Онколитические свойства теломераза-специфичного аденовируса серотипа 6, усиленного геном человеческого ГМ-КСФ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Осипов Иван Дмитриевич

• Осипов Иван Дмитриевич
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Осипов Иван Дмитриевич

ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биология аденовирусов

1.1.1. Классификация аденовирусов

1.1.2 Строение вириона

1.1.3 Жизненный цикл аденовируса

1.2 Аденовирусы как векторы

1.2.1 Биораспределение

1.2.2 Аденовирусы в онколитической виротерапии

1.2.2.1 Аттенуация онколитических аденовирусов

1.2.2.2 Усиление противоопухолевой эффективности онколитических аденовирусов

1.2.2.3 Клинические испытания онколитических аденовирусов

1.2.3 Свойства Ad6

1.2.3.1 Серопревалентность Ad6

1.2.3.2 Структурные особенности Ad6

1.2.3.3 Особенности биораспределения Ad6

1.2.3.4 Онколитические Ad6

1.2.3.5 Способы конструирования рекомбинантных аденовирусов

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Материалы и оборудование

2.1.1 Реактивы и материалы

2.1.2 Коммерческие наборы и ферменты

2.1.3 Препараты нуклеиновых кислот

2.1.4 Среды и растворы для культивирования эукариотических клеток

2.1.5 Буферы

2.1.6 Оборудование

2.1.7 Програмное обеспечение

2.1.8 Клетки и вирусы

2.2 Методы

2.2.1 Культивирование эукариотических клеток

2.2.2 Эксперименты с животными

2.2.3 Реакции ферментативного гидролиза

2.2.4 Лигирование двух фрагментов ДНК по липким концам

2.2.5 Амплификация фрагментов ДНК для проведения реакции рекомбинации или реакции лигирования

2.2.6 Рекомбинация in vitro

2.2.7 Трансформация клеток E. coli

2.2.8 Электрофоретическое разделение ДНК

2.2.9 "Оживление" вируса

2.2.10 Препаративная наработка вируса

2.2.11 Оценка жизнеспособности клеток

2.2.12 Секвенирование по Сэнгеру

2.2.13 Определение биологической активности ГМ-КСФ, секретируемого инфицированными клетками A549

2.2.14 Определение уровня ГМ-КСФ в среде клеток, инфицированных Ad6-hT-GM, при помощи ИФА

2.2.15 Определение содержания ДНК аденовируса в клетках, инфицированных вирусами Ad6 или Ad6-hT-GM, и в органах иммунодефицитных мышей-опухоленосителей при внутриопухолевом введении Ad6 или Ad6-hT-GM, методом количественной ПЦР

2.2.16 ОТ-ПЦР вирусной мРНК для определения экспрессии генов района E3

2.2.17 Статистический анализ

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Изучение онколитического потенциала Ad6 дикого типа

3.1.1 Сравнительный анализ онколитической активности природных вариантов Ad6 и Ad5 на клетках глиомы человека in vitro

3.1.2 Оценка противоопухолевой эффективности природных вариантов Ad6 и Ad5 в отношении глиобластомы человека in vivo

3.2 Конструирование рекомбинантного аденовируса Ad6-hT-GM

3.2.1 Получение плазмиды pBRAd1

3.2.2 Получение плазмиды pBRAd2

3.2.3 Получение плазмиды pBRAd3

3.2.4 Получение плазмиды pBRAd4

3.2.5 Получение полногеномной плазмиды pAd6-hTERT-GMCSF

3.2.6. "Оживление" вируса

3.3 Изучение свойств рекомбинантного вируса Ad6-hT-GM

3.3.1 Оценка репликативной активности Ad6-hT-GM

3.3.3 Оценка экспрессии генов области E3

3.3.2 Оценка уровня и биологической активности ГМ-КСФ в среде клеток, инфицированных Ad6-hT-GM

3.3.4 Цитотоскическая активность Ad5, Ad6 и Ad6-hT-GM в отношении опухолевых клеток in vitro

3.3.5 Цитотоксическая активность Ad6-hT-GM в отношении здоровых клеток и опухолевых клеток с низким уровнем hTERT in vitro

3.3.5 Противоопухолевая активность Ad6-hT-GM in vivo

3.3.6 Биораспределение Ad6-hT-GM и Ad6 при внутриопухолевом введении мышам-

опухоленосителям

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Онколитические свойства теломераза-специфичного аденовируса серотипа 6, усиленного геном человеческого ГМ-КСФ»

ВВЕДЕНИЕ

Ко второй половине XX века было описано несколько случаев спонтанной регрессии опухоли у пациентов после перенесенной вирусной инфекции. Наиболее часто упомянается случай, произошедший еще в конце XIX века, когда американский врач Джордж Док наблюдал временную ремиссию лейкемии после перенесенного гриппа у 42-летней женщины [1]. Это произошло за 37 лет до того, как была установлена вирусная природа гриппа. В 1950 - 1970-е годы были начаты десятки клинических исследований эффективности вирусов в лечении онкозаболеваний. Для этого использовались представители различных вирусных семейств, включая вирусы гепатита, флавивирусы, парамиксовирусы и аденовирусы [1-3]. Несмотря на наблюдаемую в ряде случаев противоопухолевую эффективность, побочные эффекты вирусной терапии не позволили дать этим препаратам статус широкого клинического применения.

Сегодня молекулярные процессы, протекающие в ходе вирусной инфекции, подробно изучены, и поэтому вирусные векторы активно применяются в генной инженерии и генной терапии, в том числе как противоопухолевые средства. В 2003 году Китайская Народная Республика стала первой страной, одобрившей использование вирусной генной терапии опухолей в клинической практике. Препарат Гендицин (Gendicine), разработанный компанией ShenZhen SiBiono Gene Tech Co., представляет собой нерепликативный аденовирусный вектор, экспрессирующий человеческий p53 [4]. Спустя два года разрешение получил другой противоопухолевый препарат на основе аденовируса, Онкорин (Oncorine), селективно реплицирующийся в опухолевых клетках [5,6]. В 2015 г. впервые FDA США был одобрен онколитический препарат Имлигик (Imlygic), разработанный на основе герпес-вируса, для лечения злокачественной меланомы [7]. В 2021 году в Японии для лечения злокачественной глиомы был одобрен онколитический препарат Делитакт (Delytact), основой которого также является герпес-вирус [8]. В 2022 году FDA США был одобрен препарат Адстиладрин (Adstiladrin) на основе нереплицирующегося аденовируса для лечения рака мочевого пузыря [9].

В данный момент разработки и исследования онколитических вирусов активно развиваются, ведутся клинические испытания препаратов на основе вирусов различных семейств, и наиболее часто используемым семейством является Adenoviridae. Согласно ресурсу clinicaltrials.gov, из 110 ведущихся клинических испытаний онколитических вирусов, на аденовирусы приходится 31% исследований [10]. Аденовирусы обладают несколькими достоинствами, привлекающими исследователей при разработке терапевтических средств. Во-первых, жизненный цикл аденовируса не предполагает

интеграции его генома в человеческие хромосомы, что практически исключает инсерционный мутагенез [11]. Во-вторых, аденовирусы, как правило, слабо патогенны для человека. В-третьих, они способны инфицировать широкий спектр клеток [11]. В-четвертых, они обладают большим геномом, позволяющим встраивать различные, в том числе протяженные трансгены [12]. В-пятых, аденовирусы являются хорошо исследованным объектом, генно-инженерные методы модификации их геномов, а также протоколы наработки рекомбинантных вирусов серотипа 5 хорошо отработаны за последние десятилетия.

При конструировании онколитических вирусов для терапии злокачественных новообразований вирусы модифицируют таким образом, чтобы их репликация происходила преимущественно в опухолевых клетках. Одним из способов аттенуации является встройка опухолеспецифичных промоторов, например, промотора теломеразы человека, для контроля экспрессии жизненно важного для аденовирусов гена Е1А [13]. Также, при разработке лекарственных средств противоопухолевые свойства вирусов усиливаются трансгенами, например, генами различных цитокинов, стимулирующих противоопухолевый иммунный ответ. Одним из наиболее распространенных является ген человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ), способного усиливать врожденный иммунный ответ и стимулировать презентацию опухолевых неоантигенов [14].

Большинство онколитических аденовирусов создано на основе аденовируса серотипа 5 (Ad5), однако широко распространенный предсуществующий иммунитет к аденовирусу этого серотипа ограничивает эффективность разработанных препаратов [15]. Одним из лучших кандидатов на роль «альтернативного» по отношению к Ad5 является аденовирус серотипа 6 (Ad6). Оба серотипа являются родственными и имеют схожие биологические свойства, при этом иммунитет к Ad6 менее распространен в человеческой популяции.

Однако подходы к конструированию рекомбинантных аденовирусов на основе отличных от Ad5 серотипов ещё недостаточно разработаны. Поэтому актуальными задачами являются поиск способов получения онколитических штаммов аденовируса серотипа 6 и создание на их основе противоопухолевых лекарственных средств.

Цель работы: Создание рекомбинантного условно-реплицирующегося варианта аденовируса серотипа 6, содержащего встройки промотора гена теломеразы человека hTERT и гена гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека (ГМ-КСФ), и оценка его противоопухолевого потенциала.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить онколитические свойства аденовируса Ad6 дикого типа в сравнении с наиболее часто применяемым аденовирусом серотипа 5 (Ad5) in vitro и in vivo

2. Разработать новый эффективный способ получения рекомбинантных аденовирусов на основе Ad6 и получить рекомбинантный Ad6 со встройками промотора гена теломеразы человека вместо промотора гена Е1А и гена человеческого ГМ-КСФ в ген Е3 вируса (Ad6-hT-GM).

3. Оценить способность полученного рекомбинантного вируса продуцировать биологически активный трансгенный ГМ-КСФ.

4. Оценить опухолевую селективность полученного рекомбинантного вируса.

5. Оценить противоопухолевую эффективность рекомбинантного вируса.

Научная новизна:

В рамках представленной работы была впервые изучена противоопухолевая активность Ad6 в отношении глиобластомы человека в экспериментах in vitro и на животной модели in vivo. Было показано, что Ad6 обладает онколитическим эффектом, схожим с таковым для Ad5, наиболее широко применяемого для конструирования онколитических аденовирусов. На основе метода рекомбинации in vitro был разработан новый способ получения рекомбинантных штаммов Ad6, позволяющий вносить модификации в гены E1A и E3, наиболее часто модифицируемые при конструировании онколитических аденовирусов. Разработанным способом был впервые получен рекомбинантный аденовирус Ad6-hT-GM, обладающий селективностью в отношении hTERT-положительных клеток, а также экспрессирующий ген человеческого ГМ-КСФ. Показана противоопухолевая активность нового рекомбинантного аденовируса.

Степень внедрения в практику:

Рекомбинантный штамм аденовируса серотипа 6 Ad6-hT-GM защищен патентом RU2753742C1, заявка на изобретение №2020134158, приоритет от 16.10.2020 (в формуле изобретения штамм обозначен как Ad6-hTERT-GMCSF). На основе штамма Ad6-hT-GM сконструирован штамм Ad6/3-hT-GM, содержащий дополнительную модификацию в гене белка файбер, обеспечивающую изменение спектра опухолевых мишеней. Доклинические испытания лекарственного препарата, созданного на основе штамма Ad6/3-hT-GM, проводятся в научных учреждениях ФМБА России. Подана заявка на изобретение на

штамм Ad6/3-hT-GM №2023108841/10(019059), приоритет от 07.04.2023 (в формуле изобретения штамм обозначен как Ad6/3-hTERT-GMCSF).

Личный вклад:

Основная часть экспериментальной работы и анализ результатов выполнены лично автором, либо при его участии.

Исследование онколитической активности вирусов Ad5, Ad6, Ad6-hT-GM in vivo проводилось совместно с д.б.н., зав. лабораторией Кочневой Г.В. и к.б.н, с.н.с. Гражданцевой А.А. (Лаборатория вирусных гепатитов ФГБНУ ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора), к.б.н, с.н.с. Долговой Е.В. и м.н.с. Риттер Г.С. (Лаборатория индуцированных клеточных процессов ИЦиГ СО РАН), к.б.н., н.с. Нуштаевой А.А. и к.б.н., н.с. Троицкой О.С. (Лаборатория биотехнологии и Лаборатория геномного редактирования ИХБФМ СО РАН).

Изучение биологической активности ГМ-КСФ на клетках TF-1 (человек, эритролейкемия) проводилось д.б.н., зав. лабораторией Кочневой Г.В. и к.б.н, с.н.с. Гражданцевой А.А. (Лаборатория вирусных гепатитов ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора).

Положения, выносимые на защиту:

1. Цитотоксическая и противоопухолевая активность аденовируса серотипа 6 (Ad6) в отношении глиобластомы человека не уступает таковой аденовируса серотипа 5 (Ad5)

2. Разработан новый способ получения рекомбинантных штаммов Ad6 при помощи сборки in vitro, позволяющий проводить модификации генов E1A и E3 Ad6.

3. Разработанным способом получен рекомбинантный штамм Ad6-hT-GM со встройкой промотора гена теломеразы человека вместо нативного промотора E1A, а также встройкой гена ГМ-КСФ человека в ген E3 аденовируса.

4. Ad6-hT-GM обладает избирательной цитотоксической активностью в отношении теломераза-положительных опухолевых клеток и обеспечивает наработку биологически активного ГМ-КСФ в инфицированных клетках.

5. Онколитическая активность Ad6-hT-GM в отношении опухолей человека не уступает таковой природного варианта Ad6 на модели иммунодефицитных мышей

Публикации и апробация результатов. По результатам исследования опубликовано 3 статьи в рецензируемых журналах, индексируемых в базах данных Web of Science и Scopus, результаты также были представлены на следующих конференциях: Международный форум «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва 2018), мультиконференция «Биотехнология - медицине будущего» (Новосибирск, 2019), 57-ая Международная Научная Студенческая Конференция (Новосибирск, 2019), 3-я международная конференция „Smart Bio" (Каунас, Литва, 2019), международная конференция молодых ученых: биофизиков, биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов „OpenBio" (Кольцово, 2020), Конференция Американского Сообщества Генной и Клеточной Терапии (Онлайн-формат, США, 2021), международной конференции «Синтетическая биология и биофармацевтика» (Новосибирск, 2022).

Получен патент РФ RU2753742C1 «Рекомбинантный штамм Ad6-hTERT-GMCSF, содержащий встройку промотора теломеразы человека hTERT, а также гена гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора человека, обладающий избирательной цитолитической активностью против теломераза-положительных опухолевых клеток и экспрессирующий активный человеческий гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор», приоритет от 16.10.2020 г.

ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

Вч - вирусная частица

rM-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

дНТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты

ИФА - иммуноферментный анализ

мРНК - матричная РНК

НТО - нетранслируемая область

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

п.н. - пары нуклеотидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

т.п.н. - тысячи пар нуклеотидов

ТЦПД - тканевая цитопатическая доза

ЦПД - цитопатическое действие

ЭДТА - Этилендиаминтетрауксусная кислота

Ad5 - аденовирус серотипа 5

Ad6 - аденовирус серотипа б

Ad6-hT-GM - Ad6 со встройкой промотора hTERT вместо нативного промотора E1A, а

также гена человеческого rM-КСФ

ADP - аденовирусный белок смерти

CAR - коксаки-аденовирусный рецептор

COVID-19 - коронавирусная инфекция 2019

eIF4E - фактор инициации элонгации эукариот 4

FBS - фетальная бычья сыворотка

FDA - Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и

лекарственных средств

GMCSF - rM-КСФ

hTERT - теломераза человека

ITR - инвертированные терминальные повторы

MARCO - рецептор макрофагов с коллагеновой структурой

MOI - множественность инфекции

MLP - основной поздний промотор

PP2A - протеинфосфатаза 2

pTP - претерминальный белок

SARS-COV-2 - коронавирус, связанный с тяжелым острым респираторным синдромом 2 SDS - додецилсульфат натрия TP - терминальный белок

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биология аденовирусов

1.1.1. Классификация аденовирусов

Представители семейства Adenoviridae обнаруживаются во всех классах позвоночных от хрящевых рыб до млекопитающих, включая человека. Семейство Adenoviridae включает 6 родов: Atadenovirus, Aviadenovirus, Ichtadenovirus, Mastadenovirus, Siadenovirus и Testadenovirus. Ранее аденовирусы классифицировались на основании их серологических свойств, т.е. способности нейтрализоваться соответствующей сывороткой, однако благодаря развитию молекулярной биологии стало возможным классифицировать аденовирусы по сходству их геномов. С 2007 года открытие новых аденовирусов осуществляется при помощи геномного анализа, и, по сути, обнаруженные аденовирусы являются генотипами, однако все открытые до этого продолжают именовать серотипами. Поэтому наименьшим таксоном в классификации аденовирусов в английской литературе является тип, что может означать как гено-, так и серотип. Но поскольку в русском языке в таксономии животных существует ранг "тип", который в английском языке обозначается латинским "phylum", в дальнейшем в тексте для упрощения при обозначении типов аденовирусов будет использоваться термин серотип, хотя стоит учитывать, что это не вполне верно. Кроме того, зачастую геномная ДНК открытых генотипов представляет собой рекомбинантный вариант уже известных геномов. Демаркационный критерий для генотипов все еще является дискуссионным вопросом, поэтому из более 100 генотипов аденовирусов, обнаруженных у человека, международный комитет по таксономии вирусов приводит всего 56 (табл.1)

Таблица 1 - Классификация аденовирусов человека [16].

Вид Серотип (генотип)

A 12, 18, 31

B 3, 7, 11, 14, 16, 21, 34, 35, 50, 55

C 1, 2, 5, 6

D 8-10, 13, 15, 17, 19, 20, 22-30, 32, 33, 36-39, 42-49, 51, 53, 54, 56

E 4

F 40, 41

G 52

1.1.2 Строение вириона

Аденовирусы - это безоболочечные вирусы с двуцепочечным линейным ДНК-геномом и икосаэдрическим капсидом (~90 нм) [17]. Геном аденовируса представляет собой линейную двуцепочечную ДНК длиной от 26 до 45 т.п.н. На концах генома располагаются инвертированные терминальные повторы (ITR), которые служат ориджинами репликации. Сигнал упаковки у расположен у левого ITR.

Капсид содержит 13 белков, часть из которых обращена во внешнюю среду, часть обращена вовнутрь, а часть расположена в коровой части вириона (рис. 1). Внешняя часть капсида аденовируса состоит из трех белковых структурных единиц: пентонного основания, файбера и наиболее многочисленного гексона [18].

Основные белки

М ГексонМ

'Í Пентонное основание||] Т Файбер IV Цементирующие белки О Белок VI □ Белок Illa О Белок VIII Д Белок IX Коровые белки

тр Терминальный белок О Белок Mu О Белок VII О Белок V О IVa2

■ Вирусная протеаза

Рисунок 1 - Строение вириона аденовируса [19]. Схематичная диаграмма локализации структурных белков вириона. Основные белки капсида - гексон (II), пентон (III) и файбер (IV).

Капсид стабилизирован цементирующими белками IX, IIIa, VI и VIII. Коровые белки TP, Mu, V, VII и вирусная протеаза связаны с геномной ДНК. IVa2 участвует в упаковке ДНК в капсид и

остается на одной из вершин в зрелом вирионе.

Гексон является самым большим по размеру белком вириона. Частица гексона представляет собой гомотример, 12 таких частиц образуют одну из 20 граней икосаэдра. Таким образом, один капсид содержит 240 тримерных молекул или 720 полипептидных цепей гексона. Тример гексона состоит из объемного основания, направленного внутрь вириона и вытянутого наружу верха. На вершине гексона в каждом мономере расположено 9 гипервариабельных районов (HVR, hypervariable region), определяющих серологические свойства вируса, а также играющих важную роль в его биораспределении при попадании в кровоток [20,21]. Также на вершине, в центре между тремя мономерами

образуется углубление, с которым могут взаимодействовать факторы свертывания при попадании вируса в кровь [22].

На вершинах икосаэдра расположены пентонные основания, состоящие из белкового пентамера. Структуру субъединицы пентона, как и гексона, можно разделить на проксимальное основание и дистальную вершину. Вершина содержит так называемую RGD петлю, ответственную за связывание со вторичными рецепторами аденовирусов -avP3 и avP5 интегринами, а также вариабельную петлю [23,24]. В центре пентамера проходит пора, верхняя часть которой содержит гидрофобное кольцо, связывающее следующий основной белок капсида - файбер [24].

Из пентонного основания в наружное пространство выступает гомотримерный файбер, обеспечивающий связывание вируса с первичным рецептором. Он состоит из хвостового домена (tail), взаимодействующего с пентоном, дистального домена ноб (knob), непосредственно связывающегося с рецептором, и домена шафт (shaft), расположенного между ними. Домен шафт состоит из нескольких повторов, состоящих из двух антипараллельных Р-цепей, соединенных Р-изгибом, длина домена сильно варьирует между серотипами: от 5,5 повторов у Ad35 до 22,5 у Ad12 [25]. Гибкость домена шафт также различается между серотипами и, как и длина, влияет на способность вируса инфицировать клетку [26,27].

Помимо главных капсидных белков, располагающихся на поверхности вириона, капсид также содержит белки, образующие подлежащие структуры. Часть из них стабилизирует наружную поверхность, часть участвует в упаковке ДНК, а часть -обеспечивает поздние стадии проникновения аденовируса [18].

1.1.3 Жизненный цикл аденовируса

Полный жизненный цикл аденовируса схематично изображен на рис. 2. Как и для любого безоболочечного вируса, проникновение вируса начинается с прикрепления вирусной частицы к клеточному рецептору. Аденовирусы для проникновения используют два рецептора, первичный - для повышения локальной концентрации вируса у клеточной мембраны, и вторичный - непосредственно для прохождения через мембрану. Аденовирусы разных серотипов связываются с разными первичными рецепторами, вследствие чего проявляют тропизм к различным тканям [28,29].

Рисунок 2 - Схема жизненного цикла аденовируса [30]. Проникновение аденовируса в клетку обеспечено связыванием с первичными рецепторами, а затем вторичными - ау интегринами, которые интернализуются вместе с вирусной частицей. Внутри эндосомы происходит постепенное разрушение вирусного капсида, в результате чего вирусная ДНК проникает в ядро клетки. Наступает ранняя фаза жизненного цикла, в ходе которой экспрессируются ранние гены, их белковые продукты активируют транскрипцию генов, отвечающих за репликацию вируса. После начала репликации наступает поздняя фаза жизненного цикла, в которую экспрессируются гены капсидных белков. Сборка вириона происходит в ядре, а затем наступает лизис клетки, благодаря которому вирусные частицы распространяются далее.

Для многих аденовирусов, в том числе для наиболее изученного Ad5, первичным рецептором служит CAR (Cocksackie - Adenovirus Receptor), являющийся компонентом плотных контактов. CAR высоко экспрессирован во многих органах, например, в сердце, головном мозге, ткани простаты, печени и легких [31]. Вторичным рецептором для аденовирусов выступают интегрины - белки, участвующие в клеточной адгезии, а также передаче сигналов, связанных с адгезией [32]. После того как файбер образует высокоаффинную связь с CAR, следующим этапом проникновения вируса в клетку является менее энергетически выгодный контакт пентона и интегринов, благодаря чему интегрины кластеризуются и интернализуются по пути клатрин-зависимого эндоцитоза [33]. Постепенное разрушение капсида приводит к высвобождению вирусной ДНК, которая в конечном итоге проникает в ядро через ядерную пору [34].

После попадания вирусной ДНК в ядро начинается экспрессия ранних генов аденовируса, подготавливающих клетку к репликации вирусного генома, а затем поздних, необходимых для сборки вириона. В определенный момент происходит лизис клетки, и собранные вирионы с упакованной в них вирусной ДНК выходят наружу.

В ходе жизненного цикла вируса экспрессия разных генов запускается последовательно, и гены аденовируса делят на два типа по времени начала транскрипции. Если транскрипция начинается до репликации, то ген называют ранним и его обозначают латинской буквой E. Поздние гены экспрессируются после репликации и обозначаются буквой L. Большая часть поздних генов транскрибируется с основного позднего промотора (MLP). Некоторые исследователи также выделяют ген E1A как предранний, поскольку его продукт необходим для транскрипции остальных ранних генов, и промежуточные гены, поскольку их транскрипты появляются на ранних этапах репликации. Схема генома аденовируса с отмеченными транскриптами изображена на рис. 3.

Рисунок 3 - Карта транскриптов аденовируса серотипа 5 [35]. Транскрипты показаны над геномом, если они кодируются на верхней цепи слева направо, и снизу, если кодируются справа налево на нижней цепи. Ранние гены выделены красным, поздние гены - желтым. Квадратные скобки указывают сайты инициации транскрипции. Гены pIX и IVa2 показаны черным, поскольку их классифицируют как промежуточные по времени их экспрессии. MLP транскрипты далее разбиваются на L1-L5 согласно их сайтам полиаденилирования.

Стоит отметить, что существующая классификация генов по времени начала их экспрессии основана на исследованиях, проведенных на постоянно делящихся опухолевых клетках, однако в покоящихся клетках расписание экспрессии вирусных генов может отличаться. Так, экспрессия аденовирусных генов в клетках HeLa начинается спустя 1,5 - 2 часа после инфицирования, а в нормальных клетках только через 6 часов [36].

1.1.3.1 Первый этап транскрипции, экспрессия генов области Е1 генома вируса

Функции белков, кодируемых в области Е1, схематично изображены на рис. 4. Среди белок-кодирующих генов как в здоровых, так и в опухолевых клетках первым появляется транскрипт Е1А, в состав которого входят две мРНК, большая 13S и малая 12S. В гене Е1А закодированы три белковых домена - CR1, СЯ2 и CR3 -высококонсервативных для разных аденовирусных серотипов. Из 12S мРНК при помощи сплайсинга удаляется последовательность, кодирующая CR3, в 13S мРНК эта последовательность сохраняется [37]. Белковые продукты 12S и 13S РНК называются малым и большим белками Е1А, соответственно. Оба белка взаимодействуют с рядом клеточных белков, отвечающих за регуляцию клеточного метаболизма и пролиферации, что приводит к реактивации клеточного цикла в покоящихся клетках. Готовящаяся к делению клетка накапливает дНТФ (дезоксинуклеозидтрифосфаты), которые также необходимы для репликации вирусной ДНК. Кроме того, клеточные транскрипционные факторы, активированные в делящейся клетке, необходимы вирусу для транскрипции собственных генов [38,39]. Хотя белковые продукты гена Е1А способны связываться с ДНК, сами по себе они не участвуют в инициации транскрипции и действуют опосредованно через другие транс-факторы [40]. Домен СЯ2 связывает опухолевые супрессоры белкового семейства ЯВ, которые в покоящихся клетках находятся в комплексе с транскрипционным фактором E2F, и при взаимодействии белков семейства ЯВ с белком Е1А происходит высвобождение E2F. Высвобождение E2F ведет к активации транскрипции, например, гена циклин-зависимой киназы CDK2, необходимой для перехода клетки из G0 в S-фазу, генов гистонов, а также генов белков, участвующих в репликации хромосомной ДНК. Кроме того, белковые продукты Е1А регулируют экспрессию клеточных генов через связывание факторов ремоделирования хроматина, таких как р300 и СВР, с доменом СЯ1. Роль связывания факторов ремоделирования с белковым продуктом гена Е1А в данном процессе не до конца ясна и возможно связана с репрессией протоонкогена туе факторами ремоделирования хроматина, поэтому

ингибирование функции этих факторов белковыми продуктами Е1А также способствует переходу клетки в синтетическую фазу [41].

Рисунок 4 - Действие белков, закодированных в генах района Е1. Белки Е1А высвобождают транскрипционный фактор E2F, связанный с ЯВ. Высвобождение E2F ведет к переходу клетки из G0 фазы в синтетическую фазу. E2F участвует в транскрипции гена ТР53, кодирующего белок р53, который в свою очередь запускает транскрипцию апоптотических генов, в том числе гена ВАК1, кодирующего белок ВАК и гена ВАХ, кодирующего белок ВАХ. Белок Е1В-55К связывает р53, а белок Е1В-19К белки ВАК и ВАХ, таким образом препятствуя апоптозу.

Помимо приведенных выше генов, E2F активирует также транскрипцию опухолевого супрессора р53. Чтобы избежать гибели клетки-хозяина путем апоптоза прежде, чем вирус успеет оставить потомство, аденовирус нарушает защиту клетки при помощи нескольких факторов. Справа от гена Е1А в геноме расположен ген Е1В, который благодаря альтернативному сплайсингу РНК дает два белковых продукта: Е1В-19К и Е1В-55К. Е1В-55К в комплексе с продуктом раннего гена Е4, E4-orf6, а также некоторыми клеточными белками, образует убиквитин-лигазный комплекс, который запускает деградацию различных противовирусных белков, включая р53 [42]. Комплекс Е1В-55К и E4-orf6 также обеспечивает эффективный транспорт вирусной мРНК и

препятствует транспорту клеточной мРНК из ядра в цитоплазму. Известно, что убиквитин-лигазный комплекс взаимодействует с ядерным фактором транспорта РНК

а также ядерным РНК-связывающим белком Е1В-АР5, однако точный механизм контроля транспорта мРНК из ядра в цитоплазму остается невыясненным [42,43]. Второй продукт гена Е1В, Е1В-19К, также препятствует апоптозу, однако не воздействуя напрямую на р53. Под действием апоптотических сигналов белки ВАК и ВАХ образуют пору в мембране митохондрии, таким образом пермеабилизуя ее наружную мембрану, что ведет к высвобождению цитохрома С и других факторов, необходимых для активации каспазы 9 и апоптоза. Е1В-19К связывается с белками ВАК и ВАХ, препятствуя их олигомеризации на мембране [44].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Осипов Иван Дмитриевич, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Kelly E., Russell S.J. History of oncolytic viruses: genesis to genetic engineering. // Mol. Ther. 2007. Vol. 15, № 4. P. 651-659.

2. Asada T. Treatment of human cancer with mumps virus // Cancer. 1974. P. 1907-1928.

3. HOSTER H.A., Jr R.P.Z., HAAM E. VON. Studies in Hodgkin's syndrome; the association of viral hepatitis and Hodgkin's disease; a preliminary report // Cancer res. 1949. P. 473-80.

4. Zhang W.-W. et al. The First Approved Gene Therapy Product for Cancer Ad- p53 (Gendicine): 12 Years in the Clinic // Hum. Gene Ther. 2018. Vol. 29, № 2. P. 160-179.

5. O'Shea C.C. et al. Late viral RNA export, rather than p53 inactivation, determines 0NYX-015 tumor selectivity // Cancer Cell. 2004. Vol. 6, № 6. P. 611-623.

6. Garber K. China approves world's first oncolytic virus therapy for cancer treatment. // J. Natl. Cancer Inst. J Natl Cancer Inst, 2006. Vol. 98, № 5. P. 298-300.

7. Shen Y.C. et al. Effectiveness and safety of talimogene laherparepvec and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor for metastatic melanoma: a systematic review and network meta-analysis of randomized controlled trials // Melanoma Res. Melanoma Res, 2025. Vol. 35, № 1. P. 60-66.

8. Maruyama Y. et al. Regulatory Issues: PMDA - Review of Sakigake Designation Products: Oncolytic Virus Therapy with Delytact Injection (Teserpaturev) for Malignant Glioma // Oncologist. Oncologist, 2023. Vol. 28, № 8. P. 664-670.

9. Lee A. Nadofaragene Firadenovec: First Approval // Drugs. Drugs, 2023. Vol. 83, № 4. P. 353-357.

10. Blanchette P., Teodoro J.G. A Renaissance for Oncolytic Adenoviruses? // Viruses. Viruses, 2023. Vol. 15, № 2.

11. Peter M., Kuhnel F. Oncolytic adenovirus in cancer immunotherapy // Cancers. MDPI AG, 2020. Vol. 12, № 11. P. 1-23.

12. Wan P.K.T., Fernandes R.A., Seymour L.W. Oncolytic viruses and antibodies: are they more successful when delivered separately or when engineered as a single agent? // J. Immunother. cancer. J Immunother Cancer, 2023. Vol. 11, № 8.

13. Zhang H. et al. Construction and application of adenoviral vectors // Mol. Ther. Nucleic Acids. American Society of Gene & Cell Therapy, 2023. Vol. 34.

14. Lazarus H.M. et al. Sargramostim (rhu GM-CSF) as Cancer Therapy (Systematic Review) and An Immunomodulator. A Drug Before Its Time? // Front. Immunol. Front Immunol, 2021. Vol. 12.

15. Mennechet F.J.D. et al. A review of 65 years of human adenovirus seroprevalence // Expert Rev. Vaccines. Taylor & Francis, 2019. Vol. 18, № 6. P. 597-613.

16. ICTV [Electronic resource]. URL: https://talk.ictvonline.org/ (accessed: 23.12.2024).

17. Hearing P. Adenoviridae: The Viruses and Their Replication // Fields Virology: DNA Viruses. 7th ed. / ed. Howley P.M. et al. Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health, 2021. 122-157 p.

18. Reddy V.S., Barry M.A. Structural Organization and Protein-Protein Interactions in Human Adenovirus Capsid // Subcell. Biochem. Springer Science and Business Media B.V., 2021. Vol. 96. P. 503-518.

19. Benevento M. et al. Adenovirus composition, proteolysis, and disassembly studied by in-depth qualitative and quantitative proteomics // J. Biol. Chem. J Biol Chem, 2014. Vol. 289, № 16. P. 11421-11430.

20. Kreppel F., Hagedorn C. Capsid and Genome Modification Strategies to Reduce the Immunogenicity of Adenoviral Vectors // Int. J. Mol. Sci. Int J Mol Sci, 2021. Vol. 22, № 5. P. 1-11.

21. Khare R. et al. Identification of Adenovirus Serotype 5 Hexon Regions That Interact with Scavenger Receptors // J. Virol. American Society for Microbiology, 2012. Vol. 86, № 4. P. 2293-2301.

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

Gallardo J. et al. Adenovirus Structure: What Is New? // Int. J. Mol. Sci. Multidisciplinary

Digital Publishing Institute (MDPI), 2021. Vol. 22, № 10. P. 5240.

Madisch I. et al. Phylogenetic Analysis and Structural Predictions of Human Adenovirus

Penton Proteins as a Basis for Tissue-Specific Adenovirus Vector Design // J. Virol.

American Society for Microbiology, 2007. Vol. 81, № 15. P. 8270-8281.

Zubieta C. et al. The structure of the human adenovirus 2 penton // Mol. Cell. Cell Press,

2005. Vol. 17, № 1. P. 121-135.

Nicklin S.A. et al. The influence of adenovirus fiber structure and function on vector development for gene therapy // Molecular Therapy. Mol Ther, 2005. Vol. 12, № 3. P. 384-393.

Wu E. et al. Flexibility of the Adenovirus Fiber Is Required for Efficient Receptor Interaction // J. Virol. 2003. Vol. 77, № 13. P. 7225-7235.

Shayakhmetov D.M., Lieber A. Dependence of adenovirus infectivity on length of the fiber shaft domain. // J. Virol. 2000. Vol. 74, № 22. P. 10274-10286. Stasiak A.C., Stehle T. Human adenovirus binding to host cell receptors: a structural view // Medical Microbiology and Immunology. Springer, 2020. Vol. 209, № 3. P. 325333.

Baker A.T. et al. Diversity within the adenovirus fiber knob hypervariable loops influences primary receptor interactions // Nat. Commun. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 10, № 1.

Waye M.M.Y., Sing C.W. Anti-Viral Drugs for Human Adenoviruses // Pharmaceuticals. Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI), 2010. Vol. 3, № 10. P. 3343. Tomko R.P., Xu R., Philipson L. HCAR and MCAR: the human and mouse cellular receptors for subgroup C adenoviruses and group B coxsackieviruses // Proc Natl Acad Sci USA. 1997. Vol. 94, № 7. P. 3352-3356.

Schiesser J. V. et al. Integrin avß5 heterodimer is a specific marker of human pancreatic beta cells // Sci. Rep. Sci Rep, 2021. Vol. 11, № 1.

Nemerow G.R., Stewart P.L. Role of av Integrins in Adenovirus Cell Entry and Gene Delivery // Microbiol. Mol. Biol. Rev. American Society for Microbiology, 1999. Vol. 63, № 3. P. 725-734.

Greber U.F., Suomalainen M. Adenovirus entry: Stability, uncoating, and nuclear import // Mol. Microbiol. Mol Microbiol, 2022. Vol. 118, № 4. P. 309-320. Donovan-Banfield I. et al. Deep splicing plasticity of the human adenovirus type 5 transcriptome drives virus evolution // Commun. Biol. Commun Biol, 2020. Vol. 3, № 1. Crisostomo L. et al. Temporal dynamics of adenovirus 5 gene expression in normal human cells // PLoS One. Public Library of Science, 2019. Vol. 14, № 1. Gallimore P.H., Turnell A.S. Adenovirus E1A: remodelling the host cell, a life or death experience // Oncogene. Springer Science and Business Media LLC, 2001. Vol. 20, № 54. P.7824-7835.

Montell C. et al. Complete transformation by adenovirus 2 requires both E1A proteins // Cell. Cell, 1984. Vol. 36, № 4. P. 951-961.

Montell C. et al. Resolving the functions of overlapping viral genes by site-specific mutagenesis at a mRNA splice site // Nature. Nature, 1982. Vol. 295, № 5848. P. 380384.

Avvakumov N. et al. Analysis of DNA binding by the adenovirus type 5 E1A oncoprotein // J. Gen. Virol. Society for General Microbiology, 2002. Vol. 83, № 3. P. 517-524. Sankar N. et al. p300 provides a corepressor function by cooperating with YY1 and HDAC3 to repress c-Myc // Oncogene. Oncogene, 2008. Vol. 27, № 43. P. 5717-5728. Hidalgo P. et al. The biology of the adenovirus E1B 55K protein // FEBS Letters. Wiley Blackwell, 2019. Vol. 593, № 24. P. 3504-3517.

Yatherajam G., Huang W., Flint S.J. Export of adenoviral late mRNA from the nucleus requires the Nxf1/Tap export receptor. // J. Virol. 2011. Vol. 85, № 4. P. 1429-1438.

44

45

46

47

48

49

50

51

52

53

54

55

56

57

58

59

60

61

62

Cuconati A., White E. Viral homologs of BCL-2: Role of apoptosis in the regulation of virus infection // Genes and Development. Genes Dev, 2002. Vol. 16, № 19. P. 24652478.

Weitzman M.D. Functions of the adenovirus E4 proteins and their impact on viral vectors. // Frontiers in bioscience : a journal and virtual library. Front Biosci, 2005. Vol. 10. P. 1106-1117.

Peddibhotla S. et al. E4orf1 protein reduces the need for endogenous insulin // Nutr. Diabetes. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 9, № 1.

Thai M. et al. Adenovirus E4ORF1-induced MYC activation promotes host cell anabolic glucose metabolism and virus replication // Cell Metab. Cell Press, 2014. Vol. 19, № 4. P. 694-701.

Kleinberger T. Biology of the adenovirus E4orf4 protein: from virus infection to cancer cell death // FEBS Letters. Wiley Blackwell, 2020. Vol. 594, № 12. P. 1891-1917. Huang M.M., Hearing P. Adenovirus early region 4 encodes two gene products with redundant effects in lytic infection. // J. Virol. American Society for Microbiology, 1989. Vol. 63, № 6. P. 2605-2615.

Bridge E., Ketner G. Redundant control of adenovirus late gene expression by early region 4. // J. Virol. American Society for Microbiology, 1989. Vol. 63, № 2. P. 631-638. Carvalho T. et al. Targeting of adenovirus E1A and E4-ORF3 proteins to nuclear matrix-associated PML bodies // J. Cell Biol. Rockefeller University Press, 1995. Vol. 131, № 1. P. 45-56.

Cox J.H., Bennink J.R., Yewdell J.W. Retention of adenovirus el9 glycoprotein in the endoplasmic reticulum is essential to its ability to block antigen presentation // J. Exp. Med. J Exp Med, 1991. Vol. 174, № 6. P. 1629-1637.

Andersson M. et al. Impaired intracellular transport of class I MHC antigens as a possible means for adenoviruses to evade immune surveillance // Cell. Cell, 1985. Vol. 43, № 1. P. 215-222.

Bennett E.M. et al. Cutting edge: adenovirus E19 has two mechanisms for affecting class I MHC expression // J Immunol. 1999. P. 5049-5052.

Lion T., Wold W.S.M. Adenoviruses // Fields Virology: DNA Viruses. 7th ed. / ed. Howley P.M. et al. Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health, 2021. 158226 p.

Chin Y.R., Horwitz M.S. Mechanism for removal of tumor necrosis factor receptor 1 from the cell surface by the adenovirus RIDalpha/beta complex. // J. Virol. 2005. Vol. 79, № 21. P. 13606-13617.

Lichtenstein D.L. et al. Adenovirus E3-6.7K Protein Is Required in Conjunction with the E3-RID Protein Complex for the Internalization and Degradation of TRAIL Receptor 2 // J. Virol. American Society for Microbiology, 2004. Vol. 78, № 22. P. 12297-12307. Elsing A., Burgert H.G. The adenovirus E3/10.4K-14.5K proteins down-modulate the apoptosis receptor Fas/Apo-1 by inducing its internalization. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1998. Vol. 95, № 17. P. 10072-10077.

Moise A.R. et al. Adenovirus E3-6.7K Maintains Calcium Homeostasis and Prevents Apoptosis and Arachidonic Acid Release // J. Virol. American Society for Microbiology, 2002. Vol. 76, № 4. P. 1578-1587.

Hawkins L.K., Wold W.S.M. A 12,500 MW protein is coded by region E3 of adenovirus // Virology. Virology, 1992. Vol. 188, № 2. P. 486-494. Tollefson A.E. et al. The 11,600-MW protein encoded by region E3 of adenovirus is expressed early but is greatly amplified at late stages of infection. // J. Virol. 1992. Vol. 66, № 6. P. 3633-3642.

Georgi F., Greber U.F. The Adenovirus Death Protein - a small membrane protein controls cell lysis and disease // FEBS Lett. FEBS Lett, 2020. Vol. 594, № 12. P. 18611878.

63. Swaminathan S., Thimmapaya B. Regulation of adenovirus E2 transcription unit // Current Topics in Microbiology and Immunology. Springer Verlag, 1995. Vol. 199, № III. P.177-194.

64. Saha B., Parks R.J. Human adenovirus type 5 vectors deleted of early region 1 (E1) undergo limited expression of early replicative E2 proteins and DNA replication in non-permissive cells // PLoS One. Public Library of Science, 2017. Vol. 12, № 7.

65. Charman M., Herrmann C., Weitzman M.D. Viral and Cellular Interactions During Adenovirus DNA Replication // FEBS Lett. NIH Public Access, 2019. Vol. 593, № 24. P. 3531.

66. Nevins J.R., Wilson M.C. Regulation of adenovirus-2 gene expression at the level of transcriptional termination and RNA processing // Nature. Nature, 1981. Vol. 290, № 5802. P. 113-118.

67. Zhang Y., Feigenblum D., Schneider R.J. A late adenovirus factor induces eIF-4E dephosphorylation and inhibition of cell protein synthesis. // J. Virol. American Society for Microbiology, 1994. Vol. 68, № 11. P. 7040-7050.

68. Lutz P., Kedinger C. Properties of the adenovirus IVa2 gene product, an effector of late-phase-dependent activation of the major late promoter. // J. Virol. American Society for Microbiology, 1996. Vol. 70, № 3. P. 1396-1405.

69. Yang T.C., Maluf N.K. Self-association of the adenoviral L4-22K protein // Biochemistry. Biochemistry, 2010. Vol. 49, № 45. P. 9830-9838.

70. Ahi Y.S., Mittal S.K. Components of Adenovirus Genome Packaging // Front. Microbiol. Front Microbiol, 2016. Vol. 7, № SEP.

71. de Pablo P.J., San Martin C. Seeing and touching adenovirus: complementary approaches for understanding assembly and disassembly of a complex virion // Curr. Opin. Virol. Curr Opin Virol, 2022. Vol. 52. P. 112-122.

72. Zhu F.C. et al. Immunogenicity and safety of a recombinant adenovirus type-5-vectored COVID-19 vaccine in healthy adults aged 18 years or older: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 2 trial // Lancet. Lancet Publishing Group, 2020. Vol. 396, № 10249. P. 479-488.

73. Voysey M. et al. Safety and efficacy of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine (AZD1222) against SARS-CoV-2: an interim analysis of four randomised controlled trials in Brazil, South Africa, and the UK // Lancet. Lancet Publishing Group, 2021. Vol. 397, № 10269. P. 99-111.

74. Sadoff J. et al. Interim Results of a Phase 1-2a Trial of Ad26.COV2.S Covid-19 Vaccine // N. Engl. J. Med. Massachusetts Medical Society, 2021.

75. Logunov D.Y. et al. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia // Lancet. Elsevier B.V., 2021. Vol. 397, № 10275. P. 671-681.

76. Thacker E.E., Timares L., Matthews Q.L. Strategies to overcome host immunity to adenovirus vectors in vaccine development // Expert Rev. Vaccines. Expert Rev Vaccines, 2009. Vol. 8, № 6. P. 761-777.

77. Dormond E., Perrier M., Kamen A. From the first to the third generation adenoviral vector: What parameters are governing the production yield? // Biotechnology Advances. Biotechnol Adv, 2009. Vol. 27, № 2. P. 133-144.

78. Janssen J.M. et al. Development of an AdEasy-based system to produce first- and second-generation adenoviral vectors with tropism for CAR- or CD46-positive cells // J. Gene Med. J Gene Med, 2013. Vol. 15, № 1. P. 1-11.

79. Engelhardt J.F. et al. Ablation of E2A in recombinant adenoviruses improves transgene persistence and decreases inflammatory response in mouse liver // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. Proc Natl Acad Sci U S A, 1994. Vol. 91, № 13. P. 6196-6200.

80. Armentano D. et al. Effect of the E4 region on the persistence of transgene expression from adenovirus vectors // J. Virol. J Virol, 1997. Vol. 71, № 3. P. 2408-2416.

81

82

83

84

85

86

87

88

89

90

91

92

93

94

95

96

97

98

99

Patel S.R. et al. Safety of direct myocardial administration of an adenovirus vector encoding vascular endothelial growth factor 121 // Hum. Gene Ther. Hum Gene Ther, 1999. Vol. 10, № 8. P. 1331-1348.

Krause A., Worgall S. Delivery of antigens by viral vectors for vaccination // Ther. Deliv. Ther Deliv, 2011. Vol. 2, № 1. P. 51-70.

Li Y. et al. Key points of basic theories and clinical practice in rAd-p53 ( Gendicine TM) gene therapy for solid malignant tumors // Expert Opin. Biol. Ther. Expert Opin Biol Ther, 2015. Vol. 15, № 3. P. 437-454.

Zhang Y. et al. Oncolytic virotherapy reverses the immunosuppressive tumor microenvironment and its potential in combination with immunotherapy // Cancer Cell Int. Cancer Cell Int, 2021. Vol. 21, № 1.

Lynch J.P., Kajon A.E. Adenovirus: Epidemiology, Global Spread of Novel Serotypes, and Advances in Treatment and Prevention // Semin. Respir. Crit. Care Med. Semin Respir Crit Care Med, 2016. Vol. 37, № 4. P. 586-602.

Ying B. et al. INGN 007, an oncolytic adenovirus vector, replicates in Syrian hamsters but not mice: comparison of biodistribution studies // Cancer Gene Ther. Cancer Gene Ther, 2009. Vol. 16, № 8. P. 625-637.

Wood M. et al. Biodistribution of an adenoviral vector carrying the luciferase reporter gene following intravesical or intravenous administration to a mouse // Cancer Gene Ther. Cancer Gene Ther, 1999. Vol. 6, № 4. P. 367-372.

Liu Q. et al. Biodistribution and residence time of adenovector serotype 5 in normal and immunodeficient mice and rats detected with bioluminescent imaging // Sci. Rep. Sci Rep, 2017. Vol. 7, № 1.

Cichon G. et al. Intravenous administration of recombinant adenoviruses causes thrombocytopenia, anemia and erythroblastosis in rabbits - PubMed // J Gene Med. 1999. Vol. 1, № 5. P. 360-371.

Ni S. et al. Evaluation of biodistribution and safety of adenovirus vectors containing group B fibers after intravenous injection into baboons // Hum. Gene Ther. Hum Gene Ther, 2005. Vol. 16, № 6. P. 664-677.

Stone D. et al. Comparison of adenoviruses from species B, C, E, and F after intravenous delivery // Mol. Ther. Mol Ther, 2007. Vol. 15, № 12. P. 2146-2153. Allen R.J., Byrnes A.P. Interaction of adenovirus with antibodies, complement, and coagulation factors // FEBS Letters. Wiley Blackwell, 2019. Vol. 593, № 24. P. 34493460.

SN W. et al. Adenovirus serotype 5 hexon mediates liver gene transfer // Cell. Cell, 2008. Vol. 132, № 3. P. 397-409.

Bradshaw A.C. et al. Requirements for receptor engagement during infection by adenovirus complexed with blood coagulation factor X // PLoS Pathog. 2010. Vol. 6, № 10.

Tian J., Xu Z., Byrnes A.P. Serotype-Specific Binding of Prothrombin to Adenovirus Vectors // ASGCT19 Annual Meeting. Washington DC, 2019. P. 195-196. Parker A.L. et al. Multiple vitamin K-dependent coagulation zymogens promote adenovirus-mediated gene delivery to hepatocytes // Blood. 2006. Vol. 108, № 8. P. 25542561.

Ehrenstein M.R., Notley C.A. The importance of natural IgM: scavenger, protector and regulator // Nat. Rev. Immunol. Nat Rev Immunol, 2010. Vol. 10, № 11. P. 778-786. Xu Z. et al. Clearance of Adenovirus by Kupffer Cells Is Mediated by Scavenger Receptors, Natural Antibodies, and Complement // J. Virol. 2008. Vol. 82, № 23. P. 11705-11713.

Qiu Q. et al. Impact of natural IgM concentration on gene therapy with adenovirus type 5 vectors. // J. Virol. 2015. Vol. 89, № 6. P. 3412-3416.

Haisma H.J. et al. Polyinosinic acid enhances delivery of adenovirus vectors in vivo by

101

102

103

104

105

106

107

108

109

110

111

112

113

114

115

116

117

118

119

120

preventing sequestration in liver macrophages. // J. Gen. Virol. 2008. Vol. 89, № Pt 5. P. 1097-1105.

Haisma H.J. et al. Scavenger receptor A: A new route for adenovirus 5 // Mol. Pharm. 2009. Vol. 6, № 2. P. 366-374.

Manickan E. et al. Rapid Kupffer cell death after intravenous injection of adenovirus vectors // Mol. Ther. Mol Ther, 2006. Vol. 13, № 1. P. 108-117. Di Paolo N.C., van Rooijen N., Shayakhmetov D.M. Redundant and synergistic mechanisms control the sequestration of blood-born adenovirus in the liver. // Mol. Ther. 2009. Vol. 17, № 4. P. 675-684.

Ganesan L.P. et al. Rapid and efficient clearance of blood-borne virus by liver sinusoidal endothelium. // PLoS Pathog. 2011. Vol. 7, № 9. P. e1002281.

Craig M.L., Bankovich A.J., Taylor R.P. Visualization of the transfer reaction: Tracking immune complexes from erythrocyte complement receptor 1 to macrophages // Clin. Immunol. Clin Immunol, 2002. Vol. 105, № 1. P. 36-47.

Brouwer A., Knook D.L. The reticuloendothelial system and aging: A review // Mech. Ageing Dev. Mech Ageing Dev, 1983. Vol. 21, № 3-4. P. 205-228. Shetty S., Lalor P.F., Adams D.H. Liver sinusoidal endothelial cells — gatekeepers of hepatic immunity // Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. Nature Publishing Group, 2018. Vol. 15, № 9. P. 555-567.

Schnell M.A. et al. Activation of innate immunity in nonhuman primates following intraportal administration of adenoviral vectors // Mol. Ther. Academic Press Inc., 2001. Vol. 3, № 5. P. 708-722.

Lichtenstein D.L., Wold W.S. Experimental infections of humans with wild-type adenoviruses and with replication-competent adenovirus vectors: replication, safety, and transmission // Cancer Gene Ther. 2004. Vol. 11. P. 819-829.

Di Paolo N.C. et al. Virus Binding to a Plasma Membrane Receptor Triggers Interleukin-1a-Mediated Proinflammatory Macrophage Response In Vivo // Immunity. Immunity, 2009. Vol. 31, № 1. P. 110-121.

Koodie L. et al. Rodents versus pig model for assessing the performance of serotype chimeric Ad5/3 oncolytic adenoviruses // Cancers (Basel). 2019. Vol. 11, № 2. Sugiyama K. et al. Is pathological response an adequate surrogate marker for survival in neoadjuvant therapy with immune checkpoint inhibitors? // ESMO open. ESMO Open, 2025. Vol. 10, № 2. P. 104122.

Khalifeh M., Salman H. Engineering Resilient CAR T Cells for Immunosuppressive Environment // Mol. Ther. Mol Ther, 2025.

Wang C. et al. The efficacy and safety assessment of oncolytic virotherapies in the treatment of advanced melanoma: a systematic review and meta-analysis // Virol. J. Virol J, 2023. Vol. 20, № 1.

Bischoff J.R. et al. An adenovirus mutant that replicates selectively in p53-deficient human tumor cells // Science. Science, 1996. Vol. 274, № 5286. P. 373-376. Ries S., Korn W.M. 0NYX-015: Mechanisms of action and clinical potential of a replication-selective adenovirus // Br. J. Cancer. Br J Cancer, 2002. Vol. 86, № 1. P. 5-11. Zhou L. et al. Revisiting cancer hallmarks: insights from the interplay between oxidative stress and non-coding RNAs // Mol. Biomed. Mol Biomed, 2020. Vol. 1, № 1. Matsubara S. et al. A conditional replication-competent adenoviral vector, Ad-OC-E1a, to cotarget prostate cancer and bone stroma in an experimental model of androgen-independent prostate cancer bone metastasis - PubMed // Cancer Res. 2001. Vol. 61, № 16. P. 6012-6019.

Rodriguez R. et al. Prostate attenuated replication competent adenovirus (ARCA) CN706: a selective cytotoxic for prostate-specific antigen-positive prostate cancer cells -PubMed // Cancer Res. 1997. Vol. 57, № 13. P. 2559-2563.

DeWeese T.L. et al. A phase I trial of CV706, a replication-competent, PSA selective

121

122

123

124

125

126

127

128

129

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

oncolytic adenovirus, for the treatment of locally recurrent prostate cancer following radiation therapy - PubMed // Cancer Res. 2001. Vol. 61, № 20. P. 7464-7472. Leja J. et al. A novel chromogranin-A promoter-driven oncolytic adenovirus for midgut carcinoid therapy // Clin. Cancer Res. Clin Cancer Res, 2007. Vol. 13, № 8. P. 24552462.

Armstrong L. et al. Delivery of interferon alpha using a novel Cox2-controlled adenovirus for pancreatic cancer therapy. // Surgery. 2012. Vol. 152, № 1. P. 114-122. Kawashima T. et al. Telomerase-specific replication-selective virotherapy for human cancer // Clin. Cancer Res. Clin Cancer Res, 2004. Vol. 10, № 1 Pt 1. P. 285-292. Hemminki O. et al. Ad3-hTERT-E1A, a fully serotype 3 oncolytic adenovirus, in patients with chemotherapy refractory cancer // Mol. Ther. 2012. Vol. 20, № 9. P. 1821-1830. Greider C.W., Blackburn E.H. Identification of a specific telomere terminal transferase activity in Tetrahymena extracts // Cell. Cell, 1985. Vol. 43, № 2 Pt 1. P. 405-413. Sekaran V.G., Soares J., Jarstfer M.B. Structures of telomerase subunits provide functional insights // Biochim. Biophys. Acta. Biochim Biophys Acta, 2010. Vol. 1804, № 5. P. 1190-1201.

Collins K., Mitchell J.R. Telomerase in the human organism // Oncogene. Oncogene, 2002. Vol. 21, № 4. P. 564-579.

Kim N.W. et al. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer // Science (80-. ). Science, 1994. Vol. 266, № 5193. P. 2011-2015. Liu T., Yuan X., Xu D. Cancer-Specific Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Promoter Mutations: Biological and Clinical Implications // Genes (Basel). Genes (Basel), 2016. Vol. 7, № 7.

Kyo S., Inoue M. Complex regulatory mechanisms of telomerase activity in normal and cancer cells: how can we apply them for cancer therapy? // Oncogene. Oncogene, 2002. Vol. 21, № 4. P. 688-697.

Wu K.J. et al. Direct activation of TERT transcription by c-MYC // Nat. Genet. Nat Genet, 1999. Vol. 21, № 2. P. 220-224.

Miller D.M. et al. c-Myc and cancer metabolism // Clin. Cancer Res. Clin Cancer Res, 2012. Vol. 18, № 20. P. 5546-5553.

Nair S.K., Burley S.K. X-ray structures of Myc-Max and Mad-Max recognizing DNA: Molecular bases of regulation by proto-oncogenic transcription factors // Cell. Elsevier B.V., 2003. Vol. 112, № 2. P. 193-205.

Schreiber-Agus N., DePinho R.A. Repression by the Mad(Mxi1)-Sin3 complex // BioEssays. 1998. Vol. 20, № 10. P. 808-818.

Kyo S. et al. Sp1 cooperates with c-Myc to activate transcription of the human telomerase reverse transcriptase gene (hTERT) // Nucleic Acids Res. Nucleic Acids Res, 2000. Vol. 28, № 3. P. 669-677.

Beishline K., Azizkhan-Clifford J. Sp1 and the "hallmarks of cancer" // FEBS J. FEBS J, 2015. Vol. 282, № 2. P. 224-258.

Xu D. et al. Downregulation of telomerase reverse transcriptase mRNA expression by wild type p53 in human tumor cells // Oncogene. Oncogene, 2000. Vol. 19, № 45. P. 5123-5133.

Malhotra S. et al. A Novel Long Non-Coding RNA in the hTERT Promoter Region Regulates hTERT Expression // Non-Coding RNA. Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI), 2018. Vol. 4, № 1.

Ott P. et al. Differential DNA Methylation of THOR and hTAPAS in the Regulation of hTERT and the Diagnosis of Cancer // Cancers (Basel). Cancers (Basel), 2022. Vol. 14, № 18.

Kandouz M. Cell Death, by Any Other Name... // Cells. Cells, 2024. Vol. 13, № 4. Bakhtiar Ul Islam S.M. et al. Engineering and Characterization of Oncolytic Vaccinia Virus Expressing Truncated Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase // Cancers (Basel).

142

143

144

145

146

147

148

149

150

151

152

153

154

155

156

157

158

159

160

Cancers (Basel), 2020. Vol. 12, № 1.

Vosough P. et al. Escherichia coli cytosine deaminase: Structural and biotechnological aspects // Biotechnol. Appl. Biochem. Biotechnol Appl Biochem, 2024. Vol. 71, № 1. P. 5-16.

Portulano C., Paroder-Belenitsky M., Carrasco N. The Na+/I- symporter (NIS): mechanism and medical impact // Endocr. Rev. Endocr Rev, 2014. Vol. 35, № 1. P. 106149.

Robertson M.G. et al. Cancer imaging and therapy utilizing a novel NIS-expressing adenovirus: The role of adenovirus death protein deletion // Mol. Ther. - Oncolytics. Cell Press, 2021. Vol. 20. P. 659-668.

Zolaly M.A. et al. The Clinical Advances of Oncolytic Viruses in Cancer Immunotherapy // Cureus. Cureus, 2023. Vol. 15, № 6.

Eckert E.C. et al. Generation of a Tumor-Specific Chemokine Gradient Using Oncolytic Vesicular Stomatitis Virus Encoding CXCL9 // Mol. Ther. oncolytics. Mol Ther Oncolytics, 2019. Vol. 16. P. 63-74.

Carew J.S. et al. Oncolytic reovirus inhibits angiogenesis through induction of CXCL10/IP-10 and abrogation of HIF activity in soft tissue sarcomas // Oncotarget. Oncotarget, 2017. Vol. 8, № 49. P. 86769-86783.

Santos J.M. et al. Oncolytic adenovirus shapes the ovarian tumor microenvironment for potent tumor-infiltrating lymphocyte tumor reactivity // J. Immunother. cancer. J Immunother Cancer, 2020. Vol. 8, № 1.

Durrechou Q. et al. Management of Immune Checkpoint Inhibitor Toxicities // Cancer Manag. Res. Dove Press, 2020. Vol. 12. P. 9139.

Hwang J.K., Hong J., Yun C.O. Oncolytic Viruses and Immune Checkpoint Inhibitors: Preclinical Developments to Clinical Trials // Int. J. Mol. Sci. Int J Mol Sci, 2020. Vol. 21, № 22. P. 1-26.

Lovatt C., Parker A.L. Oncolytic Viruses and Immune Checkpoint Inhibitors: The "Hot" New Power Couple // Cancers (Basel). Cancers (Basel), 2023. Vol. 15, № 16. Fisher K., Hazini A., Seymour L.W. Tackling HLA Deficiencies Head on with Oncolytic Viruses // Cancers (Basel). Cancers (Basel), 2021. Vol. 13, № 4. P. 1-14. Chaurasiya S., Fong Y., Warner S.G. Optimizing Oncolytic Viral Design to Enhance Antitumor Efficacy: Progress and Challenges // Cancers (Basel). Cancers (Basel), 2020. Vol. 12, № 6. P. 1-20.

Wang X. et al. Oncolytic virotherapy evolved into the fourth generation as tumor immunotherapy // J. Transl. Med. J Transl Med, 2023. Vol. 21, № 1. Chen Z. et al. A Neoantigen-Based Peptide Vaccine for Patients With Advanced Pancreatic Cancer Refractory to Standard Treatment // Front. Immunol. Front Immunol, 2021. Vol. 12.

Brunsvig P.F. et al. Long-Term Outcomes of a Phase I Study With UV1, a Second Generation Telomerase Based Vaccine, in Patients With Advanced Non-Small Cell Lung Cancer // Front. Immunol. Front Immunol, 2020. Vol. 11.

Dranoff G. et al. Vaccination with irradiated tumor cells engineered to secrete murine granulocyte-macrophage colony-stimulating factor stimulates potent, specific, and long-lasting anti-tumor immunity // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. Proc Natl Acad Sci U S A, 1993. Vol. 90, № 8. P. 3539-3543.

Pinder E.M. et al. Randomised controlled trial of GM-CSF in critically ill patients with impaired neutrophil phagocytosis // Thorax. Thorax, 2018. Vol. 73, № 10. P. 918-925. Joost Van Pelt L. et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) ameliorates chemotherapy-induced neutropenia in children with solid tumors // Pediatr. Hematol. Oncol. Pediatr Hematol Oncol, 1997. Vol. 14, № 6. P. 539-545. Liu J. et al. New insights into M1/M2 macrophages: key modulators in cancer progression // Cancer Cell Int. Cancer Cell Int, 2021. Vol. 21, № 1.

161

162

163

164

165

166

167

168

169

170

171

172

173

174

175

176

177

178

Lescoat A. et al. Distinct Properties of Human M-CSF and GM-CSF Monocyte-Derived Macrophages to Simulate Pathological Lung Conditions In Vitro: Application to Systemic and Inflammatory Disorders with Pulmonary Involvement // Int. J. Mol. Sci. Int J Mol Sci, 2018. Vol. 19, № 3.

Perry S.E. et al. HLA-DR regulation and the influence of GM-CSF on transcription, surface expression and shedding // Int. J. Med. Sci. Int J Med Sci, 2004. Vol. 1, № 3. P. 126-136.

Larsen C.P. et al. Regulation of immunostimulatory function and costimulatory molecule (B7-1 and B7-2) expression on murine dendritic cells - PubMed // J Immunol. 1994. Vol. 152, № 11. P. 5208-5219.

Stumbles P.A. et al. Resting respiratory tract dendritic cells preferentially stimulate T helper cell type 2 (Th2) responses and require obligatory cytokine signals for induction of Th1 immunity // J. Exp. Med. J Exp Med, 1998. Vol. 188, № 11. P. 2019-2031. Khameneh H.J. et al. GM-CSF signalling boosts dramatically IL-1 production // PLoS One. PLoS One, 2011. Vol. 6, № 7.

Xiang Z., Ertl H.C.J. Manipulation of the immune response to a plasmid-encoded viral antigen by coinoculation with plasmids expressing cytokines // Immunity. Immunity, 1995. Vol. 2, № 2. P. 129-135.

Lee S.W., Cho J.H., Sung Y.C. Optimal induction of hepatitis C virus envelope-specific immunity by bicistronic plasmid DNA inoculation with the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor gene // J. Virol. J Virol, 1998. Vol. 72, № 10. P. 8430-8436. Watanabe M. et al. Antibody dependent cellular phagocytosis (ADCP) and antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC) of breast cancer cells mediated by bispecific antibody, MDX-210 // Breast Cancer Res. Treat. Breast Cancer Res Treat, 1999. Vol. 53, № 3. P. 199-207.

Liang M. Oncorine, the World First Oncolytic Virus Medicine and its Update in China // Curr. Cancer Drug Targets. 2018. Vol. 18, № 2. P. 171-176.

Larson C. et al. Going viral: a review of replication-selective oncolytic adenoviruses. // Oncotarget. 2015. Vol. 6, № 24. P. 19976-19989.

Berger J.M. et al. Malignant ascites: Current therapy options and treatment prospects //

Cancer Treat. Rev. W.B. Saunders Ltd, 2023. Vol. 121. P. 102646.

Zhang Y. et al. Intraperitoneal oncolytic virotherapy for patients with malignant ascites:

Characterization of clinical efficacy and antitumor immune response // Mol. Ther.

oncolytics. Mol Ther Oncolytics, 2022. Vol. 25. P. 31-42.

FDA Grants Fast Track, Breakthrough Therapy Designations to Cretostimogene

Grenadenorepvec for NMIBC [Electronic resource]. URL:

https://www.onclive.com/view/fda-grants-fast-track-breakthrough-therapy-designations-to-cretostimogene-grenadenorepvec-for-nmibc (accessed: 24.03.2024). Phase 2 Data Show Clinical Activity With CG0070 Plus Pembrolizumab in NMIBC [Electronic resource]. URL: https://www.onclive.com/view/phase-2-data-show-clinical-activity-with-cg0070-plus-pembrolizumab-in-nmibc (accessed: 24.03.2024). Dehari H. et al. Enhanced antitumor effect of RGD fiber-modified adenovirus for gene therapy of oral cancer // Cancer Gene Ther. Cancer Gene Ther, 2003. Vol. 10, № 1. P. 7585.

Lang F.F. et al. Phase I study of DNX-2401 (delta-24-RGD) oncolytic adenovirus: replication and immunotherapeutic effects in recurrent malignant glioma // J. Clin. Oncol. 2018. Vol. 36, № 14. P. 1419-1427.

Nassiri F. et al. Oncolytic DNX-2401 virotherapy plus pembrolizumab in recurrent glioblastoma: a phase 1/2 trial // Nat. Med. Nat Med, 2023. Vol. 29, № 6. P. 1370-1378. Fujiwara T., Urata Y., Tanaka N. Telomerase-specific oncolytic virotherapy for human cancer with the hTERT promoter // Curr. Cancer Drug Targets. Curr Cancer Drug Targets, 2007. Vol. 7, № 2. P. 191-201.

179. Shah M.A. et al. Phase II study of telomelysin (OBP-301) in combination with pembrolizumab in gastroesophageal (GEA) adenocarcinoma. // J. Clin. Oncol. American Society of Clinical Oncology (ASCO), 2023. Vol. 41, № 16_suppl. P. 4052-4052.

180. Ranki T. et al. Phase I study with ONCOS-102 for the treatment of solid tumors - an evaluation of clinical response and exploratory analyses of immune markers // J. Immunother. Cancer. BioMed Central Ltd., 2016. Vol. 4, № 1.

181. Shoushtari A.N. et al. Pilot Study of 0NC0S-102 and Pembrolizumab: Remodeling of the Tumor Microenvironment and Clinical Outcomes in Anti-PD-1-Resistant Advanced Melanoma // Clin. Cancer Res. Clin Cancer Res, 2023. Vol. 29, № 1. P. 100-109.

182. Eriksson E. et al. Shaping the Tumor Stroma and Sparking Immune Activation by CD40 and 4-1BB Signaling Induced by an Armed Oncolytic Virus // Clin. Cancer Res. Clin Cancer Res, 2017. Vol. 23, № 19. P. 5846-5857.

183. Musher B.L. et al. LOAd703, an oncolytic virus-based immunostimulatory gene therapy, combined with chemotherapy for unresectable or metastatic pancreatic cancer (LOKON001): results from arm 1 of a non-randomised, single-centre, phase 1/2 study // Lancet Oncol. Elsevier Ltd, 2024. Vol. 25, № 4. P. 488-500.

184. Kuhn I. et al. Directed evolution generates a novel oncolytic virus for the treatment of colon cancer // PLoS One. 2008/06/19. 2008. Vol. 3, № 6. P. e2409.

185. Machiels J.P. et al. A phase 1 dose escalation study of the oncolytic adenovirus enadenotucirev, administered intravenously to patients with epithelial solid tumors (EVOLVE) // J. Immunother. cancer. J Immunother Cancer, 2019. Vol. 7, № 1.

186. Moreno V. et al. Safety and efficacy of the tumor-selective adenovirus enadenotucirev with or without paclitaxel in platinum-resistant ovarian cancer: a phase 1 clinical trial // J. Immunother. cancer. J Immunother Cancer, 2021. Vol. 9, № 12.

187. Fakih M. et al. Safety and efficacy of the tumor-selective adenovirus enadenotucirev, in combination with nivolumab, in patients with advanced/metastatic epithelial cancer: a phase I clinical trial (SPICE) // J. Immunother. cancer. J Immunother Cancer, 2023. Vol. 11, № 4.

188. Salomon R., Dahan R. Next Generation CD40 Agonistic Antibodies for Cancer Immunotherapy // Front. Immunol. Front Immunol, 2022. Vol. 13.

189. Our Pipeline | Akamis Bio | Tumor Gene Therapy [Electronic resource]. URL: https://www.akamisbio.com/pipeline (accessed: 24.03.2024).

190. Wohlfart C. Neutralization of adenoviruses: kinetics, stoichiometry, and mechanisms. // J. Virol. American Society for Microbiology, 1988. Vol. 62, № 7. P. 2321-2328.

191. McEwan W.A. et al. Regulation of Virus Neutralization and the Persistent Fraction by TRIM21 // J. Virol. American Society for Microbiology, 2012. Vol. 86, № 16. P. 84828491.

192. Vlachaki M.T. et al. Impact of preimmunization on adenoviral vector expression and toxicity in a subcutaneous mouse cancer model // Mol. Ther. Mol Ther, 2002. Vol. 6, № 3. P. 342-348.

193. Capone S. et al. A Novel Adenovirus Type 6 (Ad6)-Based Hepatitis C Virus Vector That Overcomes Preexisting Anti-Ad5 Immunity and Induces Potent and Broad Cellular Immune Responses in Rhesus Macaques // J Virol. 2006. Vol. 80, № 4. P. 1688-1699.

194. Aurisicchio L. et al. Safety, tolerability and immunogenicity of V934/V935 hTERT vaccination in cancer patients with selected solid tumors: a phase I study. // J. Transl. Med. NLM (Medline), 2020. Vol. 18, № 1. P. 39.

195. Diaz-montero C.M. et al. Phase 1 studies of the safety and immunogenicity of electroporated HER2/CEA DNA vaccine followed by adenoviral boost immunization in patients with solid tumors // J. Transl. Med. 2013. Vol. 11, № 62.

196. Barnes E. et al. Novel adenovirus-based vaccines induce broad and sustained T cell responses to HCV in man // Sci. Transl. Med. Sci Transl Med, 2012. Vol. 4, № 115.

197. Dharmapuri S. et al. Coadministration of telomerase genetic vaccine and a novel TLR9

198

199

200

201

202

203

204

205

206

207

208

209

210

211

212

213

214

215

216

agonist in nonhuman primates // Mol. Ther. Nature Publishing Group, 2009. Vol. 17, № 10. P. 1804-1813.

Weaver E.A. et al. Protection against mucosal SHIV challenge by peptide and helper-dependent adenovirus vaccines // Viruses. 2009. Vol. 1, № 3. P. 920-938. Herrlinger U. et al. Pre-existing herpes simplex virus 1 (HSV-1) immunity decreases, but does not abolish, gene transfer to experimental brain tumors by a HSV-1 vector // Gene Ther. Gene Ther, 1998. Vol. 5, № 6. P. 809-819.

Adhikary A.K. et al. Heterogeneity of the fibre sequence in subgenus C adenoviruses // J. Clin. Pathol. 2004. Vol. 57, № 6. P. 612-617.

Weaver E.A. et al. Characterization of species C human adenovirus serotype 6 (Ad6). // Virology. 2011. Vol. 412, № 1. P. 19-27.

Khare R. et al. Generation of a Kupffer cell-evading adenovirus for systemic and liver-directed gene transfer // Mol Ther. 2011. Vol. 19, № 7. P. 1254-1262. Tollefson A.E. et al. Pathology in Permissive Syrian Hamsters after Infection with Species C Human Adenovirus (HAdV-C) Is the Result of Virus Replication: HAdV-C6 Replicates More and Causes More Pathology than HAdV-C5 // J. Virol. American Society for Microbiology, 2017. Vol. 91, № 10.

Piccolo P. et al. SR-A and SREC-I are Kupffer and endothelial cell receptors for helper-dependent adenoviral vectors. // Mol. Ther. Nature Publishing Group, 2013. Vol. 21, № 4. P. 767-774.

Khare R. et al. Circulating Antibodies and Macrophages as Modulators of Adenovirus

Pharmacology // J. Virol. 2013. Vol. 87, № 7. P. 3678-3686.

Harro C. et al. Safety and immunogenicity of the Merck adenovirus serotype 5

(MRKAd5) and MRKAd6 human immunodeficiency virus type 1 trigene vaccines alone

and in combination in healthy adults // Clin. Vaccine Immunol. 2009. Vol. 16, № 9. P.

1285-1292.

Zhang Z. et al. MicroRNA Regulation of Oncolytic Adenovirus 6 for Selective Treatment of Castration-Resistant Prostate Cancer // Mol. Cancer Ther. 2012. Vol. 11, № 11. P. 2410-2418.

Shashkova E. V, May S.M., Barry M.A. Characterization of human adenovirus serotypes 5, 6, 11, and 35 as anticancer agents. // Virology. 2009. Vol. 394, № 2. P. 311-320. Chen C.Y. et al. Mining the adenovirus virome for oncolytics against multiple solid tumor types // Cancer Gene Ther. 2011. Vol. 18, № 10. P. 744-750.

Nguyen T. V. et al. Evaluation of polymer shielding for adenovirus serotype 6 (Ad6) for systemic virotherapy against human prostate cancers // Mol. Ther. - Oncolytics. Official journal of the American Society of Gene & Cell Therapy, 2016. Vol. 3, № June 2015. P. 15021.

Nguyen T. V et al. Oncolytic adenovirus Ad657 for systemic virotherapy against prostate cancer. // Oncolytic virotherapy. 2018. Vol. 7. P. 43-51.

Doerner J. et al. Novel Group C Oncolytic Adenoviruses Carrying a miRNA Inhibitor Demonstrate Enhanced Oncolytic Activity In Vitro and In Vivo // Mol. Cancer Ther. American Association for Cancer Research, 2022. Vol. 21, № 3. P. 460. Rauschhuber C. et al. RNAi suppressor P19 can be broadly exploited for enhanced adenovirus replication and microRNA knockdown experiments // Sci. Rep. Sci Rep, 2013. Vol. 3.

Mailly L. et al. A novel adenovirus vector for easy cloning in the E3 region downstream of the CMV promoter // Virol. J. Virol J, 2008. Vol. 5.

Ono H.A. et al. Noninvasive visualization of adenovirus replication with a fluorescent reporter in the E3 region // Cancer Res. Cancer Res, 2005. Vol. 65, № 22. P. 1015410158.

Kanerva A. et al. Gene transfer to ovarian cancer versus normal tissues with fiber-modified adenoviruses // Mol. Ther. Academic Press Inc., 2002. Vol. 5, № 6. P. 695-704.

217

218

219

220

221

222

223

224

225

226

227

228

229

230

231

232

233

234

235

236

Bortolanza S. et al. Deletion of the E3-6.7K/gp19K region reduces the persistence of wildtype adenovirus in a permissive tumor model in Syrian hamsters // Cancer Gene Ther. Nature Publishing Group, 2009. Vol. 16, № 9. P. 703-712. Seth P. et al. Development of oncolytic adenovirus armed with a fusion of soluble transforming growth factor-beta receptor II and human immunoglobulin Fc for breast cancer therapy // Hum. Gene Ther. Hum Gene Ther, 2006. Vol. 17, № 11. P. 1152-1160. Ono R. et al. Efficient antitumor effects of a novel oncolytic adenovirus fully composed of species B adenovirus serotype 35 // Mol. Ther. oncolytics. Mol Ther Oncolytics, 2021. Vol. 20. P. 399-409.

Bullard B.L., Corder B.N., Weaver E.A. Species D Adenoviruses as Oncolytic Viral Vectors // Viruses. Viruses, 2020. Vol. 12, № 12.

Ying B. et al. Non-ad5 adenoviral vectors and methods and uses related thereto // Cancer Gene Ther. 2010. Vol. 16, № 8. P. 625-637.

Muck-Hausl M. et al. Ad 2.0: a novel recombineering platform for high-throughput generation of tailored adenoviruses // Nucleic Acids Res. Nucleic Acids Res, 2015. Vol. 43, № 8.

Subramanian T., Vijayalingam S., Chinnadurai G. Genetic identification of adenovirus type 5 genes that influence viral spread. // J. Virol. 2006. Vol. 80, № 4. P. 2000-2012. Tollefson A.E. et al. The E3-11.6-kDa adenovirus death protein (ADP) is required for efficient cell death: characterization of cells infected with adp mutants // Virology. Virology, 1996. Vol. 220, № 1. P. 152-162.

Doronin K. et al. Overexpression of the ADP (E3-11.6K) protein increases cell lysis and spread of adenovirus // Virology. 2003. Vol. 305, № 2. P. 378-387. He T.C. et al. A simplified system for generating recombinant adenoviruses. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. National Academy of Sciences, 1998. Vol. 95, № 5. P. 2509-2514. Suzuki K. et al. The presence of the adenovirus E3 region improves the oncolytic potency of conditionally replicative adenoviruses // Clin. Cancer Res. 2002. Vol. 8, № 11. P. 3348-3359.

Armstrong L. et al. Generation of a Novel, Cox2-Targeted, Interferon-Expressing, Conditionally-Replicative Adenovirus for Pancreatic Cancer Therapy // Am. J. Surg. NIH Public Access, 2012. Vol. 204, № 5. P. 741.

Davydova J. et al. In vivo bioimaging tracks conditionally replicative adenoviral replication and provides an early indication of viral antitumor efficacy // Cancer Sci. Cancer Sci, 2010. Vol. 101, № 2. P. 474-481.

Wang Y. et al. E3 gene manipulations affect oncolytic adenovirus activity in immunocompetent tumor models. // Nat. Biotechnol. 2003. Vol. 21, № 11. P. 1328-1335. Koski A. et al. Treatment of cancer patients with a serotype 5/3 chimeric oncolytic adenovirus expressing GMCSF. // Mol. Ther. Nature Publishing Group, 2010. Vol. 18, № 10. P.1874-1884.

Musher B.L. et al. A phase I/II study of LOAd703, a TMZ-CD40L/4-1BBL-armed

oncolytic adenovirus, combined with nab-paclitaxel and gemcitabine in advanced

pancreatic cancer. // https://doi.org/10.1200/JCO.2022.40.16_suppl.4138. American

Society of Clinical Oncology, 2022. Vol. 40, № 16_suppl. P. 4138-4138.

Kumar A. et al. Applications of tissue-specific and cancer-selective gene promoters for

cancer diagnosis and therapy // Adv. Cancer Res. Adv Cancer Res, 2023. Vol. 160. P.

253-315.

Ogretmen B. et al. Role of ceramide in mediating the inhibition of telomerase activity in A549 human lung adenocarcinoma cells // J. Biol. Chem. J Biol Chem, 2001. Vol. 276, № 27. P. 24901-24910.

Cukusic A. et al. Spontaneous senescence in the MDA-MB-231 cell line // Cell Prolif. Cell Prolif, 2006. Vol. 39, № 3. P. 205-216.

Hawkins L. et al. Gene delivery from the E3 region of replicating human adenovirus:

evaluation of the 6.7K/gp19K region // Gene Ther. 2001. Vol. 8, № 15. P. 1123-1131.

237. LK H., TW H. Gene delivery from the E3 region of replicating human adenovirus: evaluation of the ADP region // Gene Ther. Gene Ther, 2001. Vol. 8, № 15. P. 11321141.

238. Hawkins L., Hermiston T. Gene delivery from the E3 region of replicating human adenovirus: evaluation of the E3B region // Gene Ther. 2001. Vol. 8, № 15. P. 1142-1148.

239. Liu Y. et al. Targeting telomerase reverse transcriptase with the covalent inhibitor NU-1 confers immunogenic radiation sensitization // Cell Chem. Biol. Cell Chem Biol, 2022. Vol. 29, № 10. P. 1517-1531.e7.

240. Cerullo V. et al. Oncolytic adenovirus coding for granulocyte macrophage colony-stimulating factor induces antitumoral immunity in cancer patients // Cancer Res. Cancer Res, 2010. Vol. 70, № 11. P. 4297-4309.

241. Wang F. et al. Biodistribution and safety assessment of bladder cancer specific recombinant oncolytic adenovirus in subcutaneous xenografts tumor model in nude mice // Curr. Gene Ther. Curr Gene Ther, 2012. Vol. 12, № 2. P. 67-76.

ПРИЛОЖЕНИЯ

aattcgcgat cgcatcatca а1аМа1асс ttattttgga ttgaagccaa tatgataatg 60 agggggtgga gtttgtgacg tggcgcgggg cgtgggaacg gggcgggtga cgtagtagtg 120 tggcggaagt gtgatgttgt aagtgtggcg gaacacatgt aagcgccgga tgtggtaaaa 180 gtgacgtttt tggtgtgcgc cggtgtacac gggaagtgac aattttcgcg cggttttagg 240 cggatgttgt agtaaatttg ggcgtaacca agtaatattt ggccattttc gcgggaaaac 300 tgaataagag gaagtgaaat ctgaataatt С^Аж* catagcgcgt aatatttgtc 360 tagggccgcg gatcctgatc cgattcgacc tctctccgct ggggccctcg ctggcgtccc 420 ttgcaccctg ggagcgcgag cggcgcgcgg gcggggaagc gcggcccaga cccccgggtc 480 cgcccggagc agctgcgctg tcggggccag gccgggctcc cagtggattc gcgggcacag 540 acgcccagga ccgcgctccc cacgtggcgg agggactggg gacccgggca cccgtcctgc 600 cccttcacct tccagctccg cctcctccgc gcggaccccg ccccgtcccg acccctcccg 660 ggtccccggc ccagccccct ccgggccctc ccagcccctc cccttccttt ccgcggcccc 720 gccctctcct cgcggcgcga gtttcaggca gcgctgcgtc ctgctgcgca cgtgggaagc 780 cctggccccg gccacccccg cgctgcaggc caccatgaga catattatct gccacggagg 840 tgttattacc gaagaaatgg ccgccagtct tttggaccag ctgatcgaag aggtactggc 900 tgataatctt ccacctccta gccattttga accacctacc cttcacgaac tgtatgattt 960 agacgtgacg gcccccgaag atcccaacga ggaggcggtt tcgcagattt ttcccgagtc 1020 tgtaatgttg gcggtgcagg aagggattga cttattcact tttccgccgg cgcccggttc 1080 tccggagccg cctcaccttt cccggcagcc cgagcagccg gagcagagag ccttgggtcc 1140 ggtttctatg ccaaaccttg tgccggaggt gatcgatctt acctgccacg aggctggctt 1200 tccacccagt gacgacgagg atgaagaggg tgaggagttt gtgttagatt atgtggagca 1260 ccccgggcac ggttgcaggt cttgtcatta tcaccggagg aatacggggg acccagatat 1320 tatgtgttcg ctttgctata tgaggacctg tggcatgttt gtctacagta agtgaaaaat 1380 tatgggcagt gggtgataga gtggtgggtt tggtgtggta attttttttt taatttttac 1440 agttttgtgg tttaaagaat tttgtattgt gattttttaa aaggtcctgt gtctgaacct 1500 gagcctgagc ccgagccaga accggagcct gcaagaccta cccggcgtcc taaattggtg 1560 cctgctatcc tgagacgccc gacatcacct gtgtctagag aatgcaatag tagtacggat 1620 agctgtgact ccggtccttc taacacacct cctgagatac acccggtggt cccgctgtgc 1680 cccattaaac cagttgccgt gagagttggt gggcgtcgcc aggctgtgga atgtatcgag 1740 gacttgctta acgagtctgg gcaacctttg gacttgagct gtaaacgccc caggccataa 1800 ggtgtaaacc tgtgattgcg tgtgtggtta acgcctttgt ttgctgaatg agttgatgta 1860 agtttaataa agggtgagat aatgtttaac ttgcatggcg tgttaaatgg ggcggggctt 1920 aaagggtata taatgcgccg tgggctaatc ttggttacat ctgacctcat ggaggcttgg 1980 gagtgtttgg aagatttttc tgctgtgcgt aacttgctgg aacagagcac gcgttattat 2040 aagctttaat gcggtagttt atcacagtta aattgctaac gcagtcaggc accgtgtatg 2100 aaatctaaca atgcgctcat cgtcatcctc ggcaccgtca ccctggatgc tgtaggcata 2160 ggcttggtta tgccggtact gccgggcctc ttgcgggata tcgtccattc cgacagcatc 2220 gccagtcact atggcgtgct gctagcgcta tatgcgttga tgcaatttct atgcgcaccc 2280 gttctcggag cactgtccga ccgctttggc cgccgcccag tcctgctcgc ttcgctactt 2340 ggagccacta tcgactacgc gatcatggcg accacacccg tcctgtggat cctctacgcc 2400 ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg ttgctggcgc ctatatcgcc 2460 gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc tcatgagcgc ttgtttcggc 2520 gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg gcgccatctc cttgcatgca 2580 ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac tactgggctg cttcctaatg 2640

caggagtcgc ataagggaga gcgtcgaccg atgcccttga gagccttcaa cccagtcagc 2700 tccttccggt gggcgcgggg catgactatc gtcgccgcac ttatgactgt cttctttatc 27б0 atgcaactcg taggacaggt gccggcagcg ctctgggtca ttttcggcga ggaccgcttt 2820 cgctggagcg cgacgatgat cggcctgtcg cttgcggtat tcggaatctt gcacgccctc 2880 gctcaagcct tcgtcactgg tcccgccacc aaacgtttcg gcgagaagca ggccattatc 2940 gccggcatgg cggccgacgc gctgggctac gtcttgctgg cgttcgcgac gcgaggctgg 3000 atggccttcc ccattatgat tcttctcgct tccggcggca tcgggatgcc cgcgttgcag 30б0 gccatgctgt ccaggcaggt agatgacgac catcagggac agcttcaagg atcgctcgcg 3120 gctcttacca gcctaacttc gatcattgga ccgctgatcg tcacggcgat ttatgccgcc 3180 tcggcgagca catggaacgg gttggcatgg attgtaggcg ccgccctata ccttgtctgc 3240 ctccccgcgt tgcgtcgcgg tgcatggagc cgggccacct cgacctgaat ggaagccggc 3300 ggcacctcgc taacggattc accactccaa gaattggagc caatcaattc ttgcggagaa 33б0 ctgtgaatgc gcaaaccaac ccttggcaga acatatccat cgcgtccgcc atctccagca 3420 gccgcacgcg gcgcatctcg ggcagcgttg ggtcctggcc acgggtgcgc atgatcgtgc 3480 tcctgtcgtt gaggacccgg ctaggctggc ggggttgcct tactggttag cagaatgaat 3540 caccgatacg cgagcgaacg tgaagcgact gctgctgcaa aacgtctgcg acctgagcaa 3б00 caacatgaat ggtcttcggt ttccgtgttt cgtaaagtct ggaaacgcgg aagtcagcgc 3бб0 cctgcaccat tatgttccgg atctgcatcg caggatgctg ctggctaccc tgtggaacac 3720 ctacatctgt attaacgaag cgctggcatt gaccctgagt gatttttctc tggtcccgcc 3780 gcatccatac cgccagttgt ttaccctcac aacgttccag taaccgggca tgttcatcat 3840 cagtaacccg tatcgtgagc atcctctctc gtttcatcgg tatcattacc cccatgaaca 3900 gaaatccccc ttacacggag gcatcagtga ccaaacagga aaaaaccgcc cttaacatgg 39б0 cccgctttat cagaagccag acattaacgc ttctggagaa actcaacgag ctggacgcgg 4020 atgaacaggc agacatctgt gaatcgcttc acgaccacgc tgatgagctt taccgcagct 4080 gcctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca catgcagctc ccggagacgg 4140 tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc ccgtcagggc gcgtcagcgg 4200 gtgttggcgg gtgtcggggc gcagccatga cccagtcacg tagcgatagc ggagtgtata 42б0 ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata tgcggtgtga 4320 aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct 4380 cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc 4440 ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg 4500 ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg 45б0 cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg 4б20 actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac 4б80 cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca 4740 tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt 4800 gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc 48б0 caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag 4920 agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac 4980 tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt 5040 tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 5100 gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 51б0 gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 5220 aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat 5280 atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc 5340 gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat 5400 acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc 54б0 ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc 5520 tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag 5580 ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct gcaggcatcg tggtgtcacg 5б40

ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg 5700 atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag 5760 taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt 5820 catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga 5880 atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca acacgggata ataccgcgcc 5940 acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc 6000 aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc 6060 ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc 6120 cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tccttttcaa 6180 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt 6240 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc 6300 taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt 6360 cgtcttcaag 6370

ААССТ АТАААААТ Ав в С в Т АГ С АС в Авв СССТ Т Т Св Т СТ Т СААв ААГ Т С в С 6 АТСвСАТСАТ