Определение чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте у больных с хроническими миелопролиферативными опухолями методом импедансной агрегометрии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.10, кандидат наук Столяр Марина Александровна

• Столяр Марина Александровна
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Столяр Марина Александровна

Введение

Глава 1 Современные представления о механизмах агрегации тромбоцитов и феномене аспиринорезистентности

1.1 Биогенез тромбоцитов и их участие в регуляции свертывания крови

1.2 Изменения в системе тромбоцитарного гемостаза при хронических миелопролиферативных опухолях

1.3 Применение ацетилсалициловой кислоты при хронических миелопролиферативных опухолях

1.4 Современные представления о причинах и механизмах развития резистентности к ацетилсалициловой кислоте

1.5 Лабораторная диагностика резистентности к ацетилсалициловой кислоте . 33 Глава 2 Материалы и методы

2.1. Объект исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Исследование агрегации тромбоцитов

2.3. Методы статистического анализа данных

Глава 3 Результаты исследований

3.1 Оптимизация метода импедансной агрегометрии в оценке индивидуальной чувствительности к АСК

3.1.1 Выбор оптимальной концентраций АСК для анализа индивидуальной чувствительности

3.1.2 Метод импеданс-люминесцентной агрегометрии в определении чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте

3.1.3 Влияние выбора ингибитора свертывания крови на агрегацию тромбоцитов и эффект АСК in vitro

3.1.4 Оценка биологической вариации результатов импедансной агрегометрии тромбоцитов

3.2 Особенности влияния АСК на функциональную активность тромбоцитов у больных хроническими миелопролиферативными опухолями

3.2.1 Влияние ингибитора 1ЛК на агрегацию тромбоцитов

Заключение

Выводы

Практические рекомендации

Перспективы дальнейшей разработки темы

Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АДФ - аденозиндифосфат;

АР - аспиринорезистентность;

АК - арахидоновая кислота;

АМФ - аденозинмонофосфат;

АСК - ацетилсалициловая кислота;

АТФ - аденозинтрифосфат;

ГИ - геморрагический инсульт;

ГП - гликопротеин;

ГМК - гладкомышечные клетки;

И3Ф - инозитол-3-фосфат;

ИИ - индекс индивидуальности;

ИМ - инфаркт миокарда;

ИП - истинная полицитемия;

ИР - индекс резистентности;

ИБС - ишемическая болезнь сердца;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КИА - коэффициент ингибирования агрегации;

МДС - миелодиспластический синдром;

ПМФ - первичный миелофиброз;

САК - субарахноидальное кровоизлияние;

СВ - синдром фон Виллебранда;

ТИА - транзиторная ишемическая атака;

PGI2 - простагландин 12 (простациклин); PGH2 - простагландин Н2; Ph - филадельфийская хромосома; ТХА2 - тромбоксан Л2;

фВ - фактор Виллебранда;

ФЛС - фосфолипаза С;

ЦНС - центральная нервная система;

ЦОГ-1 - циклооксигеназа 1;

ХМО - Ph-негативная хроническая миелопролиферативная опухоль; ЭК - эндотелиальные клетки; ЭТ - эссенциальная тромбоцитемия.

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте у больных с хроническими миелопролиферативными опухолями методом импедансной агрегометрии»

Актуальность проблемы

Известно, что нарушения тромбоцитарного гемостаза вносят существенный вклад в патогенетические механизмы развития внутрисосудистых тромбозов и кровоточивости. Многочисленные клинические данные подтверждают высокую эффективность антиагрегационной терапии малыми дозами ацетилсалициловой кислоты (АСК) в профилактике атеротромботических событий у пациентов высокого риска развития инфаркта миокарда и ишемических инсультов [Espinosa E.V., Murad P.J., 2011]. АСК также широко применяется при хронических миелопролиферативных опухолях в связи с развивающимся тромбоцитозом и реологическими нарушениями. Показано, что патогенетической основой большинства случаев ХМО является мутация в гене янускиназы-2 (JAK2) V617F которая вызывает независимую от наличия ростовых факторов активацию пролиферации клеток-предшественниц эритромиелопоэза [Levine R.L., Wernig G., 2006]. Возникающие при этом дефекты образования тромбоцитов сопровождаются не только их количественными, но и качественными изменениями, в частности, выраженным прокоагулянтным фенотипом [Barbui T., Finazzi G., 2013]. Мутация JAK2 V617F является независимым фактором риска смерти от инфаркта и тромбоэмболии [Nielsen C., Birgens H.S., Nordestgaard B.G., Bojesen S.E., 2012]. Вместе с тем, остаются не ясными механизмы влияния избыточной активации янускиназы на агрегационную активность тромбоцитов и их чувствительность к эффекту АСК.

Опыт широкого применения АСК демонстрирует факт существования категории больных, резистентных к антиагрегационному действию АСК. Одновременно показано, что терапия АСК даже в низких дозах повышает в 2-4 раза риск серьезных геморрагических осложнений. Кроме того, наличие скрытого синдрома Виллебранда или его развитие при высоких значениях тромбоцитоза

вызывает кровоточивость и является противопоказанием к приему АСК [Tiede A., Rand J.H., 2010]. Не нашли должного обсуждения и гендерные различия в эффективности аспиринопрофилактики [Christiaens L., Ragot S., 2008]. В связи с вышесказанным, очевидна целесообразность индивидуального учета агрегационных характеристик тромбоцитов перед назначением и в процессе терапии дезагрегантами. Предложены прогностические импедансный [Иванов В.И. и др., патент 2379684, 2010] и оптический [Гринштейн Ю.И. и др., патент 2413953, 2011] методы определения аспиринорезистентности на агрегометре после предварительной инкубации образцов с АСК in vitro. Вместе с тем, до сих пор не решены проблемы стандартизации агрегационных методов, нет сведений о биологической вариации получаемых результатов агрегометрии, необходимых для оптимального подхода к определению границ «нормы» функционального ответа тромбоцитов.

Степень разработанности темы исследования

В последние годы были широко изучены клиническая вариабельность ответа на АСК и феномены «резистентности», «антиагрегантной устойчивости» или «высокой реактивности тромбоцитов при лечении», определяемые как биохимическая неспособность антиагреганта ингибировать функции тромбоцитов ex vivo, [Hankey G.J., Eikelboom J.W., 2006]. Существуют различные методы тестирования функции тромбоцитов для оценки их ингибирования, вызванного АСК: оптическая агрегометрия, анализатор функции тромбоцитов-100 (PFA-100, Германия), VerifyNow (США), импедансная агрегометрия, проточная цитофлуориметрия. Но на сегодняшний день отсутствует стандартизованная технология оценки ответа тромбоцитов на терапию АСК, которая бы учитывала индивидуальную биологическую вариацию агрегации, а данные о пользе существующих методов оценки эффекта АСК весьма противоречивы. В настоящее время стало понятно, что наиболее объективным является проведение исследования функции тромбоцитов методами, обеспечивающими максимально приближенные

условия к условиям in vivo, одним из которых является импедансная агрегометрия, которая позволяет тестировать агрегацию в цельной крови пациента. Однако исследование технологии in vitro определения чувствительности тромбоцитов к АСК методом импедансной агрегометрии у пациентов с ХМО не проводилось.

Цель исследования

Определить биологические и аналитические характеристики метода импедансной агрегометрии тромбоцитов и особенности влияния ацетилсалициловой кислоты на агрегационную активность тромбоцитов у пациентов с хроническими миелопролиферативными опухолями.

Задачи исследования

1. Определить оптимальную концентрацию АСК, ингибирующую агрегацию тромбоцитов in vitro;

2. Оценить показатели аналитической и биологической вариации результатов агрегационного теста с инкубацией АСК in vitro;

3. Исследовать особенности влияния АСК на агрегацию тромбоцитов у пациентов с ХМО с мутацией в гене JAK2;

4. Разработать способ диагностики чувствительности тромбоцитов к АСК на основе комплексной импеданс-люминесцентной агрегометрии.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Впервые проведена оценка биологической вариации и выявлены гендерные отличия параметров импедансной агрегометрии. Впервые в тесте с селективным ингибитором янускиназы-2 показано участие активности данного фермента тромбоцитов в регуляции агрегации посредством посттрансляционных сигнальных механизмов. Выявлены более высокие показатели агрегации тромбоцитов у пациентов с ЭТ в сравнении с аналогичными параметрами у пациентов с ИП.

Впервые проведено исследование зависимости эффекта АСК in vitro от используемого антикоагулянта для взятия венозной крови. Разработан новый способ предиктивной оценки индивидуальной чувствительности тромбоцитов пациента к АСК, основанный на комплексном импеданс-люминесцентном методе регистрации агрегации и высвобождения содержимого тромбоцитарных гранул после in vitro инкубации проб крови с АСК.

Практическая значимость работы

Внедрение определения величины критической разницы (RCV) и сравнения значения агрегации тромбоцитов у пациента с его предыдущим значением в практику исследования функций тромбоцитов позволит проводить индивидуальную оценку функции тромбоцитов и подбирать наиболее оптимальное лечение. Использование для взятия венозной крови вакутейнеров с гепарином позволит оценить наличие дезагрегации у пациентов с ХМО, которая является специфическим нарушением функции тромбоцитов, характерным для этой группы больных.

Применение разработанного метода оценки чувствительности тромбоцитов к АСК позволит оценивать как пониженную, так и повышенную чувствительность тромбоцитов к препарату и корректировать дозу АСК и оптимизировать схему лечения.

Методология и методы исследования

Для реализации поставленной цели был проведен анализ литературы, выполнены экспериментальные исследования in vitro, использованы методы статистической обработки данных. В качестве материала использовались образцы периферической крови пациентов и здоровых добровольцев. Для оценки агрегационной функции тромбоцитов и определения чувствительности к АСК использовали метод импедансной агрегометрии в цельной крови, результат

агрегации оценивали по значению максимальной величины амплитуды сдвига импеданса (в Омах) до и после инкубации пробы цельной крови с раствором АСК.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Межиндивидуальная вариация параметров импедансного метода измерения агрегации тромбоцитов значительно превышает внутрииндивидуальную, что определяет целесообразность их интерпретации в сравнении с предыдущими значениями.

2. Янускиназа-2 тромбоцитов вовлечена в механизмы регуляции агрегационной активности тромбоцитов у пациентов с хроническими миелопролиферативными опухолями.

3. Комбинация импедансного и люминисцентного способа измерения активности тромбоцитов отражает их чувствительность к АСК.

Достоверность результатов исследования

Степень достоверности результатов исследования обеспечивается детальным анализом имеющихся литературных данных, адекватными методами исследования, в соответствии с поставленными задачами, достаточными объемам выборок пациентов и здоровых добровольцев. Результаты были проанализированы с использованием корректных методов статистической обработки данных.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования внедрены в практику работы клинико-диагностической лаборатории КГБУЗ «Красноярский краевой клинический центр охраны материнства и детства» (акт внедрения от 26.12.2017 г.) и лаборатории Красноярского филиала ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России (акт внедрения от 27.12.2017 г.).

Апробация работы

Основные теоретические и практические положения диссертации представлены в докладах на 50-й юбилейной Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (г. Новосибирск, 13-19 апреля 2012г), VIII Всероссийской научно-технической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, посвященной 155-летию со дня рождения К.Э.Циолковского (г. Красноярск, 19-24 апреля, 2012г.), XVI Международной научной школе-конференции студентов и молодых ученых «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» (г. Абакан, ноябрь 2012г.), Краевой научно -практической конференции «Актуальные вопросы клинической лабораторной диагностики» (г. Красноярск, 29-30 ноября, 2012г), IX Всероссийской научно-технической конференции с международным участием, посвященной 385-летию со дня основания г. Красноярска (г. Красноярск, 15-25 апреля 2013г.), 51-ой юбилейной Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (г. Новосибирск, апрель 2013 г.), Всероссийской научно-практической конференции студентов и молодых учёных с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки», посвященной 85-летию профессора Е.Н. Дормидонтова (г. Ярославль, апрель 2013г.), Международном молодежном научном форуме «ЛОМОНОСОВ-2013» (г. Москва, апрель 2013г.), 77-й итоговой студенческой научно-практической конференции с международным участием, посвящённой 90-летию со дня рождения профессора П. Г. Макарова и 90-летию со дня рождения доцента Б. М. Зельмановича (г. Красноярск, апрель 2013г.), XVIII форуме «Национальные дни лабораторной медицины России» (г. Москва, 1-3 октября 2013г.), Енисейских гематологических чтениях (г. Красноярск, 29-30 ноября 2013 г.), на 6-й Международной конференции по Миелопролиферативным опухолям «6th International Conference on Myeloproliferative Neoplasms» (г. Эшторил, Португалия, 2014), II Российском конгрессе гематологов (г. Москва, 12-14 октября 2016 г.).

Личный вклад автора

Автор лично участвовал в постановке цели и задач, решаемых в диссертационной работе, самостоятельно осуществлял поиск литературных источников, осуществлял подготовку и проведение экспериментов по оценке эффекта АСК у пациентов исследуемых групп, исследованию воспроизводимости методики определения чувствительности к антиагрегантной терапии, анализу и статистической обработке полученных данных. Автор лично принимал участие в подготовке статей по материалам проведенных экспериментов.

Публикации результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 39 научных работ, из них: 8 статей в изданиях, включенных в перечень ВАК, 30 публикаций в сборниках и материалах конференций. Получен 1 патент на изобретение.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 95 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, иллюстрирована 8 рисунками и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и обсуждение, заключение, выводы, практические рекомендации и список литературы, включающий 138 научных источника (13 - на русском языке и 125 - на иностранном языке).

ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМАХ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ И ФЕНОМЕНЕ АСПИРИНОРЕЗИСТЕНТНОСТИ

(Обзор литературы) 1.1 Биогенез тромбоцитов и их участие в регуляции свертывания крови

Тромбоциты - это безъядерные клетки крови дисковидной формы размерами 2-4 мкм, которые образуются в красном костном мозге путем секвестрации и «отшнуровки» цитоплазмы мегакариоцитов. Продолжительность жизни тромбоцитов у здоровых людей составляет 7-10 дней, после чего старые тромбоциты поглощаются фагоцитами ретикуло-эндотелиальной системы селезенки [МгсЬеЬоп ДБ., 2013].

Мегакариоциты - наиболее крупные полиплоидные клетки костного мозга, их количество в костном мозге относительно невелико - 0,03-0,05% от общего числа ядерных клеток. Мегакариоциты регенерируют со скоростью около 108 клеток в сутки, и из каждого мегакариоцита образуется до нескольких тысяч тромбоцитов. Диаметр зрелого мегакариоцита составляет 50-100 мкм. Он имеет крупное многодольное ядро и увеличенное число наборов хромосом, которое может достигать 64К (в среднем 16К). Мегакариоциты происходят из гемопоэтических стволовых клеток - общих предшественников всех форменных элементов крови. Из миелоидной клетки-предшественницы после стадий дифференцировки образуется мегакариобласт и промегакариоцит. В ходе дифференцировки мегакариоцитах экспрессируются типичные маркеры тромбоцитарно-мегакариоцитарной линии -комплексы гликопротеинов ГП ПЬ-Ша и ГП 1Ь-У-1Х [Воронина Е.Н. и др., 2006]. Главным регулятором образования тромбоцитов является гематопоэтический цитокин тромбопоэтин. Рецептор тромбопоэтина относится к группе рецепторов, сигнальные эффекты которых инициируются в результате активации Янус-киназ и экспрессируется на плазматических мембранах в предшественниках мегакариоцитов, в зрелых мегакариоцитах и тромбоцитах. Постоянно

синтезируемый печенью тромбопоэтин частично удаляется из кровотока в результате взаимодействия с тромбоцитами. Общее снижение тромбоцитарной массы приводит к увеличению концентрации свободного тромбопоэтина, в связи с чем увеличивается количество цитокина, попадающего в костный мозг, что ведет к ускорению тромбоцитопоэза [Мазуров А.В., 2011]. Альтернативный механизм регуляции количества тромбоцитов описан Grozovsky R. с соавт., в исследовании которого показано, что десиалированные тромбоциты, связанные с рецептором Ашвелла-Морелли стимулируют экспрессию мРНК тромбопоэтина через JAK2 [Grozovsky R, Begonja AJ, Liu K, et al., 2015].

К специфическим органеллам тромбоцитов относятся три типа гранул: а-гранулы, плотные гранулы и лизосомы. Больше всего в тромбоците а-гранул, которых насчитывается от 60 до 80 штук. В покое они расположены изолированно друг от друга, что указывает на наличие организованной структуры цитоплазматической матрицы [Michelson AD., 2013]. Гранулы содержат фактор Виллебранда, фактор V, тромбоспондин, Р-селектин, фибриноген. Плотные гранулы меньше, чем а-гранулы, представлены в небольшом количестве (3-8 штук) и обладают широкой морфологической вариабельностью. Их отличительной особенностью является наличие электронно-непрозрачного тела внутри, отделенного от окружающей мембраны пустым пространством. Плотные гранулы содержат адениновые нуклеотиды, включая АДФ и АТФ, серотонин, пирофосфат, ионы Са2+ и магний.

Лизосомальные гранулы содержат фосфатазы, арилсульфатазы, кислые гидролазы [Бышевский А.Ш. и др., 1999]. Тромбоцит, как и все другие клетки животного происхождения, окружен двухслойной фосфолипидной мембраной, в которую встроены рецепторные гликопротеины, взаимодействующие со стимуляторами (агонистами) адгезии и агрегации этих клеточных элементов. Из этих ГП наиболее важны для реализации гемостатической функции ГП Ib/V/IX,

взаимодействующий с фактором Виллебранда, и ГП ПЬ/Ша, связывающиеся с фибриногеном и другими агонистами агрегации.

Тромбоцитам принадлежит ведущая роль в первичной остановке кровотечений. В случае повреждения кровеносного сосуда тромбоциты подвергаются воздействию различных веществ, инициирующих процессы адгезии (прилипание клеток к поврежденной поверхности) и агрегации (склеивание тромбоцитов друг с другом), в результате которых образуется тромбоцитарная пробка [Мазуров А.В., 2011].

Образование тромбоцитарного тромба осуществляется в три стадии: инициация, распространение и стабилизация. При повреждении сосуда циркулирующие тромбоциты могут взаимодействовать с обнажившимся коллагеном и соединенными с ним мультимерами фактора фон Виллебранда. Это обеспечивает формирование монослоя тромбоцитов, который поддерживает генерацию тромбина и присоединение дополнительных тромбоцитов. Ключевым в этих событиях является фВ-зависимое связывание тромбоцитов (ГП 1Ь и ГП 11Ь/111а) и последующая внутриклеточная передача сигнала (ГП VI, ГП 1Ь и ГП 1а/11а), которая вызывает распространение тромбоцитов по стенке сосуда и взаимодействия друг с другом. Привлечение дополнительных тромбоцитов происходит благодаря локальному накоплению агонистов, включая АДФ и тромбоксан А2, которые высвобождаются из кровяных пластинок [МгсЬеЬоп Д.Б., 2013].

В 1990-х годах была предложена пространственная теория свертывания крови Ф.И. Атауллахановым с соавт. Согласно этой теории, свертывание крови нельзя сводить к единой и двумерной биохимической схеме, так как его части разнесены в пространстве, и белки могут попадать из одного участка в другой только с помощью диффузии или переноса потоком крови [Атауллаханов Ф.И., Волкова Р.И., Гурия Г.Т. и др., 1995; Шакирова Р.И., Пантелеев М.А., Дойникова А.Н. и др., 2012].

Основными рецептором коллагена на поверхности тромбоцитов служат ГП VI и ГП 1а/11а. которые связывают коллаген напрямую, в то время как ГП 1Ь и ГП

IIb/IIIa связывают коллаген через фактор Виллебранда. Согласно существующей модели коллаген вызывает кластеризацию рецептора ГП VI, что ведет к его фосфорилированию киназами семейства Src. Дальнейшие события включают активацию ФЛСТ2, которая гидролизует фосфотидилинозитол-дифосфат до диацилглицерола и фосфотидилинозитол-трифосфата, а также способствует синтезу ТХА2 [Li Z., Delaney M., O'Brien KA. et al., 2010]. И3Ф открывает кальциевые каналы тубулярной системы тромбоцита, увеличивая цитоплазматическую концентрацию кальция. ДАГ активирует ПК С, которая фосфорилирует соответствующие сигнальные белки.

АДФ опосредует свои эффекты посредством взаимодействия с пуринергическими рецепторами, обозначенными как P2Y1 и P2Y12. P2Y1 рецепторы связываются с Gq белком, P2Y12 рецепторы связываются с членами семейства белков Gi. Рецептор P2Y1 обеспечивает изменение формы и инициацию АДФ-индуцированной активации и первичной, обратимой агрегации тромбоцитов, в то время как P2Y12 необходим для усиления активирующего сигнала. Взаимодействие АДФ с P2Y1 приводит к активации Gq-белка с последующей активацией ФЛС и образованием ДАГ и И3Ф. Эти вторичные посредники, в свою очередь, стимулируют активацию ПК С и мобилизацию ионов кальция соответственно. Связывание АДФ с P2Y12 приводит к ингибированию аденилатциклазы и снижению уровня цАМФ в тромбоцитах. Однако, даже в высоких концентрациях, АДФ является сравнительно слабым активатором ФЛС.

Рисунок 1 - Механизм АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов (цитировано из Zhang S., 2016 с изменениями); красным цветом выделен ЦОГ-зависимый путь активации, синим цветом - ЦОГ-1-независимый путь. Обозначения: PKA - протеинкиназа А, PI3K - фосфоинозитол-3 киназа, PLA2 - фосфолипаза А2, ФЛ - фосфолипиды, АК - арахидоновая кислота, ЦОГ-1 - циклооксигеназа-1, TXA2 - тромбоксан А2, PLC - фосфолипаза С.

Активация тромбоцитов посредством АДФ включает в себя несколько сигнальных путей (рисунок 1). Агрегация требует участия интегрина ГП ПЬ/Ша с растворимым фибриногеном. На поверхности тромбоцитов есть два типа рецепторов к АДФ - Р2У1 и Р2У12, которые относятся к классу 7ТМ-рецепторов и взаимодействуют с О-белками. Взаимодействие АДФ с рецептором Р2У1 приводит к активации Од-белка с последующей активацией фосфолипазы С и образованием диацилглицерола и инозитолтрифосфата, которые стимулируют активацию протеинкиназы С и мобилизацию ионов кальция. Он, в свою очередь, стимулирует синтез тромбоксана А2 по ЦОГ-зависимому пути через активацию фосфолипазы А2.

Связывание АДФ с P2Y12 приводит к активации сопряженного с ним Gi белка, ингибированию аденилатциклазы и снижению уровня цАМФ в тромбоците. Кроме того, связанная с этим рецептором последующая активация Rapl необходима для ЦОГ-независимо преобразования интегрина ГП IIb/IIIa и ЦОГ-зависимой стимуляции синтез TXA2. Исследования показывают, что АДФ-индуцированная секреция гранул происходит через совместное стимулирование Gaq и Gai сигнальных путей, а рецептор P2Y12 играет важную роль в ТХА2-опосредованном высвобождении альфа-гранул. Таким образом, в АДФ-индуцированную агрегацию вовлечены как ЦОГ-зависимые, так и ЦОГ-независимые механизмы. Очевидно, что их соотношение может меняться, и, как следствие, будет наблюдаться неодинаковый ответ на терапевтическое воздействие, направленное на блокировку определенной точки в этом каскаде реакций.

Тромбоксан А2 синтезируется тромбоцитами из арахидоновой кислоты и служит для усиления сигналов активации, вызванных другими агонистами. После взаимодействия с агонистами, арахидоновая кислота освобождается из мембранных фософолипидов, затем преобразуется в TXA2 в реакции с участием фермента циклооксигеназы-1 (ЦОГ-1) и тромбоксан-синтазы. ЦОГ-1 присутствует в тромбоцитах, эндотелиальных клетках, слизистой желудка, почках и является гемсодержащим мембрано-связанным ферментом с молекулярной массой 70 кД. Тромбоцитарная ЦОГ-1 регулирует превращение арахидоновой кислоты в нестабильный промежуточный продукт - простагландин H2, который в результате дальнейшей его активации тромбоксансинтетазой преобразуется в форму -тромбоксан A2.

ТХА2 - кратковременно действующий стимулятор агрегации [Feher G., Feher A., Pusch G. et al., 2010]. Он связывается с тромбоксановыми рецепторами а и ß, что вызывает обогащение внешней мембраны ФЛС, а также вызывает Gi-зависимое ингибирование аденилатциклазы. ТХА2 также является мощным вазоспастическим агентом [Michelson A.D., 2013; Jennings L.K., 2009; Gresele P., 2002].

Тромбин действует на тромбоциты и другие клетки за счет связывания со специальными рецепторами - рецепторами, активируемыми протеазами (PARs). PARs - семейство рецепторов, связанные с G-белками (GPCRs), опосредуют реакции с участием тромбина в клетках. Тромбин специфично связывает и расщепляет PAR1; при этом важное значение имеет расщепление N-концевой пептидной связи, что приводит к образованию нового N-конца, который взаимодействует с другим участком рецептора. Это взаимодействие и приводит к активации сопряженных с рецептором G-белков и передачи активационного сигнала внутрь клетки. Активация тромбоцитов тромбином вызывает изменение формы тромбоцитов, высвобождение содержимого гранул, в том числе АДФ и тромбоксана А2 и интегрин-опосредованную агрегацию. АДФ и тромбоксан A2 дополнительно действуют на тромбоциты, создавая положительную обратную связь для усиления активации [Maragoudakis M.E., 2009].

1.2 Изменения в системе тромбоцитарного гемостаза при хронических

миелопролиферативных опухолях

Сосудистый тромбоз и геморрагические осложнения определяют доминирующие симптомы и причины смерти больных при хронических миелопролиферативных опухолях [Manoharan A., Gemmell R., Brighton T. et al., 1999; Шмелева В.М., Абдулкадыров К.М., Бессмельцев С.С., 2012]. В соответствии с обновленными критериями ВОЗ для уточнения вариантов Ph-негативных ХМО рекомендован тест определения мутаций в гене JAK2 и в гене MPL [Tefferi A., Thiele J., Orazi A. et al., 2007]. Мутация V617F в гене JAK2 выявляется в 90-95% случаев истинной полицитемии, 50-70% случаев эссенциальной тромбоцитемии (ЭТ), 4050% случаев миелофиброза [Haferlach T., Bacher U., Kern W. et al., 2008]. Ген JAK2 кодирует тирозинкиназу, участвующую в передаче сигнала от рецепторов цитокинов и факторов роста к ядру клетки. Мутация V617F вызывает конститутивную активацию рецептора без участия лиганда, что приводит к активации пролиферации

клетки и блокаде процессов апоптоза [Levine R.L., Wadleigh M., Cools J. et al., 2005]. Мутация в гене рецептора тромбопоэтина (MPL) встречается всего в 5-10% случаев ЭТ и ПМФ [Tefferi A., 2015]. В конце 2013 года двумя независимыми группами исследователей была открыта мутация в гене кальретикулина (CALR), которая встречается в 20-30% случаев JAK2-отрицательных ЭТ и ПМФ [T. Klampfl, H. Gisslinger, A.S. Harutyunyan et al., 2013; Nangalia J., Massie C.E., Baxter E.J. et al., 2013]. Недавние исследования показали, что клинические проявления у пациентов ЭТ с мутацией в гене JAK2 и в гене CALR отличаются: мутация CALR характеризуется более высоким тромбоцитозом, но при этом значительно меньшим риском возникновения тромботических осложнений [Rumi E., Pietra D., Ferretti V. et al., 2014; Gangat N., Wassie E.A., Lasho T.L. et al., 2015; Al Assaf C., Van Obbergh F., Billiet J. et al., 2015]. В расширенной группе пациентов с ЭТ Rotunno G. et al. обнаружил, что частота тромбозов составляла 13,5% в группе пациентов с мутацией CALR и 30,1% среди пациентов с JAK2V617F (p=0,011) [Rotunno G., Mannarelli C., Guglielmelli P. et al., 2014]. Предполагается, что увеличение активации лейкоцитов и образование тромбоцитарно-лейкоцитарных комплексов может являться дополнительным фактором увеличения риска тромбозов, наряду с увеличением количества тромбоцитов [Arellano-Rodrigo E., Alvarez-Larran A., Reverter JC et al., 2006].

Качественные дефекты тромбоцитов могут способствовать гемостатическим нарушениям, наряду с увеличением вязкости цельной крови или повышенным количеством тромбоцитов [Landolfi R., Gennaro L., Falanga A., 2008]. Показано, что у 29% больных ИП и у 14% пациентов с диагнозом ЭТ возникают тромбозы различной локализации, а кровотечения наблюдаются в 11% случаев ЭТ, 7% случаев ИП и 17% случаев ПМФ [Duangnapasatit B., Rattarittamrong E., Rattanathammethee T. et al., 2015]. В большом метаанализе 11 ретроспективных исследований, включающих 800 пациентов с ЭТ, установлено, что бессимптомное течение ЭТ характерно лишь для

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Столяр Марина Александровна, 2019 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. 12-hydroxyeicosatetraenoic acid is associated with variability in aspirin-induced platelet inhibition / B.H. Maskrey, G.F. Rushworth, M.H. Law [et al.] // J Inflamm (Lond). - 2014. - Режим доступа: http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4209229/

2. A comparison of six major platelet function tests to determine the prevalence of aspirin resistance in patients with stable coronary artery disease / M. Lordkipanidze, C. Pharand, E. Schampaert [et al.] // European Heart Journal. - 2007. - Vol. 28, №14. - P. 1702-1708.

3. A multiparametric index of platelet in vitro aggregation in cerebrovascular disease / P.P. Gazzaniga, P. Ferroni, C. Mina, F.M. Pulcinelli, P.A. Rizzo // Ital J Neurol Sci. - 1987. - Vol. 8, №6. - P. 561-566.

4. Abnormalities of platelet aggregation in chronic myeloproliferative disorders / S. Avram, A. Lupu, S. Angelescu [et al.] // J.Cell.Mol.Med. - 2001. - Vol. 5, №1. - P. 79-87.

5. Acquired von Willebrand disease in myeloproliferative disorders / P.J. van Genderen, H. Leenknegt, J.J. Michiels, U. Budde // Leuk Lymphoma. - 1996. -Vol. 22. - P. 79-82.

6. Acquired von Willebrand disease in myeloproliferative disorders / J.P. Van Genderen, H. Leenknegt, J.J. Michiels, U. Budde // Leukemia and Lymphoma. -1996. - Vol. 22, Suppl 1. - P.79-82.

7. ADP-induced platelet aggregation and thrombin generation are increased in Essential Thrombocythemia and Polycythemia Vera / Panova-Noeva M., Marchetti M., Russo L. [et al.] // Thromb Res. - 2013. - Vol. 132, №1. - P. 88-93.

8. Analysis of phenotype and outcome in essential thrombocythemia with CALR or JAK2 mutations / C. Al Assaf, F. Van Obbergh, J. Billiet [et al.] // Haematologica. -2015. - Vol.100, №7. - P.893-897.

9. Antiplatelet Trialists' Collaboration Collaborative meta-analysis of randomised trials of antiplatelet therapy for prevention of death, myocardial infarction, and stroke in high-risk patients / Antiplatelet Trialists' Collaboration // Br Med J. - 2002. - Vol. 324, №7330. - P. 141.

10. Antithrombotic drugs and subarachnoid haemorrhage risk. A nationwide case-control study in Denmark / A. Pottegárd, L.A. García Rodríguez, F.R. Poulsen [et al.] // Thromb Haemost. - 2015. - Vol. 114, №5 - Режим доступа: http: //th. schattauer. de/en/contents/archive/issue/special/manuscript/24642. html

11. Aspirin "resistance" and risk of cardiovascular morbidity: systematic review and meta-analysis / G. Krasopoulos, S.J. Brister, W.S. Beattie [et al.] // BMJ. - 2008. -Vol. 336, №7637. - P. 195-198.

12. Aspirin and clopidogrel resistance / E.D. Michos, R. Ardehali, R.S. Blumenthal [et al.] // Mayo Clin Proc. - 2006. - Vol. 81, №4. - P. 518-526.

13. Aspirin effects on platelets using whole blood tested by platelet aggregometry: a comparative study for test validation in a clinical hemostasis laboratory / W.Z. Abdullah, S.A. Bakar, W.S. Wan Mohd Zain [et al.] // Lab Medicine. - 2013. - Vol. 44, №1. - P. 90-96.

14. Aspirin extrusion from human platelets through multidrug resistance protein-4-mediated transport evidence of a reduced drug action in patients after coronary artery bypass grafting / Mattiello T., Guerriero R., Lotti L.V. [et al.] // J Am Coll Cardiol. - 2011. - Vol. 58, №7. - P. 752-761.

15. Aspirin non-responsiveness as measured by PFA-100 in patients with coronary artery disease / K. Andersen, M. Hurlen, H. Arnesen, I. Seljeflot // Thromb Res. -2002. - Vol. 108, №1. - P. 37-42.

16. Aspirin resistance [Электрон. ресурс] / K. Mansour, A.T. Taher, Musallam K.M., S. Alam. - 2009. - Режим доступа: http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2778169/

17. Aspirin resistance is associated with a high incidence of myonecrosis after nonurgent percutaneous coronary intervention despite clopidogrel pretreatment / W.H. Chen, P.Y. Lee, W. Ng [et al.] // Cardiol. - 2004. - Vol. 43, №6. - P. 1122-1126.

18. Aspirin resistance is more common in lacunar strokes than embolic strokes and is related to stroke severity / N.A. Englyst, G. Horsfield, J. Kwan, C.D. Byrne // J Cereb Blood Flow Metab. - 2008. - Vol. 28, №6. - P.1196-1203.

19. Aspirin resistance: Position paper of the Working Group on Aspirin Resistance / A. D. Michelson, M. Cattaneo, J. W. Eikelboom et al. // J. Thromb. Hemostasis. -2005. - Vol. 3, №6. - P. 1309-1311.

20. Aspirin-insensitive thromboxane biosynthesis in essential thrombocythemia is explained by accelerated renewal of the drug target / S. Pascale, G. Petrucci, A. Dragani [et al.] // Blood. - 2012. - Vol.119, №15. - P.3595-35603.

21. Aspirin-insensitive thromboxane biosynthesis in essential thrombocythemia is explained by accelerated renewal of the drug target / S. Pascale, G. Petrucci, A. Dragani [et al.] // Blood. - 2012. - Vol. 119, №15. - P. 3595-3603.

22. CAST (Chinese Acute Stroke Trial) Collaborative Group. Randomised placebo controlled trial of early aspirin use in 20 000 patients with acute stroke // Lancet. -1997. - Vol. 349. - P. 1641-1649.

23. Cattaneo, M. Resistance to antiplatelet drugs: molecular mechanisms and laboratory detection / M. Cattaneo // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2007. - Vol. 5. - P. 230-237.

24. Cerebral vein thrombosis in patients with Philadelphia-negative myeloproliferative neoplasms. A European Leukemia net Study / I. Martinelli, V. De Stefano, A. Carobbio, M.L. Randi [et al.] // Am J Hematol. - 2014. - Vol. 89, №11. - E200-5.

25. Cerebrovascular events as presenting manifestations of Myeloproliferative Neoplasm / E. Ong, F. Barraco, N. Nighoghossian [et al.] // Rev Neurol (Paris). -2016. - Vol. 172, №11. - P. 703-708.

26. Clearance of circulating activated platelets in polycythemia vera and essential thrombocythemia / N. Maugeri, S. Malato, E.A. Femia [et al.] // Blood. - 2011. -Vol. 118, №12. - P. 3359-3366.

27. Clinical and Laboratory Significance of Defective P2Y12 Pathway Function in Patients with Myeloproliferative Neoplasms: A Pilot Study / H. Chang, L.Y. Shih, A.D. Michelson [et al.] // Acta Haematol. - 2013. - Vol. 130, №3. - P. 181-187.

28. Clinical importance of aspirin and clopidogrel resistance / G. Feher, A. Feher, G. Pusch [et al.] // World Journal of Cardiology. - 2010. - Vol. 2, №7. - P. 171-186.

29. Clinical Manifestations and Risk Factors for Complications of Philadelphia Chromosome-Negative Myeloproliferative Neoplasms / B. Duangnapasatit, E. Rattarittamrong, T. Rattanathammethee [et al.] // Asian Pac J Cancer Prev. - 2015. -Vol. 16, №12. - P. 5013-5018.

30. Collaborative meta-analysis of randomized trials of antiplatelet therapy for prevention of death, myocardial infarction, and stroke // BMJ. - 2002. - Vol. 324, № 7326. - P. 71-86.

31. Collaborative overview of randomized trials of antiplatelet therapy. Prevention of death, myocardial infarction, and stroke by prolonged antiplatelet therapy in various categories of patients // BMJ. - 1994. - Vol. 308., № 6943. - P. 81-106.

32. Christopher, N. F. Mechanisms of aspirin resistance / N.F. Christopher, Ferro A. // Pharmacology & Therapeutics. - 2014. - Vol. 141. - P. 69-78.

33. Current diagnostic and therapeutic approaches to patients with acquired von Willebrand syndrome: a 2013 update / A.B. Federici, U. Budde, G. Castaman [et al.] // Semin Thromb Hemost. - 2013. - Vol. 39. - P. 191-201.

34. Cyclooxygenase inhibitors and the antiplatelet effects of aspirin / F. Catella-Lawson, M.P. Reilly, S.C. Kapoor [et al.] // N Engl J Med. - 2001. - Vol. 345, №25. - P. 1809-1817.

35. Defining the Thrombotic Risk in Patients with Myeloproliferative Neoplasms / F. Vianello, A. Battisti, G. Cella [et al.] // The Scientific World Journal. - 2011. - Vol. 11. - P. 1131-1137.

36. Determination of aspirin responsiveness by use of whole blood platelet aggregometry / B.T. Ivandic, E. Giannitsis, P. Schlick [et al.] // Clin Chem. - 2007.

- Vol. 53, №4. - P.614-619.

37. Development of aspirin resistance in persons with previous ischemic stroke / C.M. Helgason, K.M. Bolin, J.A. Hoff [et al.] // Stroke. - 1994. - Vol. 25, №12. - P. 2331-2336.

38. Efficacy and safety of low-dose aspirin in polycythemia vera / R. Landolfi, R. Marchioli, J. Kutti [et al.] // N Engl J Med. - 2004. - Vol. 350, №2. - P. 114-124.

39. Elliott, M.A. Thrombosis and haemorrhage in polycythaemia vera and essential thrombocythaemia / M.A. Elliott, A. Tefferi // Br J Haematol. - 2005. Vol. 128, № 3. - P. 275-290.

40. Erythropoietin does not increase whole-blood platelet aggregation in vitro / J.E. Taylor, J.F. Belch, I.S. Henderson, W.K. Stewart // Nephrol. Dial. Transplant. -1994.

- Vol. 9, №5. - P. 556-558.

41. Expert Consensus Document on the Use of Antiplatelet Agents: The Task Force on the Use of Antiplatelet Agents in Patients with Atherosclerotic Cardiovascular Disease of the European Society of Cardiology / C. Patrono, F.Bachmann, C. Baigent [et al.] // Eur. Heart J. - 2004. - Vol. 25, №2. - P. 166-181.

42. Ezumi, Y. Thrombopoietin, c-Mpl ligand, induces tyrosine phosphorylation of Tyk2, JAK2, and STAT3, and enhances agonists-induced aggregation in platelets in vitro / Y. Ezumi, H. Takayama, M. Okuma // FEBS Lett. - 1995. - Vol. 374, №1. - P. 4852.

43. Frequency of aspirin resistance in patients with congestive heart failure treated with antecedent aspirin / D.C. Sane, S.A. McKee, A.I. Malinin, V.L. Serebruany // Am J Cardiol. - 2002. - Vol. 90, №8. - P. 893-895.

44. Gender differences in platelet aggregation in healthy individuals / M. Otahbachi, J. Simoni, G. Simoni [et al.] // J. Thromb. - Thrombolysis. - 2010. - Vol. 30, №2. - P. 184-191.

45. Gender, race and diet affect platelet function tests in normal subjects, contributing to a high rate of abnormal results / C.H. Miller, A.S. Rice, K. Garrett [et al.] // Br. J. Haematol. - 2014. - Vol. 165, №6. - P. 842-853.

46. Gresele, P. Platelets in Thrombotic and Non-Thrombotic Disorders: Pathophysiology, Pharmacology, and Therapeutics / P. Gresele. New York: Cambridge University Press, 2002. - p.

47. Gubitz, G. Antiplatelet therapy for acute ischaemic stroke. Cochrane Database of Systematic Reviews (computer file) / G. Gubitz, P. Sandercock, C. Counsell // 2000. - №2. - CD000029.

48. Hankey, G. Aspirin resistance / G. Hankey, J. Eikelboom // Lancet. - 2006. Vol. 367, № 9510. - P. 606-617.

49. Harrison, P. Platelet function analysis / P. Harrison // Blood Reviews. - 2005. - Vol. 19, №2. - P. 111-123.

50. Impact of calreticulin mutations on clinical and hematological phenotype and outcome in essential thrombocythemia / G. Rotunno, C. Mannarelli, P. Guglielmelli [et al.] // Blood. - 2014. - Vol. 123, №10. - P. 1552-1555.

51. Incidence and risk factors for bleeding in 1104 patients with essential thrombocythemia or prefibrotic myelofibrosis diagnosed according to the 2008 WHO criteria / G. Finazzi, A. Carobbio, J. Thiele [et al.] // Leukemia. - 2012. - Vol. 26, №4. - P. 716-719.

52. Increased platelet activation and abnormal membrane glycoprotein content and redistribution in myeloproliferative disorders / M.K. Jensen, P. de Nully Brown, B.V. Lund [et al.] // Br J Haematol. - 2000. - Vol. 110, №1. - P. 116-124.

53. Increased platelet and leukocyte activation as contributing mechanisms for thrombosis in essential thrombocythemia and correlation with the JAK2 mutational

status / E. Arellano-Rodrigo, A. Alvarez-Larran, JC Reverter [et al.] // Haematologica. - 2006. - Vol. 91, №2. - P.169-175.

54. Increased platelet activation in the chronic phase after cerebral ischemia and intracerebral hemorrhage / F. van Kooten, G. Ciabattoni, PJ Koudstaal, DW Dippel [et al.] // Stroke. - 1999. - Vol. 30, №3. - P. 546-549.

55. Influence of the JAK2 V617F Mutation and Inherited Thrombophilia on the Thrombotic Risk among Patients with Myeloproliferative Disorders / M. Tevet, R. Ionescu, C. Dragan, A.R. Lupu // Maedica (Buchar). - 2015. - Vol.10, №1. - P.27-32.

56. Influence of the sample anticoagulant on the measurements of impedance aggregometry in cardiac surgery / C. Solomon, M. Winterhalter, I. Gilde [et al.] // Med Devices (Auckl). - 2008. - №1. - P. 23-30.

57. International Stroke Trial Collaborative Group. The International Stroke Trial (IST): a randomised trial of aspirin, subcutaneous heparin, both, or neither among 19,435 patients with acute ischaemic stroke. - Lancet. - 1997. - Vol. 349, №9065. - P. 1569-1581.

58. Is arachidonic acid stimulation really a test for the response to aspirin? Time to think again? / B. Olechowski, A. Ashby, M. Mariathas [et al.] // Expert Rev Cardiovasc Ther. - 2017. - Vol.15, №1. - P. 35-46.

59. Iwamoto, T. Platelet activation in the cerebral circulation in different subtypes of ischemic stroke and Binswanger's disease. / T. Iwamoto, H. Kubo, M. Takasaki // Stroke. - 1995. - Vol. 26, №1. - P. 52-56.

60. JAK2V617F allele burden and thrombosis: a direct comparison in essential thrombocythemia and polycythemia vera / Carobbio A., Finazzi G., Antonioli E. [et al.] // Exp Hematol. - 2009. - Vol.37, №9. - P.1016-1021.

61. JAK2 or CALR mutation status defines subtypes of essential thrombocythemia with substantially different clinical course and outcomes / Rumi E, Pietra D, Ferretti V. [et al.] // Blood. - 2014. - Vol. 123, №10. - P.1544-51.

62. Jarvis, G.E. Platelet aggregation in whole blood: impedance and particle counting methods / G.E. Jarvis // Methods in Molecular Biology. - 2004. - Vol. 272. - P. 7787.

63. Jedlitschky, G. Transporters in human platelets: physiologic function and impact for pharmacotherapy / G. Jedlitschky, A. Greinacher, K. Kroemer // Blood. - 2012. -Vol. 119. - P. 3394-3402.

64. Jennings, L.K. Role of platelets in atherothrombosis / L.K. Jennings // Am J Cardiol.

- 2009. - Vol. 103, 3 Suppl. - P. 4A-10A.

65. Kaushansky, K. Thrombopoietin: the primary regulator of platelet production. / K.

Kaushansky // Blood. - 1995. - Vol. 86. - P. 419-31.

66. Lack of reproducibility of assessment of aspirin responsiveness by optical aggregometry and two platelet function tests / P. Harrison, H. Segal, L. Silver [et al.] // Platelets. - 2008. - Vol. 19, №2. - P. 119-124.

67. Landolfi, R. Thrombosis in myeloproliferative and myelodysplastic syndromes / R Landolfi, L. Di Gennaro // Hematology. - 2012. - Suppl 1. - P. 174-176.

68. Landolfi, R. Thrombosis in myeloproliferative disorders: pathogenetic facts and speculation / R. Landolfi, L. Gennaro, A. Falanga // Leukemia. - 2008. - Vol. 22, №11. - P. 2020-2028.

69. Levine, R.L. Role of JAK-STAT signaling in the pathogenesis of myeloproliferative disorders / R.L. Levine, G. Wernig // Hematology Am Soc Hematol Educ Program.

- 2006. - Vol. 2006, №1. - P. 233-239.

70. Low-dose aspirin increases aspirin resistance in patients with coronary artery disease / P.Y. Lee, W.H. Chen, W. Ng [et al] // Am J Med. - 2005. - Vol. 118, №7. - P. 723727.

71. Lowenberg, E.C. Platelet-vessel wall interaction in health and disease / E.C. Lowenberg, J.C. Meijers, M. Levi // Neth J Med. - 2010. - Vol. 68, № 6. - P. 242251.

72. Maragoudakis, M.E. Thrombin: Physiology and Disease / M.E. Maragoudakis, N.E. Tsopanoglou - Springer, 2009. - 266 p.

73. McMahon, B. Thrombotic and bleeding complications in classical myeloproliferative neoplasms / B. McMahon, B.L. Stein. // Semin Thromb Hemost. - 2013. - Vol. 39, №1. - P. 101-111.

74. Michelson, A.D. Platelet function testing in cardiovascular diseases / A.D. Michelson // Circulation. - 2004. - Vol. 110, №19. - e489-93.

75. Michelson, A.D. Platelets. 3rd ed. / A. D. Michelson - Boston: Academic Press, 2013. - 900 p.

76. Mutations and thrombosis in essential thrombocythemia: prognostic interaction with age and thrombosis history / Gangat N., Wassie E.A., Lasho T.L. [et al.] // Eur J Haematol. - 2015. - Vol. 94, №1. - P.31-36.

77. Narrative review: aspirin resistance and its clinical implications / S. Sanderson, J. Emery, T. Baglin, A.L. Kinmonth // Ann Intern Med. - 2005. - Vol. 142, №5. - P. 370-380.

78. Observation versus antiplatelet therapy as primary prophylaxis for thrombosis in low-risk essential thrombocythemia / A. Alvarez-Larran, F. Cervantes, A. Pereira [et al.] // Blood. - 2010. - Vol. 116, №8. - P. 1205-1210.

79. Optimizing donor heart outcome after prolonged storage with endothelial function analysis and continuous perfusion / R.S. Poston, J. Gu, D. Prastein [et al.] // Ann Thorac Surg. - 2004. Vol. 78, №4. - P. 1362-1370.

80. Paniccia, R., Priora R., Liotta A.A., Abbate R. Platelet function tests: a comparative review / R. Paniccia, R. Priora, A.A. Liotta, R. Abbate // Vasc Health Risk Manag. -2015. №11. - P. 133-148.

81. Passamonti, F. Clinical relevance of JAK2 (V617F) mutant allele burden / F. Passamonti, E. Rumi // Haematologica. - 2009. Vol. 84, №1. - P. 7-10.

82. Pathophysiologic, rather than laboratory-defined resistance drives aspirin failure in ischemic stroke / N. Agayeva, L. Gungor, M.A. Topcuoglu, E.M. Arsava // J Stroke Cerebrovasc Dis. - 2015 - Vol. 24, №4. - P. 745-750.

83. Patrono, C. Aspirin: promise and resistance in the new millennium / C. Patrono, B. Rocca // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008; 28(3): s25-32.

84. Pathophysiologic, rather than laboratory-defined resistance drives aspirin failure in ischemic stroke / N. Agayeva, L. Gungor, M.A. Topcuoglu, E.M. Arsava // J Stroke Cerebrovasc Dis. - 2015. - Vol. 24, №4. - P.745-750.

85. Pettersen, A.A. A brief review on high on-aspirin residual platelet reactivity / A.A. Pettersen, H. Arnesen, I. Seljeflot // Vascul Pharmacol. - 2015. - Vol. 67. - P. 6-9.

86. Plasma levels of von Willebrand factor in the etiologic subtypes of ischemic stroke / E. Hanson, K. Jood, S. Karlsson [et al.] // J Thromb Haemost. - 2011. - Vol. 9, №2. - P. 275-281.

87. Platelet activation and thrombosis: studies in a patient with essential thrombocythemia / P. Nurden, C. Bihour, M. Smith [et al.] // Am J Hematol 1996. -Vol. 51. P. 79-84.

88. Platelet aggregation in whole blood is a paradoxical predictor of ischaemic stroke: Caerphilly prospective study revisited / D.S. Sharp, Y. Ben-Shlomo, A.D. Beswick, M.E. Andrew, P.C. Elwood // Platelets. - 2005. - Vol. 16, № 6. - P. 320-328.

89. Platelet Function Testing: Light Transmission Aggregometry. - Режим доступа: http: //th. schattauer. de/en/contents/archive/issue/special/manuscript/24642. html

90. Platelet Function Testing in Patients with Acute Ischemic Stroke: An Observational Study / F. Rosafio, N. Lelli, S. Mimmi [et al.] // J Stroke Cerebrovasc Dis. - 2017. -Vol. 26, №8. - P. 1864-1873.

91. Platelet volume, aggregation, and adenosine triphosphate release in cerebral thrombosis / H. Tohgi, H. Suzuki, K. Tamura, B. Kimura // Stroke. - 1991. - Vol. 22, №1/ - P. 17-21.

92. Profile and prevalence of aspirin resistance in patients with cardiovascular disease / P.A. Gum, K. Kottke-Marchant, E.D. Poggio [et al.] // Am J Cardiol. - 2001. - Vol. 88, №3. - P. 230-235.

93. Proposals and rationale for revision of the World Health Organization diagnostic criteria for polycythemia vera, essential thrombocythemia, and primary myelofibrosis: recommendations from an ad hoc international expert panel / A. Tefferi, J. Thiele, A. Orazi [et al.] / Blood. - 2007. - Vol. 110. - P. 1092-1097.

94. Prospective study of markers of hemostatic function with risk of ischemic stroke. The Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study Investigators / Folsom A.R., Rosamond W.D., Shahar E. [et al.] // Circulation. - 1999. - Vol. 100. - P. 736-742.

95. Randomised trial of intravenous streptokinase, oral aspirin, both, or neither among 17,187 cases of suspected acute myocardial infarction: ISIS-2. ISIS-2 (Second International Study of Infarct Survival) Collaborative Group // Lancet. - 1988. -Vol. 2, №8607. - P. 349-360.

96. Recommendations for the standardization of light transmission aggregometry: a consensus of the working party from the platelet physiology subcommittee of SSC/ISTH / M. Cattaneo, C. Cerlett, P. Harrison [et al.] // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2013. - P. 1183-1189.

97. Resistance to acetylsalicylic acid in patients after ischemic stroke / M. Zytkiewicz, L. Gielwanowska, E. Wojtasinska [et al.] // Pol Arch Med Wewn. - 2008. - Vol. 118, №12. - P. 727-733.

98. Resistance to aspirin and clopidogrel therapy / K.M. Musallam, K. Charafeddine, A. Bitar [et al.] // Int J Lab Hematol. - 2011. - Vol. 33, №1. - P. 1-18.

99. Resistance to aspirin in vitro is associated with increased platelet sensitivity to adenosine diphosphate / L. Macchi, L. Christiaens, S. Brabant [et al.] // Thromb Res. - 2002. - Vol. 107, №1-2. - P. 45-49.

100. Risk factors for arterial and venous thrombosis in WHO-defined essential thrombocythemia: an international study of 891 patients / A. Carobbio, J. Thiele, F. Passamonti [et al.] // Blood. - 2011. - Vol. 117, №22. - P. 5857-5859.

101. Role of a Janus kinase 2-dependent signaling pathway in platelet activation / W.J. Lu, K.C. Lin, S.Y. Huang [et al.] // Thromb Res. - 2014. - Vol. 133, №6. - P. 10881096.

102. Screening for aspirin responsiveness after transient ischemic attack and stroke: comparison of 2 point-of-care platelet function tests with optical aggregometry / P. Harrison, H. Segal, K. Blasbery [et al.] // Stroke. - 2005. - Vol. 36, №5. - P. 10011005.

103. Signaling during platelet adhesion and activation. / Li Z., Delaney M., O'Brien K.A., Du X. // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2010. - Vol. 30, №12. - P. 2341-2349.

104. Singh, S. Aspirin Resistance: Myth or Reality? / S. Singh, S.S. Kothari, V.K. Bahl. -2003. - Vol. 55, №3. - P. 217-222.

105. Singh, S. Aspirin Resistance: Myth or Reality? / S. Singh, S.S. Kothari, V.K. Bahl // Indian Heart J. - 2003. - Vol. 55. - P. 217-222.

106. Somatic CALR mutations in myeloproliferative neoplasms with nonmutated JAK2 / J. Nangalia, C.E. Massie, E.J. Baxter [et al.] // N. Engl. J. Med. - 2013. - Vol. 369, №25. - P. 2391-2405.

107. Somatic mutations of calreticulin in myeloproliferative neoplasms / T. Klampfl, H. Gisslinger, A.S. Harutyunyan [et al.] // N. Engl. J. Med. - 2013. - Vol. 369, №25. -P. 2379-2390.

108. Tefferi, A. Myeloproliferative Neoplasms: A Decade of Discoveries and Treatment Advances / A. Tefferi // Am J Hematol. - 2015. - P. 50-58.

109. The Ashwell-Morell receptor regulates hepatic thrombopoietin production via JAK2-STAT3 signaling / R. Grozovsky, A.J. Begonja, K. Liu [et al.] // Nat Med. -2015. - Vol. 21, №1. - P. 47-54.

110. The diagnosis of BCR/ABL-negative chronic myeloproliferative diseases (CMPD): a comprehensive approach based on morphology, cytogenetics, and molecular markers / T. Haferlach, U. Bacher, W. Kern [et al.] // Ann Hematol. - 2008. - Vol. 87, №1. - P. 1-10.

111. The effect of hematopoietic growth factors on platelet aggregability / A. Kaplan, S. Kaplan, K.F. Marcoe, R. Sauvage, W.P. Hammond // Clin. Appl. Thromb. Hemost. - 1998. - Vol. 4, №4. - P. 238-242.

112. The International Stroke Trial Collaborative Group. The international stroke trial (IST): a randomised trial of aspirin, subcutaneous heparin, both or neither among 19 435 patients with acute ischaemic stroke // Lancet. - 1997. - Vol. 349. - P. 15691581.

113. The PFA-100 detects sub-optimal antiplatelet responses in patients on aspirin / A. Sambola, M. Heras, G. Escolar [et al.] // Platelets. - 2004. - Vol. 17, №7. - P. 439446.

114. The primary and secondary prevention of coronary artery disease: American College of Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines (8th Edition) / R.C. Becker, T.W. Meade, P.B. Berger [et al.] // Chest. - 2008. - Vol. 133, №6. - P. 776S-814S.

115. The role of the Platelet Function Analyzer (PFA)-100 and platelet aggregometry in the differentiation of essential thrombocythemia from reactive thrombocytosis / A.E. Tsantes, A. Dimoula, S. Bonovas [et al.] // Thromb Res. - 2010. - Vol. 125, №2. -P. 142-146.

116. Thrombosis and bleeding in myeloproliferative disorders: identification of at-risk patients with whole blood platelet aggregation studies / A. Manoharan, R. Gemmell, T. Brighton [et al.] // British Journal of Haematology. - 1999. - Vol. 105, №3. - P. 618-625.

117. Thrombosis triggered by severe arterial lesions is inhibited by oral administration of a glycoprotein IIb/IIIa antagonist / J.J. Badimon, B. Meyer, L.P. Feigen, D.A. Baron [et al.] // Eur J Clin Invest. - 1997. - Vol. 27, №7. - P. 568-574.

118. Tiede, A. Diagnosis and treatment of acquired von Willebrand syndrome / A. Tiede // Thromb Res. - 2012. - Vol. 130, Suppl 2. - S2-6.

119. Thrombopoietin signal transduction in purified murine megakaryocytes / J.G. Drachman, D.F. Sabath, N.E. Fox [et al.] // Blood. - 1997. - Vol. 89. - P. 483-492.

120. Use of the platelet function analyser (PFA-100) to quantify the effect of low dose aspirin in patients with ischaemic heart disease / M. Coakley, R. Self, W. Marchant [et al.] // Anaesthesia. - 2005. - Vol. 60, №12. - P. 1173-1178.

121. Variables influencing Multiplate(TM) whole blood impedance platelet aggregometry and turbidimetric platelet aggregation in healthy individuals / U.T. Seyfert, H. Haubelt, A. Vogt [et al.] // Platelets. - 2007. - Vol. 18, №3. - P. 199-206.

122. Virginia, L. Principles of sex-based differences in physiology / L. Virginia, M. Virginia, М. Hay // London: Elsevier, 2004 - 333 p.

123. Whole blood impedance aggregometry for the assessment of platelet function in patients with congestive heart failure (EPCOT Trial) / V.L. Serebruany, M.E. McKenziea, A.F. Meistera [et al.] // The European Journal of Heart Failure. - 2002. - Vol. 4, №4. - P. 461-467.

124. Willoughby, S. Platelets and cardiovascular disease / S. Willoughby, A. Holmes, J. Loscalzo // Eur J Cardiovasc Nurs. - 2002. - Vol. 1, №4. - P. 273-288.

125. Иммунологические методы в оценке функциональной активности тромбоцитов / Сироткина, О.В., Боганькова, Н.А., Ласковец, А.Б., Кухарчик, Г.А. Гайковая, Л.Б., Вавилова, Т.В. // Медицинская иммунология. - 2010. - Т.13, №3. - С. 213218.

126. Мазуров, А.В. Физиология и патология тромбоцитов. / А.В. Мазуров - М.: Литерра, 2011. - 480 с.

127. Мемранные рецепторы тромбоцитов: функции и полиморфизм / Воронина Е.Н., Филипенко М.Л., Сергеевичев Д.С. [и др.] // Информационный вестник ВОГИС. - 2006. - Т.10, №3. - С. 553-564.

128. Пат. 2379684 Российская Федерация, МПК G01N 33/48, G01N 33/15, A61K 31/616 Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты / Иванов В.И., Дорофейков В.В., Вавилова А.В.; патентообладатель ФГБУ «СЗФМИЦ им. В. А. Алмазова» МЗ РФ. - № 2007144412/15; заявл. 29.11.2007; опубл. 20.01.2010, Бюл. №2.

129. Пат. 2413953 Российская Федерация, МПК G01N33/86 Способ диагностики резистентности к ацетилсалициловой кислоте / Гринштейн Ю. И., Филоненко И.В., Савченко А.А., Савченко Е.А., Гринштейн И. Ю.; патентообладатель ГОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ. - № 2009131242/15; заявл. 17.08.2009; опубл. 10.03.2011, Бюл. №7.

130. Приказ Минздрава России от 20.12.2012 № 1237н "Об утверждении стандарта первичной медико-санитарной помощи детям при гемофилии A, гемофилии B, болезни Виллебранда, редких геморрагических коагулопатиях и тромбоцитопатиях, протромботических состояниях, плановая первичная диагностика". 06.03.2013 № 27538.

131. Пространственные аспекты свертывания крови. III. Рост сгустков in vitro / Ф.И. Атауллаханов, Р.И. Волкова, Г.Т. Гурия [и др.] // Биофизика. - 1995. -№40. - С. 1320-1328.

132. Пространственная динамика свертывания крови на модели механического повреждения сосуда: фундаментальные механизмы регуляции и методы диагностики и терапии в кардиологии / Р.И. Шакирова, М.А. Пантелеев, А.Н. Дойникова [и др.] // Практическая медицина. - 2012. - Т.5, №60. - С. 75-80.

133. Резистентность к аспирину: распространенность, известные и предполагаемые причины, принципы диагностики, клинические исходы / Ю. И. Гринштейн, В.

В. Шабалин, И. Ю. Гринштейн [и др.] // Болезни сердца и сосудов. - 2007. - № 4. - С. 4-8.

134. Сисла, Б. Руководство по лабораторной гематологии / Б. Сисла - М.: 2011.352 с.

135. Тромбоциты: (состав, функции, биомедицинское значение) / А. Ш. Бышевский [и др.]. - Тюмень: Изд-во Тюмен. мед. акад., 1996. - 250 с.

136. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению болезни Виллебранда / В.Ю. Зоренко, Е.А. Лихачева, Т.Ю. Полянская, 2013 г.

137. Фрейзер, К.Г. Биологическая вариация: от теории к практике / К.Г. Фрейзер. -М.: Медиздат, 2010. - 168 с.

138. Шмелева, В.М. Частота встречаемости гипергомоцистеинемии у больных хроническими миелопролиферативными заболеваниями и множественной миеломой / В.М. Шмелева, К.М. Абдулкадыров, С.С. Бессмельцев // Гематология и трансфузиология (приложение). - 2012. - №3. - С.89.