Повышение противоопухолевой активности цитокина TRAIL путем изменения аминокислотного состава белка тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.02, кандидат биологических наук Яголович, Анна Валерьевна

• Яголович, Анна Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Яголович, Анна Валерьевна

Список используемых сокращений.

1. ВВЕДЕНИЕ, ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Апоптоз и терапия рака.

2.2. Семейства белков TNF и TNFR.

2.3. Apo2L/TRAIL- цитокин из семейства TNF.

2.4. Структура TRAIL.

2.5. Механизм TRAIL-индуцированного апоптоза.

2.6. Рецепторы TRAIL.

2.6.1. Рецепторы смерти DR4 и DR5.

2.6.2. Рецепторы-«ловушки» DcRl, DcR2 и OPG.

2.6.3. Рецептор-специфичные мутантные варианты TRAIL.

2.7. Физиологические функции TRAIL и его рецепторов.

2.7.1. Формирование и регуляция иммунной системы.

2.7.2. Иммунный контроль организма над первичным развитием опухоли и метастазированием.

2.7.3. TRAIL и антивирусный ответ.

2.7.4. Действие TRAIL на Т-клетки.

2.7.5. Регуляция аутоиммунных процессов.

2.7.6. Роль TRAIL в аллергических заболеваниях.

2.7.7. Физиологическая роль TRAIL-R.

2.7.8. Не-цитотоксические сигнальные пути TRAIL.

2.8. Чувствительность клеток к TRAIL.

2.8.1. Резистентность на уровне рецепторов TRAIL.

2.8.2. Сборка комплекса DISC и резистентность к TRAIL.

2.8.3. Повышенная экспрессия cFLIP.

2.8.4. Инактивация каспазы-8.

2.8.5. Изменения в митохондриальном пути апоптоза.

2.8.6. Белки-ингибиторы апоптоза IAPs, Smac/DIABLO и резистентность к TRAIL.

2.8.7. NF-кВ и резистентность к TRAIL.

2.8.8. МАР-киназы и резистентность к TRAIL.

2.8.9. Комбинация TRAIL и химиотерапии для преодоления резистентности.

2.9. TRAIL и токсичность.

2.9.1. Рекомбинантные варианты и токсичность.

2.9.2. Токсичность на гепатоцитах.

2.10. Доклинические и клинические испытания TRAIL.

2.10.1. Доклинические исследования TRAIL.

2.10.2. Клинические исследования TRAIL.

2.11. Экспрессия рекомбинантных гибридных белков и их ренатурация.

2.11.1. Экспрессия рекомбинантных белков.

2.11.2. Гибридные белки.

2.11.3. Проблемы, возникающие при экспрессии гибридных белков.

2.11.4. Расщепление гибридных белков.

2.11.5. Тиоредоксин в качестве белка-носителя в составе гибридных белков.

2.11.6. Ренатурация рекомбинантных белков.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1 Материалы.

3.1.1. Реактивы и ферментные препараты.

3.1.2. Штаммы и плазмидные вектора.

3.1.3. Синтетические олигонуклеотиды.

3.1.4. Клеточные линии и питательные среды для роста клеток.

3.2. Методы.

3.2.1. Конструирование плазмидной ДНК pET-32/TRAIL.

3.2.2. Сайт-направленный мутагенез.

3.2.3. Получение компетентных клеток E.coli BL21(DE3).

3.2.4. Трансформация клеток E.coli плазмидной ДНК.

3.2.5. Выделение плазмидной ДНК.

3.2.6. Электрофоретический анализ ДНК в агарозном геле.

3.2.7. Определение концентрации белка в растворе.

3.2.8. Электрофоретический анализ белка в полиакриламидном геле.

3.2.9. Экспрессия TRAIL и его мутантных вариантов.

3.2.10. Ренатурация гибридного белка с тиоредоксином в качестве белка-носителя.

3.2.11. Очистка и расщепление белка.

3.2.12. Идентификация белков по N-концевой последовательности.

3.2.13. Кристаллизация и рентгеноструктурный анализ рекомбинантного TRAIL.

3.2.14. Определение гомогенности белковых препаратов методом аналитического ультрацентрифугирования.

3.2.15. Определение индукции апоптоза в линиях раковых клеток.

3.2.16. Определение констант диссоциации для связывания белка с рецептором методом поверхностного плазмонного резонанса.

3.2.17. Определение выхода цитохрома с из митохондрий.

3.2.18. Вестерн-блот.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Получение рекомбинантного цитокина TRAIL.

4.1.1. Синтез гена TRAIL (114-281) и клонирование его в экспрессионный вектор.

4.1.2. Экспрессия гибридного белка Trx/TRAIL в E.coli.

4.1.3. Ренатурация и очистка гибридного белка Trx/TRAIL.

4.1.4. Расщепление гибридного белка Trx/TRAIL и очистка целевого белка TRAIL.

4.1.5. Исследование препарата рекомбинантного TRAIL методом аналитического ультрацентрифугирования.

4.1.6. Кристаллизация и рентгеноструктурный анализ рекомбинантного TRAIL.

4.1.7. Биологическая активность рекомбинантного TRAIL.

4.2. Получение и исследование мутантных вариантов TRAIL.

4.2.1. Получение мутантных вариантов TRAIL методом сайт-направленного мутагенеза.

4.2.2. Экспрессия и очистка рекомбинантных мутантных вариантов TRAIL.

4.2.3. Определение констант диссоциации при связывании различных вариантов TRAIL с пятью рецепторами.

4.2.4. Индукция апоптоза рецептор-селективными мутантными вариантами TRAIL.

5. ОБСУЖДЕНИЕ.

5.1. Получение и исследование рекомбинантного цитокина TRAIL.

5.2. Исследование биологической активности рекомбинантного цитокина TRAIL.

5.3. Исследование мутантных вариантов цитокина TRAIL.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Повышение противоопухолевой активности цитокина TRAIL путем изменения аминокислотного состава белка»

Цитокин TRAIL (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand) был обнаружен в 1995 году на основе гомологии последовательности с другими членами семейства TNF (Tumor Necrosis Factor) [1]. Он экспрессируется в клетках в виде трансмембранного белка II типа. В результате расщепления цистеиновыми протеазами внеклеточный домен TRAIL высвобождается из клетки в свободном растворимом тримерном виде [2,3]. Рекомбинантный растворимый TRAIL способен вызывать апоптоз в культурах клеток из широкого спектра человеческих опухолей, не затрагивая нормальные клетки [4]. Благодаря этому свойству рекомбинантный препарат TRAIL рассматривается в качестве многообещающего потенциального терапевтического средства для лечения раковых заболеваний. В настоящее время рекомбинантный TRAIL проходит I стадию клинических исследований (в компаниях Genentech и Amgen, начиная с 2006 года) как отдельно, так и в комбинации с другими химиотерапевтическими средствами [5-7].

Изначально рекомбинантный препарат TRAIL был получен в, бактериях и содержал гистидиновый таг на С-конце молекулы (His/TRAIL). Позднее было показано, что препарат TRAIL с гистидиновым тагом образует многомерные агрегаты и проявляет значительную токсичность на гепатоцитах [8, 9]. В дальнейшем был получен препарат TRAIL (а.о. 114-281) без тагов, который состоял только из активных тримерных молекул и практически не проявлял токсичности [4]. Однако этот препарат был экспрессирован с добавлением инициаторного метионинового кодона и потенциально обладал высокой антигенностью, поскольку при экспрессии белков в бактериях TV-концевой метионин расщепляется не полностью. Таким образом, получение качественного препарата рекомбинантного внеклеточного домена цитокина TRAIL (a.o.l 14-281) без дополнительных искусственных последовательностей и без TV-концевого метионина и с высоким выходом белка является важной задачей для успешного применения TRAIL в доклинических и клинических исследованиях.

Терапевтический потенциал TRAIL оказался ограничен в связи с тем, что многие первичные опухоли резистентны к TRAIL. Несмотря на интенсивные исследования, механизмы, лежащие в основе эффективности и селективности действия TRAIL, окончательно не выяснены. Одной из причин является сложный механизм взаимодействия TRAIL с его пятью рецепторами, из которых лишь два, DR4 и DR5 (рецепторы смерти), способны проводить сигнал апоптоза. Связывание TRAIL с рецепторами-«ловушками» DcRl и DcR2 или растворимым рецептором остеопротегерином (OPG) не приводит к апоптозу. Рецепторы DcRl и DcR2 ингибируют TRAIL-индуцированный апоптоз, конкурируя с рецепторами смерти DR4 и DR5 за связывание с TRAIL или препятствуя передаче сигнала апоптоза. Также было показано, что уровень экспрессии рецепторов DR4 и DR5 на поверхности клеток не всегда определяет чувствительность клеток к TRAIL-индуцированному апоптозу [1012]. Многие линии раковых клеток экспрессируют оба рецептора смерти, DR4 и DR5, причем каждый из них способен инициировать апоптоз независимо друг от друга. Кроме того, последние данные свидетельствуют о том, что и раковые, и нормальные клетки могут приобретать устойчивость к TRAIL-индуцированному апоптозу путем изменения экспрессии рецепторов DcRl и DcR2. Таким образом, все рецепторы TRAIL играют значительную роль в регуляции TRAIL-индуцированного апоптоза [13-15].

Для выяснения роли каждого из рецепторов DR4 и DR5 в механизме TRAIL-индуцированного апоптоза ранее методом фагового дисплея были получены DR4 и DR5-ceлeктивныe мутантные варианты TRAIL, содержащие по 6 аминокислотных замен [15]. Другие DR4 и DR5-ceлeктивныe мутантные варианты TRAIL (D218H и D269H) были получены с помощью алгоритма автоматического дизайна FOLD-X [16]. Все ранее охарактеризованные мутантные варианты в той или иной степени избирательно связывались с рецепторами DR4 или DR5, однако сохраняли высокое сродство к рецепторам-«ловушкам» DcRl и DcR2.

В данной диссертационной работе были разработаны новые эффективные методы экспрессии и очистки рекомбинантных препаратов TRAIL и новых DRS-специфичных мутантных вариантов DR5-A и DR-B в Escherichia coli. Разработанные методы позволяют очистить до 300 мг (300 мг из телец включения и 75-100 мг из цитоплазматической фракции белков) высокоактивного целевого белка TRAIL из 1 литра культуры клеток, что позволяет рассматривать препарат как потенциальное противораковое средство, пригодное для клинических испытаний. Кроме того, в данной работе получены новые мутантные варианты TRAIL DR5-A и DR5-B. Показано, что они обладают наибольшей специфичностью к рецептору DR5 по сравнению с ранее описанными рецептор-специфичными мутантными вариантами. Наряду с высокой аффинностью к рецептору DR5, они практически не связывались не только с рецептором DR4, но и с рецепторами-ловушками» DcRl и DcR2. Кроме того, мутантные варианты TRAIL DR5-A и DR-B в несколько раз эффективнее вызывали апоптоз в DR5-3aBHCHMbix линиях раковых клеток, что делает их потенциальными кандидатами для терапии опухолей, резистентных к TRAIL дикого типа.

Целью данной диссертационной работы являлось повышение селективности цитокина TRAIL к рецептору смерти DR5 путем введения комбинации DRS-специфических мутаций в структуру белка и получения рецептор-специфичных мутантных вариантов DR5-A и DR5-B; определение их констант диссоциации при связывании с пятью рецепторами TRAIL и исследование биологической активности всех препаратов на различных линиях раковых клеток для создания эффективных средств терапии опухолевых заболеваний.

Задачи исследования:

1. Получить эффективную экспрессионную конструкцию для продукции рекомбинантного цитокина TRAIL в виде гибридного белка с тиоредоксином в Е. coli, разработать методику очистки и ренатурации гибридного белка тиоредоксин/TRAIL и очистки целевого белка TRAIL.

2. Охарактеризовать физико-химические свойства и исследовать биологическую активность полученного препарата TRAIL

3. Получить и очистить новые мутантные варианты TRAIL, специфичные к рецептору смерти DR5.

4. Определить константы связывания TRAIL дикого типа и его рецептор-специфичных мутантных вариантов с пятью рецепторами TRAIL методом поверхностного плазмонного резонанса.

5. Провести сравнительный анализ биологической активности TRAIL дикого типа и его мутантных вариантов в различных линиях раковых клеток.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Яголович, Анна Валерьевна

7. ВЫВОДЫ

1. Разработаны методы экспрессии и очистки белка TRAIL и его рецептор-специфичных мутантных вариантов.

2. Методом аналитического ультрацентрифугирования показано, что полученные препараты TRAIL и его мутантных вариантов высоко гомогенны и на 98% состоят из тримерных молекул.

3. Методом поверхностного плазмонного резонанса определены константы диссоциации при связывании TRAIL дикого типа и его рецептор-специфичных мутантных вариантов с рецепторами смерти DR4 и DR5 и с рецепторами-«ловушками» DcRl, DcR2 и OPG.

4. Показано, что полученные мутантные варианты TRAIL DR5-A и DR5-В обладают высокой аффинностью к рецептору смерти DR5, практически не связываются с рецепторами DR4 и DcRl, а их сродство к рецепторам DcR2 и OPG в 20 и 100 раз ниже, соответственно, по сравнению с TRAIL дикого типа.

5. Показано, что введение мутации Asp269His в вариант DR5-8 усиливает сродство к рецептору DR5 в 3.5 раза без потери селективности к другим рецепторам, а аминокислотный остаток Asp267 ухудшает взаимодействие TRAIL с рецепторами-«ловушками» DcR2 и OPG.

6. Показано, что DR5-cпeцифичныe мутантные варианты TRAIL DR5-A и DR5-B в несколько раз эффективнее вызывают апоптоз в DR5-чувствительных линиях раковых клеток по сравнению с TRAIL дикого типа.

6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей диссертационной работе разработана методика получения рекомбинантного внеклеточного домена цитокина TRAIL (аминокислотные остатки 114-281) без тагов и без TV-концевого метионина. Синтетический ген человеческого цитокина TRAIL был клонирован в плазмидный вектор рЕТ-32а и был получен высокий уровень экспрессии (1.2 г/л) гибридного белка тиоредоксин/TRAIL в бактериальном штамме Escherichia coli BL21(DE3) в виде телец включения. Целевой белок TRAIL был очищен путем растворения и рефолдинга телец включения* и дальнейшего расщепления гибридного белка тиоредоксин/TRAIL легкой цепью энтеропептидазы человека (L-HEP). Было показано, что полученный препарат TRAIL на 98% состоит из тримеров и формирует кристаллы в в-фосфатном буфере с разрешение дифракционной^ решетки ~3.0 А. Препараты TRAIL демонстрировали высокую биологическую активность на различных линиях раковых клеток. Разработанная методика позволяет получить до 400 мг рекомбинантного целевого белка TRAIL и его мутантных вариантов из 1 литра культуры клеток. Высокие выходы и относительно низкая стоимость полученного высокоактивного препарата TRAIL делают его хорошим кандидатом для терапии рака различного происхождения.

Было показано, что агенты, повреждающие цитоскелет (таксол и. колцемид и цитохалазин Д), усиливают действие TRAIL и позволяют преодолеть защиту, связанную с гиперэкспрессией' Вс1-2. Учитывая, что-таксол и колцемид входят во многие современные схемы химиотерапии опухолей, их совместное применение с препаратами рекомбинантного TRAIL открывает широкие перспективы- для лечения опухолей, резистентных к традиционной терапии.

Кроме того, в данной работе разработаны и получены новые DR5-селективные мутантные варианты TRAIL DR5-A и DR5-B. Измерение констант диссоциации этих мутантных вариантов при связывании с каждым из пяти рецепторов подтвердило, что они практически не взаимодействуют с рецепторами DR4 и DcRl и имеют значительно сниженную аффинность к рецепторам DcR2 и OPG. Новые мутантные варианты более эффективно индуцируют апоптоз по сравнению с TRAIL дикого типа в DR5-чyвcтвитeльныx линиях раковых клеток. Кроме того, они, как и TRAIL дикого типа, способны индуцировать апоптоз в линии клеток HeLa с гиперэкспрессией Вс1-2 в комбинации с ингибиторами цитоскелета таксолом и цитохалазином Д.

Подводя итог, следует сказать, что новые DR5-cпeцифичныe варианты TRAIL DR5-A и DR5-B могут служить полезным инструментом для изучения роли различных рецепторов в механизме TRAIL-индуцированного апоптоза в различных типах раковых клеток. Благодаря высокой специфичности и биологической активности мутантные варианты TRAIL DR5-A и DR5-B могут быть использованы для терапии опухолей, резистентных к TRAIL дикого типа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Яголович, Анна Валерьевна, 2010 год

1. Wiley, S. R., Schooley, K., Smolak, P. J. et al. (1995). Identification and characterization of a new member of the TNF family that induces apoptosis. Immunity 3:673-682.

2. Wajant, H., Moosmayer, D., Wuest, T. et al. (2001). Differential activation of TRAIL-R1 and -2 by soluble and membrane TRAIL allows selective surface antigen-directed activation of TRAIL-R2 by a soluble TRAIL derivative. Oncogene 20:4101-4106.

3. Pitti, R. M., Marsters, S. A., Ruppert, S. et al. (1996). Induction of apoptosis by Apo-2 ligand, a new member of the tumor necrosis factor receptor family. J". Biol. Chem. 271:12687-12690.

4. Ashkenazi, A., Pai, R.C., Fong, S. et al. (1999). Safety and antitumor activity of recombinant soluble Apo2 ligand. J. Clin. Invest. 104:155-162.

5. Yee, L., Fanale, M., Dimick, K. et al. (2007). A Phase lb safety and pharmacokinetic study of recombinant human Apo2L/TRAIL in combination with rituximab in patients with low-grade non-Hodgkin's lymphoma. J. Clin. Oncol. 25:8078.

6. Jo, M., Kim, T.H., Seol; D.W. et al. (2000). Apoptosis induced in normal human hepatocytes by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand. Retroviral membrane display of apoptotic effector molecules. Nat. Med. 6:564567.

7. Lawrence, D., Shahrokh, Z., Marsters, S. et al. (2001). Differential hepatocyte toxicity of recombinant Apo2L/TRAIL versions. Nat. Med. 7:383385.

8. Griffith, T.S., Chin, W.A., Jackson, G.C., et al. (1998). Intracellular regulation of TRAIL-induced apoptosis in human melanoma cells. J Immunol. 161:2833-2840.

9. Sadarangani, A., Kato, S., Espinoza, N. et al. (2007). TRAIL mediates apoptosis in cancerous but not normal primary cultured cells of the human reproductive tract. Apoptosis 12:73-85.

10. Dyer, M.J., MacFarlane, M., Cohen, G.M. (2007). Barriers to effective TRAIL-targeted therapy of malignancy. J. Clin. Oncol. 25:4505-4506.

11. Clancy, L., Mruk, K., Archer, K. et al. (2005). Preligand assembly domain-mediated ligand-independent association between TRAIL receptor 4 (TR4) and TR2 regulates TRAIL-induced apoptosis. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102: 18099-18104.

12. Merino, D., Lalaoui, N., Morizot, A. et al. (2006). Differential inhibition of TRAIL-mediated DR5-DISC formation by decoy receptors 1 and 2. Mol. Cell. Biol. 26: 7046-7055.

13. Van der Sloot, A.M., Tur, V., Szegezdi, E., et al. (2006). Designed tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand variants initiating apoptosis exclusively via the DR5 receptor. Proc Natl Acad Sci USA 103:86348639.

14. Gerl, R., Vaux, D. (2005). Apoptosis in the development and treatment of cancer. Carcinogenesis 26(2): 263-270.

15. Peter, M.E. (2005). Taming TRAIL: the winding path to a novel form of cancer therapy. Cell Death Differ. 7:693-694.

16. Locksley, R. M., Killeen, N., Lenardo, M. J. (2001). The TNF and TNF receptor superfamily: integrating mammalian biology. Cell 104: 487-501.

17. Wajant, H. (2003). Death receptors. Essays Biochem. 39: 53-71.

18. Aggarwal, B. B. S., Kohr, W. J., Hass, P. E. et al. (1985). Human Tumor Necrosis Factor: production, purification, and characterization. J. Biol. Chem. 260:2345-2354.

19. Schneider, P., Holler, N., Bodmer, J. L. et al. (1998). Conversion of membrane-bound Fas(CD95) ligand to its soluble form is associated with downregulation of its proapoptotic activity and loss of liver toxicity. J. Exp. Med. 187: 1205-1213.

20. Kagawa, S., He, C., Gu, J. et al. (2001). Antitumor activity and bystander effects of the tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). Gene Cancer Research 61: 3330-3338.

21. Wang, Q., Ji, Y., Wang, X. et al: (2000). Isolation and molecular characterization of the 5-upstream region of the human TRAIL gene. Biochem. Biophys. Res. Commun. 276:466-471.

22. Manzo, F., Nebbioso, A., Miceli, M. et al. (2008). TNF-related apoptosis-inducing ligand: Signalling of a 'smart' molecule. Int. J. Biochem. Cell Biol. 41(3):460-466.

23. Mariani, S.M., Krammer, P.H. (1998). Differential regulation of TRAIL and CD95 ligand in transformed cells of the T and B lymphocyte lineage. Eur. J. Immunol. 28: 973-982.

24. Bodmer, J.L., Meier, P., Tschopp, J. et al. (2000). Cysteine 230 is essential for the structure and activity of the cytotoxic ligand TRAIL. J. Biol. Chem. 275: 20632-20637.

25. Smyth, M. J., Takeda, K., Hayakawa, Y. et al. (2003). Nature's TRAIL on a path to cancer immunotherapy. Immunity 18:1-6.

26. Sheikh, M.S., Burns, T.F., Huang, Y., et al. (1998). P53-dependent and -independent regulation of the death receptor KILLER/DR5 gene expression in response to genotoxic stress and tumor necrosis factor alpha. Cancer Res. 58:1593-1598.

27. Guicciardi, M.E., Gores, G.J. (2009). Life and death by death receptors The FASEB Journal 23:1625-1637.

28. Cha, S. S., Kim, M. S., Choi, Y. H. et al. (1999). 2.8 A resolution crystal structure of human TRAIL, a cytokine with selective antitumor activity. Immunity 11: 253-261.

29. Hymowitz, S. G., Christinger, H. W., Fuh, G. et al. (1999). Triggering cell death: the crystal structure of Apo2L/TRAIL in a complex with death receptor 5. Mol. Cell. 4:563-71.

30. Kim, S. H., Kim, K., Kwagh, J. G. et al. (2004). Death induction by recombinant native TRAIL and its prevention by a caspase 9 inhibitor in primary human esophageal epithelial cells. J. Biol: Chem. 279:40044-40052.

31. Hymowitz, S. G., O'Connell, M. P., Ultsch, M. H. et al. (2000). A unique zinc-binding site revealed by a high-resolution X-ray structure of homotrimeric Apo2L/TRAIL. Biochemistry 39:633-640.

32. Boldin, M. P., Mett, I. L., Varfolomeev, E. E. et al. (1995). Self-association of the "death. domains" of the p55 tumor necrosis factor (TNF) receptor and Fas/APOl prompts signaling for TNF and Fas/APOl effects. J. Biol. Chem. 270:387-391.

33. Kimberley, F. C., Screaton G. R. (2004). Following a TRAIL: Update on a ligand and it's five receptors. Cell Research 14:359-372.

34. Kischkel, F. C, Lawrence, D. A., Chuntharapai, A. et al. (2000). Apo2L/TRAIL-dependent recruitment of endogenous FADD and caspase-8 to death receptors 4 and 5. Immunity 12:611-620.

35. Salvesen, G. S., Dixit, V. M. (1999). Caspase activation: the induced-proximity model. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96:10964-10967.

36. Shi, Y. (2004). Caspase activation: revisiting the induced proximity model. Cell 117:855-858.

37. Chao, Y., Shiozaki, E. N., Srinivasula, S. M. et al. (2005). Engineering a dimeric caspase-9: a re-evaluation of the induced proximity model for caspase activation. PLoS Biol. 6:1079-1087.

38. Lazebnik, Y. A, Kaufmann, S. H., Desnoyers, S. et al. (1994). Cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase by a proteinase with properties like ICE. Nature 371:346-347.

39. Youle, R.J., Strasser, A. (2008). The Bcl-2 protein family: opposing activities that mediate cell death. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9: 47-59.

40. Danial, N. N., Korsmeyer, S. J. (2004). Cell death: critical control points. Cell 116:205-219.

41. Oldenhuis, C., Stegehuis, J., Walenkamp, A. et al. (2008). Targeting TRAIL death receptors. Curr. Opin. Pharmacol. 8:433-439.

42. Zou, H., Li, Y., Liu, X. et al. (1999). An APAF-l/cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9. J. Biol. Chem. 274:11549-11556.

43. Jin, Z., El-Deiry, W.S. (2005). Overview of cell death signaling pathways, Cancer Biol. Ther. 4:139-163.

44. Spierings, D.C., de Vries, E. G., Vellenga, E. et al. (2004). Tissue distribution of the death ligand TRAIL and its receptors. J. Histochem. Cytochem. 52:821-831.

45. Pan, G., O'Rourke, K., Chinnaiyan, A. M. et al. (1997). The receptor for the cytotoxic ligand TRAIL. Science 276(5309):111-113.

46. Huang, Y., Sheikh, M. S. (2007). TRAIL death receptors and cancer therapeutics. Toxicol. Appl. Pharmacol. 224(3):284-289.

47. Lahm, A., Paradisi, A., Green, D. R. et al. (2003). Death fold domain interaction in apoptosis. Cell Death Differ. 10:10-12.

48. Wu, G.S, Burns ,T. F., McDonald 3rd, E. R. et al. (1997). KILLER/DR5 is a DNA damage-inducible p53-regulated death receptor gene. Nat. Genet. 17:141-143.

49. Sheridan, J. P., Marsters, S. A., Pitti, R. M. et al. (1997). Control of TRAIL-induced apoptosis by a family of signaling and decoy receptors. Science 277:818-821.

50. Kischkel, F. C, Lawrence, D.A., Chuntharapai, A. et al. (2000). Apo2L/TRAIL-dependent recruitment of endogenous FADD and caspase-8 to death receptors 4 and 5. Immunity 12:611-620.

51. Ashkenazi, A. (2002). Targeting death and decoy receptors of the tumor-necrosis factor superfamily. Nat. Rev. Cancer 2:420-430.

52. MacFarlane, M., Inoue, S., Kohlhaas, S. L., et al. (2005). Chronic lymphocytic leukemic cells exhibit apoptotic signaling via TRAIL-R1. Cell Death Differ. 12:773-782.

53. Kurbanov, B. M., Geilen, C.C., Fecker, L.F. et al. (2005). Efficient TRAIL-Rl/DR4-Mediated Apoptosis in Melanoma Cells by Tumor Necrosis Factor-Related Apoptosis-Inducing Ligand (TRAIL). J. Invest. Dermatol. 125:1010-019.

54. MacFarlane, M., Kohlhaas, S. L., Sutcliffe, M. J. et al. (2005). TRAIL receptor-selective mutants signal to apoptosis via TRAIL-R1 in primary lymphoid malignancies. Cancer Res. 65:11265-11270.

55. Horak, P., Pils, D., Haller, G. et al. (2005). Contribution of epigenetic silencing of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand receptor 1 (DR4) to TRAIL resistance and-ovarian cancer. Mol. Cancer Res. 3:335-343.

56. Zhang, X. D., Franco, A. V., Nguyen, T. et al. (2000). Differential localization and regulation of death and decoy receptors for TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) in human melanoma cells. J. Immunol. 164:3961-3970.

57. Younes, M., Georgakis, G. V., Rahmani, M. et al. (2006). Functional expression of TRAIL receptors TRAIL-R1 and TRAIL-R2 in esophageal adenocarcinoma. Eur. J. Cancer 42:542-547.

58. Melloni, E., Secchiero, P., Celeghini, C. et al. (2005). Functional expression of TRAIL and TRAIL-R2 during human megakaryocytic development. J. Cell Physiol. 204:975-982.

59. Degli-Esposti,' M. A., Dougall, W. C., Smolak, P. J. et al. (1997). The novel receptor TRAIL-R4 induces NF-kappaB and. protects against TRAIL-mediated apoptosis, yet retains an incomplete death domain. Immunity 7:813820.

60. Degli-Esposti, M. (1999). To die or not to die the quest of the TRAIL receptors. J. Leukoc. Biol. 65:535-542.

61. Emery, J. G., McDonnell, P., Burke, M.B. et al. (1998). Osteoprotegerin is a receptor for the cytotoxic ligand TRAIL. J.' Biol. Chem. 273:14363-14367.

62. Hesry, V., Piquet-Pellorce, C., Travert, Ml et al. (2006). Sensitivity of prostate cells to TRAIL-induced apoptosis increases with tumor progression: DR5 and Caspase 8 are key players. The Prostate 66:987-995.

63. Zauli, G., Rimondi, E., Nicolin, V. et al. (2004). TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) blocks osteoclastic differentiation induced by RANKL plus MCSF. Blood 104:2044-2050.

64. Duiker, E. W., de Vries, E. G., Mahalingam, D. et al. (2009). Enhanced antitumor efficacy of a DR5-specific TRAIL variant over recombinant human TRAIL in' a bioluminescent ovarian cancer xenograft model. Clin. Cancer Res. 15:2048-2057.

65. Tur, V., van der Sloot, A. M., Reis, C. R. et al. (2008). DR4-selective tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) variants obtained by structure-based design. J. Biol. Chem. 283:20560-20568.

66. Chuntharapai, A., Dodge, K., Grimmer, K. et al. (2001). Isotype-dependent inhibition of tumor growth in vivo by monoclonal antibodies to death receptor 4. J. Immunol. 166:4891-4898.

67. Newsom-Davis, T., Prieske, S., Walczak, H. (2009). Is TRAIL the holy grail of cancer therapy? Apoptosis 14:607-623.

68. Walczak, H., Miller, R. E., Ariail, K. et al. (1999). Tumoricidal activity of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in vivo. Nat. Med. 5:157-163.

69. Kelley, S. K., Ashkenazi, A. (2004). Targeting death receptors in cancer with Apo2L/TRAIL. Curr. Opin. Pharmacol. 4:333-339.

70. Almasan, A., Ashkenazi, A. (2003). Apo2L/TRAIL: apoptosis signaling, biology, and potential for cancer therapy. Cytokine Growth Factor Rev. 14:337-348.

71. Wang, S. (2008). The promise of cancer therapeutics targeting the TNF-related apoptosis-inducing ligand and TRAIL receptor pathway. Oncogene 27:6207-6215.

72. Abdollahi, T., Robertson, N. M., Abdollahi, A. et al. (2005). Inhibition of TRAIL-induced apoptosis by IL-8 is mediated by the p38-MAPK pathway in OVCAR3 cells. Apoptosis 10:1383-1393.

73. Wajant, H., Pfizenmaier, K., Scheurich, P. (2002). TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) and its receptors in tumor surveillance and cancer therapy. Apoptosis 7:449-459.

74. Takeda, K., Hayakawa, Y., Smyth, M. J. et al. (2001). Involvement of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in surveillance of tumor metastasis by liver natural killer cells. Nat. Med. 7: 94-100.

75. Fanger, N. A., Maliszewski, C. R., Schooley, K. et al. (1999). Human dendritic cells mediate cellular apoptosis via tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). J. Exp. Med. 190:1155-1164.

76. Griffith, T. S., Wiley, S. R., Kubin, M. Z. et al. (1999). Monocyte-mediated tumoricidal activity via the tumor necrosis factor-related cytokine, TRAIL. J. Exp. Med. 189:1343-1354.

77. Liu, S., Yu, Y., Zhang, M. et al. (2001). The involvement of TNF-alpha-related apoptosis-inducing ligand in the enhanced cytotoxicity of IFN-beta-stimulated human dendritic cells to tumor cells. J. Immunol. 166: 5407-5415.

78. Lee, H.O., Herndon, J. M., Barreiro, R. et al. (2002). TRAIL: a mechanism of tumor surveillance in an immune privileged site. J. Immunol. 169:4739-4485.

79. Phillips, T. A., Ni, J., Pan, G. et al. (1999). TRAIL (Apo-2L) and TRAIL receptors in human placentas: implications for immune privilege. J. Immunol. 162:6053-6059.

80. Zamai, L., Secchiero, P., Pierpaoli, S. et al. (2000). TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) as a negative regulator of normal human erythropoiesis. Blood 95: 3716-3724.

81. Li, J. H., Kirkiles-Smith, N. C., McNiff, J. M. et al. (2003). TRAIL induces apoptosis and inflammatory gene expression in human endothelial cells. J. Immunol. 171:1526-1533.

82. Clarke, P., Meintzer, S. M., Gibson, S. et al. (2000). Reovirus-induced apoptosis is mediated by TRAIL. J. Virol. 74:8135-8139.

83. Secchiero, P., Gonelli, A., Carnevale, E. et al. (2004). Evidence for a proangiogenic activity of TNF-related apoptosis-inducing ligand. Neoplasia 6:364-373.

84. Grosse-Wilde, A., Voloshanenko, O., Bailey, S. L. et al. (2008). TRAIL-R deficiency in mice enhances lymph node metastasis without affecting primary tumor development. J. Clin. Invest. 118:100-110.

85. Cretney, E., Takeda, K., Yagita, H. et al. (2002). Increased susceptibility to tumor initiation and metastasis in TNF-related apoptosis-inducing ligand-deficient mice. J. Immunol. 168:1356-1361.

86. Finnberg, N., Klein-Szanto, A. J., El-Deiry, W. S. (2008). TRAIL-R deficiency in mice promotes susceptibility to chronic inflammation and tumorigenesis. J. Clin. Invest. 118: 111-123.

87. Takeda, K., Smyth, M. J., Cretney, E. et al. (2002). Critical role for tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in immune surveillance against tumor development. J. Exp. Med. 195:161-169.

88. Trauzold, A., Siegmund, D., Schniewind, B. et al. (2006). TRAIL promotes metastasis of human pancreatic ductal adenocarcinoma. Oncogene 25:7434-7439.

89. Blankenstein, T. (2005). The role of tumor stroma in the interaction between tumor and immune system. Curr. Opin. Immunol. 17:180-186.

90. Mace, T. A., Yamane, N., Cheng, J. et al. (2006). The potential of the tumor microenvironment to influence Apo2L/TRAIL induced apoptosis. Immunol. Invest. 35: 279-296.

91. Kim, M., Park, S. Y., Pai, H. S. et al. (2004). Hypoxia inhibits tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis by blocking Bax translocation. Cancer Res. 64: 4078-4081.

92. Sedger, L. M., Shows, D. M., Blanton, R. A. et al. (1999). IFN-gamma mediates a novel antiviral activity through dynamic modulation of TRAIL and TRAIL receptor expression. J. Immunol. 163:920-926.

93. Miura, Y., Misawa, N., Maeda, N. et al. (2001). Critical contribution of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) to apoptosis of human CD4+ T cells in HIV-1-infected hu-PBL-NOD-SCID mice. J. Exp. Med. 193:651-660.

94. Ishikawa, E., Nakazawa, M., Yoshinari, M. et al. (2005). Role of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in immune response to influenza virus infection in mice. J. Virol. 79:7658-7663.

95. Brincks, E. L., Katewa, A., Kucaba, T. A. et al. (2008). CD8 T cells utilize TRAIL to control influenza virus infection. J. Immunol. 181:4918-4925.

96. Herold, S., Steinmueller, M., von Wulffen, W. et al. (2008). Lung epithelial apoptosis in influenza virus pneumonia: the role of macrophage-expressed TNF-related apoptosis-inducing ligand. J. Exp. Med. 205:3065-3077.

97. Mirandola, P., Ponti, C., Gobbi, G. et al. (2004). Activated human NK and CD8+ T cells express both TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and TRAIL receptors but are resistant to TRAIL-mediated cytotoxicity. 104:2418-2424.

98. Janssen, E. M., Droin, N. M., Lemmens, E. E. et al. (2005). CD4+ T-cell help controls CD8+ T-cell memory via TRAIL-mediated activation-induced cell death. Nature 434:88-93.

99. Zhang, Y., Boado, R. J., Pardridge, W. M. (2003). In vivo knockdown of gene expression in brain cancer with intravenous RNAi in adult rats. J. Gene Med. 5:1039-1045.

100. Cretney, E., Shanker, A., Yagita, H. et al. (2006). TNF-related apoptosis inducing ligand as a therapeutic agent in autoimmunity and cancer. Immunology and Cell Biology 84:87-98.

101. Lub-de Hooge, M. N., de Vries, E. G., de Jong, S. et al. (2005). Soluble TRAIL concentrations are raised in patients with systemic lupus erythematosus. Ann. Rheum. Dis. 64: 854-858.

102. Wandinger, K. P., Lunemann, J. D., Wengert, O. et al. (2003). TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) as a potential response marker for interferon-beta treatment in multiple sclerosis. Lancet 361:2036-2043.

103. Lamhamedi-Cherradi, S. E., Zheng, S. J., Maguschak, K. A. et al. (2003). Defective thymocyte apoptosis and accelerated autoimmune diseases in TRAIL-/- mice. Nat. Immunol. 4:255-260.

104. Corazza, N., Brumatti, G., Jakob, S. et al. (2004). TRAIL and thymocyte apoptosis: not so deadly? Cell Death Differ. 11: 213-215.

105. Cretney, E., Uldrich, A. P., Berzins, S. P. et al. (2003). Normal thymocyte negative selection in-TRAIL-deficient mice. J. Exp. Med. 198:491496.

106. Jacobsen, E. A., Ochkur, S. L, Pero, R. S. et al. (2008). Allergic pulmonary inflammation in mice is dependent on eosinophil-induced recruitment of effector T cells. J. Exp. Med. 205:699-710.

107. Lee, J. J., Dimina, D., Macias, M. P. et al. (2004). Defining a link with asthma in mice congenitally deficient in eosinophils. Science 305:1773-1776.

108. Sumi, T., Ishida, W., Okumura, K. et al. (2009). Activation of tumour necrosis, factor-related apoptosis-inducing ligand receptor enhances the severity of murine allergic conjunctivitis. Br. J. Ophthalmol! 93:140-115.

109. Pai, S. I., Wu, G. S., Ozo" ren, N. et al. (1998). Rare loss-of-function mutation of a death'receptor gene in head and neck cancer. Cancer Res. 58: 3513-3518.

110. Wang, S., El-Deiry, W. S. (2004). Inducible silencing of KILLER/DR5 in vivo promotes bioluminescent colon tumor xenograft growth and confers resistance to chemotherapeutic agent 5-fluorouracil. Cancer Res. 64: 6666-6672.

111. Finnberg, N., Gruber, J. J., Fei, P. et al. (2005). DR5 knockout mice are compromised in radiation-induced apoptosis. Mol. Cell Biol. 25: 2000-2013.

112. Laguinge, L. M., Samara, R. N., Wang, W. et al. (2008). DR5 receptor mediates anoikis in human colorectal carcinoma cell lines. Cancer Res. 68: 909917.

113. Diehl, G. E., Yue, H. H., Hsieh, K. et al. (2004). TRAIL-R as a negative regulator of innate immune cell responses. Immunity 21:877-889.

114. Falschlehner, C., Emmerich, C. H., Gerlach, B. et al. (2007). TRAIL signalling: decisions between life and death. Int. J. Biochem. Cell Biol. 39:14621475.

115. Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B.W. et al. (1997). IKK-1 and IKK-2: cytokine-activated IkappaB kinases essential for NF-kappaB activation. Science 278:860-866.

116. Lin, Y., Devin, A., Cook, A. et al. (2000): The death domain kinase RIP is essential for TRAIL (Apo2L)-induced activation of IkappaB kinase and c-Jun N-terminal kinase. Mol. Cell Biol. 20:6638-6645.

117. Malinin, N. L., Boldin, M. P., Kovalenko, A. V. et al. (1997). MAP3K-related kinase involved in NF-kappaB induction by TNF, CD95 and IL-1. Nature 385:540-544.

118. Ehrhardt, H., Fulda, S., Schmid, I. et al. (2003). TRAIL-induced survival and proliferation in cancer cells resistant towards TRAIL-induced apoptosis mediated by NF-kappaB. Oncogene 22:3842-3852.

119. Kumar-Sinha, C., Varambally, S., Sreekumar, A. et al. (2002). Molecular crosstalk between the TRAIL and interferon signaling pathways. J. Biol. Chem. 277:575-585.

120. Hu, W. H., Johnson, H., Shu, H. B. (1999). Tumor- necrosis factor-related apoptosis -inducing ligand receptors signal NF-kB and JNK activation and apoptosis through distinct pathways. J. Biol. Chem. 274:30603-30610.

121. Varfolomeev, E., Maecker, H., Sharp, D. et al. (2005). Molecular determinants of kinase pathway activation by Apo2 ligand/tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand. J. Biol. Chem. 280:40599-40608.

122. Petersen, S. L., Wang, L., Yalcin-Chin, A. et al. (2007). Autocrine TNFalpha signaling renders human cancer cells susceptible to Smac-mimetic-induced apoptosis. Cancer Cell 12:445-456.

123. Lee, T. J., Lee, J. T., Park, J. W. et al. (2006). Acquired TRAIL resistance in human breast cancer cells are caused by the sustained cFLIP(L) and XIAP protein levels and ERK activation. Biochem. Biophys. Res. Commun. 351:1024-1030.

124. Ishimura, N., Isomoto, H., Bronk, S. F. et al. (2006). Trail induces cell migration and invasion in apoptosis-resistant cholangiocarcinoma cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 290:G129-G136.

125. Inoue, H., Shiraki, K., Yamanaka, T. et al. (2002). Functional expression of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in human colonic adenocarcinoma cells. Lab. Invest. 82:1111-1119.

126. Hinz, S., Trauzold, A., Boenicke, L. et al. (2000). Bcl-XL protects pancreatic adenocarcinoma cells against CD95- and TRAIL-receptor-mediated apoptosis. Oncogene 19: 5477-5486.

127. Fulda, S., Kufer, M. U., Meyer, E. et al. (2001). Sensitization for death receptor- or drug-induced apoptosis by re-expression of caspase-8 through demethylation or gene transfer. Oncogene 20:5865-5877.

128. Eggert, A., Grotzer, M. A., Zuzak, T.J. et al. (2001). Resistance to tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)- induced apoptosis in neuroblastoma cells correlates with a loss of caspase-8 expression. Cancer Res. 61:1314-1319.

129. Zhang, L., Gii, J., Lin, T. cl al. (2002). Mechanisms involved in development of resistance to adenovirus-mediated proapoptotic gene therapy in DLD1 human colon cancer cell line. Gene Therapy 9:1262-1270;

130. Shivapurkar, N., Toyooka, S., Toyooka, K. O. et al. (2004). Aberrant methylation of trail decoy receptor genes is frequent in multiple tumor types. Int. J. Cancer. 109:786-792.

131. Vigneswaran, N., Baucum, D. G., Wu, J. et al. (2007); Repression of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) but not its receptors during oral cancer progression. BMC Cancer 7:108.

132. Zhang, X. D., Franco, A., Myers, K. et alt (1999). Relation of TNF related? apoptosis-inducing ligand (TRAIL) receptor and FLICE-inhibitory protein expression to TRAIL-induced apoptosis of melanoma; Cancer Res. 59:2747-2753.

133. Fisher, M. J., Virmani, A. K., Wu, L. et al:. (2001): Nucleotide substitution in the ectodomain of trail! receptor DR4 is associated with lung cancer and head and neck cancer. Clin. Cancer Res. 7:1688-1697.

134. Shin, M. S., Kim, H; S., Lee, S. H. et al. (2001). Mutations of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 1 (TRAIL-R1) and receptor 2 (TRAIL-R2) genes in metastatic breast cancers. Cancer Res. 61:49424946.

135. Lee, S. H., Shin, M. S., Kim, H. S. et al. (2001). Somatic mutations of TRAIL-receptor 1 and TRAIL-receptor 2 genes in non-Hodgkin's lymphoma. Oncogene 20:399-403.

136. Lee, S. H., Shin, M. S., Kim, H. S. et al. (1999). Alterations of the DR5/TRA1L receptor 2 gene in non-small cell lung cancers. Cancer Res. 59:5683-5686.

137. Jeng, Y. M., Hsu, H. C. (2002). Mutation of the DR5/TRAIL receptor 2 gene is infrequent in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 181:205-208.

138. Wagner, K. W., Punnoose, E. A., Januario, T. et al. (2007). Death-receptor O-glycosylation controls tumor-cell sensitivity to the proapoptotic ligand Apo2L/TRAIL. Nat. Med. 13:1070-1077.

139. Daniel, P. T., Wieder, T., Sturm, I. et al. (2001). The kiss ol death: promises and failures of death receptors and ligands in cancer therapy. Leukemia 15:1022-1032.

140. Siegmund, D. et al. (2002). Selective inhibition of FLICE-like inhibitory protein expression with small interfering RNA oligonucleotides is sufficient to sensitize tumor cells for TRAIL-induced apoptosis. Mol. Med. 8:725-732.

141. Micheau, O. (2003). Cellular FLICE-inhibitory protein: an attractive therapeutic target? Expert Opin. Ther. Targets 7:559-573.

142. Kim, H: S., Lee, J. W., Soung, Y. H: et al. (2003). Inactivating mutations of caspase-8 gene in colorectal carcinomas. Gastroenterology 125:708-715.

143. Mandruzzato, S., Brasseur, F., Andry, G. (1997). A CASP-8 mutation recognized by cytolytic T lymphocytes on a human head and neck carcinoma. J. Exp. Med. 186:785-793. '

144. Teitz, T., Wei, T., Valentine, M. B. (2000). Caspase 8 is deleted or silenced preferentially in childhood neuroblastomas with amplification of MYCN. Nat. Med. 6:529-535.

145. Miller, M. A., Karacay, B., Zhu, X. et al. (2006). Caspase 8L, a novel inhibitory isoform of caspase 8, is associated with undifferentiated neuroblastoma. Apoptosis 11:15-24.

146. Fulda, S. Tumor resistance to apoptosis. (2009). Int. J. Cancer 124:511-515.

147. Cursi, S., Rufini, A., Stagni, V. et al. (2006). Src kinase phosphorylates Caspase-8 on Tyr380: a novel mechanism of apoptosis suppression. Embo J. 25:1895-1905.

148. Adams, J. M., Cory, S.'(2007). The Bcl-2 apoptotic switch in cancer development and therapy. Oncogene 26:1324-1337.

149. Tsujimoto, Y., Finger, L. R., Yunis, J. et al. (1984). Cloning of the chromosome breakpoint of neoplastic B cells with the t(14;18) chromosome translocation. Science 226:1097-1099.

150. Pepper, C., Lin, T. T., Pratt, G. et al. (2008). Mcl-1 expression has in vitro and in vivo significance in chronic lymphocytic leukemia and is associated with other poor prognostic markers. Blood 112:3807-3817.

151. Kitada, S., Pedersen, I. M., Schimmer, A. D. et al. (2002). Dysregulation of apoptosis genes in hematopoietic malignancies. Oncogene 21:3459-3474.

152. Rampino, N., Yamamoto, H., lonov, Y. et al. (1997). Somatic frameshift mutations in the BAX gene in colon cancers of the microsatellite mutator phenotype. Science 275:967-969.

153. Egle, A., Harris, A.W., Bouillet, P. et al. (2004). Bim is a suppressor of Myc-induced mouse B cell leukemia. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:61646169.

154. Zinkel, S. S., Ong, C. C., Ferguson, D. O. et al. (2003). Proapoptotic BID is required for myeloid homeostasis and; tumor suppression. Genes Dev. 17:229-239.

155. Tagawa, H., Karnan, S., Suzuki, R. et al; (2005). Genome-wide array-based CGH for mantle cell lymphoma: identification of homozygous deletions of the proapoptotic gene BIM. Oncogene 24:1348-1358.

156. Mestre-Escorihuela, C., Rubio-Moscardo, F., Richter, J. A. et al. (2007). Homozygous deletions localize novel tumor suppressor genes in B-cell lymphomas. Blood 109:271-280.

157. Hunter, A. M., LaCassc, E. C., Korneluk, R. G. (2007). The inhibitors of apoptosis (IAPs) as cancer targets. Apoptosis 12:1543-1568:

158. Eckelman, B. P., Salvesen, G. S., Scott, F. L. (2006). Human inhibitor of apoptosis proteins: why XIAP is the black, sheep of the family. EMBO Rep. 7:988-994.

159. Survivin, mapped to 17q25, is significantly associated with poor prognostic factors and promotes cell survival in human neuroblastoma. Oncogene 19:617623.

160. Tamm, I., Kornblau, S. M., Segall, H. et al. (2000); Expression and prognostic significance of IAP-family genes in human cancers and myeloid leukemias. Clin. Cancer Res. 6:1796-1803.

161. De Graaf, A. O., van Krieken, J. H., Tonnissen, E. et al. (2005). Expression of C-IAP1, C-IAP2 and SURVIVIN discriminates different types of lymphoid malignancies. Br. J. Haematol. 130:852-859.

162. Du, C., Fang, M., Li, Y. et al. (2000). Smac, a mitochondrial protein that promotes cytochrome c-dependent caspase activation by eliminating IAP inhibition. Cell 102:33-42.

163. Verhagen, A. M., Ekert, P. G., Pakusch, M. et al. (2000). Identification of DIABLO, a mammalian protein that promotes apoptosis by binding to and antagonizing IAP proteins. Cell 102: 43-53.

164. Zhang, X. D., Zhang, X. Y., Gray, C. P. et al. (2001). Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis of human melanoma is regulated by Smac/DIABLO release from mitochondria. Cancer Res. 61:73397348.

165. Shetty, S., Gladden, J. B., Henson, E. S. et al. (2002). Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) upregulates death receptor 5 (DR5) mediated by NFkappaB activation in epithelial derived cell lines. Apoptosis 7:413-420.

166. Chen, X., Kandasamy, K., Srivastava, R. K. (2003). Differential roles of RelA (p65) and c-Rel subunits of nuclear factor kappa B in tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand signaling. Cancer Res. 63:1059-1066.

167. Ichijo, H. (1999). From receptors to stress-activated MAP kinases. Oncogene 18:6087-6093.

168. Zhang, X. D., Borrow, J. M., Zhang, X. Y. et al. (2003). Activation of ERK1/2 protects melanoma cells from TRAIL-induced apoptosis by inhibiting Smac/DIABLO release from mitochondria. Oncogene 22:2869-2881.

169. Frese, S., Pirnia, F., Miescher, D. et al. (2003). PG490-mediated sensitization of lung cancer cells to Apo2L/TRAIL-induced apoptosis requires activation of ERK2. Oncogene 22:5427-5435.

170. Ohtsuka, T., Buchsbaum, D., Oliver, P. et al. (2003). Synergistic induction of tumor/cell apoptosis by death receptor antibody and chemotherapy agent through JNK/p38 and mitochondrial death pathway. Oncogene 22:20342044.

171. Ono, K., Han, J. (2000). The p38< signal transduction pathway: activation and function. Cell Signal. 12:1-13.

172. Wajant, H. (2004). TRAIL and NFkappaB signaling a complex relationship. Vitam. Horm. 67:101-132.

173. Wang, S., El-Deiry, W. S. (2003b). TRAIL and apoptosis induction by TNF-family death-receptors. Oncogene 22: 8628-8633.

174. Jin, X., Wu, X. X., Abdel-Muneem Nouh, M. A. et al. (2007). Enhancement of death receptor 4 mediated apoptosis and cytotoxicity in renal cell carcinoma cells by subtoxic concentrations of doxorubicin. J. Urol. 177:1894-1899.

175. Guan, B., Yue, P., Clayman, G. L., et al. (2001). Evidence that the death receptor DR4 is a DNA damage-inducible, p53-regulated gene, J. Cell. Physiol. 188:98-105.

176. Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Abbasi, N. et al. (2005). NF-kappaB and FLIP in arsenic trioxide (ATO)-induced apoptosis in myelodysplastic syndromes (MDSs). Blood 106:3917-3925.

177. Sayers, T. J., Brooks, A.D., Koh, C.Y. et al. (2003). The proteasome inhibitor PS-341 sensitizes neoplastic cells to TRAIL-mediated apoptosis by reducing levels of c-FLIP. Blood 102:303-310.

178. Panner, A., James, C. D., Berger, M. S., Pieper, R. O. (2005). mTOR controls FLIPS translation and TRAIL sensitivity in glioblastoma multiforme cells. Mol. Cell Biol. 25: 8809-8823.

179. Kang, J., Kisenge, R. R., Toyoda, H. et al. (2003). Chemical sensitization and regulation of TRAIL-induced apoptosis in a panel of B-lymphocytic leukaemia cell lines. British J. Haematol. 123:921-932.

180. Hougardy, B. M., Maduro, J. H., van der Zee, A. G. et al. (2006). Proteasome inhibitor MG132 sensitizes HPV-positive human cervical cancer cells to rhTRAIL-induced apoptosis. Internat. J. Cancer 118:1892-1900.

181. Karikari, C. A., Roy, I., Tryggestad, E. et al. (2007). Targeting the apoptotic machinery in pancreatic cancers using small-molecule antagonists of the X-linked inhibitor of apoptosis protein. Mol. Cancer Ther. 6:957-966.

182. Mirandola, P., Sponzilli, I., Gobbi, G. et al. (2006). Anticancer agents sensitize osteosarcoma cells to TNF-related apoptosis-inducing ligand downmodulating IAP family proteins. Int. J. Oncol. 28:127-133.

183. Hao, J. H., Yu, M., Liu, F. T. et al. (2004). Bcl-2 inhibitors sensitize tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis by uncoupling of mitochondrial respiration in human leukemic CEM cells. Cancer Res. 64:3607-3616.

184. Fulda, S., Wick, W., Weller, M. et al. (2002). Smac agonists sensitize for Apo2L/TRAIL- or anticancer drug-induced apoptosis and induce regression of malignant glioma in vivo. Nat. Med. 8:808-815.

185. Ray, S., Bucur, O., Almasan, A. (2005). Sensitization of prostate carcinoma cells to Apo2L/TRAIL by a Bcl-2 family protein inhibitor. Apoptosis 10:1411-1418.

186. Rosato, R. R., Almenara, J. A., Coe, S. et al. (2007). The multikinase inhibitor sorafenib potentiates TRAIL lethality in human leukemia cells in association with Mcl-1 and cFLIPL down-regulation. Cancer Res. 67:94909500.

187. Ricci, M. S., Kim, S. H., Ogi, K. et al. (2007). Reduction of TRAIL-induced Mcl-1 and cIAP2 by c-Myc or sorafenib sensitizes resistant human cancer cells to TRAIL-induced death. Cancer Cell 12:66-80.

188. Voortman, J., Resende, T. P., Abou, El. et al. (2007). TRAIL therapy in non-small cell lung cancer cells: sensitization to death receptor-mediated apoptosis by proteasome inhibitor bortezomib. Mol.Cancer Ther. 6:2103-2112.

189. Ravi, R., Jain, A. J., Schulick, R. D. et al. (2004). Elimination of hepaticmetastases of colon cancer cells via p53-independent cross-talk between irinotecan and Apo2 ligand/TRAIL. Cancer Res. 64:9105-9114.

190. Romagnoli, M., Desplanques, G., Mafga, S. et al. (2007). Canonical nuclear factor kappaB pathway inhibition blocks myeloma cell growth and induces apoptosis in strong synergy with TRAIL. Clin. Cancer Res. 13: 60106018.

191. Kim, M., Liao, J;, Bowling, M. L. et al. (2008). TRAIL inactivates the mitotic checkpoint and potentiates death; induced by microtubule-targeting agents in human cancer cells. Cancer Res. 68:3440-3449.

192. Xia, S:, Li, Y., Rosen, E. M. et al. (2007). Ribotoxic stress sensitizes glioblastoma cells to death receptor induced apoptosis: requirements for c-Jun NH2-terminal kinase and Bim. Mol. Cancer Res. 5:783-792.

193. Leung, K.T. et al. (2008). Activation of the JNK pathway promotes phosphorylation and degradation of BimEL a novel mechanism of chemoresistance in Tcell acute lymphoblastic leukemia. Carcinogenesis 3: 544551.

194. Koschny, R., Walczak, H., Ganten, T. M. (2007). The promise of TRAIL-potential and risks of a novel anticancer therapy. J. Mol. Med. 85:923935.

195. Gong, B., Almasan, A. (2000). Apo2 ligand/TNF-related apoptosis-inducing ligand and death receptor 5 mediate the apoptotic signaling induced by ionizing radiation in leukemic cells. Cancer Res. 60:5754-5760.

196. Hao, C., Song, J.H., His, B. et al. (2004). TRAIL Inhibits Tumor Growth but Is Nontoxic to Human Hepatocytes in Chimeric Mice. Cancer Res. 64: 8502-8506.

197. Mundt, B., Wirth, T., Zender, L. et al. (2005). Tumour necrosis factor related apoptosis inducing ligand (TRAIL) induces hepatic steatosis in viral hepatitis and after alcohol intake. Gut. 54:1590-1596.

198. Corazza, N., Kassahn, D., Jakob, S. et al. (2009). TRAIL-Induced Apoptosis Between Tumor- Therapy and Immunopathology. Natural Compounds and Their Role in Apoptotic Cell Signaling Pathways: Ann. N.Y. Acad. Sci. 1171:50-58.

199. Naka, T., Sugamura, K., Hylander, B. L. et al. (2002). Effects of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand alone and in combination with chemotherapeutic agents on patients' colon tumors grown in SCID mice. Cancer Res 62:5800-5806.

200. Shankar, S., Singh, T. R., Chen, X. et al. (2004). The sequential treatment with ionizing radiation»followed by TRAIL/Apo-2L reduces tumor growth and induces apoptosis of breast tumor xenografts in nude mice. Int. J. Oncol. 24:1133-1140.

201. Shankar, S., Singh, T. R., Srivastava, R. K. (2004). Ionizing- radiation enhances the therapeutic potential of TRAIL in prostate cancer in vitro and in vivo: Intracellular mechanisms. Prostate 61:35-49.

202. Wu, X. X., Ogawa, O., Kakehi, Y. (2004). TRAIL and chemotherapeutic drugs in cancer therapy. Vitam. Horm. 67:365-383.

203. Mirandola, P., Sponzilli, I., Gobbi, G. et al. (2006). Anticancer agents sensitize osteosarcoma cells to TNF-related apoptosis-inducing ligand downmodulating IAP family proteins. Int. J. Oncol. Jan. 28:127-133.

204. Odoux, C., Albers, A. (2004). Additive effects of TRAIL and paclitaxel on cancer cells: implications for advances in cancer therapy Vitam. Horm. 67:385-407.

205. Daniel, D., Yang, B., Lawrence, D. A. et al. (2007). Cooperation of the pro-apoptotic receptor agonist rhApo2L/TRAIL with the CD20 antibody rituximab against non-Hodgkin's lymphoma xenografts. Blood 110:4037-4046.

206. Koschny, R., Ganten, T. M., Sykora, J. et al. (2007). TRAIL/bortezomib cotreatment is potentially hepatotoxic but induces cancer-specific apoptosis within a therapeutic window. Hepatology 45:649-658.

207. Leverkus, M., Sprick, M. R., Wachter, T. et al. (2003). Proleasome inhibition results in TRAIL sensitization of primary keratinocytes by removing the resistance-mediating block of effector caspase maturation. Mol. Cell Biol. 23:777-790.

208. Pan, Y., Xu, R., Peach, M. et all (2007). Application of pharmacodynamic assays in a phase la trial of Apo2L/TRAIL in patients with advanced tumors. J. Clin. Oncol. 25:3535.

209. Stormo, G. D., Schneider, T. D., Gold, L. (1982). Characterization of translation initiation sites in E. coli. Nucl. Acids Res. 10:2971-2996.

210. Casadaban, M. J., Martinez-Arias, A., Shapira, S. K. et al. (1983). p-galactosidase gene fusion for analyzing gene expression in Escherichia coli and yeast. Methods Enzymol. 100: 293-308.

211. Maina, C. V., Riggs, P. D., Grandea, A. G. et al. (1988). An Escherichia coli vector to express and purify foreign proteins by fusion to and separation from maltose-binding protein. Gene 74:365-373.

212. Smith, D. B., Johnson, K. S. (1988). Single-step purification of polypeptides expressed in Escherichia coli as fusions with glutathione S-transferase. Gene 67:31-40.

213. LaVallie, E. R., DiBlasio, E. A., Kovacic, S. et al. (1993). A thioredoxin gene fusion expression system that circumvents inclusion body formation in the E. coli cytoplasm. Biotechnology (N Y). 11:187-193.

214. Lunn. C. A., Pigiet, V. P. (1982). Localization of thioredoxin from Escherichia coli in an osmotically sensitive compartment. J. Biol. Chem. 257:11424-11430.

215. Schein, C. H. (1989). Production of soluble recombinant proteins in bacteria. Biotechnology 7:1141-1149.

216. Mitraki, A., King, J. (1989). Protein folding intermediates and inclusion body formation. Biotechnology 7:690-697.

217. Lunn, C. A., Kathju, S., Wallace, B. J. et al. (1984). Amplification and purification of plasmid-encoded thioredoxin from Escherichia coli K12. J. Biol. Chem. 259:10469-10474.

218. Katti, S. K., LeMaster, D. M., Eklund, H. (1990). Crystal structure of thioredoxin from Escherichia coli at 1.68 angstroms resolution. J. Mol. Biol. 212:167-184.

219. Stader, J. A., Silhavy, T. J. (1990). Engineering Escherichia coli to secrete heterologous gene products. Methods in Enzymol. 165:166-187.

220. Ohnishi, S., Takano, K. (2003). Amyloid fibrils from the viewpoint of protein folding. Cell Mol. Life Sei. 61(5):511-524.

221. Gasparian, M. E., Ostapchenko, V. G., Schulga, A. A. et al. (2003). Expression, purification, and characterization of human enteropeptidase catalytic subunit in Escherichia coli. Protein Expr. Purif. Sep. 31(1):133-139.

222. Gasparian, M. E., Ostapchenko, V. G., Dolgikh, D. A. et al. (2006). Biochemical characterization of human enteropeptidase light chain. Biochemistry (Mosc). 71:113-119.

223. Agol, V. I., Belov, G. A., Bienz, K. et al. (2000). Competing death programs in poliovirus-infected-cells: commitment switch in the middle of the infectious cycle. J. Virol. 74:5534-5541.

224. Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal.* Biochem. 72:248-254.

225. Gill, S. C., von Hippel, P. H. (1989). Calculation of protein extinction coefficients from amino acid sequence data. Anal. Biochem. 182:319-326.

226. Schagger, H., von Jagow, G. (1987). Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation- of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166:368-379.

227. Otwinowski, Z., Minor, W. (1997). Processing of X-ray diffraction data collected in oscillation mode. Methods in Enzymol. 276:307-326:

228. Schuck, P. (2000). Size-distribution analysis of macromolecules by sedimentation velocity ultracentrifugation and Lamm equation modeling. Biophys. J. 78:1606-1619.

229. Liew, O. W., Ching Chong, J. P., Yandle, T. G. et al. (2005). Preparation of recombinant thioredoxin fused N-terminal proCNP: analysis of enterokinase cleavage products reveals new enterokinase cleavage sites. Protein Expr. Purif. 41:332-340.

230. Haldar, S., Jena, N., Croce, C. M. (1995). Inactivation of Bcl-2 by phosphorylation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92:4507-4511.

231. Wen, J., Ramadevi, N., Nguyen, D. et al. (2000). Antileukemic drugs increase death receptor 5 levels and enhance Apo-2L-induced apoptosis of human acute leukemia cells. Blood 96:3900-3906.

232. Mirandola, P., Gobbi, G., Ponti, C. et al. (2006). PKCe control protection against TRAIL in erythroid progenitors. Blood 107:508-513.

233. Shen, Y. L., Xia, X. X., Zhang, Y. et al. (2003). Refolding and purification of Apo2L/TRAIL produced as inclusion bodies in high-cell-density cultures of recombinant Escherichia coli. Biotechnol. Lett. 25:2097-2101.

234. Frottin, F., Martinez, A., Peynot, P. et al. (2006). The proteomics of N-terminal methionine cleavage. Mol. Cell Proteomics 5:2336-2349.

235. Cha, S. S., Shin, H. C., Choi, K. Y. et al. (1999). Expression, purification and crystallization of recombinant human TRAIL. Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 55:1101-1104.

236. Щепина, JI. А., Попова, E. H., Плетюшкина, О. Ю. и др. (2002). Апоптоз клеток HeLa и антиапоптозное действие онкобелка Вс1-2 не зависят от дыхания и мембранного потенциала митохондрий. Биохимия 67:240-253.

237. Izyumov, D. S., Avetisyan, А. V., Pletjushkina, О. Y. et al. (2004). "Wages of fear": transient threefold decrease in intracellular ATP level imposes apoptosis. Biochim. Biophys. Acta 1658:141-147.

238. Ashkenazi, A., Dixit, V. M. (1999). Apoptosis control by death and decoy receptors. Curr. Opin. Cell Biol. 11:255-260.

239. Griffith, T. S., Rauch, S. Т., Smolak, P. J. et al. (1999). Functional analysis of TRAIL receptors using monoclonal antibodies. J. Immunol. 162:2597-2605.

240. Ashkenazi, A., Herbst, R. S. (2008). To kill a tumor cell: the potential of proapoptotic receptor agonists. J. Clin. Invest. 118:1979-1990.

241. Inoue, S., MacFarlane, M., Harper, N. et al. (2004). Histone deacetylase inhibitors potentiate TNFrelated apoptosis-inducing ligand1 (TRAIL)-induced apoptosis in lymphoid malignancies. Cell Death Differ. 11:193-206.

242. Perez-Cruz, I., Carcamo, J. M., David, W. et al. (2007). Caspase-8 dependent trail-induced apoptosis in cancer cell lines is inhibited by vitamin C and catalase. Apoptosis 12:225-234.

243. Gregorini, A., Tomasetti, M., Cinti, C. et al. (2006). CD38 expression enhances sensitivity of lymphoma T and B cell lines to biochemical and receptor-mediated apoptosis. Cell Biol. Int. 30:727-732.

244. Kim, K., Fisher, M. J., Xu, S. Q. et al. (2000). Molecular determinants of response to TRAIL in killing of normal and cancer cells. Clin. Cancer Res. 6:335-346.1. БЛАГОДАРНОСТИ