Получение антигенов Brucella melitensis Rev-1 и Brucella abortus 19 BA и оценка перспективности их использования в качестве основы противобруцеллезной вакцины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат биологических наук Крыканов, Артем Александрович

  • Крыканов, Артем Александрович
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2010, МоскваМосква
  • Специальность ВАК РФ06.02.02
  • Количество страниц 118
Крыканов, Артем Александрович. Получение антигенов Brucella melitensis Rev-1 и Brucella abortus 19 BA и оценка перспективности их использования в качестве основы противобруцеллезной вакцины: дис. кандидат биологических наук: 06.02.02 - Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов. Москва. 2010. 118 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Крыканов, Артем Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу в РФ на современном этапе развития животноводства.

1.2. Характеристика антигенной структуры бруцелл.

1.3. Особенности иммунного ответа при бруцеллезе.

1.4. Вакцины, применяемые для специфической профилактики бруцеллеза животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1.1. Материалы.•.

2.1.2. Методы исследований.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Получение посевных культур штаммов В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА при культивировании их на плотных и жидких питательных средах.

2.2.2. Культивирование В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА в биореакторах марки «Биор 0,25».

2.2.3. Концентрирование нативных культур изучаемых бруцелл методом ультрафильтрации.

2.2.4. Получение субклеточных фракций культуры штамма

В. melitensis Rev-1.

2.2.5. Получение корпускулярных антигенов культур штаммов В.melitensis Rev-1 и B.abortus 19 В А и приготовление комбинированного корпускулярного антигена бруцелл.

2.2.6. Моделирование инфекционного процесса при бруцеллезе на лабораторных животных.

2.2.7. Изучение иммуногенности полученных антигенов в опытах на лабораторных животных.

2.2.8. Результаты изучения иммуногенности комбинированного инактивированного корпускулярного антигена в опытах на овцах.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАННОЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», 06.02.02 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение антигенов Brucella melitensis Rev-1 и Brucella abortus 19 BA и оценка перспективности их использования в качестве основы противобруцеллезной вакцины»

Актуальность темы. Совершенствование эпизоотологического надзора за бруцеллезной инфекцией, создание отвечающих современным требованиям средств диагностики и специфической профилактики имеет определяющее значение в борьбе с этой инфекцией. Решение данных проблем невозможно без фундаментальных и прикладных разработок по эпизоотологии, эпидемиологии, микробиологии и иммунологии, активной научной поддержки практической деятельности по обеспечению санитарно-эпидемического и эпизоотического благополучия населения и животноводства.

Успехи, достигнутые в ликвидации бруцеллеза в Российской Федерации, несмотря на их научную и практическую значимость, не позволяют в настоящее время сделать заключение о том, что проблема ликвидации бруцеллеза животных в стране окончательно-решена. Это подтверждается возникновением новых очагов данного заболевания в различных регионах РФ (10,16,71,73).

По данным Григорьевой Г.И. (26), Склярова О.Д. (69), Сочнева В.В. (72), Юсковец М.К. (77) и др., инфекция наносит значительный ущерб животноводству, который складывается из потери воспроизводительной способности, выбраковки ценных в племенном отношении животных, абортов и рождении слабого, нежизнеспособного потомства.

Современная система профилактики инфекционных заболеваний основывается на проведении общих ветеринарно-санитарных мероприятий, выявлении источников инфекции - больных животных и их удалении, применении средств специфической иммунопрофилактики (1, 32, 98, 112).

Наиболее значимым элементом в системе предупреждения бруцеллезной инфекции является вакцинопрофилактика болезни.

Однако, по мнению Панина А.Н. (55), Девришова Д.А. (33), Джупина г

С.И. (34), Литвинова О.Б. (50) и др. значительные трудности в решении данного вопроса создают циркулирующие измененные варианты возбудителя бруцеллеза: R, RS, SR и клетки с дефектной клеточной стенкой (L- формы), о существовании которых сообщали многие отечественные и зарубежные ученые. Применение антибиотиков, а также появление вышеуказанных атипичных форм, значительно снижают эффективность бактериологического исследования, которое также связано с многообразием плотных питательных сред, необходимых для идентификации бруцелл. •

Измененные формы бруцелл, несмотря на их пониженную патогенность, способны к реверсии в исходные формы и могут вызвать вспышки бруцеллеза. •

В нашей стране и за рубежом проводились и ведутся исследования по разработке и оценке эффективности различных препаратов для специфической профилактики бруцеллеза у животных. Несмотря на это, в РФ до настоящего времени официальное признание имеет живая вакцина на основе аттенуированного штамма В. abortus 19, которая была предложена в 1946 году Вершиловой П.А. (18). С 1952 года данная вакцина широко используется для иммунизации животных.

В то же время многими исследователями (21, 25, 40, 49, 81, 97) напряженность иммунитета, обусловленного введением живой вакцины на основе аттенуированного штамма В. abortus 19, с течением времени быстро снижается. Это определяет сравнительно невысокий ее защитный эффект.

Вершилова П.А. (18) указывает, что через 1, 4 и 12 месяцев после прививки уровень заболеваемости составляет, соответственно, 17,3%, 32,7% и 50,0%. Через 1 год после иммунизации положительные серологические и аллергические реакции обнаруживаются лишь^у 25-50% привитых. При этом в экспериментах на животных было показано, что предлагаемая вакцина защищает от небольших доз возбудителя (1-5 ИД50).

Кроме того, длительная персистенция возбудителя в организме создает значительные трудности в разграничении иммунного и инфекционного процессов.

В качестве альтернативы живым вакцинам неоднократно предпринимались попытки создания химических и инактивированных вакцин против бруцеллеза (36, 45, 65). Одним из достоинств использования их в медицине считается возможность одновременного применения подобных вакцин с антибактериальными препаратами. В основе предлагаемых химических вакцин используются полученные различными методами экстракции растворимые антигены микробных клеток.

Другим решением задачи специфической профилактики бруцеллеза представляется создание инактивированных вакцин на основе убитых культур бруцелл. Подобные препараты в настоящее время находят применение в ветеринарной практике. К их числу можно отнести вакцину 53Н38 - «Абро-лан», которая представляет собой суспензию инактивированных формалином микробных клеток В. melitensis, штамм Н3£ находящихся в S-форме, и полидисперсного адъюванта; вакцину 45/20 - «Абортос», состоящую из суспензии инактивированных формалином микробных клеток В. abortus, штамм 45/20 (R-форма) и полидисперсного адъюванта (53).

В последние годы Шумиловым К.В. и Калмыковым В.В. (76) запатентована «Вакцина против бруцеллеза крупного'рогатого скота». Она содержит в р , своем составе инактивированную формалином с гидратом окиси алюминия бактериальную массу (300-400* 109 микробных клеток в 1 мл B.abortus, штамм № KB 17/100 в R-форме и неполный адъювант Фрейда. По данным авторов, эта вакцина, не индуцирующая образование S-антител, способна обеспечивать защиту от бруцеллеза 69-80% морских свинок при заражении их вирулентными культурами В. abortus через 3 месяца после вакцинации.

В этих условиях современная иммунология стремится к совершенствованию и созданию новых вакцинных препаратов на принципиально новых подходах, основанных на использовании знаний о клеточных и молекулярных механизмах развития иммунитета, точных данных о структуре антигенов и кодирующих их генах, на применении современных методов биотехнологии и компьютерного анализа.

В настоящее время в РФ проводятся исследования по созданию Сплит-вакцины (split - англ. расщеплять), состоящей из антигенов бруцелл, полученных химическими и физическими методами. Сплит-вакцины не являются гомогенными, содержат примесь отдельных органических соединений или комплексы, состоящие из белков, полисахаридов и липидов.

Поиск высокоэффективных и безопасных для человека и животных средств иммунопрофилактики бруцеллеза в последние годы преимущественно направлен на изыскание щадящих способов инактивации микроорганизi мов, а также методов выделения структурных компонентов бруцелл, сохраняющих полноценными их иммуногенные свойства (89, 95, 106).

Поэтому, выбор оптимальной антигенной основы для создания противо-бруцеллезных вакцин для животных является актуальной задачей для ветеринарии.

Цель и задачи исследований.

Цель настоящих исследований - получить различные антигены культур штаммов Brucella melitensis Rev-In Brucella abortus 19 В А и оценить перспективность их использования в качестве основы противобруцеллезной вакцины для мелкого рогатого скота.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Получить посевные культуры штаммов В. melitensis Rev-1 и В.abortus 19 ВА при культивировании их на плотных и жидких питательных средах.

2. Провести культивирование В. melitensis Rev-1 и В. abortus 19 В А в биореакторах марки «Биор 0,25» и сконцентрировать их биомассу методом ультрафильтрации. ^ А

3. Получить субклеточные фракции культур штамма В. melitensis Rev-1 различной функциональной направленности.

4. Получить корпускулярные антигены культур штаммов В.melitensis Rev-1 и B.abortus 19 В А и приготовить комбинированный корпускулярный антиген изучаемых бруцелл.

5. Смоделировать инфекционный процесс при бруцеллезе на лабораторных животных и разработать метод обострения течения инфекции.

6. Изучить иммуногенность приготовленных антигенов бруцелл в опытах на лабораторных животных.

7. Изучить иммуногенность комбинированного инактивированного корпускулярного антигена в опытах на овцах. •

Научная новизна.

1. Впервые получен комбинированный инактивированный корпускулярный антиген на основе культур штаммов В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА в соотношении 1:2, обладающий иммуногенными свойствами. Титр антител у иммунизированных морских свинок и овец составил не менее 1:50.

2. Применение комбинированного инактивированного корпускулярного антигена для специфической профилактики бруцеллеза у овец позволяет предотвратить заражение бруцеллезом 80.% животных.

3. Полученные методом гель-хроматографии белковые фракции В. melitд ensis Rev-1 с молекулярной массой (135±1,5) кД, (50±10) кД и (25±5) кД обладают слабыми иммуногенными свойствами^и являются не перспективными для создания на их основе вакцинных препаратов для специфической профилактики бруцеллеза животных.

4. Впервые установлено, что введение иммунодепрессанта циклофосфаI на в дозе 200 мг/кг веса животного на 21-30 сутки после инфицирования возбудителем бруцеллеза обеспечивает обострение инфекционного процесса и повышает на 20% информативность бактериологического метода обследования искусственно зараженных морских свинок и овец. л •

5. Применение усовершенствованного бактериологического метода выявления больных бруцеллезом животных с обострением инфекционного процесса путем подкожного введения циклофосфана позволило доказать высокую антибактериальную эффективность пефлоксацина в отношении бруцелл у зараженных бруцеллезом морских свинок. Терапевтическая эффективность пефлоксацина в условиях смоделированного инфекционного процесса при бруцеллезе составила 90%.

6. Впервые разработан метод глубинного культивирования культур штаммов В. melitensis Rev-1 и В.abortus 19 ВА с использованием биореакторов марки «Биор-0,25». Выход биомассы при выращивании культуры штамма B.melitensis Rev-1 был выше в 1,3 раза, чем В.abortus 19 ВА.

Практическая значимость.

1. На производственном участке ООО «Агровет» (г. Киров-200) воспроизведена технология глубинного культивирования культур штаммов В. melitensis Rev-1 и В.abortus 19 В А с использованием биореакторов марки «Биор-0,25». Получено по 3 серии культур штаммов бруцелл с высоким выходом бактериальной массы.

2. На базе лицензированной по работе с микроорганизмами I-IV групп патогенности лаборатории НИИ микробиологии МО РФ (г. Киров) успешно проведено моделирование инфекционного процесса при бруцеллезе морских свинок и овец. Разработан метод обострения инфекционного процесса с использованием иммунодепрессанта циклофосфана.

3. Разработанный комбинированный инактивированный корпускулярный антиген на основе культур штаммов В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19

ВА в соотношении 1:2 является перспективным для создания на его основе j вакцинного препарата для специфической профилактики бруцеллеза животных.

4. По результатам исследований составлены и утверждены в установленном порядке 2 отчета о научно-исследовательской работе (промежуточный и заключительный) на тему: «Создание иммунббиологических средств защиты животных на основе корпускулярных коньюгированных и субъединичных компонентов микроорганизмов-возбудителей бактериальных и грибковых (Trichophyton) заболеваний».

5. Разработаны методические рекомендации: «Технология глубинного культивирования вакцинных штаммов В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА», «Метод обострения инфекционного процесса при бруцеллезе животных», «Получение растворимых и корпускулярных антигенов бруцелл».

6. Материалы исследований используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ при изучении дисциплин «Иммунология», «Ветеринарная микробиология» и «Биотехнология».

Личный вклад соискателя. Автору принадлежит непосредственное участие во всех этапах работы, в т.ч. в культивировании бруцелл поверхностным и глубинным методами, в получении различных белковых фракций бруцелл методом гель-хроматографии, создании комплексного корпускулярного инактивированного антигена изучаемых бруцелл, моделировании инфекционного процесса при бруцеллезе на морских свинках и овцах, определении реактогенности и иммуногенности полученных антигенов с использованием лабораторных животных и овец, анализе и обобщении полученных результатов исследований.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с микробиологом производственного участка ООО «Агровет», доктором биологических наук, профессором Кузнецовым С.М., которому выражаю глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Апробация результатов диссертации: Основные результаты исследований доложены на научно-практической конференции молодых ученых (Москва, 2006); на XV Московском международном ветеринарном конгрессе, на секции «Болезни крупного рогатого скота» (Москва, 2008); на международной конференции «Щука и образование для целей биобезопасности» (Пущино, 2008); на международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения» (г. Дубровицы, 2008).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 4 статьи, в т.ч. 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК (Ветеринарная медицина, Ветеринария и кормление).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 129 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, практическое использование полученных научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (121 источник, в т.ч. 39 - иностранных авторов). Работа содержит 25 таблиц, 14 рисунков, 10 страниц прилржений.

Похожие диссертационные работы по специальности «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», 06.02.02 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Крыканов, Артем Александрович

4. ВЫВОДЫ

1. Методами гель-хроматографии, ультразвуковой дезинтеграции, «замораживания-оттаивания» и термохимического инактивирования получены растворимые и корпускулярные антигены двух штаммов бруцелл B.melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА (суммарные белки B.melitensis Rev-1; белковые фракции B.melitensis Rev-1 с молекулярными массами 135±15, 50±10 и 25±5 кД; инактивированные .корпускулярные антигены B.melitensis Rev-1 и B.abortus 19 В А; комбинированный инактивированный корпускулярный антиген на основе культур штаммов В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА в соотношении. 1:2), 9бладающие иммуногенными свойствами.

2. Полученные методом гель-хроматографии на сефадексе G-100 белко * * » вые фракции B.melitensis Refv-1 с молекулярными массами 135±15, 50±10 и

25±5 кД содержали от 12;0±0,09% до 25,0±0,2%, белка и от 13,2±0,9 до 31,0 * I *

0,9% нейтральных Сахаров при отсутствии • лйпополисахаридов. Данные фракции вызывали выработку антител у морских свинок в титре 1:10, но не обладали протективными свойствами. "

3. Бруцеллы устойчивы к замораживанию и последующему оттаиванию микробной < суспензии и получение дезинтегрированных культур штамма B.melitensis Rev-1, не.содержащих Лживые клетки бруДелл, возможно только после проведения 10 циклов «замораживания-оттаивания». Концентрация • 1 ф суммарных белков бруцелл при этом составляет 60 мгУмл. \ *«

4. При получении инактивированного корпускулярного антигена добавление в концентрированную микробную суспензию бруцелл формальдегида

Л > ' 0 до конечной концентрации 0,4% и двукратное нагревание суспензии до 48 С I в течение 1 'часа приводит к полной инактивации бруцелл и сохранению це

1 . % лостности клеток. *

• ч *

5. Комбинированный инактивированный корпускулярный антиген на ос

• к нове культур штаммов В', melitensis Rev-1 и B.abortus 9 ВА в соотношении

1:2 вызывает у иммунизированных морских свинок и овец образование агглютининов в титре 1:50 и является перспективным в качестве основы вакцинного препарата. Применение данного антигена для специфической профилактики бруцеллеза у овец позволяет предотвратить болезнь у 80% животных. 0

6. Применение иммунодепрессанта циклофосфана в дозе 200 мг/кг веса животного на 21-30 сутки после инфицирования возбудителем бруцеллеза обеспечивает обострение инфекционного процесса и повышает на 20% информативность бактериологического метода обследования искусственно заt * • • раженных морских свинок и овец.

7. Применение усовершенствованного бактериологического метода выявления болы£ых бруцеллезом животных с обострением инфекционного про

• * • t цесса при использовании циклофосфана позволило доказать высокую анти> . бактериальную эффективность пефлоксацина в отношении бруцелл у зараженных бруцеллезом морских свинок. Терапевтическая эффективность пефлоксацина в .условиях смоделированного инфекционного процесса при бруцеллезе составила 90%. • < i

8. Технология выращивания культур щтаммов B.melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА в биореакторах марки «Биор-0,25» при температуре (37±1)°С, давлении (0,10±0,05) МПа, коэффициенте аэрации (0,7±0Д) дм3/мин, частоте ч вращения -мешалки 120 об/мин, продолжительности культивирования 28 ч, в питательной среде на- основе гидролизата мяса с содержанием аминного азота

13 0-1 fit) мг% является воспроизводимой. Получено по 3 серии культур штаммов B.meHtensis Rev-1, и B.abortus 19 В А с высоким выходом биомассы микробный; клеток - (27±7)х109 м.к./см3 и (21±5)х10® м.к./см3 соответственно.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. По результатам проведенных экспериментов составлены 2 отчета:

- «Создание иммунобиологических средств защиты животных на основе корпускулярных коньюгированных и субъединичных компонентов микроорганизмов-возбудителей бактериальных и грибковых (Trichophyton) заболеваний» (промежуточный, утв. в 2007 г);

- «Создание иммунобиологических средств защиты животных на основе корпускулярных коньюгированных и субъединичных компонентов микроор-ганизмов-дозбудителей бактериальньГх и грибковых (Trichophyton) заболеваний» (заключительный, утв. в 2008 г); *

2. Разработанные режимы "глубинного культивирования культур штам

II * • мов В. melitensis Rev-1 и .B.abortus 19 ВА в биореакторах марки «Биор-0,25» используются на производственном участке ООО «Агровет» (г. Киров-200) для получения биомассы бруцелл с целью приготовления вакцинных препаратов. ' «

3. РазраС&танныи мето!ц обострения инфекционного процесса с испольг зованием иммунодепрессанта циклофосфана применяется лабораторией НИИ микробиологии МО РФ (г. Киров), лицензированной по работе с микроорганизмами I-JV групп патогенности, при моделировании инфекционных про, ' t цессов при особо опасных болезнях человека и животных.

4. Разработанный комбинированный инактивирд^занный корпускулярный антиген на основе культур штаммов .В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА в соотношенйи 1:2 является' основой дця создания вакцинного препарата для специфической профилактики бруцеллеза животных.

5. Разработанные методические рекомендации «Технология глубинного культивирования вакцинных штаммов В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19

I '

ВА», «Метрд обострения инфекционного процесс^ при бруцеллезе животных», «Получение растворимых и корпускулярных антигенов бруцелл» используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» при изучении дисциплин «Иммунология», «Ветеринарная, микробиология» и

Биотехнология», f

6. РЕКОМЕНДАЦИЙ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ' ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать научно-производственным учреждениям комбинированный инактивированный корпускулярный антиген йа основе культур штаммор В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА в соотношении 1:2 в качестве ь основы для создания вакцинного препарата для' специфической профилактики бруцеллеза животных!.

2. Отработанные технологические параметры и режимы культивирования культур штаммов B.melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА с использованием биореакторов марки «Биор;0,25» рекомендуются' для приготовления бвак-цинных препаратов на основе других микроорганизмов.

3. Методические рекомендации «Технология глубинного культивирования вакцинных штамм9в В. melitensis Rev-1 и B.abortus 19 ВА», «Метод обо» '

• » • > v * стрения инфекционного процесса при бруцеллезе животных», «Получение 1 . . растворимых и корпускулярных антигенов бруцеЛл» рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплинам «Иммунология», «Ветеринарная микробиология» и «Биотехнология».

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Крыканов, Артем Александрович, 2010 год

1. Авилов В.М. Эпизоотологический надзор при бруцеллезе крупного рогатого скота в современных условиях: Автореф. дисс. доктора вет. наук. С-Пб, 1977. - 49 с. ;

2. Авилов В.М., Селиверстов В.В. Бруцеллёз животных и его специфическая профилактика //Ветеринария. 1997.- № 7.- С. 3-13.

3. Артемов Б.Т. Экспериментальное изучение иммуногенных свойств противобруцеллезной вакцины из штамма В-1 //Иммунитет сельскохозяйственных животных. 1973. - С. 178-183.I

4. Ассонов Н.Р. Микррбиология.- М.: Колос.- 2002.- 350 с.

5. Аутоиммунные процессы у больных различными формами хронического бруцеллеза /О. Ц. Мололкина, А.А. Шульдяков, Е.Г. Гладилина и др. //Успехи современного естествознания. 2006. - № 2. - С. 60.

6. Бажин М.А. Иммунологичесь&я память и толерантность у телят прибруцеллезе //Ветеринария. 1'984. - № 1. -С. 29-30.9

7. Базиков И.А., Бондаренко А.И: Ультраструктура L-форм бруцелл и культур-ревертантов Г/ Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.1991.-№ 1.'-С. i7-20.%

8. Белоусов Е.С., Ощепков В.Г. Иммуноферментный метод для диагностики бруцеллеза КРС. //Сельскоозяйственная биология. 1986. - № 11. - С.i *122.132.

9. Богословский С.Н., Григорьева Г.И. Применение многомерного статистического анализа для сравнительного изучения белковых спектров бактеtрий // Биохим. ц биофиз. микроорг. Горький, 1977. -С. 116-119.

10. Бруцеллы и (руцеЗшез. Микробиология, иммунология, биотехнология /Григорьева Г.И., Сочнев В.В., Бацанов Н.П. и др. /Под ред. Чл.-корр. РАСХН Сочнева В.В.- Н.Новгород: НГСХА.- 1998.- 246 с.

11. Бруцеллез. СП 3.1.085-96, ВП 13.3.1302-96 /Сборник санитарных и ветеринарных правил "Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных".

12. Бруцеллез 'собак, вызываемый В.canis— ретроспективный анализ встречаемости по С.-Петербургу за 2006-2007 г. /Яшин А.В., Кузина Т.Б., Климанов А.И. И др. // Ветеринарная практика. 2007.- № 4. - С. 23-26.

13. Буткин Е.И. Бруцеллез! В кн. Эпизоотология с микробиологией под ред. Бакулова И.А.- М.: Колос,- 1981.- С. 145-152.9 .

14. Вагина JI.A. Диагностика бруцеллеза северных рленей методом им-мунофлуоресценции //Ветеринария. 1972. - № 1. - С. 14-17.

15. Вагина JI.A., Никулина В.И., Гоппе А. С Стабильость свойств

16. Br. rangifere В :209 //Диагностика, профилактика и терапия болезней жи«вотных на крайнем Севере: Сб.науч.тр.- Новосибирск: НГУ,- 1983. С. 3-8.

17. Вашкевич Р.Б., Касьянов И.А. Изучение «ротивобруцелленой вакцины из штамма Rev-1 северных оленях //Диагностика, профилактика и терапия болезней животных на крайнем Севере: Сб.науч.тр.- Новосибирск: НГУ.--1983.-С. 13-16. •

18. Векслер И. Г\ Сравнительное изучение влияния некоторых специфических стимуляторов на иммунный ответ организма // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1990.-№ 7. - С. 64-67.

19. Воробьев А.А., Яяшенко В.А. Иммунобиологические препараты: настоящее и будущее //Журнал^микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.1995.-№ 6.-С. 105-111. \ ' Л'" «'" ' ' *

20. Выделение,и идентификация культур В. canis /Скляров О.Д., Клима1.V .нов А.И., Шумилов К.В. и др. // Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ».

21. М.: ВГНКИ.- 2007-Т. 68.- С. 125- 126.

22. Глонти Т.М. Аллерическое состояние овец, привитых разными вакцинами против бруцеллеза.- Тр. ВГНКИ. 1973. -19.- С. 84-88.

23. Глотов Г.Н!, Глотова Г.И. Опыт оздоровления овец от бруцеллеза //Ветеринария.- 2005. № 3.- С.22-25.

24. Григорьева Г.И., Йгнатовч'П.Е. Протективные антигены как факторы патогенности при конструировании вакцин // Сельскохозяйственная биология. 1987. - N 12. - С. 100-104/

25. Григорьева Г.И., .Игнатов П.Е., Федоров А.И. Спороб получения анfтигенов из бактерии рода ВпюеИа // А.с. 1631786 СССР. 15.09.88. Опубл.oi.ii.9o. . ' ;1.■

26. Григорьева Г.И., Сочнев В.В. Тихомирова Е.А-.'Способ определенияУпротивобруцеллезных антител в биологических жидкостях //А.с. 1387661

27. СССР. 07.г08.86.-'Опубл, 08.12.87. 'f

28. Григорьева Г.И., Сочнев В.В., Игнатов П.Е. Оптимизация биотехнологии получения антигенов бруцелл //Всесоюзн. иммунолог, съезд. Сочи, 1989. - С. 147.

29. Григорьева Г.И., Улицкая А.А. Применение иммуноферментного анализа для определения противобруцеллезных антител в сыворотке крови крупного рогатого • скота'//• Вестник сельскохоз.науки. 1990, № 2. -С. 8691. . -'/■ • ■

30. Демина Т.А., < Сочнев В'.В., Григорьева Г.И. Изучение гостальности1 * возбудителя бруцеллеза крупного рогатого скота-/Профил. и лечен, заболев.сельскохоз. животн. в Нечерноз. зоне РСФСР: Сб.нйуч.тр. Горький:1. ГСХИ.- 1985.-С. 13-14.

31. Девришов Д.А., Янышев А.А. Результаты эпизоотологического анализа по бруцеллёзу животных //Ветеринария. 2006. - №. 6 - С. 30.г

32. Деврйшов Д.Д., Янышев А.А. Эпизоотическая обстановка по бруцел' *лёзу животных в Российской Федерации и Республике Дагестан //Ветери• * * • •нарная медицина. 2007. - С. , 16-17.•9 *

33. Драновская Е.А.* Биологические свойства бруцелл и получениедиагностического и профилактического антивена: Автореф. дисс. докт.* »мед. наук. М., 1'97'6. - 44 с.• *• « «

34. Драновская Е.А.,-Вершилова П.А., Чернышева М.И. К вопросу о1. С- * *структуре и биологических свойствах антигенов, выделенных из бруцелл• ••• 1 1

35. Желудкбв fM.M., Павлова И.П., Курманова К.Б. Определение специфических, циркулирующих в крови иммуннщх комплексов при бруцеллезной инфекции // Журнал микробиол., иммунол. и эпидемиол. 1988. - N 8.i 1 ' . , . . -С. 59-62. • ' 't- V

36. Захарова И.Я., Косенко JI.B. Методы изучения микробных полисахаридов. Киев: АН УССР. - 1982. - 165 с.

37. Зинова А.А. Диагностика бруцеллеза собак, вызываемого В. canis. //Ветеринарная патология. 2006.- № 3 (18) - С. 11-14.

38. Игнатов П.Е. Перспективы конструирования вакцин против бруцеллеза на основе их протективного антигена //Бюллетень.ВИЭВ. 1983. - Вып. 50.-С. 3-6.

39. Игнатов П.Е. Обоснование разработки иммуноактивных препаратов для лечения профилактики инфекционных болезней: Автореф. дисс. докт.биол. наук.'- С-Пб. 1994.*- 36 с.• *

40. Игнатов П.Е., Федоров А.И. Способ получения бруцеллезного антигена: А.с. N 1256258 (СССР). 1984.I

41. Климаноь' А.И.', Малахова Т. И., Шумилов К. В. Результаты изучения биологических свойств. штамма Br. abortus 82 // Сборник научных трудов1. ВГНКИ. 1983.- С: 14-19. •

42. Колычев Н.М., ГоСманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология.-М.: Колос.- 2003.- 432 с. .f

43. Косилов И.А., Новицкий А.А. Меры борьбы с бруцеллёзом и туберкулёзом крупного рогатого скота //Ветеринария.- 1987.- № 7.- С. 6-8.1

44. Клинико-лабораторная эффективность циклоферона в комплексном лечении больных Хроническим бруцеллезом /О.Н. Мололкина, А.А. Шульдяг"

45. Костюкова Н.И., Езепчук Ю.В. Методические подходы к конструированию химических вакцин против бактериальных инфекций //Журнал мик-робиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1984. N 8. - С.3-8.

46. Литвинов О.Б:, Девришов Д.А., Янышев А.А. Бруцеллёз в России //Ветеринарная жизнь. 2007. - № 2 - С. 14.

47. Малйков В.Е. Роль липополисахарида бруцелл в формировании ги>перчувствительности замедленного типа //Журнал микробиол., эпидемиол. ииммунобиол. 1986. - № 2. - С. 112-114.♦ *

48. Малышева Л.А. Система противоэпизооТических ' мероприятий при бруцеллезе крупного рогатого скота в зоне интенсивного ведения животноводства: Айтореф. дисс. докт. вет. наук.- С-Пб., 1995. 36 с.' i

49. Механизм действия и применение циклоферона в клинике инфекционных болезней /Е.П. Ляпина, О.Г. Шульдякова, О.Н. Мололкина и др. //Вестник. Санкт-Петербургской государственной академии им. И.И. Мечникова.- 2005,- № 1.- С. 182-185.f

50. Методические рекомендации по диагностике бруцеллеза собак, вызываемого B.canis: ут'вёрждены директором ФГУ «ВГНКИ» Паниным А.Н.

51. М.: ВГНКИ.-2009.-46 с. ' •' •

52. Перспективные вакцины против бруцеллёза крупного рогатого скотаI

53. К.В.Шумилов, О.Д.Скляров, А.И.Климанов и др. // Ветеринария Кубани. -№ 4. 2008. - С. 2-Ч:1.! «

54. Перспективы изучения цитокинового статуса при хроническом бруцеллезе / Е.П. Ляпина, О.Н. Мололкина, И.А. Бережнова и др. //Успехи современного естествознания. — 2004. № 12. - С. 55-56.

55. Прогнозирование рецидивов заболевания у больных хроническим бруцеллезом /Е.Г. Гладилина, Е.П. Ляпина, А.А. Шульдяков т др. //Успехи современного естествознания. 2006. - № 1. - С. 53.

56. Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей.- ГТСВ РФ: Методические указания.- утверждены 30.01.2003.- № МУ 3.1.7.1189-03.

57. Показатели цитокинового профиля у больных различными формами хронического бруцеллеза /Е.Г. Гладилина, А.А. Шульдяков, Е.П. Ляпина идр. //Успехи современного естествознания. 2006. - № 1. - С. 54.

58. Показатели интерфероногенеза у больных различными формами хронического бруцеллеза /О.Н. Мололкина, Е.Г. Гладилина, А.А. Шульдяков и др. // Успехи современное естествознания. 2006. - № 2. - С. 60-61.г

59. Рачкова О.Ф., Григорьева Г.И., Лазовская А.Л. Экспресс-идентификация бруцелл Методом газо-жидкостной хроматографии жирных кислот //Актуальн. вопр. профил: бруцеллеза: Сб.науч.тр. Нрвосбирск: НГУ.- 1989.-с. 129-130. '

60. Рягузов В.П., Потатуркин П.М. Изучение на овцах иммуногенности жидкой и сухой вакцины из штамма Br. abortus 21 //Сборник научных трудов Донского СХИ. 1976. - 711. - Вып. 2. - С. 105-109.

61. Ряплова И.В. Современные эпидемиологические особенности бруцеллеза в Оренбургской области //Здоровье наоелени^ и среда обитания. — 2007.-№ 9.'-С. 39-43.- х

62. Ряплова И.В., Скачков М.В. Эпидемиологическая характеристикаф * ' iвспышек бруцеллёза в Оренбургской области за 1990 2006 гг. //Здоровьенаселения и среда обитания. 2007. - № 11. - С. 37 - 39.-

63. Ряплова И.В. Заболеваемость бруцеллезом городского населения Оренбургской области //Материалы IX съезда Всерос. -науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и'паразитологов. М.: Санэпидмедиа.- 2007. -Т. 1.-С. 191. . ' '

64. Ряплова И.В., Скачков М.В. Вспышки бруцеллеза в Оренбургской области //Организация противоэпидемических мероприятий по профилактике геморрагической лихорадки с почечным синдромом: Материалы Всерос. на-уч.-практ. конф. Оренбург,'2007. - С. 138 - 140.

65. Самыгин В.М., Зыкин Л.Ф., Степанов В.М. Газохроматографиче-ский анализ жирнокислотного состава бактерий //Журнал микробиол,, эпидемиол. и иммунобиол. 1994.- № 4.- С. 10-12.

66. Скляров О.Д., Логинов Й.А., Серегин И.Г. Бруцеллез животных. Диагностика, профилактика, меры борьбы и ветеринарно-санитарная экспертиза.-М.: МГУПБ.-2008.-256 с."

67. Синдром эндотоксикоза у больных различными формами хронического бруцеллеза / Е.Г. Гладилина, О. Н. Мололкина, А.А. Шульдяков и др.

68. Успехи современного естествознания. 2006. - № 1. - С. 54-55.1.'

69. Совершенствование дйагностики хронического бруцеллеза: Информационное письмо'.- Утв. МЗ Сарат. обл. /сост: А.А. Шульдяков, О.Н. Мололкина, Е.Г. Гладилина! Саратов: Агро.- 2006. - 6 е.

70. Сочнев В'.В. Проявление бруцеллеза крупного рЬгатого скота в свежем эпизоотическом очаге //Методы профилактики и лечения инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных в Нечерноземье.- Горький: НИВИ.- 1984. -С.'21-27.1.'

71. Сочнев В.В.' Григорьева Г.И., Горчакова Н.Г. Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза живот' * * . •ных.- Н.Новгород: ДСХА.- 1997. 96 с.

72. Таран И.Ф., Лямкин- Г.И. Бруцеллез (Микробиология, иммунология, эпидемиологияj"профилактика). Ставрополь, 1996. - 176 с.

73. Шевкопляс В.Н. Обеспечение эпизоотического благополучия и безопасности в ветеринарно-санитарном отношении продукции животного происхождения российского производства в Краснодарском крае // Ветеринария Кубани.-№5.-2008.-С. 2-5. ,г

74. Юсковец М.К. Бруцеллез сельскохозяйственных животных.- М.: Колос. 1960. - 228 с.'.' "• *

75. Юсковец М.К., Комсова Д-.И. Данные по испытанию вакцины противбруцеллеза из штамма Br. abortus 68 // Труды ГНКИ вет. препаратов. 1955. 5.-С. 84-93..

76. Янышев А.А. Бруцеллёз крупного и мелкого рогатого скота в Южном федеральном округе: эпизоотологичекий мониторинг и совершенствование против9эпи-зо-отичеСких мероприятий.// Автореф. дисс. канд. вет. наук. -Москва. 2007. -21 с.

77. Янышев А-А. Эффективности вакцинопрофилактики против бруцеллёза сельскохозяйственных животных в Южном Федеральном округе //Деп. в

78. ВИНИТИ 25.04.2007 № 472-В 2007. . * ;1.. • • •

79. Яременко. Н.А. Эпи5осГгическая ситуация в мире и Российской Федерации. М.: Знание. - 200li ^ 48 с.

80. Яковлев • А.Г. Эп'изоотолого-эпидемиологическая характеристика бруцеллеза в Оренбургской области //Актуальные -проблемы здоровья населения Сибири: Сб.науч.тр. Ом.ск: ОГУ.- 2004. - Т. 1. - С. .382 - 385.• • *

81. Afzai М., Brodie S.J.,Tengerdy R.P. Isolation and antigenic activity of

82. Brucella ovis outer membrane proteins //J. Clin. Microbiol., .1987.-25. - P. 2132* . f *2137. ' ' '

83. Aldret-Servent A., Bourg G., Ramus M. DNA polymorphism in strains of the genus Brucella //J.Bacterid. 1989. - 170. - № 10 - P. 4603-4607.

84. Antczak D.F., Winter A.J. Evaluation of lymphocyte blastogenesis for diagnosis of bovine brucellosis // 3rd Inter. Symp. on Brucellosis. Algiers, Algeria., 1983. Envelop, biol.- Standard. - 1984. - V.56. - P.357-370.1. V *

85. Baldwin C.L.y Verstreate D.R., Winter A.J. Immune response of cattle to

86. Brucella abortus outer membrane proteins measured by lymphocyte blastogenesis //Vet. Immun. Immunopathol. 1985. -9. - P.383-388.

87. Bertram A.F., Eter C., Canning J.A. et al. Preferential inhibition of primary granule release from bovine neutrophilis by a brucella abortus extract // Inf. Imm. 1986. -V.52. - No.l. - P.285 - 292.

88. Berman D.T., Kurtz R.S. Relationship of biological activities to structures of brucella abortus endotoxin and LPS // Ann. Inst. Pasteur. Microbiol 1987. -138. -№ 1. P. 98-101."

89. Berman D.T., Wilson Ei.L, Moreno E. Characterization of Brucella abortus soluble antigen employed in immunoassay // J. Of Clinical Microbiol. 1980. -№ 11.-P. 355-362.'

90. Bosseray-N. Infection du placenta de la souris par Brucella pathogenie etimmunite // 3rd Inter. Symp. on Brucellosis. Algiers, Algeria., 1983. Develop, biol

91. Standard.- 1984. -V.56.- P!- 283-293.i

92. Canning P.C,., Roth J.A.,' Deyoe B.L Release of 5-guanosin monophos*»phate and adenin by B. abortus and their role in the intracellular survival of bacteria // J. Infeqt. Dis. 1986. - ,154.'. p 414. ' ^

93. Chen I.M., Thoen CQ.5jPietz D.E. Application often enzyme-linked im%munosorbent assay for detection of Brucella antigenes in vaginal discharge of cows //Amer. J. Vet. Res. 1984.- V. 45. - № 1 - P. 32-34.

94. Chukwu ,C.C. Comparison .of the brucellin skin test with the lymphocytef' • . ' . ;transformation test in bovine brucellosis // J. Hyg. 1986.- 96. - № 3. - P. 403-413.

95. Corbel M. J. Brucella phages : advances in the development of A reliable phage typing system smooth and non-smooth brucella isolates //2rd Forum in Microbiology Brucella and brucellosis Ann. Inst. Pasteuer Microbiol. 1987. - V. 138 .-№ l.-P. 70-75.

96. Corbel M. J. Brucellosis: An Overview // Emerg. Infect. Dis. 1997.

97. Apr; 3. P. 213-22 12. Lang R., Banai M., Lishner M., Rubinstein E. Brucellosis //1.ternational J. of Antimicrobial Agents. 1995. - 5. - N 4. - P.203-208

98. Dubray G Proective antigens in brucellosis // 2 rd Forum in Microbiology Brucella and brucellosis: Ann. Inst. Pasteur Microbiol. 1987. - V. 138 .- № 1.- P. 84-87.•t *

99. Frenchick P.J., Markham R.J., Cochrane A.M. Inhibition of phagosome-lysosome fusion in macrophages by soluble extracts of virulent Brucella abortus //1. У t ' • . •

100. Am. J. Vet. Res. 1985. - 46 3^2-338.i .

101. Juszczyk J. Brucella abortus infection as a-clinical problem // Hexagon1. F • % щ

102. Roche. 1984.- 12.- № 6. - P. 11-16. * • *i t * ,

103. Isbert R.R., Voorchis'D.L., Falkow S. Identification of invasin a protein that allows enteric bacteria to penetrate cultured mammalian Cells // Cell.- 1987.50. P. 769-775. •• ' , f ' •

104. Lord V.R., Rolo M.R., Cherwonogrodzky J. W. Evaluation of humoral immunity to Brucella spp. in cattle by use of an agar-gel immunodiffusion test containing a polysaccharide antigen // Amer. j. Veter. Res. 1989.,- V. 50. - № 11. - p. 1813-1816. ; .r

105. Lubani M., Sharda D., Helin T. Probable transmission of brucellosis from breast milk to a newborn // Trop. Geogr. Med. 1988. - 40. - P. 151-152.

106. Marx A., Jonescu J., Pop A. Immunochemical studies on Brucella abortus lipopolysaccarides //Zbl. Bakt.'; I. Abt. Orig. 1983. - 253. - P.544-553.к• r •

107. Meyer M.E. Inter and'intra-strains variants in the genus Brucella // 3rd Inter. Symp. on Brucellosis , Algiers, Algeria., 1983. - Develop, biol Standard .1984. V. 56".-P.79-83.

108. Montaraz J'.A., Winter A.J., Hunter D.M . Protection against Brucella abortus m mice with O-polysaccharide-specific monoclonal antibodies I I Infect. Immun. 1986. - 51.- P. '961-963. Jt » •л . "

109. Morgan W.J.B. Brucella classification and regional distribution // 3rdi1.ter. Symp. On Brucellosis , Algiers, Algeria., 1983. Develop, biol Standard . -1984. - V. 56. - P.45-53.

110. Nielsen K„ Wright P. F., Cherwonogrodzky J., Duncan J. R. Enzyme immunoassay for diagnosis of bovine brucellosis // 2rd Forum in Microbiology Brucella and brucellosis: Ann. Inst! Pasteur Microbiol. 1987. - V. 138 .- № 1.-P.75-79. - ' * •; ' T

111. Plommet M. Brucellosis and immunity : Humoral .and cellular compoTnents in mice// 2rd Forum in Microbiology Brucella and'brucellosis: Ann. Inst. Pasteur Microbiol-. 1987. - V. 138 .- № 1 . P.105-110.1

112. Riley L,'Robertson D. Ingestion and intracellular survival of Brucellaabortus in human and bovine, polymorphonuclear leukocytes // Infect, and Immun.- 1984. 46. - № 1. - P-224-230. i

113. Ryter A., Chastelli.er C. Phagocyte Pathogenic Microbe Interactions

114. Anternat. Review of Cytology, 1983. - 85. - P. 287-327.

115. Santos J. М.м Verstreate D. R., Perera V. V., Winter A. J. Outer membrane proteins from rough strains of four Brucella species // Infect. Immun. 1984. -46. -P. 188-194:

116. Smith L. D., Ficht T. A. Pathogenesis of Brucella // Crit. Rev. In Microbiology. 1990. - 17. -№ 3. - P. 209-230.

117. Tabatabai'L В., Deyoe B.L Specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Detection of Bowine Antibody to Brucella abortus // J. Ctin. Microbiol. -1984. 20. - № 2. - P. 209-213.'

118. Verstreate D.R. Creasy M.T., Caveney N.T. Outer membrane proteins of Brucella abortus isolation and characterization // Infect. Immun. 1992. - 35. -P. 979-984. . ' \

119. Winter A.J-., Rowe G.E., Duncan J.R. Effectivenes of natural and syn?thetic complexes of porin arid О polysaccharide as vaccines against Brucella abortus in mice // Infect, and Immun: -2002.- 56.- № 11.- P. 2808-2817.•

120. Worthington R., Weddelt A.,'Penrose M. Comparision three serologica.l methods for , detecting B.ovis infected ovises // New Zeland Vet. J. 1994. - 32. -P. 58-60.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.