Наночастицы хитозана как носители биологически активных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат химических наук Ваел Шехта Метвалли Эльсайед Елазаб

• Ваел Шехта Метвалли Эльсайед Елазаб
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Ваел Шехта Метвалли Эльсайед Елазаб

Содержание

Введение

1. Литературный обзор

1.1. Хитозан и его свойства

1.2. Иммобилизация биологически активных веществ

1.3. Аналоги хитозана

1.4. Сополимеры, комплексы

2. Экспериментальная часть

2.1. Деструкция хитозана

2.2. Определение молекулярной массы гомологов хитозана

2.3. Получение наночастиц хитозана

2.4. Синтез производных 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов

2.5. Получение гидразида изоникотиновой кислоты

2.6. Синтез 1-изоникотинил-2-глюкозилгидразона дигидрата

2.7. Получение наночастиц комплексов хитозана с производными 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов

2.8. Получение наночастиц комплексов хитозана с гидразидом изоникотиновой кислоты

2.9. Получение наночастиц комплексов хитозана с1-изоникотинил-2-глюкозилгидразона дигидратом

2.10. Получение наночастиц солей хитозана с карбоновыми кислотами

3. Обсуждение результатов

3.1. Деструкция высокомолекулярных хитозанов

3.2. Получение наночастиц низкомолекулярного хитозана

3.3. Синтез производных 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов

3.4. Синтез 1-изоникотинил-2-глюкозилгидразона дигидрата

3.5. Получение наночастиц комплексов низкомолекулярного хитозана с биологически активными веществами

Выводы

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Наночастицы хитозана как носители биологически активных веществ»

Введение

Актуальность темы. В настоящее время значительное внимание многих исследователей приковано к проблеме выделения и химической модификации природных полимеров. Среди большого многообразия биополимеров особое место занимает хитозан. Уникальность хитозана обусловлена широким спектром проявляемых им свойств, среди которых следует особо выделить такие как биологическая активность, биосовместимость и нетоксичность. Это позволяет его использовать в химии, фармации, медицине, поэтому исследования, связанные с химией такого биополимера, как хитозан, является важной задачей полимерной химии. Учитывая его биологическую активность, биосовместимость и нетоксичность основным стратегическим направлением его использования является фармация и медицина, которая предъявляет определенные требования по величине молекулярной массы полимера. Задача получения низкомолекулярного хитозана, изучения механизма деструкции и управление процессом с целью синтеза продукта с необходимыми свойствами является актуальной как с теоретической, так и практической точек зрения. Помимо этого, наличие в макромолекулах хитозана реакционноспособных групп обуславливает его способность к комплексообразованию, позволяющая осуществлять иммобилизацию биологически активных веществ. Учитывая его биосовместимость и нетоксичность возможно получение новых гидрофильных лекарственных форм на основе известных препаратов и веществ потенциально биологически активных с пролонгированным действием, что указывает на актуальность проведенных исследований.

Цель работы - синтез наночастиц на основе хитозана с различной молекулярной массой и исследование их способности к комплексообразованию с биологически активными веществами для создания гидрофильных лекарственных форм.

Научная новизна.

Исследована возможность использования наночастиц хитозана в качестве носителей биологически активных веществ. Показано, что в присутствии триполифосфата натрия образуются наночастицы комплексов низкомолекулярного хитозана с модельными биологически активными веществами и известными лекарственными препаратами.

Изучена окислительная деструкция высокомолекулярного хитозана пероксидом водорода и получены его полимергомологи в широком диапазоне значений молекулярных масс. Установлена зависимость степени полимеризации хитозана от концентрации окислителя, температуры и продолжительности процесса. Найдено, что эффективным стоппером деструкции является водный раствор аммиака, не приводящий к понижению степени деацетилирования хитозана, как это происходит при использовании формалина.

Определены условия получения наночастиц низкомолекулярных хитозанов.с узким распределением по размерам. Показано, что размер частиц зависит от величины молекулярной массы хитозана, его концентрации и концентрации триполифосфата натрия, рН среды.

Впервые синтезирован и идентифицирован ряд прозводных 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов, являющихся потенциальными биологически активными веществами.

Получена водорастворимая форма известного противотуберкулезного препарата гидразона изоникотиновой кислоты - 1-изоникотинил-2-В-глюкозилгидразона дигидрата.

Показано, что низкомолекулярные гомологи хитозана образуют комплексы с гидразидом изоникотиновой кислоты и его углеводным производным, а также рядом производных пиридазина, на основе которых получены наноразмерные частицы с узким распределением по размерам.

Получены наночастицы солей низкомолекулярного хитозана глутаминовой, янтарной и п-аминосалициловой кислот.

Практическая значимость работы.

Синтезированны полимерные комплексы хитозана с гидразидом изонико-тиновой кислоты и его углеводным производным. Исследования в бактериоста-тической лаборатории Белгородского областного противотуберкулезного диспансера ппоказали, что они перспективны для их применения в медицинской практике.

Получен ряд прозводных 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов, являющихся потенциальными биологически активными веществами.

Личный вклад автора. Автор лично выполнил большинство этапов работ, включая постановку задач, проведение эксперимента, анализ и обсуждение результатов. Автор защищает:

Усовершенствованный способ получения низкомолекулярных полимергомоло-гов хитозана

Синтез наночастиц на основе хитозана с различной молекулярной массой Способы получения ряда 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов и 1-изоникотинил-2-0-глюкозилгидразона дигидрата

Получение комплексов наночастиц хитозана с низкомолекулярными биологически активными веществами.

Апробация работы. Результаты работы докладавались на V Всероссийской Каргинской конференции «Полимеры-2010» (Москва, 2010г.), 7-ой Санкт-Петербургской конференция молодых ученых (Санкт-Петербург, 2011 г.). Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ: 4 патента, 1 статья, 2 тезисов докладов конференций различных уровней.

1. Литературный обзор

1.1. Хитозан и его свойства

Аминосодержащие биополимеры - гомо- и гетерогликаны, их различные аналоги и конъюгаты успешно используются в фармации и медицине. Расширение поисковых и практически внедряемых разработок характерно для утилизации хитозана, что объясняется сочетанием его ценных биохимических свойств с экономической доступностью. Химическая лабильность этого полимера позволяет, применяя относительно несложные технологические процессы, получать гомологи и аналоги с различными вариантами физико-химических и биологических свойств. Совместимость таких соединений с биосистемами, биоразлагаемость в организме с образованием безвредных низкомолекулярных соединений обеспечивают перспективность их практического использования. Установлена антибактериальная, противовирусная, и противовоспалительная активность хитозана и различных композиций на его основе при практическом отсутствии токсического действия на организм. Достоверно подтверждено иммуностимулирующее, адъювантное, адаптогенное, гемоста-тическое и холестрическое действие данных гликанов. Установлена зависимость указанных свойств от степени полимеризации основных макроцепей, концентрации первичных аминогрупп, вида и содержания различных функционалов. Изучаются процессы биологического действия хитозана и его производных в организме на молекулярном уровне.

Биологически активная композиция для медицинских и косметических целей, при лечении ожогов, в качестве пищевой добавки содержит хитозан-гель или хитозан-суспензию с размером наногранул не более 100 нм и ионы благородных металлов в количестве не более 10% (хитозан-гель 98,5; Ag 1,5.) Приведены результаты клинических испытаний. Композиция стимулирует заживление ран, снижает кожные раздражения [1]. Предложено хитозан-содержащее средство для лечения инфицированных ран и ожогов, проявляющее антибактериальные свойства, трансформируя их клиническое течение, и

ускоряет различные стадии заживления, включая развитие грануляционной ткани, фибриллогинез и эпителизацию [2].

Хитозан применяют для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Определена антибактериальная активность полимера по отношению ко всей микрофлоре, выделяемой из ульцерогенной зоны. Раствор хитозана (1%) с молекулярной массой (ММ) 320 кДа и степенью деацетилиро-вания (СД) 79.3% в 0.2% водном растворе НС1 вводился как аппликация на язвенную поверхность. Использовалась также таблетированная форма. Аминог-люкан оказывает выраженное бактериостатическое действие на все исследованные микроорганизмы. Отмечены ускоренные сроки рубцевания язв и резкое снижение явления рецидива [3].

Гелевые формы хитозана использовались для лечения хронического периодонтита. Отмечено их положительное влияние на развитие воспалительных процессов в тканях периодонта, определена активность различных препаратов мелкодисперсного хитозана в гелевой форме с СД 90-95% и ММ 10-15 и 120 кДа. Гели аминоглюкана (4, 6, 8%) проявляют антибактериальное действие в отношении микроорганизмов, этиологически значимых при периодонтите; активность проявляется в течение 24 часов. Снижение концентрации полимера дезактивирует процесс.

Применение пасты из геля хитозана и оксида цинка стимулирует новообразование костной ткани [4]. Предложен способ лечения пародонтита с применением электрофореза хитозана. Использован 0.5% водный раствор гидрохлорида хитозана с ММ 200 кДа, СД 80% и степенью кристалличности 75% (рН 4.5). Электрофорез проводили с анода при плотности тока 0.3-0.5 мА/см2. Предполагается образование полиэлектролитных комплексов между компонентами соединительной ткани и аминоглюканом, заполняющим межклеточное пространство, что ведет к нормализации циркуляции крови, реабилитации функций пародонта [5]. Обсуждается возможность использования хитозана для восстановления функции сухожилия после его повреждения и оперативного вмешательства [6].

Ряд исследований посвящено вопросу изучения антибактериальной активности полимера в зависимости от ММ и СД. Аминоглюканы со значительной степенью полимеризации в виде 1% растворов в 0.2% соляной кислоте проявляют антимикробное действие в отношении многих микроорганизмов

[7].

Изучена антибактериальная активность хитозана на двух раневых штаммах Е. coli и St. albus. Показано, что наибольшим антибактериальным эффектом обладает аминогликан с ММ=72 кДа в концентрации 20 мг/мл. Разработана технология приготовления лекарственных форм - гелей на метилцеллюлозе, содержащих хитозан в разных концентрациях. Наиболее эффективными по показателю времени полузаживления оказались гель, содержащий хитозан (ММ=72 кДа) в концентрации 2%, и гель, содержащий хитозан (ММ=10,7 кДа) в концентрации 0,1% [8].

Проведена оценка биологической активности аминоглюканов на серии микроорганизмов грамотрицательного и грамположительного типов. Использовавшиеся хитозаны с ММ 4-27 кДа были получены ферментативным гидролизом из исходных полимеров с различной СД (крабовый и пчелиный хитозаны). Была определена минимальная ингибирующая концентрация (МИК). Под действием хитозана усиливается проницаемость наружной мембраны клеток до пределов их жизнеспособности. Установлено, что для полимеров с ММ 527 кДа разница действия на грамотрицательные и грамположительные бактерии практически отсутствует. При тестировании хитозанов с ММ 4 кДа и СД 55%, 73%, 78% и 86%> установлена тенденция увеличения процента гибели клеток с увеличением СД полимера. Аминоглюкан с максимальной СД имеет более высокую концентрацию положительных зарядов на макроцепи, что приводит к образованию наиболее прочной связи с поверхностью клеточной стенки микроорганизмов. Дана оценка МИК для хитозанов с ММ 5-27 кДа и СД 85% в отношении к исследованной серии микроорганизмов [9]. Низкомолекулярные полисахариды, полученные из панцирей крабов, рекомендованы как эффективные препараты в борьбе с кандидозной инфекцией, развивающейся

от чрезмерного употребления антибиотиков. Их использование целесообразно также в качестве вещества, способствующего адсорбции лекарств и биологически-адгезивного реагента. Хитозаны используют в фармации для изготовления таблеток (грануляты), гелей, пленок, микросфер и капсул [10]. Антибактериальная активность аминоглюканов исследована в отношении Е. coli. Бактерицидная активность возрастает с увеличением ММ до ее максимального значения - 9.16хЮ4 Да (рН=5.6), далее наблюдается ее снижение. Эффективность действия хитозана возрастает с увеличением СД и концентрации. Клетки Е. Coli, в условиях воздействия аминоглюкана деформируются и подвергаются аутолизису [11]. Препараты на основе хитина и хитозана оказывают защитное действие при бактериальной септической инфекции (выживаемость достигает 90%).

Установлена способность полимера ингибировать вирусные инфекции в клетках животных организмов, а также предотвращать развитие фаговых инфекций в зараженной культуре микроорганизмов. Противовирусная активность аминоглюкана, как и его антибактериальные свойства, существенно зависит от степени полимеризации и от величины положительного заряда на макромолекулах. Механизм подавления фаговой инфекции заключается в инактивации соответствующих частиц и ингибировании репродукции бактериофагов. В животных организмах влияние хитозана на вирусные инфекции объясняется его воздействием на индуктивную фазу иммунного ответа и эф-фекторные механизмы иммунной системы. Важную роль играет способность аминоглюкана индуцировать в живом организме образование интерферона [12].

Определена способность полимера как иммуномодулятора для повышения резистентности животных, одновременно наблюдается стабилизация прироста массы тела (20-40%). Выраженный иммуностимулирующий эффект обусловлен, в основном, активацией фагоцитарной активности макрофагов. Этот механизм обеспечивает запуск реакций, ответственных за скорость формирования специфического гуморального иммунитета [13].

Сопоставлены антимикробная активность 2-х фракций хитозана с ММ равным 9300 (I) и 2200 (II) Да, полученных кислотным гидролизом хитозана и меченых флуоресцеинизотиоцианатом. Показано, что I является ингибитором роста клеток Escherichia coli и ассоциируется с клеточной МБ; II стимулирует рост и проникает внутрь клеток, не взаимодействуя с МБ. Высказано предположение, что ингибирующее действие I связано с блокированием проникновения питательных веществ внутрь клеток [14]. Исследована антибактериальная активность хитозана из вешенки обыкновенной. Гликан обладает высокой антибактериальной активностью в отношении грамотрицательных и грамполо-жительных условно-патогенных микроорганизмов [15].

Исследована противовирусная активность 4 фракции хитозана со средней молекулярной массой от 1.2 до 40.4 кДа. Степень индуцированной хитозаном устойчивости растений фасоли по отношению к вирусу мягкой мозаики, , возрастала с уменьшением молекулярной массы хитозана. Мономеры - глюкоза-мин и N-ацетилглюкозамин - противовирусной активностью не обладали [16].

Установлено выраженное адаптогенное действие хитозана на организм человека при высоких физических и эмоциональных нагрузках и неблагоприятных факторах внешней среды, использовавшегося в виде смеси с аминокислотами, производными ДНК и др. Защитное действие указанных препаратов отмечено также при угрозе поражения организма различными патологиями, в числе которых, инфекционный гепатит и туберкулез [17]. Хитозаны или их производные с ММ 25-500 кДа, СД 80-88%, вязкостью 1%-ного водного раствора менее 5000 мПа-с используют при профилактике воздействия на организм латексов и вулканизаторов в качестве антиаллергического средства [18]. Хитозан обладает свойствами радиопротектора. Установлено, что для хитозана характерна выраженная противолучевая активность, как в условиях профилактики, так и при лечении. Внутривенное его введение за 10-15 минут до облучения (385-365 рад), вызывающего костно-мозговую форму лучевой болезни, предотвращает гибель животных. При этом также изучен механизм действия монохлорацетата и ацетата этого полимера с ММ 70 кДа [19].

Проведено исследование эффективности низкомолекулярного хитозана, растворимого в воде, для профилактики заболеваний, обусловленных воздействием на кожные покровы тяжелых металлов (Сг, №, Со, Р1;, РЬ и др.) и их солей, следствием которых является развитие аллергических дерматитов и экзем. Изучена кинетика аминоглюкана в коже при различной глубине ее поражения. В течении 24 часов хитозан проникает в глубокие слои эпидермиса и дермы, постепенно связываясь во всех слоях кожи, в частности, с коллагеновыми волокнами дермы. При дефектах кожного покрова проникновение во все слои ускоряется. Пути проникновения аминоглюкана и металлов в кожу аналогичны (трансфолликулярный, трансэпидермальный). В различных слоях кожи хитозан способен связываться с металлами с образованием хелатных комплексов, инактивируя антигены, образовавшиеся на поверхности иммунокомпе-тентных клеток [20].

Практическое значение в последние годы приобрело использование хитозана для связывания и выделения из организма жиров и холестерина, избыточное накопление которых в организме приводит к развитию атеросклероза, ишемической болезни сердца, гипертензии, сахарного диабета и других заболеваний. Лечение ожирения имеет ключевое значение в профилактике этих болезней. Хитозан в 10 раз эффективнее связывает жиры в сравнении с другими гликанами, понижая уровень липопротеидов высокой плотности, в результате чего происходит уменьшение веса. В лечебной практике использовались препараты аминоглюкана при алиментарном ожирении, гиперхолестеринемии, дискенезии желчевыводящих путей. Отмечено снижение массы тела у больных, принимавших хитозан на 8.7% в течение трех недель. Значительное снижение уровня холестерина отмечено на пятый день применения гликана (доза 1.5 г) [21]. В опытах использовали пищевой крабовый хитозан с СД 87%) (ТУ 9289-067-00472124-97) в капсулированном виде [22]. Установлено, что хито-заны связывают от 1.22 до 4.5 г жира на 1 г полимера. Реакционная способность гликанов зависит от способа их очистки. Полимеры после обработки молочной кислотой проявляют возможность связывать до 20 г масляной смеси

(оливковое и соевое масло) на 1 г хитозана. Отмечено, что жиры окклюдируются молекулами аминоглюкана [23]. Эффект снижения массы тела на 4.5 кг достигается в течение 30 дней при пероральном введении низкомолекулярного хитозана с СД > 85% в дозе до 2 г [24]. Предложены препараты для практического использования в борьбе с ожирением. Препараты содержат 400-500 мг хитозана, 25-50 мг глюкоманнана и др. [25].

Изучено влияние антиатерогенной диеты, обогащенной хитозаном, на клинико-биохимические показатели при сердечно-сосудистых заболеваниях. Показано, что обогащение антиатерогенной диеты хитозаном при ишемиче-ской болезни сердца и гипертонической болезни способствует улучшению клинического статуса больных, антропометрических иммунных показателей, липидного спектра сыворотки крови. Исследование продемонстрировало перспективность использования в лечебно-профилактических целях хитозана [26].

Деполимеризованный хитозан с ММ 3.5-250 кДа и СД 70% может быть использован в виде комплекса с лекарственными веществами в качестве носителя, обеспечивающего замедленное высвобождение лекарственного вещества. Комплекс модифицированного хитозана применяют в качестве системы доставки в таблетках, пленках, порошках, матричных системах, в качестве покрытий или пленок на имплантантах. Для получения лекарственных средств с пролонгированным высвобождением лекарственного вещества используют структурированный хитозан [27]. Исследовано влияние хитозана, вводимого в состав таблетированных форм диклофенака № (I) на скорость высвобождения I в кислой среде. Таблетки, получаемые методом прямого прессования, содержали смесь 25 мг I, 174 мг хитозана с различной СД (74, 87 и 92%) и 1 мг стеа-рата Mg. Скорость высвобождения I из матриц возрастает при увеличении рН буферного раствора (1.2, 3.8, 6.8) и степени ]Ч-дезацетилирования хитозана, но практически не изменяется от ионной силы раствора [28].

Предложен метод получения вещества, обладающего остеопроводимо-стью, включающий этапы: облучение хитина/хитозана у-лучами Со и получение низкомолекулярного комплекса; приготовление коллоидного раствора хи-

тозана путем растворения полученного комплекса в подкисленном водном растворе и смешивания его с апатитовым порошком. Субстанция (в виде пленки или пасты), обладающая остеопроводимостью, применяется в стоматологии и ортопедии [29].

Исследованы твердые дисперсии офлоксацина в различных носителях (хитозан, PEG 4000 и PEG 20000 и поливинилпирролидон к-90). Кристалличность офлоксацина возрастает при повышении содержания носителя. Скорость его растворения в присутствии носителей значительно выше, чем в чистом виде и возрастает в системах с большей концентрацией носителей. В системах с соотношением офлоксацин/носитель 1:1 наибольшая скорость растворения достигается при использовании хитозана. Гелеподобные водные дисперсии микрокристаллического хитозана (24%) применяют как носители лекарственных субстанций. Изучены реологические свойства этих систем [30, 31]. Разработано средство для лечения эпилепсии и судорожного синдрома, содержащее хитозан водорастворимый, сухой экстракт лекарственных растений и наполнитель [32]. Запатентованы лекарственные формы аминоглюкана, предназначенные для регулирования кровяного давления. Измельченный полимер в смеси с солями аминокислот после эмульгирования в жидких жирах помещается в желатиновую капсулу. Лекарственная форма хорошо растворима в среде желудочно-кишечного тракта [33].

Гликан с ММ 800-1000 кДа и СД до 85% в 1% растворе уксусной кислоты использован для нанесения защитной пленки на таблетки теофиллина; покрытия отверждали при 40-100° С. Отмечена частичная конверсия ацетата хитозана в хитин [34]. Получены микросферы (менее 2 мкм) из хитозана с гемфибро-зилом путем сушки распылением. Оптимальной является модель из полимера с низкой ММ при соотношении к лекарству 3:1 [35].

Применяются гранулы, капсулы, и другие пероральные лекарственные формы, содержащие порошок хитозана с диаметром частиц менее 700 мкм, покрытые водорастворимыми полимерами и кишечнорастворимой оболочкой на основе карбоксиметилцеллюлозы при толщине покрытия 0.2-2 мм. Соот-

ношение хитозана и водорастворимого полимера составляет 1:10-10:1. Активные ингредиенты, входящие в состав лекарственных форм - 5-аминосалициловая кислота, ацетаминофен, белки, в том числе, инсулин, и другие высвобождаются из толстого кишечника в течение продолжительного времени и оказывают длительный терапевтический эффект [36]. Аминоглкжаны с ММ 1.8; 100; 210 кДа и СД 86-89% используются для обработки хлопковых тканей с целью придания им антимикробной активности. Установлена зависимость ингибирующей активности таких тканей от концентрации пропитывающих растворов полимера и его ММ [37].

Свойства аминоглюканов как гелеобразователей, несущих при биологических значениях рН положительный заряд, обусловили их достаточно широкое использование в производстве лечебно-косметических средств. Хитозан имеет преимущества в сравнении с полианионными гелеобразователями, макромолекулы которых в тех же условиях являются отрицательно заряженными. Поликатионы со структурой хитозана взаимодействуют с отрицательно заряженными кожей и волосами. Использование гликанов в средствах для волос является успешным, за счет их способности образовывать пленки при взаимодействии с кератинами. Эти пленки при повышенной влажности более стабильны, чем соответствующие покрытия на основе синтетических полимеров, и предпочтительны в сравнении с традиционными фиксаторами. Хитозан улучшает расче-сываемость, уменьшает статический заряд, увеличивает блеск волос. Эти полимеры широко используются в различных видах шампуней. В составе средств для ухода за кожей важную роль играет способность гликанов создавать прозрачную защитную пленку, предохраняющую от потери влаги, хито-заны, являясь гидроколлоидами, служат увлажняющим компонентом в косметических средствах. Аминоглюканы используются также в качестве матриц для биологически-активных ингредиентов, что придает косметическим композициям лечебные свойства. Обычно применяются хитозаны с ММ 10-1000 кДа и СД до 90%. Макромолекулы, несущие в своем составе 5-20% 1Ч-ацетильных групп, обеспечивают гидрофобность полимеров. Баланс гидрофильности и

гидрофобности учитывается в вариантах применения этих гликанов в качестве стабилизаторов эмульсий, повышая их вязкость при низких значениях рН [38].

Запатентована основа для косметических средств, содержащая коллаген и хитозан в массовых соотношениях 1: (0.012-0.48), применяющаяся в водосо-держащих косметических средствах для ухода за кожей и за волосами [39]. В лечебные косметические составы, содержащие 0.1-5% лецитина и 0.5-5%) хи-тозана для повышения стабильности предлагается добавлять 0.001-15% ими-нодиянтарной кислоты или ее соли [40]. Способность аминоглюкана к пленко-образованию на коже и приданию ей шелковистости использована в специальном водно-спиртовом косметическом средстве. Хитозан в этом случае играет роль загустителя или стабилизатора. Состав, содержащий повышенную концентрацию спирта, не вызывает раздражение кожи и не придает ей липкость. Препарат содержит до 10% полимера с ММ 10-1000 кДа и СД до 99% [41]. Предложены гели, спреи и другие косметические составы для фиксации волос, ресниц, в состав которых входит хитозан с ММ 0.5-5000 кДа [42].

При создании лечебно-косметических кремов на основе гидрогелей хито-зана учитывается роль полимера, обладающего противовоспалительными и регенерирующими свойствами для защиты поврежденной кожи, ее восстановления. Предлагаются гели, содержащие 1.5% высокомолекулярного аминоглюкана в 0.5% уксусной или 1% янтарной кислотах (рН=5), с высокой проницаемостью в кожные покровы и играющие роль носителей биологически активных компонентов. При нанесении геля на раневую поверхность кожи, образующаяся пленка ускоряет процесс репарации в 8 раз за счет активации биологического очищения раны и ингибирования инфекционного процесса. Используются кремы с добавлением гиалуроновой, борной и других кислот для усиления раноза-живляющего и бактериостатического эффектов; гиалуроновая кислота является регулятором проницаемости тканей [43]. Отмечено бактерицидное и антиокси-дантное действия водорастворимого хитозана с ММ 5-200 кДа при варьировании концентрации полимера и ММ в отношении различных микроорганизмов; установлены минимальные подавляющие концентрации.

1.2. Иммобилизация биологически активных веществ

Гликаны, несущие в своей структуре катионоактивные компоненты типа аминодезоксимоноз, играют важную роль в животных, бактериальных и растительных системах. Наиболее распространенным в природе и промышленно доступным является ацетамид 2-амино-0-глюкана (хитин). В качестве зоогли-кана, организующего панцири разнообразных гидробионтов, хитин является главным сырьевым источником ценных гидрофильных аналогов - продуктов различной степени его деацетилирования - 2-амино-2-дезоксиглюканов (хито-заны). Все большее значение приобретают в этом отношении растительные сырьевые источники.

Присутствие в составе макроцепей остатков 2-амино-моноз характерно для мукогликанов и соответствующих пептидов - важнейших физиологически активных компонентов биосферы. В числе таких биополимеров хондриотины, гиалуроновая кислота, гепарин, муреины. Макромолекулы ряда мукогликанов в качестве звеньев, помимо различных производных на основе 2-аминомоноз, включают также элементы уроновых кислот. Для этой группы биополиэлек-тролитов характерны высокая гидрофильность, лабильность плотности заряда в процессе жизнедеятельности системы. Аминосодержащие биополимеры -гомо- и гетерогликаны успешно используются в фармации, медицине непосредственно, а также в виде различных аналогов и конъюгатов. Основные направления - профилактика и химиотерапевтические методы лечения различных заболеваний человека и животных. Преимущественное расширение поисковых и практически внедряемых разработок характерно для утилизации в этом направлении хитозана, что объясняется сочетанием его ценных биохимических свойств с экономической доступностью. Химическая лабильность этого полимера позволяет, применяя относительно несложные технологические процессы, получать гомологи и аналоги с различными вариантами физико-химических свойств и биологической активности. Совместимость таких соединений с биосистемами, биоразлагаемость в организме с образованием без-

вредных низкомолекулярных соединений обеспечивают перспективность их практического использования. Многочисленные экспериментальные исследования обнаружили ценные биологические свойства для этой группы биополи-мераналогов. При практическом отсутствии токсического действия на организм установлена антибактериальная, противовирусная, и противовоспалительная активность хитозана и различных композиций на его основе. Достоверно подтверждено иммуностимулирующее, адъювантное, адаптогенное, ге-мостатическое и холестрическое действие, зависящие от степени полимеризации основных макроцепей, концентрации первичных аминогрупп, вида и содержания различных функционалов, введенных при аналоговых превращениях и полимерных реакциях гликанов. Изучаются процессы биологического действия хитозана и его производных в организме на молекулярном уровне.

Механизм антибактериальной активности гидрофильных гомологов хитозана предположительно связан с особенностями опорного скелета бактериальной стенки - пептидогликана муреина. Его основная цепь включает звенья 14-ацетилглюкозамина и ТЧ-ацетилглюкозаминолактата (К-ацетил-мурамовая кислота) с присоединенными пептидными фрагментами. Пространственно структурированная система муреина заряжена отрицательно (свободные карбоксилы), что обеспечивает образование Ы-солевых связей при контакте с ка-тионоактивными макромолекулами хитозана. Процесс сорбции играет дезактивирующую роль, в том числе для варианта целевой доставки лекарственных средств с бактерицидной активностью, иммобилизованных в структуру ами-ногликана.

Используя направленное аналоговое превращение хитозана, возможно изменить знак заряда, придав макроцепям анионоактивный характер. Соответствующие сукцинаты, несущие отрицательный заряд, обладают противовирусной активностью. Дезактивация достигается благодаря сорбции вирионами, положительно заряженными за счет их белкового компонента, отличающегося значительным содержанием катионоактивных аминокислот (аргинин).

Результаты последних поисковых работ указывают на целесообразность создания биологически активных материалов (лекарственных средств, форм и др.) на основе аминоглюканов с пониженной степенью полимеризации и высокой концентрацией первичных аминогрупп, растворимых в нейтральных и кислых водных средах. Перспективным является направление использования этого вида гликанов, аналогов и комплексов с лекарствами для их доставки к очагам поражения, отдельным органам, непосредственно в структуру возбудителей заболеваний. Особое значение это может иметь в химиотерапевтических методах борьбы с бактериальными системами резистентными к традиционным лекарственным средствам. Учитывая иммуностимулирующую, адъювантную и потенцирующую активность аминоглюканов, открывается возможность создания лекарственных средств комбинированного действия, обладающих патогенетической и этиотропной активностью.

Аминоглюканы могут быть эффективно использованы как источник соответствующей аминомонозы для постоянного синтеза мукогликанов, дефицит которых приводит к различным патологическим процессам. 2-Амино-Б-глюкоза синтезируется в организме из монозы и глутамина, при этом эффективность синтеза снижается с возрастом.

2-Амино-2-дезокси-0-глюканы в зависимости от ММ и степени ацетили-рования находят применение в медицине и косметике, что связано с комплексом физико-химических и биохимических свойств. Предложены различные варианты ранозаживляющих средств на основе хитозана. При этом учитываются свойства полимера подавлять фиброз, проявлять гемостатический эффект, расщепляться лизоцином. Способность гликанов или их полимерных композиций формировать пленки использована при приготовлении ранозаживляющих материалов при условии дополнительного импрегнирования в массу полимера лекарств, ферментов, метаболитов для ускорения регенерации кожного покрова; разработаны соответствующие жидкие и мазевые средства наружного применения [44]. Проведены исследования по использованию хи-

тозана для заживления различных раневых повреждений кожного покрова и соединительных тканей. Предложены комбинированные губки, выполненные из коллагена, содержащие аминоглюкан, и пропитанные антиоксидантами, антисептиками (хлоргексидин-биглюконат и супероксиддисмутаза и др.). Установлена антибактериальная эффективность губок и уменьшение инфильтрации кожи и мягких тканей в зоне воспаления. Показано ускорение эпителизации ран, процессов роста грануляций, интенсификация очищения раневых поверхностей [45]. Исследовано влияние хитозана на процесс заживления ран верхнего века. Эксперименты, проведенные на кроликах показали выраженное стимулирующее влияние хитозана на скорость и характер заживления ран [46].

Биологически активная композиция для медицинских и косметических целей, при лечении ожогов, в качестве пищевой добавки содержит хитозан-гель или хитозан-суспензию с размером наногранул не более 100 нм и ионы благородных металлов в количестве не более 10% (хитозан-гель 98,5; Ag 1,5.) Приведены результаты клинических испытаний. Композиция стимулирует заживление ран, снижает кожные раздражения [47]. Предложено хитозан-содержащее средство для лечения инфицированных ран и ожогов, проявляющее антибактериальные свойства, трансформируя их клиническое течение, и ускоряет различные стадии заживления, включая развитие грануляционной ткани, фибриллогинез и эпителизацию [48].

Хитозан применяют для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Определена антибактериальная активность полимера по отношению ко всей микрофлоре, выделяемой из ульцерогенной зоны. Раствор хитозана (1%) с молекулярной массой (ММ) 320 кДа и степенью деацетилиро-вания (СД) 79.3%о в 0.2% водном растворе НС1 вводился как аппликация на язвенную поверхность. Использовалась также таблетированная форма. Аминоглюкан оказывает выраженное бактериостатическое действие на все исследованные микроорганизмы. Отмечены ускоренные сроки рубцевания язв и резкое снижение явления рецидива [49].

Гелевые формы хитозана использовались для лечения хронического периодонтита. Отмечено их положительное влияние на развитие воспалительных процессов в тканях периодонта, определена активность различных препаратов мелкодисперсного хитозана в гелевой форме с СД 90-95% и ММ 10-15 и 120 кДа. Гели аминоглюкана (4, 6, 8%) проявляют антибактериальное действие в отношении микроорганизмов, этиологически значимых при периодонтите; активность проявляется в течение 24 часов. Снижение концентрации полимера дезактивирует процесс.

Применение пасты из геля хитозана и оксида цинка стимулирует новообразование костной ткани [50]. Предложен способ лечения пародонтита с применением электрофореза хитозана. Использован 0.5% водный раствор гидрохлорида хитозана с ММ 200 кДа, СД 80% и степенью кристалличности 75% (pH 4.5). Электрофорез проводили с анода при плотности тока 0.3-0.5 мА/см . Предполагается образование полиэлектролитных комплексов между компонентами соединительной ткани и аминоглюканом, заполняющим межклеточное пространство, что ведет к нормализации циркуляции крови, реабилитации функций пародонта [51]. Обсуждается возможность использования хитозана для восстановления функции сухожилия после его повреждения и оперативного вмешательства [52].

Ряд исследований посвящено вопросу изучения антибактериальной активности полимера в зависимости от ММ и СД. Аминоглюканы со значительной степенью полимеризации в виде 1% растворов в 0.2%> соляной кислоте проявляют антимикробное действие в отношении многих микроорганизмов [53].

Изучена антибактериальная активность хитозана на двух раневых штаммах Е. coli и St. albus. Показано, что наибольшим антибактериальным эффектом обладает аминогликан с ММ=72 кДа в концентрации 20 мг/мл. Разработана технология приготовления лекарственных форм - гелей на метилцеллюлозе, содержащих хитозан в разных концентрациях. Наиболее эффективными по показателю времени полузаживления оказались гель, содержащий хитозан

(ММ=72 кДа) в концентрации 2%, и гель, содержащий хитозан (ММ=10,7 кДа) в концентрации 0,1% [54].

Проведена оценка биологической активности аминоглюканов на серии микроорганизмов грамотрицательного и грамположительного типов. Использовавшиеся хитозаны с ММ 4-27 кДа были получены ферментативным гидролизом из исходных полимеров с различной СД (крабовый и пчелиный хитозаны). Была определена минимальная ингибирующая концентрация (МИК). Под действием хитозана усиливается проницаемость наружной мембраны клеток до пределов их жизнеспособности. Установлено, что для полимеров с ММ 527 кДа разница действия на грамотрицательные и грамположительные бактерии практически отсутствует. При тестировании хитозанов с ММ 4 кДа и СД 55%), 73%), 78%) и 86% установлена тенденция увеличения процента гибели клеток с увеличением СД полимера. Аминоглюкан с максимальной СД имеет более высокую концентрацию положительных зарядов на макроцепи, что приводит к образованию наиболее прочной связи с поверхностью клеточной стенки микроорганизмов. Дана оценка МИК для хитозанов с ММ 5-27 к Да и СД 85%о в отношении к исследованной серии микроорганизмов [55]. Низкомолекулярные полисахариды, полученные из панцирей крабов, рекомендованы как эффективные препараты в борьбе с кандидозной инфекцией, развивающейся от чрезмерного употребления антибиотиков. Их использование целесообразно также в качестве вещества, способствующего адсорбции лекарств и биологически-адгезивного реагента. Хитозаны используют в фармации для изготовления таблеток (грануляты), гелей, пленок, микросфер и капсул [56]. Антибактериальная активность аминоглюканов исследована в отношении Е. coli. Бактерицидная активность возрастает с увеличением ММ до ее максимального значения - 9.16хЮ4 Да (рН=5.6), далее наблюдается ее снижение. Эффективность действия хитозана возрастает с увеличением СД и концентрации. Клетки Е. Coli, в условиях воздействия аминоглюкана деформируются и подвергаются аутолизису [57]. Препараты на основе хитина и хитозана оказывают защитное

действие при бактериальной септической инфекции (выживаемость достигает 90%).

Установлена способность полимера ингибировать вирусные инфекции в клетках животных организмов, а также предотвращать развитие фаговых инфекций в зараженной культуре микроорганизмов. Противовирусная активность аминоглюкана, как и его антибактериальные свойства, существенно зависит от степени полимеризации и от величины положительного заряда на макромолекулах. Механизм подавления фаговой инфекции заключается в инактивации соответствующих частиц и ингибировании репродукции бактериофагов. В животных организмах влияние хитозана на вирусные инфекции объясняется его воздействием на индуктивную фазу иммунного ответа и эф-фекторные механизмы иммунной системы. Важную роль играет способность аминоглюкана индуцировать в живом организме образование интерферона [58].

Определена способность полимера как иммуномодулятора для повышения резистентности животных, одновременно наблюдается стабилизация прироста массы тела (20-40%). Выраженный иммуностимулирующий эффект обусловлен, в основном, активацией фагоцитарной активности макрофагов. Этот механизм обеспечивает запуск реакций, ответственных за скорость формирования специфического гуморального иммунитета [59].

Сопоставлены антимикробная активность 2-х фракций хитозана с ММ равным 9300 (I) и 2200 (II) Да, полученных кислотным гидролизом хитозана и меченых флуоресцеинизотиоцианатом. Показано, что I является ингибитором роста клеток Escherichia coli и ассоциируется с клеточной МБ; II стимулирует рост и проникает внутрь клеток, не взаимодействуя с МБ. Высказано предположение, что ингибирующее действие I связано с блокированием проникновения питательных веществ внутрь клеток [60]. Исследована антибактериальная активность хитозана из вешенки обыкновенной.Гликан обладает высокой антибактериальной активностью в отношении грамотрицательных и грамполо-жительных условно-патогенных микроорганизмов [61].

Исследована противовирусная активность 4 фракции хитозана со средней молекулярной массой от 1.2 до 40.4 кДа. Степень индуцированной хитозаном устойчивости растений фасоли по отношению к вирусу мягкой мозаики, , возрастала с уменьшением молекулярной массы хитозана. Мономеры - глюкоза-мин и Ы-ацетилглюкозамин - противовирусной активностью не обладали [62].

Установлено выраженное адаптогенное действие хитозана на организм человека при высоких физических и эмоциональных нагрузках и неблагоприятных факторах внешней среды, использовавшегося в виде смеси с аминокислотами, производными ДНК и др. Защитное действие указанных препаратов отмечено также при угрозе поражения организма различными патологиями, в числе которых, инфекционный гепатит и туберкулез [63]. Хитозаны или их производные с ММ 25-500 кДа, СД 80-88%, вязкостью 1%-ного водного раствора менее 5000 мПа-с используют при профилактике воздействия на организм латексов и вулканизаторов в качестве антиаллергического средства [64]. Хитозан обладает свойствами радиопротектора. Установлено, что для хитозана характерна выраженная противолучевая активность, как в условиях профилактики, так и при лечении. Внутривенное его введение за 10-15 минут до облучения (385-365 рад), вызывающего костно-мозговую форму лучевой болезни, предотвращает гибель животных. При этом также изучен механизм действия монохлорацетата и ацетата этого полимера с ММ 70 кДа [65].

Проведено исследование эффективности низкомолекулярного хитозана, растворимого в воде, для профилактики заболеваний, обусловленных воздействием на кожные покровы тяжелых металлов (Сг, №, Со, Р1:, РЬ и др.) и их солей, следствием которых является развитие аллергических дерматитов и экзем. Изучена кинетика аминоглюкана в коже при различной глубине ее поражения. В течении 24 часов хитозан проникает в глубокие слои эпидермиса и дермы, постепенно связываясь во всех слоях кожи, в частности, с коллагеновыми волокнами дермы. При дефектах кожного покрова проникновение во все слои ускоряется. Пути проникновения аминоглюкана и металлов в кожу аналогичны (трансфолликулярный, трансэпидермальный). В различных слоях кожи хи-

тозан способен связываться с металлами с образованием хелатных комплексов, инактивируя антигены, образовавшиеся на поверхности иммунокомпе-тентных клеток [66].

Практическое значение в последние годы приобрело использование хито-зана для связывания и выделения из организма жиров и холестерина, избыточное накопление которых в организме приводит к развитию атеросклероза, ишемической болезни сердца, гипертензии, сахарного диабета и других заболеваний. Лечение ожирения имеет ключевое значение в профилактике этих болезней. Хитозан в 10 раз эффективнее связывает жиры в сравнении с другими гликанами, понижая уровень липопротеидов высокой плотности, в результате чего происходит уменьшение веса. В лечебной практике использовались препараты аминоглюкана при алиментарном ожирении, гиперхолестеринемии, дискенезии желчевыводящих путей. Отмечено снижение массы тела у больных, принимавших хитозан на 8.7% в течение трех недель. Значительное снижение уровня холестерина отмечено на пятый день применения гликана (доза 1.5 г) [67]. В опытах использовали пищевой крабовый хитозан с СД 87%) (ТУ 9289-067-00472124-97) в капсулированном виде [68]. Установлено, что хито-заны связывают от 1.22 до 4.5 г жира на 1 г полимера. Реакционная способность гликанов зависит от способа их очистки. Полимеры после обработки молочной кислотой проявляют возможность связывать до 20 г масляной смеси (оливковое и соевое масло) на 1 г хитозана. Отмечено, что жиры окклюдируются молекулами аминоглюкана [69]. Эффект снижения массы тела на 4.5 кг достигается в течение 30 дней при пероральном введении низкомолекулярного хитозана с СД > 85%) в дозе до 2 г [70]. Предложены препараты для практического использования в борьбе с ожирением. Препараты содержат 400-500 мг хитозана, 25-50 мг глюкоманнана и др. [71].

Изучено влияние антиатерогенной диеты, обогащенной хитозаном, на клинико-биохимические показатели при сердечно-сосудистых заболеваниях. Показано, что обогащение антиатерогенной диеты хитозаном при ишемической болезни сердца и гипертонической болезни способствует улучшению

клинического статуса больных, антропометрических иммунных показателей, липидного спектра сыворотки крови. Исследование продемонстрировало перспективность использования в лечебно-профилактических целях хитозана [72].

Деполимеризованный хитозан с ММ 3.5-250 кДа и СД 70% может быть использован в виде комплекса с лекарственными веществами в качестве носителя, обеспечивающего замедленное высвобождение лекарственного вещества. Комплекс модифицированного хитозана применяют в качестве системы доставки в таблетках, пленках, порошках, матричных системах, в качестве покрытий или пленок на имплантантах. Для получения лекарственных средств с пролонгированным высвобождением лекарственного вещества используют структурированный хитозан [73]. Исследовано влияние хитозана, вводимого в состав таблетированных форм диклофенака Na (I) на скорость высвобождения I в кислой среде. Таблетки, получаемые методом прямого прессования, содержали смесь 25 мг I, 174 мг хитозана с различной СД (74, 87 и 92%) и 1 мг стеа-рата Mg. Скорость высвобождения I из матриц возрастает при увеличении рН буферного раствора (1.2, 3.8, 6.8) и степени N-дезацетилирования хитозана, но практически не изменяется от ионной силы раствора [74].

Предложен метод получения вещества, обладающего остеопроводимо-стью, включающий этапы: облучение хитина/хитозана у-лучам и Со и получение низкомолекулярного комплекса; приготовление коллоидного раствора хитозана путем растворения полученного комплекса в подкисленном водном растворе и смешивания его с апатитовым порошком. Субстанция (в виде пленки или пасты), обладающая остеопроводимостью, применяется в стоматологии и ортопедии [75].

Исследованы твердые дисперсии офлоксацина в различных носителях (хитозан, PEG 4000 и PEG 20000 и поливинилпирролидон к-90). Кристалличность офлоксацина возрастает при повышении содержания носителя. Скорость его растворения в присутствии носителей значительно выше, чем в чистом виде и возрастает в системах с большей концентрацией носителей. В системах с соотношением офлоксацин/носитель 1:1 наибольшая скорость растворения

достигается при использовании хитозана. Гелеподобные водные дисперсии микрокристаллического хитозана (24%) применяют как носители лекарственных субстанций. Изучены реологические свойства этих систем [76, 77]. Разработано средство для лечения эпилепсии и судорожного синдрома, содержащее хитозан водорастворимый, сухой экстракт лекарственных растений и наполнитель [78]. Запатентованы лекарственные формы аминоглюкана, предназначенные для регулирования кровяного давления. Измельченный полимер в смеси с солями аминокислот после эмульгирования в жидких жирах помещается в желатиновую капсулу. Лекарственная форма хорошо растворима в среде желудочно-кишечного тракта [79].

Гликан с ММ 800-1000 кДа и СД до 85% в 1% растворе уксусной кислоты использован для нанесения защитной пленки на таблетки теофиллина; покрытия отверждали при 40-100° С. Отмечена частичная конверсия ацетата хитозана в хитин [80]. Получены микросферы (менее 2 мкм) из хитозана с гемфибро-зилом путем сушки распылением. Оптимальной является модель из полимера с низкой ММ при соотношении к лекарству 3:1 [81].

Применяются гранулы, капсулы, и другие пероральные лекарственные формы, содержащие порошок хитозана с диаметром частиц менее 700 мкм, покрытые водорастворимыми полимерами и кишечнорастворимой оболочкой на основе карбоксиметилцеллюлозы при толщине покрытия 0.2-2 мм. Соотношение хитозана и водорастворимого полимера составляет 1:10-10:1. Активные ингредиенты, входящие в состав лекарственных форм - 5-аминосалициловая кислота, ацетаминофен, белки, в том числе, инсулин, и другие высвобождаются из толстого кишечника в течение продолжительного времени и оказывают длительный терапевтический эффект [82]. Аминоглюканы с ММ 1.8; 100; 210 кДа и СД 86-89%) используются для обработки хлопковых тканей с целью придания им антимикробной активности. Установлена зависимость ингибирующей активности таких тканей от концентрации пропитывающих растворов полимера и его ММ [83].

Свойства аминоглюканов как гелеобразователей, несущих при биологических значениях рН положительный заряд, обусловили их достаточно широкое использование в производстве лечебно-косметических средств. Хитозан имеет преимущества в сравнении с полианионными гелеобразователями, макромолекулы которых в тех же условиях являются отрицательно заряженными. Поликатионы со структурой хитозана взаимодействуют с отрицательно заряженными кожей и волосами. Использование гликанов в средствах для волос является успешным, за счет их способности образовывать пленки при взаимодействии с кератинами. Эти пленки при повышенной влажности более стабильны, чем соответствующие покрытия на основе синтетических полимеров, и предпочтительны в сравнении с традиционными фиксаторами. Хитозан улучшает расче-сываемость, уменьшает статический заряд, увеличивает блеск волос. Эти полимеры широко используются в различных видах шампуней. В составе средств для ухода за кожей важную роль играет способность гликанов создавать прозрачную защитную пленку, предохраняющую от потери влаги, хито-заны, являясь гидроколлоидами, служат увлажняющим компонентом в косметических средствах. Аминоглюканы используются также в качестве матриц для биологически-активных ингредиентов, что придает косметическим композициям лечебные свойства. Обычно применяются хитозаны с ММ 10-1 ООО кДа и СД до 90%. Макромолекулы, несущие в своем составе 5-20% ^ацетильных групп, обеспечивают гидрофобность полимеров. Баланс гидрофильности и гидрофобности учитывается в вариантах применения этих гликанов в качестве стабилизаторов эмульсий, повышая их вязкость при низких значениях рН [84].

Запатентована основа для косметических средств, содержащая коллаген и хитозан в массовых соотношениях 1: (0.012-0.48), применяющаяся в водосо-держащих косметических средствах для ухода за кожей и за волосами [85]. В лечебные косметические составы, содержащие 0.1-5%) лецитина и 0.5-5% хитозана для повыщения стабильности предлагается добавлять 0.001-15%) ими-нодиянтарной кислоты или ее соли [86]. Способность аминоглюкана к пленко-образованию на коже и приданию ей шелковистости использована в специаль-

ном водно-спиртовом косметическом средстве. Хитозан в этом случае играет роль загустителя или стабилизатора. Состав, содержащий повышенную концентрацию спирта, не вызывает раздражение кожи и не придает ей липкость. Препарат содержит до 10% полимера с ММ 10-1000 кДа и СД до 99% [87]. Предложены гели, спреи и другие косметические составы для фиксации волос, ресниц, в состав которых входит хитозан с ММ 0.5-5000 кДа [88].

При создании лечебно-косметических кремов на основе гидрогелей хито-зана учитывается роль полимера, обладающего противовоспалительными и регенерирующими свойствами для защиты поврежденной кожи, ее восстановления. Предлагаются гели, содержащие 1.5% высокомолекулярного аминоглю-кана в 0.5%о уксусной или 1% янтарной кислотах (рН=5), с высокой проницаемостью в кожные покровы и играющие роль носителей биологически активных компонентов. При нанесении геля на раневую поверхность кожи, образующаяся пленка ускоряет процесс репарации в 8 раз за счет активации биологического очищения раны и ингибирования инфекционного процесса. Используются кремы с добавлением гиалуроновой, борной и других кислот для усиления ранозаживляющего и бактериостатического эффектов; гиалуроновая кислота является регулятором проницаемости тканей [89]. Отмечено бактерицидное и антиоксидантное действия водорастворимого хитозана с ММ 5-200 кДа при варьировании концентрации полимера и ММ в отношении различных микроорганизмов; установлены минимальные подавляющие концентрации. Наиболее сильный антиоксидант - полимер с ММ около 92 кДа. Гидрофильные хитозаны предложены в качестве натуральных консервантов и антиокси-дантов в косметических препаратах [90].

1.3. Аналоги хитозана

Не меньший интерес с точки зрения расширения практически значимых свойств хитозана представляют его химически модифицированные аналоги. Так получен Ы-триметилхитозанхлорид (ТХХ) - поликатион, который усиливает транспорт лекарственных веществ через эпителий [91] . Степень кватер-

низации ТХХ определяет количество положительных зарядов на молекуле для взаимодействия с отрицательно заряженными участками на мембране клеток эпителия. Изучено влияние степени кватернизации (от 12 до 59%) на трансэпителиальное электрическое сопротивление монослоев клетки Сасо-2 и на транспорт гидрофильных и макромолекулярных модельных соединений через клетки Сасо-2. Установлено, что все тестированные ТХХ способны значительно снизить сопротивление при рН 6.2. Максимальное значение этого показателя достигается при степени кватернизации ТХХ 48% [92]. Пептидные лекарственные вещества характеризуются низкой биодоступностью. Высокая ММ и полярность исключают их доставку в твердых оральных формах. Для усиления проникновения макромолекул во внутриклеточное пространство предложено использование ТХХ. Хитозан малорастворим при рН>6.5, что препятствует его использованию в качестве эффективного усилителя проницаемости в кишечнике [93]. Триметилированные олигомеры хитозана (ТОХ), исследованы как системы доставки генов. Установлено повышение эффективности трансфек-ции. ТОХ не доступны для конъюгирования с пептидными лигандами и другими соединениями (аминогруппа триметилирована на 40%). Установлено, что структура б-О-карбоксиметил-Ы-триметилхитозана расширяет возможности конъюгирования и применения в терапии. В частности, этот аналог можно использовать для доставки противораковых средств, пептидов и белков [94].

Для получения поперечно сшитых микрочастиц - конъюгатов с митоми-цином (0.2 мкм) предложен ]Ч-сукцинилхитозан. Метод получения - эмульгирование с применением карбодиимида. Отмечена высокая загрузка конъюгата лекарственным веществом; лекарственная форма обеспечивает доставку субстанции в печень [95]. Аскорбат хитозана получен путем суспендирования аминоглюкана в дистиллированной воде и последующего добавления эквивалентного количества аскорбиновой кислоты. Предложен также метод растворения сухого полимера в эквивалентном количестве 0,6% раствора аскорбиновой кислоты. На основе указанной композиции подготовлены образцы пленок и губок, стерилизованных радиационным способом. Проведено исследование

их пролиферативной активности. Водорастворимые аскорбаты хитозана эффективны при дистрофически-дегенеративных заболеваниях суставов и позвоночника. Витамин С и олигосахарид взаимопотенцируют биологическое действие [96,97]. Разработаны способы детоксикации при деструктивных формах панкреотита с использованием гелевых форм аскорбата и глутамината хитозана с ММ 10 - 200 кДа. Пероральное введение сорбентов является эффективным при экспериментальном жировом панкреонекрозе. В качестве осмотически активного гидрогеля 10% раствор аскорбата хитозана активно ускоряет заживление гнойных ран на фоне мембранного диализа [98,99].

Наличие в структуре гликана 2-0- или З-О-сульфатных групп сообщает полимеру выраженную антикоагулянтную активность, а также свойство инги-бировать вирус иммунодефицита человека. Степень сульфирования 1чГН2-групп не влияет на биоактивность. Макрочастицы, полученые адсорбцией хитозана и его сульфата, использованы в процессах включения белка (инсулин) для лечения диабета. Микроагрегаты инсулина получены при рН 3.0 путем образования комплекса в растворе с сульфатом аминоглюкана; частицы стабильны при рН 1.7 [100, 101].

Мембраны с селективной проницаемостью лекарственных веществ получены из алкилированного хитозана (бутилбромид, октилбромид), поперечно сшитого оксидированной глюкозой. Модельное биологически активное соединение, использованное в исследовании мембран - витамин В2 [102].

Для получения лекарственных агентов с пролонгированным действием синтезированы конъюгаты антибиотиков с хитозаном. Окислением хитозана НЮ4 (рН 4.0), взаимодействием с НгЖЮКНг и активизацией формальдегидом получают иммобилизованный хитозан, содержащий группы КСОКНСН2ОН, который немедленно вводят в реакцию с тетрациклином при рН 8.0 или карминомицином (рН 8.0) [103]. Лекарственная форма пролонгированного действия рифампицина предложена в виде матричных хитозановых таблеток, получаемых непосредственным прессованием смеси хитозана и антибиотика с последующим воздействием на них паров формальдегида, приме-

няемого в качестве сшивающего агента. Исследовано влияние степени структурирования на скорость высвобождения рифампицина и кинетику процесса его высвобождения. Кинетические характеристики процесса in vitro не соответствуют транспортной модели Фика. Увеличение времени экспозиции таблеток парами формальдегида снижает скорость высвобождения лекарства из хитозановых матриц. Варьированием степени сшивки возможно получить хи-тозановые матрицы с заданными характеристиками процесса высвобождения рифампицина [104]. Исследованы факторы, влияющие на активность иммобилизованного папаина на хитозане (СД 80%) и аминированной целлюлозе: рН реакции, концентрация глутарового альдегида и количество папаина. Изучены свойства этих иммобилизованных папаинов в сравнении с природным папаи-ном. Оптимальная температура реакции иммобилизации на хитозане и целлюлозе 80 °С. После инкубации при 90 °С в течение 1 часа активность папаинов сохранялась на уровне выше 95% [105].

Рассмотрено использование гранул сшитого оксиэтилхитозана в качестве иммуноадсорбентов. Исследовали активность иммобилизации ДНК и антител SLE на таких носителях [106]. Получен носитель противоракового лекарственного вещества паклитаксела. Реакцией хитозана с хлороцетаном в щелочных условиях получен цетил-хитозан, который спонтанно образует наносферы диаметром около 100 нм. Исследовали высвобождение загруженного в наносферы паклитаксела в фосфатном буфере рН 7.4. Скорость высвобождения уменьшается с увеличением степени алкилирования. Наносферы признаны пригодными носителями паклитаксела в водной среде [107]. Предложен препарат, в котором активная субстанция в форме нанозоля связана с заряженными производными хитозана и дополнительными полимерными носителями. Субстанции включены в нанозоли в коллоидной форме или в виде наночастиц. Препарат предназначен для перорального применения в виде порошка, грану-лята, таблеток или капсул с контролируемым высвобождением [108].

Исследована возможность получения хитозановых микросфер и их применение в качестве средств доставки антибиотиков в полость желудка. Про-

блема высокой растворимости полимера в кислой среде желудка решается ре-ацетилированием хитозана при обработке хитозановых микросфер Ас20. За одну стадию возможно провести микрокапсулирование антибиотика амокси-циллина и получить лекарственную форму с различным механизмом высвобождения в зависимости от типа применяемого хитозана и степени реацетили-рования. Микросферы могут проходить эпителиальный барьер и обнаруживаются в эпителиальных клетках желудка через 1 час после введения. Хитозано-вые микросферы через 96 часов после введения проявляют способность высвобождать амоксициллин. Новая лекарственная форма рекомендована для лечения заболеваний желудка, вызываемых Helicobacter pylori [109]. Микросферы хитозана получали в дисперсии в/м с использованием в качестве сшивающего агента генипина, обладающего низкой цитотоксичностью. Методом Фу-

13

рье-ИКС и С-ЯМР показано, что сшивка хитозана с помощью генипина ведет к образованию вторичных амидных и гетероциклических аминных связей. При взаимодействии между хитозаном и индометацином (рН 6.5) наблюдается образование комплекса со связями -CH2COO"NH3+. Выделение индометацина из микросфер хитозана зависит от их степени сшивки и взаимодействия между хитозаном и индометацином [110]. Приготовлены микросферы из хитозана, поперечно сшитого глутаральдегидом, на которые нанесено покрытие из Fe3C>4. При использовании предложенной технологии снижение ММ хитозана обеспечивает получение мелких частиц (<1мкм) с равномерным распределением. Из микросфер, загруженных аспирином, в течении 1 часа высвобождается 40% лекарственного вещества; при магнитно-направляемом покрытии из Fe304-15%. Сильный ответ на магнитное действие позволяет применять систему для направленной контролируемой доставки лекарственных веществ [111].

Рассмотрено взаимодействие лецитина с продуктами реакции хитозана с углеводами, содержащими аминогруппы. Исследовали взаимодействие хито-зан-М-ацетил-Б-фукозы, хитозан-М-ацетил-Б-глюкозамина с лецитином с образованием продуктов, меченых флуоресцеином. Обсужден механизм антибактериального действия продуктов реакций хитозана с углеводами [112].

Предлагаются 1Ч-замещенные биополимеры, получаемые реакцией хитозана с альдозой и/или кетозой с последующим восстановлением образующегося имина в аминопроизводное. Хитозан и альдозу и/или кетозу берут в весовом соотношении от 10:1 до 1:2. Используют хитозан с ММ 10-5000 кДа и СД 595%. Получаемые биополимеры отличаются улучшенной растворимостью в нейтральных и основных средах и используются в лечебно-косметических средствах для ухода за кожей и волосами в качестве гель- и пленкообразующих агентов, регуляторов вязкости водных растворов, регуляторов влажности и антимикробных препаратов [113].

Патентуется способ биологической защиты косметических и фармацевтических препаратов, заключающийся в их обработке эффективным количеством производного хитозана формулы (С6Н904КНК)п, где Я=Н, СОМе, СН2СНОНСН2Н+(Ме)2Я[Х-; К1=:(не)замещенный алкил или арил; Х=анион; п>5. Эти соединения обладают эффективной биоцидной активностью в концентрации 10-20 мкг/мл. Приведены результаты испытаний биоцидной активности [114]. Производные хитозана с СД > 4%, имеющие восстановительные концевые группы, содержащие аминогруппы в 2-положении и ОН-группы в 3-и(или) 6-положении, и фотоактивные группы типа карбонилдиаз, сульфондиа-зидных или ароматических азидных групп, используют в качестве антисептиков [115].

Определены условия введения тиоловых заместителей в структуру ами-ноглюкана путем формирования амидных мостиков между макромолекулами хитозана и тиогликолевой кислотой. Конъюгаты содержат 200 мкм тиоловых групп на 1 г полимера. Вязкость геля на основе хитозана возрастает при увеличении концентрации присоединенной кислоты за счет формирования межцепных дисульфидных связей. Препараты предназначены для повышения эффективности офтальмологических лекарств. Производные хитозана получены путем образования на его основе солей с гликолевой кислотой и олигоэфир-сульфокислотой. Производные аминоглюкана способны образовывать вязкие растворы для формирования высокоэластичных пленок. Установлена анти-

микробная активность конъюгатов хитозана с тиогликолевой кислотой для структурного варианта с ее ковалентным присоединением к полимеру. Препараты такого типа эффективны как антикандидозные средства [116, 117, 118].

Исследование сульфатов аминоглюкана с различной степенью полимеризации связано с поиском новых антитромботических средств. Низкомолекулярный сульфат хитозана (ММ 20-123 кДа, степень сульфирования 0.62 - 1.86) получают путем активации полимера диметилформамидом (ДМФ) и последующей обработкой смесью олеума и ДМФ (70 °С, 3 часа). Сульфат аминоглюкана осаждают ацетоном и обессоливают на сефадексе G - 10. Полимер проявляет антитромбозную активность, соответствующую 7-55 ед/мг. С уменьшением ММ сульфохитозанов наблюдается снижение этого показателя. Сульфаты хитозана с ММ<2 кДа практически не проявляют антикоагулянтной активности [119, 120, 121].

Предложено средство для ухода за кожей, содержащее 0.1-1.0% хитозана в виде растворенной соли (гликолята), с ММ 500-5000 кДа и СД >80% и 10-500 г/млн Zn в виде растворимой соли (глюконата Zn), в водном носителе, где находятся также ПАВ, эмульгирующий масляный компонент. В состав вводят также 0.1-1% пантенола или соли пантотеновой кислоты. Средство применяют для снятия раздражения кожи [122].

Выбор хитозана в качестве матрицы для создания эффективной антимутагенной (при у-излучении) системы основан на том, что макромолекула природного поликатиона могла бы нести функции не только полимера-носителя, но и способствовать повышению общей неспецифической резистентности организма к неблагоприятным факторам окружающей среды, обусловленному иммуностимулирующей активностью исходного полимера. Наличие кватерни-зированных аминогрупп в макромолекуле, положительный заряд макроиона, а также антирадикальная активность полимера имеют существенное значение для реализации антимутагенного эффекта. Осуществлена направленная модификация хитозана, что привело к значительному повышению (от 45 до 93%) антимутагенной эффективности полимера и появлению выраженной анти-

окислительной активности системы. На основе производных хитозана предложена интерполиэлектролитная система с контролируемым выделением антиоксид анта в среду [123].

Исследование радиолиза кватернизированных производных хитозана показало, что при введении в их структуру галловой кислоты (2 мол.%) радиационный выход радикалов снижается в 2,5 раза, и практически полностью отсутствует образование ионрадикалов, улучшая таким образом антимутагенные свойства системы [124].

Процесс карбоксиметилирования хитозана включает ряд последовательных стадий: диспергирование хитозана в среде изопропилового спирта, добавление к полученной суспензии концентрированного раствора NaOH и моно-хлоруксусной кислоты (2-12 часов; 40-70 °С). Полученные образцы содержат растворимую в воде фракцию (50.7-91.7%); степень карбоксиметилирования хитозана достигает 67.0%. Препарат обладает выраженным антимикробным действием по отношению к различным группам микроорганизмов [125]. Кар-боксиметилированием (2 ч, 65 °С) раствора хитозана с различной ММ (5-370 кДа) в 50%-ном NaOH и i-PrOH с С1СН2СООН приготовлены образцы N-, О-карбоксиметилхитозана (KMX) со степенью О-замещения 0.6-1.13 и N-замещения 0.15-0.46; определено влияние ММ на противомикробную способность N-, О-КМХ. Образцы с ММ ниже 5 кДа имели более сильное противо-микробное действие [126]. Предложен способ рассасывания спаек, возникающих у больных, перенесших хирургические операции, который основан на обработке хирургических швов гелем ковалентно сшитого N,О-КМХ, с последующим промыванием их раствором N,О-КМХ в соответствующем растворителе [127]. Предложены препараты пролонгированного высвобождения белков (более 12 часов) на основе структурированных гидрогелей N-,О-КМХ; в числе белков - фибрин, коллаген, кератин. Препараты применяют в парентеральных формах, как ранозаживляющее средство, заполняющее костные дефекты, а также при лечении гемофилии, инфекционных и опухолевых заболеваниях. Исследованы антибактериальные свойства N-,О-КМХ (Е. Coli) в зависимости

от ММ, СД, концентрации и рН растворов [128]. Проведено изучение процесса карбоксиэтилирования хитина и хитозана с использованием различных реагентов: На1СН2СН2СООН, ЫаНСОз; СН2=СНСООН; СН2=СНСООН, МаОН, Алкилирование идет только по аминогруппе без изменения степени ацетили-рования. При алкилировании хитина имеет место замещение ацетамидных групп. Алкилирование галопропионовыми кислотами более эффективно (степень замещения 1.6), чем акриловой. Алкилирование хитина в гетерофазной системе интенсифицируется ультразвуком с высокой частотой. Антимутагенная активность водорастворимых аналогов аминоглюкана, связана с их антиокислительными свойствами. Синтезированы 1Ч-моно и 1Ч-дизамещенные хитозана, содержащие КНСН(Ме)СН2СООН- или 1Ч[СН(Ме)СН2СН2СООН]2 -группы. Установлена степень замещения и соотношение заместителей в составе полученных аналогов [129, 130].

Алкилированием аминоглюкана с ММ 740 кДа (1% раствор в СН3СООН) альдегидами и восстановлением №ВН4 (рН 4.5) синтезирован 1М-метил, 14-этил, Ы-пропил и 1\[-бутил аналоги со степенью замещения 0.16-0.82. Исследовано образование лиотропных жидких кристаллов и структура аналогов. Определена биоцидная активность !ч[-производных хитозана формулы: (С6Н904МЖ)п, где Я - Н, СОМе, СН2СНОНСН2, ^(Ме^Х -, где Ягалкил, арил; X—анион, при концентрации 10-20 мг/мл. Это использовано для защиты косметических и фармацевтических препаратов. Описано получение и возможность применения диметиламиноэтилированного оксипропилхитозана. Аминоэтилирование проводилось диметиламиноэтилхлоридом в среде тетра-гидрофурана [131, 132]. Сиаллил-олигопроизводные хитозана, получаемые химическим или энзиматическим методом, способны к селективному связыванию вирусов и нейтрализации бактериальных токсинов [133].

Проведена разработка с целью получения из вязкотекучих растворов хитозана мазей резорбтивного действия, содержащих гликопротеин - стимулятор репаративных процессов в организме. Такой препарат применен для ускорения заживления травмированных тканей. Хитозан использовали в виде водорас-

творимого салицилата. Препарат эффективен при лечении ожоговых ран с нарушением трофических процессов, геморроя, пролежней и предупреждение их образования [134]. Учитывая, структурные особенности хитозана и связывания с этим различные виды биологической активности в настоящее время предпринимаются попытки использования этого аминогликана для модификации различных лекарственных средств с целью снижения их токсических проявлений, а также для осуществления приоритетной транспортировки биологически активных компонентов к целевым объектам в живом организме. Для некоторых видов хитозана выявлена противоопухолевая эффективность.

Имеется информация об использования гомологов и аналогов аминогликана для транспортировки противоопухолевых препаратов селективного действия к соответствующим мишеням организма.

Представлена разработка препаратов с целевой противоопухолевой активностью на примере 5-фторурацила, где продемонстрирован детоксикаци-онный эффект полимерной матрицы без снижения противоопухолевого действия. Способность хитозана образовывать металлокомплексы, в том числе с платино-палладиевой группой ионов использована для введения в структуру хитозана известного противоопухолевого препарата цисплатина. Основной целью при этом являлось снижение побочного действия этого препарата на организм при сохранении целевой цитотоксичности. В качестве биологической модели были использованы мыши с привитой подкожно саркомой-180. Цис-платин вводился внутрибрюшинно или перорально в дозе 1,25 мг/кг в течении 14 дней в комбинации с пероральным введением хитозана 150-750мг/кг. Установлено, что хитозан не оказал ингибирующего влияния на противоопухолевую активность цисплатина для варианта перорального введения цисплатина, его токсичность под влиянием хитозана снижалась, о чем свидетельствовало изменение массы тела и селезенки в сравнении с вариантами опытов, где введение хитозана было исключено [135].

Значительная серия экспериментальных разработок проведенных в последние десятилетия по своим результатам свидетельствует о целесообразно-

сти и эффективности развития поиска по использованию хитина, хитозана, гомологов и аналогов этих гликанов, для решения проблем связанных с совершенствованием химиотерапевтических методов профилактики и лечения онкологических заболеваний. Представлен обзор результатов экспериментальных и теоретических разработок, в которых обсуждается значение хитозана и его производных в различных методах противоопухолевой химиотерапии. Основное внимание при этом уделяется одному из направлений в реализации указанной задачи - использование структуры аминогликана в качестве эффективного носителя соответствующих цитотоксичных препаратов, ингибиторов развития опухоли и метастатического эффекта. Конъюгация хитозана с пониженной степенью полимеризации обладающей достаточной гидрофильностью, а также производных на его основе с различными противоопухолевыми препаратами дают положительный эффект, вследствие преимущественной транспортировки биоактивных субстанций непосредственно в опухоли, с последующим регулируемым во времени, высвобождением их из структуры конъю-гата. Например, в ряде экспериментальных работ отмечена высокая эффективность фтордезоксиуридин и цитарабин использованных в виде конъюгатов с хитозаном в процессе лечения при лейкозах Р-388, Положительным фактором является, также роль хитозана в снижении токсичности субстанций с противоопухолевым действием. Конъюгат митомицина С с гликозированным хитозаном обладает идентичной активностью с исходной субстанцией, но при этом значительно снижается его вредное для организма побочное действие. Конъюгат митомицина С с карбоксиметилхитином при химиотерапевтическим воздействием на организм вызывает полную регрессию меланомы В-16. Отмечена особая эффективная направленность транспортировки конъюгата митомицина С с N-сукцинилхитозаном к мишени - опухолевой ткани, что обеспечивает его селективную деструктивную активность [136]. N-Сукцинилхитозаны исследованы in vivo и in vitro с целью характеристики их биораспределения и токсичности. Установлена также противоопухолевая активность как водорастворимых так и гидрофобных N-сукцинатов хитозана [137].

На многочисленных примерах установлено, что производные хитозанов оказывают влияние на иммунитет и защитные факторы организма, с чем в частности связана также активность адъювантного типа. Учитывая, что сульфатированные производные хитозана отличаясь выраженными иммуно-модулирующими свойствами, усиливают кооперацию В-лимфоцитов, Т-хелперов, а также могут заменять функцию Т-хелперов. Предполагается, что при определенной структуре аминогликанов возможно образование соединений с одновременно антивирусными и иммуномодулирующими свойствами, что открывает пути к терапии ВИЧ-инфекции. Выяснено, что О-сульфатированный 1чГ-карбоксиметилхитозан тормозит развитие ВИЧ-иммунодефицита типа I (Н1У-1) в человеческих клетках. Механизм действия сульфатов хитозана при ВИЧ-инфекции связан с блокированием взаимодействия вирусного гликопротеида с клеточным рецептором, что играет критическую роль в развитии ВИЧ-инфекции [138]. Осуществлен синтез конъюгата 5-фторурацила и бромацелтилированнго хитозана с ММ 1,98*106 и СДА 90% в среде ДМСО и ДМФА. В составе полимерной лекарственной формы содержится 16,4% связанной субстанции. Представлены данные УФ и ИК-спектроскопии, определена скорость высвобождения 5-фторурацила при рН=7,2 [139]. Разработан способ загрузки 5-фторурацила в составе микросфер на основе хитозана полученных методом эмульгирования аминогликана с СДА=85% после предварительного пространственного структурирования формальдегидом. Препарат содержит 38,5%) фторурацила при эффективности захвата субстрата 79%. Полимерная лекарственная форма применяется в условиях внутриносового введения и отмечается быстрым высвобождением активного компонента в начальный периоде с медленной последующей диффузией [140].

Проведено исследование противоопухолевого препарата эпирубицина и его конъюгата с хитозаном. Лекарственные средства (субстанция и конъюгат) высокоэффективны против лейкоза; испытание проводили на мышах с привитым лейкозом Р-388. Выживаемость животных составила соответственно

170,8% и 533,4% по отношению к контролю. Для полимерного конъюгата отмечена более высокая противоопухолевая активность, меньшая токсичность и высокий терапевтический индекс [141].

Целевая доставка и контролируемое высвобождение противоопухолевых лекарств была изучена на хитозане с ММ 2,5-105 и СДА 90%. Полимерная матрица подвергалась Ы-ацилированию янтарным ангидридом и метотрекса-том. Конъюгат проявляет высокое средство к клеткам лейкемии К562. Препарат способен постоянно высвобождать противоопухолевую субстанцию в сыворотке человека; приведена характеристика ПК, УФ и ПМР-спектров [142].

Хитозан использован в процессе подготовки наночастиц на основе поли-капролактон-ко-лактида. Установлена возможность, при лечении подобной системой, для трансэпителиального переноса противоопухолевых средств. В частности, исследована субстанция 10-гидроксикамптотецина, которую инкапсулировали в указанные наночастицы, отличающиеся свойством биодегради-руемости [143]. По результатам ряда исследований установлена противоопухолевая активность, проявляемая при действии на патологические объекты непосредственно аминогликанов и их аналогов без загрузки полимерных матриц соответствующими субстанциями. Предложены образцы хитозана для использования в качестве химиотерапевтических средств противоопухолевого типа при онкологических заболеваниях молочной железы. Этой способностью обладают хитозаны из гриба Асйпотисо^епш с ММ 5-14'Ю4. Грибы выращиваются методом ферментации в питательной среде при 15-25 °С [144]. Олиго-сахарид хитозана с ММ 18,7 кДа полученный ферментативным методом гидролиза (хитозиназа) после изготовления на его основе диффузионным методом наночастиц диаметром 368,2 нм был оценен с точки зрения цитотоксичности по отношению к клеткам А549, для определения этого показателя применялся тетразолевый метод. В зависимости от концентрации интернализации клетками наночастиц по сравнению с олигохитозаном была повышена в 14 раз. Предполагается также возможность использования полученных наночастиц для доставки лекарственных средств [145].

Г рс4 у

¡roe " '

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Ваел Шехта Метвалли Эльсайед Елазаб

выводы

1. Исследована возможность использования наночастиц хитозана в качестве носителей биологически активных веществ. Показано, что в присутствии триполифосфата натрия образуются наночастицы комплексов низкомолекулярного хитозана с модельными биологически активными веществами и известными лекарственными препаратами.

2. Изучена окислительная деструкция высокомолекулярного хитозана пероксидом водорода и получены его полимергомологи в широком диапазоне значений молекулярных масс. Установлена зависимость степени полимеризации хитозана от концентрации окислителя, температуры и продолжительности процесса. Найдено, что эффективным стоппером деструкции является водный раствор аммиака, не приводящий к понижению степени деацетилирования хитозана, как это происходит при использовании формалина.

3. Определены условия получения наночастиц низкомолекулярных хитозанов в присутствии триполифосфата натрия с узким распределением по размерам. Показано, что размер частиц зависит от величины молекулярной массы хитозана, его концентрации и концентрации триполифосфата натрия, рН среды.

4. Впервые синтезирован и идентифицирован ряд прозводных 3-замещенных пиразоло[3,4-с]пиридазинов, являющихся потенциальными биологически активными веществами.

5. Получена водорастворимая форма известного противотуберкулезного препарата гидразона изоникотиновой кислоты - 1-изоникотинил-2-Б-глюкозилгидразона дигидрат.

6. Показано, что низкомолекулярные гомологи хитозана образуют комплексы с гидразидом изоникотиновой кислоты и его углеводным производным, а также рядом производных пиридазина, на основе которых получены наноразмерные частицы с узким распределением по размерам.

7. Синтезированы наноразмерные частицы солей низкомолекулярного хитозана глутаминовой, янтарной и п-аминосалициловой кислот.

114

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Ваел Шехта Метвалли Эльсайед Елазаб, 2012 год

Список литературы

1. Приготовление и характеристика полностью дезацетилированного хитозана / Ding Chun-mei а.о. // Huadong ligong daxue xuebao. Ziran kexue ban -2005. -V 31. N3, -P. 296-299.

2. Хитин и хитозан для многосторонних применений / Dutta Pradip Kuram а.о. // J. Macromol. Sei. С. -2002. -V. 42 N 3, -P. 307-316, 345-354.

3. Миндубаева Л.M. Получение и свойства хитинсодержащих веществ / JIM. Миндубаева, Г.Н. Марченко, А. А. Лапин // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты: Сборник научных трудов. Вып. 13. Рос.акад.естеств.наук и др. М: Изд-во РАЕН 2005. -С.46-56.

4. Заявка Франция 2857970. Способ получения полностью деацетилиро-ванного хитозана с высоким молекулярным весом. // МПК С 08 В 37/08. Опубликовано 28.01.2005.

5. Chen Cheng-Ho Деацетилирование Р-хитина. 2. Планирование факторного эксперимента / Chen Cheng-Ho, Wang Fang-Yu, Ou Zu-Pei // J. Appl. Polym. Sei. -2004. -V. 93 N 5, -P.2423-2428.

6. Новиков В.Ю, Кинетические закономерности химического дезацети-лирования хитина и хитозана / В.Ю. Новиков, E.H. Чеботок, Г.А. Гизатулина // Вестник МГТУ (Мурманск). -2005. Т. 8 № 1, -С. 179-182.

7. Chen Cheng-Ho Деацетилирование (3-хитина. 1 .Влияние условий де-ацетилирования / Chen Cheng-Ho, Wang Fang-Yu, Ou Zu-Pei /Я. Appl. Polim. Sei. -2004. -V. 93 N 5, P.2416-2422.

8. Прогресс в понимании биоактивности хитозана и олигомеров ХТЗ против некоторых грибков, обитающих на древесине / Torr Kir К. M. а.о. // Holzforschung. -2005. -V. 59 N 5, -Р.559-567.

9. Kazaai M.R. Кинетические аспекты фрагментации хитозана фемтосе-кундным лазером / Kazaai M.R., Chen S.L., Ami J.J. // Photochem. and Photobiol. A. -2003. -V. 159 N 3, -P. 207-211.

10. Патент. Россия 2263681. Способ получения водорастворимых производных хитозанов. // МПК7 С 08 В 37/08. Опубликовано 10 11.2005.

П.Гизатулина Г.А. Деполимеризация хитина и хитозана при кислотном гидролизе/ Г.А. Гизатулина, В.Ю. Новиков, И.Н. Коновалова // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Восьмой Международной конференции. //Казань, 12-17 июня 2006 г., -С.27.

12. Выделение и очистка высокоактивных фракций низкомолекулярного хитозана / П.А. Кузнецов и др. // Научные основы производства ■ ветеринарных биологических препаратов: Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых. // Щелково, 5-6 октября 2004 г., -С. 124-128.

13. Разделение хитоолигосахаридов методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и тонкослойной хроматографии / Fang Zi а.о. // Period. Ocean Univ. -2005. -V. 35 N 1, -P. 113-115.

14. Xia Wen-Shui Успехи в области исследования и получения хитоолигосахаридов / Xia Wen-Shui, Wei Xin-Lja // J. Appl. Chem. -2004. -V. 21 N 4, -P. 332-337.

15. Tsaih Min Lamg Влияние удаления мелких фрагментов с помощью ультрофильтрации при ультрозвуковой обработке на кинетику хитозана/ Tsaih Min Lamg, Tseng Lan Zang, Chen Rong Huei // Polim. Degrad. and Stab. -2004. -V. 86 N 1, -P. 25-32.

16. Электронные и колебательные спектры хитозана / И.Н. Большаков и др. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Восьмой Международной конференции.// Казань, 12-17 июня 2006 г., -С. 86.

17. Ильина A.B. Образование меланоидинов при получении и хранении низкомолекулярного хитозана / A.B. Ильина, В.П. Варламов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Восьмой Международной конференции. // Казань, 12-17 июня 2006 г., -С.98.

18.Гафуров Ю.М. Средства наружного применения препаратов «Поли-мед», «Автохит», «Гидрохит» / Ю.М. Гафуров, В.А. Мамонтова, В.А. Расска-

зов // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI меж-дун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С. 150-152.

19.Опыт применения хитозан-коллагеновых губок при лечении огнестрельных ранений мягких тканей / В.В. Панов [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.185-186.

20.Голычев В.Н. Морфофункциональные особенности заживления ран верхнего века у животных в условиях применения хитозана / В.Н. Голычев, О.М. Довгилева, П.Н. Попов // Вестн. Оренбург, гос. ун-та. -2005. -С. 2325,165.

21.Трескунов К. А. Способ получения фитохитодеза / К.А. Трескунов, Л.В. Погорельская, В.М. Червинец // Пат 2197971 Россия. МПК7 А 61 К 31/722, 33/38. Опубл. 08.05.2002.

22.Средство для наружного применения "полимед" / Ю. М. Гафуров [и др.] // Пат. 4766 Белоруссия, МПК7 А 61 К 38/02, А 61 К 31/05. Опубл. 30.12.2002.

23.Опыт лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки хитозаном / В.М. Червинец [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.255-258.

24.0решкин И.В. Экспериментальное обоснование применения препаратов хитозана для лечения хронического периодонтита / И.В. Орешкин, Л.Д. Зыкова // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.183-184.

25.Тюпенко Г.И. Электрофорез хитозана при лечении заболеваний паро-донта / Г.И. Тюпенко, Е.Е. Скорикова, А.Б. Зезин // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.241-247.

26.Effects of chitosan on cell proliferation and collagen production of tendon sheath fibroblasts, epitenon tenocytes, and endotenon tenocytes / Xia Chang-suo [a. o.] // Chin. J. Traumatol. -2005 -N 6. -P. 369-374.

27.Антимикробная активность хитозана с разной молекулярной массой / И.Б. Червинец [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.252-254.

28.Создание лекарственных форм на основе низкомолекулярного хитозана и изучение их биологической активности / В. В. Сайфетдинова // Вестн. Рос. ун-та дружбы народов. Сер. Мед. -2004. -N 4. С. 309-314.

29.Антибактериальная активность низкомолекулярного хитозана / Д.В. Герасименко [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.233-238.

30.Davis S.S. Chitosan Sor oral delivery ot drugs / Davis S.S., Ilium I. // Ed. by Riccardo A.A. Muzzarelli. -2000. -P. 137-169.

31 .Факторы, влияющие на антибактериальную активность хитозана / Jang Dong-Zhi [а.о.] // Yingyong huaxue. Chin J. Appl. Chem. -2000. -VI7. N6. -P.598-602.

32.Чирков С.И. Противовирусные свойства хитозана / С.И. Чирков // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.120.

33.Разработка и изучение некоторых лекарственных форм препаратов на основе хитозана / К.Д. Жоголев [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.163-167.

34.Molecular weight dependent antimicrobial activity by chitosan / Tokura Seiichi [a.o.] // 2nd Jap.-Germ.-Semin. Polysaccharides, Sapporo, 4-8 March, 1996. Macromol. Symp. -1997. № 120. -P. 1-9.

35.Антибактериальная активность хитозана из вешенки обыкновенной /

B. М. Раевских [и др.] // 15ая конф. „Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии", Уфа, 7-10 окт., -2002. -Т.1. Уфа: Реактив 2002, -

C. 104-105.

36.Куликов С.Н. Влияние молекулярной массы хитозана на его противовирусную активность в растениях / С.Н. Куликов [и др.] // Прикл. биохимия и микробиол. -2006 -№ 2. -С. 224-228.

37.Гафуров Ю.М. Пищевая профилактическая добавка «Витаген» / Ю.М. Гафуров, Е.Г. Мирошников, В.А. Рассказов // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.153-155.

38.Krachter Hans-Udo Verwendung von Chitosan und/oder Chitosanderivaten zur antiallergischen Ausrustung von Latices / Krachter Hans-Udo, Wächter Rolf // Заявка 19742318 Германия, МПК6 С 08 L 5/08, С 08 L 21/02. Опубл 01.04.1999.

39.Андрианова И.Е. Противолучевые свойства хитозана / И.Е. Андрианова // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С. 126-127.

40.К вопросу о кинетике водорастворимого хитозана в коже В.И. Прохо-ренков [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.223-225.

41.Бычков A.B. Применение «Хитана» в клинической практике / A.B. Бычков, В.М. Быкова, Л.И. Кривошеина // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С. 156-157

42.Использование хитозана для получения биологически активных пищевых добавок / В.М. Быкова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.147-148.

43 .Воздействие разных форм хитозана на способность связывания жиров / Я. Нелер [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.258-260.

44.Клинический опыт применения хитозана и его модификаций для коррекции массы тела и диетотерапии гастроэнтерологических заболеваний / С.П. Аникеева [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.128-131.

45.Bonner Alex G. Solid phase synthesis of organic compounds via phosphity-lating reagents / Biolink Partners, Bonner Alex G., Udell Lawrence S. // Пат. 64228806 США,МПК7А 61 К 47/06. Опубл. 06.08.2002.

46.Wachter R. Verwendung von vitaminhaltigen Zubereitungen / Wachter R., Pittermann W., Horner V. Пат. 5900408 США,МПК6 A 61 К 31/73, A 61 К 9/22. Опубл. 04.05.1999.

47.Погожева А.В. Изучение влияния хитозана на клинико-биохимические и иммунологические показатели у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями / А.В. Погожева [и др.] // Вопр. Питания. -2005. -№ 4. -С. 27-30.

48.Sabnis Shobhan Use of chitosan in compressed tablets of diclofenac sodium: Inhibition of drug release in an acidic environment / Sabnis Shobhan, Rege Pankaj, Block Lawrence H // Pharm. Dev. and Technol. 1997. V.2. №3. P.243-255.

49.Ito Michio Method of producing low molecular weight chitin/chitosan and method of producing an osteoconduction substance / Ito Michio // Заявка 1306390 ЕПВ, МПК7 С 08 В 37/08. 0публ.02.05.2003.

50.Effect of carrier types on the physicochemical and dissolution characteristics of ofloxacin solid dispersion Okonogi S. [a.o.] // Sci. Pharm. 2002. V.70. №3. P.309-316.

51 .Bodek Kazimiera H. Study on the rheological properties of microcrystalline chitosan hydrogels used as drug carriers / Bodek Kazimiera H. // Polimery. -2000. -V.45.N 11-12. -P.818-825, 854.

52.Корсун В.Ф. Средство "Хитоэпифит" для лечения эпилепсии и судорожного синдрома // В.Ф. Корсун, A.A. Корсун, Е.В. Корсун // Пат. 2204407 Россия, МПК7 А 61 К 35/78. Опубл. 20.05.2003.

53.Bonner Alex G. Solid phase synthesis of organic compounds via phosphity-lating reagents/ Biolink Partners, Bonner Alex G., Udell Lawrence S. // Пат. 6190694 США, МПК7 A 61 К 9/48. Опубл. 20.02.2001.

54.Effect of heat on characteristics of chitosan film coated on theophylline tablets / Nunthanid Turairat [a.o.] // Drug Dev. and Ind. pharm. -2002. -V. 28. N 8. -P.919-930.

55.Martinac Anita Chitosan microspheres with gemfibrozil: preparation & characterization / Martinac Anita Jalsensiok van, Filipovic-Grcic Jelena, Jalsenjak Ivan // Sei. Pharm. -2001. -V. 69. N 3. -P. 177-178.

56.Shimono Norihito Solid preparations containing chitosan powder and process for producing the same / Shimono Norihito, Mori Masaaki, Higashi Yutaka // Заявка 1203590 ЕПВ, МПК7 A 61 К 47/36. 0публ.08.05.2002.

57.Shin Y. Molecular weight effect on antimicrobial activity of chitosan treated cotton fabrics / Shin Y., Yoo D. I., Jang J. // J. Appl. Polym. Sei. -2001. -V. 80. N 13. -P. 2495-2501.

58.Лапина Г.Ф. Хитозан в косметике / Г.Ф. Лапина // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.254-255.

59.Новик Л. В. Основа для косметических средств / Л.В. Новик // Пат 2136265 Россия, МПК6 А 61 К 7/00. Опубл. 10.09.1999. Бюл. №25.

60.Erhohung der Stabiiitat von lecithin-und chitosanhaltigen Formulierungen durch Zusatz von Iminodibernsteinsaure / Kropke Rainer [a.o.] Заявка 10142932 Германия, МПК7 А 61 К 7/00, А 61 К 7/48. Опубл. 27.03.03.

61.WaSSrig-alkoholische Zubereitungen mit einem Gehalt an Chitosan / Schneider Gunther [a.o.] // Заявка 10010199 Германия, МПК7 А 61 К 7/48,С 08 В 37/08. Опубл. 06.09.2001.

62.Dupuis Christine Composition cosmetique comprenant un polymere fixant et un amidon amphotere / Dupuis Christine // Заявка 2747036 Франция, МПК6 A 61 К 7/11. Опубл. 10.10.97.

63.Применение хитозана в лечебной косметике / В.М. Быкова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.231-232.

64.Fankhauser Peter Chitosan emulsion formulation / Ciba Specialty Chemicals Holding Inc., Fankhauser Peter, Müller Bernd W. // Заявка 1190702 ЕПВ, МПК7 A61 К 7/48. Опубл. 27.03.2002.

65.Hamman J.H. N-trimethyl chitosan chloride: optimum degree of quaterniza-tion for drug absorption enhancement across epithelial cells / Hamman J.H., Schultz C.M., Kotze A.F.// Drug Dev. and Ind. Pharm. -2003. -V.29. N2. -P.161-172.

66.Thanou M. Trimethylated chitosan derivatives are effective and safe penetration enhancers for oral peptide drug delivery and absorption / Thanou M., Ver-hoef J.C., Junginger H.E. // STP pharma sci. -2000. -V.10. N 4. -P.315-319.

67.Preparation and characterization of 6-O-carboxymethyl-N-trimethyl chitosan derivative as a potential carrier for targeted polymeric gene and drug delivery / Jansma C.A. [a.o.] // STP pharma sci. -2003. -V.13. N 1. -P.63-67.

68.Preparation and in vitro properties of N-succinylchitosan - or carboxyme-thylchitin-mitomycin С conjugate microparticles with specified size / Onishi Hiraku [a.o.] // Drug. Dev. and Ind. Pharm. -2001. -V.27. N 7. -P.659-667.

69.Исследование пролиферативной активности фибробластов мыши, культивируемых на коллаген-хитозановых подложках / И.Н. Большаков [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С. 140-142.

70.Применение препарата «Олигохит» при вертеброгенной дорсалгии / Е.А. Александрова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.131-134.

71.Влияние различных гелевых форм хитозана на уровень эндогенной интоксикации при деструктивной форме панкреатита / И.Н. Большаков [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.144-148.

72.Аскорбат хитозана в мембранном диализе гнойных ран / Ю.С. Винник [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С. 157161.

73 .Балабушевич Н.Г. Использование хитозана и его производных для включения белков в полиэлектролитные микрочастицы / Н.Г. Балабушевич, Г.Б. Сухоруков, Н.И. Ларионова // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.220-223.

74.Биологическая активность некоторых производных сульфата хитозана / А.И. Гамзазаде [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С. 165-166.

75.Li Fang Preparation of oxidized glucose-crosslinked N-alkylated chitosan membrane and in vitro studies of pH-sensitive drug delivery behaviour / Li Fang, Liu Wen Guang, Yao Kang De // Biomaterials. -2002. -V.23. N 2. -P.343-247.

76.Studies on the synthesis of antibiotic conjugates with chitosan / Krysteva M. [a.o.] // Докл. Болг. АН. -1997. -V.50. N 11-12. -P.67-70.

77.Rao В. Sreenivasa Preparation and in vitro evaluation of chitosan matrices cross-linked by formaldehyde vapors / Rao B. Sreenivasa, Murthy K.V. Ramana // Drug Dev. and Ind. Pharm. -2000. -V.26. N 10. -P. 1085-1090.

78.Исследования по получению и характеристике иммобилизованного па-паина / Feng Не [а.о.] // Gaofenzi xuebao. Acta polym. sin. -2000. N 5.- P.637-640. Кит.

79.Yu Yi-hua The preparation of immunoadsorbents and their adsorption properties for anti-DNA antibodies in SLE serum / Yu Yi-hua, He Bing-lin // React, and Funct. Polym. -1999. -V.41. N 1-3. -P. 191-195.

80.Dai Zhao Исследования цетил-хитозановых наносфер как носителей паклитаксела / Dai Zhao, Sun Duo-xian, Guo Yao // Zhong caoyao. Tradit. and Herbal Drugs. 2003. -V. 34. N2, -P.120-122. Кит.

81.Hoffmann Hans-Rainer Pharmazeutische Zubereitung / Hoffmann HansRainer, Asmussen Bodo // Заявка 19940794 Германия, МПК7 A 61 К 9/10. Опубл. 01.03.2001.

82.Chitosan microspheres for the specific delivery of amoxycillin to the gastric cavity / Remunan-Lopez C. [a.o.] //STP pharma sci. -2000. -V.10. N 1. -P.69-76.

83 .Mi Fwu-Long Release of indomethacin from a novel chitosan microsphere prepared by a naturally occurring crosslinker: examination of crosslinking and poly-cation-anionic drug interaction / Mi Fwu-Long, Sung Hsing-Wen, Shyu Shin-Shing //J. Appl. Polym. Sci. -2001. -V.81. N7. -P. 1700-1711.

84.Получение и оценка магнитно-направляемых хитозановых микросфер, высвобождающих аспирин / Zhou Yong-Guo [a.o.] // Yingyong huaxue. J. Appl. Chem. -2002. -V.19.N 12. -P.l 178-1182 Кит.

85.Biological activity of chitosan-sugar hybrids: Specific interaction with lectin / Li Xuebing [a.o.] // Polym. Adv. Technol. -2000. -V.l 1. N 4. -P. 176-179.

86.Rathjens Andreas N-substituierte Biopolymere / Rathjens Andreas, Wschter Rolf // Заявка 19857546 Германия, МПК7 A 61 К 7/40, С 08 В 37/08. Опубл. 15.06.2000.

87.Biocidal chitosan derivatives Пат 6306835 США, МПК7 А01 N 43/04. Опубл. 23.10.2001.

88.Functional chitosan derivative / Yura Hirofumi [a.o.] // Заявка 99954422.4 ЕПВ, МПК7 С 08 В 37/08. Опубл. 07.11.2001.

89.Hornof М. Improvement of the mucoadhesive and viscoelastic properties of chitosan by the introduction of thiol moieties / Hornof M., Kast C.E., Bernkop-Schnurch A. // Sci. Pharm. -2001. -V.69. N 3. -P. 108-109.

90.Габриелян Г.А. Новые водорастворимые производные хитозана / Г.А. Габриелян, А.И. Чернухина, Л.Г. Енгибарян // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.18.

91.Antimicrobial activity of chitosan-thioglycolic acid conjugates / Kast C.E. [a.o.] // Sei. Pharm. -2001. -V.69. N 3. -P.5196-5197.

92.Антикоагулянтная активность образцов низкомолекулярного сульфата хитозана / Н.И. Дрозд [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.161-163.

93.Сульфатирование низкомолекулярного хитозана / П.П. Столбушкина [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.50-52.

94.Исследование антикоагулянтной активности низкомолекулярных образцов сульфата хитозана / Н.И. Дрозд [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.169-171.

95.Hautpflegemittel / Münk Gabriele // Заявка 19719856 Германия, МПК6 А 61 К 7/48. Опубл. 19.11.98.

96.Александрова В. А. Направленная модификация хитозана с целью достижения высокой антимутагенной и антиокислительной эффективности / В.А. Александрова, Г.В. Обухова, Д.А. Топчиев. // Украино-Российский симпозиум по высокомолекулярным соединениям. Донецк, 28-30 окт., 2001. Тезисы докладов. Донецк: Типогр. „Норд Компьютер". -2001. -С.85.

97.Александрова, В. А. Радиолиз производных хитозана, проявляющих антимутагенную активность / В. А. Александрова, Кузина // Ж. физ. химии . -2006. -№ 5.-С. 935-939.

98.Синтез карбоксиметилхитозана в среде изопропилового спирта / Н.Г. Базарнова [и др.] // Фармация в XXI веке: инновации и традиции. Тез. Докл. Междун. Научной крнф., С.-Петерб., 7-8 апр., 1999. СПб -1999, -С.9.

99.Chen Ling-yun Взаимоотношение структуры и противомикробной активности карбоксиметилхитозана / Chen Ling-yun, Du Yu-min, Liu Yi // Wuhan daxue xuebao. Ziran kexue ban. J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Ed. -2000. -V.46. N 2. -P.191-194 Кит.

100.Elson Clive M. N,0-carboxymethylchitosan for prevention of surgical adhesions / Elson Clive M. // Пат. 5679658 США, МПК6 A 61 К 31/73, С 08 В 37/08. Опубл. 21.10.1997.

101.Antibacterial action of chitosan and carboxymethylated chitosan / Lio Xiao Fei [a.o.] // J. Appl. Polym. Sci. -2001. -V.79. N 7. -P.1324-1335.

102.Хемоселективное карбоксиэтилирование хитина и хитозана и антимутагенная активность 1Ч-(2-карбоксиэтил) хитозанов / Ю.А. Скорик [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.46-50.

103 .N-Карбоксилсодержащие производные хитозана, гомологи хитина. Часть III. N-Карбоксибутилхитозан / Pham Le Dung [a.o.] // Tap chi hoa hoc. J. Chem. 2000. -V.38. N 2. -P.25-26 Вьет. .

104.Синтез и характеристика лиотропных жидких кристаллов N-алкилхитозана / Wu Yu-Song [a.o.] // Wuli huaxue xuebao. Acta Phys.-Chim. Sin. 2001.-V.17. N11. -P.1040-1052 Кит.

105.Dimethylaminoethylated hydroxypropyl-chitosan: preparation and application as polymeric ligand to form Rh[6] cluster complexes for the reduction of benzaldehyde and nitrobenzene / Zhu Hong [a.o.] //J. Appl. Polym. Sci. -2001. -V.80. N 3. -P.447-453.

106.Kulpinski Piotr Chemoenzymatic synthesis of new sialylated chitosan derivatives / Kulpinski Piotr, Mshitura Shin-Ichiro // 38th Makromolekular IUPAK Symposium: Book Abstr. Warsaw. -2000. -V.2. -P.745.

107.Новое лекарственное средство на основе хитозана - «Адгелон-гель» / В.Е. Тихонов [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.235-236.

108.Antitumour activity and side effects of combined treatment with chitosan and cisplatin in sarcoma 180-bearing mice / Yoshiyuki Kimura [a.o.] // J. Pharm. and Pharmacol. - 2000. - V.26. - N 10 — P. 883-890.

109.Kato Yoshinori. Contribution of chitosan and its derivatives to cancer chemotherapy / Yoshinori Kato, Hiraku Onishi, Yoshiharu Machida // In vivo. -2005.—V.4.-N 1,-P. 301-310.

110. Kato Yoshinori. N-succinyl-chitosan as a drug carrier: Water-insoluble and water-soluble conjugates / Yoshinori Kato, Hiraku Onishi, Yoshiharu Machida //Biomaterials. - 2004. - V.21. - N 5. — P. 907-915.

111.К.Д Жоголев, В.Ю Никитин, B.H. Цыган // Вестн. нов. мед. тех. -

2003.-Т. X.-№ 1-2.-С. 94.

112.Синтез и характеристика макромолекулярного пролекарства хитозан-5-фторурацила / He-ping Li [a.o.] // Changsha ligong daxue xuebao. Ziran kexue ban. -2005,- T.2. - № 4. - C.84-88. 07.12-190.169.

113.Приготовление и высвобождение in vitro хитозановых микросфер для внутриносового введения, загруженных 5-фторурацилом / Ai-Ping Zheng [a.o.] // Zhongguo yaoke daxue xuebao = Journal of China Pharmaceutical University. —

2004. - V.35. - N4 .—P. 318-323. 05.22-190.37.

114.Исследование противоопухолевого действия оригинального конъюга-та антрациклинового противоопухолевого антибиотика эпирубицина с хитоза-ном / Н. Тодорова [и др.] // Мед. прегл. Онкол. и радиол. - 2004. - N 1. - С. 3-7.

115.Приготовление и стабильность in vitro противоопухолевого лекарства: конъюгат метотрексат-сукцинил-хитозана / Yin-Song Wang [a.o.] // Gaodeng xuexiao huaxun xuebao = Chemical Journal of Chinese Universities. - 2003. -V.214. - N 11 — P. 2103-2106. 04.22-190.92.

116.Chitosan surface-modified hydroxycamptothecin loaded nanoparticles with enhanced transport across caco-2 cell monolayer / Leyang Zhang [a.o.] // J. Nanosci. and Nonotechnol. - 2006. - V.6. - N 9-10. — P. 2912-2920. 07.06-190.24.

117.Novel chitosans / Hing-Yuen Chan [а. о.] // Заявка ЕПВ МКИ7 С 08 В 37/00 опубл. 01.09.2004

118.Wan Li-qing. Изучение захвата клетками А549 наночастиц на основе олигосахарида хитозана / Li-qing Wan, Fu-qiang Ни, Hong Yuan // Yaoxue xuebao. - 2004. - V.39. - N 3. — P. 227-231.

119.Wessling Werner. Filmformige mucoadhasive Darreichungsformen zur Verarbreichung von Cannabis-Wirkstoffen / Wessling Werner // Заявка Германия МКИ7 A 61 К 9/26 Опубл. 08.01.2004.

120.Huang Yi. Приготовление новой комплексной пленки из Ь-циклодекстрин-сукцината натрия/хитозана посредством электростатического взаимодействия и ее поведение в регулированной доставке лекарства / Yi Huang, Xiao-dong Fan // Jingxi huagong = Fine Chemicals. - 2005. — V.22. - N 1. -P. 44-48.

121.Chen Wei R. Mechanism of laser immunotherapy - role of immunoadju-vant and selective photothermal laser-tissue interaction / Wei R. Chen, Hong Liu, Robert E. Nordquist // Proc. SPIE .— 2001. — V.4536. — N 2. - P. 82-89. 04.02-190.211П

122.Selective photothermal laser-tissue interaction with augmentation of im-munoadjuvants in treatment of DMBA-4 metastatic mammary tumors in rats / Wei R. Chen [a.o.] // Proc. SPIE. - 2002. — P. 37-42.

123 .Enhancement of laser cancer treatment by a chitosan-derived immunoadju-vant / Wei R. Chen [a.o.] // Photochem. and Photobiol. - 2005. - N 1,— P. 190-195.

124.Привитая радикальная полимеризация метакрилатов на хитозан / JI.A. Смирнова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.57-58.

125.Zhang Guanghua Привитой сополимер хитозана с акриламидом и его флоккулятивные свойства / Zhang Guanghua, Xie Shuhui, Duo Ian // J. Xian Jiaotong Univ. -2002. -V. 36. N 5. -P.541-544 Кит.

126.Preparation of water-soluble chitosan derivatives and their antibacterial activity /Xie Wenming [a.o.] //J. Appl. Polym. Sci. 2002. Y.85. №7. P.1357-1361.

127.Гороховцева P. Синтез и исследование O-полиэтиленгликолированного хитозана / Р. Гороховцева, Р. Макушка // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.301-303.

128.Способ получения полиэтиленгликолевого эфира хитозана / А. Н. Ка-линиченко [и др.] // Пат. 2194716 Россия, МПК7 С 08 В 37/08, А 61 К 31/722. Опубл. 20.12.2002.

129.Rathjens Andreas N,0-substituierte Biopolymere / Rathjens Andreas, Wachter Rolf // Заявка 10019140 Германия, МПК7 С 08 В 37/08. Опубл. 01.03.2001.

130.Michael David Bentley Hydrogels derived from chitosan and poly(ethylene glycol) or related polymers / Shearwater Corp., Michael David Bentley, Xuan Zhao // Пат. 6602952 США, МПК7 С 08 G 63/48, A 01 N 43/04. Опубл. 05.08.2003.

131.A chitosan/carboxymethylcellulose complex used for the pH-controlled delivery of ceftriaxone Aelenei N. [a.o.] // Stud. Univ. Babes-Bolyai. Chem. -2001. -V.46. N 1-2. -P.155-160.

132.Chitosan-polyelectrolyte complexation for the preparation of gel beads and controlled release of anticancer drug. I. Effect of phosphorous polyelectrolyte complex and enzymatic hydrolysis of polymer / Mi Fwu-Long [a.o.] // J. Appl. Polym. Sci. -1999. -V.74. N 7. -P.1868-1879.

133.Derrieu Guy Compositions a base de chondroitine et de chitosan pour la protection, le traitement ou le remplacement des tissus conjonctifs / Derrieu Guy, Pougnas Jean Luc // Заявка 2791262 Франция, МПК7 A 61 К 31/726, A 61 P 17/00, 19/00. Опубл. 29.09.2000.

134.The controlled release of a drug from biodegradable chitosan gel beads / Kofuji Kyoko [a.o.] // Chem. and Pharm. Bull. -2000. -V.48. №4. -P.579-581.

135.Kanbayashi Shintarou Сжатие лекарств в таблетках, содержащих кап-па-каррагинан и метилгликольхитозан в качестве носителя Kanbayashi Shintarou// Kobunshi ronbunshu. J. Polym. Sci. and Technol. -2001. -V.58. N 11. -P.617-623 Яп.

136.Получение таблеток, обеспечивающих пролонгированное высвобождение пуэрарина, факторы влияния / Jing Qiu-fang [a.o] // Huadong ligong daxue xuebao. J. E. China Univ. Sci. and Technol. -2003. -V.29. N 2. -P. 173-176 Кит.

137.Chitosan-alginate microparticles as a protein carrier / Coppi Gilberto [a.o.] // Drug. Dev. and Ind. Pharm. -2001. -V.27. N 5. -P.393-400.

138.Rowsen Moses L. Beta cyclodextrin-insulin-encapsulated chirosan/alginate matrix: Oral delivery system / Rowsen Moses L., Dileep K.J., Sharma Chandra P. // J. Appl. Polym. Sci. -2000. -Y.75. N9. -P.1089-1096.

139.Микрокапсулирование биологически активных веществ гелевые хи-тозан-альгинатные оболочки / Фрончек Э.В. [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.273-275.

140.Chen Yi-Qing Механизм замещения ионов в альги-нат/хитозан/альгинатных гелях / Chen Li-Qing, Sun Duo-Xian // Wuli huaxue xuebao. Asta Phis.-Chim. Sin. -2002. -V.18. N 7. -P.609-612 Кит.

141.Buccal delivery of acyclovir from films based on chitosan and polyacrylic acid / Rossi Silvia [a.o.] // Pharm. Dev. and Technol. -2003. -V.8. N 2. -P. 199-208.

142.Новые полиэлектролитные комплексы хитозана / Н.А. Самойлова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.320-323.

143 .К изучению взаимодействия двух природных полисахаридов / С.Ш. Рашидова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003.-С.347-350.

144.0фицеров Е.Н. Взаимодействие пектина амаранта с хитозаном / Е.Н. Офицеров, JI.A. Михеева // Новые достижения в исследовании хитина и хито-зана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИ-РО, 2001.-С.104-106.

145.Interaction of chitosan with hydrogel of poly(acrylic acid) and preparation of encapsulated drugs / Bo Yin Jing [a.o.] // Eurasian Chem.-Technol. J. -2001. -V.3. N 3. -P.191-194.

146.Ферментативная активность комплекса сульфат хитозана - протеаза С / Т.Н. Юданова [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI междун. Конф., Москва-Щелково, 22-24 окт. 2001г., М.: ВНИРО, 2001.-С.363-364.

147.Раневые покрытия на основе коллахита - этап получения и использования дермально-эпидермального эквивалента кожи человека / И.Н. Большаков [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. 2003г., М.: ВНИРО, 2003,-С.136-139.

148.Gupta К.Е. Studies on seniinterpenetrating polimer network beads of chitosan - poly(ethilen glycol) for the controlled release of drugs / Gupta K.E., Kumar Majeti N.V. // J. Appl. Polym. Sci. 2001. -V.80. N 4. -P.639-649.

149.Композиции на основе природного полимера хитозана с синтетическими полимерами / Н.В. Пастухова [и др.] // Украино-Российский симпозиум по высокомолекулярным соединениям. Донецк, 28-30 окт., 2001. Тезисы докладов. Донецк: Типогр. „Норд Компьютер". -2002. -С. 122.

150.Lorenz Donald Н. Gels formed by the interaction of polyvinylpyrrolidone with chitosan derivatives / Hydromer, Inc., Lorenz Donald H., Lee Connie C. // Пат. 6379702 США, МПК7 A 61 К 9/14. Опубл. 30.04.2002.

151 .Estimation of polymer compositions containing chitosan for veterinary applications / Wisniewska-Wrona Maria [a.o.] // Fibres and Text. East. Eur. -2002. -V.10. N 3. -P.82-85.

152.Electric stimuli responses to poly(vinyl alcohol)/chitosan interpenetrating polymer network hydrogel in NaCl solutions / Kim Seon Jeong [a.o.] // J. Appl. Polym. Sci. -2002. -V.86. N 9. -P.2285-2289.

153.Polymer constructs / Chondros, Inc., Domb Abraham J. // Пат. 6514522 США, МПК7 A 61 Л 9/70. Опубл. 04.03.2003.

154.Chitosan based hydrogels for macromolecular drug delivery / Martin L. [a.o.] // J. Pharm. and Pharmacol. -1998. -V.50. Suppl. -P. 171.

155.Regioselective conjugation of chitosan with a laminin-related peptide, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, and evaluation of its inhibitory effect on experimental cancer metastasis

Nishiyama Yasuhiro [a.o.] // Chem. and Pharm. Bull. -1999. -V.47. N 3. -P.451-453.

156.A conjugate from a laminin-related peptide, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, and chitosan: Efficient and regioselective conjugation and significant inhibitory activity against experimental cancer metastasis / Nishiyama Yasuhiro [a.o.] // J. Chem. Soc. Perkin Trans. -2000. -V.l. N 7. -P. 1161-1165.

157.Лосева С. В. Гпдрогелевые композиции для модификации синтетических протезов кровеносных сосудов / С.В. Лосева, Новикова, С.П., М.И. Штильман //16 междун. Конф. Молодых ученых по химии и химической технологии (МКХТ-2002), Москва, 2002. Успехи в области химии и хим. технол.. -2002.-Т.16.№3.-С.59.

158. Нудьга Л. А., Петрова В. Л. Высокомолекулярные соединения. Сер. Б. 1997, т.39, № 7, С. 1232 - 1236.

159. Длительновысвобождающие препараты аспирина для профилактики закупорки сосудов.// Патент США 6663896 МПК7 А 61 К/24. Опубл. 16.12.2003

160. Новое лекарственное средство на основе хитозана - «Адгелон-гель» / Тихонов В.Е. [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VI международ, конф. Москва-Щелково, 22-24 0КТ, -2001г., М.: ВНИ-РО, -2001.-С. 235-236.

161. Способ получения 1 -изоникотинил-2-В-глюкозилгидразона, обладающего противотуберкулезной активностью / А.П. Арзамасцев [и др.] // Пат. № 2279438 РФ. Бюл. 19.

162. Способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров / В.Л. Лапенко [и др.] // А. с. № 561377 СССР от 1977 г.

163.Поли-3-акрилоил4>глюкоза в качестве носителя лекарственных препаратов / В.Л. Лапенко [и др.] // А. с. № 1051899 СССР от 1983 г.

164. Сливкин А.П. Получение и противотуберкулезная активность полимерных форм изониазида и стрептомицина на основе эфиров карбоксиметил-декстрана / А.И. Сливкин, В.Л. Лапенко, Г.Г. Сироткина // Химико фармацевтический журнал 1999. - № 12. -С. 34-37.

165. Полистрептомицинкарбоксилат, обладающий противотуберкулезной активностью / В.Л. Лапенко [и др.] // А. с. № 799355 СССР от 1980 г.

16 6. Иммобилизация L-лизина на пространственно-сшитый гранулированный сополимер (матрицу) аффинного сорбента /А. Ф. Маслюк [и др.] // Доп. Нац. АН Укршни. -2004. № 8. -С. 146-152.

167.Zhou Xiao-Hua Получение сшитого катионита на основе хитозана тутового шелкопряда - глутаминовой кислоты / Zhou Xiao-Hua,Li Fen,Xian Xiao-Hong // Chin J. Appl. Chem. -2005. -V. 22. N 2. -P. 152-157.

168.Polymerization and complexation of methacryloylglycine / Masuda Seizo [a.o.] // J. Polym. Sci. A. -1999. -V.37. N 9. -P. 1303-1309.

16 9. Say Ridvan Selective separation of uranium containing glutamic acid molecular-imprinted polymeric microbeads / Say Ridvan, Ersoz Arzu, Denizli Adil // Separ. Sci. and Technolog. -2003 -V. 38. N14. -P.3431-3447.

170. Синтез и иммуностимулирующая активность полиэлектролитов на основе гликанов / А.И. Сливкин [и др.] // Хим. Фарм. журн. -1995. -Т. 29. N 4. -С.30-32.

171. Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression / Miyata Kanjiro [a.o.] // J. Amer. Chem. Soc. -2004. -V. 126. N 8. -P. 2355-2361.

172. Влияние различных производных гелевых форм хитозана на уровень эндогенной интоксикации при деструктивной форме панкреотита / И.Н. Большаков [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Матер. VII междун. Конф., С.-Петерб.-Репино, 15-18 сент. -2003г., М.: ВНИРО, -2003. -С. 144-148.

173. Синтез и характеристика комплекса N-салицилиден-глицинового шиффова основания с Fe(II), иммобилизованного хитозаном / Lang Hui-Yun [а.о.] // Gaodeng xuexiao huaxun xuebao. -2003. -V. 24. N 11, -P. 1937-1941.

174.Gupta К. C. Drug release behavior of beads and microgranules of chitosan / Gupta К. C., Kumar M. N. V. Ravi // J. Appl. Polym. Sci. -2000. -V. 76. N5. -P. 672-683.

175. Bhadra D. PEGylated peptide-based dendritic nanoparticulate systems for delivery of artemether / Bhadra D.,Bhadra S.,Jain N. K. // J. Drug Deliv. Sci. and technolog. -2005. -V. 15. N1. -P. 65-73.

17 6. Culbertson В. M. New matrix resins for glass polyalkenoates or glassionomers with pendant amino acid residues / Culbertson В. M., Xie D., Thakur A. // J. Macromol. Sci. A 5-6. -1999. -V. 36.- P. 681-696.

177.Dotrong M. H. Visible light-curable N-meyhacryloyl glutamic acid modified polyelectro lytes for use in dentral applications / Dotrong M. H., Johnston W. M., Culbertson В. M./ J. Macromol. Sci. A. -2000. -V. 37. N 8. -P. 911-926.

178. Исследование комплексов палладия с хитозаном и его производными как потенциальных катализаторов в реакции окисления терминальных олефи-нов / Н.В. Крамарева [и др] // Кинетика и катализ. -2004. -Т. 45. № 5. -С.784-793.

179.Cui Yuanchen Synthesis of chitosan derivatives supported palladium complexes and their catalytic behavior in the Heck reaction / Cui Yuanchen, Zhang Lei, Li Ying// Polym.Adv.Technol. -2005. -V. 16. N8. -P.633-637.

180.Анпилогова Г. P. Состав и свойства водорастворимых продуктов взаимодействия хитозана с Fe(III) в водных растворах FeCl3 / Г. Р. Анпилогова, Ю. И. Муринов// Ж. прикл. химии. -2004. -Т. 77. №11. -Р. 1880-1886.

181.Kimura Yoshiyuki. Antitumour activity and side effects of combined treatment with chitosan and cisplatin in sarcoma 180-bearing mice / Kimura Yoshiyuki. // J. Pharm. and Pharmacol. -2000. N 7. -P. 883-890.

182.Li He-ping. Синтез и характеристика макромолекулярного пролекарства хитозан-5-фторурацила / Li He-ping. // Changsha ligong daxue xu-ebao. Ziran kexue ban. -2005. -V. 2. N4. -P. 84-88.

183.Zheng Ai-Ping. Приготовление и высвобождение in vitro хитозановых микросфер для внутриносового введения, загруженных 5-фторурацилом / Zheng Ai-Ping // Journal of China Pharmaceutical University. -2004. -V. 35. N4. -P. 318-323.

184.Тодорова H. Исследование противоопухолевого действия оригинального конъюгата антрациклинового противоопухолевого антибиотика эпируби-цина с хитозаном / Н Тодорова // Мед. прегл. онкол. и радиол. -2004. №1. -С.З-7.

185.Wang Yin-Song. Приготовление и стабильность in vitro противоопухолевого лекарства: конъюгат метотрексат-сукцинил-хитозана / Wang Yin-Song // Chemical Journal of Chinese Universities. -2003. -V. 24. N11. -P. 2103-2106.

186.Hebert Rolland F. / Water-soluble salts of 2-difluoromethyl-2,5-diaminopentanoic acid (dfmo) / Hebert Rolland F. // Патент США 66305111. МПК7: A 61K 31/195. Опубл.: 07.10.2003г.

187.Строение бактерицидоактивных комплексов меди (2+) на поверхности хитозана / Ю.Н. Низельський [и др.] // Новые перспективы и исследования хитина и хитозана: Материалы Восьмой конференции, Москва-Щелково, 2006. Изд-во ВНИРО. -2006. -С. 114-116.

188.Теоретическое исследование механизма комплексообразования в системе хитин-Pb (II) / Т.В. Солодовник [и др.] // Новые перспективы и исследования хитина и хитозана: Материалы Восьмой конференции, Москва-Щелково, 2006. Изд-во ВНИРО. -2006. -С. 130-133.

189.Vincendon М. Tripheny 1 si 1у 1 chitin: a new chitin derivative soluble in organic solvents / Vincendon MM Adv. Chitin Sci. -1997. N2. -P. 328-333.

190. Yan Wu Chitosan nanoparticles as a novel delivery system for ammonium glycyrrhizinate / Yan Wu, Wuli Yang, Changhum Wong// International journal of pharmaceutics - 2005. P.235-245.