Наноформы с липоевой кислотой и её эфирами: получение, антиоксидантные и антиагрегантные свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Щелконогов Василий Андреевич

• Щелконогов Василий Андреевич
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Щелконогов Василий Андреевич

Список сокращений

1. Введение

2. Литературный обзор

2.1. Тромбоциты: строение и функции

2.1.1. Микроскопия тромбоцитов

2.1.2. Активация, адгезия и агрегация тромбоцитов

2.2. Строение и функции нейтрофилов

2.2.1. Свободно-радикальные процессы в нейтрофилах

2.2.2. Роль нейтрофилов в патологических процессах

2.3. Липоевая кислота

2.3.1. История открытия, метаболизм и биосинтез липоевой кислоты

2.3.2. Биологические свойства липоевой и дигидролипоевой кислоты

2.3.3. Концетнрация липоевой кислоты в плазме крови

2.4. Конъюгаты липоевой кислоты, обладающие различной фармакологической активностью

2.4.1. ЛК-конъюгаты, обладающие нейропротекторным действием

2.4.2. Противодиабетические производные ЛК

2.4.3. ЛК-конъюгаты обладающие противоспалительным действием

2.4.4. Противоопухолевые конъюгаты липоевой кислоты

2.4.5. Кардиопротекторные конъюгаты липоевой кислоты

2.4.6. Производные ЛК, используемые для адресной доставки лекарственных препаратов

2.4.7. ЛК-конъюгаты, применяемые в косметике

2.5. Наноформы с липоевой кислотой и с её производными

3. Теоретическая часть'

3.1. Синтез эфиров липоевой кислоты

3.2. Получение и изучение характеристик наноформ с липоевой кислотой и её эфирами

3.2.1. Получение наноформ с липоевой кислотой

3.2.2. Получение и изучение характеристик наноэмульсий эфиров липоевой кислоты

3.3. Влияние наноформ липоевой кислоты и её эфиров на функциональную активность тромбоцитов и нейтрофилов

3.3.1. Влияние наноформ липоевой кислоты и её эфиров на «кислородный взрыв» в нейтрофилах

3.3.2. Влияние наноформ липоевой кислоты и её эфиров на образование кислородсодержащих радикалов в нейтрофилах, активированных ФМА

3.3.3. Влияние липосом с липоевой кислотой на дегрануляцию нейтрофилов

3.3.4. Влияние наноформ с липоевой кислотой и её эфирами на активность НАДФН-оксидазы нейтрофилов

3.3.5. Влияние наноформ с липоевой кислотой и её эфирами на агрегацию тромбоцитов

3.3.6. Влияние нанодисперсий с липоевой кислотой и её эфирами на концентрацию ТБК-активных продуктов в плазме крови

4. Экспериментальная часть

4.1. Синтез эфиров липоевой кислоты

4.2. Определение критической концентрации мицеллообразования липоевой кислоты

4.3. Получение липосом с ЛК методом пассивной загрузки

4.4. Получение наноэмульсий с ЛК и с ЛК-эфирами

4.5. Определение кинетики высвобождения липоевой кислоты из наноформ

4.6. Выделение тромбоцитов из крови

4.7. Метод исследования процесса агрегации тромбоцитов

4.8. Определение тиобарбиатурат активных продуктов в плазме крови

4.9. Выделение нейтрофилов из крови

4.10. Определение цитотоксичности наноформ ЛК и ЛК-эфиров на модели первичной культуре нейтрофилов

4.11. Хемилюминесценция нейтрофилов

4.12. Определение количества (концентрации) СОАР на модели первичной культуры нейтрофилов (НСТ-тест)

4.13. Определение кислородсодержащих радикалов в нейтрофилах

4.14. Определение активности НАДФН-оксидазы в нейтрофилах

4.15. Статистическая обработка результатов экспериментов

5. Выводы

Публикации автора

Приложение

Список используемой литературы

Благодарности

Список сокращений

ACh - ацетилхолин

DCC - 1,3-дициклогексилкарбодиимид DCF - 2,7-дихлорфлуоресцеин

DCFH-DA - 2,7-дихлордигидрофлуоресцеин диацетат

DCM - дихлорметан

DMAP - 4-№,№диметиламинопиридин

DMPO - 5,5-диметилпирролин-Ы-оксид

DOX - доксорубицин

GSH - глутатион

HETE - гидроксиэйкозатетраеновая кислота

HPETE - гидропероксиэйкозатетраеновая кислота

IP3 - инозиттрифосфат

PDI - индекс полидисперсности

PGG2 - простагландин G2

PIP2 - фосфатидилинозитдифосфат

PKC - протеинкиназа C

PLA2 - фосфолипаза А2

PLC - фосфолипаза С

PPARs - рецепторы, активируемые пероксисомными пролифераторами

TLR - толл-подобные рецепторы

АДФ - аденозиндифосфат

АК - арахидоновая кислота

АСМ - атомно-силовая микроскопия

АТФ - аденозинтрифосфат

АФК - активные формы кислорода

АЦ - аденилатциклаза

ДГЛК - дигидролипоевая кислота

ДЛДГ - липоамиддегидрогеназа

ДТТ - дитиотреитол

ККМ - критическая концентрация мицеллообразования

КФМ - компьютерная фазовая морфометрия

ЛК - липоевая кислота

ЛК2ГД - 1,6-ди-О-липоилоксигексан

ЛК2МИ - 1(3),4(6)-ди-О-липоил-£и-мио-инозит

ЛК2ПД - 1,3-ди-О-липоилоксипропан ЛК3ГЛ - 1,2,3-три-О-липоилглицерин

ЛКДПАП - 2-О-Липоилокси-1,3-(дипальмитоиламино)пропан ЛОГ - липоксигеназа Лс - липосомы

МДА - малоновый диальдегид МЛВ - мультиламеллярные везикулы МПО - миелопероксидаза

НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат

НЛН - наноструктурированные липидные носители

НФ - нейтрофилы

НЧ - наночастицы

НЭ - наноэмульсии

ОГ - олигоглицерин

ОЛВ - одноламеллярные везикулы

ОТП - обогащенная тромбоцитами плазма

ПАВ - поверхностно-активное вещество

ПОЛ - перексиное окисление липидов

ПЭГ - полиэтиленгликоль

СОАР - супероксид-анион радикал

СОД - супероксиддисмутаза

СЭМ - сканирующая электронная микроскопия

ТАО - смесь трипафлавина и акридинового оранжевого

ТБК - тиобарбитуровая кислота

ТБК-АП - тиобарбитурат-активные продукты

ТЛН - твердые липидные наночастицы

Тромбоксан А2 - ТХА2

Тромбоксан В2 - ТХВ2

ТХУ - трихлоруксусная кислота

Тц - тромбоциты

ФАД - флавинадениндинуклеотид ФАТ - фактор активации тромбоцитов ФБР - фосфатный буферный раствор ФВ - фактор Виллебранда ФМА - форбол-12-миристат-13-ацетат

ФНО-а - фактор некроза опухоли альфа

ФХ - фосфатидилхолин

ХЛ - хемилюминесценция

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ЦОГ - циклооксигеназа

ЭВ - эффективность включения

ЭПР - электронный парамагнитный резонанс

ЭР - эндоплазматический ретикулум

1. Введение

Актуальность темы. Цереброваскулярные заболевания являются наиболее распространенными формами патологии центральной нервной системы. К основным патогенетическим механизмам инсульта относят возникновение и прогрессирование оксидантного стресса, воспалительные реакции, нарушения в сосудисто-тромбоцитарном и коагуляционном гемостазе, повреждения ГЭБ. Ишемия головного мозга является пусковым фактором развития многих патобиохимических реакций, первоначально, окислительного стресса с образованием активных форм кислорода (АФК) и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в избыточном количестве, приводящих к деструкции и гибели нейронов головного мозга. Обостряет ишемический процесс образование эйкозаноидов, которые приводят к активации и впоследствии к агрегации форменных элементов крови. Поэтому для ингибирования этих процессов в медицинской практике необходимо применять лекарственные препараты, обладающие противовоспалительным (антиоксидантным, нейропротекторным) действием и препятствующие тромбообразовнаию [1].

При комплексной терапии сосудистых заболеваний головного мозга широко используются антиоксиданты. Одним из таких веществ является альфа-липоевая кислота ЛК (5-(1,2-дитиолан-3-ил)пентановая кислота, тиоктовая кислота). В различных исследованиях in vitro и in vivo было показано, что ЛК и её восстановленная форма дигидролипоевая кислота (ДГЛК) подавляют образование активных форм кислорода и продуктов ПОЛ, тем самым защищая клетки и ткани от окислительного повреждения. ЛК усиливает активность эндогенных антиоксидантов (витамины С и Е, убихинон), увеличивает концентрацию восстановленного глутатиона. ЛК и ДГЛК способны связываться с двухвалентными ионами тяжелых металлов с образованием стабильных хелатных комплексов. В исследованиях in vitro и in vivo было выявлено, что ЛК эффективно взаимодействует с Fe2+, Cu2+, Cd2+, Zn2+ и Pb2+, а ДГЛК - с Hg2+, Fe3+, таким образом, препятствуя протеканию свободнорадикальных процессов и развитию интоксикации в организме человека. Повышая активность фактора транскрипции Nrf2, ЛК обуславливает экспрессию Nrf2-зависимых генов антиоксидантных ферментов, тем самым поддерживая антиоксидантный статус клеток и защищая их от токсичных веществ. Противовоспалительное действие ЛК обусловлено регуляцией ею сигнальных путей ядерного фактора транскрипции Nf-kb и снижением концентрации цитокинов, участвующих в воспалительных реакциях и апоптозе клеток и тканей [2,3]. Нейропротекторное действие ЛК связано с улучшением функционирования митохондрий, стимуляцией роста аксонов и защитой нейронов от окислительных повреждений [4,5].

В литературе [6,7] описаны возможные механизмы действия ЛК на функциональную активность тромбоцитов (Тц). Было показано, что при индуцировании агрегации тромбоцитов арахидоновой кислотой (АК) в условиях in vitro ЛК активировала рецепторы, активируемые

пероксисомными пролифераторами (PPARs), в результате чего, происходило уменьшение концентрации внутриклеточного Са2+, подавление активности протеинкиназы Са (РКСа) и нарушение работы циклооксигеназы-1 (ЦОГ-1) и, как следствие, снижение синтеза тромбоксанов. При этом повышался уровень циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), который уменьшает степень адгезии и агрегации тромбоцитов.

Липоевая кислота плохо растворима в воде, поэтому в медицинской практике используются препараты в виде её меглуминовой или этилендиаминовой соли, которые вводятся в больших дозах. Вследствие быстрой биодеградации липоевой кислоты (окисление боковой цепи и связывание с белками плазмы [8]) её концентрация в плазме крови резко снижается (до 20-25 мкг/мл за 20-30 мин), что приводит к уменьшению антиоксидантного и терапевтического действия. Период полувыведения ЛК - 25 мин. Поэтому разработка новых производных ЛК (ЛК-эфиров) и получение различных наноформ с ЛК или ЛК-эфирами для устранения вышеперечисленных недостатков является актуальной задачей.

Кроме того, из литературных данных известно, что различные нанодисперсии (липосомы или наноэмульсии) могут повышать проникновение препаратов в клетки за счет их слияния с плазматической мембраной, в процессе эндоцитоза или с помощью других механизмов и облегчать транспорт ЛК через мембрану клеток [9,10].

Степень разработанности научной тематики. Несмотря на большое количество работ, в которых приводятся сведения о разработке наночастиц с липоевой кислотой и её производными с различными антиоксидантами, витаминами, аминокислотами и другими веществами, в литературе отсутствуют подробные данные об их физико-химических характеристиках, стабильности, изучении биологической активности этих наночастиц на клеточных культурах тромбоцитов и нейтрофилов, а также животных моделях ишемии головного мозга.

Целью данного исследования является получение наноформ с липоевой кислотой и ее эфирами для солюбилизации их в водных растворах, обладающих пролонгированным действием, а также изучение влияния полученных наночастиц на функциональную активность тромбоцитов и нейтрофилов.

Основные задачи работы:

1. Синтезировать эфиры липоевой кислоты с различными спиртами (1,3-дипальмитоиламинопропан-2-олом, 1,3-пропандиолом, 1,6-гександиолом, глицерином, мио-инозитом);

2. Получить и охарактеризовать наноформы с липоевой кислотой и её эфирами;

3. Оценить и сравнить влияние полученных наноформ с липоевой кислотой или её эфирами на функциональную активность тромбоцитов и нейтрофилов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Наноформы с липоевой кислотой и её эфирами: получение, антиоксидантные и антиагрегантные свойства»

Научная новизна работы.

1. Осуществлен синтез новых эфиров липоевой кислоты 2-О-липоилокси-1,3-дипальмитоиламинопропана и 1(3),4(6)-ди-О-липоил-лп-мио-инозита и усовершенствованы методы синтеза и выделения 1,3-ди-О-липоилоксипропана, 1,6-ди-О-липоилоксигексана, 1,2,3-три-О-липоилглицерина. При этом выход целевых веществ составил 67-90%;

2. Получены наночастицы (НЧ) с ЛК на основе фосфатидилхолина, плюроника Ф68 и олигоглицерина с размером частиц от 50 до 350 нм, характеризующиеся медленным высвобождением субстанции из наночастиц в модельной системе и высокой дисперсионной стабильностью при длительном хранении при комнатной температуре;

3. Получены новые наноэмульсии (НЭ) ЛК-эфиров на основе плюроника Ф68 и фосфатидилхолина с размером частиц от 20 до 450 нм, определены их основные физико-химические характеристики. Использование данного состава компонентов позволяет создать наноформы с высоким содержанием активной субстанции, характеризующиеся дисперсионной стабильностью при комнатной температуре;

4. Впервые продемонстрирована антиагрегационная и антиоксидантная эффективность полученных наноэмульсий ЛК и ЛК-эфиров на тромбоцитах и нейтрофилах, а также предложены возможные механизмы их действия на данных клеточных моделях. Наиболее высокой биологической активностью обладали наноэмульсии, содержащие ЛК, 2-О-липоилокси-1,3-дипальмитоиламинопропан, 1,6-ди-О-липоилоксигексан и 1,2,3-три-О-липоилглицерин, что делает их перспективными кандидатами для дальнейшего углублённого исследования.

Теоретическая и практическая значимость работы. Усовершенствованные в работе методики синтеза эфиров липоевой кислоты позволили получить целевые соединения с высокими выходами и упростить их выделение. Подобраны оптимальные условия и уникальные составы компонентов для получения наноформ с липоевой кислотой и её эфирами с высокой дисперсионной стабильностью при длительном хранении. Изучение влияния наночастиц с ЛК и ЛК-эфирами на функциональную активность тромбоцитов и нейтрофилов показало выраженное антиагрегационное и антиоксидантное действие этих наноформ. При этом наноэмульсии с ЛК, 2-О-липоилокси-1,3-дипальмитоиламинопропаном, 1,6-ди-О-липоилоксигексаном и 1,2,3-три-О-липоилглицерином снижали образование активных форм кислорода и агрегацию тромбоцитов в 5-15 раз и ингибировали активность НАДФН-оксидазы в 2-2.5 раза. Дальнейшие молекулярно-биологические исследования полученных наночастиц с активными субстанциями, проявивших высокую биологическую активность, могут привести к созданию препаратов для комплексной терапии ишемического инсульта и уменьшения риска развития острых форм этой патологии.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Получение эфиров липоевой кислоты с различными спиртами с высокими выходами;

2. Получение наночастиц с липоевой кислотой, характеризующихся медленным высвобождением субстанции из наночастиц и высокой дисперсионной стабильностью при длительном хранении при комнатной температуре;

3. Получение наноэмульсий эфиров липоевой кислоты, характеризующихся высокой дисперсионной стабильностью при длительном хранении при комнатной температуре;

4. Выраженное антиагрегационное и антиоксидантное действие наночастиц с ЛК и её эфирами на клеточных моделях.

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 15 печатных работ, в том числе 4 статьи в изданиях, входящих в международные реферативные базы данных Web of Science и Scopus, 1 статья в издании из рекомендованного перечня ВАК Минобрнауки РФ, 1 статья и 9 тезисов докладов на Всероссийских и международных конференциях в изданиях, входящих в РИНЦ.

Апробация работы. Результаты работы были представлены и обсуждены на международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2017, 2018, 2019 и 2020), на международной конференции молодых ученых «Окисление, окислительный стресс, антиоксиданты» (Москва, 2019), на VI международной конференции молодых ученых: биофизиков, биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов (Новосибирск, 2019), на IV и V научно-практической конференции «Международная интеграция в сфере химической и фармацевтической промышленности» (Москва, 2019, 2020).

Личный вклад автора. Автору научной работы принадлежит решающая роль на всех этапах выполнения диссертационной работы - постановки цели, задач, анализа литературы, планирование и проведение исследований, обсуждение и оформление результатов, написание публикаций и участие на всероссийских и международных конференциях с докладами по теме диссертации.

Структура диссертации и объем работы. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, теоретической и экспериментальной частей, выводов, приложения и списка используемой литературы, включающего 226 источников. Научная работа иллюстрирована 65 рисунками, содержит 3 схемы и 10 таблиц.

2. Литературный обзор

Сосудистые заболевания головного мозга являются наиболее распространенными формами патологии центральной нервной системы и одной из самых актуальных проблем современной медицины. Каждый год в мире регистрируется около 11 миллионов инсультов, причем для 7 млн они является смертельными, а для остальных - глубоко и длительно инвалидизирующими. Развитые страны мира занимают 3-е место по заболеваемости и смертности от данной патологии. В России ежегодно регистрируется 450 тыс инсультов. При этом инсульты у женщин протекают более тяжело, чем у мужчин, и в 1,5-2 два раза чаще рецидивируют [11].

К основным факторам риска развития сосудистых заболеваний относят сахарный диабет, злоупотребление алкоголем, курение, избыточный вес, артериальную гипертонию, стрессовые ситуации, возраст (в возрасте 45 лет и с каждым десятилетием риск возникновения инсульта увеличивается) и другие [1 ].

Выделяют два основных вида инсульта: геморрагический и ишемический. Ишемический инсульт происходит чаще (более 80% случаев), чем геморрагический.

Геморрагический инсульт (внутричерепное кровоизлияние) - это чрезмерное кровотечение в ткань головного мозга, которое возникает вследствие разрыва кровеносного сосуда. При этом выделяют субарахноидальное (кровотечение в субарахноидальное пространство) и внутримозговое (кровотечение внутри ткани и желудочков головного мозга) кровоизлияние [12].

Ишемический инсульт - это резкое ухудшение или прекращение кровоснабжения головного мозга вследствие закупорки артерии кровяным сгустком. Различают тромботический и эмболический инсульт. В результате тромботического инсульта поврежденные артерии блокируются сгустком крови за счёт образования тромба и атеросклеротической бляшки в крупных и мелких сосудах головного мозга. Эмболический инсульт возникает при закупорке тромбом пораженного сосуда головного мозга, попавшим по кровотоку из другого места тела (органа). Это приводит к плохому снабжению кислородом или церебральной гипоксии и, таким образом, к гибели ткани мозга (инфаркту мозга) [1,13].

Гемостаз - это комплекс различных биохимических реакций, направленный на регуляцию свертываемости крови, а также предотвращение и остановку кровотечения в поврежденных стенках сосудов. Выделяют основные механизмы свертывания крови: а) Сосудисто-тромбоцитарный (первичный гемостаз) - сужение сосудов в результате их повреждения вызывает спазм сосудов - уменьшение объема кровотока в области пораженных сосудах с целью снижения больших кровопотерь. Затем происходит формирование тромбоцитарной пробки в сосудах (в процессе агрегации тромбоциты слипаются, образуя временное уплотнение,

закрывающее разрыв в стенке сосуда); б) Коагуляционный (вторичный гемостаз) инициируется внешним фактором из тканей, находящихся около повреждённого сосуда, и регулируется белками, участвующими в свертывании крови (факторы свёртываемости крови). При этом пораженные сосуды блокируются фибриновым сгустком; в) Фибринолиз - сложный биологический процесс, основанный на превращении неактивных проферментов в их активные формы, конечной целью которого является разложение фибрина после выполнения его функции (репарации повреждённой стенки сосуда) [14].

В основном, для обеспечения эффективного первичного и вторичного гемостаза наряду с фибринолизом и восстановлением поврежденной ткани головного мозга необходимо взаимодействие трех компонентов: 1) сосудистой стенки (гладкая мышца, матрикс и соединительная ткань, эндотелиальные клетки); 2) форменных элементов крови (тромбоциты, гранулоциты, нейтрофилы, моноциты, лимфоциты) и 3) плазматической свертывающей и фибринолитической систем [15]. Нарушения в гемостазе могут привести к чрезмерному кровотечению, тромбозу или другим сосудистым заболеваниям головного мозга. Было обнаружено, что гомоцистеин, индуцирует изменения в гемостазе, включая свертывание крови и фибринолиз. Избыток гомоцистеина может нарушать функции сосудистого эндотелия, изменяя свойства его поверхности с антикоагулянтного на прокоагулянтный [16].

2.1. Тромбоциты: строение и функции

Тромбоциты (Тц) представляют собой безъядерные клетки, происходящие из мегакариоцитов и обычно циркулирующие в кровотоке в течение 10 дней. Они являются вторыми по численности тельцами крови, имеют небольшие размеры (от 2 до 4 мкм) со средним объемом 7-11 фл и дискообразную форму. При здоровом состоянии их количество находится в пределах 150-450* 109 кл/л. Снижение концентрации Тц до 80-50* 109 кл/л приводит к большому кровотечению, а увеличение выше нормы до 600* 109 кл/л вызывает развитие тромбозов. Однако данные цифры условны, т. к важны их функции и роль в системе гемостаза, качественный состав и наличие ингибиторов агрегации Тц [17].

Тромбоциты играют основную роль в сосудисто-тромбоцитарном и коагуляционном гемостазе и осуществляют следующие функции:

- Ангиоспастическая - поддержание сосудистого тонуса за счет регуляции уровня (концентрации) тромбоксанов, простагландинов, серотонина и Р-тромбомодулина;

- Ангиотрофическая - обеспечивает жизнеспособность и репарацию эндотелия, поддерживает нормальную структуру и функцию стенок сосудов;

- Коагуляционно-тромбоцитарная - регуляция механизмов свертываемости крови и фибринолиза;

- Агрегацционно-адгезивная - участие в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе за счет формирования тромбоцитарной пробки («белого» тромба) в сосудах;

- Репаративная - различные факторы активации Тц приводят к размножению и миграции гладкомышечных клеток, участвуют в механизмах развития опухолевых метастазов, атеросклероза и атеротомбоза, сосудистых заболеваний сердца и головного мозга [18].

Тромбоциты играют основную роль во врожденном иммунитете и воспалении. В проведенных клинических исследованиях было установлено, что многие пациенты с тяжелыми бактериальными или вирусными инфекциями имеют тромбоцитопению, вследствие активного участия Тц в воспалительном ответе. Сосудистые заболевания головного мозга, сердца и сепсис связаны с наличием избытка тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов в кровотоке в результате взаимодействия Тц с клетками иммунной системы при воспалительных реакциях [19].

На различных экспериментальных моделях и в проведенных клинических исследованиях было показано, что при взаимодействии с опухолевыми клетками тромбоциты играют ключевую роль в развитии, прогрессировании и метастазировании злокачественных процессов, вызывая паракринные и аутокринные процессы активации, которые обуславливают фенотипические изменения в стромальных клетках, способствующие прогрессированию опухолевых процессов. Опухолевые клетки выделяют различные факторы активации Тц: тромбоксаны А2 и B2 (TXA2, TXВ2), тромбин, аденозиндифосфат (АДФ), которые в результате связывания с толл-подобными рецепторами (TLR4) на поверхности Тц, индуцируют их активацию. Активированные в результате взаимодействия с опухолевыми клетками тромбоциты высвобождают липидные медиаторы (простагладины и тоомобоксаны, вырабатываемые из арахидоновой кислоты под действием циклооксигеназы-1 (ЦОГ-1)), содержимое гранул, включая АДФ и факторы роста, хемокины, протеазы и белки), которые приводят к быстрому размножению и росту опухолевых клеток и высокому метастазированию [20].

Структурно тромбоцит можно разделить на 4 зоны:

- Периферическая зона (богата гликопротеинами, необходимыми для адгезии, активации и агрегации тромбоцитов);

- Золь-гель зона (состоит из микротрубочек и микрофиламентов, позволяющих Тц сохранять свою дисковидную форму);

- Зона органелл (содержит митохондрии, пероксисомы, гликосомы, гранулы тромбоцитов). а-Гранулы содержат факторы свертывания крови: факторы V, VIII, фибриноген, фибронектин, тромбоцитарный фактор роста. 5-Гранулы (АДФ, аденозинтрифосфат (АТФ), серотонин, Mg2+, Ca2+) являются медиаторами, активирующими тромбоциты;

- Мембранная зона (состоит из фосфолипидных мембран, образованных из гладкого эндоплазматического ретикулума мегакариоцитов, организованных в плотную трубчатую систему). Плотная трубчатая система соединена с поверхностной мембраной тромбоцитов. Отрицательно заряженные остатки фосфатидилсерина и фосфатидилинозита расположены с цитоплазматической стороны и являются субстратами для фосфолипаз. Внешняя сторона мембраны тромбоцитов покрыта аморфным белковым слоем (15-20 нм), в состав которой входит много различных белок-липидных и белково-углеводных комплексов, которые транспортируются в места остановки кровотечения [21].

На поверхности тромбоцитов расположено много разных рецепторов, которые участвуют в регуляции воспалительных и опухолевых процессов, иммунитета, гемостаза: гликопротеины GPIb-V-IX, Toll-подобные рецепторы, интегрины (aIIbß3, а2Ь1, a5ß1), рецепторы, богатые лейцином (LRR), смешанные типы рецепторов (CD63, CD36, рецепторы фактора некроза опухоли - ФНО-а), рецепторы семейства иммуноглобулинов (GPVI, FcyRIIA), рецепторы ассоциированные с белком G (рецепторы PAR-1 и PAR-4) к тромбину, рецепторы ТРа и TPß к ТХА2, рецепторы P2Y1 и P2Y12 к АДФ, тирозинкиназные рецепторы и другие [19,20].

Для изучения функциональной активности Тц применяют большое разнообразие современных методов анализа: проточную цитометрию (изучение параметров, размеров, структуры клетки, ее органелл, происходящих в ней процессов и взаимодействия с другими форменными элементами крови), световую, лазерную и люминесцентную агрегатометрию (определение степени, скорости, времени и других параметров агрегации, изменение формы, дегрануляции и секреции); иммуноферментный анализ (исследование маркеров активации), микроскопические методы (изучение морфологии и ультраструктуры Тц, визуализация процессов активации, адгезии, агрегации, секреции и ретракции), Виллебранд-тест (определение факторов свертываемости крови). Импендансные технологии позволяют исследовать параметры гемодинамики и агрегации тромбоцитов в цельной крови за быстрый период времени и без пробоподготовки. Вышеперечисленные методы используются в диагностике для скринингового тестирования, более детального, углубленного изучения механизмов функционирования клеток при различных патологиях [17,22,23].

2.1.1. Микроскопия тромбоцитов

Флуоресцентная микроскопия внесла существенный вклад при изучении структуры и функций Тц, выявлении маркеров в процессе активации, адгезии и агрегации этих клеток. В результате их окрашивания трипафлавином-акридиновым оранжевым (ТАО) в обогащенной тромбоцитами плазме (ОТП) здоровых доноров были обнаружены разные морфологические виды Тц: дискоциты, отросчатые, дегенеративно измененные и большие округлые Тц (Рис. 1) [24].

Г

Рис. 1. Флуоресцентная микроскопия Тц здорового человека, в присутствии ТАО, масштаб - 10 мкм. Тц с гранулами: а, б, в - малые, средние и большие дискоциты; г - большой округлый тромбоцит. Тц без гранул: д, е - дискоциты без гранул и с мелкими гранулами; ж, з -отросчатые и дегенеративные Тц [24].

На электронных микрофотографиях четко определены границы отдельных тромбоцитов, окрашенных ТАО, и их гранулы. Гранулы имеют оранжевое свечение, цитоплазма - зеленое, при этом отдельные гранулы с размером не более 0.35 мкм отчетливо видны. Размер тромбоцитов дискообразной формы колеблется от 2 до 5 мкм, с содержанием более 10-15 гранул (Рис.1, а-в). Иногда встречаются дискоциты, которые имеют очень мало гранул (до 2 штук), или без них, как у отросчатых и дегенеративных Тц (Рис.1. д-з). Цитоплазма в этих клетках имеет низкую интенсивность флуоресценции. В свою очередь в состав больших округлых Тц обычно входит более 25 гранул (Рис.1, г).

Одним из главных свойств тромбоцитов является их способность образовывать агрегаты. В результате действия различных стимуляторов (индукторов агрегации: АДФ, эпинифрина, арахидоновой кислоты, коллагена и тромбина) происходят заметные изменения в их

морфологии. Степень агрегации тромбоцитов зависит от концентрации, природы и механизма действия индуктора агрегации.

% V4 . ^ V >€

* ч »

V

Рис.2. Микрофотография окрашенных красителем ТАО тромбоцитов: а до активации (нативные, интактные Тц); б после активации коллагеном; в - АДФ 0.5мкМ; г - АДФ 1мкМ; д -АДФ 5мкМ. Масштаб - 10 мкм [24].

При добавлении коллагена или АДФ как к ОТП, так и к цельной крови происходило образование больших агрегатов Тц с размером от 20 до 100 мкм, а также массовая дегрануляция этих клеток (Рис.2, а-д). Через 15 мин после добавления этих индукторов в ОТП или в кровь происходило резкое уменьшение количества тромбоцитов с гранулами (до 1%) и интенсивности флуоресценции красителя (в 5 раз). В ходе исследований было установлено, что повышение концентрации АДФ в ОТП приводило к увеличению размеров агрегатов Тц: при 0.5мкМ АДФ -10-15 мкм, при 1мкМ АДФ - 20-25мкм, при 5мкМ АДФ - 40-50 (Рис.2 в-д). Под действием 5мкМ АДФ и коллагена в этих образцах наблюдалась вторая волна агрегации [24,25].

В наше время для детального исследования морфологических и оптических параметров клеток используется атомно-силовая микроскопия (АСМ) и компьютерная фазовая морфометрия (КФМ). Данные методы имеют преимущества: исследование живых Тц в реальном времени без предварительной обработки, пробоподготовки и использования дорогих реактивов; затраты малых объемов крови; детальный анализ характеристик клеток и получение высокоточных, подробных количественных результатов на основе компьютерной технологии с использованием универсальных критериев оценки Тц, характеризующих структурные и функциональные изменения клеток.

о ---1---1---■---■---

О 2000 4000 6000 8000 10000

У Бвсгюл (пт)

Рис.3. АСМ-микрофотографии Тц: А, Б - адгензированных на пленках нитрида титана в течение 1 ч инкубации; В, Г— 3Б топограмма агрегатов Тц на пленках нитрида титана в течение 2 ч инкубации; Д - 2D топограмма Тц на пленках нитрида титана; Е - Поперченное сечение агрегатов Тц в ОТП при 4780 Нм (отмеченное на (Д) красной линией). Масштаб - 20 мкм [26].

При нанесении обогащенной тромбоцитами плазмы на поверхность нитрида титана происходит быстрая активация и адгезия Тц (Рис.3, А, Б). Можно легко заметить, что эти клетки образуют псевдоподии (филоподии, 2.3 х 1.8 мкм) и соединяются друг с другом, формируя небольшую сеть. В течение 2 часов тромбоциты агрегируют и образуют большие кластеры (в виде островков, Рис.3, В, Г) с размером 5-10 мкм, которые являются предварительной стадией тромбообразования. Более того, в образцах с ОТП с помощью АСМ было обнаружено скопление агрегатов белков плазмы (5х100 нм), расположенных как на поверхности активированных Тц, так и около них (Рис.3 Д, Е) [26].

Методом КФМ было показано, что при физиологических условиях Тц представляют плоские, круглые клетки с гладкой или складчатой поверхностью (Рис.4, 1-1У). Клетки с округлой или неправильной структурой, с гладкой или складчатой поверхностью и 3-мя и более псевдоподиями на поверхности мембраны относятся ко II и III типу. Дегенеративные Тц (IV) -это клетки с неправильной формой и неровной поверхностью, с большим количеством вакуолей и отростков разной длины [27].

I тип - II тип III тип Г\' тип

Я •г- 1 (- о о $ ¥ • 1 ч

К £ £ | с 8 о ш

С.

Рис.4. фазово-интерференционные карты структуры Тц: I- дискоцит; II- тромбоцит с пониженной активностью; III - высоко активированный тромбоцит; IV - дегенеративные тромбоциты [27].

2.1.2. Активация, адгезия и агрегация тромбоцитов

Активация Тц - быстрый и в основном необратимый переход в активированное состояние клеток из состояния покоя, приводящий к изменению формы (с дисковидной на сферическую) с образованием псевдоподий и разным физиологическим ответам: адгезией, обратимой или необратимой агрегацией и дегрануляцией (Рис.5) [28,29].

Рис.5. Общая схема активации тромбоцитов [28].

Выделяют основные пути активации Тц: образование фосфатидной кислоты, связывающей кальций, из фосфатидилинозитов, продукция TXA2, ТХВ2 в результате метаболизма АК, образование фактора активации тромбоцитов (ФАТ) - фосфолипидного медиатора воспаления (фосфолипидного компонента мембраны Тц). Затем происходит взаимодействие этих клеток с коллагеном и с фактором Виллебранда (ФВ), которые активируют гликопротеиновые рецепторы ^Р 1а/11а и ОР ПЬ/Ша) на поверхности Тц. Данные процессы приводят к высвобождению из них ряда биологически активных веществ (эпинефрин, АДФ, тромбин, адреналин, фибриноген, тромбоксаны, простагландины и другие) вызывающих начальную стадию агрегации клеток [30].

Адгезия Тц - это процесс прилипания тромбоцитов к разным поверхностям, в том числе к компонентам субэндотелия у поврежденных сосудов. При этом происходит изменение заряда (с "-" на "+" для уменьшения отталкиваний клеток с отрицательным зарядом) и формы (с целью прочной фиксации Тц на повреждённой стенке сосудов). Кровяные пластинки адгезируют при связывании ФВ с GРIb/IX/V. ФВ и некоторые белки плазмы (фибронектин, тромбоспондин и другие) участвуют в процессе образования прочных мостиков между коллагеном субэндотелия сосудов GРIа и GРIb тромбоцитов (Рис.6).

Рис. 6. А — Адгезия Тц к субэндотелию пораженного сосуда; Б — Формирование мостиков между коллагеном GРIа и GРIb тромбоцитов.

В очагах поражения сосудов содержится избыток коллагена, и в начале активируются коллагеновые рецепторы (GPVI и GPIa/IIa). ОРШПа поддерживает связь тромбоцитов с коллагеном, а GPVI проводит сигнал через мембрану внутрь клетки для дальнейшей активации и агрегации Тц. Под действием вазоконстрикторных веществ и вследствие прилипания к

коллагеновым волокнам клеток и формирования множества больших агрегатов Тц происходит уменьшение просвета сосудов [31,32].

Агрегация Тц - это слипание клеток между собой под действием специфических активаторов с образованием тромба (Рис.7). Обратимая агрегация - это скопление тромбоцитов у места повреждения и склеивание их между собой под действием эпинефрина, АДФ и АТФ с образованием рыхлой тромбоцитарной пробки, проницаемой для плазмы крови. Необратимая агрегация - это процесс при котором происходит изменение их формы и структуры. В результате данного процесса клетки сливаются в гомогенную массу, образуя большие и непроницаемые для плазмы крови агрегаты Тц [30,31].

Рис.7. Схема образование тромба на месте повреждения стенки кровеносного сосуда [23].

В свою очередь различают ряд механизмов активации и агрегации Тц, обусловленных разными индукторами (Рис.8) [33-35].

- Агрегация Тц, обусловленная адреналином. Он активирует а2-адренорецепторы на поверхности мембраны Тц, в результате чего происходит подавление активности (ингибирование) аденилатциклазы (АЦ) и активация фосфатидилинозит-3-киназы (PI-3-киназы). Адреналин также повышает скорость гидролиза фосфоинозитидов с помощью тромбоксанов и, в то же время, не влияет на активацию фосфолипазы С (PLC) и на изменение структуры Тц [35].

- Агрегация Тц под действием АДФ. Аденозиндифосфат, высвобождающийся из поврежденных тканей и гранул тромбоцитов и эритроцитов, взаимодействует с 3 типами рецепторов P2Yi, P2Yi2 и P2Xi. Связываясь с P2Yi, посредством Gq- и Gi-белков, АДФ активирует PLC и киназы (Rho-, Lyn-, Akt- и PI-3-киназы), которые запускают каскад биохимических реакций, приводящих к синтезу TXA2, повышению концентрации Са2+ в цитоплазме и секреции гранул. Активируя P2Yi2 с помощью Gi-белков, АДФ ингибирует

аденилатциклазу, уменьшает образование цАМФ, стимулирует рецепторы фибриногена и усиливает ответ Тц на другие индукторы агрегации (коллаген, тромбин и ТХА2). При взаимодействии АТФ с Р2Х1 активируется сигнальный путь, который без участия киназ, увеличивает концентрацию ионов кальция и активность кальмодулин-зависимой киназы внутри клетки с последующим фосфорилированим легкой цепи миозина. Вышеперечисленные процессы приводят к изменению формы и образования крупных агрегатов Тц [34,35].

Рис.8. Пути активации и агрегации тромбоцитов. (С - каталитическая единица аденилатциклазы, АМФ - аденозинмонофосфат, GA, 01, Ор - О-белки, 0Р1а/11а -гликопротеиновый комплекс, 1Рз - инозиттрифосфат, Р1Р2 -фосфатидилинозит-дифосфат, ФЛ - фосфолипиды, ФДЭ - фосфодиэстераза).

- Агрегация Тц, индуцируемая АК. Арахидоновая кислота образуется из фосфолипидов при участии клеточных липаз мембраны тромбоцитов, прежде всего фосфолипазы А2 (РЬА2),

активируемой тромбином. Далее она подвергается дальнейшему метаболизму под действием циклооксигеназы и липоксигеназы (ЛОГ, Рис.8, 9).

Рис.9. Метаболизм арахидоновой кислоты [35].

Циклооксигеназа (ЦОГ) катализирует образование нестабильных промежуточных веществ (циклические эндоперекиси), которые далее превращаются в простагландин О2 (РОО2), а затем в PGН2. Дальнейший метаболизм PGH2 с участием PG-синтетаз приводит к образованию PGD2, РОЕ2, Р0Б2а и PGI2 (простациклина), а под действием тромбоксан-синтетазы - тромбоксана А2, который быстро превращается в стабильные конечные продукты: ТХВ2, малоновый диальдегид (МДА) и 1-гидроксигептадекатриеновую кислоту. Данные вещества участвуют в воспалительных процессах, вызывают агрегацию Тц и сужение сосудов. Необходимо отметить, что существует две изоформы ЦОГ - ЦОГ-1 и ЦОГ-2. В норме в молодых Тц присутствует только ЦОГ-1 (катализирует превращение простагландинов из АК), однако, в стрессовых условиях Тц

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Щелконогов Василий Андреевич, 2022 год

Список используемой литературы

1. Гусев Е.И. Ишемия головного мозга / Е.И. Гусев, В.И. Скворцова. - М.: Медицина, 2001. - 328 с.

2. Shay K.P. Alpha-lipoic acid as a dietary supplement: Molecular mechanisms and therapeutic potential / K.P. Shay, R.F. Moreau, E.J. Smith, A.R. Smith, T.M. Hagen // Biochim. Biophys. Acta. -2009. - V. 1790, № 10. - P. 1149-1160.

3. Smith A.R. Lipoic acid as a potential therapy for chronic diseases associated with oxidative stress / A.R. Smith, S.V. Shenvi, M. Widlansky, J.H. Suh, T.M. Hagen // Curr Med Chem. - 2004. -V.11, № 9. - P. 1135-1146.

4. Deng H. a-lipoic acid protects against cerebral ischemia/reperfusion-induced injury in rats / H. Deng, X. Zuo, J. Zhang, X. Liu, L. Liu, Q. Xu, Z. Wu, A. Ji // Mol Med Rep. - 2015. - V. 11, № 5. - P. 3659-3665.

5. Clark W.M. Efficacy of Antioxidant therapies in transient focal ischemia in mice / W.M. Clark, L.G. Rinker, N.S. Lessov, S.L. Lowery, M.J. Cipolla // Stroke. - 2001. - V. 32, № 4. - P. 1000-1004.

6. Chou T.C. Inhibitory effect of alpha-lipoic acid on platelet aggregation is mediated by PPARs / T.C. Chou, C.Y. Shih, Y.T. Chen. // J Agric Food Chem. - 2011. - V. 59, № 7. - P. 3050-3059.

7. Lai Y.S. Antiplatelet activity of alpha-lipoic acid / Y.S. Lai, C.Y. Shih, Y.F. Huang, T.C. Chou// J Agric Food Chem. - 2010. - V. 58, № 15. - P. 8596-603.

8. Akiba S. Assay of protein-bound lipoic acid in tissues by a new enzymatic method / S. Akiba, S. Matsugo, L. Packer, T. Konishi // Anal Biochem. - 1998. - V. 258, № 2. - P. 299-304.

9. Rochette L. Alpha-lipoic acid: molecular mechanisms and therapeutic potential in diabetes / L. Rochette, S. Ghibu, A. Muresan, C. Vergely // Can. J. Physiol. Pharmacol. - 1999. - V. 93, № 12. - Р. 1021-1027.

10. Duzgunes N. Mechanisms and kinetics of liposome-cell interactions / N. Duzgunes, S. Nir // Advanced Drug Delivery Reviews. - 1999. - V. 40. - Р. 3-18.

11. Гусев Е.И. Ишемический инсульт. Современное состояние проблемы / Е.И. Гусев, М.Ю. Мартынов, П.Р. Камчатнов // Доктор.Ру.- 2013. - Т. 83, № 5. - С. 7-12.

12. Пирадов М.А. Геморрагический инсульт: новые подходы к диагностике и лечению / М.А. Пирадов // Нервные болезни. - 2005. - № 1. - С. 17-21.

13. Гусев Е.И. Современные представления о лечении острого церебрального инсульта / Е.И. Гусев, В.И. Скворцова // Consilium Medicum. - 2000. - Т. 2, № 2. - С. 60-66.

14. Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии / Б.И. Кузник. - Чита: Экспресс-издательство, 2010. - 832 с.

15. Karolczak K. Mechanism of action of homocysteine and its thiolactone in hemostasis system / K. Karolczak, B. Olas // Physiol Res. - 2009. - V. 58, № 5. - P. 623-633.

16. Kajan J.P. Mechanism of homocysteine toxicity in humans // J.P. Kajan, T. Twardowski, H. Jakubowski / Amino Acids. - 2007. - V. 32, № 4. - P. 561-572.

17. Harrison P. Platelet function analysis / P. Harrison // Blood Reviews. - 2005. - V. 19, № 2. -P.111-123.

18. Максимович Н.Е. Патофизиология гемостаза / Н.Е. Максимович, К.А. Эйсмонт, Э.И. Троян, М.Н. Ходосовский, А.В. Лелевич. - Гродно: УО «ГрГМУ», 2010. - 344 с.

19. Jenne C.N. Platelets: bridging hemostasis, inflammation, and immunity / C.N. Jenne, R. Urrutia, P. Kubes // Int J Lab Hematol. - 2013. - V. 35, № 3. - P. 254-261.

20. Свиридова С.П. Роль тромбоцитов в опухолевом росте и метастазировании / С.П. Свиридова, Ш.Р. Кашия, О.А. Обухова, М.В. Рубанская, А.В. Сотников // Онкогинекология. -2018. - Т. 28, № 4. - С. 12-20.

21. Michelson, A.D. Platelets. / A.D. Michelson. - London: Academic Press, 2013. - 1398 р.

22. Филиппова О.И. Методы исследования функциональной активности тромбоцитов (обзор литературы) / О.И. Филиппова, А.В. Колосков, А.А. Столица // Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. - 2013. - Т. 13, № 2. - С. 493-514.

23. Panzer S. Methods for testing platelet function for transfusion medicine / S. Panzer, P. Jilma // Vox Sang. - 2011. - V. 101, № 1. - P. 1-9.

24. Макаров М.С. Особенности морфофункционального статуса тромбоцитов человека в норме и патологии: дисс. ... канд. биологических наук: 14.01.21 / Макаров Максим Сергеевич. -М., 2013. - 126 с.

25. М.Ш. Хубутия, М.С. Макаров, В.Б. Хватов, И.В. Высочин, Е.Н. Кобзева, Н.В. Боровкова, О.И. Конюшко. Способ оценки морфофункционального статуса тромбоцитов человека // Патент RU 2 485 502 C1, выдан 20.06.2013.

26. Karagkiozaki V. Atomic force microscopy probing platelet activation behavior on titanium nitride nanocoatings for biomedical applications / V. Karagkiozaki, S. Logothetidis, N. Kalfagiannis, S. Lousinian, G. Giannoglou // Nanomedicine. - 2009. - V.5, № 1. - P. 64-72.

27. Колосова Е.Н. Морфометрические характеристики тромбоцитов у больных с первичной иммунной тромбоцитопенией: дисс. ... канд. медицинских наук 14.01.21 / Колосова Екатерина Николаевна. - М., 2013. - 118 с.

28. Козловский В.И. Методы исследования и клиническое значение агрегации тромбоцитов. Фокус на спонтанную агрегацию / В.И. Козловский, О.М. Ковтун, О.П. Сероухова, И.Н. Детковская, И.В. Козловский // ВЕСТНИК ВГМУ. - 2013. - Т. 12, № 4. - С. 79-91.

29. Пантелеев М.А. Тромбоциты и гемостаз / М.А. Пантелеев, А.Н. Свешникова // Онкогематология. - 2014. - Т. 9, № 2. - С. 65-73.

30. Марковчин А.А. Физиологические особенности тромбоцитов / А.А. Марковчин // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 6. - С. 14-37.

31. Воронина Е.Н. Мембранные рецепторы тромбоцитов: функции и полиморфизм / Е.Н. Воронина, М.Л. Филипенко, Д.С. Сергеевичев, И.В. Пикалов // Вестник ВОГиС. - 2006. - Т. 10, № 3. - С. 553-564.

32. Свешникова А.Н. Роль трансмембранных гликопротеинов, интегринов и серпентинов в адгезии и активации тромбоцита / А.Н. Свешникова, А.В. Беляев, М.А. Пантелеев, Д.Ю. Нечипуренко // Биологические мембраны. - 2018. - Т. 35, № 5. - С. 351-363.

33. Шатурный В.И. Активаторы, рецепторы и пути внутриклеточной сигнализации в тромбоцитах крови / В.И. Шатурный, С.С. Шахиджанов, А.Н. Свешникова М.А. Пантелеев // Биомедицинская химия. - 2014. - Т. 60, № 2. - С. 182-200.

34. Бакунович А.В. Молекулярные механизмы агрегации тромбоцитов / А.В. Бакунович, К.Я. Буланова, Л.М. Лобанок // Журнал белорусского государственного университета. Экология.

- 2017. - № 4. - С. 40-51.

35. Демина О.В. Агрегация тромбоцитов человека: поиск путей ее регуляции и коррекции: дисс. ... доктора химических наук: 02.00.10 / Демина Ольга Викторовна. - М., 2014. - 495 с.

36. Макаров М.С. Неканонические способы активации тромбоцитов человека / М.С. Макаров // Медицинский алфавит. - 2015. - Т. 3, № 11. - С. 30-35.

37. Филькова А.А. Обратимая агрегация тромбоцитов в присутствии ионов кальция: механизмы и потенциальная значимость / А.А. Филькова, М.А. Пантелеев, А.Н. Свешникова // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2019. - Т. 18, № 3. - С. 120129.

38. Войцеховский, В.В. Геморрагический синдром в клинической практике / В.В. Войцеховский, Ю.С. Ландышев, С.С. Целуйко, Т.В. Заболотских. - Благовещенск: АГМА, 2014.

- 255 с.

39. Jenne C.N. Neutrophils recruited to sites of infection protect from virus challenge by releasing neutrophil extracellular traps / C.N. Jenne, C.H. Wong, F.J. Zemp, B. McDonald, M.M. Rahman, P.A. Forsyth, G. McFadden, P. Kubes // Cell host & microbe. - 2013. - V.13, № 2. - P. 169-180.

40. Gabrilovich, D.I. The Neutrophils New Outlook for Old Cells / D.I. Gabrilovich. - London: Imperial College Press, 2013. - 380 с.

41. Mortaz E. Update on Neutrophil Function in Severe Inflammation / E. Mortaz, S.D. Alipoor, I.M. Adcock, S. Mumby, L. Koenderman // Front. Immunol. - 2018. - V.9. - P. 21-71.

42. Kjeldsen L. Giant granules of neutrophils in Chediak-Higashi syndrome are derived from azurophil granules but not from specific and gelatinase granules / L. Kjeldsen, J. Calafat, N. Borregaard // Journal of leukocyte biology. - 1998. - V.64, № 1. - P. 72-77.

43. Wang X. Understanding the Multifaceted Role of Neutrophils in Cancer and Autoimmune Diseases / X. Wang, L. Qiu, Z. Li, X. Y. Wang, H. Yi // Frontiers in Immunology. - 2018. - V. 9. - P. 1-10.

44. Бойко А.А. Внутриклеточное содержание белков теплового шока 70 КДА и его взаимосвязь с продукцией активных форм кислорода в нейтрофилах человека при старении: дисс. ... кандидата биологических наук: 14.03.09 / Бойко Анна Александровна. - М., 2015. - 136 с.

45. Луценко В.Е. Флуоресцентный метод оценки функциональной активности нейтрофилов / В.Е. Луценко, Д.В. Григорьева, С.Н. Черенкевич, О.М. Панасенко, А.В. Соколов, И.В. Горудко // Актуальные вопросы биологической физики и химии. - 2018. - Т. 3, № 3. - С. 612-661.

46. Маянский, А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. - Новосибирск: Наука, 1983 - 356 с.

47. Shatalin Y.V. Effect of biginelli pyrimidines on production of reactive oxygen species by polymorphonuclear leukocytes / Y.V. Shatalin, V.S. Shubina, A.S. Fisyuk // Cell and Tissue Biology. -2010. - V.4, № 3. - P. 267-272.

48. O'Donnell B.V. Studies on the inhibitory mechanism of iodonium compounds with special reference to neutrophil NADPH oxidase / B.V. O'Donnell, D.G. Tew, O.T. Jones, P.J. England // Biochem. - 1993. - V. 290. - P. 41-49.

49. Nguyen G.T. Neutrophils to the ROScue: Mechanisms of NADPH Oxidase Activation and Bacterial Resistance / G.T. Nguyen, E.R. Green, J. Mecsas // Front Cell Infect Microbiol. - 2017. - V.7. - P. 373.

50. Ткачук В.А. Пероксид водорода как новый вторичный посредник / В.А. Ткачук, П.А. Тюрин-Кузьмин, В.В. Белоусов, А.В. Воротников // Биологические мембраны. - 2012. - Т. 29, № 1. - С. 21-37.

51. Чеканов А.В. Механизмы взаимодействия гипохлорита и гипохлорит- образующих систем с органическими гидрорероксидами: дисс. ... кандидата биологических наук: 03.00.02, 03.00.04 / Чеканов Андрей Васильевич. - М., 2004. - 144 с.

52. Steven, W.E. Biochemistry and Physiology of the Neutrophil / W.E. Steven. - Cambridge: Cambridge University Press, 1994. - 299 р.

53. Castellino F.J. Structure and function of the plasminogen/plasmin system / F.J. Castellino, V.A. Ploplis // Thrombosis and haemostasis. - 2005. - V.93. - P. 647-654.

54. Мальцева В.Н. Респираторный взрыв и особенности его регуляции в периферических нейтрофилах при росте опухоли in vivo: дисс. ... кандидата биологических наук: 03.00.02 / Мальцева, Валентина Николаевна. - П., 2007. - 138 с.

55. Белоусова М.А. Новые антиоксиданты как нейропротекторы при ишемических повреждениях головного мозга и нейродегенеративных заболеваниях / М.А. Белоусова, Е.А.

Корсакова, Е.А. Городецкая, Е.И. Каленикова, О.С.Медведев // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2014. - Т. 77, № 11. - С. 36-44.

56. Apostolova N. Molecular strategies for targeting antioxidants to mitochondria: therapeutic implications / N. Apostolova, V.M. Victor. // Antioxid Redox Signal. - 2015. - V. 22, № 8. - P. 686729.

57. Durrani A.I. Determination of alpha lipoic acid content in dietary supplements and foodstuffs using high performance liquid chromatography with different detection modes: dissertation ... doktor der Naturwissenschaften: 091 447029 / Durrani Arjumand Iqbal. - Wien, 2008. - 135 p.

58. Packer L. Alpha-lipoic acid: a metabolic antioxidant and potential redox modulator of transcription / L. Packer, S. Roy, C.K. Sen // Advances in Pharmacology. - 1997. - V. 38. - P. 79-101.

59. Haque I.U. Lipoic acid-a short review / I.U. Haque, S. Amin // Sci.Int. (Lahore). - 2007. - V. 19, № 4. - P. 273-276.

60. Reed L.J. Crystalline a-lipoic acid: A catalytic agent associated with pyruvate dehydrogenase / L.J. Reed, B.G. DeBusk, I.C. Gunsalus, C.S. Hornberger // Science. - 1951. - V. 114, № 2952. - P. 93-94.

61. Nichols T.W. a-Lipoic acid: biological effects and clinical implications / T.W. Nichols // Altern. Med. Rev. - 1997. - V. 2, № 3. - P. 177-183.

62. Biewenga G.P. The pharmacology of the antioxidant lipoic acid / G.P. Biewenga, G.R.Haenen, A. Bast // Gen Pharmacol. - 1997. - V. 29, № 3. - P. 315-331.

63. Moini H. Antioxidant and prooxidant activities of alpha-lipoic acid and dihydrolipoic acid / H. Moini, L. Packer, N. Saris // Toxicol Appl Pharmacol. - 2002. - V. 182, № 1. - P. 84-90.

64. Schupke H. New metabolic pathways of alpha-lipoic acid / H. Schupke, R. Hempel, G. Peter, R. Hermann, K. Wessel, J. Engel, T. Kronbach // Drug Metab. Dispos. - 2001. - V. 29, № 6. - P. 855862.

65. Hayden M.A. Biosynthesis of lipoic acid: characterization of the lipoic acid auxotrophs Escherichia coli W1485-lip2 and JRG33-lip9 / M.A. Hayden, I.Y. Huang, G. Iliopoulos, M. Orozco, G.W. Ashley // Biochemistry. - 1993. - V. 32, № 14. - P. 3778-3782.

66. Storm J. Lipoic Acid Metabolism of Plasmodium - A Suitable Drug Target / J. Storm, S. Müller // Curr Pharm Des. - 2012. - V. 18, № 24. - P. 3480-3489.

67. Spalding M.D. Lipoic acid metabolism in microbial pathogens / M.D. Spalding, S.T. Prigge // Microbiol Mol Biol Rev. - 2010. - V. 74, № 2. - P. 200-228.

68. Martin N. A novel two-gene requirement for the octanoyltransfer reaction of Bacillus subtilis lipoic acid biosynthesis / N. Martin, Q.H. Christensen, M.C. Mansilla, J.E. Cronan, D. Mendoza // Mol Microbiol. - 2011. - V. 80, № 2. - P. 335-349.

69. Suzuki Y.J. Thioctic acid and dihydrolipoic acid are novel antioxidants which interact with reactive oxygen species / Suzuki Y. J., Tsuchiya M., Packer L. // Free Rad. Res. Comms. - 1991. - V.15, № 5. - P. 255-263.

70. Scott B.C. Lipoic and dihydrolipoic acids as antioxidants: A critical evaluation / B.C. Scott, O.I. Aruoma, P.J. Evans, C. O'Neill, A. Vliet, C.E. Cross, H. Tritschler, B. Halliwell // Free Rad. Res. -1994. - V.20, № 2. - P. 119-133.

71. Haenen G.R. Scavenging of hypochlorous acid by lipoic acid / G.R. Haenen, A. Bast // Biochem Pharmacol. - 1991. - V.42, № 11. - P. 2244-2260.

72. Calvin M. Chemical and photochemical reactions of thioctic acid and related disulfides / M. Calvin // Fed Proc. - 1954. - V.13, № 3. - P. 697-711.

73. Stevens B. The photoperoxidation of unsaturated organic molecules: IX. Lipoic acid inhibition of rubrene autoperoxidation / B. Stevens, S.R. Perez, R.D. Small // Photochem. Photobiol. - 1974. -V.19, № 4. - P. 315-316.

74. Stary F.E. Oxidation of a-lipoic acid / F.E. Stary, S.J. Jindal, R.W. Murray // J Org Chem.-1975. - V.40, № 1. - P. 58-62.

75. Kaiser S. Lipoat und Singulettsauerstoff / S. Kaiser, P. Di Mascio, H. Sies // Thioctsbure (H.O. Borbe and H. Ulrich, Eds.). - 1989. - P. 69-76.

76. Saito I. Studies on the oxidation products of lipoic acid / I. Saito, S. Fukui // J Vitaminol. -1967. - V.13, № 2. - P. 115-121.

77. Whiteman M. Protection against peroxynitrite-dependent tyrosine nitration and alpha 1-antiproteinase inactivation by oxidized and reduced lipoic acid / M. Whiteman, H. Tritschler, B. Halliwell // FEBS Lett. - 1996. - V.379, № 1. - P. 74-76.

78. Packer L. Molecular Aspects of Lipoic Acid in the Prevention of Diabetes Complications / L. Packer, K. Kraemer, G. Rimbach // Nutrition. - 2001. - V.17, № 10. - P. 888-895.

79. Golbidi S. Diabetes and alpha lipoic Acid / S. Golbidi, M. Badran, I. Laher // Front Pharmacol.

- 2011. - V.2, № 69. - P. 1-15.

80. Muhammad M.T. Kinetics, mechanistic and synergistic studies of Alpha lipoic acid with hydrogen peroxide / M.T. Muhammad, N.K. Muhammad // Journal of Saudi Chemical Society. - 2015.

- V.19, № 2. - P. 1-9.

81. Ou P. Thioctic (lipoic) acid: a therapeutic metal-chelating antioxidant? / P. Ou, H.J. Tritschler, S.P. Wolff // Biochem Pharmacol. - 1995. - V.50, № 1. - P. 123-126.

82. Lodge J.K. Thiol chelation of Cu2+ by dihydrolipoic acid prevents human lowdensity lipoprotein peroxidation / J.K. Lodge, M.G. Traber, L. Packer // Free Radic Biol Med. - 1998. - V.25, № 3. - P. 287-297.

83. Helmut S. The Hydrophobic and Metal-Ion Coordinating Properties of a-Lipoic Acid-An Example of Intramolecular Equilibria in Metal-Ion Complex / S. Helmut // Angew. Chem. Inr. Ed. Engl.

- 1982. - V.21, № 6. - P. 389-400.

84. Suh J.H., Moreau R., Heath S.H., Hagen T.M. Dietary supplementation with (R)-alpha-lipoic acid reverses the age-related accumulation of iron and depletion of antioxidants in the rat cerebral cortex / J.H. Suh, R. Moreau, S.H. Heath, T.M. Hagen // Redox Rep. - 2005. - V.10, № 1. - P. 52-60.

85. Bush A.I. Metal complexing agents as therapies for Alzheimer's disease / A.I. Bush // Neurobiol. Aging. - 2002. - V.23, № 6. - P. 1031-1038.

86. Goralska M. Alpha lipoic acid changes iron uptake and storage in lens epithelial cells / M. Goralska, R. Dackor, B. Holley, M.C. McGahan // Exp Eye Res. - 2003. - V.76, № 2. - P. 241-248.

87. Patrick L. Mercury toxicity and antioxidants: Part 1: role of glutathione and alpha-lipoic acid in the treatment of mercury toxicity / L. Patrick // Altern Med Rev. - 2002. - V.7, № 6. - P. 456-471.

88. Packer L. New horizons in antioxidant research: action of the thioctic acid/dihydrolipoic acid couple in biological systems / L. Packer // Thioctsaure. 2nd International Thictic Acid Workshop, Universimed Verlag. - 1992. - P. 35-45.

89. Lykkesfeldt J. Age-associated decline in ascorbic acid concentration, recycling, and biosynthesis in rat hepatocytes - reversal with (R)-alpha-lipoic acid supplementation / J. Lykkesfeldt, T.M. Hagen, V. Vinarsky, B.N. Ames // FASEB J. - 1998. - V.12, № 12. - P. 1183-1189.

90. Michels A.J. Age-related decline of sodium-dependent ascorbic acid transport in isolated rat hepatocytes / A.J. Michels, N. Joisher, T.M. Hagen // Arch. Biochem. Biophys. - 2003. - V.410, № 1.

- P. 112-120.

91. Xu D.P. Alpha-Lipoic acid dependent regeneration of ascorbic acid from dehydroascorbic acid in rat liver mitochondria / D.P. Xu, W.W. Wells // J. Bioenerg. Biomembranes. - 1996. - V.28, № 1. -P. 77-85.

92. Packer L. Alpha-lipoic acid as a biological antioxidant / L. Packer, E.H. Witt, H.J. Tritschler // Free Radical Biology & Medicine. - 1995. - V.19, № 2. - P. 227-250.

93. Han D. Lipoic acid increases de novo synthesis of cellular glutathione by improving cystine utilization / D. Han, G. Handelman, L. Marcocci, C.K. Sen, S. Roy, H. Kobuchi, H.J. Tritschler, L. Flohe, L. Packer // BioFactors. - 1997. - V.6, № 3. - P. 321-338.

94. Kagan V.E. Dihydrolipoic acid: A universal antioxidant both in the membrane and in the aqueous phase / V.E. Kagan, A. Shvedova, E. Serbinova, S. Khan, C. Swanson, R. Powell, L. Packer // Biochem. Pharmacol. - 1992. - V.44, № 2. - P. 1637-1649.

95. Nohl H. Evaluation of the Antioxidant Capacity of Ubiquinol and Dihydrolipoic Acid / H. Nohl, L. Gille // Z Naturforsch C J Biosci. - 1998. - V.53, № 4, - P. 250-253.

96. Kozlov A.V. Dihydro-lipoic acid maintains ubiquinone in the antioxidant active form by two-electron reduction of ubiquinone and one-electron reduction of ubisemiquinone / A.V. Kozlov, L. Gille, K. Staniek, H. Nohl // Arch Biochem Biophys. - 1999. -V.363, № 1. - P. 148-154.

97. Lee S.R. Reversible inactivation of protein-tyrosine phosphatase 1B in A431 cells stimulated with epidermal growth factor / S.R. Lee, K.S. Kwon, S.R. Kim, S.G. Rhee // J. Biol. Chem. - 1998. -V.273, № 25. - P. 15366-15372.

98. Jacob S. Oral administration of rac-a-lipoic acid modulates insulin sensitivity in patients with type-2 diabetes mellitus: a placebo-controlled pilot trial / S. Jacob, P. Ruus, R. Hermann, H.J. Tritschler, E. Maerker, W. Ren, H.J. Augustin, G.J. Dietze, K. Rett // Free Radic Biol Med. - 1999. - V. 27, № 4. - P. 309-314.

99. Yaworsky K. Engagement of the insulin-sensitive pathway in the stimulation of glucose transport by a-lipoic acid in 3T3-L1 adipocytes / K. Yaworsky, R. Somwar, T. Ramlal, H.J. Tritschler, A. Klip // Diabetologia. - 2000. - V.43, № 3. - P. 294-303.

100. Konrad D. Drug a-Lipoic Acid Stimulates Glucose Uptake via Both GLUT4 Translocation and GLUT4 Activation / D. Konrad, R. Somwar, G. Sweeney, K. Yaworsky, M. Hayashi, T. Ramlal, A. Klip // Diabetes. - 2001. - V.50, № 6. - P. 1464-1471.

101. Shi S.S. Homocysteine and alpha-lipoic acid regulate p44/42 MAP kinase phosphorylation in NIH/3 T3 cells / S.S. Shi, R.M. Day, A.D. Halpner, J.B. Blumberg, Y.J. Suzuki // Antioxid. Redox Signal. - 1999. - V.1, № 1. - P. 123-128.

102. Shay K.P. Age-associated impairment of Akt phosphorylation in primary rat hepatocytes is remediated by alpha-lipoic acid through PI3 kinase, PTEN, and PP2A / K.P. Shay, T.M. Hagen // Biogerontology. - 2009. - V.10, № 4. - P. 443-456.

103. Diesel B. Alpha-lipoic acid as a directly binding activator of the insulin receptor: protection from hepatocyte apoptosis / B. Diesel, S. Kulhanek-Heinze, M. Höltje, B. Brandt, H.D. Höltje, A.M. Vollmar, A.K. Kiemer // Biochemistry. - 2007. - V.46, № 8. - P. 2146-2155.

104. Kim M.S. Antiobesity effects of alpha-lipoic acid mediated by suppression of hypothalamic AMP-activated protein kinase / M.S. Kim, J.Y. Park, C. Namkoong, P.G. Jang, J.W. Ryu, H.S. Song, J.Y. Yun, I.S. Namgoong, J. Ha, I S. Park, I.K. Lee, B. Viollet, J H. Youn, H.K. Lee, K.U. Lee // Nat. Med. - 2004. - V.10, № 7. - P. 727-733.

105. Lee W.J. Alpha-lipoic acid prevents endothelial dysfunction in obese rats via activation of AMP-activated protein kinase / W.J. Lee, IK. Lee, H.S. Kim, Y.M. Kim, E.H. Koh, J.C. Won, S.M. Han, M.S. Kim, I. Jo, G.T. Oh, I S. Park, J.H. Youn, S.W. Park, K.U. Lee, J.Y. Park // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2005. - V.25, № 12. - P. 2488-2494.

106. Lee W.J. Alpha-lipoic acid increases insulin sensitivity by activating AMPK in skeletal muscle / W.J. Lee, K.H. Song, E.H. Koh, J.C. Won, H.S. Kim, H.S. Park, M.S. Kim, S.W. Kim, K.U. Lee, J.Y. Park // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2005. - V.332, № 3. - P. 885-891.

107. Gius D. Intracellular oxidation/reduction status in the regulation of transcription factors NF-kB and AP-1 / D. Gius, A. Botero, S. Shah, H.A. Curry // Toxicol Lett. - 1999. - V.106, № 3. - P. 93106.

108. Zhang W.J. a-Lipoic acid inhibits TNF-a-induced NF-kB activation and adhesion molecule expression in human aortic endothelial cells / W.J. Zhang, B.B. Frei // FASEB J. - 2001. - V.15, № 13.

- P. 2423-2432.

109. Suzuki Y.J. Redox regulation of NF-kappa B DNA binding activity by dihydrolipoate / Y.J. Suzuki, M. Mizuno, H.J. Tritschler, L. Packer // Biochem Mol Biol Int. - 1995. - V.36, № 2. - P. 241246.

110. Moini H. R-alpha-lipoic acid action on cell redox status, the insulin receptor, and glucose uptake in 3 T3-L1 adipocytes / H. Moini, O. Tirosh, Y.C. Park, K.J. Cho, L. Packer // Arch. Biochem. Biophys. - 2002. - V.397, № 2. - P. 384-391.

111. Kobayashi A. Oxidative and electrophilic stresses activate Nrf2 through inhibition of ubiquitination activity of Keap1 / A. Kobayashi, M.I. Kang, Y. Watai, K.I. Tong, T. Shibata, K. Uchida, M. Yamamoto // Mol. Cell. Biol. - 2006. - V.26, № 1. - P. 221-229.

112. Bloom D.A. Phosphorylation of Nrf2 at Ser40 by protein kinase C in response to antioxidants leads to the release of Nrf2 from INrf2, but is not required for Nrf2 stabilization/accumulation in the nucleus and transcriptional activation of antioxidant response element-mediated NAD(P)H:quinone oxidoreductase-1 gene expression / D.A. Bloom, A.K. Jaiswal // J. Biol. Chem. - 2003. - V.278, № 45.

- P. 44675-44682.

113. Eggler A.L. Modifying specific cysteines of the electrophile-sensing human Keap1 protein is insufficient to disrupt binding to the Nrf2 domain Neh2 / A.L. Eggler, G. Liu, J.M. Pezzuto, R.B. van Breemen, A.D. Mesecar // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2005. - V.102, № 29. - P. 10070-10075.

114. Morkunaite-Haimi S. Reactive oxygen species are involved in the stimulation of the mitochondrial permeability transition by dihydrolipoate / S. Morkunaite-Haimi, A.G. Kruglov, V.V. Teplova, K. Stolze, L. Gille, H. Nohl, S.E. Saris // Biochem Pharmacol. - 2003. - V.65, № 1. - P. 4349.

115. Schweizer M. Stimulation of Ca2+ Release from Rat Liver Mitochondria by the Dithiol Reagent alpha-Lipoic Acid / M. Schweizer, C. Richter // Biochemical Pharmacology. - 1996. - V.52, № 12. - P. 1815-1820.

116. Moungjaroen J. Reactive Oxygen Species Mediate Caspase Activation and Apoptosis Induced by Lipoic Acid in Human Lung Epithelial Cancer Cells through Bcl-2 Down-Regulation / J.

Moungjaroen, U. Nimmannit, P.S. Callery, L. Wang, N. Azad, V. Lipipun, P. Chanvorachote, Y. Rojanasakul // J Pharmacol Exp Ther. - 2006. - V.319, № 3. - P. 1062-1069.

117. Yoo J.C. Ionizing radiation potentiates the induction of nitric oxide synthase by interferon-gamma (IFN-g) or IFNg and lipopolysaccharide in bnl cl.2 murine embryonic liver cells: role of hydrogen peroxide // J.C. Yoo, H.O. Pae, B.M. Choi, W.I. Kim, J.D. Kim, Y.M. Kim, H.T. Chung / Free Rad Biol & Med. - 2000. - V.28, № 3. - P. 390-396.

118. Davis G.D. Radioprotective effect of DL-a-lipoic acid on mice skin fibroblasts / G.D. Davis, J.G. Masilamoni, V. Arul, M.S. Kumar, U. Baraneedharan, S.F. Paul, I.V. Sakthivelu, E.P. Jesudason, R. Jayakumar // Cell Biol Toxicol. - 2009. - V.25, № 4. - P. 331-340.

119. Ramakrishnan N. Radioprotection of Hematopoietic Tissues in Mice by Lipoic Acid / N. Ramakrishnan, W.W. Wolfe, G.N. Catravas // Radiat Res. - 1992. - V.130, № 3. - P. 360-365.

120. Selim N.S. Electrical behavior of stored erythrocytes after exposure to gamma radiation and the role of a-lipoic acid as radioprotector / N.S. Selim, O.S. Desouky, E.M. Elbakrawy, R.A. Rezk // Appl Radiat Isot. - 2010. - V.68, № 6. - P. 1018-1024.

121. Mignini F. Human Bioavailability and Pharmacokinetic Profile of Different Formulations Delivering Alpha Lipoic Acid / F. Mignini, C. Nasuti, G. Gioventu, V. Napolioni, P.D. Martino // Open Access Scientific Reports. - 2012. - V.1, № 8. - P. 1-6.

122. Breithaupt-Grögler K. Dose-proportionality of oral thioctic acid — coincidence of assessments via pooled plasma and individual data / K. Breithaupt-Grögler, G. Niebch, E. Schneider, K. Erb, R. Hermann, H.H. Blume, B.S. Schug, G.G. Belz // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 1999. - V.8, № 1. - P. 57-65.

123. Evans J.L. Pharmacokinetics, tolerability, and fructosamine-lowering effect of a novel, controlled-release formulation of alpha-lipoic acid / J.L. Evans, C.J. Heymann, I.D. Goldfine, L.A. Gavin // Endocr Pract. - 2002. - V.8, № 1. - P. 29-35.

124. Сайфуллина Э.И. Компьютерная томография в оценке клинической эффективности берлитиона и его антиоксидантная активность при ишемическом инсульте / Э.И. Сайфуллина, Л.Б. Новикова, Г.Р. Иксанова, Э.М. Колчина // Клиническая неврология. - 2017. - №2. - С. 17-23.

125. Han Т. A systematic review and metaanalysis of a-lipoic acid in the treatment of diabetic peripheral neuropathy / T. Han, J. Bai, W. Liu, Y Hu // Eur. J. Endocrinol. - 2012. - V.167, № 4. - P. 465-471.

126. Ambrosi N. Alpha Lipoic Acid: A Therapeutic Strategy that Tend to Limit the Action of Free Radicals in Transplantation / N. Ambrosi, D. Guerrieri, F. Caro, F. Sanchez, G. Haeublein, D. Casadei, C. Incardona, E. Chuluyan // Int. J. Mol. Sci. - 2018. - V.19, № 1. - P. 102-115.

127. Meunier B. Hybrid molecules with a dual mode of action: dream or reality? / B. Meunier // Acc. Chem. Res. - 2008. - V. 41, № 1. - P. 69-77.

128. Koufaki M. Multifunctional lipoic acid conjugates / M. Koufaki, A. Detsi, C. Kiziridi // Curr. Med. Chem. - 2009. - V. 16, № 35. - P. 4728-4742.

129. Hager K. Alpha-lipoic acid as a new treatment option for Alzheimer's disease - a 48 months follow up analysis / K. Hager, M. Kenklies, J. McAfoose, J. Engel, G. Münch // J. Neural. Transm. Suppl. - 2007. - № 72. - P. 189-193.

130. Maczurek A. Lipoic acid as anti-inflammatory and neuroprotective treatment for Alzheimer's disease / A. Maczurek, K. Hager, M. Kenklies, M. Sharman, R. Martins, J. Engel, D.A. Carlson, G. Münch // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2008. - V. 60, № 13. - P. 1463-1470.

131. Tirosh O. Neuroprotective effects of alpha-lipoic acid and its positively charged amide analogue / O. Tirosh, C.K. Sen, S. Roy, M.S. Kobayashi, L. Packer // Free Radic. Biol. Med. - 1999. -V. 26, № 11. - P. 1418-1426.

132. Harnett J.J. Novel lipoic acid analogues that inhibit nitric oxide synthase / J.J. Harnett, M. Auguet, I. Viossat, C. Dolo, D. Bigg, P.E. Chabrier // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2002. - V. 12, № 11. - P. 1439-1442.

133. Bolognesi M. L. MTDL design strategy in the context of Alzheimer's disease: from lipocrine to memoquin and beyond / M.L. Bolognesi, M. Rosini, V. Andrisano, M. Bartolini, A. Minarini, V. Tumiatti, C. Melchiorre // Curr. Pharm. Des. - 2009. - V. 15, № 6. - P. 601-613.

134. Digiacomo M. Synthesis and pharmacological evaluation of multifunctional tacrine derivatives against several disease pathways of AD / M. Digiacomo, Z. Chen, S. Wang, A. Lapucci, M. Macchia, X. Yang, J. Chu, Y. Han, R. Pi, S. Rapposelli // Bioorg Med Chem Lett. - 2015. - V. 25, № 4. - P. 807-810.

135. Sozio P. Ibuprofen and lipoic acid diamides as potential codrugs with neuroprotective activity / P. Sozio, E. D'Aurizio, A. Iannitelli, A. Cataldi, S. Zara, F. Cantalamessa, C. Nasuti, A. Di Stefano // Arch Pharm (Weinheim). - 2010. - V. 343, № 3. - P. 133-142.

136. Koga H. New a-lipoic acid derivative, DHL-HisZn, ameliorates renal ischemia-reperfusion injury in rats / H. Koga, S. Hagiwara, J. Kusaka, K. Goto, T. Uchino, C. Shingu, S. Kai, T. Noguchi // -2012. - V. 174, № 2. - P. 352-358.

137. Stvolinsky S.L. Lipoylcarnosine: Synthesis, Study of Physico-Chemical and Antioxidant Properties, Biological Activity / S.L. Stvolinsky, N.A. Antonova, O.I. Kulikova, A.V. Lopachev, D.A. Abaimov, I. Al-Baidani, O.M. Lopacheva, T.N. Fedorova, A.P. Kaplun, G.M. Sorokoumova // Biomedical Chemistry. - 2018. - V. 12, № 4. - P. 308-315.

138. Nativi C. TRPA1 antagonist reverts oxaliplatin-induced neuropathic pain / C. Nativi, R. Gualdani, E. Dragoni, L. Di Cesare Mannelli, S. Sostegni, M. Norcini, G. Gabrielli, G. la Marca, B. Richichi, O. Francesconi, MR. Moncelli, C. Ghelardini, S.A. Roelens // Sci Rep. - 2005. - V. 3. - P. 110.

139. Lahiani A. Novel Synthetic PEGylated Conjugate of a-Lipoic Acid and Tempol Reduces Cell Death in a Neuronal PC12 Clonal Line Subjected to Ischemia / A. Lahiani, A. Hidmi, J. Katzhendler, E. Yavin, P. Lazarovici // ACS Chem Neurosci. - 2016. - V. 7, № 10. - P. 1452-1462.

140. Barry J.C. UPEI-100, a conjugate of lipoic acid and apocynin, mediates neuroprotection in a rat model of ischemia/reperfusion / J.C. Barry, C.S. Monique, V.K. Bobby, R. Desikan, M.S. Tarek // Am J Physiol Regul Integr Comp. - 2012. - V. 302, № 7. - P. 886-895.

141. Connell B.J. UPEI-300, a conjugate of lipoic acid and edaravone, mediates neuroprotection in ischemia/reperfusion / B.J. Connell, M.C. Saleh, I. Kucukkaya, A.S. Abd-El-Aziz, B.V. Khan, T.M. Saleh // Neurosci Lett. - 2014. - V. 561. - P. 151-155.

142. Connell B.J. UPEI-400, a Conjugate of Lipoic Acid and Scopoletin, Mediates Neuroprotection in a Rat Model of Ischemia/Reperfusion / B.J. Connell, M.C. Saleh, D. Rajagopal, T.M. Saleh // Food Chem Toxicol. - 2017. - V. 100. - P. 175-182.

143. Saleh M.C. Co-Administration of Resveratrol and Lipoic Acid, or Their Synthetic Combination, Enhances Neuroprotection in a Rat Model of Ischemia/Reperfusion / M.C. Saleh, B.J. Connell, D. Rajagopal, B.V. Khan, A.S. Abd-El-Aziz, I. Kucukkaya, T.M. Saleh // PLoS One. - 2014.

- V. 31, № 9. - P. 1-9.

144. Di Stefano A. L-dopa- and dopamine-(R)-alpha-lipoic acid conjugates as multifunctional codrugs with antioxidant properties / A. Di Stefano, P. Sozio, A. Cocco, A. Iannitelli, E. Santucci, M. Costa, L. Pecci, C. Nasuti, F. Cantalamessa, F. Pinnen // J. Med. Chem. - 2006. - V. 49, № 4. - P. 14861493.

145. Koufaki M. Design and synthesis of 1,2-dithiolane derivatives and evaluation of their neuroprotective activity / M. Koufaki, C. Kiziridi, F. Nikoloudaki, M.N. Alexis // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2007. - V. 17, № 15. - P. 4223-4227.

146. Jalili-Baleh L. Novel 3-phenylcoumarin-lipoic acid conjugates as multi-functional agents for potential treatment of Alzheimer's disease / L. Jalili-Baleh, H. Nadri, H. Forootanfar, A. Samzadeh-Kermani, T.T. Ku9ukkilin9, B. Ayazgok, M. Rahimifard, M. Baeeri, M. Doostmohammadi, L. Firoozpour, S.N. Bukhari, M. Abdollahi, M.R. Ganjali, S. Emami, M. Khoobi, A. Foroumadi // Bioorg Chem. - 2018. - V. 79. - P. 223-234.

147. Cacciatore I. Potent (R)-alpha-bis-lipoyl Derivative Containin 8-Hydroxyquinoline Scaffold: Synthesis and Biological Evaluation of Its Neuroprotective Capabilities in SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cells / I. Cacciatore, E. Fornasari, L. Baldassarre, C. Cornacchia, S. Fulle, E.S. Di Filippo, T. Pietrangelo, F A. Pinnen // Pharmaceuticals (Basel). - 2013. - V.6, № 1. - P. 54-69.

148. Ziegler D. Treatment of symptomatic diabetic polyneuropathy with the antioxidant alpha-lipoic acid: a meta-analysis / D. Ziegler, H. Nowak, P. Kempler, P. Vargha, P.A. Low // Diabetes Med.

- 2004. - V.21, № 2. - P. 114-121.

149. Singh U. Alpha-lipoic acid supplementation and diabetes / U. Singh, I. Jialal // Nutr. Rev. -2008. - V.66, № 11. - P. 646-657.

150. Venkatraman M.S. Alpha-Lipoic acid-based PPAR gamma agonists for treating inflammatory skin diseases / M.S. Venkatraman, A. Chittiboyina, J. Meingassner, I.H. Christopher, J. Varani, C.N. Ellis, M.A. Avery, H.A. Pershadsingh, T.W. Kurtz, S.C. Benson // Arch. Dermatol. Res. -2004. - V.296, № 3. - P. 97-104.

151. Gruzman A. Synthesis and characterization of new and potent alpha-lipoic acid derivatives / A. Gruzman, A. Hidmi, J. Katzhendler, A. Haj-Yehiec, S. Sasson // Bioorg. Med. Chem. - 2004. - V. 12, № 5. - P. 1183-1190.

152. Melagraki G. Synthesis and evaluation of the antioxidant and anti-inflammatory activity of novel coumarin-3-aminoamides and their alpha-lipoic acid adducts / G. Melagraki, A. Afantitis, O. Igglessi-Markopoulou, A. Detsi, M. Koufaki, C. Kontogiorgis, D.J. Hadjipavlou-Litina // Eur. J. Med. Chem. - 2009. - V.44, № 7. - P. 3020-3026.

153. Detsi A. Design and synthesis of novel quinolinone-3-aminoamides and their alpha-lipoic acid adducts as antioxidant and anti-inflammatory agents / A. Detsi, D. Bouloumbasi, K.C. Prousis, M. Koufaki, G. Athanasellis, G. Melagraki, A. Afantitis, O. Igglessi-Markopoulou, C. Kontogiorgis, D.J. Hadjipavlou-Litina // J. Med. Chem. - 2007. - V.50, № 10. - P. 2450-2458.

154. J.C. Milne, M.R. Jirousek, J.E. Bemis, C.B. Vu. Lipoic acid acylated salicylate derivates and their uses // US Patent, WO/2011/044138, № 0082192, 14.04.2011.

155. Shi D. Y. Alpha-lipoic acid induces apoptosis in hepatoma cells via the PTEN/Akt pathway / D.Y. Shi, H.L. Liu, J.S. Stern, P.Z. Yu, S.L. Liu // FEBS Lett. - 2008. - V.585, № 12. - P. 1667-1671.

156. van de Mark K. Alpha-lipoic acid induces p27Kip-dependent cell cycle arrest in non-transformed cell lines and apoptosis in tumor cell lines / K. van de Mark, J.S. Chen, K. Steliou, S.P. Perrine, D.V. Faller // J. Cell Physiol. - 2003. - V.194, № 3. - P. 325-340.

157. Wenzel U. alpha-Lipoic acid induces apoptosis in human colon cancer cells by increasing mitochondrial respiration with a concomitant O2-*-generation / U. Wenzel, A. Nickel, H. Daniel // Apoptosis. - 2005. - V.10, № 2. - P. 359-368.

158. Zhang S.J. Synthesis and anticancer evaluation of a-lipoic acid derivatives / S.J. Zhang, Q.F. Ge, D.W. Guo, W.X. Hu, H Z. Liu // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 2010. - V.20, № 10. - P. 3078-3083.

159. Guerriero E. Effects of lipoic acid, caffeic acid and a synthesized lipoyl-caffeic conjugate on human hepatoma cell lines / E. Guerriero, A. Sorice, F. Capone, S. Costantini, P. Palladino, M. D'ischia, G. Castello // Molecules. - 2011. - V.16, № 8. - P. 6365-6377.

160. Kaskiw M.J. Synthesis and cytotoxic activity of diosgenyl saponin analogues / M.J. Kaskiw, M L. Tassotto, J. Th'ng, Z.H. Jiang // Bioorg. Med. Chem. - 2008. - V.16, № 6. - P. 3209-3217.

161. Antonello A. Multitarget-directed drug design strategy: A novel molecule designed to block Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) and to exert proapoptotic effects / A. Antonello, A. Tarozzi, F. Morroni, A. Cavalli, M. Rosini, P. Hrelia, M. L. Bolognesi, C. Melchiorre // J. Med. Chem. - 2006.

- V.49, № 23. - P. 6642-6645.

162. Ghorbani M. Curcumin-lipoic acid conjugate as a promising anticancer agent on the surface of gold-iron oxide nanocomposites: A pH-sensitive targeted drug delivery system for brain cancer theranostics / M. Ghorbani, B. Bigdeli, L. Jalili-Baleh, H. Baharifar, M. Akrami, S. Dehghani, B. Goliaei, A. Amani, A. Lotfabadi, H. Rashedi, I. Haririan, N.R. Alam, M.P. Hamedani, M. Khoobi // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2018. - V.114. - P. 175-188.

163. Coombes J.S. Effect of combined supplementation with vitamin E and alpha-lipoic acid on myocardial performance during in vivo ischaemia-reperfusion / J.S. Coombes, S.K. Powers, H.A. Demirel, J. Jessup, H.K. Vincent, K.L. Hamilton, H. Naito, R.A. Shanely, C.K. Sen, L. Packer, L.L. Ji // Acta Physiol. Scand. - 2000. - V.169, № 4. - P. 261-269.

164. Koufaki M. Synthesis of chroman analogues of lipoic acid and evaluation of their activity against reperfusion arrhythmias / M. Koufaki, A. Detsi, E. Theodorou, C. Kiziridi, T. Calogeropoulou,

A. Vassilopoulos, A.P. Kourounakis, E. Rekka, P.N. Kourounakis, C. Gaitanaki, P. Papazafiri // Bioorg. Med. Chem. - 2004. - V.12, № 18. - P. 4835-4841.

165. Saah M. Design, synthesis, pharmacokinetic evaluation of a chemical delivery system for drug targeting to lung tissue / M. Saah, W.M. Wu, K. Eberst, E. Marvanyos, N. Bodor // J. Pharm. Sci.

- 1996. - V.85, № 5. - P. 496-504.

166. Ortial S., Durand G., Poeggeler B., Polidori A., Pappolla M. A., Boker J., Hardeland R., Pucci

B. Fluorinated amphiphilic amino acid derivatives as antioxidant carriers: a new class of protective agents / S. Ortial, G. Durand, B. Poeggeler, A. Polidori, M.A. Pappolla, J. Boker, R. Hardeland, B. Pucci // J. Med. Chem. - 2006. - V.49, № 9. - P. 2812-2820.

167. Balakirev M. Lipoic acid-derived amphiphiles for redox-controlled DNA delivery / M. Balakirev, G. Schoehn, J. Chroboczek // Chem Biol. - 2000. - V.7, № 10. - P. 813-819.

168. Gelo-Pujic M. Synthesis of new antioxidant conjugates and their in vitro hydrolysis with Stratum corneum enzymes / M. Gelo-Pujic, J.R. Desmurs, T. Kassem, S. Delaire, A. Adao, D. Tawil // Int. J. Cosmet. Sci. - 2008. - V.30, № 3. - P. 195-204.

169. Feng X. Development of PSMA-targeted and core-crosslinked glycol chitosan micelles for docetaxel delivery in prostate cancer therapy / X. Feng, Y. Zhou, X. Xie, M. Li, H. Huang, L. Wang, X. Xu, J. Yu // Mater Sci. Eng. C Mater Biol. Appl. - 2019. - V.96. - P. 436-445.

170. Ling L. High Drug Loading, Reversible Disulfide Core-Cross-Linked Multifunctional Micelles for Triggered Release of Camptothecin / L. Ling, M. Ismail, Y. Du, Q. Xia, W. He, C. Yao, X. Li // Mol. Pharm. - 2018. - V.15, № 12. - P. 5479-5492.

171. Wei R. Reduction-responsive disassemblable core-cross-linked micelles based on poly(ethylene glycol)-b-poly(N-2-hydroxypropyl methacrylamide)-lipoic acid conjugates for triggered intracellular anticancer drug release / R. Wei, L. Cheng, M. Zheng, R. Cheng, F. Meng, C. Deng, Z. Zhong // Biomacromolecules. - 2012. - V.13, № 8. - P. 2429-2438.

172. Vivechana D. Andres Synthesis and Grafting of Thioctic Acid-PEG-Folate Conjugates onto Au Nanoparticles for Selective Targeting of Folate Receptor-Positive Tumor Cells / D. Vivechana, J. Van den Bossche, M.S. Debra, H.T. David, R.P. Ronald // Bioconjug Chem. - 2006. - V.17, № 3. - P. 603-609.

173. Maciej D. Towards potent but less toxic nanopharmaceuticals - lipoic acid bioconjugates of ultrasmall gold nanoparticles with an anticancer drug and addressing unit / D. Maciej, Z. Dominika, P. Piotr, C. Grzegorz, M.W. Sylwia, S. Tomasz, K. Marcin, W. Agnieszka, B. Renata // RSC Adv. - 2018. - V.8, № 27. - P. 14947-14957.

174. Gatto E. Electroconductive and photocurrent generation properties of self-assembled monolayers formed by functionalized, conformationally-constrained peptides on gold electrodes / E. Gatto, L. Stella, F. Formaggio, C. Toniolo, L. Lorenzelli, M. Venanzi // J. Pept. Sci. - 2008. - V.14, № 2. - P. 184-191.

175. С.Л. Стволинский, В.Н. Прозоровский, Д.С. Бережной, О.И. Куликова, А.А. Логвиненко, Т.Н. Федорова. Мицелярный комплекс липоевой кислоты с карнозином для защиты млекопитающих от окислительного стресса // Патент РФ, № 2647435 C2, выдан 15.03.2018.

176. Стволинский С.Л. Наномицелярный комплекс липоевой кислоты с карнозином, обладающий антиоксидантной активностью: исследование в экспериментах in vitro и in vivo / С.Л. Стволинский, В.Н. Прозоровский, Д.С. Бережной, О.И. Куликова, Д.А. Абаимов, Т.Н. Федорова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2016. - Т. 6, № 11. - С. 3-9.

177. Kulikova O.I. Neuroprotective effect of the carnosine - a-lipoic acid nanomicellar complex in a model of early-stage Parkinson's disease / O.I. Kulikova, D.S. Berezhnoy, S.L. Stvolinsky, A.V. Lopachev, V.S. Orlova, T.N. Fedorova // Regul. Toxicol. Pharmacol. - 2018. - V. 95. - P. 254-259.

178. Nishiura H. A Novel Nano-Capsule of a-Lipoic Acid as a Template of Core-Shell Structure Constructed by Self-Assembly / H. Nishiura, K. Sugimoto, K. Akiyama, M. Musashi, Y. Kubota, Y. Tomonori, Y. Yuji, K. Takashi, Y. Yamaguchi // J. Nanomed. Nanotechol. - 2013. - V. 4, № 1. - P. 17.

179. Kubota Y. Novel nanocapsule of a-lipoic acid reveals pigmentation improvement: a-Lipoic acid stimulates the proliferation and differentiation of keratinocyte in murine skin by topical application / Y. Kubota, M. Musashi, T. Nagasawa, N. Shimura, R. Igarashi, Y. Yamaguchi // Exp. Dermatol. -2019. - V. 28, № 1. - P. 55-63.

180. Alvarez-Rivera F. a-Lipoic Acid in Soluplus Polymeric Nanomicelles for Ocular Treatment of Diabetes-Associated Corneal Diseases / F. Alvarez-Rivera, D. Fernández-Villanueva, A. Concheiro, C. Alvarez-Lorenzo // J. Pharm Sci. - 2016. - V. 105, № 9. - P. 2855-2863.

181. Hajtuch J. Effects of functionalized silver nanoparticles on aggregation of human blood platelets / J. Hajtuch, N. Hante, E. Tomczyk, M. Wojcik, M.W. Radomski, M.J. Santos-Martinez, I. Inkielewicz-Stepniak // Int. J. Nanomedicine. - 2019. - V. 11. - P. 7399-7417.

182. Ramachandran L. Therapeutic Potentials of Silver Nanoparticle Complex of a-Lipoic Acid / L. Ramachandran, C.K. Nair // Nanomater. nanotechnol. - 2011. - V. 1, № 2. - P. 17-24.

183. Madalina T. Lipoic acid functionalized SiO 2@Ag nanoparticles. Synthesis, characterization and evaluation of biological activity / T. Madalina, C.C. Daniela, M.Mu. Adina, S. Simona, G. Cornel, C.C. Mariana, B. Coralia // Mater. Sci. Eng. C. Mater. Biol. Appl. - 2017. - V. 79. - P. 499-506.

184. Huang Y. Co-administration of protein drugs with gold nanoparticles to enable percutaneous delivery / Y. Huang, F. Yu, Y.S. Park, J. Wang, M.C. Shin, H.S. Chung, V.C. Yang. // Biomaterials. -2010. - V. 31, № 34. - P. 9086- 9091.

185. Leu J.G. The effects of gold nanoparticles in wound healing with antioxidant epigallocatechin gallate and a-lipoic acid / J.G. Leu, P. Siang-An Chen, H.M. Chen // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. - 2012. - V. 8, № 5. - P. 767-775.

186. Guler E. Bio-active nanoemulsions enriched with gold nanoparticle, marigold extracts and lipoic acid: In vitro investigations / E. Guler, F.B. Barlas, M. Yavuz, B. Demir, S. Timur, Z.P. Gumus, H. Coskunol, Y. Baspinar // Colloids Surf. B. Biointerfaces. - 2014. - V. 121. - P. 299-306.

187. Pardeike J. Lipid nanoparticles (SLN: NLC) in cosmetic and pharmaceutical dermal products / J. Pardeike, A. Hommos, R.H. Müller // Int. J. Pharm. - 2009. - V. 366. - P. 170-184.

188. Silva A.C. Affiliations Preparation, characterization and biocompatibility studies on risperidone-loaded solid lipid nanoparticles (SLN): high pressure homogenization versus ultrasound / A.C. Silva, E. Gonzalez-Mira, M.L. Garcia, M.A. Egea, J. Fonseca, R. Silva, D. Santos, E.B. Souto, D. Ferreira // Colloids Surf. B. Biointerfaces. - 2011. - V. 86, № 1. - P. 158-165.

189. Elwira L. NLC delivery systems for alpha lipoic acid: Physicochemical characteristics and release study / L. Elwira, S. Elzbieta, M. Malgorzata, S. Paulina, J. W. Ogonowski // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. - 2017. - V. 532. - P. 57-62.

190. Souto E.B. A novel approach based on lipid nanoparticles (SLN) for topical delivery of a-lipoic acid / E.B. Souto, R.H. Müller, S. Gohla // Journal of Microencapsulation Micro and Nano Carriers. - 2005. - V. 22, № 6. - P. 581-592.

191. Ruktanonchai U. Physicochemical characteristics, cytotoxicity, and antioxidant activity of three lipid nanoparticulate formulations of alpha-lipoic acid / U. Ruktanonchai, P. Bejrapha, U.

Sakulkhu, P. Opanasopit, N. Bunyapraphatsara, V. Junyaprasert, S. Puttipipatkhachorn // AAPS PharmSciTech. - 2009. - V. 10, № 1. - P. 227-234.

192. Huang J. Multilayer emulsions as a strategy for linseed oil and a-lipoic acid microencapsulation: study on preparation and in vitro characterization / J. Huang, Q. Wang, T. Li, N. Xiaa, Q. Xia // J. Sci. Food Agric. - 2018. - V. 98. - P. 3513-3523.

193. Külkamp I.C. Nanoencapsulation improves the in vitro antioxidant activity of lipoic acid / I.C. Külkamp, B.D. Rabelo, S.J. Berlitz, M. Isoppo, M.D. Bianchin, S.R. Schaffazick, A.R. Pohlmann, S.S. Guterres // J. Biomed. Nanotechnol. - 2011. - V. 7, № 4. - P. 598-607.

194. Gupta S.S. In vitro study of anti-oxidative effects of b-carotene and a-lipoic acid for nanocapsulated lipids / S.S. Gupta, M. Ghosh // Food Science and Technology. - 2012. - V. 49. - P. 131-138.

195. Campos P.M. Efficacy of Cosmetic Formulations Containing Dispersion of Liposome with Magnesium Ascorbyl Phosphate, Alpha-Lipoic Acid and Kinetin / P.M. Campos, F. B. Júnior, J.P. Andrade, L. R. Gaspar // Photochem. Photobiol. - 2012. - V. 88, № 3. - P. 748-752.

196. Zhao G.D. Development and characterisation of a novel chitosan-coated antioxidant liposome containing both coenzyme Q10 and alpha-lipoic acid / G.D. Zhao, R. Sun, S.L. Ni, Q. Xia // J. Microencapsul. - 2015. - V. 32, № 2. - P. 157-165.

197. Y. Zhang. Method of making liposomes, liposome compositions made by the methods, and methods of using the same // US20120171280A1, A1 CA2834968A1, 05.07.2012.

198. Lipoic acid liposome injection // CN102525930B, 20.03.2013

199. Dharmalingam P. An anti-oxidant, a-lipoic acid conjugated oleoyl-sn-phosphatidylcholineas a helper lipid in cationic liposomal formulations / P. Dharmalingam, B. Marrapu, C. Voshavar, R. Nadella, V.K. Rangasami, R.V. Shaji, S. Abbas, R.B. Prasad, S.S, Kaki, S. Marepally // Colloids Surf B Biointerfaces. - 2017. - V. 152, № 1. - P. 133-142.

200. Lee B.S. Stimuli-responsive antioxidant nanoprodrugs of NSAIDs / B.S. Lee, X. Yuan, Q. Xu, F.S. McLafferty, B.A. Petersen, J.C. Collette, K.L. Black, J.S. Yu // Int. J. Pharm. - 2009. - V. 372.

- P. 112-124.

201. Constantinescu A. Reduction and transport of lipoic acid by human erythrocytes / A. Constantinescu, U. Pick, G. J. Handelman, N. Haramaki, D. Han, M. Podda, H. J. Tritschler, L. Packer // Biochem Pharmacol. - 1995. - V. 20, № 2. - P. 253-261.

202. Miyakea M. Membrane permeation of giant unilamellar vesicles and corneal epithelial cells with lipophilic vitamin nanoemulsions / M. Miyakea, Y. Kakizawaa, N. Toboria, M. Kuriokab, N. Tabuchib, R. Konb, N. Shimokawac, Y. Tsujinoc, M. Takagic // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces.

- 2018. - V. 169, № 1. - P. 444-452.

203. Mergen F. Synthesis of 1,3-diacylaminopropan-2-ols and corresponding 2-acyl derivatives as amide isosteres of natural lipids / F. Mergen, D.M. Lambert, J.H. Poupaert, A. Bidaine // Chem. Phys. of Lipids. - 1991. - V. 59, № 4. - P. 267-272.

204. Швец В. И. Липосомальные формы лекарственных препаратов: технологические особенности получения и применение в клинике. / В. И. Швец, Ю. М. Краснопольский, Г. М. Сорокоумова. - М.: Ремедиум, 2016. - 197 с.

205. Jaiswal M. Nanoemulsion: an advanced mode of drug delivery system / M. Jaiswal, R. Dudhe, P.K. Sharma // 3 Biotech. - 2015. - V. 5, № 2. - Р. 123-127.

206. Bouchemal K. Nanoemulsion formulation using spontaneous emulsification: solvent, oil and surfactant optimization / K. Bouchemal, S. Brian9on, E. Perrier, H. Fessi // International Journal of Pharmaceutics. - 2004. - V. 280, № 2. - Р. 241-251.

207. Schaffazick S.R. Caracterizacao e Estabilidade Físico-Química de Sistemas poliméricos Nanoparticulados Para Administracao de Fármacos / S.R. Schaffazick, S.S. Guterres, L.L. Freitas, A.R. Pohlmann // Química Nova. - 2003. - V. 26, № 5. - Р. 726-737.

208. Будкина О.А. Структурно-функциональные закономерности воздействия амфифильных блок-сополимеров на раковые клетки: дисс. ... канд. хим. наук: 02.00.06 / Будкина Ольга Александровна. - М., 2015. - 135 с.

209. Hall R. Antiplatelet Drugs: A Review of Their Pharmacology and Management in the Perioperative Period / R. Hall, C.D. Mazer // Anesth Analg. - 1994. - V. 112, № 2. - Р. 292-318.

210. Владимиров Ю. А. Активированная хемилюминесценция и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследованиях/ Ю. А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. - 2001. - Т. 7, № 1. - С. 16-23.

211. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы и клеточная Хемилюминесценция / Ю. А. Владимиров, Е. В. Проскурнина // Успехи биологической химии. - 2009. - Т. 9. - С. 341-388.

212. Jones W. Uptake, recycling, and antioxidant actions of alpha-lipoic acid in endothelial cells / W. Jones, X. Li, Z. Qu, L. Perriott, R. R. Whitesell, J. M. May. // Free Radical Biology and Medicine. -2002. - V. 33, № 1. - Р. 83-93.

213. Schaer G.L. Reduction in reperfusion-induced myocardial necrosis in dogs by RheothRx injection (poloxamer 188 N.F.), a hemorheological agent that alters neutrophil function / G.L. Schaer, T.L. Hursey, S.L. Abrahams, K. Buddemeier, B. Ennis, E.R. Rodriguez, J.P. Hubbell, J. Moy, J.E. Parrillo // Circulation. - 1994. - V. 90, № 6. - Р. 2964-2975.

214. Gomes A. Fluorescence probes used for detection of reactive oxygen species / A. Gomes, E. Fernandes, J. C. Lima // J. Biochem. Biophys. - 2005. - V. 65, № 2. - Р. 48-80.

215. Eruslanov E. Identification of ROS using oxidized DCFDA and flow-cytometry / E. Eruslanov, S. Kusmartsev // Methods Mol Biol. - 2010. - V.594 - Р. 57-72.

216. Космовский С.Ю. Определение размеров и оптических свойств тромбоцитов методом лазерной дифракционной спектроскопии: дисс. ... канд. физ.-мат. наук: 03.00.02 / Космовский Сергей Юрьевич. - М., 2003. - 78 с.

217. Sangkuhl K. Platelet aggregation pathway / K. Sangkuhl, A. R. Shuldiner, T. E. Klein, R. B. Altmana // Pharmacogenet Genomics. - 2011. - V. 21, № 8. - Р. 516-521.

218. Lai Y.S. Antiplatelet Activity of r-Lipoic Acid / Y.S. Lai, C.Y. Shih, Y.F. Huang, T.C. Chou // J. Agric. Food Chem. - 2010. - V. 58, № 15. - Р. 8596-603.

219. Lee B.S. Preparation and characterization of antioxidant nanospheres from multiple a-lipoic acid-containing compounds / B.S. Lee, X. Yuan, Q. Xu, F.S. McLafferty, B.A. Petersen, J.C. Collette, K.L. Black, J.S. Yu. // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 2009. - V. 19, № 6. - P. 16781681.

220. Uchiyama M. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acid test / M. Uchiyama, M. Mihara //Analyt. Biochemia. -1978. - V. 86. - Р. 271-278.

221. Pinton R. Zinc-deficiency enhanced nad(p)h-dependent superoxide radical production in plasma-membrane vesicles isolated from roots of bean-plants / R. Pinton I. Cakmak, H. Marschner. // Journal of Experimental Botany. - 1994. - V. 45, № 270. - Р. 45-50.

222. Gizinger O.A., Moskvin S.V., Ziganshin O.R., Shemetova M.A. Influence of low-intensity laser irradiation at functional activity and rate of NADPH-oxidase reaction of human peripheral blood neutrophils (an experimental study) //Лазерная медицина - 2016. - Т. 20, № 1. - Р 46-49.

223. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных / О.Ю. Реброва // М.: Медиа Сфера, 2006. С. - 312 с.

224. Vyas S.P. Pegylated Protein Encapsulated Multivesicular Liposomes: A Novel Approach for Sustained Release of Interferon a / S.P. Vyas, M. Rawat, A. Rawat, S. Mahor, P.N. Gupta // Drug Dev. Ind. Pharm. - 2006. - V. 32, № 6. - Р. 699-707.

225. Зернов А.Л. Микрокапсулы из поли(3-гидроксибутирата) для пролонгированного высвобождения белка /А.Л. Зернов, Е.А. Иванов, Т.К. Махина, В.Л. Мышкина, О.В. Самсонова, А.В. Феофанов, А.П. Бонарцев // Современные технологии в медицине. - 2015. - Т. 7, № 4. - С. 50-57.

226. Лившиц В.А. Микросферы из поли-3-гидроксибутирата для пролонгированного высвобождения лекарственных веществ / В.А. Лившиц, А.П. Бонарцев, А.Л. Иорданский, Е.А. Иванов, Т.А. Махина, В.Л. Мышкина, Г.А. Бонарцева // Высокомолекулярные соединения. -2009. - Т. 51, № 7. - С. 1243-1251.

Благодарности

Автор выражает глубокую и искреннюю благодарность своему научному руководителю к.х.н., доц. Шастиной Н.С. (МИТХТ им. М. В. Ломоносова, каф. БТиПФ) за создание наилучших благоприятных условий работы над проведением научных исследований, за ценные научные советы, замечания и консультации и за руководство. Автор благодарит к.б.н., с.н.с. Баранову О.А., к.б.н., с.н.с. Чеканова А.В., д.м.н., проф. Соловьеву Э.Ю. и д.м.н., проф. Федина А.И. (Кафедра неврологии, НИЛ биомедицинских исследований в неврологии РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) за создание приятной атмосферы в период активной работы над исследованиями, за ценные советы и консультации. Выражаю благодарность д.х.н. Селищевой А.А. (МГУ им. М.В. Ломоносова), д.т.н. Левину А.Д., к.х.н. Аленичеву М. (ВНИИОФИ), к.х.н Лотош Н. Ю. (НИЦ Курчатовский институт), к.х.н Львовскому А.И., д.б.н. Попенко В.И. (ИМБ РАН). Выражаю благодарность к.б.н. Торопыгину И.Ю (ИБМХ) и м.н.с. Кривошеину М.С. (ИНХС РАН) за проведение масс-спектрометрического анализа соединений.

Автор благодарит коллег, студентов и аспирантов Клочкову Алену, Бабушкина Александра, Сарвас Ксению, Жигалову Ксению (кафедра биофизики, РНИМУ им. Н.И. Пирогова), Шипелову Алину, Джавадову Голду, Иншакову Анну, Дарнотук Елизавету, Алясеву Светлану, Сергея Голубкова, Юшину Анну Андреевну, Белявцева Александра, (кафедра БТиПФ МИТХТ им. М. В. Ломоносова). Выражаю огромную благодаронсть донорам, которые добровольно сдавали биоматериал для исследований.

Благодарен руководителю организации представительства компании "ЛИПОИД АГ" (Германия), г.Москва, к.х.н., Сымону А. В., за предоставление фосфатидилхолина Lipoid S-100.

Автор выражает благодарность кафедре БТиПФ за создание замечательных условий, активной и творческой атмосферы в период проведения научных исследований, за ценные, полезные и очень интересные лекции. Выражаю глубокую благодарность Каплуну А.П. за ценные советы и пожелания.

Выражаю глубокую искреннюю благодарность научному руководителю к.х.н. Сорокоумовой Г.М., за создание приятной атмосферы для проведения научных исследований за ценные советы, указания и опыт, а также руководство с 2013 по 2017 гг.

Работа по исследованию влияния наноформ с ЛК и её эфирами на функциональную активность нейтрофилов и тромбоцитов выполнена на кафедре неврологии в НИЛ биомедицинских исследований в неврологии в Российском национальном исследовательском медицинском университете имени Н.И. Пирогова Минздрава России.

Работа выполнена в рамках госзадания, № гос. регистрации НИОКТР АААА-А19-119100390063-9, № ИКРБС AAAA-B20-220091790054-2.