Особенности взаимодействия Bacillus atrophaeus B-9918 с растениями и фитопатогенными грибами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Коряжкина, Мария Федоровна

• Коряжкина, Мария Федоровна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Коряжкина, Мария Федоровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ПРЕДСТАВИТЕЛИ РОДА BACILLUS КАК ПЕРСПЕКТИВНЫЕ АГЕНТЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ И ФИТОСТИМУЛЯЦИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

1.1 Особенности взаимодействия растений и микроорганизмов

1.2 Фитопатогены и способы борьбы с заболеваниями растений

1.3 Характеристика бацилл и перспективность их использования для разработки биопрепаратов и средств защиты растений

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ '

2.1 Объекты исследований

2.2 Методы исследований 41 ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ РАЗНООБРАЗИЯ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА BACILLUS В ТИПИЧНОЙ ДЛЯ АРИДНОЙ ЗОНЫ

АГРОЭКОСИСТЕМЕ

3.1 Выделение представителей рода Bacillus

3.1.1 Учет численности и оценка разнообразия сапротрофных микроорганизмов в агроценозе и фрагментах естественных агроэкосистем

3.1.2 Выделение и изучение морфологических, культуральных

и физиолого-биохимических свойств и идентификация аэробных спорообразующих бактерий рода Bacillus

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНГИЦИДНЫХ СВОЙСТВ ВЫДЕЛЕННЫХ БАЦИЛЛ

4.1 Исследование взаимодействия выделенных штаммов с микромицетами

4.2 Изучение фитотоксичности штаммов и выбор штамма с наиболее выраженными хозяйственно-полезными свойствами

4.3 Изучение морфологических, культуральных,

физиолого-биохимических свойств и идентификация штамма

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ BACILLUS АTROPHAEUS В - 9918 С РАСТЕНИЯМИ И ФИТОПАТОГЕННЫМИ ГРИБАМИ

5.1 Фунгицидная активность

5.2 Исследование способности к колонизации растений

(на примере томата сорта «Новичок»)

5.3 Зависимость фунгицидной и фитостимулирующей активности Bacillus atrophaeus В -9918 от фазы роста культуры при непрерывном культивировании

5.3.1 Фунгицидная активность штамма

5.3.2 Фитотоксичность и фитостимулирующая активность штамма

5.3.3 Методика получения маточной культуры и суспензии штамма Bacillus atrophaeus В - 9918

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ BACILLUS ATROPHAEUS В - 9918 С РАСТЕНИЯМИ И ФИТОПАТОГЕННЫМИ ГРИБАМИ В УСЛОВИЯХ ВЕГЕТАЦИОННЫХ И ПОЛЕВЫХ ОПЫТОВ

6.1 Вегетационные опыты с томатами сорта «Победитель»

6.1.1 Бактеризация семян

6.1.2 Инокуляция растений

6.2 Полевые опыты

6.2.1 Изучение влияния штамма Bacillus atrophaeus В-9918

на рост и устойчивость арбузов к фузариозу

6.2.2 Изучение влияния штамма Bacillus atrophaeus В-9918 на рост и устойчивость томатов к альтернариозу

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а.с.п. - Абсолютно сухая почва

КОЕ - Колониеобразующие единицы

МПА - Мясо-пептонный агар

РПБ - Рыбо-пептонный бульон

В. - Bacillus

Ps. — Pseudomonas

sp. - Species

PGPR - plant growth-promoting rhizobacteria

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности взаимодействия Bacillus atrophaeus B-9918 с растениями и фитопатогенными грибами»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Аэробные спорообразующие бактерии рода Bacillus имеют широкое распространение в биосфере, входят в состав сапротрофов и занимают различные экологические ниши в почвенных и водных экосистемах, однако по своей совокупной биомассе превалируют в почвенном покрове (Vargas-Ayala et al., 2000; McSpadden Gardener, 2004; Мелентьев, 2007; Современная микробиология..., 2009).

Представители рода Bacillus способны заселять ризосферу и рщоплану растений, используя питательные вещества, продуцируемые растениями в виде корневых экзометаболитов, а также синтезировать необходимые для растений биоконтрольные вещества, фитогормоны и витамины (Martin et al., 1987; Foldes et al., 2000; Мелентьев, 2007; Idris et al., 2007; Ortiz-Castro et al., 2008; Ahmed, Hasnain, 2010; Chen et al., 2010), все вышеперечисленные свойства позволяют отнести их, наряду с ризобиями, псевдомонадами и микоризными грибами к группе PGPR (Schippers, 1992).

Бациллы участвуют во всех формах взаимоотношений с растениями: могут являться возбудителями заболеваний (Hosford, 1982; Пересдпкин, 1989; George N. Agrios, 2005); способствовать устойчивому росту и развитию растения; защищать растение от фитопатогенов (Nielsen, Sorensen, 1997; Широков и др., 2002; Harsh et al., 2004; Мелентьев, 2007; Чеботарь, 2007; Halalisani Gumede, 2008; Saharan, Nehra, 2011).

На природном явлении антагонизма микроорганизмов по отношению к фитопатогенам основан микробиологический способ защиты растений от болезней, который является одним из самых перспективных в связи с эго эффективностью и экологичностью.

На протяжении последних двадцати лет рядом исследователей (Filippi, 1987; Kim et al., 1997; Кузьмина, 1998; Новикова, 2004; Мелентьев, 2007; Gacitua et al., 2009; U. S. Patent № 8025875, 2009) проводится работа по поиску бациллярных штаммов для создания эффективных биопрепаратов и

средств защиты растений. Такие препараты перспективны, так как штаммы, входящие в их состав, продуцируют Б AB, гормоны и витамины, а также обладают пластичным метаболизмом и смешанной жизненной стратегией, сочетающей элементы r-, L- и К- стратегов (Новикова, 2005), что позволяет им приспосабливаться к различным почвенным условиям, в том числе влажности (Backman et al., 1997; Мелентьев, 2000). Бациллярные биопрепараты совместимы с протравителями семян, гербицидами и инсектицидами (Кузьмина, 1998; Захарова, 2006; Фомина, 2009), у них выше срок хранения, благодаря наличию эндоспор, позволяющих сохранить культуру в жизнеспособном состоянии длительное время (Алехин, Злотников, 2006; Lolloo et al., 2010), что является важными условиями при использовании их в интегрированной защите растений.

Современный ассортимент биопрепаратов позволяет осуществлять

t

защиту сельскохозяйственных культур от наиболее опасных заболеваний. Однако их эффективность зависит от множества факторов, например: конкурентоспособности штаммов, входящих в состав биопрепарата по отношению к аборигенным микроорганизмам и возбудителям заболеваний растений, почвенно-климатических и других региональных условий (Захарова, 2006; Хайруллин и др., 2010). Биопрепаратов и микробиологических средств защиты, максимально адаптированных к условиям аридной зоны России в настоящее время не разработано.

Таким образом, поиск среди представителей рода Bacillus, выделенных

I

из агроэкосистем аридной зоны, обладающих биоконтрольными свойствами является весьма актуальным.

Цель исследований. Исследование особенностей взаимодействия Bacillus atrophaeus В - 9918 с растениями и фитопатогенными грибами для использования штамма в агротехнологиях.

Задачи исследований:

1. Выделить представителей рода Bacillus из агроэкосистемы и изучить их морфологические, культуральные и физиолого-биохимические свойства.

2. Исследовать взаимодействие выделенных штаммов с растениями и фитопатогенными грибами.

3. Идентифицировать штамм с наибольшей фунгицидной и фитостимулирующей активностью и определить его способность к колонизации растений.

4. Изучить влияние штамма на рост томатов в вегетационных условиях.

5. Изучить влияние штамма на рост и устойчивость растений к заболеваниям в полевых опытах на томатах и арбузах.

Научная новизна работы. Из агроэкосистемы аридной зоны выделено 16 бациллярных штаммов и изучено их взаимодействие с микромицетами. Впервые установлено, что штамм Bacillus atrophaeus В - 9918 обладает фунгицидной активностью к широкому спектру фитопатогенов, фитостимулирующей активностью и способностью к эффективной колонизации ризосферы и ризопланы растений (на примере томата).

Показана зависимость фунгицидной и фитостимулирующей активности штамма Bacillus atrophaeus В-9918 от фазы роста культуры.

Впервые показана перспективность применения суспензии штамма Bacillus atrophaeus В-9918 как средства защиты сельскохозяйственных растений на примере томатов и арбузов.

Практическая значимость. Штамм Bacillus atrophaeus В-9918 предложен в качестве средства для стимуляции роста сельскохозяйственных растений и защиты их от болезней. Полученная лабораторная партия средства апробирована в вегетационных и полевых опытах. Разработана технология применения средства, включающая бактеризацию семян, инокуляцию под корень и опрыскивание.

Штамм В. atrophaeus помещен в ВКПМ под номером В-9918. Подана заявка на изобретение «Штамм Bacillus atrophaeus В-9918 в качестве средства для стимуляции роста и защиты растений от грибных болезней» (заявка № 2010111829 (заявл. 26.03.2010).

Результаты исследований являлись частью научной работы по госконтракту: «Разработка микробного препарата для борьбы с

I

заболеваниями сельскохозяйственных культур Астраханской области» в 2010 -2011 гг. Материалы диссертации использованы при подготовке курсовых и дипломных работ студентами специальности «Микробиология», бакалаврами направления «Биология» и магистрами магистерской программы «Микробиология и вирусология» института рыбного хозяйства, биологии и природопользования АГТУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Из агроэкосистемы выделен и идентифицирован штамм Bacillus atrophaeus, обладающий фунгицидными, фитостимулирующими свойствами и способностью к колонизации растений.

2. Штамм Bacillus atrophaeus В-9918 подавляет рост F. culmorum, F. graminearum, F. poae, F. sporotrichoides, Aspergillus niger, Alternaria tenuissima, Cladosporium sp., Mycelia sterilia, Phytium ultium, и вызывает аутолиз мицелия у Alternaria sp.

3. Фитостимулирующие свойства и способность к колонизации растений подтверждены в лабораторных экспериментах, вегетационных и полевых опытах активизацией ростовых процессов растений.

4. Показана, что фунгицидная и фитостимулирующая активность штамма Bacillus atrophaeus В-9918 зависит от фазы роста культуры. Максимум антифунгальной и стимулирующей рост и развитие растений активности приходится на экспоненциальную фазу роста.

5. Выявлена оптимальная концентрация клеток В. atrophaeus В-9918 в суспензии - Ю7КОЕ/мл, при обработке которой наблюдается наибольший

эффект стимуляции роста и развития арбузов в полевых и томатов в полевых и вегетационных опытах, а также снижение развития фузариоза и альтернариоза.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы и результаты исследований докладывались на: научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения К.В. Горбунова «Фундаментальные аспекты биологии в решении актуальных экологических проблем» (Астрахань, 2008); 13-й, 14-й Пущинских международных школах-конференциях молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2009, 2010); Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах» (Москва, 2009); Всероссийской школе-семинаре для студентов, аспирантов и молодых ученых «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2009); Всероссийском симпозиуме с международным участием «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (Москва, 2009); Первых Международных Беккеровских чтениях (Волгоград, 2010), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» (Уфа, 2010); Международной научной конференции: «Инновационные технологии в управлении, образовании, промышленности «АСТИНТЕХ- . 2010» (Астрахань, 2010); Международной отраслевой научной конференции профессорско-преподавательского состава АГТУ, посвященной 80-летию основания АГТУ (Астрахань, 2010); Международной конференции молодых ученых: «Биология: от молекулы до биосферы» (Харьков, Украина, 2010), на Международной конференции с элементами научной школы для молодежи: «Экокультура и фитобиотехнологии для улучшения качества жизни на Каспии» (Астрахань, 2010).

Работа выполнена в лаборатории микробиологического мониторинга Астраханского государственного технического университета в соответствии с плановой темой НИР: «Скрининг микроорганизмов с полезными свойствами для использования в экологической и сельскохозяйственной биотехнологии» (№ гос. регистрации 01201051559, научный руководитель зав. лаб., д.б.н., проф. Дзержинская И.С.). Работа поддержана госконтрактом с министерством сельского хозяйства Астраханской области на выполнение научно-исследовательских и фундаментально-прикладных работ в 2010 -2011 гг.: «Разработка микробного препарата для борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных культур Астраханской области» (№ гос. регистрации 01.2.009.00158, научный руководитель зав. лаб., д.б.н., проф. Дзержинская И.С.).

Личный вклад соискателя. Представленные экспериментальные результаты получены лично автором. Определение концентрации цитокининов и ауксинов в культуральной жидкости определялось в Институте биологии Уфимского научного центра РАН совместно с к.б.н. Веселовым Д.С., нитрогеназную активность штамма В. atrophaeus В-9918 исследовали совместно с сотрудниками ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии РАСХН. Соискатель принимал непосредственное участие в постановке всех задач исследования, подготовке и проведении экспериментов, вегетационных опытов и полевых исследований, обработке и обсуждении полученных результатов, подготовке публикаций.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ, в том числе 3 - в ведущих рецензируемых научных журналах ВАК. Подана заявка № 2010111829 (заявл. 26.03.2010) на выдачу патента РФ «Штамм Bacillus atrophaeus В-9918 в качестве средства для стимуляции роста и защиты растений от грибных болезней» / Дзержинская И.С., Коряжкина М.Ф.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования,

и

изложения результатов исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы и приложений. Материалы диссертации изложены на 154 страницах машинописного текста, иллюстрированы 27 таблицами и 29 рисунками.

Работа выполнялась под руководством д.б.н., проф. И.С. Дзержинской

I

которой автор выражает особую признательность и благодарность. Автор выражает глубокую благодарность к.б.н. Т.С. Фоминых за методическую помощь в постановке полевых экспериментов и ценные советы; к.б.н. В.К. Чеботарю за ценные советы и помощь в работе; д.с.-х. н. Ш.Б. Байрамбекову и к. с.-х. н. Е.В. Поляковой за методическую помощь в постановке полевых экспериментов; всему коллективу кафедры «Прикладная биология и микробиология» АГТУ за помощь и поддержку в процессе работы.

ГЛАВА 1 ПРЕДСТАВИТЕЛИ РОДА BACILLUS КАК ПЕРСПЕКТИВНЫЕ АГЕНТЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ И ФИТОСТИМУЛЯЦИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

1.1 Особенности взаимодействия растений и микроорганизмов

Растительный организм можно рассматривать как сложную экосистему, в которой различные ниши заселены микроорганизмами (Купренович, 1947). Взаимодействия, возникающие между микроорганизмами и растениями, базируются как на обмене метаболитами, так и на обеспечении физического контакта и их условно можно разделить на несколько типов, важнейшими из которых являются симбиоз, паразитизм и антагонизм, наблюдать которые можно во всех частях растения (Громов, Павленко, 1989; Экология микрооорганизмов, 2004).

Микробно - растительные взаимоотношения устанавливаются уже на ранней стадии образования семени, оболочка которого, а часто и внутренние структуры несут клетки и покоящиеся формы микроорганизмов, количество и таксономическая принадлежность которых определяются множеством физико-химических и биологических факторов окружающей среды, а также свойством самого семени (Нетрусов, Котова, 2006). Как отмечают А.И. Нетрусов и И.Б. Котова, структуры семени и микроорганизмы находятся под влиянием продуктов обмена веществ друг друга (Нетрусов, Котова, 2006).

В семенах сохраняются многие возбудители болезней растений, вызывающие гибель семян, снижение всхожести или поражение и гибель проростков (Торопова и др., 2002). Фитопатогенные микроорганизмы могут находиться на поверхности, под семенной кожурой или в тканях семени. Если патоген находится внутри, он защищен тканями семени и не повреждает его, однако при прорастании использует ткани семени в качестве источника питания (Tapp, 1975), а также может выделять токсины, которые угнетающе действуют на развитие растений, снижая при этом

жизнеспособность проростков (Sharma, Singh, 2003). Растение, в свою очередь, реагируя на атаку фитопатогена, выделяет различные вещества, сдерживающие развитие инфекции, например ингибиторы протеаз, подавляющие активность ферментов фитопатогенных микроорганизмов (Дунаевский и др., 1994).

При прорастании семени в благоприятных физико-химических условиях метаболические процессы в нем и в микробной популяции, с ним связанной, значительно активизируются. Метаболиты, выделяемые как микроорганизмами, так и семенем, обладают определенной специфичностью, стимулируют или сдерживают рост различных групп микроорганизмов, влияя таким образом на процессы роста и развития молодого растения (Нетрусов, Котова, 2006). Так, ингибиторы трипсина и хемотрипсина из сои, фасоли и картофеля способны подавлять активность протеиназ, секретируемых грибом Fusarium solani, разрушающих ткани семени. Ингибитор трипсина из гречихи подавляет активность протеиназ гриба Alternaría alternata (Дунаевский и др., 1994; Дунаевский и др., 2005). Однако такая взаимосвязь ингибиторов протеиназ с развитием инфекции наблюдается не всегда. Например, при изучении трипсинингибирующей активности семян, относящихся к видам из рода Астрагал, не установлено корреляции между степенью зараженности семян и проростков грибами и бактериями и величиной их трипсинингибирующей активности (Килина и др., 2008).

Примером нейтральных или мутуалистических взаимоотношений в семени является взаимодействие семенных структур с эндофитными микроорганизмами. Эндофиты семян включают микроорганизмы, которые ассоциированы с семенами и не способны вызывать инфекционный процесс (Chen et al., 1995; Agarwal and Sinclair, 1997). Непатогенные для растений бактерии были выделены из семян кукурузы (Mclnroy and Kloepper, 1995),

хлопка (Mclnroy and Kloeeper, 1995), рапса (Graner et al., 2003), бобовых растений из рода прозопис (Sgroy et al., 2009) и др.

Эндофиты и патогены обладают одинаковым набором факторов, необходимых для успешной колонизации организма хозяина. Например, диазотрофный эндофит Azoarcus sp. ВН72 продуцирует целлюлозолитические ферменты, один из которых, эндоглюканаза, разрезает ß-1,4-гликозидные связи между сахарными остовами в полимере (Reinhold-Hurek and Hurek, 1998). Поскольку данные ферменты не используются бактериальным симбионтом для усвоения целлюлозы, предположено, что они участвуют в гидролизе клеточной стенки растения и проникновении вовнутрь. В то же время, распространенный возбудитель вилта томатов и огурцов Fusarium oxysporum инфицирует растения, используя те же целлюлозолитические энзимы (Validov et al., 2007).

Сходный состав литических ферментов и механизм колонизации внутренних структур растений эндофитами и фитопатогенами свидетельствует о том, что эндофиты произошли от фитопатогенных микроорганизмов, которые в результате совместной эволюции с растением могли лишиться своих факторов вирулентности и перейти к асимптоматическому или даже мутуалистическому существованию (Freeman and Rodriguez, 1993).

Большинство экспериментальных работ свидетельствует о нейтральном существовании бактериальных эндофитов внутри семян. Однако есть случаи мутуалистических взаимоотношений растений и эндофитов: известно, что эндофиты способны синтезировать четыре класса алкалоидов, которые являются токсичными для многих организмов и защищают, таким образом, растение от фитопатогенных нематод и грибов, насекомых, а также травоядных птиц и млекопитающих. Например, грибы рода Neotyohodium, которые являются эндофитами овсяницы тростниковидной, овсяницы луговой и райграса повышают адаптационные возможности растения, оно в свою очередь снабжает гриб питательными

веществами и является для него «убежищем». Таким образом, их «сожительство» является взаимовыгодным (Bush et al, 1997).

В исследованиях Т.В. Шеленги показано, что образцы овсяницы луговой, содержащие грибы-эндофиты рода Neotyphodium, в отличие от «неинфицированных» характеризовались большей устойчивостью к отрицательным температурам и содержали алкалоид лолин (защищающий растение-хозяина от насекомых вредителей), а также токсичные для травоядных млекопитающих алкалоиды лолитрем В и эрговалин (Шеленга, 2006). Помимо этого, эндосимбионты значительно повышали устойчивость растений к засухе благодаря аккумуляции осмопротекторов.

Поверхность растения, и главным образом поверхность листьев -филлосфера, является местом обитания разнообразных микроорганизмов. В филлосфере растения можно наблюдать различные типы взаимоотношений: от симбиоза до паразитизма. Микроорганизмы, ассоциированные с филлосферой и филлопланой, в современной литературе обозначают как эпифиты. Среди эпифитных микроорганизмов филлосферы преобладают бактерии и дрожжи (Громов, Павленко, 1989; Бабьева, Зенова, 1989). Распределение микроорганизмов на поверхности растений носит зональный характер. Эпифиты обнаруживаются преимущественно вокруг устьиц, т.к. выделения из устьиц являются основным питательным субстратом для них (Мишустин, 1984). Микроорганизмы, развивающиеся в филлосфере, могут приносить растению пользу, выделяя стимуляторы роста; значительная часть этих бактерий способна к азотфиксации (Громов, Павленко, 1989; Умаров, 1986). Доказано, что 30% продуктов азотфиксации эпифитов поступает в ткани растения (Умаров, 1986).

Наряду с другими факторами, обеспечивающими иммунитет у растений, эпифитная микрофлора служит первичным барьером для защиты растений от попадающих из окружающей среды сапрофитных, условно-

патогенных и патогенных микроорганизмов (Бабьева, Зенова, 1989; Новикова, 2004).

Однако в составе микрофлоры филлосферы могут сохраняться и фитопатопатогенные формы - микроорганизмы способные, попадая на поверхность тканей растения, вызывать различные заболевания (Слепян, 1995). Фитопатогенные бактерии проникают внутрь растения через раны, иногда через естественные отверстия в виде устьиц, нектарников и гидатод (Плотникова, 2007). Грибы, в отличие от бактерий, имеют специализированные структуры для проникновения в ткани растений, которые усложняются по мере их паразитической специализации (Плотникова, 2007). Фитопатогенные микроорганизмы, проникшие в растение, обычно размножаются в межклеточном пространстве и в сосудистых пучках. Они вызывают различные гнили, ожоги, пятнистости, увядания, опухолевые разрастания (Громов, Павленко, 1989; Головин и др., 2002; George N. Agrios, 2005).

t

Практический интерес представляет изучение особенностей взаимного обитания фитопатогенов в филлосфере растений в сходных условиях. Некоторые исследования свидетельствуют об антагонистическом характере взаимодействия между Phytophtora infestans и Alternaría solani при развитии в условиях конкуренции за пищевые ресурсы (Дорожкин, Иванюк, 1975). Однако в исследованиях В.А. Зайцевой и Р.И. Сафина показано, что у Phytophtora infestans и Alternaría solani при патогенезе картофеля существует система механизмов, позволяющая им избежать жесткой конкуренции. Сепарация инокулюма, ориентация листьев и особенности физиолого-биохимических процессов позволяют патогенам занимать разные ярусы на одном растении. Таким образом, на уровне отдельных долей отношения между патогенами характеризуются как антагонистические, на уровне ярусов и растений в целом такой конкуренции не отмечается (Зайцева, Сафин, 2007).

Ризосфера и ризоплана растений являются местами, где наблюдаются сложные растительно-бактериальные взаимодействия. Популяции многочисленных видов микроорганизмов ризосферы не являются собственно микрофлорой растения, однако они оказывают большое влияние на жизнедеятельность растения: вырабатывают тиамин и ряд других витаминов, синтезируют ростовые вещества - гиббереллин и гетероауксин, разрушают органические и минеральные соединения, способствуя повышению эффективности использования, растением минеральных веществ почвы (Bhavdish et al., 2003; Erturk et al., 2010; Saharan, Nehra, 2011).

Ризосферные микроорганизмы - это группа почвенных микроорганизмов, обитающих в прикорневой зоне растений - ризосфере и ассоциированных с поверхностью корня - ризопланой (Lynch, 1990).

Растения оказывают мощное влияние на состав и активность ризосферных микробных сообществ через продукты корневых выделений и корневого опада. Поскольку отдельные виды и сорта растений различаются по составу корневых экссудатов (Штарк, 2007; Gransee, Wittenmayer, 2000), для различных видов растений в различные периоды времени соответствует определенная микрофлора (Широких, 2005). Можно предположить, что процесс эволюции взаимодействий растений с бактериями оказал определенное влияние на характер этих продуктов, способствуя преимущественному развитию полезных для растения ' форм микроорганизмов (Нетрусов, Котова, 2006). Микроорганизмы, в свою очередь, вступая в симбиоз с растениями, меняют их метаболизм, при этом изменения направлены на адаптивность растительно-микробного сообщества (Тихонович, 2006).

Ярким проявлением мутуалистического симбиоза микроорганизмов и растений в ризосфере является процесс азотфиксации. Растения выделяют до 20 % образуемого ими органического углерода в прикорневую зону и этим сдвигают в ней соотношение азот / углерод до таких значений, которые для

роста микроорганизмов означают условия относительной азотной недостаточности. Поэтому около 75% ризосферных микроорганизмов способны к азотфиксации (Громов, Павленко, 1989; Гара, 2005). Процесс азотфиксации имеет огромное значение в агроэкоценозах (Newton, 1994).

В зависимости от типа взаимоотношений растения-хозяина с микроорганизмами - азотфиксаторами выделяют: симбиотическую и ассоциативную азотфиксацию. Кроме того в почве всегда присутствуют свободноживущие азотфиксаторы.

Из всех типов симбиозов микроорганизмов с растениями наиболее изучен симбиоз бобовых растений с клубеньковыми бактериями (ризобиями). Это связано с практической ценностью данного типа симбиоза и относительной легкостью исследования клубеньковых бактерий (Генетика симбиотической азотфиксации..., 1998).

Ассоциативной азотфиксацией называют накопление азота микроорганизмами, живущими в ассоциациях с первичными продуцентами органического вещества - растениями. Эффект высокой нитрогеназной активности этих ассоциациях связан с поступлением к бактериям от фототрофов легкодоступных источников углерода и энергии в виде экссудатов листьев и корней, внеклеточной слизи цианобактерий и корневого опада (Звягинцев и др., 2005). Ассоциативные азотфиксаторы, принадлежащие к различным родам и видам, имеют индивидуальные особенности в анатомическом строении, физиологии, биохимии и, естественно, в процессах взаимоотношения с растением. Разнообразие ассоциативных взаимоотношений растений с микроорганизмами очень велико. Эффективность азотфиксации ассоциативной микрофлорой по сравнению с симбиотической не столь велика, однако, у ассоциативных азотфиксаторов имеются важные свойства, позволяющие помочь растению в его росте и развитии (синтез фитогормонов, защита от фитопатогенов, разрушение токсических веществ).

Еще одним примером мутуализма в ризосфере является микориза: тесный симбиоз микромицета и высшего растения. Грибы, разлагая недоступные растению органические соединения почвы, обеспечивают получение им фосфора, соединений азота, вырабатывают витаминоподобные вещества и активаторы роста, а сами используют углеводы, извлекая их из корня растения. Без микоризы плохо растут всходы некоторых деревьев, а семена некоторых растений не прорастают (Систематика растений..., 2003). Этот симбиоз бывает двух видов: экто- и эндомикориза (Нетрусов, Котова, 2006).

Паразитизм - распространен среди патогенных форм ризосферы. Причем патогенны могут паразитировать как на бактериях ризосферы (бактерио-, актино- и цитофаги), так и на растении (вирусы, бактерии, грибы).

Факультативными паразитами называют организмы, которые обычно существуют как сапротрофы, но при определенных условиях могут нападать на старые, поврежденные ткани. Многие из них принадлежат к раневым паразитам. Эти паразиты пластичны, имеют широкий круг хозяев, а также легко культивируются на простых искусственных средах (Плотникова, 2007). Например, некоторые бактерии рода А^оЬа^епит в сообществе с растениями, в зависимости от условий внешней среды могут проявлять себя и как симбионты, и как паразиты (Умаров, 1982; Чумаков, 2001).

К факультативным сапрофитам относят микроорганизмы, преимущественно существующие на живых растениях, хотя при определенных условиях могут существовать как сапрофиты. Эти микроорганизмы плохо развиваются на искусственных средах. Наиболее специализированными организмами являются облигатные паразиты, живущие только за счет тканей растений (Плотникова, 2007).

Микроорганизмы ризосферы, способствующие росту и развитию растений, выделены в отдельную группу почвенных микроорганизмов -

PGPR (от англ. plant growth-promoting rhizobacteria). Ризобактерии обладают способностью к быстрому росту, эффективно колонизируют корни растений и способны утилизировать их корневые выделения. К наиболее известным представителям группы PGPR относят ризобии, псевдомонады, бациллы и микоризные грибы, эффективно колонизирующие ризосферу, стимулирующие ростовые процессы растений и подавляющие развитие фитопатогенов.

1.2 Фитопатогены и способы борьбы с заболеваниями растений

Фитопатоген, проникая в растение, воздействует на клетки при помощи продуктов своего обмена веществ и может распространиться по всему растению, нарушая нормальный процесс жизнедеятельности. Каждой группе возбудителей болезней присущи свои, специфические способы воздействия на растение - с помощью токсинов, ферментов, регуляторов роста, поглощения питательных веществ клеток растения-хозяина и т.д. (Монастырский, 2004; George N. Agrios, 2005, Плотникова, 2007). Под воздействием фитопатогена в растительном организме происходят различные изменения физиологических и биохимических процессов, что прямым образом влияет на продуктивность растений - резко снижается урожайность или ухудшается качество продукции.

В настоящее время 14,1% из 36,5% потерь зерновых во всем мире приходится на заболевания, вызванные микроорганизмами (George N. Agrios, 2005). По некоторым данным (Алехин, Злотников, 2006), поражение фитопатогенами вызывает снижение урожая сельскохозяйственных культур на 20-30%, а в годы эпифитотий - до 60%, а пораженность растений в зонах сильной вредоносности заболеваний в некоторые годы может достигать 25100% (Кулаков, 1963; Наталенко, Сорокина, 1966; Осницкая, 1971; Сайчук,1989; Заруцкий, 1972; Павлов, 1973; Поликсенова, 2001).

Э. Мюллер с соавторами (Мюллер и др., 1995) отмечает, что из 162 серьезных заболеваний растений в Центральной Европе 135 (83%) вызываются грибами, а остальные - бактериями и вирусами. По разным оценкам насчитывается не менее 10 тыс. фитопатогенных грибов, 150-200 видов бактерий, вызывающих заболевания растений, и не менее 600 фиопатогенных вирусов (Плотникова, 2007). Таким образом, микромицеты,-бесспорно, основные патогены культурных растений (Мюллер, 1995). Фитопатогенные микромицеты не только вызывают болезни растений, но и

продуцируют микотоксины, причем наибольшей способностью к токсинообразованию обладают грибы, заражающие сельскохозяйственные культуры (Баранников, Кириллов, 2006). Продукты, зараженные токсигенными грибами, резко снижают биологическую безопасность и полноценность (Монастырский, 2004) и при попадании в организм человека и животных могут привести к поражению кроветворных и иммунокомпетентных органов (ОоНшЫ е! а1., 2000). Поэтому во многих странах мира содержание микотоксинов в пищевом сырье, продуктах и кормах лимитируется (Монастырский, 2000). В последнее время все больше возрастает внимание к токсинам фузариумов, альтернарии, аспергиллов и пенициллов (Шешегова, 2006). Токсичность фитопатогенов возрастает при переходе с низкопродуктивных сортов растений на высокопродуктивные, а также при смене растения-хозяина. На интенсивность образования токсинов влияют: температура, аэрация, влажность, освещенность, химические обработки (Монастырский, 2001).

В большинстве стран мира защита растений рассматривается как одно из наиболее перспективных условий получения стабильно высоких урожаев сельскохозяйственных культур. Поэтому современные технологии возделывания сельскохозяйственных культур обязательно предусматривают комплекс мероприятий, направленных на снижение численности вредных организмов (Алехин, Злотников, 2006). Современная стратегия защиты растений основывается на соблюдении севооборотов, регулировании климатических и почвенных условий, внедрении в производство устойчивых сортов и гибридов растений, использовании химических и биологических средств защиты (Захарова, 2006; Шешегова, 2006).

На сегодняшний день пестициды фунгицидного действия являются наиболее распространенными средствами защиты растений: по массе использования во всем мире они занимают второе место (Баранников, Кириллов, 2006).

Действие пестицидов на биоценозы сложно и многообразно. Попадая в почву, они изменяют состав ее микрофлоры (Семенкова, Соколова, 2003): подавляя одни виды, они стимулируют развитие других. Они наиболее эффективны в подавлении процессов нитрификации (70 %), многие из них замедляют процессы разложения органических веществ, реакции цикла фосфора, серы (Мотузова, Безуглова, 2007). Кроме того, применение пестицидов на поздних этапах развития растения несет опасность накопления остаточных количеств в продукции (Шешегова, 2004). По мере передвижения пестицидов по трофическим цепочкам происходит не только детоксикация, но и образование высокотоксичных веществ (Баранников, Кириллов, 2006).

Также в растениях пестициды могут влиять на обменные процессы, изменяя химический состав и пищевую ценность продукции (Баранников, Кириллов, 2006). По мнению некоторых исследователей (Барабаш, Веревкина, 2002), пестициды и синтетические регуляторы роста обладают мутагенным действием: влияют на активность генетического аппарата и белоксинтезирующие системы растения.

Кроме того, химическая борьба с заболеваниями в годы эпифитотий грибных болезней оказывается малоэффективной, а химические фунгициды подавляют развитие природных антагонистов фитопатогенов, могут вызывать появление резистентных форм грибов с усиленным токсинообразованием (Монастырский, 1995). Как отмечают некоторые исследователи, в неблагоприятных условиях пестициды с фунгицидным действием могут оказать дополнительную стрессовую нагрузку на растения, что приводит к снижению урожайности растений (Белкина, Савченко, 2009).

Таким образом, использование химических пестицидов часто сопровождается опасностью загрязнения объектов окружающей среды, отрицательно воздействует на полезную флору и фауну, а также стимулирует выработку устойчивых к пестицидам популяций вредных организмов

(Захаренко, 2005; Петров, Чернышков, 2007; Рудаков, Рудаков, 2003; Brent, Hollomon, 1998).

Новое, интенсивно развивающееся направление защиты растений -создание генетически модифицированных (трансгенных) растений и полезных микроорганизмов (Bakan et al, 2002). Однако масштабное возделывание трансгенных растений выявило нежелательные последствия геномодифицированных организмов для человека и объектов окружающей среды: опасность переноса факторов устойчивости с пыльцой от культурных растений к дикорастущим и появление высокоустойчивых к фитофагам, фитопатогенам и гербицидам сорняков; перенос генов устойчивости в цепях питания почвенных микроорганизмов; утрата биоразнообразия культурных растений вследствие широкого применения их однотипных генных конструкций; эволюция фитопатогенов (Захаренко, 2005; Плотникова, 2007).

В последнее время все больше возрастает интерес к применению технологий экологического земледелия. Биологизация земледелия возможна при использовании таких факторов как чередование культур в севооборотах, использование сидератов, применение органических удобрений, биопрепаратов (Дудкин, Лобков, 1990; Казанков, 2000; Куликова, 2010). В технологиях экологического земледелия не допускается: применение химических пестицидов, использование организмов, полученных методом генетической инженерии, применение синтетических регуляторов роста.

Одним из направлений экологического земледелия является разработка биопестицидов на основе различных экстрактов растений, а также веществ выделяемых самими растениями. Так биопестицид трилоджи 70 ,ЕК на основе масла азадирахты высоко эффективен в борьбе с грибными заболеваниями табака и мало уступает химическим фунгицидам (Bozukov, 2003). Экстракт чеснока не уступает химическим фунгицидам по эффективности в борьбе с розовой гнилью корней лука - порея (Biesiada et al, 2002). Исследована также фунгицидная активность эфирного масла иссопа

лекарственного (Letessier et al, 2001), экстрактов эхинацеи (Orlikowski et al, 1999), грейпфрута (Orlikowski, 2001), хвои сибирской пихты (Петров, Чернышков, 2007). На основе эксракта грейпфрута создан эффективный фунгицидный биопрепарат биосепт 33 SL (Orlikowski, 2001).

Норвежскими учеными исследовалось действие эфирных масел из различных растений на возбудителя фитофтороза картофеля. Показано, что экстракты, проявившие активность по отношению к фитопатогену в лаборатории, в полевых экспериментах не обеспечивали должной защиты растений, а кроме того являлись фитотоксичными. А экстракты, показавшие в лаборатории слабую активность по отношению к фитопатогенам, в полевых экспериментах эффективно (на 60-75%) подавляли развитие заболевания и были не фитотоксичными (Quintanilla et al, 2002). Группой исследователей из Сербии и Черногории также отмечен фунгицидный и фунгистатический эффект паров эфирных масел по отношению к возбудителю серой гнили {Botrytis cinerea) (Tanovic et al, 2005). Пакистанскими исследователями установлено, что водный экстракт стеблей аргемоне мексиканской (тропический однолетний сорняк) подавляет развитие корневых гнилей томата, за счет использования содержащихся в экстракте фенольных веществ. Концентрация экстракта 5% угнетала, 1% - стимулировала рост растений. Ингибирующее действие экстракта сглаживалось применением нитрата аммония или ризобактерий (Siddiqui et al, 2002).

Австралийскими учеными показано, что 2-фенилэтилизотиоционат, выделяемый корнями рапса, подавляет развитие грибов, оомицетов и бактерий. Отмечено, что бактерии более толерантны к 2-фенилэтилизотиоционату, чем эукариоты (Smith, Kirkegaard, 2002).

В исследованиях ученых из Индонезии и Австралии показано, что некоторые летучие соединения (альдегиды, этанол, кетоны), выделяемые растениями способны подавлять рост фитопатогенных бактерий и микромицетов (Utama et al, 2002).

>

Некоторые препараты способны стимулировать рост растения и защищать его от болезней повышая иммунитет растения (Защита растений от болезней..., 2002; Жернова, Жернов, 2010). Такие препараты могут опосредованно защищать растение за счет фиторегуляторной активности штаммов-продуцентов, или повышая его болезнеустойчивость (Новикова, 2004). По некоторым данным биопрепараты фитостимулирующего действия агат-25К, иммунофицит и эклоран эффективны против многих грибных болезней ячменя, а урожайность растений, обработанных данными биопрепаратами выше, чем при применении химических фунгицидов (Черемисинов, 2003; Лобанкова и др., 2004).

Бельгийскими исследователями показано, что препараты элекса (хитозан), серенада {Bacillus subtilis штамм QST 713) и элот-вис (смесь растительных экстрактов) индуцировали устойчивость томата к фитофторозу (Isebaert S et al.., 2002). Иммунитет к различным заболеваниям растений вызывают также с помощью воздействия низкими дозами ультрафиолетового излучения, различных биоагентов: дрожжей (Droby et al., 2002), грибов (Cal et al, 2000) и других микроорганизмов.

Одним из самых перспективных направлений экологического земледелия считается микробиологический способ защиты растений. Он основан на использовании природного явления: антагонизма, возникающего между микроорганизмами, входящими в состав препарата и фитопатогенами (Haas et al., 2000; Чеботарь, 2007, Мелентьев, 2007).

Преимущества биопрепаратов на основе микроорганизмов по сравнению с химическими фунгицидами состоит в их специфичности, то есть способности поражать только определенные виды возбудителей; безопасности для человека, теплокровных животных и культурных растений (Новикова, 2005). Определенные преимущества микробных препаратов связаны с небольшими начальными капиталовложениями и использованием базы биолабораторий и региональных станций государственной службы

защиты растений. Использование биопрепаратов исключает накопление пестицидов в растениях (Нугманова и др., 2002). Фунгицидные биопрепараты способны сократить в значительной степени использование химических пестицидов, снизить нагрузку полезных сельскохозяйственных угодий по клеткам и спорам вредных микроорганизмов. Микробиологические пестициды можно применять в комплексе с другими средствами защиты растений, включать их в интегрированные системы защиты растений (Муромцев, 1990).

И.И. Новикова выделяет два способа микробиологической защиты растений от фитопатогенов: первый - создание условий для массового спонтанного развития микроорганизмов; второй - искусственное насыщение микробиоты штаммами микробов - антагонистов (Новикова, 2004).

Создание условий для спонтанного размножения полезных микроорганизмов может быть достигнуто при внекорневых подкормках растений азотом, фосфором и другим элементами. Однако при таких обработках необходима осторожность, т.к. дополнительный источник питания на поверхности листьев может стимулировать развитие фитопатогенов (ОиеМпег а1., 1988). Еще одним способом активизации эпифитной микрофлоры является опрыскивание листьев биологически активными веществами (Захаренко, 2000).

Основная задача биологического контроля фитопатогенных микроорганизмов заключается в снижении уровня их развития в активной или покоящейся стадии при одновременном направленном изменении условий колонизации хозяина и жизнедеятельности антагонистов (Надыкта, 2004).

Микробы - антагонисты возбудителей болезней растений в подавляющем большинстве являются свободноживущими видами, принадлежат к разным систематическим и эколого - физиологическим

группам и широко представлены во всех экологических нишах: почве, ризосфере, филлосфере растений (Новикова, 2004).

В основе антагонизма ризосферных бактерий по отношению к фитопатогенным микромицетам могут лежать: выделение антагонистами антибиотиков и литических ферментов, конкуренция за ионы железа и питание, паразитизм бактерий по отношению к фитопатогенам. Часто механизм подавления роста фитопатогенов ризосферными микроорганизмами заключается в синтезе антагонистами антибиотиков.

Современный ассортимент биофунгицидов включает обширный перечень препаратов и позволяет весьма эффективно осуществлять защиту сельскохозяйственных культур от наиболее опасных фитопатогенов (Надыкта, 2004; Государственный каталог пестицидов..., 2010; Pesticides in the Modern World..., 2011). В числе фунгицидных биопрепаратов в России традиционно производят алирин, гамаир, псевдобактерин-2, бактофит, фитоспорин - М, триходермин (Широков, 2006, Захаренко, 2005, Государственный каталог пестицидов..., 2010).

Как показывают исследования, современные биопрепараты обеспечивают высокий уровень защиты и по биологической эффективности превосходят, не уступают или же уступают незначительно фунгицидам химического происхождения (Колобков, Сайфулин, 2003; Зимоглядова и др., 2004; Gajda, Kurzawinska, 2004).

Исследования физиологии роста и развития растений показало, что воздействие на семена биопрепаратами с фунгицидным действием вызывает последействие на продуктивность растений. Это объясняется тем, что биохимические процессы, протекающие в фазу прорастания семян, влияют на интенсивность обмена веществ на всех последующих стадиях морфогенеза растений. Предпосевное замачивание семян биопрепарата увеличивает полевую всхожесть. Так в исследованиях Е.В. Поляковой показано, что фунгицидные биопрепараты Алирин и Гамаир повышают

полевую всхожесть, снижают поражаемость томатов открытого грунта альтернариозом в 1,5-2 раза, стимулируют ростовые процессы растений, повышают качество плодов (Полякова, 2009).

В настоящее время проводится работа по поиску биоконтрольных агентов для создания эффективных биопрепаратов на основе бацилл (Чеботарь, 2007, Мелентьев, 2007), грибов-антагонистов (Полянская, Толстухина 2004; Томилова, Штерншис, 2006), псевдомонад (Штарк и др., 2003), ризобий (Paulitz, Beiander, 2001), дрожжевых грибов (Coelho et al, 2003; Храбрых и др., 2007), актиномицетов (Ташпулатов и др., 2007; Широких, 2005; Новикова, 2004; Trejo-Estrada et al, 1998), молочнокислых бактерий (Йылдырым, 2009, Лапицкая и др., 2008, Kuwaki et al, 2004), цианобактерий (Долмачева и др., 2009; Трефилова, 2008).

Однако широкому распространению биометода, как отмечает ряд исследователей (Захарова и др., 2006; Калиниченко и др., 2005; Минина и др., 2009; Хайруллин и др., 2010), препятствует недостаточная эффективность известных биопрепаратов, нестабильность их действия.

P.M. Хайруллин с соавторами объясняет низкую эффективность высокоантагонистичного по отношению к фитопатогенам эндофитного штамма Bacillus subtilis 49 Н его низкой выживаемостью в почве, а также негативным воздействием штамма на азотфиксаторов почвы (Хайруллин и др., 2010).

Еще одной причиной низкой эффективности биопрепаратов является непродолжительное существованием антагониста в ризосфере растения на необходимом для эффективной работы препарата уровне. Например, в исследованиях Л.Ю. Кузьминой показано, что при бактеризации, семян пшеницы сорта Саратовская 55 и Безенчукская 139 (1990-1992 гг.) биопрепаратом на основе В. polymyxa биологическая эффективность к корневым гнилям в фазу выхода в трубку составляет 27-50%, в то время как в фазу полной спелости защитного эффекта препарата не наблюдается

(Кузьмина, 1998). В исследованиях Е.Е. Акимовой также показано, что численность бактерии Pseudomonas sp. В-6798 до окончания цветения растений кукурузы, пшеницы и овса нарастала, а после окончания вегетации бактерии полностью вытеснялись из почвы (Акимова, 2007). '

Численность клеток В. subtilis М 51 в ризосфере растения в течение 35 дней после посадки была оптимальной для проявления штаммом фунгицидных свойств, однако затем наблюдалось быстрое снижение численности штамма в ризосфере растения, что привело к заражению корней фузариозом (Filippi et al., 1987).

Необходимым условием в выборе биопрепарата для защиты растений является характер воздействия штамма-антагониста на фитопатоген. Показано, что некоторые из биопрепаратов при угнетении развития мицелия грибов рода Fusarium, в то же время стимулировали повышение токсинообразования фитопатогенов. Так, биофунгицид глиокладин усиливал токсинообразование дезоксиниваленола (ДОН) и зеараленона (Ф-2), бактофит, псевдобактерин, триходермин и др. - зеараленона. Биопрепарат микостоп сдерживал развитие фузариоза и токсинообразование (Монастырский, Ярошенко, 2002). Поэтому при выборе средств защиты растений необходимо подбирать средства не только подавляющие развитие болезни, но и способные к сдерживанию образования или деградации токсинов.

Захарова с соавторами в своих исследованиях отмечает, что эффективность биопрепаратов зависит от их конкурентоспособности по отношению к аборигенной микрофлоре и возбудителям заболеваний растений, почвенно - климатических и других региональных условий (Захарова, 2006). В связи с этим возникает необходимость в ориентировании научных исследований на разработку препаратов, приуроченных к конкретным почвенно-климатическим условиям.

1.3 Характеристика бацилл и перспективность их использования для разработки биопрепаратов и средств защиты растений

Анализ литературных данных по поиску микроорганизмов с фунгицидными свойствами показал, что в последнее десятилетие представители рода Bacillus являются перспективными агентами биологической защиты растений и являются основой многих коммерческих биофунгицидов (Schisler, Slininger, 1994; Широков, 2002; Захаренко, 2005; Чеботарь, 2007).

t

Микроорганизмы рода Bacillus - свободноживущие, одноклеточные, нефотосинтезирующие, палочковидные клетки, образующие типичные эндоспоры. Они грамположительны, подвижны за счет перитрихальных жгутиков. Микроорганизмы рода Bacillus относятся к гетеротрофным организмам, размножаются поперечным делением клеток. Размер их клеток варьирует в пределах 0,5 - 2,5 х 1,2 - 10 мкм. Вегетативные клетки имеют вид прямых или слабоизогнутых палочек с параллельными сторонами и округлыми концами, которые в редких случаях резко обрезанные. Штаммы данного рода аэробы и факультативные анаэробы, с метаболизмом бродильного или дыхательного типа, обычно каталазоположительные (Мишустин, Емцев, 1987; Определитель бактерий Берги, 1997). Бациллы имеют широкое распространение в биосфере, входят в состав сапротрофных микроорганизмов и занимают различные экологические ниши в почвенных и водных экосистемах, однако по своей совокупной биомассе превалируют в почвенном покрове (Vargas-Ayala et al., 2000; McSpadden Gardener, 2004; Мелентьев, 2007; Современная микробиология..., 2009).

Численность бацилл в природной среде может быть стабильно очень

высокой (до 107 КОЕ/г). Так в аридных почвах нижнего Поволжья по данным

f

В.П. Зволинского и Е.К. Батовской (Зволинский, Батовская, 2005) численность микроорганизмов рода Bacillus может достигать нескольких

миллионов на 1 г сухой почвы. Бациллы населяют ризосферу, филосферу растений, являются основными эндофитами растений (Нетрусов, Котова, 2006).

Насчитывают более 20 видов рода Bacillus, продуцирующих БАВ. Наиболее перспективные для биотехнологии представители этого рода относятся к виду В. subtilis. При расшифровке генома В. subtilis был обнаружен многочисленный набор транспортных белков, что свидетельствует о гибкости взаимодействия этой бактерии с окружающей средой.

Многие штаммы бацилл обладают рядом хозяйственно-ценных свойств: они способны синтезировать биоконтрольные вещества, фитогормоны и витамины, фиксировать азот атмосферы. Важной особенностью бацилл является их высокая конкурентоспособность при колонизации соответствующих частей растений и образовании бактериально-растительных ассоциаций (Кравченко и др., 2002; Мелентьев, 2007; Чеботарь, 2007). Все вышеперечисленные свойства позволяют отнести бацилл, наряду с ризобиями, псевдомонадами и микоризными грибами к PGPR (от англ. plant growth-promoting rhizobacteria), т.е. группе почвенных микроорганизмов способных заселять ризосферу и ризоплану растений, используя питательные вещества, продуцируемые растениями в виде корневых экзометаболитов (Schippers, 1992).

В. Д. Не дорезков в своих исследованиях показал, что 20-40% бацилл, выделенных из внутренних тканей растений проявляют антагонистическую активность к возбудителям болезни растений, таких как Fusarium cuhnorum, Alternaría alternata, Aspergillus nidulans, Bipolaris sorokiniana (Недорезков, 2002). Антагонизм микроорганизмов рода Bacillus по отношению ко многим грибам-фитопатогенам объясняется способностью разных видов бацилл синтезировать различные вещества: антибиотики, сидерофоры, токсины,

целлюлазы, гемицеллюлазы (Чеботарь, 2007; Мелентьев, 2007; Новикова, 2005).

Антибиотики - это специфические продукты жизнедеятельности организмов или их модификации, обладающие высокой физиологической активностью по отношению к определенным группам микроорганизмов, задерживая их рост или полностью подавляя развитие (Егоров, Ландау, 1989). Некоторые исследователи отмечают, что помимо угнетения роста фитопатогенов, антибиотики, защищая растения от инфекции, опосредованно стимулируют их рост (Ryder et al., 1999). Бациллы могут синтезировать антибиотики четырех основных классов: циклические олигопептиды;

линейные или циклические олигопептиды, основные пептиды;

t

аминогликозидные антибиотики (Новикова, 2005; Мелентьев, 2007; Martin et al, 2003).

Исследования проведенные Е.Б. Кудряшовой с соавторами показали, что штаммы видов Bacillus subtilis, В. atrophaeus и фенотипически близкие культуры Bacillus sp. синтезируют полиеновые антибиотики - гексаены с противогрибным действием по отношению к фитопатогенным грибам Fusarium culmorum, F.sporotrichiella, F.oxysporum, Botritis sorokiniana, Alternaria tenuis, Phytophtora infestans. Степень подавления роста зависит от тест-гриба (Кудряшова и др., 2005).

Работами A.B. Широкова с соавторами экспериментально доказано, что 50 % фунгицидного эффекта Bacillus sp. обусловлено наличием фракции низкомолекулярных метаболитов, предположительно полипептидной природы (Широков и др., 2002).

Паразитизм бактерий по отношению к микромицетам заключается в использовании содержимого гиф микромицетов в качестве дополнительного источника питания, возможное за счет синтеза бактериями литических ферментов, лизирующих клеточные стенки грибов. Например, считается, что хитинолитические ферменты Trichoderma hirzianum и T. virens отвечают за

разрушение клеточных стенок грибов и таким образом действуют как биоконтрольные агенты (Di Pietro et al, 1993; Lorito et al, 1994).

Гидролитические ферменты представителей рода Bacillus некоторые исследователи рассматривают как один из механизмов подавления роста грибов - фитопатогенов, хотя физиологическое значение данных ферментов для почвенных сапротрофов в основном ограничивается функцией питания. Утверждения о том, что гидролитические ферменты, в частности хитиназы, участвуют в подавлении роста фитопатогенов, в последние, годы подвергаются резкой критике. Однако есть и сторонники данной теории. Одним из доказательств участия миколитических ферментов в подавлении роста фитопатогенов является тот факт, что, как правило, типично сапротрофные виды почвенных грибов проявляют большую устойчивость к действию ферментов и антибиотиков бацилл по сравнению с паразитами (Pleban et al., 1997; Harish et al., 1998).

В доказательство участия гидролитических ферментов в подавлении роста фитопатогенов исследователи приводят способность бацилл, синтезирующих экзогенные гидролазы к подавлению роста фитопатогенных микроорганизмов (Кудрявцев и др., 2004). Так П. Нильсен и Д. Соренсен (Nielsen, Sorensen, 1997) выделили изоляты бацилл, обладающих антагонистической активностью к широкому кругу фитопатогенов: Aphanomyces cochleoides, Pythium ultimum и Rhizoctonia solani. Отобранные штаммы были идентифицированы как Bacillus polymyxa, Bacillus subtilis и Bacillus spp. Все они продуцировали и выделяли во внешнюю среду гидролитические ферменты, лизирующие стенки фитопатогенных грибов.

Однако более тщательные исследования свидетельствуют о том, что уровень хитиназной активности не может являться достоверным критерием антагонистических свойств культуры, как впрочем, и уровень активности других миколитических ферментов (Актуганов и др., 2003, Мелентьев, 2007). Так А.И. Мелентьевым с соавторами (Мелентьев и др., 2006), показано, что

ферментативное разрушение клеточных стенок грибов обусловлено действием хитиназ и ß-1,3- глюконазы микроорганизмов рода Bacillus, причем хитиназный комплекс принимает лишь косвенное участие в проявлении антагонистической активности микроорганизмов рода Bacillus.

Предположительно для бактерий рода Bacillus характерен комплексный механизм подавления роста грибов, заключающийся во взаимодействии гидролитических ферментов с антибиотическими веществами с преобладающей ролью последних (Актуганов и др, 2003).

Отмечено, что и при низкой продукции антибиотиков, не обеспечивающей полного подавления роста грибов, действие миколитических ферментов бацилл может значительно усиливаться. Этот синергизм объясняется частичным ингибированием мембраносвязанных синтетаз р-глюкана и хитина пептидными антибиотиками, которые ослабляют рост грибов, делая их более доступными для разрушающего действия Р-глюканаз и хитиназ. С другой стороны, ферментативный лизис клеточной стенки может способствовать проникновению фунгицидов в клетку-мишень (Козачко и др, 1995; А.К. Никонорова, 1996). Синергичное действие литических ферментов совместно с антибиотиками и фунгицидами обнаружено у различных микроорганизмов (Collins, Pappagianis, 1974; А. Di Pietro et al, 1993; Nielsen, Sorensen, 1997).

Наряду с антибиотиками, токсинами и гидролитическими ферментами, обнаружено, что в качестве бактериоцинов могут выступать и белки лектиновой природы некоторых почвенных азотфиксирующих бактерий (Абросимова, 2006). Так A.B. Широков (Широков, 2002) в своих исследованиях показал, что лектины JI1 и JI2, имеющиеся в клетках некоторых бацилл, являются по своей природе гликопротеинами, специфичными к глюкоуроновой кислоте и фруктозо- 1,6-фосфату (JI1), a JI2 еще и к D-галактозамину, ингибируют рост некоторых микроорганизмов.

Известно, что железо является одним из элементов питания за

I

который конкурируют микроорганизмы (Neilands, 1957; Шавловский,

Логвиненко, 1988). В условиях дефицита железа ризосферные бактерии и

фитопатогенные грибы вырабатывают сидерофоры - низкомолекулярные

органические молекулы, обладающие высоким сродством к Fe (Соколов,

1990; Воронин, 1998). Однако сидерофоры бактерий обладают большим

сродством к ионам трехвалентного железа, чем сидерофоры грибов, тем

самым между ними возникает жесткая конкуренция (Штерншис и др., 2000;

Акимова, 2007). Выделение бациллами сидерофоров, которые

характеризуются большим сродством к ионам железа, чем сидерофоры

микромицетов также может являться механизмом подавления роста

фитопатогенов (Чеботарь, 2007).

Обязательными свойствами, необходимыми штаммам, составляющим

основу препаратов для защиты растений и стимуляции их роста являются:

успешная колонизация корней и дальнейшая способность бактерий

поддерживать численность в ризосфере растения (Benizeri et al., 2001).

Только при наличии данных условий бактерии способны проявлять комплекс

положительных эффектов на рост и развитие растений. Бациллы, входящие в

состав биопрепаратов, являются активными колонизаторами ризосферы

t

растений. Например, фосфатиммобилизующие штаммы Bacillus subtilis (шт. 11, 13, 15), В. megaterium (шт. 1, 2, 9, 12, 16), В. cereus var.mycoides (шт. 6, 10, 14), В. pumilus (шт. 3, 4) способны к эффективной колонизации ризосферы и ризопланы огурца. Штаммы данного рода обильно заселяют определенные зоны ризопланы огурца. Исследователи также отмечают неравномерность распределения бактерий на поверхности корня, что связывают с различиями в выделении экссудатов определенными зонами корня и особенностями трофических потребностей исследованных микроорганизмов (Кудриш и др., 2009).

Помимо проявления представителями рода Bacillus фунгицидных свойств по отношению к фитопатогенам в литературе указывается на их способность к стимуляции роста растений (патенты РФ № 2259397, 2005; № № 2284353, 2006; 2289621, 2006; № 2295562, 2007). Способность к стимуляции роста растений объясняется выделением микроорганизмами данного рода фитогормонов: цитокининов и ауксинов.

Так штамм Bacillus subtilis 413, входящий в состав коммерческого биоудобрения Экстрасол, синтезирует 4 ауксина: индолил-3 молочную кислоту, индолил-3-карбонувую кислоту, индолил-альдегид и индолил-3 -уксусную кислоту (Чеботарь, 2007). Штамм Bacillus subtilis ИБ-22 обладает способностью к синтезу цитокининов (Мартыненко, 2009; патент РФ № 2178970, 2002). В исследованиях Т.Н. Архиповой показано повышение содержания ИУК и цитокининов у растений пшеницы, семена которых перед посевом обрабатывали препаратами на основе микроорганизмов рода Bacillus - антагонистов фитопатогенных грибов (Архипова, 1999).

Таким образом, перспективность использования микроорганизмов рода Bacillus в качестве компонентов биопрепаратов с фунгицидными свойствами заключается в следующем:

1. Они синтезируют различные вещества: антибиотики, сидерофоры, токсины, целлюлазы, гемицеллюлазы, подавляющие рост фитопатогенов.

2. Являются активными колонизаторами ризосферы растений.

3. Обладают пластичным метаболизмом и смешанной жизненной стратегией, сочетающей элементы r-, L- и К- стратегов (Новикова, 2005).

4. Приживаются в прикорневой зоне растений при относительно низких температурах почвы, что имеет большое значение, поскольку именно в таких условиях происходит формирование корневой системы проростков и в тоже время агрессия почвенных фитопатогенов (Мелентьев, 2000).

5. Режим влажности почвы не столь существенен для развития интродуцированных бацилл - антагонистов в ризосфере растения (Мелентьев, 2000).

6. Экспериментально доказана совместимость бациллярных биопрепаратов с протравителями семян, гербицидами и инсектицидами, что является важным условием при использовании бактериальных биопрепаратов в интегрированной защите растений (Кузьмина, 1998; Захарова, 2006, Фомина, 2009).

7. У биопрепаратов на основе микроорганизмов рода Bacillus по сравнению с биопрепаратами на основе других микроорганизмов выше срок хранения, благодаря наличию эндоспор, позволяющих сохранить культуру в жизнеспособном состоянии длительное время (Алехин, Злотников, 2006).

8. Микроорганизмы рода Bacillus за счет выделяемого ими полимера Ливана могут сосуществовать с микроорганизмами различных систематических групп и образовывать таким образом жизнеспособные ассоциации (Патент США №6753179, 2004).

На основе микроорганизмов рода Bacillus уже созданы отечественные биопрепараты фунгицидного действия: алирин, гамаир, фитоспорин М {Bacillus subtilis ВНИИСХМ 128), бацизулин {Bacillus sp.), бактоген и др. Данные препараты уже апробированы и показали стабильные положительные результаты (Завалин, 2005; Широков, 2006). В США и Европе выпускаются препараты Rhizo-Plus и Rhizo-Plus Konz (на основе Bacillus subtilis), Serenade (на основе Bacillus subtilis QWT713) , Epic, Kodiak {Bacillus subtilis A13). Все перечисленные препараты ингибируют рост патогенных грибов — Phytophthora spp., Pythium spp., Fusarium spp., Sclerotium spp., Rhizoctonia spp. и т. д. (Schisler, Slininger, 1994).

Одним из перспективных направлений сельскохозяйственной биотехнологии является производство высокоэффективных комплексных

биопрепаратов (Нугманова и др., 2002). Комплексные биопрепараты подразделяют на:

1) Биопрепараты с комплексным действием, на основе одного штамма микроорганизма. Так, И.И. Новикова с сотрудниками разрабатывают новый тип полифункциональных препаратов, которые обладают не только прямым антагонистическим действием на возбудителей болезней, но и могут опосредованно защищать растение за счет фиторегуляторной активности штаммов - продуцентов или повышая его болезнеустойчивость (Новикова, 2004).

Выделенный из корней риса, произрастающего в провинции Иенгнам Южная Корея, штамм бактерий Bacillus spp. KR-083 обладает набором хозяйственно-ценных свойств: подавляет развитие фитопатогенных грибов: Phytophtora capsici, Rhizoctonia solani, Fusarium culmorum, Fusarium solani, Pythium spp., фитопатогенных бактерий: Erwinia carotovora A-l, Erwinia carotovora 3391, Pseudomonas syringiae 8300, Pseudomonas syringiae 2314, Clavibacter michiganense 17-1, способен к фиксации азота и стимуляции роста растений (патент РФ №2295562, 2007г.).

2) Биопрепараты нового поколения, основанные на полифункциональных комбинациях различных микроорганизмов. Так комплексный биопрепарат на основе ассоциации Bacillus firmus и Klibsiella terrigena, внесенный в ризосферу ярового ячменя обладает не только фунгицидными, но и фитостимулирующими свойствами (Злотников, Умаров, 1998).

Н.Г. Захаровой с сотрудниками разработан комплексный биопрепарат на основе фосфатминерализующих микроорганизмов Bacillus polymyxa и Pseudomonas stützen, повышающий продуктивность огурца на 12-15% (Захарова, 2006). Известны также полифункциональные биопрепараты на основе микроорганизмов - азотфиксаторов (Захарова, 2006).

3) Полифункциональные комбинации микроорганизмов, применяемые в комплексе с органическими или минеральными удобрениями, фунгицидами регуляторами роста (Новикова, 2005; Захарова, 2006).

Так И.И. Новиковой с сотрудниками (2005) разработан новый комплексный биопрепарат на основе AVA - высокотемпературного расплава различных минералов и иммобилизованных на нем микроорганизмов Т. viride и Bacillus subtilis. Полученный биопрепарат не только защищает растение от болезни, но и обеспечивает его доступными минеральными элементами.

Был получен положительный результат при применении ростстимулирующих бактерий Pseudomonas aeruginosa и Bacillus subtilis в комплексе с органическим удобрениями для защиты растений от фитопатогенов (Siddigui, 2001).

Таким образом, новый подход предполагает создание систем комплексной защиты растений от болезней. При этом для восстановления и активации природных регуляторных механизмов должны использоваться различные группы микроорганизмов, чтобы обеспечить биологическое разнообразие в агроценозах и повысить их устойчивость (Новикова, 2004). Особенно актуально создание комплексных биопрепаратов с одной стороны улучшающих минеральное питание растений, с другой стороны -стимулирующих их рост, и защищающих от болезней.

российская государственная! библиотека

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Коряжкина, Мария Федоровна

ВЫВОДЫ

1. Из агроэкосистемы аридной зоны выделено 16 штаммов аэробных спорообразующих бактерий, которые по морфологическим, культуральным и физиолого-биохимическим свойствам отнесены к роду Bacillus.

2. В результате скрининга по фунгицидной активности отобрано 14 штаммов, действие которых по отношению к исследуемым микромицетам является избирательным и специфичным. Наибольшей антифунгальной активностью обладают 4 штамма, из них 1 - фитотоксичен, другие способны к фитостимуляции.

3. Штамм, обладающий наиболее выраженной фунгицидной активностью к представителям рода Fusarium и Alternaría, фитостимулирующей активностью и способностью к колонизации растений идентифицирован как Bacillus atrophaeus.

Штамм В. atrophaeus В-9918 способен поддерживать численность в ризосфере томата в приделах 2*107-Ю10 КОЕ/ г а.с.п.; в ризоплане 4,8*1044,6*105 КОЕ/ см2 корня, что достаточно для проявления положительных эффектов на рост и развитие растений.

4. Наиболее эффективной концентрацией клеток в суспензии при корневой инокуляции томатов в вегетационных экспериментах является титр 10 КОЕ/мл, стимулирующий прирост биомассы на 61% и 33% при однократной и двукратной инокуляции соответственно.

5. В полевых опытах на арбузах показано, что бактеризация семян суспензией штамма В. atrophaeus В-9918 с титром 107 КОЕ/мл стимулирует прирост биомассы растения на 79% и подавляет развитие фузариоза на 100%.

6. В полевых опытах на томатах во всех вариантах обработки (бактеризация семян, бактеризация + опрыскивание, бактеризация + пролив под корень) суспензией штамма В. atrophaeus В-9918 с титром 107 КОЕ/мл стимулируются ростовые процессы растения: увеличивается высота растений

12-33%), площадь листовой поверхности (38-72%). Наиболее эффективным вариантом обработки снижающим альтернариоз на 34,6% является бактеризация + опрыскивание.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Коряжкина, Мария Федоровна, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Агроэкология: учеб. для вузов / под. ред. Черникова В.А., Чекереса А.И. - М.: Колос, 2000. - 536 с.

2. Абросимова О.В., Карпунина JI.B., Тихомирова Е.И. Изучение функциональной активности макрофагов на фоне действия лектина Paenibacillus polymyxa II Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. - 2006. - № 1 . - С. 3 - 6.

3. Акимова Е.Е. Исследование влияния бактерий Pseudomonas sp. В-6798 на фитопатогенные грибы и высшие растения: Автореф. дис... канд. биол. наук. - Томск, 2007. - 23 с.

4. Актуганов Г.Э., Мелентьев А.И., Кузьмина Л.Ю., Галимзянова Н.Ф., Широков A.B. Хитинолитическая активность бактерий Bacillus Cohn. -антагонистов фитопатогенных грибов // Микробиология. - 2003. - Т.72. - № 3.-С. 356-360.

5. Алехин В. Т., Злотников А. К. Биопрепарат альбит: результаты и особенности применения // Земледелие. - 2006. - № 3. - С. 38 - 40.

6. Архипова Т.Н. Исследование цитокининов, продуцируемых ризосферными микроорганизмами: Автореф. дис...канд. биол. наук - Уфа, 1999.-24 с.

7. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. - 2-е изд., перераб. и доп. -М.: Изд-во МГУ, 1989. - 336 с.

8. Байрамбеков Ш.Б. Защита овощных, бахчевых культур и картофеля от болезней в Астраханской области / сост. Ш.Б. Байрамбеков. - Астрахань: Новая линия, 2007. - 136 с.

9. Барабаш И.П., Веревкина Т.Л. Применение регуляторов роста растений без генетического риска - основа экологически безопасных биотехнологий // Материалы международной научной конференции «Повестка дня на XXI век: программа действий - экологическая безопасность и устойчивое развитие». -Ставрополь, 2002. - С. 207-209.

10. Баранников В. Д., Кириллов Н.К. Экологическая безопасность сельскохозяйственной продукции. - М.: Колос С, 2006. - 352 с.

11. Белимов A.A. Взаимодействие ассоциативных бактерий и растений в зависимости от биотических и абиотических факторов: Автореф. дис...доктора биол. наук. - Санкт-Петербург, 2008. -46с.

12. Белкина Р.И., Савченко A.A. Продуктивность раннеспелых сортов яровой пшеницы под влиянием обработок семян и растений защитно-стимулирующими составами // Аграрный вестник Урала - 2009. - №10. - С. 10-12.

13. Берестецкий O.A. Изучение фитотоксических свойств микроскопических грибов // Методы экспериментальной микологии. — Киев: Наукова думка, 1982. - С. 321-333.

14. Воронин A.M. Ризосферные бактерии рода Pseudomonas, способствующие росту и развитию растений // Сорос, образов, журнал. -1998.-№ 10.-С. 25-31.

15. Ганнибал Ф.Б. Видовой состав, таксономия и номенклатура возбудителей альтернариоза листьев картофеля // Лаборатория микологии и фитопатологии им. А.А.Ячевского ВИЗР. История и современность. Под ред. А.П.Дмитриева. СПб: ВИЗР, 2007. - С. 142-148.

16. Ганнибал Ф.Б. Токсигенность и патогенность грибов рода Aliernaria для злаков // Лаборатория микологии и фитопатологии им. A.A. Ячевского ВИЗР. История и современность / Под ред. А.П. Дмитриева. - С.-Пб., 2007. -С. 82-93.

17. Гара Ф., Прифер У., Доулинг Д. Прокариоты в сельском хозяйстве // Современная микробиология. Прокариоты. - 2005. - С. 359 - 380.

18. Генетика симбиотической азотфиксации с основами селекции / Под ред. И.А. Тихоновича, H.A. Проворова. - СПб.: Наука, 1998. - 208 с.

19. Головин П.Н., Арсеньева М.В., Тропова А.Т., Шестиперова З.И. Практикум по общей фитопатологии. - М.: Лань, 2002. - 288 с.

20. ГОСТ 12038 - 84. Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести. - М., 1984. - 29 с.

21. ГОСТ 17.4.3.01-83. Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб. - М.: ИГЖ Издательство Стандартов, 2004.

22. ГОСТ 26483-85. Почвы. Приготовление солевой вытяжки и определение ее pH по методу ЦИНАО. - М.: Издательство стандартов, 1985.

23. ГОСТ 28168-89. Почвы. Отбор проб. - М.: Стандартинформ, 2006.

24. ГОСТ 9.048-89. Единая система защиты от коррозии и старения. Изделия технические. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов. М.: Издательство стандартов, 1989. - 23 с.

25. ГОСТ Р 51592-2000. Вода. Общие требования к отбору проб. - М: Стандартинформ, 2005.

26. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных на территории РФ. - М.: Минсельхоз России, 2010.-801 с.

27. Громов Б. В., Павленко Г. В. Экология бактерий: учеб. Пособие. -Ленинград: Издательство Ленинградского университета, 1989. - 248 с.

28. Дзержинская И.С. Питательные среды для выделения и культивирования микроорганизмов. Уч. пособие - Астрахань: Издательство АГТУ, 2008.-348 с.

29. Дзержинская И.С., Коряжкина М.Ф. Исследование фунгицидной активности представителей рода Bacillus II Естественные науки. - 2009. - № 2.-С. 16-20.

30. Долмачева Л.И., Широких И.Г., Фокина А.И. Антифузариозное действие цианобактерий и актиномицетов в почве и ризосфере // Микология и фитопатология. - 2009. - Т. 43. - С. 157-165.

31. Дорожкин H.A., Иванюк В.Г. Альтернариевая кислота - биологически активный продукт метаболизма возбудителей ранней сухой пятнистости картофеля // Микология и фитопатология. - 1975. - Т.9, вып. 3. - С.220-225.

32. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований). - 5-е изд. доп. и перераб. - М.: Агропромиздат, 1985. - 351 с.

33. Дудкин В.М., Лобков В.Т. Биологизация земледелия: основные направления // Земледелие. - 1990. - №11. - С.43-46.

34. Дунаевский Я.Е., Павлюкова Е.В., Белякова Г.А., Белозерский М. А. Антианионные ингибиторы трипсина из покоящихся семян гречихи: выделение, специфичность действия и влияние на рост микромицетов // Биохимия. - 1994. - Т. 59. - Выпуск 7. - С. 990-996.

35. Дунаевский Я.Е., Цыбина Т.А., Белякова Г.А., Домаш В.И., Шарпио Т.П., Забрейко С.А., Белозерский М.А. Ингибиторы протеиназ как антистрессовые белки высших растений // Прикладная биохимия и микробиология. - 2005. - Т. 41. - № 4. - С. 392-396.

36. Егоров Н. С., Ландау Н. С. Биосинтез биологически активных соединений смешанными культурами микроорганизмов // Прикладная биохимия и микробиология. - 1989. - № 6. - С. 78 - 81.

37. Жернова С.Ю., Жернов Г.О. Экологически безопасные методы борьбы с корневыми гнилями сои в условиях Курганской области // Аграрный вестники Урала. - 2010. - №7 - С.64 - 66.

38. Завалин А.А. Биопрепараты, удобрения и урожай. - М.: Издательство ВНИИА, 2005. - 302 с.

39. Зайцева В.А., Сафин Р.И. Экологические особенности совместного развития Phytophtora infestans и Alternaría solani на листьях картофеля // Вестник Казанского государственного аграрного университета. - 2007. - №1. -С. 70-73.

40. Заруцкий М.М. Биологические особенности возбудителей макроспориоза и септориоза томатов и меры борьбы с ними в условиях БССР: Автореф. дис...канд. биол. наук. - Минск: БелНИИЗР, 1972. - 20 с.

41. Захаренко В. А. Современная стратегия защиты растейий // Овощеводство и тепличное хозяйство. - 2005. - № 4. - С. 28 - 37.

42. Захаренко В.А. Защита растений в третьем тысячилетии / Материалы XIV международного конгресса по защите растений // Агрохимия. - 2000. -№4.-С. 75-93.

43. Захарова Н.Г. Создание биопрепаратов, перспективных для сельского хозяйства // Ученые записки Казанского государственного университета. Серия Естественные науки. - 2006. - Т. 148. - книга 2. - С. 102 — 112.

44. Защита растений от болезней в теплицах / под ред. А. К. Ахатова. - М.: Товарищество научных изданий КМК, 2002. - 464 с.

45. Зволинский В.П., Батовская Е.К. Влияние углеводородов на почвенную биоту // Технологии нефти и газа. - 2005. - № 4. - С.50 - 55.

46. Звягинцев Д. Г., Бабьева И. П., Зенова Г. М. Биология почв: учебник. -3 - е изд., испр. и доп. - М. : МГУ, 2005. - 445 с.

47. Зимоглядова Т.В., Дурихин В.М., Миронов Я. В. Эффективность биологических препаратов в борьбе с болезнями люцерны [Борьба с грибными болезнями] // Проблемы экологии и защиты растений в сельском хозяйстве / Ставроп. гос. аграр. ун-т. - Ставрополь, 2004. -С. 155-159.

48. Зимоглядова Т.В., Карташева И.А. Практикум по микробиологии. - М.: Колос, 2007. - 145 с.

49. Злотников А. К., Умаров М. М. Влияние инокуляции ризосферной бактериальной ассоциации Bacillus firmus и Klibsiella terrigena на пораженность ярового ячменя фитопатогенными грибами // Современные проблемы микологии, альгологии и фитопатологии. Сборник трудов международной конференции, посвященной 80-летию кафедры микологии и альгологии МГУ и 90-летию со дня рождения М, В. Горленко. - М.: МГУ -ИД «Муравей», 1998. - С. 41 - 42.

50. Иевлева Е.В., Ревина Т. А., Кудрявцева Н. Н., Софьин А. В., Валуева Т. А. Внеклеточные протеиназы фитапатогенного гриба Fusarium culmorum II

Прикладная биохимия и микробиология. - 2006. - Т. 42. - № 3. - С. 338 -344.

51. Избранные задачи большого практикума по микробиологии / МГУ им. М.В. Ломоносова, Биол. фак. - М.: Изд-во МГУ, 1991. - 126 с.

52. Йылдырым Е.А. Гетероферментативные молочнокислые бактерии и

перспективы их использования в растениеводстве и кормопроизводстве:

f

Автореф. дис.. .канд. биол. наук. - Санкт-Петербург, 2009. - 23 с.

53. Казанков Ю.К. Биологизация почвозащитной системы земледелия / Повышение эффективности сельскохозяйственного производства в условиях биологизации земледелия. Труды Чувашского НИИСХ. Цивильск, 2000. -Т.1.-С. 18-30.

54. Калиниченко М.С., Масловский А.Н., Андреев М.В., Макаров О.В., Титова Э.В. Способы применения стимулятора роста растений оксидата и его влияние на продуктивность яровой пшеницы в Томской области // Аграрная наука - с.-х. производству Сибири, Монголии, Казахстана и Кыргызстана / РАСХН. Сиб. Отд-ние. - Новосибирск, 2005. - Т. 1. - С. 186 -190.

55. Килина Ю.Г., Жмудь Е.В., Дорогина О.В. Всхожесть семян некоторых видов семейства Fabaceae L., их зараженность грибной и бактериальной микрофлорой и трипсинингибирующая активность // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2008. - №5 - С. 9-12.

56. Козачко И.А., Вьюницкая В.А., Бережнизкая Т.Г. Эндофитные бактерии рода Bacillus - перспективные культуры для создания биологических средств защиты растений от болезней.// Мжробюл. журнал -1995.-Т.57.-№5.-С. 69-78.

t

57. Колобков Е.В., Сайфулин C.B. Защитно - стимулирующие биопротравители на ячмене [Эффективность предпосевной обработки семян биопрепаратами триходермин и биопрос в борьбе с корневыми гнилями и другими болезнями] // Сб. науч. тр. Урал. НИИСХ. - 2003. - Т. 60. - С. 303 -310.

58. Котова B.B. Корневые гнили зернобобовых культур. - JL: Агропромиздат, 1986. - 94 с.

59. Кравченко JI.B., Макарова Н.М., Азарова Т.С. и др. Выделение и фенотипическая характеристика ростостимулирующих ризобактерий (PGPR), сочетающих высокую активность колонизации корней и ингибирования фитопатогепных грибов // Микробиология. - 2002. - Т. 71. - С. 521-525.

60. Краткий определитель бактерий Берги / Р. Мюррей и др.; под ред. Дж. Хоулта; перевод с английского С. Ш.Тер-Казарьяна; под ред. Г. А. Заварзина. - М. : Мир, 1980.-495 с.

61. Кудриш И.К., Булавенко JI.B., Дыренко Д.И., Климчук Д. А. Колонизация ризосферы огурцов фосфатмобилизирующими бактериями рода Bacillus II Мкробиолопчний журнал. - 2009. - Т. 71. - №6. - С. 14-20. (

62. Кудрявцев В. А., Осадчая А. И., Сафронова С. А. Аэробы рода Bacillus как источник продуцентов литических // Биотехнология. - 2004. - № 4. - С. 24 -33.

63. Кудряшова Е. Б., Виноградова Н. Г., Арискина Е. В. Bacillus subtilis и фенотипически близкие штаммы - продуценты гексаеновых антибиотиков // Прикладная биохимия и микробиология. - 2005. - № 5. - С. 553 - 557.

64. Кузнецов С.И., Дубинина Г.А. Микробиологическое изучение внутренних водоемов. - М., 1987.

65. Кузьмина Л.Ю. Исследование взаимодействий бактерий-антагонистов с растениями и фитопатогенными грибами: Автореф. дис...канд. биол. наук. -Казань, 1998.-26 с.

66. Кузьмина Л. Ю., Мелентьев А. И. Колонизация ризосферы яровой пшеницы бактериями рода Bacillus COHN при бактеризации семян // Микробиология. - 2003. - Т. 72. - № 2. - С. 268 - 274.

67. Кулаков Л.Ф. Вредители и болезни картофеля и томатов / Распространение вредителей и болезней сельскохозяйственных культур в Тувинской АССР в 1962 г. и прогноз их появления в 1963 г. / Под ред.

Кулакова Л.Ф. - Кызыл: Мин. производства и заготовок с.х. продуктов Тувинской АССР, 1963. - С. 36.

68. Куликова А.Х., Дроздов A.B., Захаров Н.Г., Макарова Н.В. Влияние систем основной обработки почвы на засоренность посевов и урожайность звена севооборота с сидеральным паром // Нива Поволжья. - 2010. - №2. -С.23-26.

69. Купренович В.Ф. Физиология больного растения в связи с общими вопросами паразитизма. - М.: Изд-во АН СССР. - 1947. - 300 с.

70. Лапицкая Е.А., Петров В.Б., Никонов E.H., Кряжевских Л.А., Лапте Г.Ю.Препарат «Биотроф 600» стимулятор роста томатов // Аграрный вестник Урала. - 2008. - №5. - С. 42-44.

71. Левитин М.М., Ганнибал Ф.Б., Орина A.C., Гасич Е.Л. Хлопунова Л.Б., Баранова O.A. Грибы рода Alternaria на злаковых, пасленовых и крестоцветных культурах в России // Иммунология. Аллергология. Инфектология. - 2010. - №1. - С. 112-113.

72. Лобанкова О.Ю., Карташева И.А., Савельев С.А., Малыхин Е.А. Проблемы экологии и защиты растений в интегрированоой защите озимого ячменя от болезней [Борьба с грибными болезнями] // Проблемы экологии и защиты растений в сельском хозяйстве. Ставроп. гос. аграр. ун-т. -Ставрополь, 2004. - С. 148 - 153.

73. Мальфамнова Н.Е. Характеристика разнообразия эндофитных бактерий семян овощных культур с использованием микробиологических и молекулярно-генетических методов: магистерская дис. - СПб., 2008. - 94 с.

74. Мартыненко Е.В. Влияние цитокининпродуцирующих бактерий рода Bacillus cohn. на рост растений салата и пшеницы: Дис. ...канд. биол. наук. -Уфа, 2009.- 144 с.

75. Мелентьев А.И. Аэробные спорообразующие бактерии Bacillus Cohn в агроэкосистемах. - М.: Наука, 2007. - 147 с.

76. Мелентьев А. И., Кузьмина J1. Ю., Галимзянова Н. Ф. Влияние температуры и влажности почвы на колонизацию ризосферы пшеницы бактериями Bacillus COHN, антагонистами фитопатогенов // Микробиология.

- 2000. - Т. 69. - № 3. - С. 426 - 432.

77. Мелентьев А. И. Применение бацилл - антагонистов для биоконтроля грибов, разрушающих сырую древесину // Прикладная биохимия и микробиология. - 2006. - Т. 42. - № 1. - С.70 - 75.

78. Мелиорация и использование орошаемых земель в Астраханской области / Под ред. Н. В. Челобанова. - Астрахань, 2002. - 560 с.

79. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под ред. Д.Г. Звягинцева. - М.: Изд-во МГУ, 1991.-304 с.

80. Методы экспериментальной микологии / под ред. Билай В.И. - М.: Наукова Думка, 1982 - 550 с.

81. Минаева О.М., Акимова Е.Е. Использование малых моделей искусственных экосистем для изучения взаимодействия ризобакт'ерий с растением-хозяином и микроскопическимим почвенными грибами // Электронный журнал «Исследовано в России», 2006. - С. 617-623. р Режим доступа: http://zhurnal.ape.relarn.ru/articles/2006/062.pdf.

82. Минеев Г.В. Практикум по агрохимии / Под ред. В.Г. Минеева. - М.: Изд-во МГУ, 1989.-304 с.

83. Минина Т.С., Захарова Р.Ш., Уразбахтина H.A., Хайруллин P.M. Новые эндофитные штаммы Bacillus subtilis как основа биофунгицидов // Вестник Казанского государственного аграрного университета. - 2009. - Т. 12. - №2. -С. 118-123.

84. Мишустин E.H. Микроорганизмы как компонент биогеоценоза (методы изучения). М.: Наука, 1984.- 160 с.

85. Мишустин Е. Н., Емцев В. Т. Микробиология: учеб. пособие для вузов.

- Изд. 3-е перераб. и доп. - М. : Агропромиздат, 1987. - 367 с.

86. Моисейченко В.Ф., Трифонова М.Ф., Заверюха А.Х., Ещенко В.Е. Основы научных исследований в агрономии. - М.: Колос, 1996. - 336 с.

87. Монастырский O.A. Влияние фунгицидов на образование токсинов штаммами видов Fusarium при заражении зерна пшеницы // Докл. РАСХН. -1995.-№2.-С. 21-22.

88. Монастырский O.A. Мониторинг токсинообразующих грибов зерновых злаков // Агрохимия. - 2001. - №8. - С. 79-87.

89. Монастырский O.A. Современное состояние и проблемы исследования токсигенных грибов, поражающих злаковые культуры // Актуальные вопросы биологизации защиты растений. - Пущино, 2000. - С. 79-89.

90. Монастырский O.A., Ярошенко В.Ф. Влияние биопрепаратов на развитие токсинообразования полевых штаммов Fusarium II Докл. РАСХН, 2002.-№3.- С. 22-23.

91. Монастырский O.A. Разработка биопрепаратов для борьбы с токсигенными грибами // Защита и карантин растений. - 2004. - № 9.- С. 26 -28.

92. Мотузова Г. В., Безуглова О. С. Экологический мониторинг почв - М : Академический проект, 2007. - 237 с.

93. Муромцев Г. С. Основы сельскохозяйственной биотехнологии. - М. : Агропромиздат, 1990. - 384 с.

94. Мюллер Э., Леффлер В. Микология. - М.: Мир, 1995. - 343 с.

95. Надыкта В. Д. Перспективы биологической защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов // Защита и карантин растений. - 2004. -№ 6. - С. 26 - 30.

96. Наталенко Г.С., Сорокина В.К. Вредители и болезни помидоров / Распространение вредителей и болезней сельскохозяйственных культур в Ростовской области в 1966 г. и прогноз их появления в 1967 г. / Под ред. Кулакова Л.Ф. - Ростов-на-Дону: Ростовская областная СТАЗР, Донской зональный НИИСХ, 1966. - С. 44-47.

у I

97. Недорезков В.Д. Биологическая защита пшеницы от болезней в условиях южного Урала. - М.: Изд-во МСХА, 2002. - 172 с.

98. Нетрусов А.И., Котова И. Б. Микробиология. - М.: Издательский центр «Академия», 2006. - 352 с.

99. Никонорова А.К. Особенности взаимодействия Bacillus subtilis с Helminthosporium sativum Рат., King et Bakke II Микология и фитопатология. - 1996. - Т.ЗО. - Выпуск 5-6. - С.69-73.

100. Новикова И.И. Биоценотическое значение микробов-антагонистов в фитосанитарной оптимизации агроэкосистем // Биологические средства защиты растений, технологии их изготовления и применения - СПб.: ВИЗР; 2005. - С. 303 - 330.

101. Новикова И.И. Комплексные биопрепараты полифункционального действия: эффективность и перспективы использования в защите растений от болезней // Культурные растения для устойчивого сельского хозяйства в XXI веке / Рос. акад. с.-х. наук. - М., 2005. - Т. 2. - С. 248 - 261.

102. Новикова И.И. Полифункциональные биопрепараты для защиты растений от болезней // Защита и карантин растений. - 2004. - № 2. -(С. 22 -24.

103. Нугманова Т.А, Осипова М. Г., Кабаргина М. В. Биотехнологические аспекты производства экологически чистых беспестицидных продуктов питания // Сборник научных трудов: «Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты» (выпуск 6) / научные статьи. Инновационные технологии и природные ресурсы, создание функциональных продуктов. - М. : Изд-во РАЕН, 2002. - С. 9 - 20.

104. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т. 1.1 Под ред. Дж. Хоулта и др. М.: Мир, 1997. - 432 с.

105. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т. 2. / Под ред. Дж. Хоулта и др. М.: Мир, 1997. - 368 с.

106. Осницкая Е.А. Болезни овощных культур / Распространение вредителей и болезней сльскохозяйственных культур в РСФСР в 1970 г. и прогноз их появления в 1971 г. / Под ред. Полякова И .Я., Минкевича И.И. -М.: МСХ РСФСР, ВИЗР, 1971. - С. 187-198.

107. Павлов Н.К. Вредители и болезни овощных культур / Распространение главнейших вредителей и болезней сельскохозяйственных культур в Смоленской области в 1972 г. и прогноз их появления в 1973 г. и меры борьбы с ними. МСХ РСФСР, Смоленская обл. СТАЗР, 1973. - С. 45.

108. Патент № 6753179 США, МПК C12S 13/00. Method for purtification treatment of environmental pollutants [Text] / Tsuchiya . Akihito. - № 09/731863 ; заявл. 08.12.00 ; опубл. 22.06.04 ; приор. 08.12.99, (Япония); НПК 435/262.5.

109. Патент № 2099947 Россия, A01N63/00, C12N1/20, C12N1/20, C12R1:125. Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней / Смирнов В.В., Сорокулова И.Б., Бережницкая Т. Г., Ваньянц Г.М., Менликиев М.Я., Недорезков В.Д., Минеев М.И., Вахитов В.А., Байгузина Ф. А. -№ 96121980/13; Заявл. 15.11.1996; Опубл. 27.12.1997.

110. Патент № 2178970 Россия, A01N63/00, C12N1/20, C12N1/20, C12R1:125. Штамм Bacillus subtilis ИБ-22 - продуцент цитокининов / Мелентьев А.И., Кудоярова Г.Р., Веселов С.Ю., Архипова Т.Н., Гильванова Е.А., Усанов Н.Г., Кузьмина Л.Ю., Симонян М.В. - № 2000105807/13; Заявл. 13.03.2000; Опубл. 10.02.2002.

111. Патент № 2259397 Россия, C12N1/20, А01С1/06, C12N1/20, C12R1:125. Средство для защиты зерновых сельскохозяйственных культур, подсолнечника, винограда от фитопатогенных микроорганизмов, а овощных культур от фитопатогенных бактерий / Хотянович A.B., Темнова О.В., Орлова H.A., Быкова Н.В., Чеботарь В.К. - № 2003110469/13; Заявл. 02.04.2003; Опубл. 27.08.2005.

112. Патент № 2289621 Россия, C12N1/20, A01N63/00, C12R1/0. Штамм бактерий Bacillus mucilaginosus, обладающий широким спектром

фунгицидного действия, и биопрепарат на его основе / Кандыба Е. В., Назаров А. Г. - № 2005129296/13; Заявл. 21.09.2005; Опубл. 20.12.200б'.

113. Патент № 2295562 Россия, C12N1/20, A01N63/00. Штамм бактерий Bacillus spp. KR-083 в качестве средства для защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов и стимуляции их роста / Чеботарь В.К., Уй Гум Канг. - № 2005127026/13; Заявл. 23.08.2005; Опубл. 20.03.2007.

114. Патент № 2284353 Россия, C12N1/20, A01N63/00, А01С1/00, C12R1/07. Штамм микроорганизмов Bacillus mycoides var В. А. для получения биопрепарата, используемого для стимуляции роста и защиты растений от болезней / Иванов A.A., Темнова О. В., Быкова Н.В., Орлова Н. А. - № 2005113784/13; Заявл. 05.05.2005; Опубл. 27.09.2006.

115. Пересыпкин В.Ф. Сельскохозяйственная фитопатология. М.: Агропромиздат, 1989.-408 с.

116. Петров Н.Ю., Чернышков В.В. Влияние метеорологических условий, минеральных удобрений и биостимуляторов на рост и развитие яровой пшеницы сорта Камышинская ЗВ в зоне светло-каштановых почв Нижнего Поволжья // Аграрный Вестник Урала. - 2007. - №6 - С.46-48.

117. Петров Н.Ю., Шершнев A.A. Влияние регуляторов роста на продуктивность зерновой кукурузы // Аграрный вестник Урала. - 2007.- №5-С. 40-41.

118. Пидопличко Н.М. Грибы: паразиты культурных растений. Определитель. Том 1. Грибы совершенные. - Киев.: Наукова Думка, 1977. -296 с.

119. Плотникова Л.Я. Иммунитет растений и селекция на устойчивость к болезням и вредителям / Под ред. Ю.Т. Дьякова. - М.: КолосС, 2007. - 359 с.

120. Поликсенова В.Д. Ретроспективный обзор болезней томатов в Белоруссии и перспектива развития фитопатологической ситуации. / Защита

растений на рубеже XXI века. Материалы научно-практической

t

конференции, посвященной 30-летию БелНИИЗР (Минск-Прилуки, 19-21

февраля, 2001 г. / Под ред. Сороки С.В. - Минск: Белбизнеспресс, 2001. - С. 225-228.

121. Полякова Е.В. Элементы биологизированной технологии возделывания томата в условиях дельты Волги: Автореф. дис...канд. биол. наук. -Астрахань, 2009. - 21 с.

122. Полянская JI.M., Толстухина Т.Е. Закономерности прорастания

конидий фитопатогенных грибов // Микробиология. - 2004. - Т. 73. - № 4. - С.

t

455-460.

123. Попкова К.В. Практикум по сельскохозяйственной фитопатологии. -М.: Агропромиздат, 1988.-336 с.

124. Практикум по агрохимии: Учеб. пособие. - 2-е изд., перераб. и доп./ Под ред. академика РАСХН В.Г. Минеева. - М.: Изд-во МГУ, 2001.-689 с.

125. Практикум по микробиологии: учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А. И. Нетрусов, М. А. Егорова, JI. М. Захарчук и др. ; под ред. А. И. Нетрусова. - М.: Академия, 2005. - 608 с.

126. Родина А. Г. Методы водной микробиологии. - М. : Наука, 1965. - 364 с.

127. Рудаков O.JI., Рудаков В.О. Адаптация патогенной микробиоты в закрытом грунте // Материалы конференции «Состояние и проблемы научного обеспечения овощеводства защищенного грунта», 23-26 ноября 2003.-М., 2003. - С. 81-82.

128. Руководство к практическим занятиям по микробиологии: практическое пособие / Под ред. Н.С. Егорова. - 2-е изд. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1983. -251с.

129. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Под ред. Н.С. Егорова. - М.: Изд-во МГУ, 1995. - 222с.

130. Сайчук А.И. Оценка вредоносности Alternaría solani на исходном селекционном материале томата / Селекция, агротехника и орошение

овощных культур / Под ред. Ершовой B.J1. Кишинев: Штиинца, МолдНИИО, 1989.-С. 114-117.

131. Саттон Д., Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. - М.: Мир, 2001 - 486 с.

132. Семенкова И.Г., Соколова Э.С.. Фитопатология. - М. : Акакдемия, 2003.-480 с.

133. Систематика растений: водоросли и грибы: методические указания к лабораторным работам по ботанике для студентов специальностей «Биоэкология», «Экология» и «Микробиология» / Е. Г. Кузьмина. -Астрахань, Издательство АГТУ, 2003. - 32 с.

134. Скворцова И.Н. Идентификация почвенных бактерий рода Bacillus. Часть 1.-М.: МГУ, 1983. - 43с.

135. Слепян Э. И. Экологическая фитопатология: объекты и значение / Э. И. Слепян // Тез. Докл. Всеросс. съезда по защите растений - СПб : ВИЗР, 1995. -С. 251 -252.

136. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев: Наукова думка, 1982. - 280 с.

137. Современная микробиология. Прокариоты. В 2-х Т. 1 / Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. -М.:Мир, 2009. -656 с.

138. Современная микробиология. Прокариоты. В 2-х Т. 2 / Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. - М.: Мир, 2009. - 496 с.

139. Соколов М.С. Состояние, проблемы и перспективы применения экологически безопасных пестицидов в растениеводстве // Агрохимия. 1990. -№ 10.-С. 124-143.

140. Tapp С. Основы патологии растений. - М.: Мир, 1975. - 592 с.

141. Ташпулатов Ж.Ж., Бекмухамедова Н.К., Ходжибаева С.М. Актиномицеты ризосферы хлопчатника - антагонисты грибных и бактериальных фитопатогенов // Четвертый Московский международный

конгресс: «Биотехнология - состояние и перспективы развития». Материалы конгресса. - 2007. - Ч. 2. - С. 326.

142. Теплинская Н.Г. Тенденции изменений качественного состава сапрофитного бактериопланктона и бентоса северо-западной части Черного моря под влиянием эвтрофирования // Итоги науки и техники. Сер. Микробиология. М., 1995. - Т. 31. - С. 12-19.

143. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии: Учебники и учеб. пособия для высш. учеб. заведений. - М.: Дрофа, 2004. - 256 с.

144. Тихонович И.А. Теоретические основы и практические возможности экологизации селскохозяйственного производства на основе микробно-растительного взаимодействия // Проблемы интенсификации и экологизации земледелия России: материалы. - М., 2006. - С.56-78.

145. Томилова О.Г., Штерншис М. В. Влияние препарата на основе грибов рода Chaetomium на рост фитопатогенных // Прикладная биохимия и микробиология. - 2006. - Т. 42. - № 1. - С. 76 - 80.

146. Торопова Е Ю., Стецов Г.Я., Чулкина В.А. Эпифитологические основы системы защиты растений. Новосибирск, 2002.-578 с.

147. Трефилова Л.В. Использование цианобактерий в агробиотехнологии: Автореф. дис.. .канд. биол. наук. - Саратов, 2008. - 25 с.

148. Умаров М.М. Ассоциативная азотфиксация. М.: Изд-во МГУ, 1986. -132 с.

149. Умаров, М.М. Значение несимбиотической азотфиксации в балансе азота в почве // Изв. АН СССР. Сер. биол. - 1982. - № 1. - С. 92 - 105.

150. Фомина Н.Ю. Применение регуляторов роста, биопрепаратов, микроудобрений и фунгицидов на горохе посевном в южной лесостепи Зауралья // Аграрный вестник Урала. - 2009.- №3. - С. 61-63.

151. Хайруллин P.M., Лукьянцев М.А., Уразбихина H.A. Некоторые причины низкой эффективности использования высокоантагонистичных

эндофитных штаммов Bacillus subtilis в качестве основы биофунгицидов // Вестник Казанского государственного аграрного университета. - 2010. -Т. 17. - №3. - С. 146-149.

152. Храбрых О.Д., Барайщук Г.В., Andreas Kollar, Wilhelm Jelkmann. Дрожжи в борьбе с возбудителем серая гниль Botrytis cinerea II Аграрный вестник Урала. - 2007.- №4. - С. 30-33.

153. Чан Минь Куан, Егоров М.А. Исследование ростостимулирующей активности штамма рода Bacillus выделенного из клубеньков Vigna cylindrical II Естественные науки. - 2011. - №2. - С. 107-109.

154. Чеботарь В.К. Эффективность применения биопрепарата Экстрасол. -М.: Издательство ВНИИА, 2007. - 216 с.

155. Черемисинов М.В. Микробиологические препараты и регуляторы роста против возбудителей корневых гнилей на ячмене // Адаптивные технологии в растениеводстве. Итоги и перспективы. Ижев. гос. с.-х. акад. - Ижевск, 2003. -С. 152- 159.

t

156. Чумаков М.И. Механизм агробактериальной трансформации растений. - Саратов.: Издательство «Слово», 2001. - 256 с.

157. Шавловский Г.М., Логвиненко Е.М. Роль железа в регуляции синтеза белков у микроорганизмов // Успехи микробиологии. Т. 22. - М.: Наука, 1988.- С. 108.-115.

158. Шеленга Т.В. Характеристика эндофитсодержащих образцов овсяницы луговой (Festuca pratensis huds.) из коллекции ВИР им. Н.И. Вавилова: Дис...канд. биол. наук.- Санкт-Петербург, 2006.- 103 с.

159. Шешегова Т.К. Проблемы и приоритеты научных исследований в области агроэкологии и растениеводства на Евро-Северо-Востоке // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. -2006. - №8. - С. 13-15.

160. Шешегова Т. К., Широких И. Г. Для активизации борьбы с фузариозом колоса // Защита и карантин растений. - 2004. - № 4. - С. 22-23.

161. Широких A.A. Реакция сортов озимой ржи и ячменя на инокуляцию ризосферными актиномицетами // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. -2005.- №6. - С.28-32.

t

162. Широков A.B., Кудоярова P.A., Кузнецов В.И. Антигрибная активность штамма Bacillus subtilis 26 Д - основа биопрепарата «Фитоспорин М» // Доклады Московского общества испытателей природы (по материалам четвертой Международной научной конференции « Биотехнология - охране окружающей среды»). - Т. 39 . - М. : Изд. Графикон, 2006. - С. 257 - 258.

163. Широков A.B. Белковые и пептидные факторы Bacillus sp. 739 -ингибиторы роста фитопатогенных грибов // Прикладная биохимия и микробиология. - 2002. - Т. 38. - № 2. - С. 161 - 165.

164. Шкаликов, В. А. Защита растений от болезней / Шкаликов В. А. [и др.] ; под ред. В. А. Шкаликова -2-е изд., испр. и доп. - М. : Колос С, 2003. -255 с.

165. Штарк О.Ю. Влияние корневых экзометаболитов пшеницы на антагонистические свойства ризобактерий по отношению к фитопатогенным грибам: Дис...канд. биол. наук. - Санкт-Петербург, 2007. - 162 с.

166. Штарк О.Ю., Шапошников А.И., Кравченко JI.B. Продуцирование антифунгальных метаболитов Pseudomonas chlororaphis при росте на различных источниках питания // Микробиология. - 2003. - Т. 72. - № 5. - С. 645-650.

167. Штерншис М.В., Джалилов Ф.С., Андреева И.В., Томилова О.Г. Биопрепараты в защите растений. Новосибирск, 2000. - 128 с.

168. Экология микроорганизмов: учеб. для студ. вузов / под ред. проф. А. И. Нетрусова. - М.: Издательский центр «Академия», 2004. - 272 с.

169. Ягодин Б.А., Дерюгин И.П., Жуков Ю.П. Практикум по агрохимии / под ред. Ягодина Б.А. - М.: Агопромиздат, 1987. - 512 с.

170. Agarwal V. and Sinclair J. Principles of seed pathology. - CRC Press, Boca Raiton,Fla, 1997.-P. 238.

171. Araujo F. F., Souza E. C., Guerreiro R. Т., Chado Guaberto L. M., Ferreira De Araujo A. S.. Diversity and Growth-Promoting activities of Bacillus sp. -Revista Caatinga, Mossoro. - 2012. - Vol. 25. - № 1. - P. 1-7.

172. Backman P.A., Wilson M.A., Murphy J.F. Bacteria for biological control of plant diseases. Environmentally safe approaches to crop disease control. - Lewis Publishers, New York, USA. - 1997. - P. 95-109.

173. Bakan В., Melcion D., Richard-Molard D., Cahagnier B. Fungal growth and Fusarium mycotoxin content in isogenic traditional maize and genetically modified maize grown in France And Spain // J. Agr. Food Chem. - 2002'. - Vol. 50. - №4.-P. 728-731.

174. Benizri E., Baudoin E. and Guckert A. Root colonization by Inoculated Plant Growth-Promoting Rhizobacteria // Biocontrol science and technology. 2001.- № 11. P. 557-574. - Режим доступа: http://www.tandf.co.uk, электрон, библиотека.

175. Bhavdish N., Johri A., Sharma J. S., Virdi. Rhizobacterial Diversity in India and Its Influence on Soil and Plant Health // Adv Biochem Engin/Biotechnol. -2003.-Vol. 84.-P. 49-89.

176. Biesiada A., Kolota E., Pietr S., Stankiewicz M., Matkowski K. Estimation of efficiency of garlic extract and Trichoderma viride against pink root rot (Pyrenochaeta terrestris (Hansen) Gorenz, Walker et Larson) on leek // Vegetable crops research bull. - Skierniewice, 2002. - Vol. 57. - P. 73 - 81.

177. Bozukov H. Investigation on action of biopesticide Trilogy 70 EK against of economy important mycosis on tobacco // Науч. тр. Аграрен. унив. - Пловдив, 2003.-Т. 48.-Р. 365-370.

178. Brent К.J., Hollomon D.W. Fungicide resistance: the assessment of risk // FRAC Monograph. - 1998. - №2, Brussels.

179. Bush L.P., Wilkinson H.H., Schardl C.L. Bioprotective Alkaloids of Grass Fungal Endophyte Symbioses // Plant Physiol. - 1997. -Vol. 14. - № 1. - P. 1-7.

180. Cal A. de., Garcia R., Lepe P. Malgarejo Induced resistance by Penicillium oxalicum against Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici: histological studies of infested and induced tomato stems // Phytopatology. - 2000. - Vol. 90. - № 3. - P. 260 - 268.

181. Chen C., Bauske E. M., Musson G. et al. Biological control of Fusarium wilt

t

on cotton by use of endofitic bacteria // Biological control. - 1995. -Vol. 5 - №1. -P. 83-91.

182. Coelho A.R., Hoffmann F.L., Hirooka E.Y. Biocontrole de doencas pos-colheita de aplicacao eseguranca alimentar // Semina. - 2003. - Vol. 24. - № 2. - P. 337-358.

183. Collins, M., and D. Pappagianis. Lysozyme enhanced killing of Candida albicans and Coccidioides immitis by amphotericin B. Sabouraudia. - 1974. - № 12.-P. 329-340.

184. Di Pietro A., Lorito M., Hayes C.K., Broadway R.M., Harman G.E. Endochitinase from Gliocladium virens: isolation, characterization, and synergistic antifungal activity in combination with gliotoxin // Phytopathology, 1993. - 83. - P. 308-313.

185. Droby S. Indyction of resistance to Penicillium digitatum in grapefruit by the yaest biocontrol agent Candida oleophila / S. Droby et al. // Phytopatology. -2002. - Vol. 92. - № 4. - P. 393 - 399.

186. Erturk Y., Ercisli S., Haznedar A., Cakmakci R. Effects of plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) on rooting and root growth of kiwifruit (Actinidia deliciosa) stem cuttings // Biological Research . - Vol. 43. - P. 91-98.

t

187. Filippi C., Bagnoli G., Volterrani M., Picci G. Antagonistic effects of soil bacteria on Fusarium oxysporum II Plant Soil. - 1987. - Vol. 98. - №2. - P. 161167.

188. Foldes T., Banhegye I., Herpai Z., Varga L., Szigeti J. Isolation of Bacillus strains from the rhizosphere of cereals and in-vitro screening for antagonism

against phytopathogenic food borne and spoilage microorganisms // Journal of Applied microbiology. -2000.-Vol. 89,- P. 840-846.

189. Freeman S. and Rodriguez R. Genetic conversion of a fungal plant pathogen to a non-pathogenic, endophytic mutualist // Science. - 1993. - Vol. 260. - P. 75190. Fritz M. Resistance induction in the pathosystem tomato - Alternaría solani: dissertation: 30.09.05 / Maendy Fritz. - G., 2005. - 124 s.

191. Gacitúa S., Valiente C., Díaz K., Hernández J., Uribe M., Sanfuentes E. Identification and biological characterization of isolates with activity inhibite against Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid // Chilean journal of agricultural research.- 2009.- Vol. 69. - P. 526-533.

192. Gajda I., Kurzawinska H. Potential use of Pythium oligandrum and imazalil in the protection of potato against Rizoctonia solani II Phytopatologia Polonica. -2004. - № 32. - P. 47 - 52.

193. George N. Agrios, Plant Pathology. - 5th Edition. - London: Academic Press, 2005.-952 p.

194. Golin'ski, P.; Kiecana, I.; Kaczmarek, Z.; Kostecki, M.; Golin'ska, B.; Kaptur, P.; Wisniewska, H.; Chelkowski, J. Diversity within winter wheat cultivars in scab response after inoculation with Fusarium avenaceum II Phytopathologia Polonica. 2000. - №20. - P. 97 - 105.

195. Graner G., Persson P., Meijer J. and Alstrom, S. A study on microbial diversity in different cultivars of Brassica napus in relation to its wilt pathogen, Verticillium longisporum // FEMS Microbiol. Lett. - 2003. - Vol. 224. - P. 269276.

196. Gransee A., Wittenmayer L. Qualitative and quantitative analysis of water-soluble root exudates in relation to plant species and development // Journal of Plant Nutrition and Soil Science. - 2000.-Vol. 163. - P. 381-385.

197. Gueldner R.C., Reilly C.C., Pusey P.L. Isolation and identification of iturins as antifungal peptides in biological control of peach brown rot with Bacillus subtilis //J. agr.food chem. - 1988. - Vol. 36. - № 2. - P. 366-370.

198. Haas D., Blumer C., Keil C. Biocontrol ability of fluorescent pseudomonads genetically dissected: importance of positive feedback regulation // Curr. Opin. Bio-thechnol. - 2000. - Vol. 11. - №3. - P. 290-297.

199. Halisani Gumede. The development of a putative microbial product for use in crop production. - Rhodes University, 2008. - 133 p.

200. Harish S., Manjula K., Podile A.R Fusarium udum is resistant to the mycolytic activity of a biocontrol strain of Bacillus subtilis AF 1 FEMS // Microbiology Ecology. - 1998. - Vol. 25. - №4. - P. 385-390.

201. Harsh P. B., Fall R., Vivanco J. M. Biocontrol of Bacillus subtilis against Infection of Arabidopsis Roots by Pseudomonas syringae Is Facilitated by Biofilm Formation and Surfactin Production// Plant Physiology . - 2004- Vol.134. - P. 307-319.

202. Hoffland E., Findenberg G. and Nielemans J. Solubilization of rock phosphate by rape // Plant and soil. - 1989. - V. 113. - P. 161-165.

203. Hosford R.M. White blotch incited in wheat by Bacillus megaterium pv. Cerealis II Phytopathology. - 1982. -Vol. 72.- P. 1453-1459.

204. Idris S.E., Iglesias D.J., Talon M., Borriss R. Tryptophan-dependent production of Indole-3-Acetic Acid (IAA) affects level of plant growth promotion by Bacillus amy loi iquefaciens FZB42 // Molecular Plant-Microbe Interactions. -2007. - Vol. 20 (Suppl 6).- P. 619-626.

205. Isebaert S., Verhoever R., Haesaert G. Control of Phytophthora infestans in tomato by means of indused resistance // Parasitica. - 2002. - Vol. 58. - № 2/4. - P. 117-125.

206. Kim D.S., Weller D.M., Cook R.J. Population dynamics of Bacillus sp. L324-92R and Pseudomonas fluorescens 2-79RN in the rhizosphere of wheat // Phytopathology. - 1997. - Vol. 87 (5). - P. 559-564.

207. Kuwaki Sh., Ohhira I., Takahata M., Hirota A., Murata Y., Tada M. Effect of the Fermentation of Herb by Lactic Acid bacteria against Phytopathogenic

Filamentous Fungi and Growth of Host Plants // Journal of Bioscience and Bioengineering. - 2004. - Vol. 98. - P. 187-192.

208. Laemmlen F. Alternaria diseases / University of California // Agriculture and Natural Resources. - 2001. - Publcation 8040.

209. Letessier M. P., Svoboda K. P., Walters D. R. Antifungal activity of the essential oil of hyssop (Hyssopus officinalis) // J. Phytopathol. - 2001. - Vol. 149. -№ 11/12.-P. 673 -678.

210. Lolloo, R., Maharaih, D., Gorgens, J., Gardiner, N. A downstream process for production of a viable and stable Bacillus cereus aquaculture biological agent // Applied Microbiology and Biotechnology.- 2010. - Vol. 86.- P. 499-508.

211. Lorito M., Hayes C.K., A. Di Pietro, Woo S.L., Harman C.E. Purification,

characterization, and synergistic activity of a glucan 1,3- j3 - glucosidase and an Nt

acetyl- j3 -glulcosaminidase from Trichoderma harzianum II Phytopathology. -1994.-Vol. 84.-P. 398-405.

212. Lynch J.M. Soil biotechnology - Microbical Factors in Crop Productivity // Blackwell Scientific Publications, Oxford, London. - 1990. - P. 107-121.

213. Martin N. I., Haijing Hu H., Matthew M. Isolation, structural characterization, and properties of mattacin (polymyxin M), a cyclic peptide andibiotic produced by Paenibacillus Kobensis Mil J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278.-№ 15.-P. 13124- 13132.

214. Martin S.B., Abawi G.S., Hoch H.C. Biological control of soilborne

t

pathogens with antagonists // Biological control in agricultural IPM systems. -1987.-P. 433-454.

215. Mclnroy J. and Kloepper J. Survey of indigenous bacterial endophytes from cotton and sweet corn // Plant and Soil. - 1995. - Vol. 173. - P. 337-342.

216. Neilands J.B. Some aspects of microbial iron metabolism // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1957.-Vol. 2. - Iss. 2.-P. 101-111.

217. Newton W.E. Nitrogen fixation: some perspectives and prospects // Proc. 1st European nitrogen fixation conference. Szeged. - 1994. - P. 1-6.

218. Nielsen P., Sorensen J. Multi - target and medium - independent fungal antagonism by hydrolytic enzymes in Paenibacillus polymyxa and Bacillus pumilus strains from barley rhizosphere // FEMS Microbiol. Ecol. - 1997. - Vol. 2. -P. 183-192.

219. Orlikowski L. B., Skrzypczak C., Wojdyla A. Biological activity of plant extracts and chitosan towards soil-borne and leaf patogens // Botanica lith. - 1999. -Suppl. -3. - P. 47-53.

220. Orlikowski L. B. Effect of grapefruit extract on development of Phytophthora cryptogea and control of foot rot of gerbera // J. of plant protection research. -Poznan; Warsaw, 2001. - Vol. 41. - № 3. - P. 288 - 294.

221. Paulitz T.C., Belanger R.R. Biological control in green house systems // Annu. Rev. Phytopathol. - 2001. - Vol. 39. - P. 103 - 133.

222. Pesticides in the Modern World - Pesticides Use and Management / Edited By: M. Stoytcheva. Publisher: InTech, 2011. - 520 p.

223. Pleban S.; Chernin L. and Chet I. Chitinolytic enzymes of an endophytic strain of Bacillus cereus II Letters in Applied Microbiology, September 1997. -Vol. 25. - № 4. - P. 284-288.

224. Quintanilla P., Rohloff J., Iversen T.-H. Influence of essential oils on Phytophthora infestans // Potato Res. - 2002. - Vol. 45. - № 2/4. - P. 225-235.

225. Reinhold-Hurek B. and Hurek T. Life in grasses: diazotrophic endophytes // Trends in Microbiology. - 1998. - Vol. 6. - P. 139-144.

226. Ryder M.N., Yan Z., Terrace T.E. et al. Use of strains of bacillus isolated in China to suppress take-all and rizoctonia root rot, and promote seedling growth of glasshouse-grown wheat in Australian soils // Soil. Biol.Biochem., 1999. - Vol. 31.-P. 19-29.

227. Saharan B.S., Nehra V. Plant Growth Promoting Rhizobacteria: A Critical Review // Life Sciences and Medicine Research. - Department of Microbiology, Kurukshetra University, Kurukshetra, Haryana 136 119, India. - 2011.-Vol. 2011. -P. 1-30.

228. Schippers B. Prospects for management of natural suppressiveness to control soilborne pathogens // In: Biological control of plant diseases, progress and challenges for the future. NATO ASI Series A Life Sciences / Tjamos E.C., Papavizas G.C., Cook RJ. (eds.). Plenum Press, New York, 1992. - Vol. 230. - P. 21-34.

229. Schisler D.A., Slininger P.J. Selection and performance of bacterial strains for biologically controlling Fusarium dry rot of potatoes incited by Gibberella pulicaris II Plant Dis. - 1994. - № 78. - P. 251-255.

230. Sgroy V., Cassan F., Masciarelli O., Del Papa M.F., Lagares A., Luna V. Isolation and characterization of endophytic plant growth-promoting (PGPB) or stress homeostasis-regulating (PSHB) bacteria associated to the halophyte Prosopis strombulifera // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2009. - Nov;85(2):371-81.

231. Sharma P., Singh S.D. Effects of fungal metabolites on germination and seedlingvigour of pea // J. Maharashtra Agr. Univ. - 2003. - Vol. 28. - № 3. - P. 269-270.

232. Siddigui I. A., Shaukat S. S., Ehteshamul - Haque S. Use of plant growth -promoting rhizobacteria (PGPR) find soil organic amendments for the management of root diseases complex of uridbean // Acta agrobotanica. - Lublin; Warszawa, 2001.-Vol. 19.-P. 89-90.

233. Siddiqui I.A., Shaukat S.S., Khan G.H., Zaki M.J. Evaluation of Argemone Mexicana for control of root-infecting fungi in tomato // J. Phytopathol. - 2002. -Vol. 150,-№6.-P. 321-329.

234. Simons M., Brand I, de Weger L. et al. Gnotobiotic system for studying rhizosphere colonization by plant growth-promoting Pseudomonas bacteria // MPMI. - 1996. - Vol. 9. - P.600-607.

235. Smith B.J., Kirkegaard J.A. In vitro inhibition of soil microorganisms by 2-phenylethyl isothiocyanate // Plant Phatol. - 2002. - Vol.51. - №5. - P. 585-593.

236. Tanovic В., Milijasevic S., Todorovic В., Potocnik I., Rekanovic E.

Toksicnost etarskih ulja za Botrytis cinerea Pers. in vitro // Pesticidi. - 2005, - Vol.

t

20.-№2.-P. 109-114.

237. Thomashow L.S., Weller D.M. Role of phenasine antibiotic from Pseudomonas fluorescens in biological control of Gaeumannomyces graminis var. tritici // J. Bacte-riol. - 1988. - P. 3499- 3508.

238. Trejo-Estrada, Rivas Sepulveda I., Crawford D.L.. In vitro and in vivo antagonism of Streptomyces violaceusniger YCED9 against fungal pathogens of turfgrass // World Journal of Microbiology and Biotechnology. - 1998. - Vol.14. -P. 865-872.

239. United States Patent № 5403583, application number: 988985. Bacillus

i

megetarium ATCC 55000 and method of use thereof to control R. solani. - Date of patent apr.1995.

240. United States Patent № 8025875, application number: 12/557975. Bacillus isolates and methods of their use to protect against plant pathogens / Montana State University (Bozeman, UT, US).- Filing Date: 09/11/2009; Publication Date: 09/27/2011; Primary Class: 424/93.46.

241. Патент № 6753179 США, МПК C12S 13/00. Method for purification treatment of environmental pollutants [Text] / Tsuchiya . Akihito. - № 09/731863 ;

заявл. 08.12.00 ; опубл. 22.06.04 ; приор. 08.12.99, (Япония) ; НПК 435/262.5.

t

242.

243. Utama J.M.S.; Wills R.B.H., Ben-Yehoshua S., Kuesk C. In vitro efficacy of plant volatiles for inhibiting the growth of fruit and vegetal decay microorganisms // J. Agric. Food Chem. - 2002. - Vol. 50. - № 22. - 6371-6377.

244. Validov S., Kamilova F., Qi S., Stephan D., Wang, J., Makarova N., and Lugtenberg B. Selection of bacteria able to control Fusarium oxysporum f.sp. radicis-lycopersici in stonewool substrate // J. Appl. Microbiol. - 2007. - Vol. 102. -P. 461-471.

245. Vargas-Ayala R., Rodriguez-Kabana R., Morgan-Jones G., Mclnroy J. A., Kloepper J. W. Shifts in soil microflora induced by velvetbean (Mucuna deeringiana) in cropping systems to control root-knot nematodes // Biological Control. -2000.17:11-22.

246. Veselov S.U., Kudoyarova G.R., Egutkin N.L., Gyuli-Zade V.Z., Mustafma A.R., Kof E.M. Modified Solvent Partitioning Scheme Providing Increased Specificity and Rapidity of Immunoassay for IAA // Physiol. Plantarum. 1992. -Vol. 86. - P. 93-96.