Получение, свойства и применение композитных полимерных гидрогелей с иммобилизованными белками и пептидами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат химических наук Купцова, Светлана Владимировна

• Купцова, Светлана Владимировна
• кандидат химических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат химических наук Купцова, Светлана Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Полимеры, чувствительные к изменению внешнего сигнала.

1.2. Полимерные гели на основе термочувствительных полимеров.

1.2.1. Фазовый переход в термочувствительных полимерных системах.

1.2.2. Влияние состава и строения полимерного геля на критическую температуру и набухание.

1.2.3. Особенности термочувствительных полимеров класса 14-виниламидов.

1.3. Применение термочувствительных полимеров и гелей на их основе в биотехнологии.

1.3.1. Использование термочувствительных свойств полимеров в хроматографии.

1.3.2. Использование термочувствительных гелей для концентрирования жидкостей.

1.3.3. Иммобилизация ферментов в матрицы на основе термочувствительных полимеров.

1.3.3.1. Получение конъюгатов ферментов с термочувствительными полимерами.

1.3.3.2. Иммобилизация ферментов в гелях термочувствительных полимеров.

1.3.3.3. Использование ферментов, иммобилизованных в гели на основе термочувствительных полимеров, в водно-органических средах.

1.4. Применение монокомпонентных и композитных гелей на основе термочувствительных полимеров в медицине.

1.4.1. Системы на основе термочувствительных полимеров для перорального введения.

1.4.2. Системы на основе термочувствительных полимеров для введения через слизистые.

1.4.3. Термочувствительные липидные системы.

1.4.4. Полимерные покрытия для заживления ран.

1.4.4.1. Тромбин и пептиды, обладающие тромбиноподобным действием, как пепрспективные средства для заживления ран.

2 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

2.1. Получение стабильных препаратов ферментов лиофильным высушиванием в присутствии поли-14-виниламидов.

2.2. Иммобилизация протеолитических ферментов/пептидов в композитный ПВК-СаА^ гидрогель.

2.2.1. Получение гранул/пленок композитного ПВК-СаА^ гидрогеля.

2.2.1.1. Получение магнитных гранул композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованными протеазами.

2.2.1.2. Получение гранул композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованным в них тромбином.

2.2.2. Получение пленок композитного ПВК-СаА

§ гидрогеля иммобилизованными в них тромбином или пептидами.

2.2.2.1. Получение пленок композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованным тромбином.

2.2.2.2. Получение пленок композитного геля ПВК-СаА^ с иммобилизованными в них пептидами.

2.3. Исследование свойств протеаз, иммобилизованных в гранулы композитного ПВК-СаА^ гидрогеля.

2.3.1. рН-зависимость для нативного и иммобилизованного химотрипсина.

2.3.2. Влияние температуры на активность нативного и иммобилизованного химотрипсина.

2.3.3. Изучение влияния органических растворителей на сохранение протеолитической активности нативного и иммобилизованного трипсина.

2.4. Использование иммобилизованных в композитный ПВК-СаА^ гидрогель протеолитических ферментов/пептидов.

2.4.1. Использование гранул с иммобилизованным химотрипсином в водно-органической среде в качестве биокатализатора в реакции получения энантиомеров фенилаланина.

2.4.2. Исследование возможности применения пленок композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованными тромбином/пептидами как ранозаживляющих средств.

2.4.2.1. Использование пленок композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованным тромбином для заживления ран.

2.4.2.2. Использование пленок композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованными пептидами для заживления ран.

2.4.2.3. Использование покрытых поли-Ь-лизином и хитозаном пленок композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованными пептидами для лечения ран.

3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1 Материалы

3.2 Методы исследования

4 ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение, свойства и применение композитных полимерных гидрогелей с иммобилизованными белками и пептидами»

Данная работа выполнена в Институте биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова в соответствии с планом НИР и отражает одно из направлений использования полимерных композитных материалов для биотехнологии и биомедицины.

Полимерные системы с иммобилизованными белками (ферментами, антителами) и пептидами находят все более широкое применение в биотехнологии и в различных областях медицины в качестве терапевтических средств для лечения местных и системных заболеваний [1;2], экстракорпоральной очистки биологических жидкостей [3], поверхностной обработки ран и ожогов [4], в клинических анализах [5]. Иммобилизованные ферменты успешно используются как биокатализаторы в различных областях тонкого органического синтеза, в частности, в синтезе олиго- и полинуклеотидов [6], олиго- и полисахаридов [7;8], олигопептидов [9; 10], для разделения рацемических смесей и получения энантиомеров [8;11;12], для регенерации кофакторов ферментативных реакций [13].

Известно, что нестабильность некоторых белков ограничивает их широкое использование. Иммобилизация позволяет успешно решать проблему стабилизации белков, в том числе ферментов, а также многократно их использовать. Однако общеизвестными методами не удается иммобилизовать некоторые лабильные ферменты, в частности, тромбин и карбоксипептидазу В. Поэтому создание новых материалов и на их основе методов для иммобилизации нестабильных белков, в частности, ферментов, является актуальной задачей.

В последнее время особый интерес исследователей вызывают так называемые «умные полимеры», которые способны изменять свои свойства или структуру в ответ на сигнал окружающей среды. При внешнем воздействии (рН, температура, химический 7 сигнал, электрическое поле и др.) микроструктура таких полимеров быстро и обратимо изменяется от гидрофильного до гидрофобного состояния [14]. Введение "умных" полимеров в состав композитных материалов позволяет получать полимерные системы с заданными свойствами. Особенно привлекательны водорастворимые полимеры, чувствительные к изменению температуры или рН в физиологическом интервале, поскольку их свойства идеально подходят для иммобилизации биологически активных веществ (ферментов, белков, пептидов, ДНК и др.).

Среди таких полимеров пристальный интерес привлекают термочувствительные полимеры класса поли-Ы-виниламидов, в частности, гомо- и сополимеры Ы-винилкапролактама, как модели природных полимеров с амидной группой, например, белков. Они находят широкое применение в медицине и биотехнологии, входят в состав лекарственных препаратов, на их основе готовят носители для биологически активных веществ, мембраны, сорбенты [15].

Как было показано ранее, один из представителей класса поли-Ы-виииламидов, а именно, ПВК, обладает способностью образовывать комплексы с белковыми молекулами, как в растворе при комнатной температуре, так и при термоосаждении при температуре 32-37°С [16].

Целью работы являлось создание композитных гидрогелей (в виде полимерных гранул и пленок) на основе синтетического термочувствительного полимера поли-ТЧ-винилкапролактама (ПВК) и альгината кальция (СаА^) с иммобилизованными в них белками, в частности, протеолитическими ферментами и пептидами; исследование свойств таких иммобилизованных систем и возможностей их применения в качестве биокатализаторов и для ускорения ранозаживления. Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• получить гранулы (в том числе магнитные) композитного ПВК-СаА^ гидрогеля с иммобилизованными в них протеолитическими ферментами; 9

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Купцова, Светлана Владимировна

4 ВЫВОДЫ:

1. Получены гранулы композитного ПВК-CaAlg гидрогеля (в том числе с магнитным наполнителем) с иммобилизованными в них протеолитическими ферментами (трипсином, химотрипсином, карбоксипептидазой В и тромбином). Активность иммобилизованных протеиназ составляла 50-85% от исходной, а сохранение ферментативной активности - не менее 6 мес.

2. Исследованы некоторые свойства химотрипсина, иммобилизованного в гранулы композитного ПВК-CaAlg гидрогеля, в частности, рН- и температурная зависимости, термостабильность и устойчивость в различных водно-органических средах. Впервые для иммобилизованных в гранулы композитного ПВК-CaAlg гидрогеля трипсина и химотрипсина, определены кинетические параметры ферментативных реакций при различных температурах и концентрациях органического растворителя.

3. Показано, что гранулы композитного ПВК-CaAlg гидрогеля с включенным протеазами, могут быть предложены в качестве биокатализаторов в реакциях, протекающих в водно-органических средах. Химотрипсин иммобилизованный в гранулы гидрогеля успешно использовали в среде ацетонитрил-вода для получения энантиомеров фенилаланина с оптической чистотой до 87%.

4. Разработан новый метод иммобилизации тромбина в полимерные пленки ПВК-CaAlg гидрогеля, позволяющий сохранить до 50% исходной фермента.

5. Разработан новый способ иммобилизации пептидов, в частности пептидов-агонистов рецепторов тромбина (ag-PAR-1) и трипсина (ag-PAR-2), в пленки композитного ПВК-CaAlg гидрогеля.

6 Изучен эффект полимерных пленок с включенными тромбином/пептидами на процесс репарации ткани в экспериментах in vivo. Показано, что эти полимерные покрытия ускоряют ранозаживление.

5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Автор выражает глубокую благодарность к.х.н. Марквичевой Е.А. за руководство работой и д.х.н., проф. Зубову В.П. за ценные научные консультации. Автор искренне признателен также д.х.н. Румшу Л. Д. за постоянную помощь в работе.

Автор выражает глубокую благодарность д.б.н., проф. Струковой C.B. и к.б.н. Дугиной Т.Н. за плодотворную и долговременную совместную работу по исследованию влияния пленок композитного ПВК-CaAlg гидрогеля с иммобилизованными тромбином/пептидами на заживление ран. Автор благодарит также к.х.н. Ланге за проведение гистологических исследований. Автор выражает особую признательность к.б.н. Дугиной Т.Н. за постоянную помощь и поддержку в работе и консультации при написании диссертации.

Автор искренне признателен д.х.н., проф. Белоконю Ю.Н. и к.х.н. Кочеткову К.А. за проведение совместной работы по использованию иммобилизованных в гранулы композитного ПВК-CaAlg гидрогеля ферментов в качестве биокатализаторов в реакциях в водно-органических средах.

Автор выражает глубокую благодарность к.х.н. Бурякову А.Н. за предоставленную возможность проведения экспериментов с магнитными носителями.

Автор благодарит также к.х.н. Сергеева Н.В. за помощь и консультации в исследовании кинетики десорбции пептидов из полимерных пленок. Автор искренне признателен м.н.с. Вихрову A.A. и н.с. Старковой H.H. за постоянную помощь и поддержку в работе.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Купцова, Светлана Владимировна, 2000 год

1. Alvarez O.A., Zimmerman G. Pegaspargase-induced pancreatitis. // Med. Pediatr. Oncol., 2000, v. 34, p. 200-205.

2. Ameer GA., Harmon W., Sasisekharan R., Langer R. Investigation of a whole blood fluidized bed Taylor-Couette flow device for enzymatic heparin neutralization. // Biotechnol. Bioeng., 1999, v. 62, p. 602-608.

3. Ruiz S., Feliu J.A., Caminal G., Alvaro G., Lopez-Santin J. Reaction engineering for consecutive enzymatic reactions in peptide synthesis: application to the synthesis of a pentapeptide. // Biotechnol. Prog., 1997, v. 13, p. 783-787.

4. Levitsky V. Y., Lozano P., Iborra J.L. Kinetic analysis of deactivation of immobilized alpha-chymotrypsin by water-miscible organic solvent in kyotorphin synthesis. // Biotechnol. Bioeng., 1999, v. 65, p. 170-175.

5. Bossi A., Cretich M., Righetti P.G. Production of D-phenylglycine from racemic (D,L)-phenylglycine via isoelectrically-trapped penicillin G acylase. // Biotechnol. Bioeng., 1998, v. 60, p. 454-461.

6. Riva S., Bovara R., Pasta P., Carrea G. Oxidoreduction of steroids with immobilized hydroxysteroid dehydrogenases and cofactor regeneration. // Ann. NY Acad. Sci., 1988, v. 542, p. 413-416.

7. Galaev I.Y., and Mattiasson B. 'Smart' polymers and what they could do in biotechnologyand medicine // Trends Biotechnol., 1999, v. 17, p. 335-340.

8. Кирш Ю.Э. Поли-Ы-винилпирролидон и другие поли-Ы-виниламиды. М: Наука, 1998,252 с.

9. Шерстюк С.Ф., Галаев И.Ю., Савицкий А.П., Кирш Ю.Ф., Березин И.В. Поливинилкапролактам обратимо осаждаемый термополимер. Соосаждение белков // Биотехнология, 1987, т. 3, с. 179-183.106

10. Amiya T, and Tanaka T. Coil-globula transition in polymers. // Macromolecules, 1987, v. 20, p. 1162-1164.

11. Tanaka T. Collapse of gels and the critical endpoint. // Phys. Rev. Lett., 1978, v. 40, p. 820-823.

12. Nirokawa Y., Tanaka T. Volume phase transition in nonionic gel. // J. Chem. Phys., 1984, v. 81, p. 6379-6380.

13. Sawai T., Yamazaki S., Ikariyama Y., Aizawa M. pH-responsive swelling of the ultrafine microsphere. // Macromolecules, 1991, v. 24, p. 2117-2118.

14. Akala E.O., Kopeckova P. and Kopecek J. Novel pH-sensitive hydrogels with adjustable swelling kinetics. // Biomaterials, 1998, v. 19, p. 1037-1047.

15. Lee S.J., and Park K. Synthesis and characterization of sol-gel phase reversible hydrogels sensitive to glucose. // J. Molec. Recog., 1996, v. 9, p. 549-557.

16. Obaidat A.A., and Park K. Characterization of protein release through glucose-sensitive hydrogel membranes. // Biomaterials, 1997, v. 11, p. 801-806.

17. Kost J., Leong K. and Langer R. Ultrasound-enhanced polymer degradation and release of incorporated substances. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v. 86, p. 7663-7666.

18. Kwon I.C., Bae Y.H. and Kim S.W. Electrically erodible polymer gel for controlled release of drugs. //Nature, 1991, v. 354, p. 291-293.

19. Yuk S.H., Cho S.H., Lee H.B. Electric current-sensitive drug delivery systems using sodium alginate/polyacrylic acid composites. // Pharm. Res., 1992, v. 9, p. 955-957.

20. Tanaka T., Nishio I., Sun S-T., Ueno-Nishio S. Collapse of gels in an electric field. // Science, 1982, v. 218, p. 467-469.

21. Kost J., Wolfrum J., Langer R. Magnetically enhanced insulin release in diabetic rats. // J. Biomed. Mater. Res., 1987, v. 21, p. 1367-1373.

22. Shiga T., Kurauchi T. Deformation of polyelectrolyte gels under the influence of electric field. // J. Appl. Polym. Sci., 1990, v. 39, p. 2305-2320.107

23. Hirose Y., Amiya T., Hirokawa Y. and Tanaka T. Phase Transition of Submicron Gel Beads. // Macromolecules, 1987, v. 20, p. 1342 1344.

24. Yoshida R., Uchida K., Kaneko Y., Sakai K., Kikuchi A., Sakurai Y., Okano T. Comb-type grafted hydrogels with rapid de-swelling response to temperature changes. // Nature, 1995, v. 374, p. 240-242.

25. Chytry V., Netoplik M., Bondanecky M., Ulbrich K. Phase transition parameters of potential thermosensitive drug release systems based on polymers of N-alcylmethacrylamides. // J. Biomater. Sci. Polym. Ed., 1997, v. 8, p. 817-824.

26. Dingenouts N., Norhausen Ch. And Ballauff M. // Macromolecules, 1998, v. 31, p. 89128917.

27. Kono K., Henmi A., Yamashita H., Hayashi H., Takagishi T. Improvement of temperature-sensitivity of poly(N-isopropylacrylamide)-modified liposomes // J. Controlled Release, 1999, v. 59, p. 63-75.

28. Kono K., Nakai R., Morimoto K., Takagishi T. Thermosensitive polymer-modified liposomes that release contents around physiological temperature // Biochim. Biophys, Acta, 1999, v. 1416, p. 239-250.

29. Marquez G., Wang L.V. , Wang C., Hu Z. Development of tissue-simulating optical phantoms: poly-N-isopropylacrylamise solution entrapped inside a hydrogel. // Phys. Med. Biol., 1999, v. 44, p. 309-318.

30. Kawasaki N., Ohkura R., Miyazaki S., Uno Y. Sugimoto S., Attwood D. Thermally reversible xyloglucan gels as vehicles for oral drug delivery. // Int. J. Pharm., 1999, v. 181, p. 227-234.

31. Miyazaki S., Suisha F., Kawasaki N., Shirakawa M., Yamatoya K., Attwood D. Thermally reversible xyloglucan gels as vehicles for rectal drug delivery. // J. Controlled Release, 1998, v. 56, p. 75-83.

32. Rollason G., Davies J.E., Sefton M.V. Preliminary report on cell culture on a thermally reversible copolymer. // Biomaterials, 1993, v. 14, p. 153-155.1.I

33. Kono K., Nakai R., Morimoto K., Takagishi T. Temperature-dependent interaction of thermo-sensitive polymer-modified liposomes with CV1 cells. // FEBS Lett., 1998, v. 456, p. 306-310.

34. Hayashi H., Kono K. and Takagishi T. Temperature sensivitization of liposomes using copolimers of N-isopropylacrylamide. //Bioconjug. Chem., 1999, v. 10, p. 412-418.

35. Aoyagi Т., Ebara M., Sakai K., Sakurai Y., Okano T. Novel bifunctional polymer with reactivity and temperature sensitivity. //J. Biomater. Sci. Polym. Ed., 2000, v. 11, p. 101110.

36. Kirsh Y. E. Water-soluble poly(N-vinylamides): microstructure, solvation,conformational state and complex formation in aqueous solutions. // Prog. Polim. Sci., 1993, v. 18, p. 519542.

37. Кузькина И.Ф., Пашкин И.И., Марквичева E.A. // Хим.-Фармац. Журнал, 1996, т.1, с. 39-44.

38. Марквичева Е. А., Бронин А. С., Кудрявцева Н. Е., Кузькина И. Ф., Пашкин И. И., Кирш Ю. Э., Румш Л.Д., Зубов В. П. Новый метод иммобилизации протеолитических ферментов в полимерных гидрогелях // Биоорг. Химия, 1994, т. 20, с.257-262.109

39. Markvicheva E.A., Tkachuk N.E., Kuptsova S.V. , Dugina T.N., Strukova S.M., Kirsh Yu.E., Zubov V. P., Rumsh L.D., Stabilization of proteases by entrapment in a new composite hydrogel, Appl. Biochem. Biotechnol., 1996, v. 61, N1-2, p. 75-84.

40. Зубов В.П., Пашкин И.И., Кузнецова O.A., Кузькина И.Ф., Кирш Ю.Э. Синтез сополимеров N-винилкапролактама с N-винилформамидом и физико-химические свойства их водных растворов. // ВМС, 2000, т. 42, с. 1-6.

41. Park T.G. Temperature modulated protein release from pH/temperature-sensitive hydrogels // Biomaterials, 1999, v. 20, p. 517-521.

42. Serres A., Baudys M., Kim S.W. Temperature and pH-sensitive polymers for human calcitonin delivery // Pharm. Res., 1996, v. 13, p. 196-201.

43. Ramkissoon-Ganorkar C., Liu F., Baudys M., Kim S.W. Modulating insulin-release profile from pH/thermosensitive polimeric beads through polymer molecular weight // J. Controlled. Release, 1999, v. 59, p. 287-298.

44. Miyazaki S., Oda M., Takada M., Attwood D. Thermally gelling poloxamine Synperonic T908 solution as a vehicle for rectal drug delivery // Biol. Pharm. Bull., 1995, v. 18, p. 1151-1153.

45. Bochot A., Fattal E., Gulik A., Couarraze G., Couvreur P. Liposomes dispersed within a thermosensitive gel: a new dosage form for ocular delivery of oligonucleotides // Pharm. Res., 1998, v. 15, p. 1364-1369.

46. Han C.K., and Bae Y. H. Inverse thermally-reversible gelation of aqueous N-isopropilacrilamide copolymer solutions. // Polymer, 1998, v. 39, p. 2809-2814.

47. Kim J.-H., and Balauff M. The volume transition in thermosensitive core-shell latex particles containing charged groups. // Colloid. Polym. Sei., 1999, v. 277, p. 1210-1214.

48. Vernon В., Kim S.W. and Bae Y.H. Insulin release from islets of Langerhans entrapped in a poly(N-isopropylacrilamide-co-acrylic acid)polymer gel // J. Biomater. Sei. Polym. Ed., 1999, v. 10, p. 183-198.110

49. Kondo A., Fukuda H. Preparation of thermo-sensitive magnetic microspheres and application to enzyme Immobilization. //J. Ferment. Bioeng., v. 84, p. 337-341.

50. Yuk S.H., Cho S.H., Lee S.H. pH/temperature-responsive polymer composed ofpoly((N,N-dimethylamino)ethyl methacrylate-co-ethylacrylamide) //Macromolecules, 1997, v. 30, p. 6856-6859.

51. Tanaka Т., Fillmore D., Sun S.T., Nishio I., Swislow J., and Shah A. Phase transitions in ionic gels // Phys. Rev. Lett., 1980, v. 45, p. 1636 1639.

52. Tanaka Т., Phase transitions of gels, In:Polyelectrolyte Gels, Harland, R.S. and Prud'homme, R.K., Eds., ACS Symp. Series, 1992, v. 480, p.l.

53. Elliassaf J. Hydrofobic bonding in vinyl polymers // J. Polym. Sci., B, 1965, v. 3, p. 764769.

54. Matsuyama A., Tanaka F. Theory of solvatation-induced reentrant phase separation in polymer solutions // Phys. Rev. Lett., 1990, v. 65, N 3, p. 341-344.

55. Тагер A.A., Сафронов А.П., Шарина С.В., Галаев И.Ю. Термодинамика водных растворов поливинилкапролактама// ВМС, 1990, т.32 А, N 3, с.529-534

56. Тагер А.А., Сафронов А.П., Березюк Е.А., Галаев И.Ю. Гидрофобные взаимодействия и нижняя критическая температура водных растворов полимеров // ВМС, 1991, т.ЗЗ Б, с.572-577.

57. Yuk S.H., and Bae Y.H. Phase-trsansition polymers for drug delivery. // Critical rewiews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1999, v. 16, p. 385-423.

58. Taylor L., Cerankowski L. D. Preparation of films exhibiting a balanced temperature dependence to permeation by aqueous solutions a study of lower consolute behavior // J. Polym. Sci., 1975, v. 13, p. 2551-2570.

59. Schild H.G., Tirrell D.A. Microcalorimetric detection of lower critical solution temperatures in aqueous polymer solutions // J. Phys. Chem., 1990, v. 94, p. 4352-4356.1.l

60. Home R.A., Almeida J.P., Day A.F., Yu N.-T. Macromolecule hydratation and the effect of solutes on the cloud point of aqueous solutions of poly(vinyl-methyl ether) // J. Coll. Interface Sci., 1971, v. 35, p. 77-85.

61. Huang X., Akehata Т., Unno H., Hirasa O. Dewatering of biological slurry by using water-absorbent polymer gel // Biotechnol. Bioeng., 1989, v. 34, p. 102-109.

62. Chakhovsky N., Martin R.H., R.van Neckel. Polyethyleneglycol monoethers. Critical solution temperatures of polyethylene glycol monoether-water mixtures and the influence of a third constituent // Bull. Soc. Chem. Beiges., 1956, v. 65, p. 453-474.

63. Bae Y.C., Lambert S.M., Soane D.S., Prausnitz J.M. Cloud point curves of polymer solutions from thermooptical measurements // Macromolecules, 1991, v. 24, p. 44034407.

64. Будтов В.П. Физическая химия растворов полимеров, С.-П: Химия, 1992, с.53.

65. Karlstrom G. A new model for upper and lower critical solution temperatures in poly(ethyleneoxide) solutions. // J. Phys. Chem., 1985, v. 89, p. 4962-4964.

66. Bae Y.H., Okano T. and Kim S.W. On-off thermocontrol of solute transport: I. Aqueous swelling properties of N-isopropylacrylamide networks modified with hydrophobic components. // Pharm. Res., 1991, v. 8, p. 531-539.

67. Vernon В., Gutowska A., Kim S.W., Bae Y.H. Thermally reversible polymer gels for biohybrid artificial pancreas. // Macromol. Symp., 1996, v. 109, p. 155-160.

68. Hoffman A.S., Afrassiabi A. and Dong L.C. Thermally reversible hydrogels: II. Delivery to and selective removal of substances from aqueous solutions. //J. Controlled Release, 1986, v. 4, p.213-222.

69. Еремеев H.JI., Казанская Н.Ф. Фазовый переход в матрице как регулятор ферментативной активности протеиназ // Биоорганическая Химия, 1998, т. 24, с. 356-363.

70. Василевская В.В., Хохлов А.Р. О влиянии низкомолекулярной соли на коллапс заряженных полимерных сеток. // ВМС, 1986, т. 26 А, с. 316-320.

71. DongL.C., and Hoffman A.S. Thermally reversible hydrogels: III. Immobilization of enzymes for feed-back reaction control. // J. Controlled Release, 1986, v. 4, p. 223-229.

72. Shibayama M. and Tanaka Т., "Volume Phase Transition and Relation Phenomena of Polymer Gels," in: Advances in Polymer Sciences V. 109, Edited by K. Dusek. 1993, p. 1-62. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg.

73. Madsen F., and Peppas N.A. Complexation graft copolymer networks: swelling properties, calcium binding and proteolitic enzyme inhibition. // Biomaterials, 1999, v. 20, p. 1701-1708.

74. Kirsh Y. E. Water-soluble poly(N-vinylamides): microstructure, solvation,conformational state and complex formation in aqueous solutions. // Prog. Polim. Sci., 1993, v. 18, p. 519542.

75. Кирш Ю.Э., Сусь T.A., Карапутадзе T.M., и др. Особенности комплексообразования и конформационных превращений макромолекул поли-1\Г-виниллактамов в водных растворах. // ВМС, 1979, т. 21 А, с. 519-525.

76. Кирш Ю.Э., Галаев И.Ю., Карапутадзе Т.М., Марголин A.M., Швядас В.К. Термоосаждаемые конъюгаты поливииилкапролактам-фермент // Биотехнология, 1987, т. 3, с. 184-189.

77. Hosoya К., Kimata К., Agaki Т., Tanaka N., Frechet J.M. Temperature-controlled highperformance liquid chromatography using a uniformly sized temperature-responsive polymer-based packing material. // Anal. Chem., 1995, v. 67, p. 1907-1911.

78. Lakhiari H., Okano Т., Nurdin N., Luthi C., Descouts P., Muller D., Jozefonvicz J. Temperature-responsive size-exclusion chromatography using poly(N-isopropylacrylamide) grafted silica. // Biochim. Biophys. Acta, 1998, v. 1379, p. 303313.

79. Galaev I.Y., and Mattiasson B. Shielding affinity chromatography. // Bio/technology, 1994, v. 12, p. 1086.

80. Galaev I.Y., Arvidsson P. and Mattiasson B. Protein displasement in dye-ligand chromatography using neutral and charged polymers. // J. Mol. Recognition, 1998, v. 11, p. 255-260.

81. Gehrke S. H., Andrews G. P., Cussler E. L. Chemical aspects of gel extraction // Chem. Eng. Sci., 1986, v. 41, p. 2153-2160.

82. Freitas R.F.S., Cussler E.L. Temperature sensitive gels as extraction solvents // Chem. Eng. Sci., 1987, v. 42, p. 97-103.

83. Park C.H., Hoffman A.S. Concentrating cellulases using a temperature-sensitive hydrogel: effect of gel particle size and geometry // Biotechnol. Prog., 1993, v. 9, p. 640-646.

84. Еремеев H. Л., Сиголаева JI. В., Кост А. О., Казанская Н. Ф. Концентрирование растворов белков при помощи температуро-чувствительных гелей // Биотехнология, 1994, т.8, с.25-29.

85. Roepke DC, Goyal SM, Kelleher CJ, Halvorson DA, Abraham AJ, Freitas RF, Cussler EL Use of temperature-sensitive gel for concentration of influenza virus from infected allantoic fluids. // J. Virol. Methods, 1987, v. 15, p. 25-31.

86. Maheshkumar S., Peterson R.B. and Goyal S.M. Temperature-sensitive gel for virus concentration from urine. // J. Virol. Methods, 1989, v. 23, p. 41-46.

87. Huang X., Akehata T., Unno H., Hirasa O. Dewatering of biological slurry by using water-absorbent polymer gel. // Biotechnol. Bioeng., v. 34, p. 102-109.

88. Trank S.J., Johnson D.W., Cussler E.L. Isolated soy protein production using temperature-sensitive gels. // Food Technol., 1989, v. 43, N 6, p. 78-83.

89. Chilcoti A., Chen G., Stayton P., Hoffman A.S. Site-specific conjugation of temperature-sensitive polymer to a genetically-engineered protein. // Bioconjugate Chem., 1994, v. 5, p. 504-507.

90. Chen G., Hoffman A.S. Preparation and properties of thermoreversible, phaseseparating enzyme-oligo(N-isopropylacrylamide conjugates. // Bioconjugate Chem., 1993, v. 4, p. 509-514.

91. Chen G., Hoffman A.S. Synthesis of carboxylated poly(NIPAAm) oligomers and their application to form thermo-reversible polymer-enzyme conjugates. // J. Biomater. Sci. Polym. Ed., 1994, v. 5, p. 371-382.

92. Matsukata M., Aoki T., Sanui K., Kikuchi A., Sakurai Y., Okano T. Effect of molecular architecture of poly(N-isopropylacrylamide)-trypsin conjugates on their solution and enzymatic properties. // Bioconjugate Chem., 1996, v. 7, p. 96-101.

93. Matsukata M., Takei Y., Aoki T., Sanui K., Ogata N., Sakurai Y., Okano T. Temperature-modulated solubility-activity alterations for poly(N- isopropylacrylamide)-lipase conjugates. // J. Biochem. (Tokyo), 1994, v. 116, p. 682-686.

94. Hoffman A.S. Application of thermally reversible polymers and hydrogels in therapeutics and diagnostics. // J. Control. Release, 1987, v. 6, p. 297-305.115

95. Кухтин А.В., Еремеев H.JL, Беляева ЕА, Казанская Н.Ф. Relationship between state of а термочувствительной матрицы и активность иммобилизованной в ней уреазы. // Биохимия, 1997, т. 62, с. 371-376.

96. Eremeev N.L., Kukhtin A.V., Belyaeva Е.А., Kazanskaya N.F. Effects of thermosensitive matrix-phase transition on urease-catalyzed urea hydrolysis. // Appl. Biochem. Biotechnol., 1999, v. 76, p. 45-55.

97. Park C.H., Hoffman A.S. Thermal cycling effects on the bioreactor performances of immobilized J3-galactosidase in themperature-sensitive hydrogel beads. // Enzyme. Microb. Technol., 1993, v. 15, p. 476-482.

98. Klibanov A.M., Samokhin G.P., Martinek K., Berezin I.V. A new approach to preparative enzymatic synthesis. // Biotechnol Bioeng., 2000, v. 67, p. 737-747.

99. Gupta, M.N. "Enzyme function in organic solvents" // Eur. J. Biochem., 1992, v. 203, p. 25-32.

100. Wescott CR, Klibanov AM The solvent dependence of enzyme specificity. // Biochim. Biophys. Acta, 1994, v. 1206, p. 1-9.

101. Klibanov A.M. Why are enzymes less active in organic solvents than in water?. // Trends Biotechnol., 1997, v. 15, p. 97-101.

102. Dai L., Klibanov A.M. Striking activation of oxidative enzymes suspended in nonaqueous media. // Proc Natl Acad Sci U S A, 1999, v. 96, p. 9475-9478.

103. Мартинек К., Клибанов A.M., Самохин Г.П., Семенов А.П., Березин И.В. Препаративный ферментативный синтез в двухфазной водно-органической системе. // Биоорганич. химия, 1977, т.З, с.696-702.

104. Zaks, A. and Klibanov, A.M. The effect of water on enzyme action in organic media. //J. Biol. Chem., 1988, v. 263, p. 8017-8021.

105. Белова А.Б., Можаев В.В., Левашов А.В., Сергеева М.В., Мартинек К., Хмельницкий Ю.Л. Взаимодействие между физико-химическими параметрами органических растворителей и их денатурирующим воздействием на белки. // Биохимия, 1991, т. 85, с. 1923-1945.

106. Клибанов A.M., Семенов А.Н., Самошин Г.Р., Мартинек К. Ферментативные реакции в водно-органических средах: критерий выбора оптимального органического растворителя. // Биоорг. Химия, 1978, т.4, с. 82-88.

107. Klibanov А. М. In: Biocatalysis in organic media. Ed. by. Laane C., Tramper J., Lilly M. D., 1987, p. 116. Elsevier, Amsterdam.

108. Khmelnitsky Yu.L., Mozhaev V. V., Belova A.B., Sergeeva M.V., and Martinek K. Denaturation capasity: a new quantitative criterion for selection of organic solvents as reaction media in biocatalysis. // Eur. J. Biochem., 1991, v. 198, p. 31-41.

109. Gupta, M.N., Batra, R., Tyagi, R., and Sharma, A. Polarity index: the guiding solvent parameter for enzyme stability in aqueous-organic cosolvent mixtures. // Biotechnol. Prog., 1997, v. 13, p. 284-288.

110. Ross A.C., Bell G. And Hallinga P.J. Organic solvent functional group effect on enzyme inactivation by the interfacial mechanism. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2000, v. 8, p. 183-192.

111. Gekko K., Morikawa T. Preferential hydration of bovine serum albumin in polyhydric alcohol-water mixtures // J.Biochem., 1981, v. 90, pp 39-50.

112. Reslow M., Aldercreutz, P. and Mattiasson, B. The influence of water on protease-catalyzed peptide synthesis in acetonitrile/water mixtures. // Eur. J. Biochem., 1988, v. 177, p. 313-318.

113. Kise, H., and Hayakama, A. Immobilization of proteases to porous chitosan beads and their catalysis for ester and peptide synthesis in organic solvents. // Enzyme Microb. Technol., 1991, v. 13, p. 584-588.

114. Adlercreutz P., Clapes P. Catalitic properties of alpha-chymotrypsin in organic media. // Biomed. Biochim. Acta, 1991, v. 50, p. 55-60.

115. Adlercreutz P. Activation of enzymes in organic media at low water activity by polyols and saccharides. // Biochim. Biophys. Acta, 1993, v. 1163, p. 144-148.

116. Batra R., Tyagi R., Gupta M.N. Influence of Immobilization on Enzyme Activity in Aqueous-Organic Cosolvent Mixtures. // Biocatalysis Biotransformation, 1997, v. 15, p. 47-53.

117. Levitsky V. Y., Lozano P., Iborra J.L. Kinetic analysis of deactivation of immobilized alpha-chymotrypsin by water-miscible organic solvent in kyotorphin synthesis. // Biotechnol. Bioeng, 1999, v. 65, p. 170-175.

118. Inada Y., Takahashi K., Yoshimoto T., Ajima A., Matsushima A., Saito Y. Application of polyethileneglycol- modified enzymes in biological processes: organic solvent soluble enzymes. // Trends Biotechnol., 1986, v. 4, p. 190-194.118

119. Adlercreutz P. On the importants of the support material for enzymatic synthesis in organic media // Eur. J. Biochem., 1991, v. 199, p. 609-614.

120. Sakodynskaya I.K., Sorokina E.M., Efremova N.V., Topchieva I.N. Enzymic activity of polymer-protein complexes in water-miscible organic solvents. // Bioorg Khim., 1999, v. 25, p. 439-443.

121. Kwon O.H., Imanishi Y., Ito Y. Catalytic activity and conformation of chemically modified subtilisin Carlsberg in organic media. Biotechnol. Bioeng., 1999, v. 66, p. 265270.

122. Kise, H., Hayakama, A., and Noritomi, H. Protease-catalyzed synthetic reactions and immobilization-activation of the enzymes in hydrophilic organic solvents. // J. Biotechnol., 1990, v. 14, p. 239-254.

123. Tanaka, A. and Kawamoto, T. In: Protein immobilization: fundamentals and apploications. Edited by Taylor, R.F., 1991, p. 183-208. Marcel Dekker. New York.

124. Afrassiabi A., Hoffman A. S., Cadwell L. A. Effect of temperature on the release rate of biomolecules from thermally reversible hydrogels. // J. Membr. Sci., 1987, v. 33, p. 191-200.

125. Yoshida R., Sakai K., Okano T., Sakurai Y. A new model for zero-order drug release 1. Hydrophobic drug release from hydrophilic polymeric matrices/ // Polymer J., 1991, v. 23,p. 1111-1121.

126. Kokufata E., Zhang Y.-Q., Tanaka T. Saccharide-sensitive phase transition of a lectine-loaded gel. //Nature, 1991, v. 351, p. 302-304.

127. Dong L.C., Hoffman A.S. Synthesis and application of thermally reversible heterogels for drag delivery. // J. Control. Release, 1990, v. 13, p. 21-31.

128. Chen S.C., Jones D.H., Fynan E.F., Farrar G.H., Clegg J.C., Greenberg H.B., Herrmann J.E. Protective immunity induced by oral immunization with a rotavirus DNA vaccine encapsulated in microparticles. // J. Virol., 1998, v. 72, p. 5757-5761.

129. Fassano A. Innovative strategies for the oral delivery of drugs and peptides. // Trends Biotechnol., 1998, v. 16, p. 152-157.

130. Bowersock T.L., HogenEsch H., Suckow M., Guimond P., Martin S., Borie D., Torregrosa S., Park H., Park K. Oral vaccination of animals with antigens encapsulated in alginate microspheres///Vaccine, 1999, v. 17, p. 1804-1811.

131. Oku N., Naruse R., Doi K., Okada S. Potential usage of thermosensitive liposomes for macromolecule delivery/ // Biochim. Biophis. Acta, 1994, v. 1191, p. 389-391.

132. Kakinuma K., Tanaka R., Takahashi H., Sekihara Y., Watanabe M., Kuroki M. Drug delivery to the brain usind thermosensitive liposome and local hyperthermia. // Int. J. Hyperthermia, 1996, v. 12, p. 157-165.

133. Wheeler J.J., Palmer L., Ossanlou M., MacLachlan I., Graham R.W., Zhang Y.P., Hope M.J., Scherrer P., Cullis P.R. Stabilized plasmid-lipid particles: construction and characterization. // Gene Ther., 1999, v. 6, p. 271-281.120

134. Mok K.W., Lam A.M., and Cullis P.R. Stabilized plasmid-lipid particles: factors influencing plasmid entrapment and transfection properties. // Biochim. Biophys. Acta,1999, v. 1419, p. 137-150.

135. Hong K., Zheng W., Baker A., Papahadjopoulos D. Stabilization of cationic liposome-plasmid DNA complexes by polyamines and poly(ethylene glycol)-phospholipid conjugates for efficient in vivo gene delivery. // FEBS Lett., 1997, v. 400, p. 233-237.

136. Hayashi H., Kono K. and Takagishi T. Temperature-controlled release property of phospholipid vesicles bearing a thermo-sensitive polymer. // Biochim. Biophys. Acta, 1996, v. 1280, p. 127-134.

137. Hayashi H., Kono K. and Takagishi T. Temperature sensivitization of liposomes using copolimers of N-isopropylacrylamide. // Bioconjug. Chem., 1999, v. 10, p. 412-418.

138. Zignani M., Drummond D.C., Meyer O., Hong K., Leroux J. In vitro characterization of a novel polymeric-based pH-sensitive liposome system. // Biochim. Biophys. Acta,2000, v. 1463, p. 383-394.

139. Levine R., Agren M., Mertz P. Effect of occlusion on cell proliferation during epidermal healing. //J. Cut. Med. Surg., 1998, v. 2, p. 193-198.

140. Bradley M., Cullum N., Nelson E.A., Petticrew M., Sheldon T., Torgerson D. Systematic reviews of wound care management: (2) Dressings and topical agents used in the healing of chronic wounds. // Health Technol. Assess., 1999, v. 3, p. 90.

141. Agren M. An amorhous hydrogel enhances epithelialisation of wounds. // Acta Derm. Venereol., 1998, v. 78, p. 119-122.

142. Rowley J.A., Madlambayan G., Mooney D.J. Alginate hydrogels as synthetic extracellular matrix materials. // Biomaterials, 1999, v. 20, p. 45-53.121

143. Natsume T., Ike O., Okada T., Takimoto N., Shimizu Y., Ikada Y. Porous collagen sponge for esophageal replacement. // J. Biomed. Mater. Research, 1993, v. 27, p. 867875.

144. Young T. Reaping the benefits of foam dressings. // Community Nurse, 1998, v. 4, p. 47-48.

145. Kushwaha V., Bhowmick A., Behera B.K., Ray A.R. Sustained release of antimicrobial drugs from polyvinylalcohol and gum arabica blend matrix. // Artif. Cells Blood. Substit. Immobil. Biotechnol., 1998, v. 26, p. 159-172.

146. Draye J.P., Delaey B., Van de Voorde A., Van Den Bulcke A., De Reu B., Schacht E. In vitro and in vivo biocompatibility of dextran dialdehyde cross-linked gelatin hydrogel films. // Biomaterials, 1998, v. 18, p. 1677-1687.

147. Segal H., Hunt B.J. The effects of alginate and non-alginate wound dressings on blood coagulation and platelet activation. // J. Biomater. Appl., 1118, v. 12, p. 249-257.

148. Ueno H., Yamada H., Tanaka I., Kaba N., Matsuura M., Okumura M., Kadosawa T., Fujinada T. Accelerating effects of chitosan for healing at early phase of experimental open wounds in dogs. // Biomaterials, 1999, v. 20, p. 1407-1414.

149. Madihally S.V., Matthew W.T. Porous chitosan scaffolds for tissue engineering. // Biomaterials., 1999, v. 20, p. 1133-1142.

150. Healy KE, Rezania A, Stile RA Designing biomaterials to direct biological responses. // Ann N Y Acad Sci., 1999, v. 875, p.24-35.

151. Naldini A., Sower L., Bocci V., Meyers B., Carney D.H. Thrombin receptor expression and responsiveness of human monocytic cells to thrombin is linked to interferon-induced cellular differentiation. // J. Cell. Physiol., 1998, v. 177, p. 76-84.

152. Chambers R.C., dabbagh K., McAnulty R.J., Gray A.J., Blanc-Brude O.P. Thrombin stimulates fibroblasts procollagen production via proteolytic activation of proteases-activated receptor 1. // Biochem. J., 1998, v. 333, p. 121-127.122

153. Stiernberg J., Redin W.R., Warner W.S., Carney D.H. The role of thrombin and thrombin receptor activating peptide (TRAP-508) in initiation of tissue repair. // Thromb. Haemost., 1993, v. 70, p. 158-62.

154. Carney D.H., Redin W., McCroskey L. Role of high-affinity thrombin receptors in postclotting cellular effects of thrombin. // Semin. Thromb. Hemost., 1992, v. 18, p. 91103.

155. Dabbagh K., Laurent G.J., McAnulty R.J., Chambers R.C. Thrombin stimulates smooth muscle cell procollagen synthesis and mRNA levels via a PAR-1 mediated mechanism. //Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p. 405-409.

156. Corvera C.U., Dery 0., McConalogue K., Bohm S.K., Khitin L.M., Caugney G.H., Payan D.G., and Bunnet N.W. Mast cell tryptase regulates colonic miocytes through proteinase-activated receptor-2. // J. Exp. Med., 1997, v. 183, p. 821-827.

157. Molino M., Barnathan E.S., Numerof R., Clark J., Dreyer M., Cumashi A., Hoxie J.A., Schechter J.A., Woolkalis M., and Brass L.F. Interaction of mast cell Tryptase with thrombin receptors and PAR-2. // J. Biol. Chem., 1997, v. 272, p. 4043-4049.

158. Grand R.J.A., Turnell A.S. and Grabham P.W. Cellular consequences of thrombin-receptor activation. // Biochem.J., v. 313, p. 353-368.

159. Vu T.K., Hung D.T., Wheaton V.I., and Coughlin S.R. Molecular cloning of a functional thrombin receptor reveals a novel proteolitic mechanism of receptor activation. //Cell, 1991, v. 64,p. 1057-1068.

160. Gerszten R.E., Chen J., Ishii M. Ishii K, Wang L, Nanevicz T, Turck CW, Vu TK, Coughlin SR. Specificity of the thrombin receptor for agonist peptide is defined by its extracellular surface. //Nature, 1994, v. 368, p. 648-651.

161. Bahou W.F., Kutok J.L., Wong A., Potter C.L., Coller B.S. Identification of a novel thrombin receptor sequence required for activation-dependent responses. // Blood, 1994, v. 84, p. 4195-4202.123

162. Nystedt S., Emillson K., Washlested C. and Sundelin J. Molecular cloning of a potential proteinase activated receptor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, v. 91, p. 92089212.

163. Al-Ani B., Saifeddin M. And Hollenberg M.D. Detection of functional receptors for the proteinase-activated-receptor-2-activating polypeptyde, SLIGRL-NH2 in rat vascular and gastric smooth muscle. // Can. J. Physiol. Pharmacol., 1995, v. 73, 1203-1207.

164. Ishihara H., Connolly A.J., Zeng D., Kahn M.L., Zheng Y.W., Timmons C., Tram T., and Coughlin S.R. Protease-activated receptor 3 is a second thrombin receptor in humans. //Nature, 1997, v. 386, p. 502-506.

165. Xu W., Andersen H., Whitmore T.E., Presnell S.R., Yee D.P., Ching A., Gilbert T., Davie E.W., and Foster D.C Cloning and characterization of human protease-activated receptor 4. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, v. 95, p. 6642-6646.

166. Kahn M.L., Zheng Y.W., Huang W„ Bigornia V. , Zeng D., Moff S., Farese Jr. R.V., Tam C., and Coughlin S.R. A dual thrombin receptor system for platelet activation. // Nature, 1998, v. 394, p. 690-694.

167. Vassallo RR, Kieber-Emmons T, Cichowski K, Brass LF Structure-function relationships in the activation of platelet thrombin receptors by receptor-derived peptides. // J. Biol. Chem., 1992, v. 267, p. 6081-6085.r- . , ,1 • " ^fitflv124

168. Van Obberghen-Schilling E, Rasmussen UB, Vouret-Craviari V, Lentes KU, Pavirani ! A, Pouyssegur J Stracture-activity analysis of synthetic alpha-thrombin-receptor-activating peptides. // Biochem. J., 1993, v. 292, p. 667-671.

169. Vouret-Craviari V, Van Obberghen-Schilling E, Scimeca JC, Van Obberghen E, Pouyssegur J Differential activation of p44mapk (ERK1) by alpha-thrombin and thrombin-receptor peptide agonist. // Biochem. J., 1993, v. 289, p. 209-214.

170. Scardino M.S., Swaim S.F., Morse B.S., Sartin E.A., Wright J.C., Hoffman C.E. Evaluation of fibrin sealants in cutaneous wound closure. // J. Biomed. Mater. Res., 1999, v. 48, p. 315-321.

171. Dunn C.J., Goa K.L. Fibrin sealant: a review of its use in surgery and endoscopy. // Drugs, 1999, v. 58, p. 863-886.

172. Miller-Andersson M., Gaffney P. J. Seghatchian // Thromb. Res., 1980, v. 20, p. 109122.125

173. Heller M.C., Carpenter J.F., Randolph T.W. Effects of phase separating systems on lyophilized hemoglobin. // J. Phasrm. Sci., 1996, v. 85, p. 1358-1362.

174. Anchordoquy T.J., Carpenter J.F., Polymers protect lactate dehydrogenase during freeze-drying by inhibiting dissociation in the frozen state. // Arch. Biochem. Biophys., 1996, v. 332, p. 231-238.

175. Струкова С. М., Умарова Б. А., Киреева Е. Г. и др. Механизм регуляции свертывания крови // Биохомия животных и человека, 1992, с. 1.

176. Ануфриева Е.В., Некрасова Т.Н., Лущик В.Б., Федотов Ю.А., Кирш Ю.Э., Краковяк М.Г. Надмолекулярное структурообразование в водном растворе полиариленамидосульфоната натрия, регулируемое полимерным инициатором // ВМС, 1992, т. 33, с. 31-34.

177. Марквичева Е.А. Новые методы иммобилизации и культивирования клеток в полимерных гидрогелях. Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук, М., 1992.

178. Loster, К., Seidel, S., Kirstein, D., Schneider, F., and Noll, F. Novel antibody coating of a magnetizable solid phase for use in enzyme immunoassays. // J. Immunol. Methods., 1992, v. 148, p. 41-47.

179. Suzuki, M., Kamihira, M., Shiraishi, Т., Takeuchi, H., Kobayashi, T. Affinity partitioning of protein using a magnetic aqueous two-phase system. // J. Ferment. Bioengin., 1995, v. 80, p. 78-84.

180. Al-Hassan, Z., Ivanova, V. , Dobreva, E., Penchev, I., Hristov, J., Rachev, R. and Petrov, R. Non-porous magnetic supports for cell immobilization. // J. Ferment. Bioeng., 1991, v. 71, p. 114-116.

181. Туркин С.И., Лукин Ю.В., Марквичева E.A., Али-заде Р.А., Зубов В.П., Завальный М.А., Скуинын А.Г., Клявинып М.К., Зицманис А.Х.// 1990. А.с. СССР 1567623.126

182. Hwang S.J., Park H., Park K. Gastric retentive drug-delivery systems. // Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier. Syst., 1998, v. 15, p. 243-284.

183. Szymonifka, M.J., and Chapman, K.T. Magnetically manipulable polymeric supports for solid phase prganic synthesis. // Tetrahedron Letters, 1995, v. 36, p. 1597-1600.

184. Nakagoni K., Ajisaka K. Immobilization of thrombin and Succinyl-trombin on Eupergit C andaplication to the production of activated protein C // Biotechnol. Letters, 1990, v. 12, N3, p. 179-184.

185. Esmon N. L., Owen W. G. et al. Isolation of a membrane-bound cofactor for thrombin-catalysed activation of protein C // J. Biol. Chem., 1982, v. 257, N2, p. 859-864.

186. Salem H. H., Maruyama I. et al. Isolation and characterization of thrombomodulin from human placenta // J. Biol. Chem., 1984, v. 259, N19, p. 12246-12251.

187. Spotnitz W.D. Fibrin sealant in the United States: clinical use at the University of Virginia. // Thromb.Haemostasis, 1995, v. 74, p. 482-484.

188. Kim H.J., Lee H.C., Oh J.S., Shin B.A., Oh C.S., Park R.D., Yang K.S., Cho C.S. Polyelectrolyte complex composed of chitosan and sodium alginate for wound dressing application. // J. Biomater. Sci. Polym. Ed., 1999, v. 10, p. 543-556.

189. Ribeiro A.J., Neufeld R.J., Arnaud P., Chaumeil J.C. Microencapsulation of lipophilic drugs in chitosan-coated alginate microspheres. // Int. J. Pharm., 1999, v. 187, p. 115-123.

190. Quong D., Neufeld R.J. DNA encapsulation within co-guanidine membrane coated alginate beads and protection from extracapsular nuclease. // J. Microencapsulation, 1999, v. 16, p. 573-585.

191. Yan X., Khor E., Lim L.Y. PEC films prepared from chitosan-Alginate coacervates. // Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), 2000, v. 48, p. 941-946.

192. Esquisabel A., Hernandes R.M., Igartua M., Gascon A.R., Calvo B., Pedraz J.L. Effect of lecithins on BCG-alginate-PLL microcapsule particle size and stability upon storage. // J. Microencapsulation, 2000, v. 17, p. 363-372.127

193. Arnold, F.H. "Engineering enzymes for non-aqueous solvents" // Trends Biotechnol., 1990, v. 8, p. 224-249.

194. Kawakami K, Abe T, Yoshida T "Silicone-immobilized biocatalysts effective for bioconversions in nonaqueous media" // Enzyme Microb Technol., 1992, v. 14, p. 371375.

195. Gekko K., Ohmae E., Kameyama K., Takagi T. Acetonitrile-protein interactions: amino acid solubility and preferential solvation" // Biochim. Biophys. Acta., 1998, v. 1387, p.195-205.

196. Bender, M.L., Kezdy, F.J., and Gunter, C.R. "The anatomy of an enzymatic catalysis, oc-chymotrypsin" // J. Am. Chem. Soc., 1964, v. 86, p. 3714-3718.

197. Zerner, В., Bond, R.P.M., and Bender, M.L. "Kinetic evidence for the formation of acyl-enzyme intermediates in the a-chymotrypsin-catalyzed hydrolyses of specific substrates" // J. Am. Chem. Soc., 1964, v. 86, p. 3674-3678.

198. Воспаление. Руководство для врачей. Под ред. В.В. Серова и B.C. Паукова, М.: Медицина, 1995, 640 с.

199. Regan М.С., Barbul A. The cellular biology of wound healing. In: Wound healing. Ed. by G. Schlag and H. Redl, 1994. Springer Verlag, New York-Berlin-Heidelberg, p. 3-17.128

200. Blackman J.D., Senseng D. "Clinical evaluation of a semi-permeable polymeric membrane dressings for the treatment of chronic diabetic foot ulcers" // Diabetes Care, 1994, v. 17, p. 322-325.

201. Мурадян P.Г., Чекмарева И.А., Адамян A.A. Исследование покрытий на основе коллагена, Бюл. Эксперимент. Биологической Медицины, 1995, т.1, с.529-531.

202. Dery О. Proteinase-activated receptors: novel mechanisms of signaling by serine proteases. //Am. J.Physiol., 1998, v. 274, p. 1429-1542.

203. Саркисов Д.С., Пальцин A.A., Втюрин Б.В. В кн. Электронная микроскопическая радиоаутография клетки, М.: Наука, 1980, 131 с.