Определение чувствительности бластных клеток к противоопухолевым химиопрепаратам у детей с острыми лейкозами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Кузнецова, Светлана Станиславовна

• Кузнецова, Светлана Станиславовна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Кузнецова, Светлана Станиславовна

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Прогностические факторы и результаты лечения острых лейкозов у детей.

1.2. Чувствительность лейкозных клеток к химиопрепаратам, определяемая на основании тестов in vitro (МТТ-тест, DISC-метод), как фактор прогноза острых лейкозов у детей.

1.3. Механизмы лекарственной резистентности. Значение молекулярных биомаркеров, ответственных за апоптоз при острых лейкозах у детей.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Клинико-цитологическая характеристика и лечение больных, включенных в исследование чувствительности бластных клеток к химиопрепаратам in vitro.

2.2. Клинико-цитологическая характеристика и лечение больных, включенных в исследование по изучению молекулярных биомаркеров и антигена CD95 на поверхности бластных клеток.

2.3. Методы исследования.

2.4. Статистическая обработка данных.

Глава 3. Анализ чувствительности бластных клеток детей с острыми лейкозами к химиопрепаратам in vitro в различных группах риска, рецидиве заболевания и в зависимости от факторов прогноза.

3.1. Сравнение чувствительности бластных клеток к химиопрепаратам in vitro в различных группах риска детей с OJTJI и при рецидиве заболевания.

3.2. Сравнение чувствительности бластных клеток к химиопрепаратам in vitro в различных группах риска детей с OMJI и при рецидиве заболевания.

3.3. Клинико-лабораторная характеристика детей с OJIJI с различной чувствительностью бластных клеток к химиопрепаратам in vitro, прогностическое значение.

3.4. Клинико-лабораторная характеристика детей с OMJI с различной чувствительностью бластных клеток к химиопрепаратам in vitro, прогностическое значение.

3.5. Экспрессия биомаркёров лекарственной резистентности при острых лейкозах у детей.

Глава 4. Результаты лечения детей с острыми лейкозами при различной чувствительности бластных клеток к химиопрепаратам in vitro.

4.1. Сравнение ответа на химиотерапию больных OJIJI.

4.2. Сравнение ответа на химиотерапию больных OMJI.

4.3. Выживаемость детей с OJIJI в зависимости от уровня экспрессии CD95.

Глава 5. Оценка чувствительности бластных клеток по доле эффективных химиопрепаратов in vitro в зависимости от клинико-лабораторных показателей и исхода острых лейкозов у детей.

5.1. Сравнение клинико-лабораторных характеристик, ответа на химиотерапию детей с OJIJI при различной доле эффективных химиопрепаратов in vitro.

5.2. Сравнение клинико-лабораторных характеристик, ответа на химиотерапию детей с OMJI при различной доле эффективных химиопрепаратов in vitro.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение чувствительности бластных клеток к противоопухолевым химиопрепаратам у детей с острыми лейкозами»

Актуальность темы. Прогноз при лечении детей с острыми лейкозами значительно улучшился за последние десятилетия. Успехи в терапии острых лейкозов у детей связаны с внедрением интенсивной программной химиотерапии. В настоящее время с помощью современного лечения около 97 % детей с OJ1JI и 75-85 % больных OMJ1 достигают ремиссии, при этом 5-летняя безрецидивная выживаемость составляет 70 % и 30-50 % соответственно [13,18,33,92,109]. Однако, примерно у 30 % детей с OJ1JI, и более чем у 50 % с OMJI развивается в последующем рецидив заболевания [32,90,92,97,98]. Безусловно, основную долю рецидивов составляют пациенты высокой группы риска при впервые диагностированном заболевании. Однако имеют место случаи рецидивов у больных с изначально благоприятным прогнозом заболевания. Глубокого изучения требуют пациенты с первично-резистентными формами OJ1, когда ремиссия не достигается при стандартно применяемых схемах полихимиотерапии. Лекарственная резистентность бластных клеток к химиопрепаратам является ведущей причиной неэффективности современного программного лечения, а ее преодоление - основной резерв повышения результативности химиотерапии [9,80,107].

Исследования последних лет показали, что лекарственную устойчивость можно достаточно точно определить при воздействии химиопрепаратов на опухолевые клетки in vitro (МТТ-тест и DISC-метод) [14,16,52,73,79,82,102]. Многие исследования подтвердили значение этих методов в долгосрочном прогнозе OJ1JL Ряд исследований показал, что чувствительность in vitro к преднизолону, винкристину и L-аспарагиназе каждая в отдельности значительно коррелирует с безрецидивной и бессобытийной выживаемостью при ОЛЛ, причем этот факт оценивается как более значимый, чем возраст, размеры опухолевой массы, иммунофенотип опухолевых клеток [52,57,80,81]. В отношении изучения чувствительности бластов к химиопрепаратам in vitro при ОМЛ у детей данные в литературе немногочисленны.

В настоящее время считается, что реализация циторедуктивного эффекта всех химиотерапевтических средств, независимо от механизмов их действия, происходит через активацию в опухолевых клетках программированной клеточной гибели — апоптоза, т.е. чувствительность опухолевых клеток к химиопрепаратам зависит от их способности вступать в апоптоз [4,9,30,115,]. Это качество определяется белками, участвующими в управлении апоптозом. К механизмам нарушения гибели клеток под действием химиопрепаратов относится блокирование апоптоза при гиперэкспреесии гена Вс1-2, мутациях гена р-53, и уменьшение экспрессии антигена CD95(Fas/APO-l) [22,25,50,55,60,89,114].

В связи с этим, актуальным является определение профиля чувствительности бластных клеток к химиопрепаратам (ХП), планируемым к использованию при лечении детей с различными вариантами OJT, и изучение факторов апоптоза. Эти данные могут быть использованы для прогнозирования течения заболевания, дифференцированного лечения пациентов и способствовать выбору адекватной тактики терапии в соответствии с биологическими характеристиками опухоли для достижения более высокого уровня выживаемости больных.

Цель работы. Оценить прогностическое значение определения чувствительности бластных клеток к химиопрепаратам in vitro (МТТ-тест и DISC-метод) при остром лимфобластном и остром миелоидном лейкозах у детей. Для достижения выбранной цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить чувствительность бластных клеток к ХП in vitro с помощью МТТ-теста и DISC-метода у детей с различными группами риска острого лейкоза (OJIJI, ОМЛ) при впервые установленном диагнозе и рецидиве заболевания.

2. Выявить корреляционные связи между чувствительностью бластных клеток к ХП по данным тестов in vitro и общепринятыми клинико-гематологическими факторами риска острых лейкозов (ОЛЛ, ОМЛ) у детей.

3. Определить значимость идентификации биомолекулярных маркеров лекарственной резистентности Bcl-2, Вах, Ki-67, р-53 при острых лейкозах (ОЛЛ, ОМЛ) у детей.

4. Оценить прогностическое значение результатов определения чувствительности бластных клеток к ХП in vitro (МТТ-тест и DISC-метод) для анализа эффективности индуктивной химиотерапии у детей с острыми лейкозами (ОЛЛ, ОМЛ).

5. Провести сопоставление данных, полученных при определении чувствительности бластных клеток к ХП in vitro, с отдаленными результатами лечения детей с острыми лейкозами (ОЛЛ, ОМЛ)

Научная новизна. Определена зависимость чувствительности бластных клеток к ХП, определяемая in vitro с помощью МТТ-теста и DISC-метода, от характеристики опухолевого субстрата при ОЛЛ и ОМЛ у детей, касающаяся особенностей иммунофенотипа бластных клеток, морфологических и цитогенетических данных, а также некоторых клинико-гематологичсских факторов прогноза. Предложен новый подход к клинической интерпретации чувствительности бластных клеток к ХП по результатам тестов in vitro для прогноза эффективности химиотерапии. В работе раскрыта гетерогенность опухолевой популяции в отношении чувствительности к ХП, что может иметь значение для объяснения механизма формирования лекарственной резистеитности, а также определения отдаленного прогноза у детей с острыми лейкозами. Проведено исследование доли эффективных ХП in vitro для прогнозирования ближайших и отдаленных результатов лечения детей с ОЛЛ и ОМЛ.

Практическая ценность. На основании полученных результатов исследования доказана целесообразность применения данных по изучению чувствительности бластных клеток к ХП in vitro для определения прогноза ОЛЛ и ОМЛ у детей. Убедительно показано, что с высокой точностью может быть предсказана клиническая эффективность планируемой схемы химиотерапии и отдаленные результаты лечения. Показана возможность использования тестирования ХП in vitro для индивидуализации программ терапии и повышения эффективности лечения детей с резистентными формами и рецидивами острого лейкоза.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Кузнецова, Светлана Станиславовна

выводы

1. У пациентов с неблагоприятным прогнозом ОЛЛ отмечена низкая чувствительность лейкозных клеток in vitro ко всем препаратам. При рецидивах острых лейкозов у детей резистентность бластных клеток к химиопрепаратам возрастала, за исключением винкристина и вепезида у больных с ОЛЛ.

2. Властные клетки детей с ОЛЛ, имеющие фенотип ранних этапов дифференцировки В-линейного ряда, были более чувствительными in vitro ко всем исследуемым химиопрепаратам в отличае от лимфобластов Т-линейного подварианта.

3. При ОМЛ у детей более высокая чувствительность миелобластов к химиопрепаратам in vitro наблюдалась при экспрессии антигена CD7, а наличие экспрессии В-линейных маркеров ухудшало чувствительность к цитозару. У пациентов с нормальным кариотипом и t(8;21) чувствительность к доксорубицину была выше по сравнению с больными, имеющими t(15;17) (р=0,001).

4. Положительная экспрессия Bcl-2 на бластных клетках при ОЛЛ у детей не ассоциировалась с плохим прогнозом заболевания, а при ОМЛ коррелировала с неблагоприятными факторами прогноза. Положительная экспрессия Вах присутствовала у больных с впервые установленным диагнозом ОЛЛ и сочеталась с благоприятным прогнозом.

5. У детей с ОЛЛ выявлена высокая корреляция между чувствительностью лейкозных клеток к препаратам in vitro, входящим в схему индуктивной химиотерапии, и выходом в ремиссию на 33 день от начала лечения. У больных в состоянии стойкой ремиссии была высокая чувствительность ко всем химиопрепаратам in vitro. Показатели безрецидивной выживаемости ухудшались у пациентов с низкой чувствительностью бластов к преднизолону (р-0,06), цитозару (р=0,02) и вепезиду (р=0,01). Бессобытийная выживаемость была ниже в случаях низкой чувствительности бластов ко всем препаратам, за исключением доксорубицина.

6. У детей с ОМЛ при отсутствии ремиссии после индуктивной химиотерапии отмечено снижение чувствительности бластов in vitro к антрациклинам. Низкая чувствительность миелобластов ко всем химиопрепаратам in vitro не ухудшала показатели безрецидивной выживаемости пациентов. На бессобытийную выживаемость больных ОМЛ влияла чувствительность бластных клеток к цитозару (р=0,01).

7. Выявлена достоверная (р=0,0001) взаимосвязь наступления ремиссии на 33 день от начала лечения у детей с ОЛЛ и высокого процента (66,7 %-100 %) эффективных ХП in vitro, входящих в схему индуктивной химиотерапии. У больных с отсутствием ремиссии на данный срок химиотерапии доля эффективных ХП составила от 0 до 33 %. Безрецидивная выживаемость у пациентов с долей эффективных препаратов более 50% и менее 50 % составила 74,0+10,2 % и 62,9±15,7 % соответственно (р=0,06). Рецидивы ОЛЛ у детей характеризовались достоверно (р=0,013) меньшей долей эффективных ХП in vitro.

8. Бессобытийная выживаемость детей с ОМЛ была различной при доле эффективных in vitro препаратов более 50 % и менее 50 %, составив 57,1 ±13,2 и 47,6 ±5,0 % соответственно (р=0,001).

Практические рекомендации

1. При программном лечении детей с ОЛЛ и ОМЛ необходимо принимать во внимание чувствительность бластных клеток к ХП ex vivo, определяемую с помощью МТТ-теста и DISC-метода.

2. Чувствительность бластных клеток к ХП in vitro (МТТ-тест и DISC-метод) следует использовать для определения прогноза острых лейкозов у детей наряду с общепринятыми факторами риска развития рецидива.

3. При неблагоприятном прогнозе, рефрактерных формах и рецидивах острого лейкоза (ОЛЛ, ОМЛ) у детей целесообразно использовать индивидуальный подбор наиболее эффективных химиопрепаратов с изменением программ лечения и включением новых лекарственных средств, тестируемых in vitro.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Кузнецова, Светлана Станиславовна, 2004 год

1. Байдуп JI.B. Современная диагностика и классификация острой лейкемии. Острая миелоидная лейкемия. // Гематология и трансфузиология.-1996.-№4.- с.35-39.

2. Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека.// Проблемы гематологии и трансфузиологии.-1990, №8.- с.4-7.

3. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Fas/Аро-1-антиген молекула, опосредующая апоптоз.// Гематология и трансфузиология.- 1995. -т.40, №6.-с. 35-38.

4. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Программированная клеточная смерть (апоптоз).// Российский Онкологический журнал.- 1996.-№ I.e. 58-61.

5. Батурина Ю.А. Хромосомный анализ и мониторинг минимальной резидуальной болезни при OMJI у детей: Дис. канд. мед. наук.- М., 2002.-130 с.

6. Божьева М.Г. Клинико-иммунологическая характеристика смешанно-линейных подвариантов острого лимфобластного лейкоза у детей: Дис. канд. мед. наук.- М., 2002.125 с.

7. Владимирская Е.Б., Торубарова Н.А. Острые лейкозы и гипоплазии кроветворения у детей,- М.: Медицина.-1985.с. 32-46.

8. Владимирская Е.Б., Кисляк Н.С., Румянцев А.Г. Причины и пути преодоления лекарственной резистентности при лейкозах и лимфомах у детей.// Гематология и трансфузиология. 1998. -т.43, № 6,- с.3-7.

9. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии. — М., 2001.- с.59-71.

10. Гаврикова Н.В. Клинико-иммунологическая характеристика стволовоклеточного подварианта острого лимфобластного лейкоза у детей: Дис. канд. мед. наук,- М., 2000.115 с.

11. Дурное Л. А. Перспективы детской онкологии.// Педиатрия,- 1991, №11.-С.5-7.

12. Дурное Л.А. Руководство по детской онкологии.-М., 2003., с.239- 265.

13. Кошель И.В. Гематология детского возраста на современном этапе.// Педиатрия 1987.-№8.- с.5-11.

14. Литвинова Е.А. Изучение чувствительности опухолевых клеток к химиопрепаратам и путей ее модификации у детей с острым лейкозом in vitro при помощи МТТ-анализа: Дис. канд. мед. наук,- М., 1999. -122 с.

15. Маякова С.А. Лечение и прогноз острого лимфобластного лейкоза у детей: Дис. д-ра мед. наук.- М., 1986. 160 с.

16. Метелица JI.C. Индивидуальный анализ чувствительности клеток острого лейкоза у детей к химиопрепаратам и цитокинам методом МТТ-анализа: Авторефер. дис. канд. мед. наук.- М., 1994. 110 с.

17. Попа А.В., Тупицин Н.Н., Маякова С.А. Прогностическое значение иммунологических маркеров острого нелимфобластного лейкоза у детей.// Педиатрия,-1999.-№3.-с.25-29.

18. Попа А.В. Критерии прогноза и лечение острого нелимфобластного лейкоза у детей: Дис.канд. мед. наук.- М., 1996. -135 с.

19. Тупицин Н.Н. Иммунофенотипическая характеристика гемобластозов человека и ее клиническое значение: Дис. д-ра мед. наук.- М., 1984. 170 с.

20. Тупицин Н.Н. Клиническая онкогематология.-М.: Медицина, 2001.-е.131-135.

21. Шишкин Ю.В. Опосредованный апоптоз в лейкозных клетках и нормальных кроветворных клетках: Дис. д-ра мед. наук.- М., 2000. 170 с.

22. Avvisati G., Lo Coco F., Mandelli F. Acute Promyelocyte Leukemia: Clinical and Morphologic Features and Prognostic Factors.// Seminars in Hematology.- 2001.-Vol.38.-№1,- p.4-12.

23. Behrmann I., Walczac H., Krammer PH. Structure of the human APO-1 gene.// Eur.J.Immunol.-1994.-Vol.3, №12.- p.3057-3062.

24. BennetJM., Catovsky D., Daniel MT. Proposed revised criteria for the classification of the acute myeloid leukemia.// Ann. Intern. Med.- 1985.-Vol.66,№ 47.-p. 1466-1478.

25. Borner C. Diminished cell proliferation associated with the death-protective activity of Bcl-2.// J Biol Chem.- 1996, Vol.271, №.22.-p. 12695-12698.

26. Carbonell F., Swansbury J., Min T. Cytogenetic findings in acute bifenotipic leukemia. // Leukemia.- 1996.Vol.10, №8.-p. 1283-1287.

27. Chikayama S., Kabayashi Y., Takahashi Y The effect on cell cycle and apoptosis at a low concentration of daunorubicin. // Int.J. of Haemat.-1996.-Suppl.l.-p.l74.

28. Chylicki K., Ehinger M., Sveberg H., et.al. Characterization of the molecular mechanisms for p53-mediated differentiation.// Cell Growth and Differentiation, 2000, Vol.1 l.-p. 561571.

29. Clift R.A., Buckner C.D., Thomas E.D., et al. The treatment of acute non-lymphoblastic leukemia by allogeneic marrow transplantation. //Bone Marrow Transplant.-1997.-№2.-p.243-258.

30. Cortes J., Kantarjian H. Acute lymphoblastic leukemia: a comprehensive review with enphasize on biology and therapy.// Cancer.- 1995. Vol.76.-p.2393-2417.

31. Coustan-Smith E., Kitanaka A., Pui C., et al. Clinical Relevance of BCL-2 Overexpression in Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia.// Blood.-1996.-Vol.87, N3.- p.l 140-1146.

32. Creutzig U., Zimmermann M, Ritter J., et.al. Definition of a standart-risk group in children with AML.// Br. J of Haematol.-1999.-Vol. 104,N3.- p.630-639.

33. Den Boer ML., Kapaun P., Pieters R. Myeloid antigen co-expression in childhood acute lymphoblastic leukemia: relationship with in vitro drug resistance. //Br J Heamatol.-1999.-Vol.l 05,№4.-p.876-882.

34. Dirks W., Schone S., Uphorf C., et al. Expression and function of CD95(FAS/APO-l) in leukemia-lymphoma tumour lines.//Br. J.Haematol.-1997.-Vol.96.-p.584-593.

35. Drexler HG., Thiel E., Ludwig WD. Review of the incidence and clinical relevance of myeloid antigen-positive acute lymphoblastic leukemia.// Leukemia.- 1991.-Vol.5,№8.-p.637-645.

36. Estey E.H., Shen Y., Thall P.F. Effect of time to complete remission on subsequent survival and disease-free survival time in AML, RAEB-t, and RAEB.// Blood. -2000.-Vol.95,Nl.- p.72-77.

37. Evans WE., Petros WP., Relling MV., el al. Clinical pharmacology of cancer chemotherapy in children.// Pediatr Clin North Am.-1989.-№36.-p.l 199-1230.

38. Fisher D.E. Apoptosis in cancer therapy: crossing the threshold. //Cell.- 1994.-Vol.78.-p. 539-542.

39. Foon K., Gale R., Todd R. Resent advavces in the immunologic classification of leukemia.// Semin. Haematol.- 1986.-Vol.23.-p.257

40. Gaynon PS., Bleyer WA., Steinherz PG., et al. Day 7 marrow response and outcome for children with acute lymphoblastic leukemia and unfavorable presenting features.// Med Pediatr Oncol.- 1990.-№18.-p.273-279.

41. Grondaek К., Straten P.Т., Ralfkiaer E., et al. Somatic Fas mutations in non-Hodgkin's lymphoma: association with extranodal disease and autoimmunity.// Blood.- 1998. Vol.92, N.9.-p. 3018-3024.

42. Gruss H.J., Dower S.K. Tumor necrosis factor ligand superfamily: involvement in the pathology of malignant lymphomas. // Blood.- 1995.-Vol. 85, N12.-p. 3378-3404.

43. Hara J., Hosoi G., Okamura Т., et al. CD33+ B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia in children: a distinct subgroup of B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia.// IntJ.Hematol.-1995.-Vol.61,N2.-p.77-84.

44. Heme G., Fengler R., Hartmann R., et al. Six-year experience with a comprehensive approach to the treatment of recurrent childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL-REZ BFM 85).

45. Hirsch-Ginsberg C., Childs C., Chang K.S., et al. Phenotypic and molecular heterogeniti in Philadelphia chromosome-positive acute leukemia.// Blood.-1998.-Vol.71.-p. 186.

46. Hogarth LA., Hall AG. Increased Bax expression is associated an increased risk of relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia.// Blood.-1999.-Vol.93,N8,- p.2671-2678.

47. Holleman A., den Boer M.L., Kazemier K.M., et al. Resistance to different classes of drugs is associated with impaired apoptosis in childhood acute lymphoblastic leukemia.//Blood.- 2003,Vol.102,N13.- p.4541-4546.

48. Hongo Т., Yajima S., Sakurai M., et al. In vitro drug sensitivity testing can predict induction failure and early relapse of childhood acute lymphoblastic leukemia. //Blood.-1997.- Vol.89,N8.- p.2959-2965.

49. Karawajew L., Wuchter C., Rupper V., et al. Differential CD95 expression and function in T and В lineage acute lymphoblastic leukemia cells.// Leukemia.- 1997.-Vol.ll.-p. 1245-1252.

50. Kaspers G.J.L., Smets L.A., Pieters R., et al. Favorable prognosis of hyperdiploid common acute lymphoblastic leukemia may b explained by sensitivity to antimetabolites and other drugs: Results of an in vitro study.// Blood. -1995.- Vol.85.-p.751-756.

51. Kaspers GJL., Pieters R„ Van Zantwijk C.H., et al. In vitro drug sensitivity of normal peripheral blood lymphocytes and childhood leukemic cells from bone marrow and peripheral blood. //Br J Cancer.-199l.-Vol.64.-p.469.

52. Kaspers GJL., Pieters R., Zantwijk C.H., et al. Prednisolone resistance in childhood acute lymphoblastic leukemia: vitro-vivo correlations and cross-resistance to other drugs. //Blood.- 1998.-Vol.92,Nl.- p.259-266.

53. Knudson C.M., Johnson G.M., Lin Y., et al. Bax Accelerates Tumorogenesis in p53-deficient Mice. // Cancer Research.- 2001, Vol.61.-p. 659-665.

54. Kroemer G. The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis. // Nature Medicine.- 1997.-Vol.3, N6.-p.614-620.

55. Lam V., McPerson P., Salmena L., et al. p53 gene status and chemosensitivity of childhood acute lymphoblastic leukemia cells to adriamycin.// Leukemia Research.-1999,-Vol. 23.- p.871-880.

56. Painter J.S., Dalton W.S. Mutations in the Fas antigen in patients with multiple myeloma.// Blood.- 1997. Vol.90, N11 .-p.4266-4270.

57. Linette G.P., Li Y., Roth K, Korsmeyer S.J. Cross talk between cell death and cell cycle progression: Bcl-2 regulates NFAT-mediated activation.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1996.Vol.93.-p.9545-9552.

58. Liso V., Albano F., Pastore D., et al. Bone marrow aspirate on the 14th day of induction treatment as a prognostic tool in de novo adult acute myeloid leukemia.// Haematol.-2000.-Vol.85.-p. 1285-1290.

59. Ludwig WD., Harbott J., Bartram CR., et al. Incidence and prognostic significance of immunophenotypic subgroups in childhood acute lymphoblastic leukemia: Experiences of the BFM study 86. //Resent Results Cancer Res.- 1993.-p. 131:269

60. Marks D.I., Kurz B. W., Link M.P., et al. High incidence of potential p53 inactivation in poor outcome childhood acute lymphoblastic leukemia at diagnosis// Blood.- 1996. -Vol.87,N3.-p. 1155-1161.

61. Martin G., Barragan E., Bolufer P., et al. Relevance of presenting white blood cell count and kinetics of molecular remission in the prognosis of acute myeloid leukemia with CBFp/MYHl 1 rearrangement.// Haematol.-2000.-Vol.85.- p.699-703.

62. Matutes E., Morilla R., Farahat N. Definition of acute bifenotipic leukemia.// Haematol. —1997.-Vol.82,Nl.-p.64-66.

63. Mating ZT., Maclean FR., Reid AD., et al. The relationshop between bcl-2 expression and response to chemotherapy in acute leukemia.// Br.J.Haematol.-1994.-Vol.88.-p.l05-109.

64. Mazel S., Burtrum D., Petrie H.T. Regulation of cell division cycle progression by bcl-2 expression: a potential mechanism for inhibition of programmed cell death. //J Exp Med.-1996.-Vol.183, N5.-p. 2219-2226.

65. Meijerink J.P.P., Mensink E.J.B.M., Wang K., et al. Hematopoietic malignancies demonstrate loss-of-function mutations of Bax.// Blood.- 1998,- Vol.91, N8.-p. 29912997.

66. Nagata S„ Golstein P. The Fas death factor.// Science.-1995.-Vol. 267.-p.1449-1456.

67. Nakase K., Kita K., Miwa H. Expression pattern of hybrid phenotype in adult lymphoblastic leukemia.// Cancer Detect Prev.-2001.-Vol.25,N4.-p.394-405.

68. Ng SM, Ariffin WA, Lin HP. Clinical features and treatment outcome of children with myeloid antigen coexpression in B-lineage acute lymphoblastic leukemia: a study of 151 Malaysian children. //Trop.Pediatr.-2000.-Vol.46,N2.-p.73-78

69. Nomdedeu J.F., Lete I., Baigel M., et al. Mutational analysis of p53 in 16 cases of acute lymphoblastic leukemia and Burkitt's lymphoma. // Haematol.- 1997.-Vol.82.-p.550-554.

70. Pieters R. Drug resistance in childhood leukemia. // PhD thesis, University, Amsterdam, 23-28 Aug, 1991.-p.578.

71. Pieters R., Haismans D.R., Loonen A.H., et al. Relation of cellular drug resistance to long-term clinical outcome in childhood acute lymphoblastic leukemia. //Lancet.- 1991.-Vol.338,N8.-p.399-403.

72. Pieters R., Kaspers G.J.L., Klumper E., et al. Clinical Relevance of In Vitro Drug Resistance Testing in Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia: The State of the Art.// Med. and Ped. Oncol.-1994.-Vol.22.-p.299-308.

73. Pieters R., LoonenAH., Huismans DR., et al. In vitro drug sensitivity cells from children with leukemia using the MTT assay with culture conditions.// Blood. -1990.- Vol.76.-p.2327-3601.

74. Plumas J., Jacob M.-C., Chaperot L., et al. Tumor В cells from Non-Hodgkin's lymphoma are resistant to CD95 (Fas/Apo-l)-mediated apoptosis. // Blood.- 1998.-Vol.91, N8.-p. 2875-2885.

75. Poeta GD., VendittiA., Principe ML, et al. Amount of spontaneous apoptosis detected by Bax/Bcl-2 ratio predict outcome in acute myeloid leukemia (AML).// Blood.-2003.-Vol.l01,N6.-p.l25-152.

76. Pui C.H., Hancock M.L., Head D.R., et al. Clinical significance of CD34 expression in childhood B-precursor acute lymphoblastic leukemia.// Blood.-1993.-Vol.82.-p.889.

77. Pui CH. Childhood leukemias.// N Eng J Med.- 1995.-Vol.332.-p.1618

78. Putti M.C., Rondelli R., Cocito M.G., et al. Expression of myeloid markers lacks prognostic impact in children treated for acute lymphoblastic leukemia.// Blood.-1998.-Vol.92,N3 .-p.785-801.

79. Reed JC., Kitada S., Takayama S., et al. Regulation of chemoresistance by the bcl-2 oncoprotein in non-Hodgkins lymphoma and lymphocytic leukemia cell lines. // Ann. Oncol.-1994.-Vol.,N5.-p.61-65.

80. Reiter A., Schrappe M., Ludwig WD., et al. Chemotherapy in 998 unselected childhood ALL patients. Results and conclusion off the multicenter trial ALL-BFM-86.// Blood.-1994.Vol.84,N3.- p.3122-3133.

81. Ribeiro RC., Pui CH., Characterization and management of poor-prognosis childhood acute lymphoblastic leukemia.// International Journal of Pediatric Hematology/Oncology.-1998.-Vol.70,N5.-p.89-98.

82. Riehm H., Gadner II., Henze H. Et al. Results and significance of six randomized trials in four consecutive ALL-BFM Studies.// Haematol.Blood Transfiir.-1990.-Vol.33.-p.439-450.

83. Rowan S„ Ludwig RL. Specific loss of apoptotic but not cell cycle arrest function in human tumor derived p53 mutant.// EMBO J.-1996.-Vol.l5.-p.827-838.

84. Schrappe M., Reiter A., Riehm H. Cytoreduction and prognosis in childhood acute lymphoblastic leukemia. // J Clin Oncol.- 1996.-Vol.l4,N6.-p.2403-2408.

85. Straus S.E., Jaffe E.S., PuckJ.M., et al. The development of lymphomas in families with autoimmune lymphoproliferative syndrome with germline Fas mutations and defective lymphocyte apoptosis.// Blood.-2001.-Vol.98, Nl.-p. 194-200.

86. Tollman MS. Therapy of acute myeloid leukemia.// Cancer Control.-2001.-Vol.8,N1,-p.62-78.

87. Thomas E.D., Buckner C.D., Banaji M„ et al. One hundred patients with acute leukemia treated by chemotherapy, total body irradiation, and allogeneic marrow transplantation. // Blood.-1997.-Vol.49,N2.-p.511-533.

88. Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease.// Science.- 1995.-Vol.267.-p.l456-1458.

89. Tsujimoto Y, Gorham J., Cossman J. et al. The t(14;18) chromosome translocations involved in B-cell neoplasms result from mistakes in VDJ joining. //Science (Washington,DC).-1985.-Vol.299.- p.1390-1393.

90. Tsurusawa M., Saeki Ко., Katano N., et al. Bcl-2 expression and prognosis in childhood acute leukemia. //Pediatr. Hematol.Oncol.-1998.-Vol.l5,N2.-p.l43-155.

91. Twentyman PR., Lascombe M. A study of some variables in a tetrazolium dye (MTT) based assay for cell growth and chemosensitivity.// Br J Cancer.- 1987.-Vol.56-p.279-285.

92. Uckun F.M., Salher H.N., Gaynon P.S. Clinical features and treatment outcome of children with myeloid antigen positive acute lymphoblastic leukemia: a report from the CCG.//Blood.-1997.-Vol.90,Nl.-p.28-35.

93. Uckun F.M., Sensel M.G., Sun L., el al. Biology and treatment of childhood T-lineage acute lymphoblastic leukemia.//Blood.- 1998.-Vol.91,N3.-p.735-746.

94. Uckun FM., Yang Z„ Sather H., et al. Cellular exspression of antiapoptic BCL-2 oncoprotein in newly diagnosed acute lymphoblastic leukemia: a Children cancer group study.// Blood.-1997.- Vol.89, N10.- p.3769-3777.

95. Veerman AJP., Pieters R. Drug sensitivity assays in leukemia and lymphoma.// Br J Haematol. -1990,-Vol. 74.-p.381-384.

96. Wada M., Barlram C.R., Nakamura H., et al. Analysis of p53 mutations in a large series of lymphoid malignancies of childhood.// Blood.- 1993.-Vol.82,Nl.-p.3163-3164.

97. Wickremasinghe R. G., Hoffbrand A. V. Biochemical and genetic control of apoptosis: relevance to normal hematopoiesis and hematological malignancies.// Blood.-1999.-Vol.93,Nll.-p.3587-3600

98. Wiersma S.R., Ortega J., Sobel E. Clinical importance of myeloid-antigen expression in acute lymphoblastic leukemia of childhood.// Engl. J.Med.-1991.-Vol.324,N12.-p.800-808.

99. Wyllie AH. Cell death: a new classification separating apoptosis from necrosis. In: Bowden ID., Lockscin RA., eds: Cell death in biology and pathology. London: Chapman and Hall.-1981,- p.9-34.

100. Yang E. and Korsmeyer S.J. Molecular thanatopsis: a discourse on the Bcl2 family and cell death. // Blood.- 1996,- Vol.88, N2.-p.386-401.

101. Zhivotovski В., Burgess D.H., SchlegelJ., et al. Proteases in Fas-mediated apoptosis. // Journal of Cellular Biochemistry.- 1997,- Vol.64,N5.-p.43-49.

102. Zwaan C.M., Meshinchi S., Radich J.P. et al. FLT3 internal tandem duplication in 234 children with acute myeloid leukemia: prognostic significance and relation to cellular drug resistance.//Blood.-2003.-Vol.l 02,N7.-p.23 87-2394.

103. Zwaan C.M., Kaspers G.J.L., Pieters R., et al. Cellular drug resistance in childhood acute myeloid leukemia is related to chromosomal abnormalities.// Blood.-2002.-Vol. 100,N9.-p.3352-3360.

104. Zwaan C.M., Kaspers G.J.L., Pieters R., et al. Cellular drug resistance profiles in childhood acute myeloid leukemia: differences between FAB types and comparison with acute lymphoblastic leukemia.// Blood.-2000.-Vol.96,N.8-p.2879-2886.