Оценка некоторых показателей качества и безопасности свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.06, кандидат биологических наук Хоменец, Николай Геннадьевич

• Хоменец, Николай Геннадьевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хоменец, Николай Геннадьевич

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генетически-модифицированные источники питания

1.2. Создание генетически-модифицированных животных

1.3. Методы определения генетически-модифицированных 17 компонентов в продуктах питания

1.4. Методы оценки безопасности продукции, полученной из 22 генетически-модифицированных источников

1.5. Безопасность и качество мясного сырья, включая трансгенное 25 мясное сырьё

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Цель и задачи исследования

2.2. Материалы и методы исследования 322.3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 40 2.3.1. Выявление чужеродной ДНК в трансгенной свинине, вареных колбасах и консервах, содержащих свинину трансгенного происхождения и мышечной ткани перепелов

Выделение ДНК

Определение концентрации ДНК и степени ее очистки

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.3.2. Исследование токсичности трансгенной свинины и 46 изготовленных из неё вареной колбасы и консервов с использованием тест-организма Tetrahymena pyriformis

2.3.3. Определение относительной биологической ценности (ОБЦ) 48 трансгенной свинины, вареной колбасы и консервов, изготовленных из трансгенной свинины, в опытах на инфузориях.

2.3.4. Токсикологическая оценка трансгенной свинины и продуктов 50 её переработки

2.3.4.1. Токсикологическая оценка трансгенной свинины на перепелах

2.3.4.2. Токсикологическая оценка трансгенной свинины

2.3.4.3. Токсикологическая оценка вареных колбас

2.3.4.4. Токсикологическая оценка консервов

2.3.5. Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя трансгенных 61 свиней

2.3.6. Физико-химические исследования мышечной ткани свиней

2.3.7. Микробиологическая оценка мяса и мясопродуктов 67 трансгенного происхождения

2.3.8. Результаты гистологических исследований продуктов убоя 70 трансгенных свиней

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка некоторых показателей качества и безопасности свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки»

В последние годы в различных странах ведутся работы в области генной инженерии, направленные на повышение эффективности растениеводства и животноводства, улучшение качества пищевого сырья, выращивание растений и животных, устойчивых к неблагоприятным факторам внешней среды, получение новых лечебно-профилактических препаратов и в других целях.

В настоящее время получены трансгенные мыши, кролики, свиньи, овцы с различными генными конструкциями (Шевелуха B.C. и др., 1994; Вгеш G., 1988). Производство трансгенных животных даст возможность придать новые характеристики существующему физиологическому статусу: например, изменить генную регуляцию, увеличить продуктивность и усилить сопротивляемость к различным заболеваниям (Георгиев ГЛ., 1989; Land R. В., Wilmut I., 1987; Мс Connel L. J., 1986, Kappes N. 1999).

Исследования свидетельствуют о том, что определенные генные комбинации могут приводить к увеличению темпа роста живой массы клонированных животных.

Увеличение производства и повышение качества мясного сырья, в том числе свинины, во многом зависят от повышения мясной продуктивности животных, сокращения потерь в процессе производства и переработки, совершенствования критериев оценки качества мяса и организации его рационального использования (Эрнст JI.K.,1999).

В структуре перерабатываемых в России животных на конец 2004 г. доля свинины составляет 22,2% (Дорогова Л., 2004). Статистика свидетельствует о том, что увеличение производства так называемого красного мяса, то есть мяса животного происхождения в мире в основном обеспечивается за счет повышения удельного веса свиноводства как наиболее скороспелой отрасли животноводства. Значительное место ему отводится и в нашей стране.

Во ВНИИ животноводства под руководством академика РАСХН JI.K. Эрнста ведутся исследования по созданию трансгенных свиней с интегрированным геном релизинг-фактора гормона роста GRF (олигопептид, состоящий из 43 или 44 аминокислот с различной степенью гомологии между видами, который синтезируется в аркуатическом вентромедиальном ядрах гипоталамуса). Сравнительное изучение роста и развития полученных поколений трансгенных и нетрансгенных поросят показало, что у трансгенных свиней наблюдалась тенденция к увеличению энергии роста животных. Экспрессия генов hGRF (генная конструкция гормона роста, соматолиберин человека, релизинг-фактор) оказывала положительное влияние на прирост живой массы в более позднем возрасте, когда экспрессия эндогенного соматотропина снижается. Изучение содержания соматотропина в крови трансгенных по hGRF животных показало отсутствие заметных различий по этому показателю у подопытных и контрольных групп животных.

Рост производства свинины в мире достигается главным образом за счет интенсификации отрасли и увеличения поголовья этих животных. Важным фактором интенсификации свиноводства являются широкое внедрение метода гибридизации, повышающего продуктивность помесей, совершенствование продуктивных и племенных качеств разводимых пород свиней, вовлечение в сферу производства лучших из них, отличающихся высоким выходом мяса, а также улучшение технологии подготовки животных к убою и их переработки. (Эрнст J1.K. и др., 2001).

Для осуществления этих задач ученые занимаются решением ряда проблем, влияющих на качество и безопасность готового продукта, уделяя особое внимание научному обоснованию и практическому воплощению возможности прижизненного формирования у животных требуемых характеристик получаемого от них мясного сырья.

Проведенные за последние годы исследования показали, что с помощью генной инженерии, то есть путем интеграции в организм специфических генов, можно не только ускорить и значительно улучшить продуктивные показатели животных, но и повысить приспосабливаемость их к окружающей среде, создать популяции животных, генетически устойчивых к ряду инфекционных заболеваний, направленно изменять наследственные признаки (Эрнст J1.K. и др., 2001).

К настоящему времени селекционерами получены растения трансгенного происхождения более чем 120 видов, среди них картофель, соя, томаты, кукуруза, рис, рапс, хлопок, лен, табак и другие. Такие страны, как Китай, Индия и Индонезия, насчитывающие 2,5 млрд. населения, выращивают и используют в пищу трансгенные культуры, а 16 стран, население которых составляет 3,2 млрд. человек, несмотря на продолжающиеся споры о преимуществах и недостатках трансгенных культур, продолжают увеличивать посевные площади под генетически модифицированные культуры. Если в 1996 году площади, занятые под ГМ культурами, составляли 1,7 млн. га, то в 2002 г. — 58,7 млн. га, то есть произошло 34-х кратное увеличение. В области животноводства также ведутся работы. Цель экспериментов - это ускорение роста животных с помощью переноса генов гормона роста, повышение резистентности организма к неблагоприятным факторам внешней среды, получение биологически активных веществ медицинского и ветеринарного назначения и др.

В настоящее время получены трансгенные мыши, кролики, свиньи, овцы, куры и перепела с различными генными конструкциями (Шевелуха B.C. и др.,1994; Brem G., 1988). Живая масса полученных трансгенных крольчат и поросят не отличалась при рождении от контроля, хотя в экспериментах на мышах отмечали более быстрый рост трансгенных мышей, которые имели большую массу, чем в контроле, в 1,5-2,4 раза (Brem G. et. al., 1986; Pristo et al., 1999). Некоторые авторы приводят экспериментальные данные, в которых отмечают, что скорость роста трансгенных свиней не изменялась.

Новые технологии выращивания животных, направленные на повышение их продуктивности путем выведения трансгенных особей, предусматривают использование так называемых «агентов перераспределения», которые, изменяя метаболизм животного, способствуют усиленному росту ткани и снижению накопления жира. Вместе с тем при выведении новых пород животных с заранее заданными свойствами и качественными показателями возникает большое число проблем. Это связано с тем, что целенаправленное воздействие на усиленный рост мышечной ткани как при племенной работе, так и при использовании современных биотехнологий и генной инженерии может привести к негативным последствиям: может изменяться структура и окраска мышечной ткани, рН, жесткость, влагоудерживающая способность, степень и характер жирности (мраморность), а также консистенция, вкусовые и ароматические свойства мяса после термической обработки (Рогов И.А. и др. 2001).

Не представляется возможным использование полученной животноводческой продукции в пищевых целях, так как не доказана, особенно с учетом отдаленных последствий, её безопасность для человека. В этой связи важнейшей задачей является проведение широких исследований по контролю безопасности такого сырья и продуктов его переработки, хотя многие ученые считают, что введенный в объект ген - это участок ДНК, а его продукт - белок. В желудочно-кишечном тракте нуклеиновые кислоты расщепляются на нуклеотиды, а белки расщепляются на аминокислоты, которые не представляют опасности для человека. По мнению Рогова И.А. (2000), на сегодняшний день в мире нет ни одного научного аргумента против использования таких изученных и разрешенных к применению трансгенных культур, как соя, картофель, кукуруза и др. Об этом свидетельствуют результаты медико-биологических исследований Института питания РАМН (Сорокина Е.Ю. и др., 2003). По их данным, трансгенная соя и кукуруза не представляют опасности для человека. И, тем не менее, сегодня важна информированность переработчиков и потребителей сельскохозяйственной продукции о происхождении растительного сырья.

Кроме того, необходимо проводить длительные эксперименты на различных видах животных, птиц и простейших с использованием различных методов с целью выявления отдаленных неблагоприятных последствий при употреблении ГМ продуктов питания.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Хоменец, Николай Геннадьевич

4. ВЫВОДЫ

1. Введение в состав корма перепелам мясокостной муки, полученной от трансгенной свинины, содержащей ген mMTl/hGRF гормона роста человека, не приводит к накоплению гена в составе мышечной ткани перепелов.

2. Использование тест-организма Tetrahymena pyriformis подтвердило отсутствие токсичности образцов трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием с высокой степенью достоверности.

3. Относительная биологическая ценность трансгенной свинины, вареных колбас и консервов, изготовленных с ее использованием и определенная с помощью тест-организма Tetrahymena pyriformis с высокой степенью достоверности (99,95%), близка по значению к аналогичному показателю нетрансгенных образцов.

4. При токсикологической оценке трансгенной свинины на перепелах не установлено отрицательного влияния на показатели яйценоскости, выводимость перепелят, живой массы перепелов при выращивании, а также на интегральный показатель хронической интоксикации. Эмбрионы развивались нормально, мутагенного влияния трансгенной свинины на рост и развитие перепелиных эмбрионов не установлено. Результаты исследований позволяли использовать в качестве тест-организма перепелов для комплексной оценки свинины трансгенного происхождения и продуктов ее переработки с учетом отдаленных последствий.

5. Не выявлено токсичности вареных колбас и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины в хронических экспериментах на белых крысах:

- по показателям прироста массы и среднесуточного прироста, которые составили у подопытной группы, получавшей вареные колбасы - 124,00+4,90 г/гол и 2,76+0,17 г/гол и у контрольной - 116,00+4,70 г/голову и 2,58+0,13 г/голову соответственно;

- по показателям прироста массы и среднесуточного прироста, которые составили у подопытной группы, получавшей консервы 105,00+5,40 г/голову, и 2,33+0,15 г/голову; у контрольной - 106,00 +5,10 г/голову и 2,36+0,10 г/голову соответственно;

6. Не выявлено токсичности вареных колбас и консервов, изготовленных с добавлением трансгенной свинины по интегральному показателю хронической интоксикации (ИПХИ):

- по интегральному показателю хронической интоксикации (в %), который составил у подопытной группы, получавшей вареные колбасы по печени 4,58+0,21, селезенке -2,10+0,05, сердцу - 0,73+0,06 и почкам - 0,92+0,05, в контроле - 4,27+0,15; 2,02+0,04; 0,67+0,09 и 0,87+0,07 соответственно;

- по интегральному показателю хронической интоксикации, который составил у подопытной группы, получавшей консервы по печени 4,24+ 0,16; селезенке -2,00+0,09; сердцу - 0,71+0,05 и почкам -0,88+0,04, в контроле - 4,20+0,14; 1,87+0,06; 0,68+0,03 и 0,85+0,04 соответственно.

7. Микробная обсемененность трансгенной свинины по КМАФАнМ не отличается от аналогичного показателя контрольной (нетрансгенной) свинины и составляет соответственно 0,7 lxl03+0,80х 102 и 0,86х103+0,92х102. Других микроорганизмов, регламентированных СанПиН 2.3.2.1078-01 в исследованных образцах свинины, предназначенной для изготовления колбас и консервов не обнаружено. В образцах вареных колбас и консервов, изготовленных из трансгенной свинины по микробиологическим показателям не отличались от контрольных (из нетрансгенной свинины) и были промышленно стерильны.

8. При ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя трансгенных свиней (с использованием генной конструкции релизинг-фактора соматотропина mMTl/hGRF) и нетрансгенных свиней не выявлено различий. Незначительные различия отмечены в выходах мышечной и костной тканей, шкурки, технических зачисток. У нетрансгенных свиней получен меньший выход жира-сырца (25,60+1,30%) на 2,90% по сравнению с выходом жира-сырца у трансгенных свиней (28,50+1,41%).

9. Влагоудерживающая способность в % к общей влаге в составе парной трансгенной свинины находилась в пределах значений 59,40+0,11; в составе охлажденной - 54,2+0,14; соответствующие показатели для нетрансгенной свинины составили 60,14+0,06 и 55,2+0,10. Критерий достоверности при этом составлял.

10. При гистологических исследованиях внутренних органов подопытных крыс, получавших трансгенную свинину и контрольных морфологических отличий не выявлено.

Предложения для практики. На основании материалов исследований разработаны Методические рекомендации: «Тест-системы по оценке безопасности мясного сырья трансгенного происхождения», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН (М., 2005), которые могут быть использованы в специальных лабораторных и научно-исследовательских учреждениях для контроля свинины трансгенного и нетрансгенного происхождения и продуктов ее переработки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Хоменец, Николай Геннадьевич, 2007 год

1. Александрова Н.А. и др. Методы оценки качества мяса и мясопродуктов за рубежом // М., 1997, 156 е.

2. Алехина Л.В., Андреенко В.И., Ивашов В.И. Современные методы анализа качества мяса и мясопродуктов // Мясная промышленность, АгроНИИТЭИММП, М., 1991, 35 е.

3. Беляев Е.Н., Тутельян В.А. Качество и безопасность продуктов детского питания в России: медико-биологические требования и результаты мониторинга // Вопросы питания, 1996. № 5. - С. 8-12.

4. Бутко М.П. Организация и современные методы проведения ветеринарно-санитарной экспертизы. Киев 1984.

5. Бутко М.П., Шапкина Л.П. Санитарно-гигиенические проблемы экспертизы мяса пернатой дичи // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С.90.

6. Бурков В.И., Боровков М.Ф., Колесниченко И.С., Касаткин B.C. Ветсанэкспертиза мяса и жира диких животных и пернатой дичи // Ветеринария, Москва, 2003.- №2. С. 55 - 60.

7. Версан В.Г. Актуальные проблемы введения в действие Федерального закона «О техническом регулировании» // Стандарты и качество, 2003.- № 5.- С. 30-32.

8. Витт С.В., Сапоровская М.Б., Беликов В.Н. Об анализе аминокислот методом газ-жидкосткой хроматографии // Журнал аналитической химии, 1966.- Т. 21.-№2.-С. 227-231.

9. ГОСТ Р 52174-2003 Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа.

10. Долгов В.А., Лавина С.А. Методические аспекты оценки качества и безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003,162 е.

11. Долгов В.А., Лапаев В.Э. Использование инфузорий (Тетрахимена пириформис) в качестве тест-культуры в приборе "Биотестер 2" (экспресс-метод). -М.: Агропромиздат. -1991, 18 с.

12. Долгов В. А. и др. Методические рекомендации для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов. М.: Агропромиздат. - 1992, 14 с.

13. Долгов В. А. Ветеринарно-санитарные и экологические аспекты биотестирования. М.: ВНИИВСГЭ. -1993, 74 с.

14. Донченко Л.В., Надыкта В.Д. Безопасность пищевого сырья и продуктов питания //М., Пищепромиздат, 1999, 352 с.

15. Донченко Л.В., Надыкта В.Д. Безопасность пищевой продукции // М., Пищепромиздат, 2001, 525 с.

16. Дубцова Г.Н., Кирюхина М.Н., Дубцов Г.Г. Мясные кулинарные изделия, обогащенные растительным белком // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С.166-168.

17. Езерская Е.Я., Галочкин В.А. Идентификация видоспецифичных мышечных белков сельскохозяйственных животных и птицы.// Сельскохозяйственная биология. Сер.биология животных, 1999.- № 6. -С.3-9.

18. Журавская Н.К., Алехина Л.Т., Опряшенкова Л.М. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов // М., Агропромиздат, 1985, 296 с.

19. Заяс Ю.Ф. Качество мяса и мясопродуктов // М., Легкая и пищевая промышленность, 1981, 312 с.

20. Кабанова Е.М. Определение видовой принадлежности мяса домашних и диких животных.// Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук, Чуваш, с.-х. акад. Чебоксары, 1999, 23 с.

21. Карелин А.И., Макаров В.А., Боровков М.Ф. Словарь ветеринарных, зоогигиенических и санитарных терминов. М.: Росагропромиздат., 1990.

22. Комаров А.А. Методы оценки качества и безопасности кормов и кормовых добавок // Ветеринария, 2001.-№1.- С. 51-56.

23. Комаров А.А., Обухов И.Л. Определение видовой принадлежности мясных ингредиентов в кормах для собак и кошек методом ПЦР // Восьмой международный конгресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. М., 2000, С. 27-28.

24. Комаров А.А., Обухов И.Л., Сорокина М.Ю., Панин А.Н. Определение видовой принадлежности тканей жвачных животных.// Ветеринария, 2000.-№3.- С. 59-62.

25. Комаров А.А., Панин А.Н., Вылегжанина Е.С. Методы контроля анаболиков в продукции животноводства // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С.251-252.

26. Кривононосов М.В. Организация защиты качества продуктов питания // Международный медицинский журнал (г. Харьков), 1998.- № 4.- С. 104106.

27. Крылова Н.И., Лесковская Ю.Н. Физико-химические методы исследования продуктов животного происхождения // М., Пищевая промышленность, 1968, 316 с.

28. Кузнецова Т.Г. Оценка морфологических свойств мясного сырья и колбасных изделий по микроструктурным показателям // М., Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук, 1997.

29. Лабораторные исследования в ветеринарии: химико-токсикологические методы. Под. ред. Антонова Б.И. //М.: Агропромиздат, 1989, 319 с.

30. Лори Т.А. Наука о мясе // М., Пищевая промышленность, 1973,198 с.

31. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование//М., изд. «Мир»., 1994, С. 159-172.

32. Могильный М.П., Калашнова Т.В. Пути повышения качества продуктов питания // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С. 363-364.

33. Мысик А.Т., Белова С.М., Фомичев Ю.П. и др. Справочник по качеству продуктов животноводства // М., Агропромиздат, 1986,254 с.

34. Нечаев А.П. Научные основы и технологические решения получения жировых продуктов для здорового и лечебно-профилактического питания // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С. 377-379.

35. Николаева М.А., Лычников Д.С., Неверов А.Н. Идентификация и фальсификация пищевых продуктов // М., Экономика, 1996, С. 84-95.

36. Новоселов В.П., Шаронова Д.А. Методы геномной «дактилоскопии» в экспертизе идентификации личности и кровного родства // Новосибирск, «Наука» РАН, 1999, С. 1-134.

37. Обухов И.Л., Панин А.Н., Груздев К.Н. Использование ПЦР в практических ветеринарных лаборатория // Ветеринария, 1997.- №2.- С.24-27.

38. Олехнович А.А., Корчагина Л.Б., Иванова Т.В., Фомина Е.А. Новый способ экспрессной оценки интегральной фальсификации пищевых продуктов // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003,390 с.

39. Оррисс Г., Паакканэн 10. Codex Alimentarius научная основа для защиты потребителя и торговли продуктами питания // «Вопросы питания», 2000.-№ 3.-С. 28-32.

40. Остерман М.Б. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами // М., Наука, 1983, С. 4-45.

41. Парук А.П., Курмакаева Т.В. Использование биофизических методов при определении фальсификаций мяса // Практик, Москва, 2004.- № 7-8.-С.14-17.

42. Писарева В.М. Идентификация белков животного происхождения в пищевых продуктах электрофоретическим методом // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва 1999.

43. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. Утв. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, 27 декабря 1983 г. М., ВО «Агропромиздат», 1988.

44. Правила проведения сертификации пищевых продуктов и продовольственного сырья.// М., 1999.

45. Производственно-технический контроль и методы оценки качества мяса и птицепродуктов. Под ред. Горбатова В.М. // М., «Пищевая промышленность», 1974, 274 с.

46. Поздняковский В.М. Гигиенические основы питания, безопасность и экспертиза продовольственных товаров. // Издательство новосибирского университета, 1999, 8 с.

47. Попова М.Ю., Булыгина Е.С., Кузнецов Б.Б., Жаринов А.И., Рогов И.А., Скрябин К.Г. Определение содержания и выделение ПЦР-пригодной ДНК из коммерческих препаратов переработки сои // Биотехнология, Москва, 2003.-№2.- С. 86-94.

48. Рогов И.А. Новые технологии производства продуктов здорового питания // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С. 440-441.

49. Рогов И.А., Антипова Л.В., Шуваева Г.П., Пищевая биотехнология. В 4-х книгах. Основы пищевой биотехнологии // Москва, 2004, Книга 1.

50. Родин В.И. Сравнительная оценка методов ветеринарно-санитарного контроля пищевого сырья и готовых продуктов.// Материалы международной научно-технической конференции «Пищевой белок и экология». М. 2000, С. 188-189.

51. Романов Г.А. Генетическая инженерия растений и пути решения проблемы биобезопасности // Физиология растений, Москва, 2000.- Том 47.-№3.- С. 342-353.

52. Романенко Г.А. Обеспечение качества и безопасности сельскохозяйственной продукции // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С.444-445.

53. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. Под редакцией Скурихина И.М., Тутеляна В.А. // М., Изд. «Брандес», « Медицина», 1998, С. 232.

54. Самуйленко А.Я., Кузнецов Д.П., Кузнецова С.В. иммуноферментный анализ в ветеринарной медицине // Ветеринария.- № 12.- С. 20-24.

55. Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.3.2.1078-01 Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов // М., 2001.

56. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды // М., изд. «Мир», 1987, С. 47-64.

57. Сафронова A.M., Батурин А.К., Старовойтов М.Л. Анализ потребления мясопродуктов населением России // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С.464-466.

58. Светличкин В.В. Сертификация животноводческой продукции // Материалы международной научной конференции «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, Москва, 1999, С. 21-31.

59. Сенченко Б.С., Кабанова Е.М. Определение видовой принадлежности мяса по температуре вспышки наружного и внутреннего жира некоторых видов животных.// Кубанский государственный аграрный университет, 1999.- Вып.375.- С.119-121.

60. Системы анализа рисков и определения критических контрольных точек: НАССР/ХАССП//Москва, 2002, 593 с.

61. Скалинский Е.И., Белоусов А.А. Микроструктура мяса.// М., Пищевая промышленность, 1978, С. 155-175.

62. Слесаренко Н.А., Курмакаева Т.В., Якушев С.В. Морфологические критерии определения видовой принадлежности мяса.// Современные вопросы интенсификации кормления, содерж. животных и улучшения качества продуктов животноводства, М.,1999, С.103-105.

63. Смирнов A.M., Симецкий М.А., Таланов Г.А. Состояние и перспективы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии // Ветеринария, 2001.- № 10.-С. 3-7.

64. Стент Г. Молекулярная генетика // М., изд. «Мир», 1974, 535 с.

65. Татулов 10. Качество свинины одного из основных видов сырья мясной промышленности // Свиноводство, 1997.- № 6.- С. 24-26.

66. Технология мяса и мясопродуктов. Под ред. Рогова И.А. // ВО «Агропромиздат», 1988, 756 с.

67. Указания по организации Государственного надзора за содержанием гормональных стимуляторов роста и тиреостатиков в продукции животного происхождения № 12-7/900 // Утверждены Главным государственным ветеринарным инспектором РФ 4 октября 1999.

68. Фомичев Ю.П. Техническое регулирование и контроль качества молока в процессе производства//Практик, Москва, 2004.- № 7-8.- С.8 -13.

69. Фрумгарц Л.Ф., Киприянов С.М., Калачиков С.М. и др. Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации // Биоорганическая химия, 1986.- №11.- С. 1508-1513.

70. Хвыля С.И. Микроструктурный анализ, идентификация и фальсификация мясных продуктов// Пищевая промышленность, 1998.- № 5.- С. 68-69.

71. Хвыля С.И. Соевые белковые продукты и возможности их идентификации // Сб.трудов 7-то всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С. 539-540.

72. Хвыля С.И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г. Практическое применение гистологических методов анализа// Мясная промышленность, 1994.- №6.-С. 9-11.

73. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика // М, изд. «Мир», 1999,558 с.

74. Чан Т.В.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот // В кн. Молекулярная клиническая диагност., методы, М., 1998, изд. «Мир», С. 374-394.

75. Черкасский Б.Л., Подукова Л.Г, Акулова Н.Г. Пищевые зоонозы людей в России. Материалы международного симпозиума «Пищевые зоонозы», М, 1995, С. 18-20.

76. Черняева М.Н. Анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов. // Ветеринария, 2001.- №6.- С.47-50.

77. Чумак P.M. Иммуноферментный анализ и рекомбинантные антигены // Лаб. Диагностика, 1999,- № 3.- С. 3-6.

78. Чуркина И.В., Сазонова А.А., Черепанов С.В., Смирнов А.Ф. Геномная дактилоскопия кур с использованием в качестве зонда ТГ-обогащенной минисателлитной ДНК // Сельскохозяйственная биология, 1995.- №2.- С. 53-55.

79. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биотопов // В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., изд. «Мир», 1999, С. 395-425.

80. Шумилов К.В., Мельниченко Л.П., Селиверстов В.В. Современные данные об иерсиниозе животных. Ветеринария, 1998.- №4.- С. 7-13.

81. Экологическая биотехнология (Под ред. Форстера К.Ф., Вейза Д.А.) // Л, изд. «Химия», 1990, С. 21-39.

82. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Анализ пищевых продуктов и напитков с помощью хроматографических методов // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России» Москва, 2003, С. 595596.

83. Abraham J., Rajulu P.V. Species identification in unprocessed meats through agarose isoelectric focusing of urea-extracted proteins and myoglobin // Indian J.anim.Sc., 1992, v. 62, № 1, p. 69-74.

84. Adessi C., Matton G., Turcatti G., Mermod J., Mayer P., Kawashima E. Solid phase DNA amplification: characterisation of primer attachment and amplification mechanisms // Nucleic Acids Research, 2000, 28, 20, p. 87.

85. Agrowal S., Cristodoulou C., Gait M. Efficient methods for attaching nonradioactive labels to the 5 ends of syntheticaligodeoxy ribonucleotides // Nucl. Acid. Res. 1986. V. 14, p. 6227-6245.

86. Araki H. Et al. Histochemical properties of muscle fiber in breiler chickens //Jap. SocofSci Fish. 1993, v.34, № 2, p. 137-144.

87. Bauer F., Rippel-Rachle B. Tierartenidentifizierung bei Fleisch und Fleischwaren.// Wien.tierarztl.Mschr., 1998, Jg.85,H.8.-S.260-266.

88. Beard J. Gene probes Locate waterborne diseases // New Sci, 1987, № 1562, p. 237.

89. Beneke В., Hagen M. Eignung der PCR (Polymerase-Ketten-Reaktion): Tierartennachweis in erhitzten Fleischerzeugnissen.// Fleischwirtschaft, 1998, Jg.78,N 9.-S.1016-1019.

90. Bennet H.S. The structure and functional muscle // Academic Press, New York, v. 1, 1960, p. 137.

91. Berger C., Melchers F. In situ hybridization ofmRNA molecule in single cells // Annu rep, 1985, Basel Inst. Immunol, Basel, p. 1-10.

92. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isolation Procedure Based on

93. Selective Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles // J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, № 3, p.615-619.

94. Buntjer J.B.,Lamine A.,Haagsma N.,Lenstra J.A. Species identification by oligonucleotide hybridisation: the influence of processing of meat products // J.Sc.Food Agr., 1999, v. 79, № 1, p. 53-57.

95. Calvo J.H.,Zaragoza P.,Osta R. Random amplified polymorphic DNA fingerprints for identification of species in poultry pate // Poultry Sc., 2001, v. 80, № 4, p. 522-524.

96. Cassiman I. Diagnosis of genetic diseases by probes // Acta clin. Belg, 1988, p. 181-184.

97. Chikuni K, Matsunaga T, Tanabe R. Determination of mitochondrial cytochrome В gene sequence for red deer and the differentiation of closely related deer meat // Meat Sci, 1990, v. 49, № 4, p. 379-385;

98. Church R.B. Method for study of hybridization and reassociation of nucleic acids axtracted from cells of higher animals // In: Molecular techniques and approach in developmental biology, ed. by M. J. Chrispeels. N. Y., 1973, p. 223-301.

99. Codex Alimentarius // Vol. 10, FAO, WHO, 1991, 223 p.

100. Codex Alimentarius Volume Thirteen. Methods of analysis and sampling // Vol. 13,FAO, WHO, 1994,134 p.

101. Codex Alimentarius Volume Ten. Meat and meat products including soups and broths // Vol. 10, FAO, WHO, 1994,222 p.

102. Cooper M.G. Species identification of meat product by standard methods // Ed.Patt., 1985, v 6, p. 135-141.

103. Сох K.H., DeLeon D.V., Angerer L.M. Detection of mRNAs in sea unchin embryos by in situ hibridization using asymmetric RNA probes // Developmental Biology, 1987, v. 101, p.485-502.

104. De Ley I., Cattoir H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturatiun rates // Europ. J. Biochem., 1970, v. 12, p. 133142.

105. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA // "Biochem. Biophys. Res. Commun.", 1966, v.23, p. 641-646.

106. Ding H.,Xu R.-J.,Chan D.K.O. Identification of broiler chicken meat using a visible/near-infrared spectroscopic technique // J.Sc.Food Agr., 1999, v. 79, № 11, p. 1382-1388.

107. Erlich H.A. PCR technology.// Stockton Press, New York, 1989.

108. Fairbrother K.S.,Hopwood A.J.,Lockley A.K.,Bardsley R.G. Meat speciation by restriction fragment length polymorphism analysis using an alpha-actin cDNA probe //Meat Sc., 1998, v.50, № 1, p. 105-114.

109. Fei S.,Okayama T.,Yamanoue M.,Nishikawa I.,Mannen H.,Tsuji S. Species identification of meats and meat products by PCR // Anim.Sc.Technol., 1996, v.67, № 10. p. 900-905.

110. Fleming I., Lumbley J. Validation of new techniques for the analysis of foods // Food Sciens and technology today, v. 9., № 2, 1995, p. 84-85.

111. Forster A., Modness J., Skingle D. Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin // Nuc. Acid Res., 1985, № 3, p.745.

112. Gillespie D., Spiegelman S. A quantive assay for DNA-RNA hybrids with DNA-RNA immobilized on a membrane // J. Molecul. Biol., 1965, v. 12, p.829-842.

113. Gudibande R., Kenten J. Electrochemiluminescen T-label for DNA probe assays // Biotechnol Adv, 1997, v. 15, № 3-4, p. 721.

114. Harbing S., Harbing M. Detection of DNA via an ion channel switch biosensor // Analytical Biochemistry, 2000, 282, p. 70-79.

115. Harris S., Jonet D. Optimisation of the PCR // Brit. J. Biomid. Sci., 1997, v. 54, №3, p. 166-173.

116. Hayashi K. Manipulation of DNA by PCR. In. PCR the Polimerase chain reaction, Eds // Mullis K.B., Ferre F. & Gibbs R.A., Birkhauser, 1994, p. 3-14.

117. Heinert H.H. et al. The analysis of the beef forcemeat on the contents of the alimentary components // Fleischwirtschaft, 1980, v. 2, p. 421-240.

118. Heinzelmann R. Beurteilung von Eber-, Zwitter-und Kryptorchiden (Binneneber) fleisch.//Fleischwirtschaft, 1999, Jg.79,N 9.-S.34-39.

119. Helle N. Et al. Methods of allocation DNA from chicken. // Arch. Fur Lebensmittelhygiene, 1996, v. 3, № 2, p. 48-51.

120. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA // Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, v. 97 (1), p 222-227.

121. Hoffmann K. Identification and determination of meat and foreign proteins by means of dodecylsulfat poliacrylamid gel electrophoresis // Ann. Nutr. Alim., v. 31, № 2,1997, p. 207-215.

122. Hopmar A., Wiegant J., Tesser G. A no-radioactive in situ hybridization method based on mercurated nucleic acid probes and sulfhydryl-hapten ligands // Nucl. Acud. Res., 1986, v. 14, № 16, p. 6471-6488.

123. Hopwood A.J., Fairbrother K.S., Lockley A.K., Bardsley R.G. An actin gene-related polymerase chain reaction (PCR) test for identification of chicken in meat mixtures // Meat Sc., 1999, v. 53, № 4, p. 227-231.

124. Hunt D.J. et al. Fatty acid changes deering development of zygotic // Physiol. Plantarium. 1997, v.81, № 4, p. 447-454.

125. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J., White T.J. Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications // Academic Press, San Diego, California, 1990, p. 16-21.

126. ISO 9001. Quality systems models for quality assurance in design, 1987, pp. 6-8.

127. Jannsen E. Method adapted to PhastSystem // Z. Lebensm. Unterrs. Forsh.,-1986.-V. 182,-p.479-483.

128. Jremstein M. and Hognes D. Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene // Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1975, p. 3961-3965.

129. Kim H. et al. Applying of different methods for allocation DNA // J. of Food Sci., 1986, v. 5, № 3, p. 68-71.

130. King N.L. Kurt L. Analysis of raw beef samples for adulterant meat species by enzyme staining of isoelectric focusing gels // J. Food Sci.,—1982.-v.47,-p.1608-1612.

131. Kofoth M. Aktuelles aus der internationalen Fleischforschung // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 68-69.

132. Koh M.C.,Lim C.H.,Chua S.B.,Chew S.T.,Phang S.T.W. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprints for identification of red meat animal species // Meat Sc., 1998, v. 48, № 3/4, p. 275-285.

133. LeProust E., Pellois J., Yu P., Zhang H., Gao X. Digital light-detected synthesis. A microarray platform that permits rapid reaction optimization on a combinatorial basis // Journal of Combinatorial Chemistry, 2000,2, p. 349-354.

134. Liberona H.E., Moxham J.M., Timbs D.V. Qualitty controlprocedures in an automated serological testing laboratory // N.Z. Vet. J., 1978, 26, № 23, p. 60, 65-66.

135. Longer P. Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1981, №11, p. 6633.

136. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. et al. The classical and sensitive methods for measuring the concentration of proteins // J. Biol. Chemistry., v. 193,1951, p. 265-270.

137. Ludke H.,Bargholz J.,Leiterer M. Wertbestimmende und Einige toxische Inhaltsstoffe in Fleisch und Verarbeitungsprodukten von Pute und Schwein. Schr.-R // Verb.Dt.Landw.Unters.Forsch.-Anst., Darmstadt, 1993, № 37, -S. 669-672.

138. Macedo-Silva A.,Barbosa S.F.C.,Alkmin M.G.A.,Vaz A.J.,Shimokomaki M., Tenuta-Filho A. Hamburger meat identification by dot-ELISA // Meat Sc., 2000, v. 56, №2, p. 189-192.

139. Marmur J., Doty P. Heterogeneity in deoxyribonucleic acids. I. Dependens on composition of the configurational stbility of deoxyribonucleic acid // Nature , 1959, v. 183, p. 1427-1431.

140. Marmur J., Doty P. Thermal renaturation of deoxyribonucleic acid. // J. Molecul. Biol., 1961, v.3, p.585-594.

141. Martin R., Haza A.I., Horales P. Detection and quantification of goats chees in ewes chees using a monoclonal antibody and two ELISA formats // J. Sc. Food Agr. 1997, v.79, № 7, p. 35-41.

142. Martm R. H. Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids // Biotech. Adv., 1991, v.9, p. 185-196.

143. Moio L., DiLuccia A., Addeo F. Fast isoelectric focusing of milk proteins on small ultrathin polyacrylamide gel containing urea // Electrophoresis. 1989, v.10, p.535-539.

144. Moio L., Sasso M.L., Chianese L., Addeo F. Rapid detection of bovin milk in ovine, caprine and water buffalo milk or cheese by gel isoelectric focusing on PhastSystem. // Ital. J. Food Sci., 1990, v.3, p. 71-176.

145. New analytical system to improve food quality management // Int. Labmate, 2001, 25, №7, p. 36.

146. Novelli A.B. Bacillus subtillis spores as a natural pro-host oral agent.

147. Preliminari date in children. Chemioterapia. 1984, vol.3, p.152-155.

148. Ouchterlony 0. // Progress in Allergy. 1958, v. 6, p. 30

149. Partis L.,Croan D.,Guo Z.,Clark R.,Coldham T.,Murby J. Evaluation of a DNA fingerprinting method for determining the species origin of meats // Meat Sc., 2000, v. 54, № 4, p. 369-376.

150. Paz de Репа M., Concepcion Cid M., Bello J. A method for identification of frozen meat used for production of cooked ham // Meat Sc., 1998, v. 48, № 3/4, p. 257-264.

151. Ranki M. Sandweich hybridization as a convmient method for detection ofnucleic acids in crude samples // Gene, 21, 1983, p. 77.

152. Rehbein H., Kress G., Schmidt T. Application of PCR-SSCP to cpecies identification of fishery products // J. of the Sci of Food and Agric., 1997, v. 74, № 1, p. 35-41.

153. Rehben H. Electrophoretic techniques for species identification of fichery products. -Z, Lebensm. Unters Forsch., 1990, v. 191, p. 1-38.

154. Renand G. Perspectives d'amelioration genetique de la qualite de la viande // Elevages beiges, 1993, № 12, p. 9-11.

155. Renz M., Kiirz C. A colorimetric method for DNA hybridization // Nlicleic Acids Res., 1984. v. 12, № 8, p. 13435-13444.

156. Saiki R.K., Walsh P.S., Levenson C.H., Erlich H.A. Genetic ahalisis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, vol. 86, p. 6230-6234.

157. Sakurai M., Hikono H., Ohta M. Production and characterization of monoclonal antibodyes that zecognize bovine kit zeceptor //Veter. Immunol. Immunopathol. 1997, v. 68, № 2/4, p. 101-112.

158. Sausern J. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electroohoresis // J.Molec.Biolog., 1975, 98, p. 503.

159. Seymour С. Electrophoresis technology: food and reverage analysis // Food Tech. Europe, 1993, Sept/Nov., p. 127-152.

160. Skarpeid H.-J.,Moe R.E.,Indahl U.G. Detection of mechanically recovered meat and head meat from cattle in ground beef mixtures by multivariate analysis of isoelectric focusing protein profiles // Meat Sc., 2001, v. 57, № 3, p. 227-234.

161. Smith D.M. Immunoassays in Process Control and Speciation of Meats // Food technologi, 1995, № 2, p. 116-117.

162. Sperner В., Schalch В., Gabert J., Greil В., Stolle A Einsatz des Salmotyre fleischsaft ELISA // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 81-84.

163. Swatland HJ. Early PSE detection.Ontario swine research rev // Guelph,1997,1997, p. 50-51.

164. Tartaglia M., Saulle E., Pestaloza S. Detection of bovine mitochondrial DNA in ruminant feeds: a molecular approach to test for the presence of bovine-derived material // Journal of food protection, vol. 61, № 5, 1998, p. 513-518.

165. Taylor A. Et al. Extraction and ESI-CID-Ms/Ms analysis of myoglobins fran different meat species // Food Sci. &Techn. Tod., 2000, v. 69, № 1, p. 81-86.

166. Tchen P., Ranki M. Time-resolved fluoromentri, a sensitive method to quantify DNA-hybrids //Nucl. Acid Res., 1986, № 2, p. 1017-1028.

167. Todd D., Creelan J. L., MeNulty M. S. Dot-hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe // J. Clin. Microbiol., 1991, v.29, № 5, p. 933-939.

168. Varga C.,Strelec V.,Volk M. Poultry meat in the production of meat products // Agriculture, 2000, v. 6, № 1, p. 49-52.3 94. Vermer Wheelock. Food safety: A key issue for consumers // Int. J. Dairy Technol., 1998, 51, №1, p. 11-14.

169. Vo-Dinh t., Anarie J., Isola N., Landis D., Wintenberg A., Ericson M. DNA biochip using a phototransistor integrated circuit // Analytical Chemistry, 1999, 71, p. 358-363.

170. Vollenhofer S., Burg K., Schmidt J., Kroath H. Genetically modified organisms in foods screening and specific detection by polymerase chain reaction//J.Agric.Food Chem/1999,47 (12): 5038-5043.

171. Westin L., Xu X., Miller C., Wang L., Edman C., Nerenberg M. Anchored multiplex amplification on a microelectronic chip array // Nature Biotechnology, 2000,18, 2, p. 199-204.

172. Wolf C., Burgener M.,Hubner P.,Luthy J. PCR-RFLP analysis of mitochondrial DNA: differentiation of fish species // Food Sc.Technol., 2000, v .33, №2, p. 144-150.

173. Yamanaka M.,Kudo T.,Itagaki Y.,Sato S.,Nakamura T. Sex identification of beef by polymerase chain reaction // Anim Sc.J., 1999, v.70, № 8, p. 111-113.

174. Yman I. M. Meat and fish species identification by isoelectric focusing // Food laboratory news, v.6, N2,1990, p. 28-45.

175. Zimmermann S., Zehner R.,Mebs D. Tierartenidentifizierung aus Fleischproben mittels DNA-Analyse // Fleischwirtschaft, 1998, Jg.78, № 5.-p.530-533.