Природные антитела с оксидоредуктазными активностями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Намжил Эрдэнэчимэг

• Намжил Эрдэнэчимэг
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Намжил Эрдэнэчимэг

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Активные формы кислорода в организме

1.1.1. Пероксид водорода

1.1.2. Супероксидный анион - радикал

1.1.3. Синглетный кислород

1.1.4. Гидроксил радикал

1.1.5. Оксид азота

1.2. Цитотоксическое действие активных форм кислорода в организме

1.3. Антиокислительная защита организма

1.3.1. Механизмы внутриклеточной антиокислительной защиты

1.3.1.1. Супероксидцисмутаза

1.3.1.2. Каталаза

1.3.1.3. Пероксидаза

1.3.1.4. Глутатион зависимые ферменты

1.3.2. Механизмы неферментативной природы

1.4. Иммуноглобулины

1.5. Каталитически активные антитела

1.5.1. Природные каталитически активные антитела при различных аутоиммунных патологиях

1.5.2. Возможные механизмы образования природных абзимов

1.5.3. Природные абзимы с протеазной активностью

1.5.4. Природные абзимы с нуклеазными активностями

1.5.5. Природные абзимы с другими активностями

1.5.6. Абзимы с оксидоредуктазной активностью

1.6. Доказательство принадлежности каталитических активностей антителам 41 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Реактивы и материалы

2.2. Методы

2.2.1. Получение сыворотки крови

2.2.2. Выделение антител из плазмы крови крыс аффинной хроматографией на Protein A-Sepharose

2.2.3. Очистка IgG с помощью гель-фильтрации

2.2.4. Электрофоретический анализ белков

2.2.5. Концентрирование препаратов белка

2.2.6. Определение концентрации белка

2.2.7. Определение пероксидазной и оксидоредуктазной активностей антител

2.2.8. Иммунизация кроликов

2.2.9. Определение оптимального значения рН в реакции окисления 3,3'-Диаминобензидина (DAB) антителами

2.2.10. Тестирование пероксидазной и оксидоредуктазной активностей белков в полиакриламидном геле

2.2.11. Проведение рН-шока антител

2.2.12. Исследование влияние ионов двухвалентных металлов на пероксидазную и оксидоредуктазную активности антител

2.2.13. Определение каталазной и глутатионпероксидазной активностей AT

2.2.14. Определение кинетических параметров реакции окисления субстрата антителами

2.2.15. Анализ содержания металлов в препаратах антител

2.2.16. Хроматография AT на сорбенте, хелатирующем ионы металлов

2.2.17. Определение пероксидазной и оксидоредуктазной активностей методом флуоресценции

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выделение препаратов антител из сыворотки крови крыс линии Wistar

3.2. Тестирование пероксидазной и оксидоредуктазной активностей в препаратах антител

3.3. Определение оптимальных условий реакции окисления

3,3диаминобензидина антителами

3.3.1. Исследование зависимости пероксидазной активности от рН среды

3.3.2. Зависимость пероксидазной активности от концентрации пероксида водорода

3.4. Доказательство принадлежности каталитической активности антителам 66 3.4.1. Кислый шок препаратов антител

3.5. Локализация активных центров антител 71 3.5.1. Тестирование пероксидазной и оксидоредуктазной активностей методом in situ

3.6. Влияние ионов двухвалентных металлов на пероксидазную и оксидоредуктазную активности антител

3.6.1. Анализ содержания металлов в препаратах антител

3.6.2. Хроматографическое разделение на сорбенте, хелатирующем ионы металлов

3.7. Субстратная специфичность при окислении различных соединений 97 3.7.1. Окисление различных субстратов препаратами антител

4. ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Природные антитела с оксидоредуктазными активностями»

Известно, что окислительный стресс, а также действие мутагенов и канцерогенов приводит к старению человека и развитию у него различных патологий: раковых заболевании, инфаркта миокарда, атеросклероза, диабета, катаракт, эмфизем, различных дегенеративных заболеваний мозга, сердца, мышц, аутоиммунных заболеваний (АИЗ) т. д. [1]. Одной из основных причин окислительного стресса является накопление активированных форм кислорода (АФК): »02~, '02, Н202, НО*, ОСГ, К02\ Н0'2, N0* и др. АФК являются потенциальными окислителями ДНК, белков, липидов и других компонентов клеток человека [2, 3].

Все АФК обладают высокой цитотоксичностью для любых типов клеток и клеточных образований, что определяется их химической реактивностью, при этом концентрации АФК в тканях невысоки: Н202 - 10"8 М, *02~- 10'" М, Н0'<10"п М [4-6].

В процессе эволюции для защиты от АФК в клетках выработались специализированные системы ферментативных антиокислителей. Ферментативные антиокислители характеризуются высокой специфичностью действия, направленного против определенных АФК; специфичностью клеточной и органной локализации, которые зачастую перекрываются комплементарным образом, а также необходимостью присутствия в качестве катализаторов металлов, таких как Си2+, Ътх*, Ре2+ [7, 8].

Иммунная система высших организмов играет важнейшую роль в их защите от патогенного влияния окружающей среды. Центральную роль в этом процессе играют антитела, основной функцией которых является взаимодействие со специфическими антигенами, приводящее к нейтрализации токсинов, чужеродных микроорганизмов и т. д. Однако, исследования последних десятилетий привели к открытию новой функции иммуноглобулинов - их способности катализировать большое число различных химических реакций.

В настоящее время абзимология - наука, изучающая антитела, обладающие ферментативными активностями, интенсивно развивается, и число примеров химических превращений, катализируемых абзимами, превышает 100. Методами сайт-направленного мутагенеза и селективной химической модификации [9, 10] были получены абзимы, субстратная специфичность которых в ряде случаев выше, чем ферментов, а также абзимы, для которых нет аналогов среди природных ферментов [11].

Новые перспективы в области изучения каталитически активных антител возникли в 1989 году в связи с открытием группой С. Пола [12] первых природных абзимов с протеолитической активностью в сыворотке крови больных бронхиальной астмой. 6

Позднее, при ряде других аутоиммунных заболеваний, а также в молоке здоровых рожениц, были обнаружены абзимы с протеолитической, фосфатазной, ДНК- и РНК-гидролизующими, амилолитической, полисахарид-, протеин- и липидкиназной активностями. Недавно было показано, что АТ человека и животных обладают супероксиддисмутазной активностью и превращают синглетный кислород 'Ог в его восстановленную форму О2* [13,14].

Группой И. Генералова было показано, что препараты крови здоровых доноров и пациентов с различными формами гепатита обладают пероксидазной активностью [15], но доказательства отнесения этой активности непосредственно к АТ отсутствовали.

Цель настоящей работы заключалась в исследовании пероксидазной активности препаратов из крови крыс линии \У1з1аг. В процессе выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Доказать, что исследуемые пероксидазная и оксидоредуктазная активности являются собственным свойством антител;

• Изучить влияние ионов двухвалентных металлов на ферментативные активности антител;

• Провести анализ субстратной специфичности АТ с пероксидазной и оксидоредуктазной активностями;

• Определить относительные удельные оксидоредуктазную и пероксидазную активности антител в реакциях окисления 3,3'- диаминобензидина (Е)АВ);

• Изучить ферментативные свойства (металл- и рН-зависимость, кинетические параметры реакции окисления субстратов), а также провести их сравнение с соответствующими характеристиками пероксидазы хрена.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Намжил Эрдэнэчимэг

выводы

1. Впервые показано, электрофоретически гомогенные что иммуноглобулины класса в из крови крыс линии ^^аг подобно пероксидазе хрена, обладают пероксидазной и оксидоредуктазной активностями. На основании выполнения ряда общепринятых критериев доказано, что эти активности являются собственным свойством ^О.

•2. Показано, что пероксидазная и оксидоредуктазная активности крыс являются зависимыми от ионов металлов с переменной валентностью: Ре2+, Си2+, 1\'г+, Со2+, Мп2+. В процессе выделения антитела частично теряют связанные с ними ионы металлов, а удаление их с помощью ЭДТА приводит к полной потере активности, антитела активируются в присутствии экзогенных ионов различных металлов.

3. Показано, что обладают широкой субстратной специфичностью и в присутствии пероксида водорода эффективно окисляют типичные субстраты пероксидазы хрена: 3,3'- диаминобензидин, о-фенилендиамин, а-нафтол,р-гидрохинон и КАОН.

4. Показано, что удельные активности поликлональных препаратов ^О в зависимости от препарата варьируют в широких пределах при пероксидазном {кса, = (0.18-2.0)-103 мин*1} и оксидоредуктазном {ксШ = (0.09-3.6)-103 мин"1} окислениях субстратов и возрастают после добавления экзогенных ионов металлов в 2.1 -18.0 раз.

5. Показано, что субстратная специфичность, содержание различных эндогенных ионов металлов и их влияние на ферментативную активность а также кинетические параметры и оптимальные значения рН в реакциях окисления субстратов антителами являются индивидуальными для каждого животного; то есть, репертуар моноклональных антител с пероксидазной и оксидоредуктазной активностями, входящих в состав поликлональных иммуноглобулинов, сильно варьирует от животного к животному.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Намжил Эрдэнэчимэг, 2007 год

1. Allen R.G. Free radicals in aging. Boca Raton. FL: CPC Press. 1998. P.12-23.

2. Зенков H.K., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах. Успехи современной биологии. 1993. Т. 113. С. 286-296.

3. Morel Y., Baruoki R. Repression of gene expression by oxidative stress. J. Biochem. 1999. V.342.P. 481-496.

4. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах. Итоги науки и техники: Сер. Биофизика. 1991. С. 29.

5. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы. Успехи современной биологии. 1993. Т. 113. Р. 107-122.

6. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах. М.: Наука. 1972.

7. Sies Н. Oxidative stress from basic research to clinical application. Amer. J. Med. 1991. V.91. Suppl. 3. S31-S38.

8. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen. Enzymes-Tools and Targets. Basel: Karger.1988. P. 161-167.

9. Guo J., Huang W., Zhou G.W., Fletterick R.J., Scanlan T.S. Mechanistically different catalytic antibodies obtained from immunization with a single transition-site analog. Proc. Natl. Acad. Sci. 1995. V. 92. P. 1694-1698.

10. Miller G.P., Posner B.A., Benkovic S.J. Expanding the 43C9 class of catalytic antibodies using a chain-shuffling approach. Bioorg. Med. Chem. 1997. V. 5. P. 581-590.

11. Na J., Houk K.N., Hilvert D. Transition State of the Base-Promoted Ring-Opening of Isoxazoles. Theoretical Prediction of Catalytic Functionalities and Design of Haptens for Antibody Production. J. Am. Chem. Soc. 1996. V. 18. P. 6462-6471.

12. Paul S., Voile D.G., Beach S.M., Johnson D.R., Powell M.J., Massey R.J. Catalytic hydrolysis of vasoactive intestinal peptide by human autoantibody. Science. 1989. V. 244. P.l 158-1162.

13. Langen R., Chang I., Germanas J.P., Richards J.H., Winkler J.R., Gray H.B. Electron tunneling in proteins: coupling through a beta strand. Science. 1995. V. 268. P. 1733-1735.

14. Wentworth P.Jr., lyn H,J., Wentworth A.D., Zhu X., Larsen N.A., Wilson I.A., Xu X., Goddart III W.A., Janda K.D., Eschenmoser L., Lemer R.A. Antibody catalysis of the oxidation of water. Science. 2001. V. 293. P. 1806-1811.

15. Генералов И.И., Новиков Д.К. Жильцов И.В. Взаимодействие поликлональных IgG человека с катионами металлов. Вести национальной академии наук Беларуссии. Сер. Биол. Наук. 1999. Т. 1. С. 90-96.

16. Naqui A., Chance В. Reaction oxygen intermediates in biochemistry. Ann. Rev. Biochem. 1986. V. 55. C. 137-166.

17. Bandy В., Davison A.J. Mitochondrial mutations may increase oxidative stress: implications for carcinogenesis and aging? Free Radical Biol. Med. 1990. V. 8. P. 523-535.

18. Mori H., Arai Т., Mori K. et al. Use of M4PO and oxygen -17 in the study hydroxyl radical generation in the hypoxanthine- xanthine oxidize reaction. Biochem, Mol. Biol. Int. 1994. V. 32. P. 523-529.

19. Brunory M., Rotilio G. Biochemistry of oxygen radical species. Methods Enzymol. 1984. V.105.P. 22-35.

20. Ioshida R., Hayaishi 0. Overview: Superoxygenase. Meth. Enzymol. 1984. V. 105. P.61-70.

21. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoperoxidase SCN-/Н202. Free Radical Biol. Med. 1992. V. 13. P. 187-195.

22. Болдырев A.A. Окислительный стресс и мозг. Соросовский образовательный журнал. 2001. Т. 7. С. 21-28.

23. Byczkowski J.Z., Gessner Т. Biological role of superoxide ion- radical. Int. J. Biochem. 1988. V. 20. P. 569-580.

24. Зенков H.K., Панкин B.3., Менщикова Е.Б. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК Наука/Интерпериодика. 2001.343 с.

25. Berki Т., Nemeth P. Photo-immunotargeting with haematoporphyrinconjugates activated by a lowpower He-Ne laser. Cancer Immunol. Immunother. 1992. V. 35. P. 69-74.

26. Осипов Ф.Н., Азизова O.A., Владимиров Ю.В. Активные формы кислорода и их роль в организме. Успехи Биол. химии. 1990. Т. 31. Р. 180-208.

27. Vladimirov Y.A., Olenev V.I., Suslova N.B., Cheremissina Z.P. Lipid peroxidation in mitochondrial membrane. Adv.Lipid.Res. 1980. V. 17. P. 173-249.

28. Leisman G.B., Daub M.E. Singlet oxygen yields, optical properties and photo toxicity of . reduced derivatives of the photosensitizer cercosporin. Photochem. Photobiol. 1992. V. 55. P.373-379.

29. Cadenas E., Boveres A., Chance B. Low-level chemiluminescence of biological systems. Methods in Enzymology N.Y.: Acad. Press. 1984. V. 105.P. 211-242.

30. Kim K.K., Whitin J.C., Sukhova N.M., Cohen H.J. Increase in extracellular glutathione peroxidase in plasma and lungs of mice exposed to hyperoxia. Pediatr. Res. 1999. V. 46. P. 715721.

31. Маеда X., Акаике Т. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении ираке. Биохимия. 1998. Т. 63. С. 1007-1019.

32. Aust А.Е., Eveleigh J.F. Mechanisms of DNA oxidation. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1999. V. 222. P. 246-252.

33. Sagone F.L., Greewald J., Kraut E.N.et al. Glucose: a role as a free radical scavenger in biological systems. J. Lab. Clin. Med. 1983. V. 101. P. 97-104.

34. Imlay J.A., Linn S. DNA damage and oxygen radical toxicity. Science. 1988. V. 240. P.1302-1309.

35. Vanabeck B.S. Involment of oxygen radicals and blood cells in the phatogenesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia. Appl. Cardiopulm. Phatophysiol. 1991. V. 4. P. 127-138.

36. Klebanoff S.J. Reactive nitrogen intermediates and antimicrobiol activity: Role nitrite. Free Radic. Res. 1993. V. 14. P. 351-360.

37. Frei В., Stoker R., Ames B.N. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. V. 85. P. 9748-9752.

38. Krinsky N.L. Membrane antioxidants. Ann. NY. Acad. Sci. 1988. V. 551. C. 17-33.

39. Stocker R., Frei B. Endogenous antioxidant defences in human blood plasma. Oxidative stress: oxidants and antioxidants. London: Academic Press. 1991. P. 213-243.

40. Frei В., Gaziano J.M. Content of antioxidants, preformed lipid hydroperoxides and cholesterol as predictors of the susceptibility of human LDL to metal ion dependent and independent oxidation. J.lipid Res. 1993. V. 34. P. 2135-2145.

41. Mates J.M., Sanchez-Jimenez F. Antioxidant enzymes and their implications in pathophysiologic processes. Front. Biosci. 1999. T. 4. P. 339-345.

42. Dhaunsi G.S., Gulati S., Singh A.K., Orak J.K., Asayama K., Singh I. Demonstration of Cu-Zn superoxide dismutase in rat liver peroxisomes. Biochemical and immunochemical evidence. J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 6870-6873.

43. Kirkman H.N., Gaetani G.F. Catalase: a tetrameric enzyme with four tightly bound molecules ofNADPH. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V. 81. P. 4343-4347.

44. Kirkman H.N., Rolfo M., Ferraris A.M., Gaetani G.F. Mechanisms of protection of catalase by NADPH. J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 13908-13914.

45. Lardinois O.M. Reactions of bovine liver catalase with superoxide radicals and hydrogen peroxide. Free Radic. Res. 1995. T. 22. P. 251-274.

46. Gibson D.M., Liu E.N. The inhibition of peroxidase and indol-3-acetic acid oxidase activity by British Anti-Lewisite Arch. Biochem. Biophys. 1978. V. 186. P. 317-323.

47. Pang A., Gettison A.V., Francesch C., Rolando C., Goldberg R. On substrate specifity of peroxidases involved in the lignification process. J. Plant Physiol. 1989. V. 135 (2), P. 325-332.

48. Аммосова Т.Н., Упоров И.В., Рубцова М.Ю., Игнатенко О.В., Егоров A.M., Колесанова Е.Ф., Арчаков А.И. Антигенная картирования пероксидазы хрена (изофермент С). Биохимия. 1998. Т. 62 (4). Р. 516-524.

49. Schuller D.J., Ban N., van Huystee R.B., McPherson A., Poulos T.I. Propretie and structure of peroxidase. Structure. 1996. V. 4. P. 311-321.

50. Chance B. The kinetics of the enzyme- substrate compound peroxidase. J. Biol. Chem. 1943. V. 141 (2). P. 153-177.

51. Frei B. Ascorbic acid protects lipids in human plasma and low-density lipoprotein against oxidative damage. Amer. J. Clin. Nutr. 1991. V. 34. PS1113-S1118.

52. Jore D., Kaouadji M.N., Ferradini C. Bitamin E and correlated antioxidants: Ay-radiolysis study. Antioxidants in Therapy Preventive Medicine. NY.: Plenum Press. 1990. P. 151-154.

53. Guiteridge J.M.C., Quinlan G.J., Antioxidant protection against organic and inorganic oxygen radicals by normal human plasma The important primary role for iron-binding and iron-oxidising proteins. Biochim. Bioph. Acta. 1992. V. 1159. P. 248-251.

54. Душкин М.И. Биологическая роль окисленных производных холестерина в клетках млекопитающих. Успехи современной биологии. 1991. Т. 111. С. 845-857.

55. Davies K.J.A., Goldberg A.L. Oxygen radicals stimulate proteolysis and lipid peroxidation by independent mechanisms in erythrocytes. J. Biol. Chem. 1987. V. 262. P. 8220-8226.

56. Кения M.B., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе. Успехи современной биологии. 1993. Т. 113. Р* 456-470.

57. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология М. Мир. 2000. 580с.

58. Галактионов В.Г. Иммунология М.: Академия. 2004. 522с.

59. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. Медицина. Москва. 2000.

60. Hasemann С.A., Capra J.D., Immunoglobulins: Structure and function. Fundamental immunology. Ed. Paul W. N.Y: Raven press. 1989. P. 209-214.

61. Schultz P.G., Lerner R.A., Benkovic S.J. Catalytic antibodies. Chem. Eng. News. 1990. V.68. P. 26-40.

62. Davies D.R., Padlan E.A., Sheriff S. Antibody-antigen complexes. Ann. Rev. Biochem. 1990. V. 59. P. 439.

63. Jencks W. Catalysis in chemistry and Enzymology. N.Y. McGraw-Hill. 1969.

64. Slobin I.I. Preparation and some properties of antibodies with specifity toward p-nitrofenil esters. Biochemistry. 1966. V. 5. P. 2836-2841.

65. Кульберг А.Я., Дочева Ю.В., Тарханова И.А., Спивак В.А. О протеолитической активности в препаратах очищенного иммуноглобулина G и антител кролика. Биохимия. 1969. Т. 34. С. 1178.

66. Raso V., Stollar B.D. The antibody-enzyme analogy: Comparison of enzymes and antibodies specific for phosphopyridoxyltyrosine. Biochemistry. 1975. V. 14. P. 591-599.

67. Tramontano A., Janda K.D., Lerner R.A. Catalytic antibodies. Science. 1986. V. 234. P.1566-1570.

68. Pollack S J., Jacobs J.W., Schultz P.G. Selective chemical catalysis by an antibody. Science. 1986. V. 234. P. 1570-1573.

69. Earnshaw W.C., Rothfield N. Identification of a family of human centromere proteins using autoimmune sera from patients with scleroderma. Chromosoma. 1985. V. 91. P. 313-320.

70. Бойко A.H. Фаворова O.O. Рассеянный склероз: молекулярные и клеточные механизмы. Молекул, биол. 1995. Т. 29. С. 727-743.

71. Li L., Paul S., Tyutyulkova S., Kazatchkine M.D., Kaveri S. Catalytic activity of anti-thyroglobulin antibodies. J. Immunol. 1995. V. 154. P. 3328-3332.

72. Shoenfeld Y., Ben-Ehuda O., Messinger J., Bentwithc Z., Rauch J., Isenberg D.I., Gado N. Autoimmune diseases other than lupus share common anti-DNA idiotypes. Immunol. Lett. 1988. V. 17. P. 285-291.

73. Sugiyama Y., Yamamota T. Characterization of serum anti-phospholipid antibodies in patients with multiple sclerosis. Tohoku J. Exp. Med. 1996. V. 178. P. 203-215.

74. Бигаззи П.Е. Механизмы иммунологии (под ред. Коена С., Уозда П.Ф., Мак-Класки Р.Т.) М. Медицина. 1983. С. 181-206.

75. Gololobov G.V., Mikhalp S.V., Starov A.V., Kolesnikov A.V., Gabibov A.G. DNA-protein complexes. Natural targets for DNA-hydrolyzing antibodies. App. Biochem. Biotechnol. 1994. V. 47. P. 305-315.

76. Gabibov A.G., Gololobov G.V., Makarevich O.I., Schourov D.V., Chernova E.A., Yadav R.P. DNA-hydrolyzing autoantibodies. Appl. Biochem. Biotechn. 1994. V. 47. P. 293-303.

77. Gilbert D., Brard F., Jovelin F., Tron F. Do naturally occurring autoantibodies participate in the constitution of the pathological B-cell repertoire in systemic lupus erythematosus. J. Autoimmun. 1996. V. 9. С. 247-257.

78. Krause I., Blank M., Shoenfeld Y. Idiotypic induction autoimmunity. J. Biol. Regul. Homeost. Agents. 1998. V. 12. P. 49-52.

79. Shoenfeld Y., Teplizki H.A., Mendlovic S., Blank M., Mozzes E., Isenberg D.A. The role of the human anti-DNA idiotype 16/6 in autoimmunity. Clin. Immunol. Immunopathol. 1989. V.51. P. 313-325.

80. Raptis L., Menard H.A. Quantitation and characterization of plasma DNA in normal and patients with systemic lupus erythematosus. J. Clin. Invest. 1980. V. 66. P. 1391-1399.

81. Nevinsky G.A., Kanyshkova T.G., Semenov D.V., Vlassov A.V., Gal'vita A.V, Buneva V.N. Secretory immunoglobulin A from of healthy human mother's milk catalyzes nucleic acid hydrolysis. Appl. Biochem. Biotechnol, 2000. V. 83. P. 115-129.

82. Nevinsky G.A., Kanyshkova T.G., Buneva V.N. Natural catalytic antibodies (abzymes) in normalcy and pathology. Biochemistry (Moscow). 2000. V. 65. P. 1245-1255.

83. Nevinsky G.A., Favorova O.O., Buneva V.N. Natural Catalytic Antibodies New Characters in the Protein Repertoire. Protein-protein interactions; a molecular cloning manual (E. Golemis. Eds.). New York. Cold Spring Harbor. 2002. P. 523-534.

84. Nevinsky G.A., Buneva V.N. Human catalytic RNA- and DNA-hydrolyzing antibodies. J. Immunol. Methods. 2002. V. 269. P. 235-245.

85. Nevinsky G.A., Buneva V.N. Catalytic antibodies in healthy humans and patients with autoimmune and viral pathologies. J. Cell. Mol. Med. 2003. V. 7. P. 265-276.

86. Nevinsky GA, Buneva V.N. Natural catalytic antibodies-abzymes. In Catalytic antibodies (Ed. Ehud Keinan). 2005. P. 503-567.

87. Jerne N.K. Towards a network theory of the immune system. Ann. Immunol. 1974. V. 125. P. 373-398.

88. Shuster A.M., Gololobov G.V., Kvashuk O.A., Bogomolova A.E., Smirnov I.V., Gabibov A.G. DNA hydrolyzing autoantibodies. Science. 1992. V. 256. P. 665-667.

89. Шустер A.M., Гололобов Г.В., Квашук O.A., Габибов А.Г. Антиидиотипические и природные каталитически активные антитела. Молекуляр. Биология. 1991. Т. 25. С. 593601.

90. Avalle В., Thomas D., Friboulet A. Functional mimicry: elicitation of a monoclonal anti-idiotypic antibody hydrolizing beta-lactams. FASEB J. 1998. V. 12. P. 1055-1068.

91. Gololobov G.V., Rumbley C.A., Rumbley J.N., Schourov D.V., Makarevich O.I., Gabibov A.G., Voss E.W., Rodkey L.S. DNA hydrolysis by monoclonal anti-ssDNA autoantibody BV 04-01: origins of catalytic activity. Mol. Immunol. 1997. V. 34. P. 1083-1093.

92. Gololobov G.V., Sun M., Paul S. Innate antibody catalysis. Mol. Immunol. 1999. V. 36. P. 1215-1222.

93. Сучков С.В., Наумова Т.Е., Третьяк Е.Б., Грачева Т.В., Алекберова З.С., Хитров А.Н., Габибов А.Г. Молекулярные основы патогенности ДНК-связывающих аутоантител. Иммунология. 2004. Т. 2. С. 115-119.

94. Friboulet A., Avalle В., Debat Н., Thomas D. A possible role of catalytic antibodies in metabolism. Immunology today. 1999. V. 20. P. 474-475.

95. Paul S., Mei S., Mody В., Eklund S.N., Beach C.M., Massey R.J., Hamel F. Cleavage of vasoactive intestinal peptide at multiple sites by autoantibody. J. Biol. Chem., 1989. V. 266. P.16128-16134.

96. Mei S., Mody В., Eklund S.H., Paul S. Vasoactive intestinal peptide hydrolysis by antibody light chains. J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 15571-15574.

97. Odintsova E.S., Buneva V.N., Nevinsky G.A. Casein-hydrolyzing activity of slgA antibodiesfrom human milk. J. Mol. Recognit. 2005. V. 18. P. 1-9.

98. Одинцова E.C., Харитонова M.A., Барановский А.Г., Сизякина Л.П., Бунева В.Н., Невинский Г.А. Протеолитическая активность IgG антител из крови больных синдромом приобретенного иммунодефицита человека. Биохимия. 2006. Т. 71 (3). Р. 320-332.

99. Бунева B.H., Андриевская O.A., Романникова И.В., Гололобов Г.В., Ядав Р.П., Ямковой В.И., Невинский Г.А. Взаимодействие каталитически активных антител с олигорибонуклеотидами. Молекуляр. биология. 1994. Т. 28. С. 738-741.

100. Vlassov A., Florentz C., Helm M., Naumov V, Buneva V., Nevinsky G., Giege R. Characterization and selectivity of catalytic antibodies from human serium with RNase activity. Nucletide. Acid Res. 1998. V. 26. P. 5243-5250.

101. Власов A.B., Барановский А.Г., Канышкова Т.Г., Принц А.В., Забара В.Г., Наумов В

102. A., Бреусов А.А., Жьеже Р., Бунева В.Н., Невинский Г.А. Субсратная специфичность ДНК- и РНК-гидролизующих антител из крови больных полиартритом и аутоиммунным тиреоидитом. Молекуляр. биология. 1998. Т. 32. С. 559-569.

103. Барановский А.Г., Матюшин В.Г., Власов А.В., Забара В.Г., Наумов В.А., Бунева

104. B.Н., Невинский Г.А. ДНК- и РНК-гидролизующие антитела из крови больных различными формами вирусного гепатита. Биохимия. 1997. Т. 62. С. 1590-1599.

105. Kalaga R, Li L, O'Dell J.R., Paul S. Unexpected presence of polyreactive catalytic antibodies in IgG from unimmunized donors and decreased levels in rheumatoid arthritis. ¿Immunol. 1995. V. 155. P. 2695-2702.

106. Kit Y.Y., Semenov D.V., Nevinsky G.A. Phosphorylation of different human milk proteins by human secretory immunoglobulin. A. Bioch. Mol. Biol. Internat. 1996. V. 39. P. 521-527.

107. Nevinsky G.A., Kit Y.Y., Semenov D.V., Khlimankov D.Y., Buneva V.N. Secretory immunoglobulin A from human milk catalyzes milk protein phosphorylation. Appl. Biochem. Biotechnol. 1998. V. 75. P. 77-91.

108. Kit Y.Y, Kim A.A., Sidirov V.N. Affinity-purified secretory immunoglobulin A possesses the ability to phosphorylate human milk casein. Biomed Sci. 1991. V. 2. P. 201-204.

109. Kanyshkova T.G., Semenov D.V., Khlimankov D.Y., Buneva V.N., Nevinsky G.A DNA-hydrolyzing activity of the light chain of IgG antibodies from milk of healthy human mothers. FEBS Lett. 1997. V. 416. P. 23-27.

110. Buneva V.N., Kanyshkova T.G., Vlassov A.V., Semenov D.V., Khlimankov D.Y., Breusova L.R., Nevinsky G.A. Catalytic DNA- and RNA-hydrolyzing antibodies from milk of healthy human mothers. Appl. Biochem. Biotechnol. 1998. V.75. P. 63-76.

111. Семенов Д.В., Канышкова Т.Г., Кит Ю.Я., Хлиманков Д.Ю., Акимжанов A.M., Горбунов Д.А., Бунева В.Н., Невинский Г.А. Иммуноглобулины класса G человека гидролизуют нуклеотиды. Биохимия. 1998. Т. 63. Р. 1097-1106.

112. Savel'ev A.N., Eneyskaya E.V., Shabalin K.A., Filatov M.V., Neustroev K.N. Antibodies with amylolytic activity. Protein Peptide Lett. 1999. V. 6. P. 179-184.

113. Gorbunov D.V., Karataeva N.A., Buneva V.N., Nevinsky G.A. Lipid kinase activity of antibodies from milk of clinically healthy human mothers. Biochim. et Biophys. Acta. 2005. V.1738.P. 153-166.

114. Karataeva N.A., Gorbunov D.V, Prokudin I.V., Buneva V.N., Kulminskaya A.A., Neustroev K.N., Nevinsky G.A. Human milk antibodies with polysaccharide kinase activity. Immunology Letters. 2006. V. 103. P. 58-67.

115. Savel'ev A.N., Kanyshkova T.G., Kulminskaya A.A., Buneva V.N., Eneyskaya E.V., Filatov M.V., Nevinsky G.A., Neustroev K.N. Amylolytic activity of IgG and slgA immunoglobulins from human milk. Clin. Chim. Acta. 2001. V. 314. P. 141-152.

116. Кит Ю.Я., Семенов Д.В., Невинский Г.А. Существуют ли каталитически активные антитела у здоровых людей? Молекуляр. биология. 1995. Т. 29. С. 519-526.

117. Кульберг А.Я., Петяев И.М., Замотаева Н.Г. Каталитические свойства продуктовкатаболитного распада клеточных рецепторов (R- белков). Иммунология. 1988. Т. 3. С. 37.119

118. Кульберг А.Я., Петяев И.М. Каталитические свойства антиидиотипических антител и антирецепторов. Иммунология. 1988. Т. 6. С. 10-13.

119. Петяев И.М., Кульберг А.Я. Ферментативные свойства антител и легочных рецепторов. Иммунология. 1988. Т. 5. С. 12-14.

120. Кульберг А.Я., Тараханова И.А., Маргулис Г.У., Бартова JI.M., Кулагина Н.Н Конформационное превращение антитела в его антиидиотипический эквивалент. Иммунология. 1990. Т. 1. С. 16-18.

121. Кульберг А.Я., Оганян P.P., Шибнев Б.А. Утилизация радикалов кислорода синтетическими пролин-богатыми олигопептидами. Биохимия. 1992. Т. 57 (11). С. 17441750.

122. Demcheva M.V., Nelen М.А., Deiko S.A. Monoclonal antibodies against palladium (II) coproporphyrin: hapten binding and peroxidase catalytic activity of complexes with iron (III) coproporphyrin. 11th Eur.Immunol.Soc. Helsinki. 1991. P. 10.

123. Iverson B.L., Iverson S.A, Roverts V.A. Metalloantibodies. Science. 1990. V. 249. P. 652662.

124. Luo G., Ding L., Liu Z. A selenium containing abzyme, the activity of which surpassed the level of native glutathione peroxidase. Ann. NY Acad. Sci. 1998. V. 864. P. 136-141.

125. Luo J.M., Qi D.H., Zheng Y.G., Mu Y., Yan G.L., Yang T.S., Chen J.C. ESR studies on reaction of saccharide with the free radicals generated from the xanthine oxidase/hypoxanthine system containing iron. FEBS Lett. 2001. V. 492 (1-2). P. 29-32.

126. Sun Y., Li Т., Chen H., Zhang K., Zheng K., Mu Y., Yan G., Li W, Shen J., Luo G Selenium-containing 15-Mer Peptides with High Glutathione Peroxidase-like activity. J.Biol.Chem. 2004. V. 279. P. 37235-37240.

127. Ricoux R., Sauriat-Dorizon H., Girgenti E., Blanchard D., Mahy J.P. Hemoabzymes: towards new biocatalysts for selective oxidations. J. Immunol. Methods. 2002. V. 269. P. 39-57.

128. Ricoux R., Lukowska E., Pezzoti F., Mahu J.P. New activities of catalytic antibody with peroxidase activity. Formation of Fe(II)-RNO complexes and stereoselective oxidation of sulfides. FEBS. 2004. V. 271. P. 1277-1283.

129. Kohda К., Kakehi M., Ohtsuja Y., Tagaka M., Imanaka T. Studies of high thermo stability and peroxidase activity of recombinant antibody L chain-porphyrin Fe(IIl) complex. FEBS Letters. 1997. V. 407. P. 280-284.

130. Langen R., Chang I., Germanas J.P., Richards J.H., Winkler J.R., Gray H.B. Electron tunneling in proteins: coupling through a beta strand. Science. 1995. V. 268. P. 1733-1735.

131. Datta D., Vaidehi N., Xu X. Goddard III. W.A. Mechanism for antibody catalysis of the oxidation of water by singlet dioxygen. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V. 99. P. 2636-2641.

132. Андриевская O.A., Бунева B.H., Забара В.Г., Наумов В.А., Ямковой В.И., Невинский Г.А. Иммуноглобулины класса М из сыворотки крови больных системной красной волчанкой эффективно расщепляют РНК. Молекуляр. Биология. 1998. Т. 32. С. 908-915.

133. Фримелль Г. Иммунологические методы. Москва Медицина. 1987.

134. Tijssen P. Laboratory techniques in biochemistry and molecular Biology. Practice and theory of enzyme immunoassay. Elsevier, Amsterdam. New-York-Oxford. 1985. P. 15

135. Остерман JI.A. Методы исследование белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. Москва. Наука. 1981.

136. Morrisey J.N. Silver stain for proteins in polyacrilamide gels: a modified procedure with enhanced uniform sensitiviy. Anal. Biochem. 1981. V. 117. P. 307-310.

137. Sambrook J., Russell D.W. Molecular cloning: A laboratory manual. New York. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2001.

138. Aebi H. Catalase in vitro. Methods Enzymol. 1984. V. 105. P. 121-130.

139. Flohe L., Gunzler W.A. Assays of glutathione peroxidase. Methods Enzymol. 1984. V. 105. P. 114-121.

140. Диксон M., Уэбб Э. Ферменты. Москва, Мир. 1982.1120 с.

141. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов. Москва, Мир. 1980. С. 191 -210.

142. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. Москва, Мир. 1979.

143. Yudelevich I.G., Cherevko A.S., Engelsht V.S., Pikalov V.V., Tagiltsevand A.P., Zheenbajev Zh.Zh. A two-jet plasmatron for the spectrochemical analysis of geological samples. Spectrochimica Acta. 1984. V. 139B. P. 777-785.

144. Shelpakova I.R., Zaksas N.P., Komissarova L.N., Kovalevskii S.V. Spectral methods for analysis of high purity gallium with excitation of spectra in the two-jet arc plasmatron. J. Anal. At. Spectrom. 2002. V. 17. P. 270-273.

145. Amino N., Tado H., Hidaka Y. Postpartum autoimmune thyroid syndrome: a model of aggravation of autoimmune disease. Thyroid. 1999. V. 9. P. 705-713.

146. Dayan C.M., Daniels G.H. Chronic autoimmune thyroidites. New Engl. J. Med. 1996. V. 335. P. 99-107.

147. Tanaka A., Lindor K., Ansari A., Gershwin M. E. Fetal Microchimerisms in the Mother: Immunologic Implications. Liver Transpl. 2000. V. 6. P. 138-143.

148. Freeman R., Rosen H., Thysen B. Incidence of thyroid dysfunction in an unselected postpartum population. Arch. Int.Med. 1986. Y. 146. P. U61-1364.

149. Fey H.R., Burtler R., Marti F. The production in the pregnant cow of anti-human immuniglobulin to be used for the antiglobulin test. Vox Sang. 1973. V. 25. P. 245-253.

150. Mestecky J., McGhee J.R. Immunoglobulin A (IgA): molecular and cellular interactions involved in IgG biosynthesis and immune response. Adv. Immunol. 1987. V. 40. P. 153-245.

151. Inbred strains of rats: OXYS rat genome. 1996. P. 52-54.

152. Егоров A.M., Осипов А.П. Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. Москва, Высшая школа. 1991.

153. Andrievskaya O.A., Buneva V.N., Zabara V.G., Naumov V.A., Iamkovoi V.I., Nevinsky G.A. Catalytic heterogenity of polyclonal RNA-hydrolyzing IgM from sera of patients with lupus erythematosus. Med. Sci. Monit. 2000. V. 6. T. 460-470.

154. Golinelly-Pimpaneu B., Gigant B., Bizebard T„ Nazava J., Saludjian P., Zemel R., Tavvfik D.S., Eshhar Z., Green B.S., and Knossow M. Crystal structure of a catalytic antibody Fab with esterase-like activity. Structure. 1994. V. 2. P. 175-183.

155. Akagi K., Yamanaka M., Murai K., Omae T. Purification and properties of acid ribonuclease from human serum and leucocytes. Cancer Res. 1978. V. 38. P. 2163-2167.

156. Suzuki H. Recent advances in abzyme studies. J. Biochem. 1994. V. 115. P. 623-628.

157. Stewart J.D., Bencovic S.J. Mechanistic and practical considerations. Chem. Soc. Rev., 1993. V. 22. P. 213-219

158. Odintsova E.S., Buneva V.N., Nevinsky G.A. Casein-hydrolyzing activity of slgA antibodies from human milk. J. Mol. Recognit. 2005. V. 18. P. 413-421.