Особенности экспрессии микроРНК у пациентов с бронхиальной астмой, ХОБЛ и сочетанием бронхиальной астмы и ХОБЛ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.25, кандидат наук Дьяченко Николай Александрович

• Дьяченко Николай Александрович
• кандидат наук
• 2021

Оглавление диссертации кандидат наук Дьяченко Николай Александрович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о сочетании БА и ХОБЛ

1.2 Механизмы эпигенетической регуляции

1.3 Общие сведения о структуре, биогенезе и функциях микроРНК

1.4 Особенности экспрессии микроРНК при бронхообструктивных заболеваниях легких

1.4.1 МикроРНК ШЯ-21 и микроРНК ш1Я-146а при БА

1.4.2 МикроРНК miR-21 и микроРНК ш1Я-146а при ХОБЛ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Общая характеристика обследованных групп

2.2 Молекулярно-генетические методы исследования

2.2.1 База исследования и оборудование

2.2.2 Выделение микроРНК из образцов крови

2.2.3 Выделение микроРНК из биоптатов легких

2.2.4 Синтез кДНК на матрицах микроРНК

2.2.5 Проведение ПЦР в режиме реального времени

2.3 Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Клинические особенности БА, ХОБЛ и ПБАХ

3.1.1 Клинические особенности ПБАХ

3.1.2 Клинические особенности ХОБЛ

3.1.3 Клинические особенности БА

3.2 Особенности экспрессии микроРНК miR-21 и miR-146a в периферической крови в группах пациентов с БА, ХОБЛ, ПБАХ и в контрольной группе

3.3 Взаимосвязи экспрессии микроРНК т1Я-21 и miR-146a с клиническими

и патогенетическими признаками у пациентов с ПБАХ

3.4 Взаимосвязи экспрессии микроРНК miR-21 и miR-146a с клиническими

и патогенетическими признаками у пациентов с ХОБЛ

3.5 Взаимосвязи экспрессии микроРНК mLR-21 и mLR-146a с клиническими

и патогенетическими признаками у пациентов с БА

3.6 Особенности экспрессии микроРНК miR-21 и miR-146a в биоптатах

легких у пациентов с ХОБЛ, получавших хирургическое лечение

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности экспрессии микроРНК у пациентов с бронхиальной астмой, ХОБЛ и сочетанием бронхиальной астмы и ХОБЛ»

Актуальность темы

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), несмотря на достигнутые успехи в диагностике и лечении, остается одной из важнейших проблем здравоохранения, нанося огромный экономический и социальный ущерб ежегодно. Согласно данным «Глобальной стратегии диагностики, лечения и профилактики ХОБЛ» пересмотра 2019 года (GOLD, 2019), ХОБЛ продолжает находиться на четвертом месте в списке причин смертности во всем мире [1]. В связи с тем, что в течение ближайших десятилетий прогнозируется рост заболеваемости ХОБЛ в результате сохраняющегося влияния факторов риска и старения населения, изучение новых механизмов данной патологии с целью поиска перспективных диагностических и прогностических маркеров в рамках персонифицированной, таргетной терапии является весьма актуальным.

Бронхиальная астма (БА) представляет собой хроническое респираторное заболевание, распространенность которого среди населения в разных странах мира составляет от 1 до 18% по данным «Глобальной инициативы по бронхиальной астме» (GINA, 2018) [2]. Изучено множество фенотипов указанной болезни [3], поэтому разработка фенотип-специфической терапии -перспективное направление современной медицины. На сегодняшний день для пациентов с тяжелой, терапевтически резистентной БА зачастую оказывается не эффективной V ступень терапии по GINA. Взаимосвязь между определенными клиническими паттернами, ответом пациента на терапию и патологическими особенностями заболевания требует дальнейшего изучения.

Пациенты с сочетанием БА и ХОБЛ (ПБАХ) представляют собой популяцию, которая отличается от пациентов с изолированными БА, ХОБЛ. Поэтому с позиций патофизиологии, клиники и терапии выделение таких больных в особую группу представляется обоснованным и целесообразным.

Для постановки диагноза ПБАХ пациент должен соответствовать двум большим критериям или одному большому и двум малым критериям. Большие

критерии: прирост объёма форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ1) > 400 мл и > 15%, эозинофилия мокроты или ранее диагностированная БА. Малые критерии: увеличение сывороточного иммуноглобулина-Е (^Е), атопия в анамнезе, прирост ОФВ1 > 200 мл и > 12% по крайней мере в двух измерениях [4]. В настоящее время фенотип ПБАХ изучен недостаточно. В связи с этим актуальным является активное выявление пациентов с ПБАХ, изучение специфики данного фенотипа, что будет способствовать выявлению предикторов развития сочетания БА и ХОБЛ, улучшению прогноза и качества жизни пациентов.

Благодаря новым достижениям в изучении взаимосвязей между генами, их продуктами и факторами окружающей среды была выявлена огромная роль эпигенетической изменчивости - изменений экспрессии генов, которые не затрагивают и не нарушают структуру ДНК, однако способны устойчиво передаваться в ряду поколений.

Одна из главных причин возросшего в настоящее время интереса к эпигенетике заключается в том, что однонуклеотидный полиморфизм генов, изучаемый в ходе анализа полногеномных ассоциаций, не смог объяснить фенотипическую вариабельность, наблюдаемую при БА и ХОБЛ, несмотря на генетическую детерминированность этих заболеваний. Изучение эпигенетических профилей является перспективным и важным не только для фундаментальной науки, но и для практической медицины. Анализ профиля экспрессии микроРНК в комплексе с клинико-лабораторными и инструментальными данными позволит сформировать новые подходы в диагностике и лечении ПБАХ, БА и ХОБЛ.

Принято выделять три основных уровня эпигенетической регуляции и, соответственно, три ее механизма: геномный (метилирование ДНК), протеомный (модификация гистонов) и транскриптомный (регуляция посредством РНК, в первую очередь - микроРНК).

МикроРНК - это малые некодирующие молекулы РНК, которые влияют на экспрессию генов и, таким образом, участвуют в эпигенетической регуляции практически всех физиологических и патологических процессов. В здоровом

организме микроРНК вовлечены практически во все процессы развития тканей и органов, дифференцировки клеток и апоптоза [5], [6]. Однако конкретные биологические функции многих микроРНК и белки-мишени для большинства из них остаются недостаточно изученными.

Если рассматривать микроРНК и дыхательную систему в целом, то эти молекулы необходимы для развития легких в эмбриогенезе и детском возрасте, а также для поддержания легочного гомеостаза на протяжении всей жизни организма. В последние годы была открыта важная роль некоторых микроРНК в патогенезе различных заболеваний, в том числе БА, ХОБЛ и рака легкого, однако эти данные противоречивы.

Согласно данным литературы, у больных с бронхообструктивной патологией особого внимания заслуживают следующие микроРНК: miR-146a, miR-21 [7].

Известно, что увеличение уровня микроРНК miR-146a снижает интерлейкин (ИЛ)-1Ь-индуцированный выброс ИЛ-6 и ИЛ-8 гладкомышечными клетками дыхательных путей и альвеолоцитами [8]. По данным других авторов, экспрессия miR-146a и miR-15b коррелирует со степенью тяжести ХОБЛ, оцененной по функции внешнего дыхания (ФВД) [9]. Также известно, что у пациентов с ХОБЛ сниженная экспрессия miR-146a фибробластами в ответ на действие воспалительных цитокинов ex vivo повышает активность циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2), что приводит к избытку воспалительного медиатора простагландина Е2 (PGE2) в легочной ткани и, как следствие, к подавлению репаративной функции легочных фибробластов.

При изучении активности микроРНК miR-21 на модели аллергической БА у мышей (сенсибилизация к клещам домашней пыли) была показана гиперэкспрессия этой микроРНК. При ХОБЛ данные по экспрессии микроРНК miR-21 противоречивы: некоторые исследователи выявляли гипоэкспрессию miR-21, в то время как в работах других авторов показано повышение экспрессии этой микроРНК [9]. Таким образом, вопрос об уровне экспрессии микроРНК miR-21 у пациентов с ХОБЛ требует дальнейшего уточнения.

Работ, оценивающих экспрессию микроРНК при ПБАХ, в мировой литературе практически нет [10], [11], а для микроРНК miR-21 и miR-146a такие исследования отсутствуют вовсе.

Профили микроРНК в норме и при патологии отличаются друг от друга, поэтому в случае разных вариантов течения заболеваний или при разных нозологических формах определенные микроРНК могут выступать в роли ценных прогностических или диагностических биомаркеров [12].

В настоящее время разрабатываются две ключевые терапевтические стратегии для регулирования содержания конкретных микроРНК в организме: антагомиры (antagomiRs) и микроРНК-имитаторы (miR-mimics). Данные методы уже применяются в онкологии, однако в области респираторных заболеваний до сих пор не опубликованы результаты клинических исследований по оценке стратегий таргетирования микроРНК [7].

Существует множество методов количественной оценки микроРНК в биологических жидкостях и тканях. Ввиду отсутствия у микроРНК строгой специфичности (мишенью одной микроРНК может быть несколько генов), очень важно сделать правильный выбор молекул микроРНК для их дальнейшего применения в диагностике и лечении.

На сегодняшний день ХОБЛ, БА и ПБАХ являются глобальной проблемой человечества. Разработка новых подходов в диагностике и терапии с использованием микроРНК окажет существенное воздействие на решение этой медицинской и социальной проблемы.

Цель работы

Установить особенности экспрессии микроРНК miR-146a и miR-21 у пациентов с БА, ХОБЛ и сочетанием БА и ХОБЛ.

Задачи исследования

1. Изучить клинические особенности ПБАХ у мужчин, проживающих в Северо-Западном регионе РФ.

2. Определить экспрессию микроРНК miR-146a и miR-21 в периферической крови у пациентов с БА, ХОБЛ и ПБАХ.

3. Выполнить анализ ассоциаций экспрессии микроРНК miR-146a и miR-21 в периферической крови у пациентов с БА и ХОБЛ с клиническими и патогенетическими признаками основного заболевания.

4. Выявить особенности профиля экспрессии микроРНК miR-146a и miR-21 у пациентов с ПБАХ.

5. Определить экспрессию микроРНК miR-146a и miR-21 в биоптатах легких у больных с эмфизематозным фенотипом ХОБЛ, получивших хирургическое лечение (редукция объема легких), и их ассоциации с клиническими и патогенетическими признаками основного заболевания.

6. Адаптировать методику определения экспрессии микроРНК miR-21 и miR-146а с использованием реагентов российского производства в образцах периферической крови и биоптатах легких у жителей РФ, больных БА, ХОБЛ и ПБАХ.

Научная новизна

1. Впервые дана характеристика фенотипа ПБАХ у мужчин, проживающих в Северо-Западном регионе РФ.

2. Впервые проведена оценка эпигенетического регулирования на уровне транскриптома (экспрессия микроРНК miR-21 и miR-146а) у пациентов с ПБАХ мужского пола, проживающих в Северо-Западном регионе РФ.

3. Впервые показана ассоциация экспрессии микроРНК miR-21 и miR-146а в периферической крови с патогенетическими и клиническими параметрами, а также с особенностями терапии у пациентов с ПБАХ мужского пола.

4. Впервые проведена оценка органоспецифической экспрессии микроРНК ш1Я-21 и miR-146а у пациентов с эмфизематозным фенотипом ХОБЛ, получивших хирургическое лечение (редукция объема легких).

5. Впервые показана ассоциация органоспецифической экспрессии микроРНК ш1Я-21 с гипоксемией у пациентов с эмфизематозным фенотипом ХОБЛ, получивших хирургическое лечение (редукция объема легких).

6. Адаптирована методика определения экспрессии микроРНК ш1Я-21 и miR-146а с использованием реагентов российского производства в образцах периферической крови и биоптатах легких для жителей РФ, больных БА, ХОБЛ и ПБАХ.

Практическая значимость работы

Разработан метод диагностики фенотипов БА, ХОБЛ, ПБАХ у пациентов мужского пола, проживающих в Северо-Западном регионе РФ, на основе комплексной оценки клинической картины заболевания и лабораторно-инструментальных данных, в том числе эпигенетических маркеров на уровне транскриптома (экспрессия микроРНК ш1Я-21 и mLR-146а), для создания в перспективе персонифицированных подходов к фенотип-специфической терапии БА, ПБАХ, ХОБЛ и их профилактики.

Результаты работы внедрены в лечебную практику пульмонологического отделения № 2, терапевтического отделения № 2 клиники НИИ ревматологии и аллергологии ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» МЗ РФ (197022, СПб, ул. Льва Толстого, д. 6-8, тел. [phone], https://www.1spbgmu.ru).

Теоретические и практические положения, изложенные в диссертации, используются в учебном процессе кафедры госпитальной терапии с курсом аллергологии и иммунологии имени академика М.В. Черноруцкого с клиникой в программах обучения студентов ПСПбГМУ им. академика И.П. Павлова, а также слушателей циклов последипломного образования.

Положения, выносимые на защиту

1. Фенотипы БА, ХОБЛ и ПБАХ различаются по критериям возраста пациентов, характера воспаления, выраженности и степени обратимости

бронхообструкции, особенностей терапии с учетом гендерного признака (мужской пол).

2. Эпигенетическое регулирование на уровне транскриптома (экспрессия микроРНК miR-21 и miR-146а) у пациентов с ПБАХ отличается от такового в группах пациентов с изолированными БА, ХОБЛ и в контрольной группе.

3. У пациентов с ПБАХ экспрессия микроРНК miR-21 и miR-146а ассоциирована с длительностью заболевания, характером воспаления в бронхах, выраженностью бронхообструкции, наличием коморбидной патологии и особенностями терапии.

4. У пациентов с эмфизематозным фенотипом ХОБЛ, получивших хирургическое лечение (редукция объема легких), органоспецифическая экспрессия микроРНК miR-21 в биоптатах легких ассоциирована с гипоксемией.

5. Методика определения экспрессии микроРНК шiR-21 и miR-146а в образцах периферической крови и биоптатах легких перспективна в качестве дополнительного метода комплексной диагностики фенотипов БА, ХОБЛ и ПБАХ у жителей РФ.

Апробация работы

Результаты диссертации доложены на XXVIII и XXIX Национальных конгрессах по болезням органов дыхания в 2018 и 2019 гг. (г. Москва), на IV Российском конгрессе с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное» в 2017 году (г. Санкт-Петербург), на научно-практических конференциях «Булатовские чтения: актуальные вопросы пульмонологии и клинической аллергологии» в 2018 и 2019 гг. (г. Санкт-Петербург).

По теме диссертации опубликованы 4 печатные работы, в том числе 3 в журналах, входящих в Перечень Высшей аттестационной комиссии РФ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о сочетании БА и ХОБЛ

БА и ХОБЛ - наиболее часто встречающиеся в клинической практике болезни органов дыхания. Обычно каждое из этих заболеваний имеет различную этиологию, клиническую картину и течение. Тем не менее, эти две нозологические формы иногда сочетаются у одного и того же пациента, и на сегодняшний день признано, что БА и ХОБЛ могут сосуществовать как фенотип ПБАХ, выделение которого клинически важно по целому ряду причин [13]. Во-первых, подсчитано, что с каждым годом количество пациентов с ПБАХ значительно увеличивается, как и количество пациентов с изолированными БА и ХОБЛ. Во-вторых, у лиц с ПБАХ наблюдаются более частые и тяжелые обострения заболевания. Например, пациенты, страдающие сочетанием БА и ХОБЛ, как правило, имеют выраженную гипоксию из-за необратимой обструкции дыхательных путей и нарушения альвеолярной диффузионной способности вследствие эмфизематозных изменений. С другой стороны, пациенты с ХОБЛ, которые имеют астматический компонент, не только страдают от одышки при физической нагрузке, но также у них могут развиваться приступы удушья ночью или рано утром с дистантными хрипами. В-третьих, методы лечения ПБАХ, основанные на доказательной медицине, еще не достаточно эффективны, так как пациенты с ПБАХ систематически исключались из клинических испытаний [14].

Впервые представление о ПБАХ было изложено в GINA и GOLD в редакции от 2015 года, и в то время указанное состояние было принято называть «синдромом перекреста БА и ХОБЛ» [15]. Согласно этим рекомендациям, диагностика ПБАХ осуществлялась в два этапа. Первый этап - выявление хронического заболевания дыхательных путей по наличию хронического или рецидивирующего кашля, мокроты, бронхообструкции или повторных обострений заболеваний нижних дыхательных путей. На втором этапе

необходимо было выявить и сравнить признаки БА и ХОБЛ у конкретного пациента (возраст пациента к дебюту заболевания, паттерн симптомов, показатели легочной функции). Например, вариабельность симптомов и ограничение воздушного потока (определяемое с помощью спирометрии или пикфлоуметрии) и анамнез атопии свидетельствовали в пользу БА, в то время как табакокурение и необратимая обструкция соответствовали диагнозу ХОБЛ. Предложенные принципы GINA и GOLD в редакции от 2015 года были понятны для врачей общей практики, но не являлись достаточно объективными [14].

В 2016 году, пытаясь дать более точное определение ПБАХ, международная группа исследователей во главе с Sin D. предложила три основных критерия этой нозологии:

1. Стойкое ограничение воздушного потока (индекс Тиффно после ингаляции бронхолитика менее 0,70) у лиц старше 40 лет;

2. Табакокурение не менее 10 пачко-лет или эквивалентное ему воздействие загрязнения воздуха;

3. Анамнез БА до 40 лет или прирост ОФВ1 более 400 мл

и три второстепенных критерия (наличие в анамнезе атопии или аллергического ринита; прирост ОФВ1 более 200 мл или 12 % от базовых значений при двух или более измерениях; количество эозинофилов в периферической крови более 300 клеток/мл). Диагноз ПБАХ мог быть установлен при наличии трех основных критериев и хотя бы одного второстепенного критерия [16].

В 2017 году GINA официально рекомендовала использовать термин «сочетание БА и ХОБЛ», а не «синдром перекреста БА и ХОБЛ» [2] . Эта позиция основывалась на том, что термин «синдром» предполагает состояние неизвестного происхождения, при котором клинические симптомы и/или лабораторные данные указывают на общие патофизиологические механизмы. Кроме того, БА и ХОБЛ имеют разнообразные фенотипы, поэтому термин «синдром» некорректен для описания ПБАХ.

Несмотря на то, что единого подхода к диагностике ПБАХ до сих пор нет [17], принято считать, что на сегодняшний день распространенность ПБАХ

составляет около 15-20% среди больных БА и ХОБЛ [18]. Недавнее исследование, проведенное в США, показало, что распространенность ПБАХ составила около 6% среди 183521 обследованных пациентов с БА и ХОБЛ [19].

Встречаемость сопутствующей патологии при ПБАХ выше, чем у пациентов с БА, но близка к таковой при ХОБЛ. Расходы на лечение лиц с ПБАХ больше, чем у лиц с БА, и сопоставимы с таковыми для лиц с ХОБЛ [18]. При этом в ходе другого исследования в США, основанного на Национальной программе обследования здоровья у больных с 2007 по 2012 год, были получены данные, что скорректированная по возрасту распространенность ПБАХ намного ниже (1,05%), однако для ПБАХ характерно более тяжелое течение по сравнению с изолированными БА, ХОБЛ [20]. Еще одно исследование в Южной Корее продемонстрировало, что информация о распространенности ПБАХ сильно зависит от используемых диагностических критериев [21].

Становится все более очевидным, что ПБАХ представлен в виде нескольких фенотипов: одни из них включают в себя больше признаков БА, чем ХОБЛ, а другие - наоборот; иными словами, ПБАХ является «зонтиком» для нескольких фенотипов [22]. По мнению некоторых исследователей, ПБАХ свойственны три основных клинических субфенотипа. Первый субфенотип включает пациентов с диагнозом ХОБЛ, но с особенностями БА (например, выраженная обратимость после ингаляции бронходилататора). Второй включает пациентов с диагнозом ХОБЛ, но с некоторыми особенностями БА (например, эозинофилия крови или мокроты, повышенная концентрация иммуноглобулина Е (^Е)). И третий субфенотип включает пациентов с БА в возрасте до 40 лет с наличием в анамнезе табакокурения (или его отсутствием, по мнению некоторых авторов), демонстрирующих частичную обратимость обструкции дыхательных путей [18].

Таким образом, пациенты с ПБАХ имеют патофизиологические особенности как БА, так и ХОБЛ, но соотношение степени выраженности этих особенностей зависит от эндотипов этих заболеваний. Некоторые пациенты имеют в основном черты атопии и ^2-тип воспаления дыхательных путей, с эозинофилией, преобладанием CD4+ клеток, повышенными уровнями ^Е, с

участием некоторых ключевых медиаторов, таких как ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-9 и ИЛ-13. Другие пациенты имеют в основном признаки ХОБЛ, такие как нейтрофилия дыхательных путей и преобладание CD8+-клеток с участием медиаторов ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-13 и фактора некроза опухоли альфа (Т№-а) [23].

В аспекте структурных изменений дыхательных путей, при БА преобладают десквамация эпителия, субэпителиальный фиброз и гипертрофия гладких мышц дыхательных путей, тогда как для ХОБЛ в большей степени характерна плоскоклеточная метаплазия, гипертрофия слизистых желез и разрушение паренхимы легких, ремоделирование бронхов [18], [24].

Группа исследователей вместе с Ь. Реге7-ёе^1аш и В. Cosio установили, что у пациентов, страдающих ХОБЛ с эозинофильным воспалением, и у курящих астматиков с частично обратимой обструкцией (тяжелая БА) концентрации ИЛ-5, ИЛ-13, ИЛ-8, ИЛ-6, ТЫБ-а и ИЛ-17 в сыворотке крови были сходными. Однако биомаркеры, ассоциированные с ТИ2-типом воспаления, такие как периостин, концентрация оксида азота в выдыхаемом воздухе (БеКО) и количество эозинофилов крови, были выше у пациентов с ХОБЛ с эозинофильным типом воспаления [22].

У пациентов с ПБАХ БеКО, содержание ^Е и эозинофилов мокроты и крови обычно выше, чем у лиц с ХОБЛ, и сопоставимы с таковыми у пациентов с БА [25]. Акагаг-Кауап^е В. и его коллеги сообщили, что для пациентов с ХОБЛ и ПБАХ характерно воспаление в больших и малых дыхательных путях, и при этом концентрация эозинофилов прямо коррелирует со значением БеКО. [26]

В настоящее время при БА использование ингаляционных кортикостероидов (ИГКС) считается обязательным, и ИГКС могут использоваться в качестве монотерапии, а при ХОБЛ возможно лечение длительно действующими бронходилататорами: бета-2-агонистами длительного действия (ДДБА) или/и длительно действующими м-холинолитиками (длительно действующие антихолинергические средства, ДДАХ) без ГКС. Комбинированная терапия ИГКС в сочетании с ДДБА или/и ДДАХ является базисной терапией для ПБАХ [27]. Существенный интерес для пациентов с ПБАХ представляет недавно

разработанная тройная терапия, сочетающая ДДБА, ДДАХ и ИГКС в одном ингаляторе [28].

Таким образом, значимость фенотипа ПБАХ и потребность в его дальнейшем изучении не вызывает сомнений, так как данная патология существенно снижает качество жизни пациентов, являясь серьезной медико-социальной проблемой [29]. Именно поэтому изучение новых патогенетических механизмов с участием микроРНК - перспективный путь развития в области инновационных методов диагностики и лечения сочетания БА и ХОБЛ.

1.2 Механизмы эпигенетической регуляции

За последние десятилетия произошел огромный скачок в изучении взаимодействий между генами, их продуктами и факторами окружающей среды. Особенность эпигенетической регуляции состоит в том, что благодаря ей происходит изменение экспрессии генов без нарушения структуры ДНК, и это изменение может устойчиво передаваться в ряду поколений. Важным направлением эпигенетики является изучение особенностей эпигенома в различных тканях организма в норме и при патологии.

Активность многих генов специфична во времени и пространстве: такие гены экспрессируются только на определенных этапах дифференцировки клетки или/и в определенных тканях организма. В целом, у взрослого человека одновременно работают не более 20% всех генов. Необходимый уровень активности каждого гена в нужное время и в определенном месте во многом обеспечивается за счет эпигенетических механизмов [30].

Существуют три уровня эпигенетической регуляции и, соответственно, три ее основных механизма: геномный (метилирование ДНК), протеомный (модификация гистонов) и транскриптомный (регуляция посредством РНК, в первую очередь микроРНК) [31].

Метилирование ДНК

Метилирование ДНК обеспечивается за счёт присоединения метильной группы к цитозину и обычно происходит в составе CpG-динуклеотида [32]. 5'-нетранслируемые области генов содержат «CpG-островки» - последовательности, богатые CpG-динуклеотидами. Метильные группы нарушают взаимодействия ДНК с белками, что приводит к ослаблению связей транскрипционных факторов с ДНК. Метилированные участки ДНК могут взаимодействовать с репрессорами транскрипции, а также влиять на структуру хроматина. Таким образом, метилирование уменьшает экспрессию гена, причем метилированное состояние может поддерживаться в течение многих клеточных поколений.

Метилирование ДНК играет ключевую роль в старении, канцерогенезе, в развитии легких и дифференцировке их клеток в процессе эмбриогенеза. Лабораторные животные, которые утратили способность к ДНК-метилированию, не развиваются во взрослых особей. Метилирование ДНК также важно и для врожденного и приобретенного иммунного ответа, поскольку оно регулирует экспрессию генов главного комплекса гистосовместимости и влияет на презентацию антигенов.

При ХОБЛ выявлено нарушение метилирования ДНК, а именно гипометилирование генов-иммуномодуляторов. В частности, было обнаружено, что у пациентов с ХОБЛ с ранним развитием эмфиземы имеет место гипометилирование гена 8ЕКРШЛ1, кодирующего альфа-1-антитрипсин -ингибитор сериновых протеаз [31]. Для пациентов с БА также характерны свои особенности нарушения метилирования ДНК. В первую очередь это касается гена транскрипционного фактора STAT5A, участвующего в дифференцировке лимфоцитов ТК2 [33].

Сигаретный дым и прочие загрязнения воздуха вызывают окислительный стресс, сопровождающийся гипометилированием [34]. Отмечено, что пренатальное воздействие курения приводит к нарушению функции легких, к повышенному риску развития стридорозного дыхания и БА у ребенка. Курение женщины в последнем триместре беременности ассоциировано с развитием БА у детей, что объясняется нарушением метилирования ДНК через механизм окислительного стресса [31].

В отличие от мутаций, метилирование ДНК - обратимый процесс, что делает данный механизм привлекательным для терапевтического воздействия. Степень метилирования ДНК можно рассматривать как потенциальный диагностический и прогностический биомаркер, а сайты метилирования - как потенциальные мишени для новых лекарственных агентов.

Модификация гистонов

Второй эпигенетический механизм связан с ДНК-гистоновыми взаимодействиями. Гистоны влияют на доступность определенных участков ДНК

для транскрипции посредством изменения конформации хроматина. Наиболее хорошо изученными модификациями гистонов являются ацетилирование и деацетилирование, которые осуществляются ацетилтрансферазами гистонов (HAT) и деацетилазами гистонов (HDAC), соответственно [30].

Деацетилирование гистонов приводит к конденсации хроматина и образованию гетерохроматина, т. е. к более плотному упаковыванию ДНК в ядре. Вследствие этого присоединение к ДНК транскрипционных факторов и полимеразы нарушается, что в итоге подавляет экспрессию генов. Повышенное ацетилирование гистонов, наоборот, приводит к разрыхлению хроматина (образованию эухроматина) и гиперэкспрессии генов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дьяченко Николай Александрович, 2021 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Global Initiative for COPD. Global Strategy for Diagnosis, Management, and Prevention of COPD [Электронный ресурс]. - 2019. - Режим доступа: https://goldcopd.org/wp-content/uploads/2018/11/GOLD-2019-v 1.7-FINAL-14Nov2018-WMS.pdf.

2. Global Initiative for Asthma. Global Strategy of Asthma Management and Prevention [Электронный ресурс]. - 2018. - Режим доступа: https://ginasthma.org/wp-content/uploads/2018/04/wms-GINA-2018-report-V1.3-002.pdf.

3. Nanda, A. Asthma in Adults/A. Nanda, AN. Wasan//Med Clin North Am. -2020. - №104. - P. 95-108.

4. Soler-Cataluna, JJ. Consensus document on the overlap phenotype COPD-asthma in COPD/JJ. Soler-Cataluna, B. Cosio, JL. Izquierdo et al.//Arch Bronconeumol. - 2012. - №48. - P. 331.

5. Chen, Y. MicroRNAs: the fine modulators of liver development and function/Y. Chen, CM. Verfaillie//Liver International. - 2014. - №34. - P. 976.

6. Hata, A. Functions of the bone morphogenetic protein signaling pathway through microRNAs (review)/A. Hata, H. Kang//Int J Mol Med. - 2015. - №35. - P. 563.

7. Stolzenburg, LR. The role of microRNAs in chronic respiratory disease: recent insights/LR. Stolzenburg, A. Harris//Biol Chem. - 2018. - №399. - P. 219-234.

8. Perry, MM. Rapid changes in microRNA-146a expression negatively regulate the IL-1beta-induced inflammatory response in human lung alveolar epithelial cells/MM. Perry, SA. Moschos, AE. Williams et al.//J Immunol. - 2008. - №180. - P. 5689.

9. Rupani, H. MicroRNAs and respiratory diseases/H. Rupani, T. Sanchez-Elsner, P. Howarth// Eur Respir J. - 2013. - №41. - P. 695-705.

10. Lacedonia, D. Expression profiling of miRNA-145 and miRNA-338 in serum and sputum of patients with COPD, asthma, and asthma-COPD overlap

syndrome phenotype/D. Lacedonia, GP. Palladino, MP. Foschino-Barbaro et al.//Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. - 2017. - №12. - P. 1811-1817.

11. Asensio, VJ. Eosinophilic COPD Patients Display a Distinctive Serum miRNA Profile From Asthma and Non-eosinophilic COPD/VJ. Asensio, A. Tomas, A. Iglesias et al.//Arch Bronconeumol. - 2019.

12. Dutta, RK. Aberrant MicroRNAomics in Pulmonary Complications: Implications in Lung Health and Diseases/RK. Dutta, S. Chinnapaiyan, H. Unwalla//Mol Ther Nucleic Acids. - 2019. - №18. - P. 413-431.

13. Venkata, AN. Asthma-COPD overlap: review of diagnosis and management//Curr Opin Pulm Med. - 2019.

14. Yanagisawa, S. Definition and diagnosis of asthma-COPD overlap (ACO)/S. Yanagisawa, M. Ichinose//Allergology International. - 2018. - №67. - P. 172-178.

15. Global Initiative for Asthma. Global Initiative for COPD. Diagnosis of Diseases of Chronic Airflow Limitation: Asthma, COPD, and Asthma-COPD Overlap Syndrome (ACOS). [Электронный ресурс]. - 2015. - Режим доступа: http://goldcopd.org/asthma-copd-asthma-copd-overlap-synd.

16. Sin, DD. What is asthma-COPD overlap syndrome? Towards a consensus definition from a round table discussion/DD. Sin, M. Miravitlles, DM. Mannino et al.//Eur Respir J. - 2016. - №48. - P. 664.

17. Barczyk, A. Asthma-COPD Overlap - A Discordance Between Patient Populations Defined by Different Diagnostic Criteria/A. Barczyk, M. Maskey-Warzçchowska, K. Gorska et al.//J Allergy Clin Immunol Pract - 2019. - №7. - P. 2326-2336.

18. Boulet, LP. The many faces of asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap/LP. Boulet, NA. Hanania//Curr Opin Pulm Med. - 2019. - №25. - P. 110.

19. Turner, RM. Overlap of asthma and chronic obstructive pulmonary disease in patients in the United States: analysis of prevalence, features, and subtypes/RM. Turner, M. DePietro, B. Ding//JMIR Public Heal Surveill. - 2018. - №4. - P. 60.

20. Mendy, A. Prevalence and features of asthma COPD overlap in the United States 2007-2012/A. Mendy, E. Forno, T. Niyonsenga et al.//Clin Respir J. - 2018. -№12. - P. 2369-2377.

21. Song, JH. Differences in prevalence of asthma-COPD overlap according to different criteria/JH. Song, CH. Lee, DK. Kim et al.//Medicine (Baltimore). - 2018.

22. Perez-de-Llano, L. Asthma-COPD overlap is not a homogeneous disorder: further supporting data/L. Perez-de-Llano, BG. Cosio, CHACOS study group//Respir Res. - 2017. - №18. - P. 183.

23. Wurst, KE. Understanding asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndrome/KE. Wurst, K. Kelly-Reif, GA. Bushnell et al.//Respir Med. - 2016.

- №110. - P. 1-11.

24. Karayama, M. Physiological and morphological differences of airways between COPD and asthma-COPD overlap/M. Karayama, N. Inui, H. Yasui et al.//Sci Rep. - 2019. - №9. - P. 7818.

25. Gao, J. Sputum cell count: biomarkers in the differentiation of asthma, COPD and asthma-COPD overlap/J. Gao, W. Zhou, B. Chen et al.//Int J Chron Obs Pulmon Dis. - 2017. - №12. - P. 2703-2710.

26. Alcazar-Navarrete, B. Alveolar and bronchial nitric oxide in chronic obstructive pulmonary disease and asthma-COPD overlap/B. Alcazar-Navarrete, F. Castellano Minan, P. Santiago Diaz et al.//Arch Bronconeumol. - 2018. - №54. - P. 414-419.

27. Vogelmeier, CF. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report: GOLD executive summary/CF. Vogelmeier, GJ. Criner, FJ. Martinez et a.l//Arch Bronconeumol. - 2017.

- №53. - P. 128-149.

28. Lipson, DA. Once-daily single-inhaler triple versus dual therapy in patients with COPD/DA. Lipson, F. Barnhart, N. Brealey et al.//N Engl J Med. - 2018. - №378.

- P. 1671-1680.

29. Kim, J. Socioeconomic impact of asthma, chronic obstructive pulmonary disease and asthma-COPD overlap syndrome/J. Kim, YS. Kim, K, Kim et al.//J Thorac Dis. - 2017. - №9. - P. 1547-1556.

30. Миронова, Ж.А. Геномные технологии в пульмонологии: роль микроРНК в развитии бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких/Ж.А. Миронова, Н.А. Дьяченко, А.С. Улитина и соавт.//Пульмонология. -2016. - №26. - С. 5-12.

31. Durham, AL. Basic science: Epigenetic programming and the respiratory system/AL. Durham, IM. Adcock//Breathe. - 2013. - №9. - P. 278-288.

32. Pinney, SE. Mammalian Non-CpG Methylation: Stem Cells and Beyond//Biology (Basel). - 2014. - №3. - P. 739.

33. Tsicopoulos, A. Environmental and genetic contribution in airway epithelial barrier in asthma pathogenesis/A. Tsicopoulos, P. de Nadai, C. Glineur//Curr Opin Allergy Clin Immunol. - 2013. - №13. - P. 495.

34. Barnes, PJ. Corticosteroid resistance in patients with asthma and chronic obstructive pulmonary disease//J Allergy Clin Immunol. - 2013. - №131. - P. 636.

35. Горбунова, В.Н. Введение в молекулярную медицину: учебное пособие/В.Н. Горбунова, С.Н. Пчелина, А.Л. Шварцман//Санкт-Петербрг. - Изд-во Политехнического ун-та. - 2011.

36. Kozomara, A. miRBase: from microRNA sequences to function/A. Kozomara, M. Birgaoanu, S. Griffiths-Jones//Nucleic Acids Res. - 2019. - №47. - P. 155-162.

37. Sassen, S. MicroRNA: implications for cancer/S. Sassen, EA. Miska, C. Caldas//Virchows Arch. - 2008. - №452. - P. 1-10.

38. Vishnoi, A. MiRNA Biogenesis and Regulation of Diseases: An Overview/A. Vishnoi, S. Rani//Methods Mol Biol. - 2017. - №1509. - P. 1-10.

39. Lu, TX. Diagnostic, functional, and therapeutic roles of microRNA in allergic diseases/TX. Lu, ME. Rothenberg//J Allergy Clin Immunol. - 2013. - №132. -P. 3-13.

40. Oglesby, IK. MicroRNAs in inflammatory lung disease - master regulators or target practice?/IK. Oglesby, NG. McElvaney, CM. Greene//Respir Res. - 2010. -№11. - P. 148.

41. Pritchard, CC. MicroRNA profiling: approaches and considerations/CC. Pritchard, HH. Cheng, M. Tewari//Nat Rev Genet. - 2012. - №13. - P. 358-369.

42. Кочетов, А.Г. Перспективы применения микроРНК в диагностике и терапии сердечной недостаточности/А.Г. Кочетов, И.В. Жиров, В.П. Масенко и соавт.//Кардиологический вестник. - 2014. - №10. - С. 62-67.

43. Sinha, A. Exosome-enclosed microRNAs in exhaled breath hold potential for biomarker discovery in patients with pulmonary diseases/A. Sinha, AK. Yadav, S. Chakraborty et al.//J Allergy Clin Immunol. - 2013. - №132. - P. 219-222.

44. Maltby, S. Targeting MicroRNA function in respiratory diseases: minireview/S. Maltby, M. Plank, HL. Tay et al.//Front Physiol. - 2016. - №7. - P. 21.

45. Schembri, F. MicroRNAs as modulators of smoking-induced gene expression changes in human airway epithelium/F. Schembri, S. Sridhar, C. Perdomo et al.//Proc Natl Acad Sci USA. - 2009. - №106. - P. 2319-2324.

46. Dissanayake, E. MicroRNAs in Allergic Disease/ E. Dissanayake, Y. Inoue//Curr Allergy Asthma Rep. - 2016. - №16. - P. 67.

47. Hammad Mahmoud Hammad, R. Plasma microRNA-21, microRNA-146a and IL-13 expression in asthmatic children/R. Hammad Mahmoud Hammad, DHED. Hamed, MAER. Eldosoky et al.//Innate Immunity. - 2018. - №24. - P. 171-179.

48. Elbehidy, RM. MicroRNA-21 as a novel biomarker in diagnosis and response to therapy in asthmatic children/RM. Elbehidy, DM. Youssef, AS. El-Shal et al.//Molecular Immunology. - 2016. - №71. - P. 107-114.

49. Lu, TX. MicroRNA-21 is upregulated in allergic airway inflammation and regulates IL-12p35 expression/TX. Lu, A. Munitz, ME. Rothenberg//J Immunol. -2009. - №182. - P. 4994-5002.

50. Wu, XB. Overexpression of microRNA-21 and microRNA-126 in the patients of bronchial asthma/XB. Wu, MY. Wang, HY. Zhu et al.//Int J Clin Exp Med. -2014. - №7. - P. 1307-1312.

51. Luo, X. Increased expression of miR-146a in children with allergic rhinitis after allergen-specific immunotherapy/X. Luo, H. Hong, J. Tang et al.//Allergy Asthma Immunol Res. - 2016. - №8. - P. 132-140.

52. Rebane, A. MicroRNA and allergy//Adv Exp Med Biol. - 2015. - №888. -P. 331-352.

53. Liu, L. Activation of peroxisome proliferation-activated receptor- y inhibits transforming growth factor- ß1- induced airwaysmooth muscle cell proliferation by suppressing Smad-miR- 21 signaling/L. Liu, Y. Pan, C. Zhai et al.//Journal of Cellular Physiology. - 2017. - №234. - P. 669-681.

54. Yu, ZW. Mutual regulation between miR-21 and the TGFß/Smad signaling pathway in human bronchial fibroblasts promotes airway remodeling/ZW. Yu, YQ. Xu, XJ. Zhang et al.//Journal of Asthma. - 2019. - №56. - P. 341-349.

55. Li, CL. MicroRNA-21 mediates the protective effects of mesenchymal stem cells derived from iPSCs to human bronchial epithelial cell injury under hypoxia/CL. Li, ZB. Xu, XL. Fan et al.//Cell Transplantation. - 2018. - №27. - P. 571583.

56. Lee, HY. Inhibition of MicroRNA-21 by an antagomir ameliorates allergic inflammation in a mouse model of asthma/HY. Lee, JY. Choi, J. Hur et al.//Exp Lung Res. - 2017. - №43. - P. 109-119.

57. Kim, RY. MicroRNA-21 drives severe, steroid-insensitive experimental asthma by amplifying phosphoinositide 3-kinase-mediated suppression of histone deacetylase 2/RY. Kim, JC. Horvat, JW. Pinkerton et al.//J Allergy Clin Immunol. -2017. - №139. - P. 519-532.

58. Bartel, S. Pulmonary microRNA profiles identify involvement of Creb1 and Sec14l3 in bronchial epithelial changes in allergic asthma/S. Bartel, N. Schulz, F. Alessandrini et al.//Sci Rep. - 2017.

59. Han, S. miR-146a mimics attenuate allergic airway inflammation by impacted group 2 innate lymphoid cells in an ovalbumin-induced asthma mouse model/S. Han, C. Ma, L. Bao et al.//Int Arch Allergy Immunol. - 2018. - №177. - P. 302-310.

60. Faiz, A. Profiling of healthy and asthmatic airway smooth muscle cells following IL-1ß treatment: a novel role for CCL20 in chronic mucus hyper-secretion/A. Faiz, M. Weckmann, H. Tasena et al.//Eur Respir J. - 2018.

61. Liu, L. MiR-146a regulates PMl-induced inflammation via NF-kB signaling pathway in BEAS-2B cells/L. Liu, C. Wan, W. Zhang et al.//Environ Toxicol. - 2018. - №33. - P. 743-751.

62. Li, F. MicroRNA-146a promotes IgE class switch in B cells via upregulating 14-3-3g expression/F. Li, Y. Huang, YY. Huang et al.//Mol Immunol. -2017. - №92. - P. 180 -189.

63. Zhang, Y. MicroRNA-146a expression inhibits the proliferation and promotes the apoptosis of bronchial smooth muscle cells in asthma by directly targeting the epidermal growth factor receptor/Y. Zhang, Y. Xue, Y. Liu et al.//Exp Ther Med. -2016. - №12. - P. 854-858.

64. Fujii, S. Insufficient autophagy promotes bronchial epithelial cell senescence in chronic obstructive pulmonary disease/S. Fujii, H. Hara, J. Araya at al.//Oncoimmunology. - 2012. - №1. - P. 630-641.

65. Zeng, Z. MicroRNA-21 aggravates chronic obstructive pulmonary disease by promoting autophagy/Z. Zeng, S. He, J. Lu et al.//Exp Lung Res. - 2018. - №44. -P. 89-97.

66. Chen, ZH. Egr-1 regulates autophagy in cigarette smoke-induced chronic obstructive pulmonary disease/ZH. Chen, HP. Kim, FC. Sciurba et al.//PLoS ONE. -2008.

67. He, ZH. Decitabine enhances stem cell antigen-1 expression in cigarette smoke extract-induced emphysema in animal model/ZH. He, Y. Chen, P. Chen et al.//Exp Biol Med (Maywood). - 2016. - №241. - P. 131.

68. Xie, L. An increased ratio of serum miR-21 to miR-181a levels is associated with the early pathogenic process of chronic obstructive pulmonary disease in asymptomatic heavy smokers/L. Xie, M. Wu, H. Lin et al.//Mol. Biosyst - 2014. -№10. - P. 1072-1081.

69. Xie, L. Expression of miR-21 in peripheral blood serum and mononuclear cells in patients with chronic obstructive pulmonary disease and its clinical significance/L. Xie, F. Yang, S. Sun//Cent South Univ (Med Sci). - 2016. - №41. - P. 238-243.

70. Chen, BB. Circulating miR-146a/b correlates with inflammatory cytokines in COPD and could predict the risk of acute exacerbation COPD/BB. Chen, ZH. Li, S. Gao//Medicine (Baltimore). - 2018.

71. Tasena, H. MicroRNA-mRNA regulatory networks underlying chronic mucus hypersecretion in COPD/H. Tasena, A. Faiz, W. Timens et al.//Eur Respir J. -2018.

72. Osei, ET. miR-146a-5p plays an essential role in the aberrant epithelial-fibroblast cross-talk in COPD/ET. Osei, L. Florez-Sampedro, H. Tasena et al.//Eur Respir J. - 2017.

73. Sato, T. MicroRNAs as Therapeutic Targets in Lung Disease: Prospects and Challenges/T. Sato, H. Baskoro, SI. Rennard et al.//Chronic Obstr Pulm Dis. -2015. - №3. - P. 382-388.

74. Sessa, R. Role of MicroRNAs in lung development and pulmonary diseases/R. Sessa, A. Hata//Pulm Circ. - 2013. - №3. - P. 315-328.

75. Trotter, MA. Advanced therapies for COPD - What's on the horizon? Progress in lung volume reduction and lung transplantation/MA. Trotter, PM. Hopkins//J Thorac Dis. - 2014. - №6. - P. 1640-1653.

76. Chomczynski, P. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on/P. Chomczynski, N. Sacchi//Nat Protoc. - 2006. - №1. - P. 581-585.

77. Endogenous Controls for Real-Time Quantitation of miRNA Using TaqMan® MicroRNA Assays. Applied Biosystems Application Note [Электронный ресурс]. - 2007. - Режим доступа: www.appliedbiosystems.com.

78. Vandesompele, J. Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes/J. Vandesompele, K. De Preter, F. Pattyn et al.//Genome Biol. - 2002.

79. Barnes, PJ. Cellular and molecular mechanisms of asthma and COPD//Clin Sci (Lond). - 2017. - №131. - P. 1541-1558.

80. Bai, JW. Asthma-COPD overlap syndrome showed more exacerbations however lower mortality than COPD/JW. Bai, B. Mao, WL. Jang et al.//QJM. - 2017. -№110. - P. 431-436.

81. Miravitlles, M. Diagnosis of asthma-COPD overlap: the five commandments//Eur Respir J. - 2017.

82. Gibson, PG. Asthma-COPD overlap 2015: now we are six/PG. Gibson, VM. McDonald//Thorax. - 2015. - №70. - P. 683-691.

83. Boulet, LP. Asthma-COPD overlap phenotypes and smoking: comparative features of asthma in smoking or non-smoking patients with an incomplete reversibility of airway obstruction/LP. Boulet, ME. Boulay, JL Derival et al.//COPD. - 2018. - №15.

- P. 130-138.

84. Baarnes, CB. Incidence and long-term outcome of severe asthma-COPD overlap compared to asthma and COPD alone: a 35-year prospective study of 57,053 middle-aged adults/CB. Baarnes, ZJ. Andersen, A. Tjonneland et al.//Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. - 2017- №12. - P. 571-579.

85. Maselli, DJ. Asthma COPD overlap: impact of associated comorbidities/DJ. Maseli, NA. Hanania//Pulm Pharmacol Ther. - 2018. - №52. - P. 27-31.

86. Henriksen, AH. The prevalence and symptom profile of asthma-COPD overlap: the HUNT study/AH. Henriksen, A. Langhammer, S. Steinshamn et al.//COPD. - 2018. - №15. - P. 27-35.

87. Caillaud, D. Asthma-COPD overlap syndrome (ACOS) vs 'pure' COPD: a distinct phenotype?/D. Caillaud, P. Chanez, R. Escamilla et al.//Allergy. - 2017. - №72.

- P. 137-145.

88. Hamada, S. Radiographic evidence of sinonasal nflammation in asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndrome: an underrecognized association/S. Hamada, S. Tatsumi, Y. Kobayashi et al.//J Allergy Clin Immunol Pract.

- 2017. - №5. - P. 1657-1662.

89. Yeh, JJ. Asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndrome associated with risk of pulmonary embolism/JJ. Yeh, YC. Wang, CH. Kao//PLoS One. - 2016.

90. Yeh, JJ. The relationship of depression in asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndrome/JJ. Yeh, CL. Lin, WH. Hsu et al.// PLoS One. -2017.

91. Yeh, JJ. Association of asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndrome with coronary artery disease, cardiac dysrhythmia and heart failure: a population-based retrospective cohort study/JJ. Yeh, YF. Wei, CL. Lin et al.//BMJ Open. - 2017.

92. Yeh, JJ. Asthma chronic obstructive pulmonary diseases overlap syndrome increases the risk of incident tuberculosis: a national cohort study/JJ. Yeh, YC. Wang, CH. Kao//PLoS One. - 2016.

93. Ekerljung, L. Prevalence, clinical characteristics and morbidity of the asthma-COPD overlap in a general population sample/L. Ekerljung, R. Mincheva, S. Hagstad et al.//J Asthma. - 2018. - №55. - P. 461-469.

94. Mindus, S. Asthma and COPD overlap (ACO) is related to a high burden of sleep disturbance and respiratory symptoms: results from the RHINE and Swedish GA2LEN surveys/S. Mindus, A. Malinovschi, L. Ekerljung et al.// PLoS One. - 2018.

95. Wurst, KE. Disease burden of patients with asthma/COPD overlap in a US claims database: impact of ICD-9 coding based definitions/KE. Wurst, S. St Laurent, D. Hinds et al.//COPD. - 2017. - №14. - P. 200-209.

96. Lee, SY. Combination therapy of inhaled steroids and long-acting beta2-agonists in asthma-COPD overlap syndrome/SY. Lee, HY. Park, EK. Kim et al.//Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. - 2016. - №11. - P. 2797-2803.

97. Ong, J. Age-related gene and miRNA expression changes in airways of healthy individuals/J. Ong, RR. Woldhuis, IM Boudewijn et al,//Sci Rep. - 2019. - №9. - P. 3765.

98. Trinh, HKT. Association of the miR-196a2, miR-146a, and miR-499 polymorphisms with asthma phenotypes in a Korean population/HKT. Trinh, DL. Pham, SC. Kim et al.//Mol Diagn Ther. - 2017 - №21. - P. 547-554.

99. Williams, AE. MicroRNA expression profiling in mild asthmatic human airways and effect of corticosteroid therapy/AE, Williamsm, H. Larner-Svensson, MM. Perry et al.//PLoS One. - 2009.

100. Comer, BS. MicroRNA-146a microRNA-146b expression and antiinflammatory function in human airway smooth muscle/BS. Comer, B. Camoretti-Mercado, PC. Kogut et al.//Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. - 2014. - №307. - P. 727-734.