Определение фенотипических и молекулярно-генетических характеристик штаммов Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae, выделенных из ликвора детей, больных гнойным бактериальным менингитом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Урбан, Юлия Николаевна

• Урбан, Юлия Николаевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Урбан, Юлия Николаевна

ОГЛАВЛЕНИЕ......................................................................................2

ВВЕДЕНИЕ.........................................................................................4

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................34

1.1.Основные возбудители гнойного бактериального менингита......................34

ХАЛ.Streptococcus pneumoniae. Факторы патогенности, серотипы....................35

1.1. l.Neisseria meningitidis. Факторы патогенности, серогруппы.....................38

1.1.3. Haemophilus influenzae. Факторы патогенности, серотипы.......................40

1.2.Устойчивость основных возбудителей гнойного бактериального менингита к антибиотикам.....................................................................................41

1.3. Лабораторная диагностика гнойного бактериального менингита................44

1.4. Методы внутривидовой дифференцировки и анализ популяционной структуры N.meningitidis, S. pneumoniae и H.influenzae............................................48

1.5. Вакцинопрофилактика.....................................................................54

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.......................................................58

ГЛАВА 2. АНАЛИЗ РАСПОСТРАНЕНИЯ ОСНОВНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНОГО БАКТЕРИАЛЬНОГО МЕНИНГИТА В СТРАНАХ СНГ...............58

2.1.Идентификация возбудителей гнойного бактериального менингита в спинномозговой жидкости..............................................................................58

2.2. Характеристика выделенных штаммов.................................................62

ГЛАВА 3. ПРОФИЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНОГО БАКТЕРИАЛЬНОГО МЕНИНГИТА, ВЫДЕЛЕНЫХ ИЗ СМЖ БОЛЬНЫХ ДЕТЕЙ.........................................67

3.1. Анализ антибиотикочувствительности штаммов S.pneumoniae..................67

3.2. Анализ антибиотикочувствительности штаммов N. meningitidis................71

3.3. Анализ антибиотикочувствительности штаммов H.influenzae..................73

ГЛАВА 4. ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ШТАММОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ СМЖ................................................................................................74

4.1. Мультилокусное сиквенс-типирование штаммов S.pneumoniae..................74

4.2. Мультилокусное сиквенс-типирование штаммов N.meningitidis..................76

4.3. Мультилокусное сиквенс-типирование штаммов Н.influenzae...................78

ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ШТАММОВ S. pneumoniae, ВЫЗЫВАЮЩИХ ИНВАЗИВНЫЕ И НЕИНВАЗИВНЫЕ ФОРМЫ ИНФЕКЦИЙ..................................................................................................80

ГЛАВА 6. АЛГОРИТМ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНОГО

БАКТЕРИАЛЬНОГО МЕНИНГИТА.........................................................84

ЗАКЛЮЧЕНИЕ....................................................................................86

ВЫВОДЫ............................................................................................94

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ......................................................95

ПРЕСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ..............................95

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.....................................................................96

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................................................97

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение фенотипических и молекулярно-генетических характеристик штаммов Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae, выделенных из ликвора детей, больных гнойным бактериальным менингитом»

ВВЕДЕНИЕ. Актуальность темы исследования

Гнойный бактериальный менингит (ГБМ), как форма инфекционной нейропатологии, занимает важное место в структуре заболеваний нервной системы и остается одной из причин летальности и инвалидизации больных. Во всем мире ведущими возбудителями бактериального менингита Neisseria meningitidis (менингококк), Streptococcus pneumoniae (пневмококк) Haemophilus influenzae тип b (Hib) [28, 47,180,181].

Ежегодно в мире по расчетным данным регистрируется более 1,2 миллиона случаев бактериальных менингитов [181]. Показатели заболеваемости и летальности от бактериальных менингитов колеблются в зависимости от региона, страны, конкретного патогена и возрастной группы. При отсутствии лечения уровень летальности может доходить до 70 процентов, а у одного из каждых пяти выживших после бактериальных менингитов могут возникать осложнения, включая тугоухость, неврологические расстройства [28, 29, 181].

Для идентификации N. meningitidis, S. pneumoniae и Н. influenzae широко используются микробиологические методы: бактериологический метод, микроскопический метод, иммунохимический метод (реакция латекс - агглютинации). Хотя бактериологический метод и принято считать золотым стандартом для подтверждения случаев заболевания в условиях клиники, уровень положительных результатов этого исследования относительно низок по причине несоблюдения оптимальных условий хранения и транспортировки материала и/или проведения антибактериальной терапии до взятия клинического материала, а учет результатов реакции латекс - агглютинации носит субъективный характер и может быть сложным для интерпретации [28, 181]. Поэтому в последние годы, для диагностики основных возбудителей бактериального менингита широко применяются молекулярные методы, в частности метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод позволяет обнаружить специфическую ДНК патогенных бактериальных агентов и для этого не требуются живые бактериальные клетки. В настоящее время ПЦР находит широкое применение в диагностике и эпиднадзоре за патоген-

ными бактериальными агентами благодаря своей высокой чувствительности, специфичности и большей производительности [77, 138, 148,181] .

Определение серогруппового/серотипового пейзажа N. meningitidis, S. pneumoniae и Н. influenzae играет важную роль в эпиднадзоре и внедрении вакцин, которые необходимы для профилактики бактериальных менингитов [180].

Своевременная и адекватная антибиотикотерапия бактериального гнойного менингита позволяет снизить смертность и инвалидизацию пациентов [28, 112, 180]. Однако, лечение данного заболевания может быть неэффективными вследствие отсутствия чувствительности к антибактериальным препаратам (АБП) штаммов N. meningitidis, Н. influenzae и S. pneumoniae . Поэтому необходимо определение чувствительности штаммов возбудителя к основным антибиотикам в лабораторных исследованиях. Трудности в выделении культур обуславливают необходимость использования молекулярно-генетических методов для выявления маркеров, определяющих устойчивость к антибиотикам [121, 181].

Для полноценного эпидемиологического надзора за N. meningitidis, Н. influenzae и S. pneumoniae необходимы исследования, которые позволяют проанализировать популяцию возбудителя [108]. Данные об эволюции и закономерностях распространения патогенных бактерий, полученные с помощью метода мультилокусного сиквенс типирования (MJICT), наиболее информативны, так как позволяют определять генетическую связь между штаммами и оценивать степень филогенетического родства возбудителей, а так же дает представления о географическом распределении патогенов [34, 156].

В ряде стран входящих в состав содружества независимых государств (СНГ) для идентификации S.pneumoniae, N.meningitidis, Н.influenzae в лабораториях используются, в основном, бактериологические и серологические методы, и полноценной картины о распространении на этих территориях гнойного бактериального менингита, вызванного данными возбудителями нет. Актуальность работы заключается в необходимости всестороннего изучения циркулирующих штаммов N. meningitidis, S. pneumoniae и Н. influenzae вызывающих гнойный бактериальный менингит в странах СНГ.

Степень разработанности темы исследования

Гнойные бактериальные менингиты по-прежнему остаются серьезной проблемой здравоохранения и, поэтому необходимо внедрение вакцин против патогенов, вызывающих данное заболевание [180, 181]. Для этого, необходимо проводить мониторинг циркулирующих патогенов. Мониторинг, проведенный на этапе после внедрения вакцинации, позволит выявить серогруппо-вые/серотиповые замены циркулирующих возбудителей [44, 181]. В современных условиях, использование молекулярно-генетических методов, совместно с классическими бактериологическими методами позволяет провести полноценный мониторинг циркулирующих патогенов, а использование молекулярных методов для определения детерминант, отвечающих за устойчивость к антибактериальным препаратам позволяет определить природу их устойчивости [44].

В России мониторингом циркулирующих возбудителей ГБМ с использованием, как классических бактериологических методов, так и современных молекулярно-генетических методом занимаются Миронов К.О., Королева И.С. Костюкова Н.Н. Козлова Р.С. , Платонова А.Е. Шипулин Г.А., Савинова Т.А., Сидоренко С.И. и др . [26, 27, 29, 31, 37, 44, 45].

Однако, работ посвященные мониторингу за возбудителями ГБМ с использованием молекулярно-генетических методов в странах СНГ нет, и, до сих пор, остается неясной циркуляция доминирующих возбудителей гнойного менингита в страх СНГ, их антибиотикорезистентность и филогенетические отношения. Данные исследования являются важными для Российской Федерации в связи с географической близостью и миграцией людей из стран входящих в состав содружества независимых государств.

Цель исследования Провести микробиологический и молекулярно-генетический скрининг образцов СМЖ и штаммов из ликвора, полученных от детей, больных гнойным бактериальным менингитом, для оценки фенотипических, молекулярно-генетических и филогенетических свойств S. pneumoniae, N. meningitidis и H.influenzae.

Задачи исследования

1. Провести мониторинг циркуляции N. meningitidis, S. pneumoniae и Н. influenzae в странах СНГ. Определить их серогрупповую и серотиповую принадлежность.

2. Оценить уровень фенотипической антибиотикочувствительности штаммов N. meningitidis, S. pneumoniae и Н. influenzae. Выявить наличие изменений в генах pbpla, pbp2x и pbp2b, обуславливающих снижение чувствительности к пенициллину, и наличие генов mefA и егтВ, ответственных за устойчивость к макролидам, у штаммов S. pneumoniae.

3. Определить доминирующие сиквенс-типы и клональные комплексы штаммов S. pneumoniae, N. meningitidis и Н. influenzae, циркулирующих в странах СНГ, провести анализ филогенетического родства с построением дендрограмм.

4. Установить степень филогенетического родства между штаммами S. pneumoniae, выделенными из СМЖ и со слизистой носоглотки.

5. Разработать алгоритм идентификации возбудителей гнойного бактериального менингита.

Научная новизна

Впервые охарактеризована популяционная структура штаммов S. pneumoniae, N. meningitidis и Н. influenzae, вызывающих гнойный бактериальный менингит у детей в странах СНГ с помощью метода мультилокусного сиквенс-типирования (MJICT). Выявлено, что штаммы S.pneumoniae относились к сиквенс-типам ST 239, 246, 2436, 473, а также ST 230 и ST 1176, в которые вошли штаммы, устойчивые к пенициллину, N.meningitidis - к клональному комплексу ST-11 complex/ET-37 complex и Н. influenzae - к клональному комплексу А1/А2.

Проведено молекулярно-генетическое исследование детерминант антибио-тикорезистентности S. pneumoniae и показано, что устойчивость к пенициллину у S. pneumoniae связана с изменениями в генах, кодирующих чувствительность к пенициллину, а устойчивость к эритромицину обусловлена приобретением соответствующих островков патогенности (генов резистентности к антибиотикам).

Впервые идентифицированы два новых сиквенс-типа N. meningitidis ST-10735 и ST- 10736, которые размещены в международной базе Neisseria PubMLST под идентификационными номерами 28790

(http://pubmlst.org/perl/bigsdb/bigsdb.pl?page=profileInfo&db=::pubmlst neisseria seqd ef&scheme id=l&profile _id= 10735) и 28791 (http ://pubmlst.org/ perl/bigsdb/ bigsdb.pl?page = profilelnfo&db^ pubmlst neisseria seqdef &scheme id=l&profile _id=1073), что способствует повышению эффективности эпидемиологического надзора за менингококковой инфекцией.

Разработанный алгоритм идентификации возбудителей гнойного бактериального менингита позволяет сделать заключение о клинической значимости возбудителя в инфекционном процессе и оптимизировать лечебно-профилактические мероприятия.

Теоретическая и практическая значимость работы

Предложенный алгоритм идентификации инвазивных и неинвазивных штаммов с применением классических бактериологических и молекулярно-генетических методов позволит оценить патогенетическую значимость различных возбудителей гнойного бактериального менингита в инфекционном процессе.

Сведения о составе и распределении серогруппового/серотипового пейзажа N.meningitidis, S.pneumoniae и Н. influenzae в странах СНГ дают возможность обосновать введение в национальный календарь прививок вакцин против данных возбудителей.

Данные о наличии антибиотикорезистентности у штаммов S.pneumoniae и N. meningitidis могут быть использованы для оптимизации антибиотикотерапии гнойных бактериальных менингитов в странах СНГ.

Создан банк ДНК N.meningitidis, S.pneumoniae, Н.influenzae для дальнейших исследований, определения генетической структуры (сиквенс-типы) и определения антибиотикорезистентности, связанной с генетическими изменениями циркулирующих патогенов.

Результаты исследований и разработок внедрены в научно-исследовательскую работу лаборатории клинической микробиологии и биотехно-

логии ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора (Акт внедрения от 24 июля 2014 г.)

Оптимизированные молекулярно-генетические методы типирования основных возбудителей гнойного бактериального менингита используются в Региональном референс-центре по инвазивным бактериальным заболеваниям, управляемым вакцинацией (PPJI по ИБЗ), Европейского Регионального Бюро Всемирной Организации Здравоохранения (ЕРБ ВОЗ) при проведении мониторинга за основными возбудителями гнойных бактериальных менингитов в странах СНГ. Результаты проведенных исследований размещены в базе данных ВОЗ и включены в ежегодно издаваемые бюллетени по наблюдению за возбудителями гнойных бактериальных менингитов в Европейском регионе ВОЗ.

Методология и методы исследования

Методология данной работы спланирована согласно поставленной цели. Основными предметоми исследования стали фенотипические, молекулярно-генетические и филогенетические свойства циркулирующих штаммов, вызывающих ГБМ. Научная литература, посвященная проблеме основных свойств S.pneumoniae, N. meningitidis и H.influenzae была проанализирована формальнологическими методами исследования. Объектом исследования явились штаммы S.pneumoniae, N .meningitidis и H.influenzae, выделенные из спинномозговой жидкости (СМЖ) детей больных ГБМ. В работе были использованы бактериологические, иммунохимические и молекулярно-генетические методы исследования.

Материалы исследования

Результаты диссертационной работы основаны на лабораторном исследовании 810 образцов СМЖ, взятой у детей в возрасте от 1 месяца до 59 месяцев и 29 дней, поступивших в дозорные госпиталя с подозрением на менингит и 47 клинических штаммов. При этом 33 клинических штамма были выделены из исследуемой СМЖ, а 14 штаммов S.pneumoniae были взяты от пациентов клинико-диагностического центра ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского. СМЖ и выделенные из нее клинические штаммы поступали из следующих стран: Азербай-

джан, Армения, Грузия, Белоруссия, Узбекистан и Украина за период 2007-2013 гг. Исследования с применением бактериологических, цитологических, серологических, биохимических и молекулярно-генетических методов проводились в ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора на базе которого располагается Региональная Референс Лаборатории (РРЛ) по инвазивным бактериальным заболеваниям ЕРБ ВОЗ. Часть работы проводилась в Глобальной Референс Лаборатории (ГРЛ) по инвазивным бактериальным заболеваниям расположенной на базе Клинического Диагностического Центра (CDC) г. Атланта, США.

Схема идентификации возбудителей

Изолят

Окрашивание по Граму

Грамположительные диплококки или грамположительные кокки в коротких цепях

Чашка с кровяным агаром

Альфа-гемолитические колонии

Все 3 анализа должны проводиться параллельно

Определение активности каталазы

Проба с оптохином

Культура Каталазоотри-цательна

Установлена вероятная

принадлежность к Streptococcus spp. на основании окрашивания по Граму и теста на катала-зу

Культура чувствительна к опто-хину (зона задержки роста >14 мм в диаметре)

Культура является S pneumoniae (исходя из того, что она также грам-положительна, каталазо-отрицательна)

Культура устойчива к оптохину зона задержки роста (<14 мм в диаметре)

Рисунок 1. Схема определения S.pneumoniae.

Тест на растворимость в желчи

X

Не растворима в желчи

Растворима в желчи

Является S pneumoniae

Z

Определение серотипа

а-гемолитические стрептококки, не относящиеся к виду S pneumoniae

Рисунок 2. Схема определения N.meningitidis

Рисунок 3. Схема определения Н. influenzae.

Идентификация Н. influenzae, N. meningitidis и S.pneumoniae осуществлялась согласно схемам, предложенным в пособии ВОЗ (рисунок 1-3) [181].

Используемые питательные среды

1) Кровяной агар для выделения N. meningitidis и S.pneumoniae на основе колумбийского агара (Oxoid, Великобритания) с добавлением стерильной дефибрированной крови барана в итоговой концентрации 5%.

2) «Шоколадный» агар для выделения Н. influenzae на основе колумбийского агара (Oxoid, Великобритания) с добавлением стерильной дефибрированный крови барана в итоговой концентрации 5%, приготовленный согласно руководству [181].

3) Триптиказо-соевый агар (Oxoid, Великобритания) для определения потребностей в факторах роста Н. influenza.

4) Цистеин-триптиказовый агар (ЦТА) (Oxoid, Великобритания) с добавлением 1% углеводов (полужидкая питательная среда) для проведения тестов на утилизацию углеводов.

5) Агар Мюллера-Хинтон (Oxoid, Великобритания) с добавлением 5% крови барана для определения чувствительности N. meningitidis и S.pneumoniae к антибактериальным препаратам.

6) Питательная среда HTM для определения чувствительности Н. influenzae к антибактериальным препаратам на основе агара Мюллера-Хинтон с добавлением гемина и НАД.

Бактериоскопический метод

Окраску по Грамму мазков из свежих культур проводили согласно общепринятой методике [68]. Учет результатов осуществляли на световом микроскопе «Zeiss» при увеличениях х1СЮ, х400, xlOOO.

Постановка пробы с оптохином

Пробу производили с использованием диагностических дисков (6 мм, 5 мкг) с оптохином (Р) (Oxoid, Великобритания). Использовали 18-24 часовую культуру исследуемых штаммов выращенных на кровяном агаре при 35-37°С в атмосфере с -5% С02. Одноразовой петли, засевали штриховым методом на половину чашки с кровяным агаром. Затем накладывали диск с оптохином на засеянный участок среды на чашке, и помещали чашку в термостат на ночь при 35-37°С с ~5% СОг . Показания снимали через 18-24 часа. Если зона задержки роста была в пределах 14 мм или более, то это свидетельствовало о чувствительности культуры на оптохин.

Анализ на растворимость в желчи

Тест на растворимость в желчи (растворе дезоксихолата натрия) позволяет отличить S. pneumoniae от всех других альфа-гемолитических стрептококков. Культура S. pneumoniae растворима в желчи, тогда как все другие альфа-гемолитические стрептококки обладают резистентностью к желчи. Дезоксихолат натрия (2% водный раствор) лизирует клеточную стенку пневмококков. Для приготовления водного раствора дезоксихолата натрия растворяли 2 г дезоксихолата натрия (Oxoid, Великобритания) в 100 мл стерильной дистиллированной воды. Для анализа использовали 18-24 часовую культуру исследуемых штаммов, выросших на кровяном агаре при 35-37°С в атмосфере с -5% СОг- Одноразовой петлей собирали колонию микроорганизмов и суспендировали в 1,0 мл 0,85% физиологического раствора (мутность в диапазоне 0,5-1,0 по стандарту МакФар-ланд). Суспензию разделяли на 2 равные части (по 0,5 мл на пробирку), в одну пробирку с суспензией добавляли 0,5 мл 2% раствора дезоксихолата натрия, в другую добавляли 0,5 мл 0,85% физиологического раствора. Хорошо перемешивали содержимое каждой пробирки. Инкубировали пробирки в термостате при 35-37°С в атмосфере СОг. Через 2 часа осматривали пробы на предмет возможного исчезновения мутности. Если происходило исчезновение мутности в пробирке, в

которую был добавлен дезокснхолат натрия, то результат интерпретировался как положительный.

Проба на каталазу

Каталаза - это фермент, который разлагает пероксид водорода (Н2О2) на Н20 и 02 . Для этой пробы брали 18-24 часовую культуру, инкубированную при 35-37°С в атмосфере с -5% С02. Одноразовой петлей собирали колонию бактерий и помещали ее на предметное стекло. Затем добавляли 1,0 мл 3% раствора Н202 на стекло и смешивали его с культурой. Отсутствие образования пузырьков в бактериальной суспензии говорило о том, что проба отрицательная. Любое выделение пузырьков из бактериальной суспензии говорило о том, что проба положительная.

Утилизация углеводов: метод с использованием цистин-триптиказового агара

Углеводы 4-х разных типов: глюкоза, мальтоза, лактоза и сахароза добавлялись в пробирки с ЦТА до достижения окончательной концентрации 1% углеводов. В качестве индикатора в питательную среду вносился феноловый красный. С 24 часовой культуры выросшей на кровяном агаре одноразовой петлей снималось 3-5 колоний микроорганизмов. Затем петля с посевным материалом 8 раз погружалась на глубину 10 мм в ЦТА с углеводами. Для каждого углевода использовалась отдельная одноразовая петля. Пробирки с неплотно завинченными крышками помещались в термостат при температуре 35-37°С без атмосферы С02. Инкубировались посевы на ЦТА не менее 72 часа. Появление видимой мутности и желтого окрашивания в верхней части столбика среды указывало на рост культуры и образование кислоты и интерпретировалось как положительный результат.

Тест Ковача на оксидазу

Для приготовления 1% раствора реактива Ковача 0,1 г тетраметил-пара-фенилендиамин дигидрохлорида растворяли в 10 мл стерильной дистиллированной воды, тщательно размешивали и оставляли на 15 минут. На полоску филь-

тровальной бумаги наносили несколько капель приготовленного раствора Ковача и давали высохнуть ей на воздухе. Пластиковой одноразовой петлей снимали часть выросшей за ночь культуры и втирали ее в пропитанную реактивом фильтровальную бумагу. Изменение цвета в течение 10 секунд на фиолетовый свидетельствовало о положительной реакции.

Определение потребности в X (гемин) и V (НАД) факторах роста

Для исследования использовали 18-24 часовую культуру штаммов выросших на "шоколадном" агаре, инкубированных при 35-37°С в атмосфере с -5% СОг. Из выросших культур приготавливали умеренно густую суспензию бактериальных клеток (сопоставимую со стандартом 1,0 по МакФарланду), в триптиказо-соевый бульоне и тщательно перемешивали на вортексе. Пользуясь стерильной петлей, засевали на одну половину чашки с триптиказо-соевым агаром 10 мкл взвеси культуры и давали посеву высохнуть. На чашки с внесенным посевным материалом после высыхания инокулята раскладывали бумажные диски, содержащие гемин, НАД и гемин/НАД. Осторожно переворачивали чашки вверх дном и инкубировали в термостате в течение 18-24 ч при 35-37°С в присутствии -5% СО2 . Затем осматривали рост культуры вокруг бумажных дисков. Н. influenzae давала рост только вокруг бумажного диска, содержащего и гемин и НАД.

Серологический метод

Для определения серогрупп и серотипов культур N. meningitidis, Н. influenzae и S. pneumoniae, выпускаются несколько тест систем, принцип действия которых основан на реакции агглютинации. Для серотипирования Н. influenzae, N. meningitidis и S. pneumoniae использовались коммерческие тест системы Pastorex meningitidis Latex kit (Biorad, США), Pneumotest Latex kit (SSI, Дания), индивидуальные антисыворотки к N. meningitidis (BD, США). Постановку реакций и оценку результатов проводили в соответствии с инструкциями по применению производителя.

Реакция иммунного набухания капсулы (проба Нейфельда)

При помощи стерильной петли снимали культуру S. pneumoniae, выросшую за ночь на кровяном агаре, и суспендировали в 0,5 мл 0,85% физиологического раствора, полученная суспензия была умеренной мутности (примерно соответствовала 0,5 по Макфарланду). Наносили на предметное стекло по 5 мкл индивидуальных антисывороток (SSI, Дания) и метиленовой сини. Добавляли примерно 0,2-1,0 мкл разведенной взвеси клеток и затем перемешивали все три компонента наконечником пипетки. Накрывали взвесь квадратным покровным стеклом площадью 22 мм и инкубировали при комнатной температуре (25°С) в течение 10-15 мин. Учет результатов осуществляли при увеличении с использованием иммерсионного объектива хЮ00 микроскопа «Zeiss». Интерпретацию результатов производили согласно инструкции производителя.

Методы на определение антибиотикочувствительности

Тест на продукцию р-лактамазы

Экспресс-тест на продукцию р-лактамазы может дать клинически значимую информацию еще до получения результатов определения чувствительности к АБП, поэтому его проводили сразу после идентификации Н. influenzae.

Использовались бумажные диски, пропитанные хромогенным нитроцифи-ном (Oxoid, Великобритания), который образует продукт красного цвета при гидролизе под воздействием лактамазы. Предварительно прогревали упаковку, внутри которой находился картридж с дисками, до комнатной температуры (25°С). Увлажняли диск стерильной дистиллированной водой. Собирали несколько колоний исследуемого штамма и равномерно наносили их на поверхность диска. Появление красного цвета говорило о положительной реакции. Реакция считается отрицательной, если по истечении 30 мин окрашивания не произошло. Положительный результат теста на (3- лактамазную активность указывал на то, что штамм Н. influenzae устойчив к пенициллину, ампициллину и амоксициллину.

Определение чувствительности к антибиотикам дискодиффузионным

методом Кирби-Бауэра

Для скрининга штаммов в целях их распределения по следующим категориям: «чувствительные», «промежуточные», «устойчивые» к нескольким антибактериальным препаратам (АБП) использовали диско-диффузионный метод (ДДМ). При тестировании штаммов N. meningitidis и S. pneumoniae данным методом использовался агар Мюллера-Хинтон с добавлением 5% крови барана, для Н. influenzae использовалась среда HTM. Среды разливали в чашки Петри, слой агара был толщиной 4 мм. Перед внесением посевного материала чашки с агаром и пропитанные антибиотиками диски (Oxoid, Великобритания) прогревались до комнатной температуры (25°С). Посевной материал трижды вносился на всю поверхность агара с помощью тампона, при этом поворачивали чашку на 60 градусов после каждого засева, для обеспечения равномерного распределения материала и получения сплошного роста культуры. После чего давали инокуляту высохнуть (примерно 5-10 мин) и помещали диагностические диски на поверхность агара с помощью стерильного пинцета. Диски были расположены на достаточном расстоянии друг от друга, чтобы зоны задержки роста не перекрывались. Чашки с посевами инкубировались в перевернутом положении в атмосфере с 5% С02 в течение 20-24 ч при 35±2°С. По окончании инкубации замеряли диаметры каждой зоны задержки роста. Диаметрами зон задержки роста считались расстояния между границами крайних колоний зоны, различимых невооруженным глазом. Результаты интерпретировали согласно рекомендациям МУК 4.2. 1890-04 и стандартным значениям, рекомендуемым Институтом клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standarts Institute, CLSI) [63] , представленным в таблицах 1-3.

Метод определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК), Е-тест

Данный метод позволял определить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) препарата. Это один из методов определения лекарственной

чувствительности, который в техническом плане такой же простой, как диско-диффузионный метод, однако позволяет получать количественные результаты, выражаемые в микрограммах на миллилитр (мкг/мл). Метод предназначен для исследований конкретного набора препаратов и предполагает использование тонкой тест-полоски - Е-тест (Oxoid, Великобритания), которая содержит градиент концентраций АБП и накладывается на поверхность чашки с плотной питательной средой, засеянной исследуемым микроорганизмом. Для определения МИК использовали метод с использованием тест-полосок с нанесенным градиентом концентраций исследуемого препарата, основанный на диффузии.

При исследовании штаммов N. meningitidis и S. pneumoniae использовался агар Мюллера-Хинтон с добавлением 5% крови барана, для Н. influenzae использовалась среда HTM. Перед внесением посевного материала, чашки с агаром и пропитанные антибиотиками тест-полоски прогревали до комнатной температуры (25°С). Посевной материал трижды вносился на всю поверхность агара с помощью тампона, при этом поворачивали чашку на 60 градусов после каждого засева, для обеспечения равномерного распределения материала и получения сплошного роста культуры. Давали инокуляту высохнуть (примерно 5-10 мин) и на поверхности агара размещали по два разных градиентных Е-теста (Oxoid, Великобритания), ориентированных в противоположных направлениях. Чашки с посевами инкубировались в перевернутом положении в атмосфере с 5% С02 в течение 20-24 ч при 35±2°С. По окончании инкубации на агаре вокруг полосок при образовании эллипсовидных зон задержки бактериального роста считывались результатов исследования. Искомой величиной МИК считали точку пересечения зоны задержки роста со шкалой МИК на тест-полоске. Маркировочные деления на градиентной полоске соответствовали стандартным концентрациям в 2-кратном разведении для метода серийных разведений в агаре, а также имели мелкие деления, обозначающие промежуточные значения. Результаты интерпретировали согласно рекомендациям МУК 4.2. 1890-04 и стандартным значениям, рекомендуемым Институтом клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standarts Institute, CLSI) [63] , представленным в таблицах 1-3.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Урбан, Юлия Николаевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 .Абрикосова, Н.Ю. Этиологическая структура острых бактериальных менингитов и ее расшифровка с использованием иммунодиагностики / Н.Ю. Абрикосова, Н.Н.Костюкова, A.A. Туманян // Менингококковая инфекция и гнойные менингиты: Тез. докл. Всесоюзн. конф. - Архангельск. - 1986. - С. 4750.

2. Алиева, P.O. Разработка набора сухих сред для бактериологической диагностики заболеваний, вызванных пневмококком / P.O. Алиева, А.Г. Гаджиева , Т.И. Осокина // Вопр. физиол. метаболизма и идентификации микроорганизмов: Сб. научн. трудов НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалея - С. 53.

3. Белошецкий, Г.В. Характеристика серотиповых свойств и антибиотикоустой-чивости штаммов пневмакокков, типтрованных методом МЛСТ/ Г.В. Белошецкий, И.С. Королева, A.B. Сафронов, К.О. Миронов// Молекулярная диагностика 2010. Сборник трудов VII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - 2010. - Т.4. - С. 224-257.

4. Белошицкий, Г.В. Пневмококковые менингиты в Российской Федерации / Г.В. Бело-шицкий, И.С. Королева, H.H. Кошкина // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2009. -№21.- С. 6-10.

5. Белошицкий, Г.В. Фенотипическая и генетическая характеристика штаммов пневмококков, выделенных от больных пневмококковым менингитом / Г.В. Белошицкий, К.О. Миронов, И.С. Кролева // Клин микробиол антимикроб химиотер. - 2011. -Т 13, № 3 - С. 261-266.

6. Белошицкий, Г.В. Серотиповый пейзаж инвазивных певмакокков в г.Москва, выделенных от больных пневмакокковым менингитом / Г.В. Белошицкий , И.С. Королева // Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - 2014. - Т.1,№ 1. -С. 408-409.

7. Белошицкий, Г.В. Генетические междунородные клоны пневмококка изолированные от больных пневмаокковым менингитом в Москве/Г. В. Белошицкий , К.О. Миронов, И.С. Кролева // Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - 2014 - Т. 1.- С. 410-411.

8. Бехало, В.А. Современные представления о механизмах патогенного действия менингококка / В.А.Бехало , H.H. Костюкова //Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2009. - № 3. - С. 40-43.

9. Богданович, Т.М. Выделение, идентификация и определение чувствительнсти к антибиотикам Haemophilus influenzae / Т.М. Богданович, О.Ю. Стецюк , О.И. Креченкова // Современные методы клинической микробиологии. - Смоленск: МАКМАХ. - 2003.- Вып 1. - С. 34-62.

10. Воронина, Л.Г Результаты типирования капсулы штаммов Streptococcus pneumoniae методом мультиплексной полимеразной реакции (ПЦР), выделеных у детей на Среднем Урале / Л.Г. Воронина., Е.В. Саматова. // Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - Том 1. - 2014. - С. 412-413.

П.Веркман, К. Физиология бактерий / К. Веркман , П, Вильсон-М.: Мир.-1954.- 320 с.

12. Винник, А.Л. Экспериментальное клинико-микробиологическое обоснование новых методов диагностики пневмококковой инфекции Автореф. дис. д-ра мед. наук/АЛ. Винник - М., 1991. - 52 с.

13. Винник, А.Л., Питательная среда для выделения и культивирования пневмококка / А.Л. Винник, А.К Варгина, З.И. Ершова //Журн. микробиол. -1985.- №8.- С. 19-22.

14. Вишнякова, Л.А. Питательная среда для выделения и культивирования пневмококка и гемофильных палочек / Л.А. Вишнякова , М.В. Герасимова, М.Е.Фаустова //Лаб. дело. - 1981. - № 1. - С. 38-41.

15. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с анг./ С. Гланц -М., Практика, 1998.-459с.

16. Глушкевич, Т.Г. Распределение серотипов Streptococcus pneumoniae при носоглоточном носительстве у летей до 5 лет (результаты пилотного проекта) / Т. Г. Глушкевич., В.В. Яновская, Л.И. Чернышова, A.M. Гильфанова // Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - 2014 - Т. 1. - С. 409410.

17. Горлина, М.Х. Железо и патогенность бактерий / М. X. Горлина / / Журн. Микробиологии. - 1985. - № 5 - С. 103-108.

18. Грубер, И.М. Физиологические особенности пневмококков / И.М.Грубер, Л.Г. Жданова , Ю.В. Мохов // Журн. микробиол.- 1981. - № 12. - С. 24-29.

19. Есаулкова, А.Ю. Изучение пейзажа циркулирующих серотипв стрептококков на территории свердловской облости методом моекулярно-биологического типирования / А.Ю. Есаулкова, А.Л. Дурасова, A.B. Сомова, В.В. Романенко // Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - 2014. - Т. 1. - С. 414415.

20. Жданова, Л.Г. К 100-летию открытия пневмококка / Л.Г.Жданова // Журн. микробиол,- 1981. - № 12. - С. 3-5.

21. Зубков, М.Н.Микробиологические аспекты диагностики пневмоний / М.Н. Зубков , E.H. Гугуцидзе // Пульмонология. - 1997. -№ 1. - С. 41-45.

22. Иванова, Л.Г. Повышение коэффициента использования компонентов при балансировке питательной среды для выращивания пневмококков / Л.Г. Иванова , А.К. Варгина, А.Л. Винник // Антибиотики, и медицинский биотехнология -1986.-№8.-С. 596-600.

23. Катосова, Л.К. Серотипы пневмококков у детей с острыми и хроническими воспалительными заболеваниями легких и у здоровых / / Л.К. Катосова / Журнал микробиология- 1987.-№!.- С. 29-36.

24. Кветная, А.С. микробиологические основы патогенеза пневмококковой инфекции у детей: Автореф. Дис. Д-ра наук/ А.С. Кветная - СПб., 1995 - 36 с.

25. Миронов, К.О. Генетическая характеристика носительских штаммов Neisseria Meningitidis/ К.О. Миронов, Т.А. Тагаченкова, И.С. Королева, А.Е. Платонов// Молекулярная диагностика 2010. Сборник трудов VII всеросийской научно-практической конференции с международным участием. - 2010. - Т. 4 - С. 263266.

26. Козлов, Р.С. Пневмококки: прошлое, настоящее и будущее / Р.С. Козлов-Смоленск:: Смоленская государственная медицинская академия, 2005 - 128 с .

27. Козлов, Р.С. Пневмококки: уроки прошлого - взгляд в будущее / Р.С. Козлов //Здоровье Украины- 2010.- №8 (237). -С. 39-40.

28.Королева, И.С. Менингококовая инфекция и гнойные бактериальные менингиты/ И.С. Королева , Г.В. Белошицкий - Москва: МИА, 2007- 112 с.

29. Королева, И.С. Эпидемиология менингококковой инфекции в России и в мире на современом этапе / И.С. Королева , А.Е. Платонов , К.О. Миронов К // Вакцинация.-2004.-N1(31). - С. 10-15.

30. Костинов, М.П., Вакцинопрофилактика пневмококковых инфекций и гриппа при аутоиммунных заболеваниях / М.П. Костинов, А.А. Тарасова - М.: «МДВ», 2009.- 250 с.

31. Костюкова, Н.Н. Этиологическая структура бактериальных менингитов в различных регионах / Н.Н. Костюкова, Н.А. Коржуева, С.А. Деркач //Журн. Микробиол. - 1992. -№7-8.-С. 14-17.

32. Костюкова, Н. Н. Бактерионосительство как форма персистенции менингококков / Н.Н. Костюкова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2009. - № 4. - С. 8-12.

33. Кречикова, О.И. Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Streptococcus pneumoniae - методические рекомендации / О.И. Кречикова , Р.С. Козлов , Т.М. Богданович Т.М. //Клин, микробиол. и антимикроб, химиотер. - 2000. - Т. 2, № 2. - С. 88.

34. Лукашов В.В. Молекулярная эволюция и филогенетический анализ/ В.В. Лу-кашов - М.: Бином, 2009. -256 с.

35. Матросова, C.B. Этиологическая диагностика менингитов и менингоэнцефалитов у детей метдом ПНР / С.В. Матросова., О.В. Ракчеева, О.Ю. Шипулина, А.Е. Платонов, Г.В. Крючкова , Г.Д. Гусева, Ю.Я. Венгеров// Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с междунородным участием. - 2014. -Т. 1. - С. 422423.

36. Медуницын, Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницын - М.: «Триада X», 1999. -448 с.

37. Мирнов, К.О. Идентификация и серотипирование российских штаммов Streptococcus pneumoniae с применением методик, основанных на ПЦР / К.О. Мирнов , А.Е. Платонов, P.C. Козлов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. -2011- Т. 13, № 4. -С. 304- 319.

38. Миронов, К.О. Определене серогрупп Neisseria meningitidis, вызвавших генерализованные формы менингококковой инфекции на территории Москвы в 2012-2013 гг. с помощью ПЦР в режими риального времени/ К.О. Миронов., С.В. Матосова, O.JI. Дрибноходова, О.Ю. Шипулина, А.Е. Платонов, Г.А. Шипулин, Т.С. Свистунова, Ю.А. Венгеров // Молекулярная диагностика 2014. Сборник трудов VIII всеросийской научно-практической конференции с международным участием. - 2014. - Т. 1.-С. 417-418.

39. Миронов, К.О.Мультилокусное секвенирование - типирование штаммов Haemophilus influenzae серотипа b, выделенных в регионах России / К.О. Миронов, А.Е. Платонов, М.К. Николаев, И.С. Королева, С.И. Демен, Т.А. Дружинина,.Д. Орлов, Т.В. Честанова, Т.А. Кириллова, М.Ю. Тарасов, Е.М. Ибрагимова, С.И. Браславская, Г.А. Шипулин // Материалы II Российской конференции «Актуальные вопросы менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов». - М. - 2008. - С. 36.

40. Миронов, К.О.Идентификация и серотипирование российских штаммов Streptococcus pneumoniae, с применением методик основанных на ПЦР / К.О.

Миронов, А.Е. Платонов, З.С. Козлов // Клин микробиол антимикроб химиотер -2011.-Т.13, №4.- С. 304-313.

41. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов // Методические указания МУК 4.2.1987-04 (Утвержденные главным санитарным врачом РФ 04.03.2004). - 31 с.

42. Никифоров, Е.А. Актуальные и нерешенные проблемы менингококковой инфекции на современном этапе / Е.А. Никифоров, В.В. Кичикова , Е.И. Ефимов // Медицинский альманах. - 2011. - №4 (17). - С.94-99.

43. Руководство по медицинской микробиологии/Под редакцией А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, С.М. Ивановой.- М. -2012. - 1151 с.

44. Платонов, А.Е., Г. А. Шипулин, Е. Н. Тютюнник, Генодиагностика бактериальных менингитов и генотипирование их возбудителей. Пособие для врачей/ А.Е. Платонов, Г. А. Шипулин, Е. Н. Тютюнник - М., 2001.- 37 с.

45. Савинова, Т.А. Генетическое разнообразие пенициллинустойчивых Streptococcus pneumoniae / Т.А. Савинова, О.Ю. Филимонова, С.А. Грудина, С.И. Сидоренко // Журнал инфектологии. - 2009. Т. 1, №4. - 2009. - С.66-71.

46. Салкина, О.А. Вакцинопрофилактика пневмококковой инфекции у детей групп риска - Автореф. дис. канд. мед. наук/ О.А. Салкина-М., 2012. - С. 130

47. Сорокина, М.Н Бактериальные менингиты у детей/ М.Н. Сорокина , В.В. Иванова , Н.В. Скрипченко- М.: Медицина, 2003. - 314 с

48. Anderson, P. Enhanced nasopharyngeal colonization of rats by piliated Haemophilus influenzae type b/ P.Anderson // Infection and . Immunity - 1985. -Vol. 48-P. 565-568.

49. Alcala, В., С. Salcedo, L. de la Fuente, L. Arreaza, M. J. Uria, R. Abad, R. Enriquez, J. A. Vazquez, M. Motge, and J. de Batlle Neisseria meningitidis showing decreased susceptibility to ciprofloxacin: first report in Spain / B. Alcala, C. Salcedo, L. de la Fuente, L. Arreaza, M. J. Uria, R. Abad, R. Enriquez, J . A. Vazquez, M.

Motge, and J. de Batlle // Journal of Antimicrobial Chemotherapy.. - 2004.- Vol. 53 -P. 409.

50. Asahi, Y Diversity of substitutions within or adjacent to conserved amino acid motifs of penicillin-binding protein 2X in cephalosporinresistant Streptococcus pneumoniae isolates/ Y. Asahi, Y. Takeuchi, K. Ubukata// Journal of Antimicrobial Chemotherapy - 1999. - Vol.43 - P. 1252-1255.

51. Austrian, R. Importance of carbon dioxide for the isolation of pneumococci / R. Austrian , P. Collins /Journal Bacteriology- 1966. - Vol. 92 - P. 1282-1284.

52. Balachandran, P. Role of pneumococcal surfase protein C in nasopharyngeal carriage and pneumonia and its abilitu to elicit protection against carriage of Streptococcus pneumoniae / P. Balachandran, W. Boorks , A. Virolainer-Julkunen // Infection and . Immunity. - 2002.- Vol. 70. - P. 2526-2534.

53. Barenkamp, S. J. Subtyping isolates of Haemophilus influenzae type b by outermembrane protein profiles / S.J. Barenkamp //Journal of Infections of Disease. -1981.-Vol. 143.-P. 668-676.

54. Bennett, N.M. Pneumococcal bacteremia in Monroe County / N.M. Bennett, J. Buffington, F.M. La Force // New York. Am. Journal Public Health.- 1992. - Vol. 82. -P. 1513-1516.

55. Billal, D. S. Can the Etest correctly determine the MICs of beta-lactam and cephalosporin antibiotics for beta-lactamase-negative ampicillin-resistant Haemophilus influenzae / D.S. Billal, M. Hotomi, N. Yamanaka. // Journal of Antimicrobial Chemotherapy - 2007.- Vol. 51. - P. 3463-3464.

56. Bhakdi, S. Membrane damage by pore-forming bacterial cytolysins / S/ Bhakdi, J. Taranum-Jensen//Microbiology Pathogen. - 1986.-Vol. 1. - P. 5-14.

57. Bjornson, A. Relation between serum opsonic activity for Streptococcus pneumoniae and complement function in sickle cell diseas/ A. Bjornson , J.S. Lobel, R.S. Harr //Journal of Infectious Diseases.-1985. - Vol. 152. - P. 701-709.

58. Blacklow, R. S, Biosynthesis of sialic acids by Neisseria meningitidis./ R.S. Blacklow, L. Warren. // Journal of Biological Chemistry. -1962.-Vol. 237. -P. 35203526.

59. Balachandran, P. The autolytic enzyme Lyt A of S. pneumoniae is not responsible for realizing pneumolysin / P. Balachandran , S.K. Hollingshaed, J.C. Paton , D.E. Briles //J. Bacteriolology- 2001.-Vol. 183.-P. 3108-3116.

60. Boisier, P.Meningococcal meningitis: unprecedented incidence of serogroup X-related cases in 2006 in Niger / P. Boisier , P. Nicolas , S. Djibo,M.K. Taha, I. Jeanne , H.B. Mainassara , B. Tenebray , K.K. Kairo , D. Giorgini, S.P. Chanteau // Clinical Infectious Diseases -2007. -Vol. 44 -P.657-663.

61. Brehony, C. Multilocus sequence typing for global surveillance of meningococcal disease/ C. Brehony, K. A. Jolley, M. C. J. Maiden // FEMS Microbiology Reviews -2007.-Vol. 31, № 15-P. 26.

62. Briles, D.E. PspA and PspC: Their potential for use as pneumococcal vaccines/ S.K. Hollingshead , E. Swiatlo//Microbial Drug Resistance.- 1997-Vol. 3- P. 401408.

63. Butler, J.C. Serotype distribution of Streptococcus pneumoniae infections among preschool children in the United States, 1978-1994: implications for development of a conjugate vaccine / J.C. Butler, R.F. Breiman, H.B. Lipman // Journal of Infectious Diseases.-1995. - Vol. 171- P. 885-889.

64. Caimano, M.J. Capsule Genetics in Streptococcus pneumoniae and a Possible Role for Transposition in the Generation of the Type 3 Locus./ M.J. Caimano , G.G. Hardy, J. Yother, A. Tomasz// Streptococcus pneumoniae: molecular biology & mechanisms of disease - 2000. - P. 115-127.

65. Callaghan Martin J. Opacity-associated adhesin repertoire in hyperinvasive Neisseria meningitidis / J. Callaghan Martin, A. Jolley Keith , C.J. Maiden Martin // Infection and. Immunity. - 2006. - № 74 (9). - P. 5085-5094.

66. Carvalho, M. G. Evaluation and improvement of real-time PCR assays targeting lytA, ply, and psaA genes for detection of pneumococcal DNA / M. G. Carvalho, M.L. Tondeila , K.McCaustland , L. Weidlich , L. McGee, L.W. Mayer, A. Steigerwalt, M.

Whaley, R.R. Facklam, B. Fields , G. Carlone , E.W. Ades, R. Dagan , J.S.Sampson // Journal of Clinical Microbiology. -2007. -Vol. 45. - P. 2460-2466.

67. Changing epidemiology of pneumococcal serotypes after introduction of conjugate vaccine: July 2010 report. Organization World Health Weekly Epidemiological Record 85, P. 425-436.

68. Chakraborty, P. A text book of Microbiologi/P. Chakraborty - New Central Book Agency , 2009 - 720 p.

69. Chiba, N. Application of the Real-Time PCR method for gonotypic identification of b - lactam resistance in isolates from invasive pneumococcal diseases/ N.Chiba , M.Morozumi, K. Ubukato // Microbial Drug Resistance. - 2011. -Vol. 10. - P. 1-8.

70. Chou, M. Severe pneumococcal infection in patients with neoplastic disease/ M. Chou, A.E. Brown , A. Blevins , Armstrong D. // Cancer. -1983. - Vol. 5. - P. 15461550.

71. Chu, Y. W. A blood isolate of N. meningitidis showing reduced susceptibility to quinolones in Hong Kong / Y.W. Chu, T. K. M. Cheung, V. Tung, F. Tiu, J. Lo, R. Lam, R. Lai, and K. K. Wong. // International Journal of Antimicrobial Agents. - 2007. -Vol. 30.-P. 94-95.

72. Claus, H. Many carried meningocicc lack the genes required for capsule synthesis and transport/ H.Claus, M.C.J. Maiden , R. Maag // Microbiology. - 2002. - № 148.-P. 1813-1819.

73. Claus, H. Molecular divergence of the sia locus in different serogroups of Neisseria meningitidis expressing polysialic acid capsules / H. Claus, M. Vogel, M. Muhlenhoff , R. Gerardy-Schahn , and M. Frosch // Molecular and General Genetics. - 1997.- Vol. 257.-P. 28-34.

74. CLSI. Performance Standards for Antimicrobial susceptibility testing; Twenty -third Informational Supplement, CLSI document M100-S23 Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute, 2013, 206 p.

75. Corso, A.Emergence of Neisseria meningitidis with decreased susceptibility to ciprofloxacin in Argentina /A. Corso, D. Faccone, M. Miranda, M. Rodriguez, M.

Regueira, C. Carranza, C. Vencina, J. A. Vazquez, M. Galas.// Journal of Antimicrobial chemotherapy. - 2005. - Vol. 55. - P. 596-597.

76. Coulton, J. The outer membrane of Haemophilus influenzae type b: cell envelope associations of major proteins / J. Coulton, D.T. Wan Coulton, J. and Wan D. T. // Microbiology - 1983. -Vol. 29. - P. 280-287.

77. Diermayer, M . Epidemic serogroup B meningococcal disease in Oregon: the evolving epidemiology of ET-5 strain/ M. Diemayer, K. Hedberg, F. Hoesly, M. Fischer// JAMA.-1999.- Vol. 282.- P. 1493-1497.

78. Dolan-Livengood, J. M Genetic basis for nongroupable Neisseria meningitidis / J.M. Dolan-Livengood , Y.K. Miller., L.E. Martin ,R. Urwin , D.S.Stephens. // Journal of Infectious Diseases -2003.-Vol. 187.-P. 1616-1628.

79. Givon-Lavi, N. Spread of S.pneumoniae and antibiotic-resistance S.pneumoniae from daycare center attendes to their yonger sislings/ N. Givon-Lavi, D. Fraser, N. Porat, R.Dagan// Journal of Infectious Diseases .-2002-Vol.l86.-P.1608-1614

80. Enright, M. C. Multilocus sequence typing / M.C. Enright, B. G. Spratt// Trends in Microbiology. - 1999. - Vol. 7. - P. 482-487.

81. Enriquez, R . Nalidixic acid disk for laboratory detection of ciprofloxacin resistance in Neisseria meningitides/ R. Enriquez, R. Abad, C. Salcedo, J. A. Vazquez// Antimicrobial Agents and Chemotherapy - 2009. - Vol. 53. - P.796-797.

82. Eskola, J. Efficacy of a pneumococcal conjugate vaccine against acute otitis media / J/ Eskola., T/ Kilpi, A. Palmu//New England Journal of Medicine. - 2001.-Vol. 344(6). - P. 403-409.

83. Erwin, A.L Analysis of Genetic Relatedness of Haemophilus influenzae Isolates by Multilocus Sequence Typing/ A. L. Erwin,S. A. Sandstedt, P. J. Bonthuis, J. L. Geel-hood, K. L. Nelson, W.C. T. Unrath, M. A. Diggle, M. J. Theodore,, C.R. Pleatman, E. A. Mothershed, C. T., L. W. Mayer, J.R. Gilsdorf, A. L. Smith//Journal of Bacteriology- 2008 - Vol.2.- P. 1473-1483

84. Faden, H. Changes in nasopharyngeal flora during otitis media of childhood / H. Faden, J. Stanievich, L Brodsky., J. M. Berstein // Journal of Pediatric Infectious Diseases - 1990. - Vol. 9. - P. 623-626.

85. Fernandez, F.J. Meningit causing Streptococcus pneumoniae resist cefotsksim / F.J. Fernandez // Einform. Infection. Mycrobiology Clinical.- 1990.-Vol.17,- P.45-46.

86. Feil, A. Recombination within natural populations of pathogenec bacteria: short-term phylogenetic consequence / A Feil // Proceedings of the National Academy of Sciences. -2001. - Vol. 98. - P. 182-187.

87. Frosch, M. Molecular characterization and expression in Escherichia coli of the gene complex encoding the polysaccharide capsule of Neisseria meningitidis group B / M Frosch, C Weisgerber, T.F. Meyer // Proceedings of the National Academy of Sciences. Sci USA. -1989-Vol.11. - P. 1669-1673.

88. Ganguli, S. Molecular cloning and analysis of genes for sialic acid synthesis in Neisseria meningitidis group B and purification of the meningococcal CMP-NeuNAc synthetase enzyme / S. Ganguli, G.Zapata, T. Wallis, C Reid., G. Boulnois , W. F. Vann , I. S. Roberts // Journal of Bacteriology. - 1994. - Vol. 176. - P. 4583-4589.

89. Garcia, P. Purification and characterization of the autolytic glycosidase of Streptococcus pneumoniae / P. Garcia, J.L. Garcia , E. Garcia , R. Lopez Biochemical and Biophysical Research Communications. - 1989. - Vol. 158. - P. 251-256.

90. Gherardi, G. Major related sets of antibiotic-resistant Pneumococci in the United States as determined by pulsed-field gel electrophoresis and pbpla-pbp2b-pbp2x-dhf restriction profiles / G. Gherardi, C. G. Whitney, R. R. Facklam, B. Beall. // Journal of Infectious Diseases. - 2009. - Vol. 181. - P. 216-229.

91. Go, E.S. Anti-pneumococcal antibody response in normal subjects: a meta-analysis / E.S. Go, Z.K. Ballas // Journal of Allergy Clinical Immunology - 1996. - Vol. 98. -P. 205-215.

92. Grebe, T. Penicillin-binding proteins 2b and 2x of Streptococcus pneumoniae are primary resistance determinants for different classes of beta-lactam antibiotics / T. Grebe, R. Hakenbeck // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. - 1996.- Vol. 40. -P. 829-834.

93 Green, B. A. A recombinant non-fatty acylated form of the Hi-PAL (P6) protein of Haemophilus influenzae licits biologically active antibody against both nontypeable and type b H influenzae / B.A. Green, B J. Metealf, T. Quinn-Dey, D.H. Kirkley, S.A. Quataert // Infection and Immunity -1990.- Vol. 58. - P. 3272-3278.

94 Gulig, P. A. Coprecipitation of lipopolysaccharide and the 39,000-molecular-weight major outer membrane protein of Haemophilus influenzae type b by lipopolysaccharide-directed monoclonal antibody /P.A. Gulig, EJ. Hansen // Infection and Immunity. -1985.-Vol. 49.-P. 819-827.

95. Guttierrez, M. K. Programs and abstracts of the 30 Interscience Conference/ M.K. Guttierrez, L.S. Joffe, L.J. Forney, M.P. Glode,//Am. Soc. Microbiol., 1990.

96. Hammerschmidt, S. Contribution of genes from the capsule gene complex (cps) to lipooligosaccharide biosynthesis and serum resistance in Neisseria meningitidis / S. Hammerschmidt, C. Birkholz, U. Zahringer, B. D. Robertson, J. van Putten, O. Ebeling, M. Frosch. // Molecular Microbiology - 1994. - Vol. 11. - P. 885-896.

97. Hausdoff, W.P. Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use /W.P. Hausdoff W.P., J. Bryant, P.R. Paradiso, G.R. Siber // Clinical Infection - 2000. -Vol. 30. - P. 100-121.

98. Haziot, A. Recombinant soluble CD 14 mediates the activation of endothelial cells by lipopolysaccharide/ A. Haziot, G.W. Rong, J. Silver, S.M. Goyert // Journal of Immunology - 1993.-Vol. 151. - P. 1500-1507.

99. Henrichsen, J. Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae / J. Henrichsen // Journal of Clinical Microbiology. -1995. - Vol. 33. - P. 2759-2762.

100. Henriques, B. Molecular epidemiology of Streptococcus pneumoniae causing invasive disease in 5 countries / B. Henriques, M. Kalin , A. Ortqvist // Journal of Infectious Diseases -2000. - Vol. 182. - P. 833-839.

101.Hill, D.J Cellular and molecular biology of Neisseria meningitidis colonization and invasive disease/ D. J. Hill, N. J. Griffiths, E.Borodina, M. Virjl//Clinical Science.-2010.-Vol. 118-P. 547-564.

102. Hsu, H. E. Effect of pneumococcal conjugate vaccine on pneumococcal meningitis / H.E. Hsu, K.A. Shutt, M.R. Moore , B.W. Beall, N.M. Bennett, A.S. Craig , M.M.

Farley, J.H. Jorgensen , C.A. Lexau, S. Petit, A. Reingold, W. Schaffner, A. Thomas , C.G. Whitney, L.H. Harrison // New England Journal of Medicine. - 2009. - Vol. 360. - P. 244256.

103. Jacoby, G.A. Prevalence and resistence mechanisms of common bacterial respiratori phathonys / G.A. Jacoby //Clin.Infect. Dis. - 1994.-Vol.18.-P.951-957.

104. Janson, H. Limited diversity of the protein D gene (hpd) among encapsulated and nonencapsulated Haemophilus influenzae strains/ H. Janson, M. Ruan, A. Forsgren. // Infection and Immunity. - 1993. - Vol. 61. - P. 4546-4552.

105. Jones, C. Capsular polysaccharides from Neisseria meningitidis and Streptococcus pneumoniae / C. Jones //Carbohydr. Eur. - 1998 - Vol. 21.- P. 10-16.

106. Jones, G.R. Dynamics of carriage of Neisseria meningitidis in a group of military recruits: subtype stability and specificity of the immune response following colonization / G.R. Jones, M. Christodoulides, J.L. Brooks// Journal of Infectious Diseases. -1998.- №178(2). -P. 451-459.

107. Kahler, C. M. The (alpha2- > 8)-linked polysialic acid capsule and lipooligosaccharide structure both contribute to the ability of serogroup B Neisseria meningitidis to resist the bactericidal activity of normal human serum / C.M. Kahler, L.E. Martin, G.C. Shih // Infection and Immunity. - 1998. - Vol. 66. - P. 5939-5947.

108. Katz, L. S. Meningococcus genome informatics platform: a system for analyzing multilocus sequence typing data./ L.S. Katz, C. R. Bolen, B. H. Harcourt, S. Schmink, X. Wang, A. Kislyuk, R. T. Taylor, L. W. Mayer, I. K. Jordan. // Nucleic Acids Research. -2009.-Vol. 37.-P. 606-611.

109. Kim, J.O.. Association of intrastrain phase variation in quantity of capsular polysaccharide and teichoic acid with the virulence of Streptococcus pneumoniae/ J.O. Kim, J.N. Weiser / / Journal of Infectious Diseases. - 1998. - Vol. 177.- P. 368-377.

110. Kimura, A. A minor high-molecular-weight outer membrane protein of Haemophilus influenzae type b is a protective antigen / A. Kimura, P.A. Gulig, G.H. McCracken, T.A. Loftus, C. Hansen // Infection and Immunity.- 1985. - Vol. 47. - P. 253-259.

111. Kiroff G.K. Lack of effect of splenic regrowth on the reduced antibody responses to pneumococcal polysaccharides in splenectomized patients/ G.K. Kiroff, A. N. Hodgen, P.A. Drew, G.G.Jamieson // Cliniclal Experements. Immunology -1985. - Vol. 62. - P. 48-56.

112. Klauser, T. The secretion pathway of IgA protease-type proteins in gram-negative bacteria/T. Klause, J. Pohner, T.F. Meyer// Bioessays. - 1993.-Vol. 15. - P. 799-805.

113. Klugman, K.P. Bactericidal activity against cephalosporin-resistant Streptococcus pneumoniae in cerebrospinal fluid of children with acute bacterial meningitis / K.P. Klugman, I.R Friedland , J.S. Bradley // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. - 1995. - Vol. 39. - P. 1988-1992.

114. Klugman, K.P. The successful clone: the vector of dissemination of resistance in Streptococcus pneumonia / K.P. Klugman // Antimicrobial Agents and Chemotherapy.- 2002.- Vol. 2.-P. 1-5.

115. Krivan, H.C. Many pulmonary pathogenic bacteria bind specifically to the carbohydrate sequence GalNac 1-4 Gal found in some glycolipids / H.C. Krivan , D.D. Roberts, V. Ginsburg // Proceedings of the National Academy of Sciences. USA. -1988. - Vol. 85. - P. 6157-6161.

116. Kroll, J S. The bex locus in encapsulated Haemphilus influenzae a chromosol region involved in capsule polysaccharide export /J.S. Kroll, B. Loynds, L.N. Brophy, E.R. Moxon //Molecular Microbiology..- 1990.-Vol. 4. - P. 1853-1862.

117. Kroll, J. S. The genetics of encapsulation in Haemophilus influenzae / J.S. Kroll, // Journal of Infectious Diseases. - 1992. - Vol. 165- P. 93-96.

118. Kruger C. Serum CD 14 levels in polytraumatized and severely burned patients / C. Kruger, C. Schutt, U. Obertacke // Clinical and Experimental Immunology.- 1991.- Vol. 85. -P.297-301.

119. Law, D.C. Invasive meningococcal disease in Quebic, Canada, due to an emerging clone of ST-269 serogroup B meningococci with serotype antigen 17 and serotype antigen PL 19 (B: 17:P1.19)// Clinical and Experimental Immunology.-2005.-Vol.44,- P. 2743-2749.

120. LaForce, F. M. The Meningitis Vaccine Project / F.M. LaForce, K. Konde, S. Viviani, and M. P. Preziosi. // Vaccine 25 Supplement. - 2007. - P. 97-100.

121. Leclercq, R. Resistance to Macrolides and Related Antibiotics in Streptococcus pneumoniae / R. Leclercq, P. Courvalin / Journal of Antimicrobial Chemotherapy.. - 2002. -Vol. 46.-P. 2727-2734.

122. Leclercq, R. Mechanisms of Resistance to Macrolides and Lincosamides: Nature of the Resistance Elements and Their Clinical Implications / R. Leclercq // Clinical Infectious Dis-eases.-2002. - Vol. 34.- P. 482-492.

123. Leggiadro, R.J. Penicillin-nonsusceptible Pneumococcus / R.J. Leggiadro // J. Antimicrobial Agents and Chemotherapy.- 2000.-Vol. 14.-P. 123-127.

124. Liao, J.C. Use of a multilocus variable-number tandem repeat analysis method for molecular subtyping and phylogenetic analysis of Neisseria meningitidis isolates / J.C. Liao, C.C. Li, C.S. Chiou // BioMed. Central Microbiology.. - 2006.- № 6.- P.44.

125 O'Ryan, M. A Multi-Component Meningococcal Serogroup B Vaccine (4CMenB): The Clinical Development Program / M. O'Ryan, J. Stoddard, D. Toneatto, J. Wassil, P. Duell// Drugs.-2014.-Vol. 74.-P. 15-30.

126. Loeb, M. R. Isolation and partial characterization of outer and inner membranes from encapsulated Haemophilus influenzae type b/M.R. Loeb, A.L. Zachary, D.H. Smith,// Journal of Bacteriology - 1981. - Vol. 145. - P. 596-604.

127. Lukinmaa, S. Application of molecular genetic methods in diagnostics and epidemiology of food-borne bacterial pathogens /S. Lukinmaa, S., U.-M. Nakari, M. Eklund, A. Siitonen // Acta Pathologica, Microbiologica et Immunologica Scandinavica (APMIS). -2004.-Vol. 112 .-P. 908-929.

128. Maaroufi, Y. Rel-time PCR for determining capsular serotypes of Haemophilus influenzae/ Y. Maaroufi ,J.M. De Bruyne, C. Heymans , F. Crokaert // Journal of Clinical Microbiology. - 2007,- Vol. 45. - P. 2305-2308.

129. Mayer, L.W. Distribution of multi-locus sequence types of N.meningitidis serogroup B in the US, 200-2005/L.W. Mayer, A.M. Whitney, E. Mothershed// Poster presented at Internal PathogenicNeisseria Conference. - 2006.

130 Maiden, M. C. Multilocus sequence typing: a portable approach to the identification of clones within populations of pathogenic microorganisms / M.C. Maiden, J. A. Bygraves, E. Feil, G. Morelli, J. E. Russell, R. Urwin, Q. Zhang, J. Zhou, K. Zurth, D. A. Caugant, I. M. Feavers, M. Achtman, B. G. Spratt. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1999. - Vol. 95. - P. 3140-3145.

131. McDaniel, L.S. PspA, a surface protein of Streptococcus pneumoniae, is capable of eliciting protection against pneumococci of more than one capsular serotype / L.S. McDaniel, J.S. Sheffield, P. Delucchi, D.E. Briles //Journal of infections of Immunity. -1991. - Vol. 59. - P. 222-228.

132. McDaniel, L.S. Use of insertional inactivation to facilitate studies of biological properties of pneumococcal surface protein A (PspA) / L.S. McDaniel, J. Yother, M. Vijayakumar // Journal of Experimental Medicine.. - 1987. - Vol. 165. - P. 381-394.

133. McGee, L. Serotype 19F multiresistant pneumococcal clone harbouring two erythromycin resistance determinants (erm[B] and mef[Al) in South Africa /L. McGee, K.P. Klugman, A. Wasas // Journal of Clinical Microbiology. -2001. - Vol. 45. - P. 1595-1598.

134. Meats, E. Characterization of encapsulated and noncapsulated Haemophilus influenzae and determination of phylogenetic relationships by multilocus sequence typing./ E. Meats, E. J. Feil, S. Stringer, A. J. Cody, R. Goldstein, J. S. Kroll, T. Popovic, B. G. Spratt. // Journal of Clinical Microbiology. -2003.- Vol.41. - P. 1623-1636.

135. Messmer, T. 0. Comparison of four polymerase chain reaction assays for specificity in the identification of Streptococcus pneumoniae / T.O. Messmer, J. S. Sampson, A. Stinson, B. Wong, G. M. Carlone, R. R. Facklam // Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. -2004.-Vol. 49.-P. 249-254.

136. Mothershed, E. A. Use of real-time PCR to resolve slide agglutination discrepancies in serogroup identification of Neisseria meningitidis/ E.A. Mothershed, C. T. Sacchi, A. M. Whitney, G. A. Barnett, G. W. Ajello, S. Schmink, L. W. Mayer, M. Phelan, T. H. Taylor, Jr., S. A. Bernhardt, N. E. Rosenstein, T. Popovic. // Journal of Clinical Microbiology. - 2004. -Vol. 42. - P.320-328.

137. Mortensen, J. E. Surveillance of antimicrobial resistance in Neisseria meningitidis from patients in the Cincinnati tristate region (Ohio, Kentucky, and Indiana) / J.E. Mortensen, M. J. Gerrety, L.D.Gray// Journal of Clinical Microbiology. - 2006.-Vol. 44. - P. 1592-1593.

138. Murdoch, D. R. Evaluation of a PCR assay for detection of Streptococcus pneumoniae in respiratory and nonrespiratory samples from adults with community-acquired pneumonia /D.R. Murdoch, T. P. Anderson, K. A. Beynon, A. Chua, A. M. Fleming, R. T. Laing, G. I. Town, G. D. Mills, S. T. Chambers, and L. C. Jennings // Journal of Clinical Microbiology.- 2003. -Vol.41.-P. 63-66.

139. Murphy, T. F. A subtyping system for nontypable Haemophilus influenzaebased on outer-membrane proteins / T.F. Murphy, K.C. Dudas, J.M. Mylotte, M.A. Apicellia // Journal of Infectious Diseases.- 1983.- Vol. 147. - P. 838-846.

140. Musher, D.M. Streptococcus pneumoniae: At the Threshold of the 21st Century / D.M. Musher, R.F. Breiman , A. Tomasz // Streptococcus pneumoniae: molecular biology & mechanisms of disease. Larchmont: Mary Ann Liebert, Inc. - 2000. - P. 485-491.

141. Nielsen, S.V. Capsular types of Streptococcus pneumoniae isolated from blood and CSF during 1982-1987 /S.V. Nielsen , J. Henrichsen // Clinical Infectious Diseases.- 1992. - Vol. 15. - P. 794-798.

142. Paton, J.C., Molecular Analysis of Putative Pneumococcal Virulence Proteins Streptococcus pneumoniae: molecular biology & mechanisms of disease/ J.C. Paton, A.M. Barry, R.A. Lock , A. Tomasz // Larchmont: Mary Ann Liebert, Inc. 2000. - P. 261-270.

143. Paton, J.C. Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide/J.C. Paton, J.K. Morona//Gram-positiv pathogens. Amerecan Society for Microbiology.-2000.-Vol.l.-P. 201213.

144. Pimenta , F. Sequential Triplex Real-Time PCR Assay for Detecting 21 Pneumococcal Capsular Serotypes That Account for a High Global Disease Burden / F. Pimenta, A. Roundtree , A. Soysal, M. Bakir , M. Plessis, N. Wolter, A. von Gottberg, L. McGee., M.G. Carvalho, B. Beall // Journal of Clinical Microbiology. - 2013,- Vol. 51(2). - P. 647-652.

145. Radetsky, M.S. Multiply resistant pneumococcus causing meningitis: Its epidemiology within a day-care centre / M.S. Radetsky, G.R. Istre G.R., T.L. Johansen //Lancet. -1981. -Vol. 440. - P. 771-773.

146. Rainbow, J. Rifampin-resistant meningococcal disease / Rainbow. J., E. Cebelinski, J. Bartkus ,A. Glennen, D. Boxrud, R. Lynfield //Emerging Infectious Diseases. - 2005.-Vol. 11.-P. 977-979.

147. Ravin, A.W. Reciprocal capsular transformations of pneumococci //. Jornal of. Bacteriology - 1959. - Vol. 77. - P. 296-309.

148. Rekha, P. Sequential Multiplex PCR Approach for Determining Capsular Serotypes of Streptococcus pneumoniae Isolates / P. Rekha, E. Robert, Gertz, B. Beall // Journal of Clinical Microbiology. - 2006.- №1.-P. 124-131.

149. Robinson, K. A. Epidemiology of invasive Streptococcus pneumoniae infections in the United States 1995-1998 /K.A. Robinson, W. Baughman, G. Rothrock, N. L. Barrett, M.

Pass, C. Lexau,B. Lamaske, K. Stefonek, B. Barnes, J. Patterson, E. R. Zell, A. Schuchat// JAMA.- 2001.-Vol. 285.-P. 1729-1735.

150. Rodríguez-Barradas, M.C. Antibody to capsular polysaccharides of Streptococcus pneumoniae after vaccination of human immunodeficiency virus-infected subjects with 23-valent pneumococcal vaccine / M.C. Rodriguez-Barradas, D.M. Musher, C. Kahart // Journal of Infectious Diseases.- 1992.-Vol. 165. - P. 553-556.

151. Rosenow, C. Contribution of novel choline-binding proteins to adherence, colonization and immunogenecity of Streptococcus pneumoniae / C. Rosenow, P. Ryan J.N. Weiser // Molecular Microbiology. - 1999. - Vol. 25. - P. 819-829.

152. Rubins, J.B. Pneumolysin activates phospholipase A in pulmonary artery endothelial cells/ J.B. Rubins, T.J. Mitchell, P. W. Andrew, D.E. Niewoehner // Infection and Immunity. - 1994. - Vol. 62. - P. 3829-3836.

153 . Sadler, F. Genetic analysis of capsular status of meningococcal carrier isolates /. F.A. Sadler, A. Fox, K. Neal, M. Dawson, K. Cartwright, R. Borrow// Epidemiology and Infection. - 2003.- Vol. 130. - P. 59-70.

154. Sam, I.C. Failure to detect capsule gne bexAin Haemophilus influenzae types e and f by real-time PCR due to sequenc variation within probe binding sites / I.C. Sam , M. Smith // Journal of Medical Microbiology. - 2005.-Vol. 54. - P.453-455.

155. Satola, S.W. Complete sequence of the cap locus of Haemophilus influenzae serotype b and nonencapsulated b capsule-negative variants / S.W. Satola, P.L Schirmer, M.M. Farley // Infection and Immunity.. - 2003. - Vol. 7. - P. 3639-3644.

156. Seiender, R. K. Population genetics of pathogenic bacteria / R.K.Seiender // Microbial Pathogenesis. - 1987. - Vol. 3. - P. 1-7.

157. Seiender, R.K. Methods of multilocus enzyme electrophoresis for bacteria population genetics and systematics / R.K.Seiender, D.A. Caugant // Applied and Environmental Microbiology- 1986. - Vol.51. - P. 873-884.

158. Shapiro, E.D. Pneumococcal vaccine. Vaccines and immunotherapy / E.D. Shapiro // S.J. Cryz Jr., editor. - New York: Pergamon Press. - 1991. - P. 127-139.

159. Schouls, L. M. Multiple-Locus Variable-Number Tandem Repeat analysis of Neisseria meningitidis yields groupings similar to those obtained by Multilocus Sequence Typing/ L.M. Schouls, A. Van der Ende, M. Damen, I. Van de Pol// Journal of Clinical Microbiology -2006.-Vol. 44.-P. 1509-1518.

160. Sidorenko, S.V. Antimicrobial Resistance of Streptococcus pneumoniae Recovered from Respiratory Tract Infections (RTI) of Inpatients in Moscow / S.V/ Sidorenko, S.A. Grudinina, L.K. Kotosova // Proceedings of the 40th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. - Washington: American Society for Microbiology. -2000. - P. 109.

161. Sisk, J.E. Cost-effectiveness of vaccination against pneumococcal bacteremia among elderly people / J.E.Sisk, A.J. Moskowitz, W. Whang // JAMA.- 1997. - Vol. 278. - P. 13331339.

162. Song, X. M. The gene encoding protein D (hpd) is highly conserved among Haemophilus influenzae type b and nontypeable strains / X.M. Song, A. Forsgren, H. Janson // Infection and Immunity - 1995. - Vol. 63. - P. 696-699.

163. Spratt, B.G., W.P. Hanage, Brueggemann A.B Evolutionary and population biology of Streptococcus pneumoniae / B.G. Spratt, W.P. Hanage, Brueggemann A.B // The pneomococcus. -2004 - P. 119-135.

164. Spratt, B.G. A multilocus sequence typing sheme for Streptococcus pneumoniae: iidentification of clones associated with serious invasive disease / B.G. Spratt, M.C. Enright// Microbiology. - 1998.- Vol. 144. - P.3049-3060.

165. Stephens, P. Biology and pathogenesis of the evolutionarily successful, obligate human bacterium Neisseria meningitidis / P.Stephens // Vaccine. -2009.- Vol.27. - P-71-77.

166. Stefanelli, P. Rifampicin-resistant meningococci causing invasive disease: detection of point mutations in the rpoB gene and molecular characterization of the strains / P. Stefanelli, C. Fazio, G. La Rosa, C. Marianeiii, M. Muscillo, and P. Mastrantonio. // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. - 2001. - Vol.47 .- P. 219-222.

167. Suzuki, N. Genotypic identification of presumptive Streptococcus pneumoniae by PCR using four genes highly specific for S. pneumoniae / N. Suzuki, M. Yuyama, S. Maeda, H. Ogawa, K. Mashiko, and Y. Kiyoura // Journal of Medical Microbiology. - 2006. - Vol. 55.-P. 709-714.

168. Thomas, J.D. sodC-Based Real-Time PCR for detection of Neisseria meningitidis/ J.D. Thomas, C.P. Hatcher, D.A. Satterfield, M.J. Theodore, C.B. Michelle// Plos One.-Vol.6.-P.l-8.

169. Talkington, D. F. Protection of mice against fatal pneumococcal challenge by immunization with pneumococcal surface adhesin A (PsaA) / D.F. Talkington., B.G. Brown, J.A. Tharpe //J. Microb. Pathogen. - 1996. - Vol. 21. - P. 17-22.

170. Tumanen, E. I. The Pneumococcus / E.I. Tumanen, T.J. Mitchel , D.A. Morrison -Washington, D.C.: ASM PRESS, 2004. - 427 p.

171. Tamura, K. MEGA5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods / K. Tamura, D. Peterson, N. Peterson, G. Stecher, M. Nei, S. Kumar // Molecular Biology and Evolution - 2011. - № 28(10). -P. 2731-2739.

172. Uria, M.J. A generic mechanism in Neisseria meningitidis for enhanced resistance against bactericidal antibodies / M.J. Uria, Q. Zhang, Y. Li // Journal of Experimental Medicine.- 2008,-Vol. 205. - P. 1423-1434.

173. Urwin, R. Multilocus sequence typing: a tool for global epidemiology / R. Urwin, M. C. Maiden // Trends in Microbiology. - 2003. - Vol. 11. - P. 479-487.

174. Van Ketel, R.G. Detection of Haoemophilus influenzae in cerbspinal fluids by polymerase chain reaction DNA amplification / R.G. Van Ketel// Journal of Medical Microbiology. - 1990.- Vol. 33. - P. 271-276.

175. Waggoner-Fountain, L. A. The emergence of Haemophilus influenzae types e and fas significant pathogens / I.A. Waggoner-Fountain, J. O. Hendley, E. J. Cody, V. A. Perriello, and L. G. Donowitz // Clinical Infectious Diseases. - 1995. - Vol. 21. -P. 1322-1324.

176. Wang, X. Detection of bacterial pathogen in Mongolia meningitis surveillance with a new real-time PCR assay to detect Haemophilua influenzae / X. Wang, R. Mair , C. Hatcher, M.J. Theodore, K. Edmond //Journal Internation of Medical Microbioogy. -2011. - Vol. 301.-

P.303-309.

177. Watt, J. P Burden of disease caused by Haemophilus influenzae type b in children younger than 5 years: global estimates / J.P. Watt, L.J. Wolfson, K.L. O'Brien, E/ Henkle, M. Deloria-Knoll, N. McCall // Lancet. - 2009. - Vol. 374. - P. 903-911.

178. Weiser, J. Phase variation in pneumococcal opacity. Relationship between colony morphology and nasopharyngeal colonization / J. Weiser, R. Austrian , P. Sreenivasan , H.R. Masure // Infection and Immunity.- 1994. - Vol. 62. - P. 2582-2589.

179. Whatmore, A. M. Genetic relationships between clinical isolates of Streptococcus pneumoniae, Streptococcus oralis, and Streptococcus mitis:Characterization of "atypical" pneumococci and organisms allied to S. mitis harboring S. pneumoniae virulence factor-encoding genes / A.M. Whatmore, A. Efstratiou, A. P. Pickerill, K. Broughton, G. Woodard,

D. Sturgeon, R. George, C. G. Dowson // Infection and Immunity - 2000. - Vol. 68. - P. 1374-1382.

180. World Health Organization Control of epidemic meningococcal disease / WHO Practical Guidelines Second Edition. Geneva, 1988.

181. WHO MANUAL, 2nd EDITION. Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenza / WHO/IVB.l 1.09.-2011, 311 p.

182. WHO Vaccine Preventable Diseases Monitoring System: Immunization schedules by antigen selection centre // http: // apps.who.intimmunization_monitoringen /globalsummary / ScheduleResult.cfm; accessed Feb 22, 2011; last updated 15 Dec 2010).

183. Wood, W.B. The inhibition of surface phagocytosis by the capsular 'slime layer' of pneumococcus type III / W.B. Wood, M.R. Smith // Journal of Experimental Medicine. -1999.-Vol. 90- P. 85-96.

184. Wu, H. M. Emergence of ciprofloxacin-resistant Neisseria meningitidis in North America/. Y.M. Wu, B. Harcourt, C.P. Hatcher, S.C. Wei, R.T. Novak, X. Wang, B.A. Juni, A. Glennen, D.R. Boxrud, J. Rainbow, S. Schmink, R.D. Mair, M.J. Theodore, M.A. Sande, T.K. Miller, K. Kruger, A.C. Cohn, T.A. Clark, N.E. Messonnier, L.W. Mayer, R. Lynfield New England Journal of Medicine. - 2009.- Vol. 360. - P. 886-892.

185. Velasco, E A Streptococcus pneumoniae: virulence factors, pathogenesis and vaccines /

E.A. Velasco, A.F.M. Verheul, J. Verhoef, H. Snippe//Microbiology.- 1995. - Vol. 59,-P. 591-603.

186. Yadav, C. Genetic requirements for pneumolysin localization / C. Yadav, Thompson, Y.-J. Lu, R. Malley // 7 International Symposium on Pneumococci and Pneumococcal Diseases. Book of Abstracts. Israel. - 2010- Vol. 19 - P.35—36; .

187. Yazdankhah, S. P. Use of variable-number tandem repeats to examine genetic diversity of Neisseria meningitidis/ S. P. Yazdankhah, B. A. Lindstedt, D. A. Caugant // Journal of Clinical Microbiology. - 2005.- Vol. 43. - P. 1699-1705.

188. Zimmer, S.M. Serogroup B meningococcal vaccines / S.M. Zimmer, D.S. Stephens // Curr Opin Investig Drugs. - 2006. - Vol. 7. - P. 733-73.