Особенности гуморального иммунного ответа при гепатитах А,С, дельта и их значение для клиники и диагностики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, доктор биологических наук Круглов, Игорь Вячеславович

  • Круглов, Игорь Вячеславович
  • доктор биологических наукдоктор биологических наук
  • 2006, Москва
  • Специальность ВАК РФ14.00.36
  • Количество страниц 208
Круглов, Игорь Вячеславович. Особенности гуморального иммунного ответа при гепатитах А,С, дельта и их значение для клиники и диагностики: дис. доктор биологических наук: 14.00.36 - Аллергология и иммулология. Москва. 2006. 208 с.

Оглавление диссертации доктор биологических наук Круглов, Игорь Вячеславович

ВВЕДЕНИЕ.10.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.26.

1.1. Вирусные гепатиты: общее и особенное.26.

1.2. Иммуноферментиый анализ в диагностике гепатита С.31.

1.3. Различные варианты течения HCV-иифекции и дифференциально-диагностические критерии.39.

1.4. Гепатит D.44.

1.5. Исследование ВГЛ-инфекции с помощью синтетических пептидов.49.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.52.

2.1. Методы компьютерного анализа белковых последовательностей.52.

2.2. Твердофазный синтез пептидов.52.

2.3. Серологическое исследование эпитопов белка NS5 вируса гепатита С.57.

2.4. Спектр антител к различным антигенам HCV при различных вариантах течения хронической HCV-иифекции.59.

2.5. Исследование серокоиверсии антител у больных ГС с использованием синтетических пептидов, моделирующих иммунодомшиштные антигенные детерминанты ВГС.61.

2.6. Исследование серокоиверсии антител у больных ГС на основе моделирования антигенов ВГС с использованием синтетических пептидов и генноииженерных полипептидов.62.

2.7. Выявление типоспецифических anli-HCNS4 антител у больных гепатитом С методом иммунофермеитиого анализа.63.

2.8. Серологическое исследование иммунодоминантиого участка иуклео-капсидиого белка вируса гепатита дельта.66.

2.9. Исследование антигенных свойств пептидов, соответствующих фрагментам последовательности белка нуклеокапсида IIDV различных генотипов.70.

2.10. Разработка новых иммуноферментных тест-систем для диагностики гепатита D па основе синтетических пептидов.78.

2.11. Исследование особенностей взаимодействия антиген - антитело при использовании линейных синтетических пептидов и мультипептидиого антигена, моделирующих антигенные детерминанты вируса гепатита А.82.

2.12. Статистический анализ.90.

Глава 3. СЕРОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭПИТОПОВ БЕЛКА NS

ВИРУСА ГЕПАТИТА С И РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ЧЕТВЁРТОГО ПОКОЛЕНИЯ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ANTI-IICV.91.

Глава 4. СПЕКТР АНТИТЕЛ К РАЗЛИЧНЫМ АНТИГЕНАМ HCV ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ HCV-ИИФЕК-ЦИИ.106.

Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ CEPOKOI [ВЕРСИИ АНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ ГС С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ, МОДЕЛИРУЮЩИХ ИММУНОДОМИНАНТИЫЕ АНТИГЕННЫЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ ВГС.111.

Глава 6. ИССЛЕДОВАНИЕ СЕРОКОНВЕРСИИ АНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ ГС НА ОСНОВЕ МОДЕЛИРОВАНИЯ АНТИГЕНОВ ВГС С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ И ГЕИИОИНЖЕНЕРНЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ.128.

Глава 7. ВЫЯВЛЕНИЕ ТИПОСПЕЦИФИЧЕСКИХ ANTI-HCNS4 АНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ С МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА.135.

Глава 8. ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИГЕННЫХ ДЕТЕРМИНАНТ ВИРУСА

ГЕПАТИТА ДЕЛЬТА.144.

Глава 9. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ АНТИГЕН - АНТИТЕЛО ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЛИНЕЙНЫХ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПЕПТИДОВ И МУЛЬТИПЕПТИДНОГО АНТИГЕНА, МОДЕЛИРУЮЩИХ АНТИГЕННЫЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ ВИРУСА

ГЕПАТИТА А.160.

Глава 10. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.169.

ВЫВОДЫ.187.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Аллергология и иммулология», 14.00.36 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности гуморального иммунного ответа при гепатитах А,С, дельта и их значение для клиники и диагностики»

Гепатиты С и дельта являются актуальными проблемами для здравоохранения Российской Федерации в связи с высокими показателями инвалиднзации и смертности в результате этих заболеваний и их последствий. Не менее 10.000 человек в год умирает в России в результате заболеваний парентеральными гепатитами и их отдалённых последствий, и есть все основания ожидать роста этого показателя н дальнейшем [17]. Проблема гепатита А (ГА) актуальна в связи с периодическими подъёмами заболеваемости этой инфекцией. Согласно официально регистрируемым данным за период с 1995 по 2005 годы заболеваемость ГА в Российской Федерации находилась в пределах от 28,3 до 123,5 заболевших па 100.000 населения в целом по стране.

В основе диагностики вирусных гепатитов лежит выявление маркёров этих инфекций высокочувствительным методом иммупофермеитного анализа. Однако достижение высокой чувствительности современных иммунофермептных тсст-систем сопряжено с некоторыми проблемами в обеспечении специфичности, что может приводить к появлению ложноноложительпых результатов, а также расхождений в результатах исследований при использовании тест-систем различных фирм-производителей. Кроме того, генетическая вариабельность вирусов - этиологических агентов гепатитов, также может приводить к различиям в детекции маркёров этих вирусов. Поэтому одним из путей создания эффективных диагностических препаратов является использование синтетических пептидов, моделирующих конкретные антигенные детерминанты вирусных белков. Знание особенностей строения, предопределяющих активность и специфичность этих участков, позволяет более точно ориентироваться при поиске В-энитопов в аминокислотой последовательности белка, а также формирует подходы к пониманию патогенеза и саиогепсза вирусных инфекций, связанных со сложным взаимодействием между вирусом и иммунной системой человеческого организма.

Трудности анализа антигенных детерминант вируса гепатита А (ВГА) обусловлены их конформационной структурой. В связи с этим перспективным представляется использование более сложных нелинейных синтетических пептидов, в том числе и являющихся гетерогенными антигенами.

Для диагностики ГС в настоящее время в клинической практике используются иммунофермеитные тест-системы Ш и IV поколений, позволяющие выявлять антитела классов G и М к ВГС. Однако эти тест-системы не позволяют оценить уровень иммунного ответа но отношению к отдельным белкам ВГС и к отдельным эпитопам этих белков. Выявление нуклеиновой кислоты вируса методом полимеразпон цепной реакции (Г1ЦР) весьма информативно при проведении эпидемиологических исследований, однако будучи отдельно взятым, этот метод недостаточно информативен при оценке течения заболевания у конкретного больною. Таким образом, подход к диагностике ГС в настоящее время принципиально отличается от серологического обследования больных гепатитом В (ГВ) например, которое носит гораздо более комплексный характер. Серологическое обследование больного ГВ - это по сути своей мониторинг различных маркеров, каждый из которых несёт свою информационную нагрузку (HBsAg, anti-HBcor Ig М, anti-HBcor Ig G, anti-HBs, HBeAg/anti-HBe). Предлагаемый нами комплексный подход к серологическому обследованию актуален для больных ГС не менее, чем для больных ГВ, прежде всего потому, что заболевание ГС значительно чаще переходит в хроническую форму, следовательно, патологический процесс носит более сложный, более комплексный характер.

Применение пептидных моделей позволяет определять роль отдельных аминокислотных остатков в составе белков, соответствующих различным генотипам вируса гепатита С (ВГС). Ряд авторов указывает па то, что выявление антител к отдельным антигенным детерминантам (белки и отдельные эпитопы) ВГС коррелирует с определенной фазой течения заболевания и позволяет оценить активность патологического процесса [3, 6, 41, 177]. Однако такие исследования, как правило, либо ограничивались сопоставлением частоты выявления Ig G к core- и NS4-6ejiKa\i, либо их титров у различных групп больных, либо проводилось аналогичное сравнительное исследование частоты выявления Ig G и их уровня к отдельным фрагментам из последовательности структурных белков ВГС. В ходе проведения нашего исследования была сопоставлена частота выявления антител (как класса G, так и класса М) и их уровня к отдельным фрагментам вирусных белков у различных групп больных, в том числе было также проведено исследование спектра антител в динамике у больных ГС с различными исходами заболевания.

Специфическая серологическая диагностика вирусного гепатита дельта является актуальной проблемой здравоохранения. Первоначально в соответствующих диагиостикумах использовался вирусный антиген, выделяемый из ткани печени умерших от TD. Более эффективным и безопасным является использование геппонпжеперных препаратов или синтетических пептидов, моделирующих иммунодомипаптные эпитопы HDAg. Однако использование рекомбииаптного HDAg имеет свои недостатки. Рекомбппантпые белки состоят из целевого протеина и дополнительных полииептидов, из-за которых иммупофермситная реакция иногда дает ложноположмтельпые результаты. Поэтому одним из путей создания эффективных тест-систем для диагностики дельта-инфекции является использование синтетических пептидов, моделирующих конкретные антигенные детерминанты белка вирусного иуклеокапсида. Кроме того, синтетические пептиды легче и дешевле очистить, чем геииоинжеперные препараты.

В настоящее время известны пуклеотидпые последовательное™ РНК HDV и аминокислотные последовательности HDAg, полученные из различных географических регионов [53, 57, 58,84,94, 96,97,107,144, 157,169,178]. В соответствии с примятой классификацией, большинство таких последовательностей принадлежит к первому типу HDV. Второй тип, наряду с первым, встречается в Азии. HDV третьего типа циркулирует в Южной Америке. Данные о генотипах HDV, циркулирующих па территории РФ очень ограничены и противоречивы.

По одним данным, расшифрованная нуклеотндная последовательность генома российского изолята HDV наиболее близка к последовательностям молдавских и болгарского изолятов, относящихся к генотипу IB [146]. По другим - нуклеотидные последовательности геномов HDV, кодирующих С-копцевую часть I IDAg и циркулирующих в Северо-Западном регионе России, относятся к IA генотипу IIDV [29].

Вышеизложенные факты свидетельствуют, таким образом, об актуальности использования синтетических пептидов для дальнейшего исследования дельта-инфекции, в том числе - для разработки соответствующих диагностических препаратов. В диссертации представлены результаты ссротниироваиия HDV, циркулирующего на территории России, с помощью синтетических пептидов, моделирующих аминокислотные последовательности иммунодомииаитного и вариабельного участков IIDAg, соответствующих трём известным типам HDV.

ЦЕЛЬЮ диссертационной работы является совершенствование серологической диагностики гепатитов А, С и дельта на основе исследования особенностей гуморального иммунного ответа по отношению к различным антигенным детерминантам соответствующих вирусов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие ЗАДАЧИ:

1. Исследовать антигенную структуру белков вирусов гепатитов А, С и дельта с помощью пептидных моделей фрагментов аминокислотной последовательности соответствующих вирусных белков.

2. Разработать модификацию иммупофермептного анализа для определения спектра anti-IICV антител и исследовать особенности серокоиверсии антител к антигенным детерминантам структурных и неструктурных белков вируса гепатита С у больных с различными исходами острого гепатита С.

3. Разработать модификацию ИФА для выявления типоспсцифических anti-HCNS4 антител у больных гепатитом С.

4. Разработать новый вариант ИФА для диагностики гепатита D па основе синтетических пептидных антигенов.

5. Оценить целесообразность использования гетерогенных тетрамерных мультннептидиых антигенов при разработке новых тест-систем для выявления серологических маркёров ВГА.

Методами, позволяющими реализовать поставленные задачи, являются: моделирование консервативных иммунодоминантиых, а также вариабельных тнпоспецифическнх эпнтопов вирусных белков с помощью синтетических пептидов;

- тестирование серологического материала на маркёры гепатитов Л, В, С и дельта;

- иммупофермептиое исследование антигенной активности пептидов с помощью сывороток больных различными вирусными гепатитами;

- метод множественного пептидного исследования (Multiple Peptide Assay [179]);

- исследование корреляции между спектром антител к различным вирусным белкам, представленным разными антигенными детерминантами и клинико-биохимическим вариантом течения HCV-ннфекцни па основе данных иммуноферментпого анализа, общих клинических методик и биохимического анализа крови обследуемых больных;

- статистический анализ результатов проводился методом оценки доверительного коэффициента Стыодепта - t; различия признавались достоверными при р < 0,05.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

1. Среди синтезированных Ы85-пептидов в качестве наиболее перспективного с точки зрения диагностики ГС отобран пептид с последовательностью 2295-2317 а.о. Эта последовательность содержит как минимум два эпитопа, имеющих различную природу. Установлены оптимальные условия для проведения реакции с этим пептидом, позволяющие максимально полно использовать потенциал обоих эиитопов в диагностических целях. Полученные результаты позволили использовать пептид 2295-2317 в составе новой антигенной композиции, куда дополнительно был включён синтетический пептид, дублнруюший нммуподомннантный участок HCcAg, но более короткий, чем рекомбинаптиын IICcAg, также используемый. Подобное дублирование, характерное для тест-систем IV поколения, позволило увеличить чувствительность разработанной тест-системы.

2. Установлена корреляция между спектром антител к отдельным вирусным белкам, представленным различными антигенными детерминантами, и клипико-биохимическим вариантом течения хронической IICV-инфскции. Если сыворотка пациента с хронической HCV-ипфекцией не содержит Ig G к какой-либо из антигенных детерминант неструктурных белков вируса, либо к обоим антигенным детерминантам согс белка HCV, использованных в настоящем исследовании, то с высокой стспспыо вероятности (соответственно, р < 0,05 и р < 0,01) можно полагать, что данный пациент находится в состоянии ПНАТ (хронический гепатит с постоянно нормальным уровнем алапинамнпотрапсферазы (AJIT)). Особенно выраженный характер данная закономерность имеет для пациентов, в сыворотке которых не содержится Ig G к обоим антигенным детерминантам NS4, а также при сочетании отсутствия Ig G к антигенным детерминантам согс-бслка с отсутствием Ig G к какой-либо из антигенных детерминант неструктурных белков вируса (в настоящем исследовании 100 % таких пациентов принадлежали к группе с ПНАТ). Также установлено, что наличие в высоком титре anti-NS4 Ig G (р < 0,05), и особенно сочетание anti-NS4-20 и anti-core-16 Ig G в высоком титре (р <0,01) характерно для больных хроническим гепатитом С с более активным клинико-бнохимическим вариантом течения заболевания (ХГС).

3. Впервые установлены следующие закономерности серокопверсии anti-IICV класса G, характерные для больных ГС с последующей ремиссией: быстрое нарастание уровня anti-core Ig G в течение первых 16 педель заболевания с последующим спадом вплоть до полного исчезновения антител к 52 неделе; уровень anti-NS4 Ig G у таких больных также достигает значений, достоверно превышающих уровень, характерный для первых двух педель желтушного периода, к 4-ому месяцу от начала желтушного периода, затем быстро снижается, и к 9 .месяцу оказывается достоверно ниже своих максимальных значений, характерных для 4-го месяца; уровень anli-NS5 Ig G минимален, лнбо anti-NS5 отсутствуют.

4. Впервые установлены следующие закономерности серокопверсии anti-HCV класса G, характерные для больных ГС с последующей хроиизацией: менее быстрое нарастание уровня anti-core Ig G в первые 6 месяцев заболевания, чем у больных с последующей ремиссией, затем начинается стремительный рост концентрации антител, п к 13-ому месяцу заболевания уровень anti-core Ig G у больных ХГС оказывается, как правило, значительно выше, чем максимальный уровень anti-core Ig G у больных с последующей ремиссией па 4-ом месяце; концентрация anti-NS4 Ig G достоверно выше относительно первых двух педель уже на втором месяце заболевания и остаётся высокой в дальнейшем; постепенное нарастание уровня anti-NS5 Ig G, который достигает значений, достоверно более высоких, чем в первые две педели заболевания, к 6-му месяцу. Выявленная закономерность характерна как для anti-NS5 Ig G, взаимодействующих с синтетическим пептидом а.о. 2295-2317, так и для anti-NS5 Ig G, взаимодействующих с генноинженерным NS5, по для них она выявлена в более ранний срок - начиная с 4-го месяца заболевания.

5. У больных ГС с последующей ремиссией anti-core Ig М, взаимодействующие с синтетическим пептидом а.о. 19-34, были выявлены только в течение первого месяца заболевания. Anti-NS4 Ig М у некоторых больных ГС с последующей ремиссией выявлялись до 6 месяца заболевания включительно. Тем не менее, снижение уровня anti-NS4 Ig М, взаимодействующих с синтетическим пептидом а.о. 1921-1940, относительно первых двух недель заболевания имеет достоверный характер уже к 4-му месяцу. Anti-NS5 Ig М, взаимодействующих с синтетическим пептидом а.о. 2295-2317, не удалось выявить ни у одного из больных ГС с последующей ремиссией. У больных ГС с последующей хропизацией anti-core, anti-NS4 и anti-NS5 Ig М могут сохраняться в течение неопределенно длительного периода, исчезать и появляться вновь при обострении ХГС.

6. На основе типоспецмфичсских пептидов, моделирующих различные участки вариабельного региона NS4 белка вируса гепатита С, была разработана тест-система для выявления типоспецмфичсских антител, появление которых в сыворотке крови больного характерно для ВГС соответствующего тина. В результате проведённого исследования по выявлению тииоспецифических anti-HCNS4 антител у больных гепатитом С с помощью разработанной тест-системы было установлено достоверное различие в циркуляции ВГС разных типов в Москве и Белоруссии (Витебск).

7. В диссертации представлены результаты ссротипировапия HDV, циркулирующего па территории России, с помощью синтетических пептидов, моделирующих аминокислотные последовательности иммунодоминантиого и вариабельного участков HDAg, соответствующих трём известным типам HDV. Создай и апробирован вариант иммуноферментпого анализа для выявления anti-delta классов Ig G и Ig M в сыворотках крови, разработанный па основе синтетических пептидов.

8. Наиболее эффективным антигеном с точки зрения скрининга anti-HAV-IgM позитивных сывороток среди использованных в данном исследовании синтетических пептидных антигенов является MAP4(VP1+VP3).

Использование MAP4(VP1+VP3) для этой цели более эффективно, чем использование комбинации его составляющих - линейных пептидов VP1 и VP3, или его комбинации с его составляющими. Использование гетерогенных мультипептидпых антигенов, в том числе содержащих VP1 (11 а.о. - 25 а.о.) и VP3 (110 а.о. - 121 а.о.), целесообразно при разработке новых тест-систем для ВГА.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Впервые проведено исследование спектра anti-HCV антител и их уровня в процессе развития заболевания у больных ГС с различными исходами. Для этого были выявлены и использованы наиболее значимые с точки зрения поставленной задачи антигенные детерминанты вирусных белков. Установлены достоверные различия частоты выявления anti-HCV антител (как класса G, так и класса М) и их уровня к отдельным фрагментам вирусных белков у различных групп больных ГС. Установлены закономерности серокоиверсии anti-HCV антител, имеющие прогностическое значение.

2. Впервые установлено, что сероконверсня anti-NS4 Ig G имеет место во время острой фазы заболевания ГС, в том числе - уже в первые 10 дней желтушного периода. Впервые установлена корреляция между частотой выявления anti-NS4 Ig G в первые 10 дней желтушного периода ОГС и степенью риска давнего инфицирования ВГС.

3. В результате проведённого исследования но выявлению типоспецифичсских anti-HCNS4 антител у больных гепатитом С с помощью разработанной тест-системы было установлено достоверное различие в циркуляции ВГС разных типов в Москве и Белоруссии (Витебск).

4. Разработаны новые варианты ИФЛ па основе синтетических пептидов для диагностики гепатита D.

5. Впервые показана диагностическая значимость модификации ИФА па основе гетерогенных тетрамерпых мультипептидпых антигенов.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ определяется полученными новыми знаниями об антигенных свойствах исследованных детерминант вирусных белков, а также исследованием взаимного влияния синтетических пептидных антигенов, которое приводит к изменению их нммунохимических свойств па уровне взаимодействия антиген - антитело. В результате проведённого исследования установлены закономерности развития гуморального иммунного ответа у больных гепатитом С в зависимости от дальнейшего развития заболевания. С помощью разработанной тест-системы на основе тиноспецифнческих пептидов, были установлены статистически достоверные различия в циркуляции ВГС различных типов в Москве и Белоруссии (Витебск). Установлено, что антигенная структура иммунодомипантного региона а.о. 65-80 белка нуклеокапсида HDV, наиболее широко распространенного на территории Центральной России среди больных гепатитом дельта, соответствует генотипу HDV I.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ.

1. Сконструированы иммунофсрмснтные тест-енетемы (лабораторный вариант) па осповс синтетических пептидных антигенов вируса гепатита С, а также их комбинаций с геппоннженерными препаратами.

2. Сконструированы иммуноферментные теег-системы (лабораторный вариант) на осповс синтетических пептидных антигенов вируса гепатита дельта.

3. Выявлены различия в клиническом течении и исходах острого гепатита С у больных с различным спектром антител к иммуподоминантпым участкам структурных и неструктурных белков вируса гепатита С.

4. Разработай новый подход к серологической диагностике ГС, основанный па динамическом контроле за спектром антител к вирусу гепатита С.

5. Разработаны методические рекомендации па сконструированную тест-систему для контроля за спектром антител к вирусу гепатита С в сыворотках крови IICV-ипфицироваппых лиц, содержащие дополнительные критерии оценки активности патологического процесса и сроков заболевания, и методические рекомендации па сконструированную тест-систему для типирования антител к вирусу гепатита С в сыворотках крови IICV-ипфицироваппых лиц, содержащие критерии интерпретации полученных результатов с точки зрения типоспсцифичпости выявленных антител по отношению к различным генотипам вируса гепатита С.

6. Результаты диссертационной работы позволили обосновать целесообразность дополнительного обследования больных ОГС и острым вирусным гепатитом неустановленной этнологии, включающего раздельное определение антител к антигенам ВГС, использованным в дайной работе, для уточнения диагноза и прогнозирования исхода заболевания.

7. Дана оценка принципиальном возможности использования мультинеитндных гетерогенных структур для диагностики ГЛ.

8. Положения диссертационной работы, затрагивающие клинико-лабораторные аспекты прогнозирования исходов ОГС используются при проведении учебных занятий и чтений лекций студентам кафедры инфекционных болезней с курсом эпидемиологии и курсантам ФПДО МГМСУ.

АПРОБАЦИЯ.

Результаты исследований по теме диссертации были доложены па Фальк симпозиуме № 92 "Новые направления в гепатологин", Санкт-Петербург, Россия, 21-22 июня 1996; на 24 симпозиуме Европейского Пептидного Общества, Эдинбург, Великобритания, 1996; на Пятой международной конференции «СПИД, рак и связанные проблемы», Санкт-Петербург, Россия, 25-30 мая, 1997; на II Российской научно-практической конференции "Гепатиты В, С, D и G - проблемы диагностики, лечения и профилактики", Москва, Россия, октябрь 1997; на научной конференции "Вирусные инфекции на пороге 21 века: эпидемиология и профилактика», С.-Петербург, Россия, 21-23 апреля 1999; на III Российской научно-практической конференции "Гепатиты B,C,D и G - проблемы диагностики, лечения и профилактики", Москва, Россия, июнь 1999; на научной конференции "Актуальные проблемы медицинской вирусологии», Москва, Россия, ноябрь 1999; на 2-й Объединённой Всероссийской и Всеармейской научной конференции "Санкт-Петербург -Гастро-2000", С.-Петербург, Россия, 20-22 сентября 2000; на научно-практической конференции "Гепатит С (Российский консенсус)", Москва, Россия, 26-27 сентября 2000; на IV Российской научно-практической конференции "Гепатиты В,С и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики", Москва, Россия, июнь 2001; на паучпо-практичсской конференции «Неотложная помощь в клинических условиях», Мытищи, Россия, 2002; па XVI конгрессе Международной Эпидемиологической Ассоциации, Монреаль, Канада, 2002; на конференции отдела вирусных гепатитов и клинической вирусологии Института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМП в 2003 году. В завершённом виде диссертационная работа была доложена на конференции отдела вирусологии Института вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН в 2006 году.

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

По материалам диссертационной работы опубликовано 10 научных статей в рецензируемых журналах и 23 сообщения в сборниках тезисов научных симпозиумов и конференций.

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания использовавшихся материалов и методов, 7 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка цитируемой литературы, состоящего из 181 работы отечественных и зарубежных авторов.

Похожие диссертационные работы по специальности «Аллергология и иммулология», 14.00.36 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Круглов, Игорь Вячеславович

Выводы на основании данных, полученных при исследовании ссроконверсии антител у больных ГС с использованием синтетических пептидов, моделирующих пммунодоминаитпые антигенные детерминанты ВГС, можно сформулировать в виде таблицы № 36. Установлены различия в динамике гуморального иммунного ответа в зависимости от дальнейшего развития патологического процесса, в том числе - уже в острой фазе заболевания (рис. 9 - 12). Полученные данные представляют интерес с точки зрения их прогностического значения. При этом необходимо иметь в виду, что ГС не является типичной инфекцией, а имеет ряд особенностей, которые характерны для медленных инфекций (см. Обзор литературы, /./.). Поэтому гуморальный иммунный ответ па ту или иную отдельно взятую антигенную детерминанту вируса у отдельно взятого больного может быть нетипичным для того или иного варианта развития заболевания. Поэтому для клинического прогноза имеет значение совокупность нескольких благоприятных пли неблагоприятных признаков из перечисленных в таблице № 36, в которой приводятся особенности серокоивсрсии у больных ГС при типичном благоприятном и типичном неблагоприятном развитии заболевания иа основании данных, полученных в ходе настоящего исследования.

Необходимо также иметь в виду то, что когда мы говорим об anti-HCcore, anti-IICNS4, anti-HCNS5, речь не идёт о суммарном гуморальном иммунном ответе ко веем антигенным детерминантам вирусных белков core, NS4, NS5. Данные литературы и наших собственных исследований свидетельствуют о том, что для оценки гуморального иммунного ответа на тот пли иной вирусный белок может иметь некоторое значение, какие именно антигенные детерминанты данного белка для этого используются [19, 25]. При этом использование отдельных иммунодоминантных участков вирусных белков может быть предпочтительнее использования более протяжённых фрагментов аминокислотной последовательности или же полноразмерных белков вируса [19]. В настоящем исследовании нами были использованы наиболее значимые с точки зрения поставленной задачи антигенные детерминанты вирусных белков, выявленные в процессе предыдущих исследований.

Актуальность такого подхода оказалась особенно значимой для установленных нами, в процессе настоящего исследования, закономерностей ссроконверснн anti-NS4 Ig G. До сих пор в научной литературе, посвященной этому вопросу, было довольно широко распространено мнение, согласно которому anti-NS4 Ig G в острую фазу ГС отсутствуют [2,44]. Нам удалось показать, что это не так.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Круглов, Игорь Вячеславович, 2006 год

1. К.А.Андриуца, С.О.Вязов, П.П.Блохина. Вирусный гепатит дельта. - Кишинев: "Штниица", 1993, стр. 140.

2. А.10.Афанасьев, С.В.Зубов, Ю.Е.}1(дапов, А.В.Кривопускова. ИФА-диагпостика в разграничении гепатита С острого и хронического течения. // Росс. жури, гастроэнтер., колопрокт., 1995, Т. 5, № 3 (Прнлож. 1), стр. 12.

3. М.С.Балаяп, М.И.Михайлов. Вирусные гепатиты энциклопедический словарь, М., 1999, стр. 46.

4. Т.А.Бектп.мнров, Р.Л.Волкова, Е.В.Эльберт и др. Оценка диагностической эффективности тест-снстсмы для выявления РНК ВГС методом ПЦР «АмнлиСепс™ HCV-240/BKO-440». // Вопр. вирусол., 2002, № 5, стр. 12-16.

5. Е.А.Васильева. Сравнительная характеристика вирусных гепатитов В и С но данным клипико-лабораторного и эпидемиологического обследования. Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 1995.

6. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение. / Под ред. В.В.Покровского, М„ 2000.

7. Г.А.Галегов, В.Л.Андронова, Н.А.Леонтьева и др. Этиотропная лекарственная терапия вирусных инфекций. // Вонр. вирусол., 2004, № 3, стр. 35-40.

8. В.А.Давапков, С.В.Рогожин, В.В.Коршак и др. Реакционная способность галогеиметилнрованпых сополимеров стирола с дивппплбензолом. // Изв. АН СССР, серия химическая, № 7, стр. 1612.

9. П.В.Дементьева, Ю.А.Семнлетов, Т.Л.Яшина и др. Использование синтетических антигенов для ссрогнпнровапия вирусных гепатитов D и Е. // Материалы Фальк симпозиума № 92 "Новые направления в геиатологин". Сапкт-Петербург, Россия, 1996, стр. 327.

10. Е.В.Демсптьева. Анализ структурной организации и моделирование антигенных детерминант белков вирусов гепатита D и Е на основе синтетических пептидов. Дисс. канд. биологических паук. Москва, 1997.

11. Р.П.Евстигнеева, В.Д.Смнрпов, Ю.А.Семнлетов и др. Антигенные свойства пептидных фрагментов белка нуклеокансида вируса гепатита дельта. // Докл. акад. паук СССР, 1991, т. 316, № 1, стр. 239-242.

12. О.О.Зпойко. Острый вирусный гепатит С (клиника, диагностика и исходы). Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Москва, 1994.

13. В.Т.Ивашкин (ред.). Болезни печени и желчевыводяших путей. // Руководство для врачей, изд. дом «М-Всстн», Москва, 2002.

14. Е.И.Ильина, Е.Е.Фомнпа, Е.К.Артёмов и др. Хронические вирусные заболевания печени. // Метод, пособие для врачей, Москва, 2002, стр. 21.

15. С.М.Клименко. Анализ заболеваемости социально-значимыми вирусными инфекциями в 1990-1995 и состояние исследований по вирусологии в Российской Федерации. // Вестник РФФИ, 1997, №1 (7), стр. 12.

16. А.В.Козлова. Клинические особенности и исходы острого гепатита С при разных генотипах вируса. Дисс. . канд. мед. паук. Москва, 1998.

17. И.В.Круглов, О.О.Зиойко, О.Л.Огиенко и др. Спектр антител к различным антигенам HCV при различных вариантах течения хронической MCV-ннфекции. // Вопр. вирусол., 2002, № 2, стр. 11-16.

18. И.В.Круглов, О.О.Зиойко, М.П.Фппогепона и др. Серологическое исследование эпитопов белка NS5 вируса гепатита С и их значение для клиники и диагностики. // Вопр. вирусол., 2000, № I, стр. 14-17.

19. Е.И.Лакипа, А.А.Кущ. РНК вируса гепатита С в организме больных хроническим гепатитом С. // Вопр. вирусол., 2002, № 2, стр. 4-11.

20. Д.К.Львов, П.Г.Дсрябни. Географическое распространение вируса гепатита С и его генотипов. // Вопр. вирусол., 1997, № 5, стр. 196-199.

21. Д.К.Львов, Е.И.Самохвалов, С.Мншпро и др. Закономерности распространения вируса гепатита С и его генотипов в России и странах СНГ. // Вопр. вирусол., 1997, № 4, стр. 157-161.

22. О.В.Масалова, Е.И.Самохвалов, Н.В.Петракова и др. Выявление маркёров ВГС-белка нуклеокапсида, РНК и вирусспецифичсскнх антител в плазмах крови доноров. // Вопр. вирусол., 2000, № 2, стр. 14-18.

23. О.В.Масалова, А.Г.Абдулмеджидова, К.В.Моргунов и др. Изменение показателей гуморального и клеточного иммунитета у пациентов с хроническим гепатитом С различной тяжести. // Вопр. вирусол., 2003, № 3, стр. 15-19.

24. Н.В.Петракова, Т.И.Калинина, Ю.Е.Худяков и др. Получение и очистка рекомбинантного полипептида, содержащего антигенные детерминанты сердцевинного белка вируса гепатита С. // Вопр. вирусол., 1997, № 5, стр. 208-212.

25. Д.Рнч, Ж.Сипгх. Карбодиимпдпып метод. //Пептиды. Основные методы образования пептидной связи. Под ред. Э.Гросса и И.Маинхофсра, М., Мир, 1983, стр. 246-267.

26. Е.В.Рыжова, В.А.Ивашопиша, М.П.Грудишш н др. Выделение и клонирование гена антигена вируса гепатита дельта. Использование рекомбииантного антигена для серодиагностики дельта инфекции. // Мол. генетика, микробиология и вирусология, 1998, №2, стр. 29-32.

27. Е.В.Рыжова, О.Ю.Решетникова, М.П.Грудиипп п др. Определение нуклеотидпых последовательностей российских изолятов вируса гепатита дельта. // Мол. генетика, микробиология и вирусология, 1997, № 3, стр. 33 36.

28. Н.В.Садикова. Разработка системы контроля качества серологической диагностики вирусных гепатитов В и С в сети скрнпипговых лабораторий. Авр. канд. мед., Москва, 2001.

29. Ю.А.Семилетов, В.А.Карпова, Т.И.Калинина, Ю.Е.Худяков. Локализация иммуподоминаитного сайга в составе корового антигена вируса гепатита В с помощью синтетических пептидов. // Биооргапич. химия, 1994, т. 20, №11, стр. 11751185.

30. Ю.А.Семилетов, В.А.Карпова, В.Д.Смнриов, С.О.Вязов. Локализация пммуиодомипаптпого сайта в составе антигена вируса гепатита дельта с помощью синтетических пептидов. // Биооргапич. химия, 1993, т. 19, № 3, стр. 277-285.

31. Ю.А.Семилетов, В.А.Карпова, Ю.А.Худяков и др. Синтез и антигенная активность пептидов белка нуклеоканенда вируса гепатита дельта. // Биооргапич. химия, 1992, т. 18, №2, стр. 252-262.

32. Ю.А.Семилетов, И.В.Круглов, В.А.Карпова и др. Сравнительное исследование диагностической ценности пептидов, соответствующих различным геномным последовательностям вируса гепатита дельта. // Мол. генетика, микробиол. и вирусол., 1993, №4, стр. 34-37.

33. Ю.А.Ссмилетов, В.К.Пименов, И.В.ЬСруглов и др. Определение тиноспсцифичсских антител к вирусу гепатита дельта на основе синтетических пептидов. // Воир. вирусол., 2001, № 5, стр. 21-25.

34. Ю.А.Семнлетов, Т.В.Фирсова, И.В.Круглов и др. Использование синтетических пептидов как дополнительных антигенов для выявления антител к вирусу гепатита С. // Воир. вирусол., 1998, № 3, стр. 107-109.

35. Ю.А.Семнлетов, Т.В.Фирсова, С.II.Кузин и др. Антигенная активность синтетических пептидов фрагментов белков вируса гепатита С. // Докл. Акад. Наук, 1993, т. 333, №3, стр. 391-393.

36. И.А.Созниа. Разработка и использование метода определения генотии-специфнчсских антител к вирусу гепатита С. Авр. канд. биол., СПб., 1999.

37. С.Н.Сорипеоп. Вирусные гепатиты. СПб., 1997, стр. 225-226.

38. С.Н.Соринсоп. Вирусные гепатиты. СПб., 1997, стр.223.

39. Д.Стюарт, Д.Япг. Твердофазный синтез пептидов. М., Мир, 1971, стр. 176.

40. С.Г.Чешик, Е.Ю.Малинппкова, Д.С.Чешнк, Н.А.Малышев. Клииико-лабораторная оценка терапевтической эффективности и переносимости противовирусного препарата «Никавнр» при остром гепатите В. // Вопр. вирусол., 2003, №3, стр. 40-44.

41. И.В.Шахгильдян, М.И.Михайлов, Г.Г.Ошпценко. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика). // Москва, 2003, стр. 129.

42. А.В.Шустов, В.П.Мишин, А.З.Максютов и др. Маркёры вируса гепатита С и различных его генотипов у пациентов Новосибирска. // Вопр. вирусол., 2000, № 6, стр. 22-27.

43. И.Н.Хлопова. Клиника и диагностика острой дельга-впруспой инфекции. Дисс. . канд. мед. паук. Москва, 1998.

44. G.Barany and R.Mcrrilield. // Hie Peptides / E.Gross, J.Meienhofcr eds., New-York: Acad. Press, 1980, v. 2., p. 44.

45. R.Bartenschlagcr, L.Ahlborn-Laakc, K.lasaegil ct al. Substrate determinants for cleavage in cis and trans by the hepatitis С virus NS3 proteinase. // J.Virol., 1995, v. 69, № l,p. 198-205.

46. K.F.Bcrgniann, J.L.Casey, J.L.Gerin. Modulation of hepatitis delta virus infection by vaccnation with synthetic peptides. // Fourth international symposium on hepatitis delta virus and liver disease. Rhodes Island, Greece, 1992, p. 113.

47. K.F.Bcrgniann, P.J.Cotc, A.Moriarty, J.L.Gerin. Hepatitis Delta Antigen. Antigenic Structure and Humoral Immune Response. //.(.Immunol., 1989, v. 143,№ 11, p.3714-3721.

48. F.Bonino, K.II.Hccrmann, M.Rizclto, W.II.Gcrlich. Hepatitis delta virus: protein composition of delta antigen and its hepatitis В virus derived envelope. // J.Virol., 1986, v. 58, p. 945-950.

49. M.R.Brunctto, F.Oliveri, M.Bladi, E.Chiabcrge. Does HBeAg minus IIBV modify the course of HDV supcrifcction? // The hepatitis delta virus. / J.L.Gerin, R.H.Purcell, M. Rizetto, eds. New York: Alan R. Liss Inc., 1991, p. 211-216.

50. J.L.Cascy, T.L.Brown, E.J.Colan et al. A genotype of hepatitis D virus that occurs in northern South America. // PNAS USA, 1993, v. 90, p. 9016-9020.

51. L.Caponi, S.Pcgorano, V.D.Bartolo ct al. Autoantibodies directed against ribosomal P proteins: use of a multiple antigen peptide as the coating agent in ELISA. // .Immunol., 1995, p.193-202.

52. M.F.Chang, S.C.Baker, L.H.Soe et al. Human hepatitis delta antigen is a nuclcar phosphoprotcin with RNA-binding activity. //J. Virol., 1988, v. 62, p. 2403-2410.

53. M.Chao, S.-Y.IIsich, J.Taylor. Role of low forms of hepatitis delta virus antigens: evidence for a mechanism of self limiting genome replication. // J. Virol., 1990, v. 64, p. 5066-5069.

54. M.Chao, C.M.Lce, II.C.Tang et al. Molccular cloning and characterization of an isolate of hepatitis delta virus RNA isolated in Taiwan. // Ilepatology, 1991, v. 13, p. 345352.

55. Y.C.Chao, M.F.Chang, I.Gust, M.M.C.Lai. Sequence conservation and divergence of hepatitis D virus RNA // Virology, 1990, v. 178, p. 384-392.

56. D.C.Chen, M.Y.Lai, J.L.Sung. Delta infection in patients with chronic liver disease and hepatocellular carcinoma: An infrequent finding in Taiwan. // Ilepatology, 1984, v. 4, p. 502-503.

57. Q.-L.Choo, G.Kuo, A.J.Weiner et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood borne noii-A, non-B viral hepatitis genome.//Science, 1989, v. 244, p. 359-362.

58. Q.L.Choo, K.H.Richman, J.N.Man et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis С virus. // PNAS USA, 1991, v. 88, № 6, p. 2451-2455.

59. P.Y.Chou, G.D.Fasman. Empirical predictions of protein conformation. // Ann. Rev. Biochcm., 1978, v.47, p. 251-276.

60. S.Cole, E.J.Gowans, T.B.Macnaughton, et al. Direct evidence for cytotoxicity associated with expression of hepatitis delta virus antigen. // Hcpatology, 1991, v. 13(5), p. 845-851.

61. V.Desmct, M.Gerbcr, J.M.Moofnagle et al. Классификация хронического гепатита: диагностика, определение степени тяжести и стадии течения. // Росс, журнал гастроэнтерологии, гепатологип, колопроктологни, 1995, 2, стр. 38-45.

62. R.D.DiMarchi, J.P.Tam, S.B.H.Kent, R.B.Merrifield. Weak acid catalyzed pyrrolidone carboxylic acid formation from glutaminc during solid phase peptide synthesis. // Int. J. Pept. Prot. Res., 1982, v.19, p. 88-93.

63. C.Donada, A.Crucitti, G.Tommassi et al. Liver damage and HCV genotypes in anti-HCV seropositive asymptomatic subjects. // J. of I Iepatology, 1997, v. 26., Supplement № 1, p. 211.

64. EASL International Consensus Conference on Hepatitis C. Paris, 26-28 February 1999. Hi. of I Iepatology, 1999, 30, p.956-961.

65. E.A.Emini, J.V.Hughes, D.S.Perlow, J.Boger. Induction of hepatitis A virus-neutralizing antibody by a virus-specific synthetic peptide. //J.Virol., 1985, 55, p. 836-839.

66. E.Engvall, P.Perlmann. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Quantitatie assay for immunoglobulin G. // Inimunochem., 1971, 28, p. 871-874.

67. X.Forns, R.Thimme, S.Govindarajan et al. Hepatitis С virus lacking the hypervariable region 1 of the second envelope protein is infectious and causes acute resolving or persistent infection in chimpanzees. // PNAS, 2000, v. 97, № 24, p. 13318 13323.

68. T.Fujisawa, M.Inui, K.Yamamoto etal. Spontaneous remission of chronic hepatitis С in children. // Eur. J. Pediatr. 1997 Oct., 156 (10), p. 773-776.

69. J.S.Glenn, J.M.White. Trans-dominant ingibition of human hepatitis delta virus genome replication. //J. Virol., v. 65., p. 2357-2361.

70. S.Govindarajan, K.-P.Chin, A.G.Redeker, R.L.Peter. Fulminant В viral hepatitis: role of delta-agent. // Gastroenterology, 1984, v. 86, p. 1417-1420.

71. A.Grakoui, D.W.McCourt, C.Wychovvski et al. A second hepatitis С virus-encoded proteinase. // PNAS USA, 1993, v.90, p. 10583-10587.

72. C.J.Healy, R.W.Q.Chapman, K.A.Fleming. Liver histology in hepatitis С infection: a comparison between patients with persistently normal or abnormal transaminases. // Gut, 1995, v.37, p. 274-278.

73. M.Hijikata, H.Mizushima, T.Akagi ct al. Two distinct proteinase activities required for the processing of a putative nonstructural precursor protein of hepatitis С virus. // J.ViroI., 1993, v.67, p. 4665-4675.

74. J.H.Hoofnagle. Hepatitis C: The Clinical Spcctrum of Disease. // Hepatology, 1997, v.26, № 3, Suppl. l,p. 155-160.

75. N.Horiike, S.M.F.Akbar, K.Michitaka et al. In vivo immunization by vaccine therapy following virus suppression by lamivudine: a novel approach for treating patients with chronic hepatitis B. //J. Clinical Virol., 2005, v. 32, p. 156-161.

76. J.V.Hughes, L.W.Stanton, J.E.Tomassini et al. Neutralizing monoclonal antibodies to HAV: partial localization of a neutralizing antigenic site. // J.Virol., 1984, 52, p. 465-473.

77. F.lmazeki, M.Omata, M.Ohto. Complete nucleotide sequences of hepatitis delta virus RNA in Japan. // Nucl. Acids Res., 1991, v. 19, p. 5439.

78. C.Janot, A.M.Courouce, F.Barin et al. Lcs trousses dc depistage dcs anticorps anti-VHC utilisccs en France. Analyse dc scnsibilitc. // Transfus. Clin. Biol., 1994, v.4, p. 295301.

79. E.Kaiser, R.L.Colescott, R.Presentini ct al. Color test lor detection of free terminel amino groups in the solidphase synthesis of peptides. // Anal. Biocem., 1970, v. 34, № 2, p. 595-598.

80. N.Kato, M.Hijikata, Y.Ootsuyama ct al. Molecular cloning of the human hepatitis С virus genome from Japanese patients with non-A, non-B hepatitis. // PNAS USA, 1990, 87, p. 9524-9528.

81. Y.E.Khudyakov, M.O.Favorov, 1-1 .A.Fields. A small open reading frame of the hepatitis delta virus antigenomic RNA encodcs a protein that elicits antibodies in some infected patients. // Virus Res., 1993, v. 27 (1), p. 13-24.

82. Y.E.Khudyakov, N.S.Khudyakova, D.L.Jue et al. Linear B-cell Epitopes of the NS3-NS4-NS5 Proteins of the Hepatitis С Virus as Modeled with Synthetic Peptides. // Virology, 1995, v. 206, p. 666-672.

83. Y.E.Khudyakov, A.M.Makhov. Amino acid sequence similarity between the terminal protein of hepatitis В virus and predicted hepatitis delta virus gene product. // FEBS Lett., 1990, v. 262, p. 345-348.

84. L.Kisfaludy, M.Low, O.Nyeki et al. Vorwendung von pcntaphluorophcnylestern in peptidsynthese. // Licbigs Ann. Chcm., 1973, № 9., p. 1421.

85. G. Kuo, Q. Choo, H.Alter el al. An Assay for Circulating Antibodies to a Major Etiologic Virus of Human Non-A, Non-B Hepatitis. // Scicncc, 1989,244, p. 362-364.

86. M.Y.Kuo, J.Goldberg, L.Coates, W.Mason et al. Molecular cloning of hepatitis delta virus RNA from an infected woodchuck liver: sequence, structure, and application. // J.Virol., 1988, v. 62, p. 1855-1861.

87. J.Kytc, R.F.Doolittle. A simple method for displaying the hydropathic character of a protein. // J. Mol. Biol., 1982, v. 157, p. 105-132.

88. C.M.Lee, F.Y.Bih, Y.C.Chao. Evolution of hepatitis delta virus RNA during chronic infection. // Virology, 1992, v. 188, p. 265-273.

89. C.M.Lee, C.S.Changchien, J.C.Chang, Y.F.Liaw. Characterization of a new genotype II hepatitis delta virus from Taiwan. Hi. Med. Virol., 1996, v. 45, p. 145-154.

90. C.Z.Lee, J.II.Lin, M.Chao et al. RNA-binding activity of hepatitis delta antigen involves two arginin-rich motifs and is required for hepatitis delta virus RNA replication. // J. Virol., 1993, v. 67, p. 2221-2227.

91. S.M.Lemon, W.Barclay, M.Ferguson ct al. Imnuinogenicity and antigenicity of chimeric picornaviruses which express HAV peptide sequences: evidence for a neutralization domain near the amino terminus of VP I of IIAV.//Virology, 1992, 188(1), p. 285-295.

92. S.M.Lemon & L.H.Ping, 1989, p. 193-208. In: B.L.Semler & E.Ehrcnfeld (Eds.). Molecular aspects of picornavirus infection and detection.

93. Y.F.Liaw, II.II.Lin, C.M.Chu ct al. Hepatitis delta virus infection in Taiwan. // The hepatitis delta virus and its infection. / M.Rizzctto, J.L.Gcrin, R.II.PurccII, eds., New York, Alan R. Liss Inc., 1987, p. 479-483.

94. C.Lin, B.D.Lidcnbach, B.M.Pragai ct al. Processing in the hepatitis С virus E2-NS2 region: identification of p7 and two distinct E2-specific products with different C-tcrmini. //J.Virol., 1994, v. 68, № 8, p. 5063-5073.

95. G.Luo, M.Chao, S.-Y.Ilsieh et al. Л specific base transition occurs on replicating hepatitis delta virus RNA. // Nature, 1990, v. 329, p. 343-346.

96. D.K.Lvov, E.I.Samokhvalov, F.Tsuda et al. 1'revalencc of hepatitis С virus and distribution of its genotypes in Northern Eurasia. // Arch. Virol., 1996, v. 141, № 9, p. 16131622.

97. J.G.McHutchison, S.C.Gordon, E.R.Schiff et al. Interferon alfa-2b alone or in combination with ribavirin as initial treatment for chronic hepatitis C. // N. Engl. J. Med., 1998, v. 339,p.1485-1492.

98. S.Makino, M.F.Chang., C.K.Shieh et al. Molecular cloning and sequencing of a human hepatitis delta (D) virus RNA. // Nature. 1987, v. 329, p. 343-346.

99. P.Marcelini, A.Kilani, K.Cymes ct al. Virological and histological characteristics in anti-HCV positive subjects with normal transaminases levels. //Hcpatology, 1995, v.22, p. 273A.

100. P.Marcelini, S.Zjvy, J.P.Benhamou ct al. Management of the asymptomatic HCV carrier with normal ALT levels. // Viral. Hepat. Rev., 1996, v. 12, p. 234-238.

101. O.V.Masalova, S.N.Atanadzc, E.I.Samokhvalov et al. Detection of HCV Core Protein Circulating Within Different Vims Particlc Populations. // J. of Med. Virology, 1998, v. 55, p. 1-6.

102. S.Mattoli, L.lmberti, R.StcHini, D.Primi. Mimicry of the immunodominant conformation-depcndcnt antigenic site of HAV by motifs selected from synthetic peptide libraries. //J.Virol., 1995, 69, p. 5294-5299.

103. R.B.Merrificld. // J. Amer. Cliem. Soc., 1963, v. 85, p. 2149-2154.

104. H.Mizushima, M.Hijikata, S.Asable et al. Two hepatitis С virus glycoprotein E2 products with different C-termini. // J.Virol., 1994, v. 68, № 10, p. 6215-6222.

105. J.Monjardino. Replication of hepatitis delta virus. // J. Viral Hepatitis, 1996, v. 3, p. 163-166.

106. O.V.Nainan, M.A.Brinton, H.S.Margolis. Identification of amino acids located in the antibody binding sites of human HAV. // Virology. 1992, 191, p. 984-987.

107. E.H.Nardin, Ci.A.Oliveira, J.M.Calvo-Calle, R.S.Nussenzvveig. The use of MAPs in the analysis and induction of protcctivc immune responses against infectious diseases. // Adv. Immunol., 1995,60, p. 105-149.

108. F.Negro, S.U.Emcrson, C.McRill et al. Detection of hepatitis delta virus RNA by a polymerase chain rcaction-bascd assay. // The hepatitis delta virus. / J.L.Gerin, M.Rizzetto, R.H.Purcell eds., New York, Wiley-Liss, 1991, p. 173-184.

109. F.Negro, G.L.Gerin, R.H.Purcell, R.H.Miller. Basis of hepatitis delta virus disease? //Nature, 1989, v. 341, p. 111.

110. Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peplidies, Recommendation 1983, Eur.J. Biochem., v. 138, № 1, p. 9-37.

111. R.R.Ogorzalek Loo & P.C.Andrews. Examining charging in ES1-MS with MAP. In: Proc. 42 ASMS Conference on Mass Spectrometry, p.410.

112. H.Okamoto, K.Kurai, S.Okada et al. Full-Length Sequence of a Hepatitis Genome Having Poor Homology to Reported Isolates: Comparative Study of Four Distinct Genotypes. // Virology, 1992, 188, p. 331-341.

113. H.Okamoto, S.Okada, Y.Sugiyama et al. Nucleotide sequence of the genomic RNA of hepatitis С virus isolated from a human carrier: comparison with reported isolates for conserved and divergent regions. //J. Gen. Virol., 1991, 72, p. 2697-2704.

114. H.Okamoto, V.Sugiyama, S.Okada el al. Typing hepatitis С virus by polymerase chain reaction with type-specific primers: application to clinical surveys and tracing infectious sources. Hi. Gen. Virol., 1992, 73, p. 673-679.

115. K.Patel, McHutchinson. Pegintcrferon alpha-2b: a new approach to improving response in hepatitis С patients. // Expert Opin. Pharmacother., 2001, v. 2, № 8, p. 13071315.

116. J.A.Perez, J.F.Gonzalez-Dankaart, F.Reig ct al. Solid phase synthesis and immunogenicity of a VP3 peptide from 11AV. II Biomedical Peptides, Proteins & Nucleic Acids, 1995, l,p. 93-100.

117. M.Peters. Update on HIV/HBV coinfcction: pathogenesis and treatment. // The prnNotcbook, 2002, v. 7, № 4, p. 16-25.

118. LH.Ping, R.W.Jansen, J.T.Stapleton et al. Identification of an immunodominant antigenic site involving the capsid protein VP3 of HAV. II PNAS USA, 1988, 85, p. 82818285.

119. L.I I.Ping & S.M.Lemon. Antigenic structure of human HAV defined by analysis of escape mutants selected against murine monoclonal antibodies. //J.Virol., 1992, 66, p. 22082216.

120. C.Pohl, B.M.Baroudy, K.F.Bergniann et al. A human monoclonal antibody that recognizes viral polypeptides and in vitro translated products of the genome of the hepatitis D virus. Hi. Infect. Dis., 1987, v. 156, p. 622-629.

121. F.Poisson, P.Roingeard, A.Baillou et al. Characterization of RNA-binding domains of hepatitis delta antigen. Hi. Gen. Virol., 1993, v. 74, p.2473-2477.

122. A.Ponzetto, B.Forzani, P.P.Parravicini et al. Epidemiology of hepatitis delta virus infection. // Eur. J. Epidemiol., 1985, v. I, p. 257-263.

123. V.K.Potapov, V.P.Veiko, O.N.KoroIeva, Z.A.Shabarova. Rapid synthesis of oligodeoxyribonucleotides on a grafted polymer support. // Nucl. Acids Res., 1979, v. 6, p. 2041-2056.

124. T.Poynard. Treatment of hepatitis С virus: the first decade. // Semin. Liv. Dis., 2004, v. 24 (suppl. 2), p. 19-24.

125. T.Poynard, V.Ratziu, Y.Benmanov et al. Fibrosis in patients with chronic hepatitis C: detection and significanse. // Sem. in Liv. Diseases. 2000, v. 20. № 1, p. 47-54.

126. O.V.Ptitsyn, A.V.Finkelstein. Theory of protein secondary structure and algorithm of its prediction. // Biopolymers, 1983, v. 22, p. 15-25.

127. M.Raida, K.Adermann, W.G.Forssmann. Characterization of MAPs by electrospray MS and amino acid sequencing. In: Proc. 42 ASMS Conference on Mass Spectrometry, p. 412.

128. M.Rizetto. The delta agent. // Hepatology, 1983, v. 3, p. 729-737.

129. M.Rizzetto, M.G.Canese, S.Arico et al. Immunofluorescence detection of a new antigen/antibody system (D/anti-D) associated with hepatitis В virus in liver and serum of HBsAg carriers. // Gut, 1977, v. 18, p. 997-1003.

130. M.Rizzetto, M.G.Canese, J.L.Gerin, el al. Transmission of the hepatitis В virus-associated delta antigen to chimpanzee. // J. Infect. Dis., 1980, v. 141, p. 590-602.

131. M.Rizzetto, J.W.Shih, J.L.Gerin. The hepatitis В virus-associated D antigen: isolation from liver, development of solid-phase radioimmunoassays for D antigen and anti-D and partial characterization of D antigen. //J.Immunol., 1980, v. 125, p. 318.

132. M.Rizzetto, G.Verme, S.Recchia ct al. Chronic hepatitis in carriers of hepatitis В surface antigen, with intrahepatic expression of the delta antigen.//Ann. Intern. Med., 1983, v. 98, p. 437-441.

133. G.D.Rose. Prediction of chain turns in globular proteins on a hydrophobic basis. // Nature, 1978, v. 272, p. 586- 590.

134. J.A.Saldanha, H.C.TIiomas, J.P.Monjardino. Cloning and sequencing of RNA of hepatitis delta virus isolated from human serum. Hi. Gen. Virol., 1990, v. 71, p. 1603-1606.

135. U.Schlipkoter, A.Ponzctto, K.Fuchs el al. Different outcomes of chronic hepatitis delta virus infection in woodchucks. // Liver, v. 10, p. 291-301.

136. A.O.Shakil, S.Hadziyannis, J.H.Hoofnagle et al. Geographic distribution and gcnctic variability of hepatitis delta virus genotype 1. // Virology. 1997, v. 234, p. 160-167.

137. Y.K.Shimizu, K.Yamaji, Y.Masulio et al. Identification of the sequence on NS4A required for enhanced eleavage of the NS5A//5B site by hepatitis С virus NS3 protease. // J.Virol., 1996, v.70,№ l,p. 127-132.

138. A Short Guide to Abbreviations and Their Use in Peptide Scicnce, J. Peptide Sci., 1999, v. 5, p. 465-471.

139. P.Simmonds. Variability of Hepatitis С Virus. // Hcpatology, Feb. 1995, p. 570583.

140. P.Simonds, K.Rose, S.Graham et al. Hi. Clin. Microbiol., 1993, 31, p. 1493-1503.

141. A.Smedile, C.Lavarini, P.Farci ct al. Epidemiologic patterns of infections with the hepatitis В virus associated delta agent in Italy. // American journal of epidemiology, 1983, v. 117, p. 223-229.

142. J.T.Stapleton & S.M.Lemon. Neutralization cscape mutants define a dominant immunogenic neutralization site on HAV. //J.Virol., 1987, 61, p. 491-498.

143. J.P.Tam. Synthetic peptide vaccine design: synthesis and properties of a high-density MAP system. // PNAS USA, 1988, 85, p. 5409-5411.

144. J.P.Tam & F.Zavala. Multiple antigen peptide. A novel approach to increase detection sensitivity of synthetic peptides in solid-phase immunoassays. // J. Immunol. Methods, 1989, 124, p. 53-61.

145. J.P.Tam. Reccnt advances in MAPs. // J. Immunol. Methods, 1996, 196, p. 17-32.

146. J.R.Tang, L.Cova, J.P.Lamclin et al. Clinical relevance of the detection of hepatitis delta virus RNA in serum by RNA hybridization and polymerase chain reaction. // J. Hepatol., 1994, v. 21, p. 953-960.

147. J.R.Tang, O.Hantz, L.Vitvitski, J.P.Lamclin. Discovery of a new point mutation changing the HDAg expression of a hepatitis delta virus isolate from Central African Republic. Hi. Gen. Virol., 1993, v. 74, p. 1827-1835.

148. Y.Tanji, M.Hijikata, S.Saton, K.Shimotohno. Hepatitis С virus-encodcd nonstructural protein NS4A has versatil function in viral protein processing. // J. Virol., 1995, v.69, № 3, p. 1575-1581.

149. Y.Tanji, T.Kaneko, S.Saton, K.Shimotohno. Phosphorylation of hepatitis С virus-encoded nonstructural protein NS5a. // J. Virol., 1995, v. 69, № 6, p. 3980-3986.

150. J.M.Taylor. Hepatitis delta virus: cis and trans function required for replication. // Cell, 1990, v. 61, p. 371-373.

151. J.M.Taylor. Structure and replication of hepatitis delta virus. // Seminars in Virology, 1990, v. I, p. 135-141.

152. J.Taylor, W.Mason, J.Summers ct al. Replication of human hepatitis delta virus in primary cultures of woodchuck hepatocytes. // J. Virol., 1987, v. 61, № 9, p. 2891 -2895.

153. H.L.Tilleman, H.Wedcmeyer, T.Rudolf et al. Early lamivudine therapy prevents liver failure in patients with fulminant hepatitis B. // J.l lepatol., 2002, v. 36, Suppl. I, p. 275.

154. I.Toida, S.Yamamoto, S.Takuma et al. Lack of tuberculin activity of synthetic peptides. // Infection and Immunity, 1985, v. 50, № 3, p. 614-619.

155. В. K. Van Weemen, A.H.W.M.Schuurs. Immunoassay using antigen enzyme conjugates. // FEBS Letters, 1971, 215, p. 232-236.

156. S.Vassarotto, M.Bestagno, F.Bonelli, O.Burrone. Cloning and expression of an anti-IIDAg chimeric lgM and its application as a standart in an anti-HDAg quantitation assay. //

157. Ninth Triennial International Symposium on Viral Hepatitis and Liver Disease, Rome, Italy, 1996, A 281, p. 117.

158. T.Vogel, R.Kurth, S.Norley. The majority of neutralizing abs in HlV-1-infection patients recognize linear VP3 loop sequences. Studies using HIV-1 MAPs. // J.Immunol., 1994, 153,p.1895-1904.

159. K.S.Wang, Q.L.Choo, A.J.Wciner et al. Structure, sequence and expression of the IIDV genome. // Nature, 1986, v. 323, № 6088, p. 508-514.

160. K.S.Wang, Q.L.Choo, A.J.Weiner et al. Corrigendum: Structure seqence and expression of the hepatitis delta virus genome. // Nature, 1987, v. 328, p. 456.

161. J.G.Wang, R.W.Jansen, E.A.Brown, S.M.Lemon. Immunogenic domains of hepatitis delta virus antigen: peptide mapping of epitopes recognizcd by human and woodchuck antibodies. // J. Virol., 1990, v. 64, № 3, p. 1108-1116.

162. A.J.Weiner, Q.L.Choo, K.S.Wang et al. A single antigenomic open reading frame of the hepatis delta virus cncode the epitopc(s) of both hepatitis delta antigen polypeptides p24 and p27. // J. Virol., 1988, v. 62, p. 594.

163. J.-C. Wu, T.-Z. Chiang, I.-J. Sheen. Characterization and philogcnctic analysis of a novel hepatitis D virus strain discovered by restriction fragment length polymorphism analysis. Hi. Gen. Virol., 1998, v. 79, p. 1105-1113.

164. J.C.Wu, K.B.Choo, C.M.Chen et al. Genotyping of hepatitis D virus by restriction fragment length polymorphism and relation to outcome of hepatitis D. // Lancet, 1995, v.346, p. 939-941.

165. H.Yajma, N.Fujii. // 'flic Peptidies: Analysis, Synthesis, Biology. / E.Gross, J.Meienhofer eds., New-York, Acad. Press, 1983, v. 5, p. 65-109.

166. N.Yuki, N.Hayashi, E. Mita et al. Clinical Characteristics and Antibody Profiles of Chronic Hepatitis С Patients: Relation to Hepatitis С Virus Genotypes. // J. of Med. Virol., 1995,45, p. 162-167.

167. Z.-X.Zhang, M.Chen, A.Socnnerborg et al. Distinguishing Acute from Symptomatic Chronic Hepatitis С Virus (HCV) Infection by Site-Directed Serology of the HCV Structural Proteins. Hi. of Infectious Diseases, 1995, 171, p. 1356-9.

168. Y.Y.Zhang, E.Tscga, B.G.Hansson. Phylogenctie analysis of hepatitis D viruses indicating a new genotype 1 subgroup among African isolates.//J. Clin. Microbiol., 1996, v. 34, p. 3023-3030.

169. Z.-X. Zhang, Z.-B. Yun, M. Chen et al. Evaluation of a Multiple Peptide Assay for Typing of Antibodies to the Hepatitis С Virus: Relation to Genomic Typing by the Polymerase Chain Reaction. // J. Med. Virol., 1995, 45, p. 50-55.

170. A.L.Zignego, M. De Carli, M.Monti et.al. Hepatitis С virus infection of mononuclear cells from peripheral blood and liver infiltrates in chronically infected patients. //J.Med. Virol., 1995, v. 47, №1, p. 58-65.

171. H.Zylberberg, S.Pol, V.Thiers et al. Significanse of repetedly normal aminotransferase activities in HCV-infcctcd patients. // J. of Hcpatology, 1997, v. 26, Supplement № I, p. 190.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.