Прогностическое значение изменения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Усанова, Елена Алексеевна

• Усанова, Елена Алексеевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Усанова, Елена Алексеевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о патогенезе острого деструктивного панкреатита

1.1.1. Участие полиморфно-ядерных лейкоцитов в патогенезе острого деструктивного панкреатита

1.1.2. Механизмы инфицирования и микробиологический пейзаж при остром деструктивном панкреатите

1.2. Современные возможности прогнозирования течения острого деструктивного панкреатита

1.3. Механизмы регуляции кислородозависимого метаболизма полиморфно-ядерных лейкоцитов

2.3.3. Метод выделения полиморфно-ядерных венозной крови

лейкоцитов из цельной

2.3.4. Метод подсчета полиморфно-ядерных лейкоцитов цельной крови в камере Горяева

2.3.5. Метод учета жизнеспособности полиморфно-ядерных лейкоцитов

2.3.6. Определение суммарной секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами методом люминол-зависимой хемилюминесценции

2.3.7. Определение секреции супероксид анион радикала кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами методом люцигенин-зависимой хемилюминесценции

2.3.8. Определение влияния условий инкубации in vitro на полиморфно-ядерные лейкоциты методами люминол- и люцигенин-зависимой хемилюминесценции

2.3.9. Определение праймирующего влияния комплексных бактериальных антигенов на полиморфно-ядерные лейкоциты методами люминол- и люцигенин-зависимой хемилюминесценции

2.3.10. Методы статистической обработки результатов

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ и ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Изучение влияния условий инкубации in vitro на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме

3.2. Изучение влияния условий инкубации in vitro на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.3. Изучение влияния бактериальных комплексных антигенов на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме

3.3.1. Праймирующее влияние комплексного антигена Escherichia coli на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме

3.3.2. Праймирующее влияние комплексного антигена Staphylococcus aureus на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме

3.3.3. Праймирующее влияние комплексного антигена Klebsiella pneumoniae на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме

3.3.4. Праймирующее влияние комплексного антигена Pseudomonas aeruginosa на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме

3.4. Изучение влияния бактериальных комплексных антигенов на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.4.1. Изучение влияния комплексного антигена Escherichia coli на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.4.2. Изучение влияния комплексного антигена Staphylococcus aureus на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.4.3. Изучение влияния комплексного антигена Klebsiella pneumoniae на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.4.4. Изучение влияния комплексного антигена Pseudomonas aeruginosa на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.5. Прогностическое значение исследования изменения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите

3.5.1. Динамическое исследование суммарной секреции активных форм кислорода и секреции супероксид анион радикала кислорода полиморфно-

ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным

панкреатитом

3.5.2. Динамическое исследование праймирующего влияния бактериальных комплексных антигенов на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным

панкреатитом

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Прогностическое значение изменения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

В хирургической практике острый панкреатит (ОП) в 20-40% случаев носит деструктивный, некротический характер [3; 88; 100; 114]. В настоящее время экспериментальными исследованиями доказано, что активированные полиморфно-ядерные лейкоциты (ПМЛ) одними из первых иммунных клеток обнаруживаются в очаге панкреодеструкции [141; 154; 155]. Считается, что они являются важными компонентами в защите и ограничении повреждения ткани поджелудочной железы. Однако ряд недавних научных исследований свидетельствует и о негативной роли ПМЛ в патогенезе острого деструктивного панкреатита (ОДП). Инфильтрируя ткань поджелудочной железы и секретируя активные формы кислорода (АФК) в ходе респираторного взрыва, нитроксиды и гидролитические ферменты, ПМЛ способны вызывать локальное повреждение железы, способствуя прогрессированию процессов деструкции [143; 155]. Коллектив зарубежных авторов в своей работе показал, что ПМЛ участвуют в регуляции апоптоза в панкреа-тоцитах при экспериментальном панкреатите [140]. Существует точка зрения, что ПМЛ, находясь в микроциркуляторном русле под действием «цитокинового шторма», приходят в состояние гиперстимуляции и, мигрировав в очаг деструкции, «перевыполняют» там свои эффекторные функции, оказывая не защитное, а повреждающее действие. По мере развития ответной противовоспалительной реакции, ПМЛ приходят в состояние иммунодепрессии, тем самым способствуя усугублению ОДП и инфицированию очагов панкреатогенной деструкции [77]. Установлено, что инфицирование очагов повреждения при экспериментальном панкреатите осуществляется за счет бактериальной транслокации флоры кишечника и происходит уже в первые сутки от начала заболевания [118]. Между тем, клиническое проявление гнойно-септических осложнений ОДП наблюдается только на 10 - 14 —е сутки заболевания [98; 101; 118]. Наиболее часто высеваемыми возбудителями при инфицировании ОДП по данным литературы являются Escherichia coli, Klebsiella spp, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus и Pseu-

domonas aeruginosa [59; 120]. Вопрос, в силу каких причин в одном случае у больных ОДП протекает асептично и разрешается, а у других усугубляется инфицированием и развитием гнойно-септических осложнений, остается до сих пор нерешенным. Учитывая, что основное количество летальных исходов при ОДП связано с развитием гнойно-септических осложнений, изучение процессов инфицирования и поиск ранних маркеров является одной из актуальных задач современной медицины [Приводится по: 88].

С нашей точки зрения, позитивное или негативное влияние ПМЛ на процессы деструкции в поджелудочной железе могут быть связаны с нарушениями процессов прайминга этих клеток. Существование такой способности у ПМЛ, как прайминг или предстимуляция, известно еще с 80-х годов прошлого века. Суть данного явления заключается в том, что действие праймирующего стимула на клетку не приводит к ее непосредственной активации, а вызывает развитие повышенной функциональной готовности клетки, что влечет за собой усиление интенсивности ответа (например, повышенную секрецию АФК на последующее добавление этого же или другого стимула [35; 50; 82]. Также важно отметить, что при возникновении воспалительного процесса в макроорганизме ПМЛ приходят в состояние предстимуляции еще в кровеносном русле, под действием находящихся там праймирующих факторов. Далее, мигрируя в очаг воспаления, там они реализуют все свои эффекторные функции, в т. ч. и секрецию АФК.

На сегодняшний день известно много праймирующих факторов: различные химические вещества, физические факторы, препараты цитокинов, миелопепти-ды, микроорганизмы и их компоненты [23; 54; 64; 82]. В ряде работ исследовали праймирующее действие бактерий или их антигенов на фагоцитарную активность ПМЛ крови при различных инфекционных заболеваниях и у здоровых людей [17]. Однако чаще всего это было воздействие каким-то одним выделенным компонентом бактерий, являющимся патоген-ассоциированным молекулярным паттерном (РАМР) данного микроорганизма, - липополисахаридом, пептидоглика-ном либо токсином [116; 131]. В организме же, при воспалении бактерии исполь-

зуют все свои факторы патогеиности, инвазии, токсины, выделяют продукты жизнедеятельности. Именно поэтому в данной работе была смоделирована in vitro ситуация, схожая с той, которая создается in vivo при попадании микроорганизма и возникновении воспалительного процесса. Для этого в качестве праймирующего стимула использовали комплексные бактериальные антигены, состоящие из инактивированных цельных микроорганизмов, их разрушенных компонентов, и выделенных ими продуктов жизнедеятельности.

Таким образом, изучение праймирующей способности ПМЛ, проявляющейся изменением секреции АФК, in vitro имеет патофизиологическое значение in vivo. Между тем, процессы прайминга ПМЛ при ОДП остаются неизученными, что и обусловило актуальность настоящей работы. Изменение функционального потенциала ПМЛ, его возможное потенцирование открывает новые возможности для предупреждения гнойно-септических осложнений различных острых воспалительных заболеваний.

Цель исследования

Исходя из выше изложенного, целью настоящей работы явилось исследование механизмов изменения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами при остром деструктивном панкреатите.

Задачи исследования

Для достижения поставленной нами цели потребовалось выполнить следующие задачи:

1. Отработать условия определения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови в норме.

2. Выявить изменения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами при асептическом и инфицированном течении острого деструктивного панкреатита.

3. Изучить влияние бактериальных комплексных антигенов на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами в норме.

4. Оценить особенности секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови под влиянием бактериальных комплексных антигенов при асептическом и инфицированном течении острого деструктивного панкреатита.

5. Разработать прогностический алгоритм определения характера течения острого деструктивного панкреатита на первые сутки заболевания по изменению секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови.

Научная новизна

Установлено влияние условий инкубации in vitro и подтверждена роль компонентов цельной крови в механизмах секреции АФК на ПМЛ крови в норме.

Впервые выявлено праймирующее влияние комплексных антигенов Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa на секрецию АФК ПМЛ крови в норме.

Установлено, что у пациентов с инфицированным течением ОДП уже в 1-е-3-е сутки заболевания наблюдается снижение суммарной секреции АФК и секреции Ог~ ПМЛ крови по сравнению с пациентами, имеющими в дальнейшем асептическое течение заболевания.

Впервые выявлено снижение праймирующей способности ПМЛ к секреции АФК в ответ на воздействие инкубацией при 37°С в течение 60 мин и комплексными антигенами микроорганизмов, способных вызвать инфицирование у пациентов с гнойно-деструктивными формами острого панкреатита. Установлено, что одним из механизмов снижения секреции АФК ПМЛ крови является нарушение активности НАДФН-оксидазы.

Теоретическая значимость работы

Значимость исследования заключается в расширении представлений об участии ПМЛ в патогенезе ОДП, в частности их роли в развитии инфицирования очагов панкреодеструкции на ранних сроках заболевания.

Практическая значимость работы

На основании полученных экспериментальных данных установлена возможность использования метода стимулированной сульфатом бария люминол-зависимой хемилюминесценции крови в прогнозе течения ОДП уже в 1-е сутки заболевания. Снижение секреции АФК ПМЛ крови при воздействии комплексными антигенами Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa может являться ранним специфическим маркером инфицирования при ОДП.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Для получения результатов по определению эффекта прайминга ПМЛ in vitro, приближенных к условиям in vivo, необходимо производить исследования по изучению секреции АФК ПМЛ на цельной крови.

2. Предварительная инкубация при 37°С в течение 60 мин оказывает прайми-рующее влияние на секрецию АФК ПМЛ в норме. У пациентов с ОДП та же инкубация вызывает снижение секреции АФК ПМЛ. При инфицированном течении ОДП одним из механизмов является нарушение активности НАДФН-оксидазы ПМЛ.

3. Комплексные AT Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae и Pseudomonas aeruginosa оказывают праймирующее влияние на секрецию АФК ПМЛ в норме и при асептическом течении ОДП. Данное влияние определяется активацией НАДФН - оксидазы ПМЛ.

4. При инфицированном течении ОДП секреция АФК ПМЛ снижена. При воздействии комплексными AT Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella

pneumoniae и Pseudomonas aeruginosa происходит снижение праймирующей способности к секреции АФК ПМЛ. Одним из механизмов наблюдаемого снижения является нарушение активации НАДФН-оксидазы ПМЛ. 5. На основании полученных данных предложен прогностический алгоритм определения характера течения острого деструктивного панкреатита на первые сутки заболевания по изменению секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови под влиянием бактериальных комплексных антигенов.

Апробация работы

Основные результаты работы доложены и обсуждены на совместной научной конференции кафедр общей патологии МВФ, физиологии МБФ и экспериментальной и клинической хирургии МБФ ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирого-ва МЗ РФ 07 марта 2014 г. Материалы диссертационной работы доложены на II Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирские медико-биологические чтения» (Барнаул, 2012), на XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2012) и на XX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2013).

Внедрение результатов работы

Результаты диссертационной работы внедрены в практику 12-го хирургического отделения ФГБУ «3 ЦВКГ им. А.А. Вишневского» и в учебный процесс кафедры общей патологии МБФ ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова МЗ РФ.

Публикации результатов исследования

По результатам исследования опубликовано 8 печатных работ из них 4 работы в российских научных рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Министерства науки и образования РФ.

Личный вклад автора

Автор провел сбор исходных данных, анализ и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрении в практику.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, собственных результатов исследования и обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 88 отечественных и 70 иностранных источников, приложения. Диссертация иллюстрирована 38 таблицами, 31 рисунком.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о патогенезе острого деструктивного панкреатита

Острый деструктивный панкреатит - это локальное асептическое воспаление поджелудочной железы, в основе которого лежит внутрипротоковая аутоактива-ция панкреатических ферментов (трипсина, химотрипсина и эластазы) и повреждение (деструкция) ацинарных клеток или панкреатоцитов. Пусковых механизмов аутоактивации ферментов поджелудочной железы может быть несколько. Один из основных механизмов - это повышение давления в панкреатическом протоке, связанное с нарушением оттока секрета поджелудочной железы на уровне фате-рова соска - камни, спазм папиллы или стеноз, особенности анатомического строения протоков, парафатериальные дивертикулы, повышение внутридуоде-нального давления [90; 123]. Еще один из наиболее часто реализуемых механизмов - панкреатическая гиперсекреция, вызванная действием повреждающих факторов (метаболитов алкоголя, желчи, гиперлипидемии и др.) [111; 145; 150]. Также локальная или системная сосудистая ишемия и шок способны провоцировать повреждение клеток поджелудочной железы. Отдельного внимания заслуживают факторы, обладающие непосредственным действием на панкреатоциты. Это вирусы Коксаки, эндемического паротита, аденовирусы, бактерии Salmonella, Yersinia, Helicobacter pylory, аскариды и некоторые лекарственные и химические вещества [18; 62]. Из-за деструкции панкреатоцитов происходит повреждение эпителия в области дуктоацинарных соединений и выброс панкреатических ферментов в интерстициальную ткань и сосуды поджелудочной железы, а затем и в системный кровоток. Таким образом запускается многоуровневая воспалительная реакция, в которой активированные панкреатические ферменты играют роль факторов альтерации воспаления [142]. Масштаб возникающей воспалительной реакции зависит от ряда факторов и играет одну из основных ролей в патогенезе

одп.

Воздействие протеолитических ферментов на сосудистую стенку приводят к феномену эндотелиальной дисфункции, что сопровождается активацией свертывающей, противосвертывающей и калликреин-кининовой систем [27; 81]. В результате сначала развивается спазм, потом парез сосудов микроциркуляции, приводящие к сладж-феномену, а затем к нарушению проходимости микроцирку-ляторного русла, отёку и ишемии ткани поджелудочной железы [28; 45]. После инициации воспаления в поджелудочной железе происходит подключение в патогенез ОДП клеточного звена иммунной системы. Результатом этого является продукция иммунными клетками (моноцитами/макрофагами, лейкоцитами, Т-лимфоцитами) медиаторов воспаления (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНОа, РАБ, 1САМ-1, МСР-1 и др.), активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), незавершённый фагоцитоз, выделение оксида азота (N0), АФК, и выработка острофазовых белков [71; 158]. В условиях развивающейся гипоксии из-за накопления недоокисленных продуктов клеточного метаболизма (лактата и пирувата) в мик-роциркуляторном русле и в тканях происходит развитие эндогенной интоксикации. Процессы ПОЛ и повышенная секреция АФК только усугубляют гипоксию тканей, развивающуюся на фоне блокировки антиоксидантных систем и, таким образом, замыкается порочный круг развития эндогенной интоксикации [63]. Далее происходит генерализация эндогенной интоксикации и в макроорганизме развивается системная воспалительная реакция (рисунок 1). Исход данной реакции трудно предсказуем и зависит от многих факторов, в т. ч. и от баланса продуцируемых про- и противовоспалительных цитокинов [78]. На фоне этого развивается полиорганная недостаточность, проявляющаяся острым респираторным дистресс-синдромом, острой почечной недостаточностью, поражением печени и нарушением барьерной и моторной функций кишечника. За счет бактериальной транслокации при увеличении проницаемости слизистой оболочки кишечника происходит инфицирование и нагноение очагов панкреодеструкции и парапан-креатической клетчатки [127]. Далее при развитии гнойно-септических осложне-

ний ОДП происходит «вторая волна» полиорганной недостаточности, связанная с попаданием бактериальных токсинов и ферментов в системный кровоток.

Суммируя вышесказанное, в настоящее время в патогенезе ОДП выделяют 3 патогенетических стадии, которые обозначил Савельев B.C., и соавторы (1983): I стадия (1-ые - 3-й сутки). Стадия патогенной токсемии. II стадия (3-е -14-е сутки). Стадия эндогенной интоксикации. Данная стадия может заканчивается выздоровлением, либо переходит в следующую стадию. III стадия (14-е - 17-е сутки). Стадия развития гнойно-септических осложнений [74].

ПРОДУКЦИЯ провоспалнтельных медиаторов *ФНО-альфа *ИЛ-1 *ИЛ-2 *ИЛ-6 *>о

*АФК

*Эикозаноиды

ПРОДУКЦИЯ Хемокннов *МСР-1 ♦Вещество Р

Молекул адгезии *1САМ-1

V

I

ПРОДУКЦИЯ противовоспалительных медиаторов

*ИЛ 4 *ИЛ-10

♦антагонист Я ИЛ-1

*С'5а

♦нейтральная эндопептндаза

ПОЛИОРГАННАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ

СЕПТИЦЕМИЯ

Рисунок 1. Схема развития системной воспалительной реакции при остром деструктивном панкреатите.

1.1.1. Участие полиморфно-ядерных лейкоцитов в патогенезе острого

деструктивного панкреатита

В настоящее время, несмотря на достижения в исследовании молекулярных механизмов патогенеза ОДП, роль фагоцитарного звена, и, в частности, ПМЛ в развитии данного заболевания изучена недостаточно полно [34]. Ключевыми клетками, ответственными за воспалительный процесс при ОДП являются пан-креатоциты, но нельзя не учитывать важное участие и клеточного звена иммунитета - моноцитов, макрофагов, ПМЛ, лимфоцитов и эндотелиоцитов [71].

К настоящему времени известно, что ПМЛ в воспалительном процессе при ОДП выполняют как минимум три функции:

1. Разрушают и удаляют поврежденную ткань поджелудочной железы, образовавшуюся в результате действия активированных ферментов железы (трипсина, химотрипсина и эластазы);

2. Защищают зону повреждения от возможного присоединения и бактериальной инфекции, способной вызывать гнойно-септические осложнения ОП;

3. Регулируют поведение других клеток иммунной системы, участвующих в воспалении.

После запуска повреждения в панкреатоцитах, начинается приток активированных лейкоцитов из микроциркуляторного русла в зону гибели ацинарных клеток и через 2-3 часа уже отмечается инфильтрация ткани поджелудочной железы ПМЛ [67; 155]. Надо отметить, что при ОДП у ПМЛ периферической крови еще до начала миграции обнаруживается ряд цитохимических особенностей. На экспериментальных моделях ОДП у крыс и в клинических исследованиях у больных с ОДП в начале заболевания возрастает активность НАДФН - оксидазы ПМЛ, определяемая по уровню восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), снижается активность лизосомальных катионных белков и миелопероксидазы (МПО) [4; 6; 48]. Снижение активности МПО может быть следствием дегрануля-ции ПМЛ с истощением этой ферментной системы еще в кровотоке вследствие наличия антигенного бактериального раздражителя [5; 51]. Одновременно с этим

увеличивается количество гликогена в цитоплазме ПМЛ, повышается активность кислой фосфатазы и снижается содержание липидов клетки [51; 95]. В то же время, выявлено почти пятикратное увеличение содержания в цитоплазме ПМЛ таких неферментных катионных белков как дефензинов, серпроцидинов, а также лактоферрина и лизоцима [7]. Эти цитохимические особенности ПМЛ при ОДП свидетельствуют о том, что еще до поступления в очаг воспаления ПМЛ приходят в состояние гиперстимуляции [75]. Гипотезу о гиперстимуляции ПМЛ в системном кровотоке выдвинул Ятс1егкпесЫ; Н. (1988) [138]. Предполагается, что одной из возможных причин гиперстимуляции ПМЛ в кровотоке может быть си-нергичное влияние провоспалительных цитокинов, продуцируемых клеточным иммунным звеном в начале заболевания [22; 84; 114].

Миграция ПМЛ зависит и происходит при некоторых адгезивных взаимодействиях между лейкоцитарной клеткой и эндотелиоцитом стенки кровеносного русла. Известно, что 1САМ-1 (адгезивный белок клеточной поверхности эндоте-лиоцитов) способствует адгезии и его содержание резко возрастает во время воспалительного процесса при ОДП [104; 105; 126; 149]. В экспериментальном исследовании Ъъптотс V., и соавт. сообщается об обнаружении молекул 1САМ-1 на поверхности панкреатической ацинарной клетки у крыс, при экспериментальном панкреатите, вызванном сверхмаксимальными дозами церулеина [109]. Возможно, что сами панкреатоциты способны нацеливать на свою поверхность ПМЛ, которые могут разрушать неповрежденные клетки поджелудочной железы, тем самым вызывая более обширные повреждения. Предполагается, что дефицит 1САМ-1, препятствующий вовлечению ПМЛ в воспаление, способен повлиять на размеры повреждения при ОДП [153]. После адгезии происходит хемотаксис ПМЛ, который направляет их к участкам повреждения ткани под действием градиента концентраций растворимых хемотаксических молекул или хемоаттрактан-тов. В этом процессе, участвуют многие белки, включая провоспалительные ци-токины, молекулы адгезии, матричную металлопротеиназу (ММР-9) и большое подсемейство хемотаксических цитокинов (хемокинов) [104; 105; 126]. За про-

шедшие 20 лет многие хемокины были определены как воспалительные медиаторы с сильным лейкоцит - активирующим действием, что и свидетельствует об их участии в патогенезе ОП. Ранее полагали, что каждый класс хемокинов имеет свой тип рецептора и воздействует на различные лейкоцитарные клетки. Например, ИЛ-8, GRO-a, ENA-78 на ПМЛ, а RANTES, МСР-1, М1Р-1а - на моноциты. В настоящее время, показано, что все лейкоциты на своей поверхности имеют семейство рецепторов со сцепленным 7-трансмембранным доменом G ко всем хемокинам [94; 106; 148; 156]. Однако экспрессируются на поверхности ПМЛ в очаге воспаления лишь определенные типы рецепторов этого семейства, в соответствии с присутствующими для них лигандами. Таким образом, в зависимости от профиля хемокинов может меняться клеточный состав в зоне воспаления [126; 156]. В свою очередь подтверждена негативная роль ММР-9 ПМЛ в патогенезе ОДП. Данный фермент вызывает разрыв базальной мембраны эндотелиоцитов микроциркуляторного русла поджелудочной железы и других внутренних органов, провоцируя кровоизлияния и развитие полиорганной недостаточности [92; 146]. Однако показана и защитная роль ПМЛ в патогенезе ОДП. В экспериментальных исследованиях, проводимых на моделях отечного и деструктивного панкреатита у мышей выявлено, что первоначальным моментом активации ПМЛ является окклюзия ими капилляров поджелудочной железы, которая предшествует их переходу в зону повреждения. Ингибирование внутрипросветной аккумуляции ПМЛ в проводимом исследовании приводило к развитию геморрагических некрозов и усилению тяжести течения экспериментального ОП [128].

В очаг повреждения ПМЛ приходят уже в активированном состоянии, что способствует быстрому фагоцитированию остатков деструкции ткани поджелудочной железы. В то же время, было показано, что активация ПМЛ - важный фактор, определяющий тяжесть ОДП. Из-за возможной гиперстимуляции ПМЛ еще в системном кровотоке, в очаге деструкции они могут секретировать чрезмерное количество АФК, вызывая тем самым, более массивный некроз в поджелудочной железе и развитие полиорганной недостаточности [137; 144; 148]. Да-

лее, приходя в состояние истощения, ПМЛ способствуют развитию гнойно-септических осложнений при ОДП [77]. Было показано, что истощение ПМЛ влияет и на значительное увеличение апоптоза в ацинарных клетках. Sandoval D. и соавт. (1996) в своем исследовании сообщили об увеличении апоптотических ацинарных клеток вследствие назначения антинейтрофильной сыворотки, которая сопоставима с анти-ICAM-l (молекула межклеточной адгезии 1, нейтрализирую-щее антитело), и значительно уменьшала распространение некроза и воспалительного инфильтрата на экспериментальной модели ОП [154]. Аналогичные результаты наблюдались и в другом исследовании, где лечение метотрексатом крыс с ОП заканчивалось значительным снижением количества ПМЛ, что фиксировалось по низким миелопероксидазным уровням и последовательном увеличении апоптотической гибели ацинарной клетки [140]. Экспериментальное исследование, использующее в качестве экспериментальной модели вызванный таурохола-том тяжелый острый панкреатит, показало, что ПМЛ, через ФНО-а -зависимый механизм, могут быть включены в развитие как апоптотической, так и некротической формы смерти ацинарных клеток [97].

Резюмируя литературные данные, следует дополнить известные факты о функционировании ПМЛ при ОДП. Существуют и негативные моменты участия ПМЛ в патогенезе ОДП - это чрезмерная секреция АФК при гиперстимуляции ПМЛ, способная вызывать новые очаги некрозов поджелудочной железы, развитие гнойно-септических осложнений и запуск апоптоза панкреатоцитов из-за последующего за гиперстимуляцией истощения ПМЛ.

1.1.2. Механизмы инфицирования и микробиологический пейзаж при

остром деструктивном панкреатите

Инфицирование при ОДП является одним из основных факторов, определяющих клиническое течение и исход данного заболевания [118]. До настоящего времени в медицине общепризнанной теорией инфицирования очагов панкреато-генной деструкции является теория транслокации условно - патогенной микро-

флоры из просвета кишечника. Berg R.D. и соавт. (1979) определили бактериальную транслокацию как процесс миграции бактерий из желудочно-кишечного тракта во внекишечные пространства и такие внутренние органы, как мезентери-альные лимфатические узлы, селезенку, почки и системный кровоток. Процесс инфицирования инициируется прекращением функционирования барьера слизистой оболочки кишки и вызывается повреждением механизмов иммунной защиты организма [103]. Beger H.G. и соавт. (1986) продемонстрировали связь между кишечной флорой, процессом инфицирования панкреонекроза, и клиническим исходом у больных с тяжелым течением острого панкреатита [98].

Изменение состава флоры кишечника, нарушение моторной и барьерной функции слизистой оболочки кишки рассматриваются в настоящее время как основные звенья бактериальной транслокации при ОДП (рисунок 2) [127].

Рис.2. Роль бактериальной транслокации в инфицировании острого деструктивного панкреатита.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Усанова, Елена Алексеевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Адо, А.Д. Современная практическая аллергология / А.Д. Адо, A.A. Поль-нер. - М.: Медгиз, 1963.-399с.

2. Активированная люцигенином хемилюминесценция тканей животных/ Н.С. Матвеева, О.Б. Любицкий, А.Н.Осипов, Ю.А. Владимиров //Биофизика сложных систем.-2007.- Т.52. - №6. - С. 1120-1127.

3. Багненко, С.Ф. Современные представления о тактике лечения острого панкреатита / С.Ф. Багненко, А.Д. Толстой, В.Р. Гольцов //Актуальные вопросы диагностики и хирургического лечения заболеваний органов брюшной полости: сб. статей. - СПб.- 2005. - С. 127-129.

4. Балаклеец, E.H. Активация нейтрофильных лейкоцитов системы верхней полой и воротной вен у больных острым панкреатитом/ E.H. Балаклеец, A.A. Славинский, А.Н. Лищенко // Кубанский научный медицинский вест-ник.-2010.-№9 (123).-С.31-33.

5. Балачевский, Б.В. Воздействие даларгина на функционально-метаболическую активность нейтрофилов крови при остром экспериментальном панкреатите/ Б.В. Балачевский, А.Н. Курзанов, A.A. Славинский// Кубанский научный медицинский вестник.-2006.-№10.-С.15-17.

6. Барсук, A.B. Активация нейтрофильных лейкоцитов периферической крови у больных острым панкреатитом /A.B. Барсук, В.В. Нарсия, A.A. Славинский //MODERN HIGH TECHNOLOGIES.-2012.-№8.- С.8-9.

7. Барсук, A.B. Антибактериальные катионные белки нейтрофильных лейкоцитов в динамике развития острого панкреатита/ A.B. Барсук, В.В. Нарсия, A.A. Славинский //Международный журнал экспериментального образования.^^.-№6.- С.9.

8. Будихина, A.C. Новый метод определения бактерицидной активности биологических жидкостей с помощью лазерной проточной цитофлюоромет-

рии/ A.C. Будихина, Н.С. Олиферук, Б.В. Пинегин //Иммунология.-2006.-Т.27.-№4.-С.249-252.

9. Бельков, В.В. Прокалыдитонин и С-реактивный белок в современной лабораторной диагностике / В.В. Вельков // Клинико-лабораторный консилиум.-2008.-№6.-С.46-52.

10. Владимиров, Ю.А. Стимулированная кристаллами сульфата бария хемилю-минесценция лейкоцитов цельной крови / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерст-нев, А.П. Пирязев // Биофизика.-1989.-Т.34.-№6.- С. 1051-1054.

11. Владимиров, Ю.А. Хемилюминесценция в биологических системах. /Ю.А. Владимиров //Природа.-1997.-№3.-С. 18-28.

12. Владимиров, Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Серия Биофизика / под ред. М.Н. Мерзляка - М.:ВИНИТИ, 1989 - Т. 24.-176с.

13. Военков, B.JI. Регуляторные функции активных форм кислорода в крови и в водных модельных системах: автореф. дис....д-ра биол. наук: 03.0013; 03.00.02 / Военков Владимир Леонидович. - М., 2003. - 23с.

14. Гематологический атлас: настольное руководство врача-лаборанта / Г.И. Козинец, Т.Г. Сарычева, С.А. Луговская и др. - М.: Практическая медицина, 2008.-187с.

15. Годков, М.А. Хемилюминесцентный анализ нейтрофилов неразделенной крови в клинической практике: автореф. дис.... канд. мед. наук: 14.00.36 /Годков Михаил Андреевич.- М., 1998.- 25с.

16. Грачева, Т.А. Совершенствование хемилюминесцентного метода исследования функциональной активности фагоцитирующих клеток/Т.А. Грачева // Клин. лаб. диагностика. - 2008. - №2. - С.54-55.

17. Грачева, Т.А. Способ диагностики специфической сенсибилизации организма человека к бактериальным антигенам по показателям хемилюминесцентного свечения нейтрофилов / Т.А. Грачева // Иммунология. - 2007.-Т.28. - №5. - С.297-299.

18. Данилов, M.B. Хирургия поджелудочной железы: руководство для врачей / М.В. Данилов, В.Д. Федоров.- М.: Медицина, 1995.- 512с.

19. Диагностические аспекты острого панкреатита/ И.С.Малков, A.M. Зайнут-динов, A.A. Новожилова и др. // Практическая медицина.-2007.-№21. -С.45-48.

20. Диагностическое и прогностическое значение НСТ-теста при различных формах острого панкреатита / М.А. Шевляева, Г.К. Карипиди, C.B. Аваки-мян, В.А. Зарубин //Кубанский научный медицинский вестник. -2010. Т.123.- №9 - С.171-175.

21. Диагностическое и прогностическое значение щелочной фосфатазы ней-трофилов при остром панкреатите / М.А. Шевляева, C.B. Авакимян, Г.К. Карипиди и др. // Бюллетень Вост-Сиб. Научного центра СО РАМН.-2012,-№4-1. -С.152-155.

22. Дифференцированные влияния стимуляции in vitro на фенотип и функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов в норме и при осложненном остром деструктивном панкреатите / И.В. Нестерова, И.Н. Швыд-ченко, Е.Ю. Быковская и др. //Иммунология.-2009.-№2.-С.283-286.

23. Долгина, E.H. Рецепторная (цитокин-опосредованная) и нерецепторная (ла-зер-индуцированная) активация эффекторных функций фагоцитов: автореф. дис.... канд. мед. наук: 14.00.36; 03.02.00/ Долгина Евгения Николаевна. -М., 2001. -21с.

24. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И.Долгушин, О.В. Бухарин.-Екатеринбург: УрО РАН, 2001. - 284с.

25. Дорохина, H.A. Использование специфических антигенных препаратов в качестве индукторов дыхательного взрыва лейкоцитов крови при хемилю-минесцентном анализе / H.A. Дорохина, A.A. Савченко, А.Б. Чесноков // Клин. лаб. диагностика.-2001.-№1.-С.39-43.

26. Дунаевская, С.С. Активные формы кислорода и хемилюминесценция при остром панкреатите / С.С. Дунаевская, Е.В. Дябкин //Сибирский медицинский журнал .-2010.-Т.94.-№3 .-С.З 8-40.

27. Ермолов, A.C. Современное состояние диагностики и лечения острого панкреатита / A.C. Ермолов, П.А. Иванов, A.B. Гришин //IX Всероссийский съезд хирургов: мат.конф.- Волгоград, 2000.-С.45-46.

28. Ефимов, A.J1. Прогностические критерии тяжести острого пакреатита в зависимости от изменения показателей микроциркуляции/ А.Л.Ефимов, И.В. Гайворонский, C.B. Петров //Вестник СПб университета.-2006.-Серия 11.-№1.- С. 94-101.

29. Зенков, Н.К. Исследование механизмов окислительного стресса при воспалении и возможностей его антиоксидантной коррекции: автореф. дис.... д-ра биол. наук: 14.0016;03.00.04 / Зенков Николай Константинович. - Ново-сиб., 2007.-35с.

30. Зубарев, П.Н. Критерии выбора и эффективность применения плазмоферре-за в лечении острого деструктивного панкреатита/ П.Н.Зубарев, C.B. Пас-карь // Новости хирургии.- 2011.- Т. 19.- №5.- С.46-51.

31. Зубарев, П.Н. Причины летальных исходов при остром деструктивном панкреатите/ П.Н.Зубарев, И.Д. Косачев, Т.В. Паскарь //Вестник СПб университета. Серия 11: Медицина.-2009.-№4.-С. 161-168.

32. К вопросу о ранней диагностике и прогнозировании течения панкреонекро-за / Ю.С. Винник, A.A. Савченко, C.B. Миллер и др.// Сиб. мед. обозрение.-2009.-Т.55.-№1.-С.42-46.

33. Камилов, Р.Ф. Хемилюминесценция как метод оценки общей антиокислительной активности крови, слюны, слезной жидкости и мочи / Р.Ф. Камилов, Т.В. Ханов, Р.Н. Яппаров и др. //Клин. лаб. диагностика.-2009.-№2.-С.21-23.

34. Кислородзависимые механизмы микробицидной системы нейтрофилов в прогнозировании течения острого панкреатита / М.А. Шевляева, Г.К. Кари-

пиди, В.А. Зарубин, Е.Г. Ермоленко //Бюллетень ВС НЦ РАМН. - 2012.-№4(86)- С. 148-151.

35. Клебанов, Г.И. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов/ Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров //Успехи современной биологии. - 1999. -Т.119. -№5. - С. 462-475.

36. Клименко, H.A. Воспаление /H.A. Клименко //Патофизиология: учебник для медицинскиз вузов/ под ред. В.В.Новицкого, Е.Д. Гольберга - Томск: изд-во том.ун-та, 2006.- гл.9.- с.207 - 227.

37. Клинические аспекты применения хемилюминесцентного анализа/ Ю.С. Винник, A.A. Савченко, О.В. Перьянова и др. //Сибирское медицинское обозрение.- 2006.-Т.40. - №3. - С.3-6.

38. Клишевич, Ю.Б. Приписанные характеристики методики определения активности лейкоцитов/ Ю.Б. Клишевич // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук.-2012. - №5. -С.32-34.

39. Комаров, Ф.И. Биохимические показатели в клинике внутренних болезней: справочник /Ф.И.Комаров, Б.Ф. Коровкин. - М.: МЕДпресс, 2000.-232с.

40. Кормош, Н.Г. Физиологическая роль активных форм кислорода (субклеточный уровень) - взгляд клинициста/ Н.Г. Кормош //Российский биотерапевтический журнал.-201 l.-T.10.-№4. -С.29-35.

41. Краснова, Е.И. Клиническое значение хемилюминесцентного ответа лейкоцитов крови при рожистом воспалении/ Е.И. Краснова // Бюллетень СО РАМН.-1997." №4.- С.101-105.

42. Лечебно-диагностическая лапароскопия у больных с различными формами острого панкреатита / В.П. Саганов, В.Е. Хитрихеев, Г.Д. Гунзынов, B.C. Очиров //Вестник Бурятского государственного университета.-2010.-№12.-С. 134-138.

43. Липкин, Ю.Г. Прикладная статистика для врача. Первичный анализ данных: методические разработки /Ю.Г.Липкин.- М.: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава, 2008,- 33с.

44. Литвин, A.A. Современные возможности прогнозирования инфекционных осложнений тяжелого острого панкреатита/ А.А Литвин //Вестник СПб Университета. - 2009.- Cep.ll.- №3.- С.127-134.

45. Литвицкий, П.Ф. Воспаление/ П.Ф. Литвицкий // Вопросы современной пе-диатрии.-2006.-Т.5.-№5.-С.63-71.

46. Литвицкий, П.Ф. Система иммунобиологического надзора и иммунопатологические синдромы/ П.Ф. Литвицкий // Вопросы современной педиатрии.-2007.-Т.6.-№3.-С.62-70.

47. Лобаков, А.И. Клинико-инструментальные и лабораторные факторы оценки тяжести прогноза и течения острого деструктивного панкреатита / А.И. Лобаков, A.M. Савов, В.Н. Филижанко и др.//Альманах клинической медицины.-2007.-№16.- С.102-105.

48. Локтионов, А.Л. Коррекция нарушений нейтрофильного звена антиинфекционной защиты у больных с деструктивными формами острого панкреатита / А.Л. Локтионов, Д.П. Назаренко, А.И. Конопля //Современные наукоемкие технологии.-2005._-№7.-С.51.

49. Майоров, В.М. Морфологические изменения внутренних органов при остром некротизирующем панкреатите по данным аутопсии/ В.М.Майоров, З.А. Дундаров, А.А.Подольский //Новости хирургии.-2010.-Т.18.-№2.-С.28-36.

50. Маянский, А.Н. НАДФН-оксидаза нейтрофилов: активация и регуляция/ А.Н. Маянский //Цитокины и воспаление. - 2007. - Т.6. - №3. - С.3-13.

51. Нагоев, Б.С. Состояние функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных острыми и хроническими панкреатитами / Б.С.Нагоев, A.A. Юанов //Вестник новых медицинских технологий.-2006. Т.13.-№4.-С.113-115.

52. Невмятуллин, А.Л. Реактивная хемилюминесценция нейтрофилов человека в системах со стафилококками: автореф. дис.... канд. мед. наук: 14.00.46 ; 03.00.07 /Невмятуллин Абуалисиня Летфуллович. - М., 1988. - 20с.

53. Нестеренко, Ю.А. Диагностика и лечение деструктивного панкреатита: монография / Ю.А. Нестеренко, В.В.Лаптев, C.B. Михайлусов - М., 2004.-304с.

54. Нестерова, И.В. Влияние миелопептидов на функционирование нейтро-фильных гранулоцитов / И.В. Нестерова, И.Н. Швыдченко // Аллергол. и иммунол. - 2005. -Т.6. - №1. - С.70-80.

55. Нехаев, С.Г. Полиморфноядерные лейкоциты как система антиэндотокси-новой защиты организма / С.Г. Нехаев, Ю.И. Григорьев //Вестник новых медицинских технологий.-2010.-Т. 17.-№ 1.-С. 13-14.

56. Никанкина, Л.В. Особенности цитокин-зависимой регуляции кислородного метаболизма фагоцитов: автореф. дис.... канд. мед. наук: 14.00.36; 03.02.00 /Никанкина Лариса Вячеславовна. - М., 2001. - 22с.

57. Новиков, К.Н. Роль активных форм кислорода в биологических системах при воздействии факторов окружающей среды: автореф. дис.... д-ра биол. наук: 03.00.16; 03.00.02 / Новиков Кирилл Николаевич. - М., 2004. - 24с.

58. Особенности диагностики, прогнозирования и комплексного лечения острого деструктивного панкреатита на ранних стадиях заболевания/ Ю.Л. Шевченко, М.Н. Стойко, М.Н. Замятин и др.//Альманах клинической медици-ны.-2006.-№11.- С. 162-170.

59. Острые скопления жидкости, осложняющие течение панкреонекроза. Приемлем ли выжидательный подход?/С.В. Михайлусов, Е.В. Моисеенкова, A.B. Черняков и др. //Вестник РГМУ. - 2009,- №2. - С.30-33.

60. Острый панкреатит и травмы поджелудочной железы / Р.В. Вашетко, А.Д. Толстой, A.A. Курыгин и др. - СПб.: Питер, 2000. - 320с.

61. Петрова, Е.В. Интраабдоминальная госпитальная инфекция у больных пан-креонекрозом / Е.В. Петрова, Н.Т. Алексеева, А.Ю. Корольков // Вестник РУДН, сер. Медицина. - 2007,- №2.- С.67-72.

62. Полушин, С.Ю. Варианты течения атипичных форм иерсиниоза с поражением поджелудочной железы / С.Ю. Полушин, Г.И. Синенченко, В.Е. Наза-

ров // Вестник российской военно-медицинской академии.-2009.- Т.1.-№25.-С.959.

63. Потянова, И.В. Патогенетическое обоснование схем коррекции токсического повреждения легких: автореф. дис.... канд. мед. наук: 14.03.03 /Потянова Ирина Владимировна. - М., 2011- 23 с.

64. Праймирующее влияние галогенированных фосфолипидов на функциональные ответы нейтрофилов человека / И.В. Горудко, Т.В. Вахрушева, A.B. Мухортова и др. //Биол. мембраны. - 2010.- Т.27.- №4. - С. 314-324.

65. Приказ №320 от 13.04.2011 Департамента Здравоохранения г. Москвы «О единой тактике диагностике и лечения острых хирургических заболеваний органов брюшной полости в лечебных учреждениях Департамента Здравоохранения г. Москвы» [Электронный ресурс] //Семерка - Российский правовой портал. [Интернет-портал]. URL: http://law7.ru/moscow/legal7m/r988.htm (дата обращения 16.03.2014).

66. Прогностические критерии тяжести острого деструктивного панкреатита / Г.И. Синенченко, Л.П. Пивоварова, A.B. Шиляев, И.В. Двойное //Вестник Российской Военно-медицинской Академии.- 2007. -Т.1.- №17.-С. 100-105.

67. Проценко, С.И. Патоморфогенез органов панкреатодуоденальной зоны при экспериментальном панкреонекрозе, индуцированном введением трипсина/ С.И. Проценко, В.Г. Вискунов, A.A. Асатрян //Вестник эксперим. и клин, хирургии,-2011.-Т.4.-№2.-С.334-339.

68. Редькин, А.П. Фагоцитарные реакции в иммунном статусе при гнойных инфекциях: автореф. дис.... канд. мед. наук: 14.00.36 / Редькин Андрей Павлович.-М., 1989.-24с.

69. Роль органо-тканевых барьеров в формировании системной воспалительной реакции и нейтрализации токсинов при панкреонекрозе, выбор рациональной тактики комплексного хирургического лечения/ В.Г. Лубянский, В.Ф.Черненко, А.Р. Алиев и др. //Вестник экспериментальной и клинической хирургии.-2011.-Т.4.-№1.-С.51-55.

70. Роль прокальцитонина в дифференциальной диагностике стерильного и инфицированного панкреонекроза и оценке степени тяжести состояния больных со стерильным панкреонекрозом / В.П. Саганов, В.Е. Хитрихеев, Г.Д. Гунзынов, B.C. Очиров //Вестник Бурятского государственного университе-та.-2010.-№12.- С. 240-246.

71. Роль цитокинов в развитии острого панкреатита / М.А. Агапов, В.А. Горский, М.В. Хорева, Э.Р. Ованесян // Анналы хирургической гепатологии.-2009.-Т.14.-№3.-С.85-91.

72. Рулева, Н.Ю. Миелопероксидаза: биологические функции и клиническое значение / Н.Ю. Рулева, М.А. Звягинцева, С.Ф. Дугин //Современные наукоемкие технологии.-2007.-№8.-С. 1 -4.

73. Савельев, B.C. 50 лекций по хирургии /под ред. Савельева B.C.- М.: Медиа Медика, 2003,- 408с.

74. Савельев, B.C. Острый панкреатит / B.C. Савельев, В.М. Буянов, Ю.В. Огнев - М.: Медицина, 1983. -240с.

75. Сапрыкин, В.П. Морфологическая характеристика нейтрофильных лейкоцитов крови больных гнойно-септическими заболеваниями: авто-реф.дис....канд. мед. наук: 14.00.15 /Сапрыкин Владимир Павлович. - М., 1995.-21с.

76. Сепиашвили, Р.И. Открытие фагоцитоза и обоснование фагоцитарной теории в историко - научном освещении / Р.И. Сепиашвили, М.Г. Шубич, И.В. Дорофеева //Аллергология и иммунология. - 2003. - Т. 4. - №2. - С. 10-15.

77. Спонтанная и индуцированная реструктуризация хроматина ядер нейтрофильных гранулоцитов при остром деструктивном панкреатите в стадии гнойных осложнений / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова, A.A. Евглевский и др. //Цитокины и воспаление. - 2010. -Т.9. - №2. - С.13-17.

78. Способ коррекции синдрома системной воспалительной реакции при остром панкреатите / М.А. Агапов, В.А.Горский, М.В. Хорева и др. // Цитокины и воспаление.-2012. - №3.-С.39-44.

79. Способ получения бактериальных аллергенов: пат. 2183970 Рос. Федерация: МПК 7 А61К39/35, А61К39/02 /Федосеева В.Н., Камышева В.А.; заявитель и патентообладатель ООО «Медалл» - № 2001102725; заявл. 31.01.2001; опубл. 27.06.2002, [Электронный ресурс] //Поиск патентов и изобретений, зарегистрированных в РФ и СССР. [Офиц.сайт]. URL: http://www.findpatent.ru/patent/218/2183970.html (дата обращения 14.02.2014).

80. Теселкин, Ю.А. Антиоксидантная активность плазмы крови как критерий оценки состояния антиоксидантной системы организма и эффективности применения экзогенных антиоксидантов: дис....д-ра биол. наук: 03.00.04 /Теселкин Юрий Олегович.- М.-2003.-272с.

81. Толстой, А. Д. Острый панкреатит. Трудности, возможности, перспективы: клинические лекции /А.Д. Толстой - СПб.: Предприятие СПб Союза художников., 1997,- 140с.

82. Тутелян, A.B. Прайминг фагоцитов и его применение в системе оценки специфической активности иммунорегуляторных соединений / A.B. Тутелян, Г.И. Клебанов // Иммунология. - 2004.- Т.25. - №1.- С.14-16.

83. Фенотипические и функциональные характеристики нейтрофильных грану-лоцитов в норме и их сезонные изменения / И.В. Нестерова, И.Н. Швыдчен-ко, Е.В. Фомичева и др. //Аллергология и иммунология.-2007.-Т.8.-№1.-С.З.

84. Фирсова, В.Г. Острый панкреатит: современные аспекты патогенеза и классификации / В.Г. Фирсова, В.В.Паршиков, В.П. Градусов //СТМ J. - 2011.-Т.2.- С.127-134.

85. Хабибулин, P.P. Теоретические и практические аспекты процесса люминол-зависимой хемилюминесценции в живых организмах / P.P. Хабибулин, A.B. Федосов // Башкирский химический журнал. -2006. - Т.13.-№2.- С. 106-107.

86. Чеснокова, Н.П. Молекулярно-клеточные механизмы индукции свободно-радикального окисления в условиях патологии / Н.П. Чеснокова, Е.В. Пону-

калина, М.Н. Бизенкова //Современные проблемы науки и образования.-2006.-№6.-С21 -26.

87. Швыдченко, И.Н. Нейтрофильные гранулоциты как источник цитокинов семейства интерлейкина 1 / И.Н. Швыдченко // Цитокины и воспаление.-2012.- №1.- С.17-25.

88. Шелест, П.В. Диагностика и прогнозирование клинико-морфологических форм острого деструктивного панкреатита / П.В. Шелест, В.И. Миронов //Сибирский медицинский журнал.- 2007.- №6.- С.5-9.

89. A study of intestinal permeability in relation to the inflammatory response and plasmaendocab IgM levels in patients with acute pancreatitis/ J.C. Penalva, J. Martinez, R. Laveda, et al. // J. Clin. Gastroenterol.-2004.-V. 38. -P.512-517.

90. A unifying concept: pancreatic ductal anatomy both predicts and determines the major complications resulting from pancreatitis / W.H. Nealon, M. Bhutani, T.S. Riall, et al. //J Am Coll Surg.-2009.- V.208.- №5.- P.790-801.

91. Activation of human neutrophils by mycobacterial pheic glicolipids/ J. Faldt, C. Dahlgren, A. Karlsson, et al. // J.Clin. Fnd Exp. Immunol.-1999.-V. 118.-№2.-P.253-260.

92. Al Mofleh, I.A. Severe acute pancreatitis: pathogenetic aspects and prognostic factors / I.A. Al Mofleh // Word J Gasrtoenterology.-2008.-V.14.-№5.- P.675-684.

93. Allen, R.C. Phagocytic leukocyte oxigenation activities and chemiluminescence: a kinetic approach to analysis /R.C. Allen //Methods Enzymol. - 1986.- V.133.-P.449-493.

94. An increase in the susceptibility of burned patientsto infectious complications due to impaired production of macrophage inflammatory proteinl alpha / M. Koba-yashi, H. Takahashi, A.P. Sanford, et al. // J Immunol.- 2002.-V. 169.-P. 44604466.

95. Andreeva, S.D. Acid phoshatase of leukocytes-cutochemical test in the study of acute destructive pancreatitis / S.D. Andreeva, D.G. Muhamatshina, M.A. Mamarova // European J of natural history.-2012.-№l.-P.9-10.

96. Antibiotic prophylaxis in severe acute pancreatitis / H.G. Beger, B.M. Rau, R. Isenmann, et al. // Pancreatology.- 2005.-V.5.-P.10-19

97. Anti-ICAM-1 antibody modulates late onset of acinar cell apoptosis and early necrosis in taurocholate-induced experimental acute pancreatitis/ B.M. Rau, A. Paszkowski, S. Esber, et al. //Pancreas.- 2001.-V. 23.-P. 80-88.

98. Bacterial contamination of pancreatic necrosis. A prospective clinical study. / H.G. Beger, R. Bittner, S. Block, M.W. Büchler //Gastroenterology. - 1986. -V.91. - №2. - P.433^438.

99. Baraukas, G. C-reactive protein in early prediction of pancreatic necrosis / G. Baraukas, S. Svagzdus, A. Maleckas // Medicina (Kaunas).-2004.-V.40.-№2.-P.135-140.

100. Beger, H.G. Natural history of necrotizing pancreatitis/ H.G. Beger, B.M Rau, R. Isenmann //Pancreatology. - 2003. - V.3. - P.93-101.

101. Beger, H.G. Severe acute pancreatitis: Clinical course and management / H.G. Beger, B.M.Rau //World J Gastroenterology. - 2007.-V.13,- №38,- P.5043-5051.

102. Beger, H.G. The role of immunocytes in acute and chronic pancreatitis: when friends turn into enemies / H.G. Beger, F. Gansauge, J. Mayer //Gastroenterology.-2000.-V. 118.-№4.- P.626-629.

103. Berg, R.D. Translocation of certain indigenous bacteria from the gastrointestinal tract to the mesenteric lymph nodes and other organs in a gnobiotic mouse model / R.D. Berg, A.M. Gallington //Infect.Immun. - 1979.-V.23.-P.403-411.

104. Bhatia, M. Inflammatory mediators as therapeutic targets in acute pancreatitis / M. Bhatia, J.P. Neoptolemos, J. Slavin // Curr. Opin. Investig. Drugs.-2001.-V.2.-P.496-501.

105. Bhatia, M. Novel therapeutic targets for acutepancreatitis and associated multiple organ dysfunction syndrome/ M. Bhatia // Curr. Drug. Targets Inflamm Allergy. -2002.-V.1. -P. 343-351.

106. Bonecchi, R. Upregulation of CCR1 and CCR3 and induction of chemotaxis to CC chemokines by IFN gamma in human neutrophils / R. Bonecchi, N. Polentarutti, W. Luini // J. Immunol.- 1999.-V. 162.-P. 474^179.

107. Boyum, A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow / A. Boyum //Scand.J.Clin.Lab.Investig.-1968.-V.21-№.97.-P.l-9.

108. Carlos, T.M. Leukocyte-endothelial adhesion molecules/ T.M. Carlos, J.M. Harlan //Blood.-1994.-V.84,- P.2068-2101.

109. Cerulein upregulates ICAM-1 in pancreatic acinar cells, which mediates neutrophil adhesion to these cells / V. Zaninovic, A.S Gukovskaya., I. Gukovsky, et al. //Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. - 2000.-V.279.-P.G666-G676.

110. Chemiluminescence detection of H202 produced by human neutrophils during the respiratory burst / M.P. Wymann, V. Tscharner, Deranleau, M. Baggilioni //Anal.Biochem.-1987.-V.165.-№2.-P.371-378.

111. Chronic alcohol consumption is a major risk factor for pancreatic necrosis in acute pancreatitis/ G.I. Papachristou, D.J. Papachristou, V.D. Morinville, et al. // Am J Gastroenterol.-2006.-V. 101 .-P.2605-2610.

112. Croton, R.S. Ionized calcium in acute pancreatitis and its relationship with total calcium and serum lipase/ R.S. Croton, R.A. Watter, N.B. Roberts //Brit.J.Surg.-1981 .-V.68.-№2.-P.241 -244.

113. Dahlgren, C. Respiratory burst in human neutrophils / C. Dahlgren, A. Karlsson //J.Immunol.met. -1999.-V.232.-P.3-14.

114. Dambrauskas, Z. Predicting development of infected necrosis in acute necrotizing pancreatitis / Z. Dambrauskas, J. Pundzius, G. Barauskas //Medicina (Kaunas).-2006.-Vol.42.-№6.- P.441-449.

115. Diagnostic relevance of procalcitonin, IL-6, and sICAM-1 in the prediction of infected necrosis in acute pancreatitis/ Y. Mandi, G. Farcas, T. Takacs, et al. //Int J Pancreatology ,-2000.-V.28.-№ 1 .-P.41 -49.

116. Differential effects of bacterial lipopolysaccharides upon neutrophil function / M.-H.Ruchaud-Sparagano, C.A. Ruivenkamp et al.// FEBS Lett.- 1998.-V.430.-№3.- P.363-369.

117. Early assessment of pancreatic infections and overall prognosis in severe acute pancreatitis by procalcitonin (PCT) / B.M. Rau, E.A. Kemppainen, A.A. Gumbs, et al. // Annals of Surgery.-2007.-V.245.- №5.-P.745-754.

118. Frequency and time course of pancreatic and extrapancreatic bacterial infection in experimental acute pancreatitis in rats/ M. Schwarz, J. Thomsen, H. Meyer, et al. //Surgery. - 2000. - V.127. - №4. - P.427-432.

119. Frossard, J-L. New serum markers for the detection of severe acute pancreatitis in humans/ J-L. Frossard, A. Hadengue, C.M. Pastor // Amer. J. Respir. Crit. Care Med.- 2001.-V.164.-P.162-170.

120. Gastric colonization, intestinal permeability and septic morbility in acute pancreatitis/ C.E. McNaught, N.P. Woodcock, C.J. Mitchell, et al. //Pancreatology. -2002.- №2. - P.463-468.

121. Granulocyte elastase in assessment of severity of acute pancreatitis/ Dr.V.Gross, J. Schölmerich, H-G. Leser, et al. //Digestive diseases and sciences.- 1990.-V35.-№1.-P.99-105.

122. Granulocyte-colony-stimulating factor primes NADPH oxidase in neutrophils throught translocation of cytochrome b558 by gelatinase- granule release / P.J. Mansfield, V. Hinkovska-Galeheva, J.A. Shayman, L.A. Boxer //J Lab. Clin.Med.-2002.-V.140.-P.9-16.

123. Grigoriu, M. Periampullar diverticulum-related to bilio-pancreatic disorders/ M. Grigoriu, R. Palade, C. Lutic // Chirurgia (Bucur) -2010.-V.105.-№l.-P.37-43.

124. Hajime, N. Priming effect of Pseudomonas aeruginosa leukocidin on chemilumenescense response of zymosan or PMA-stimulated rabbit PNL / N.

Hajime, K. Otohico, N. Masatoshi //Jap J Med Science and Biology.-1991.-V.44.-№5-P.252.

125. Inflammatory cytokines, C-reactive protein, and procalcitonin as early predictors of necrosis infection in acute pancreatitis/ F.C. Riche, B.P. Cholley, M.J. Laisne, et al. //Surgery.-2003.-V.133.-№3.-P.257-262.

126. Inflammatory mediators in acute pancreatitis / M. Bhatia, M. Brady, S. Shokuhi, et al.// J. Pathology.- 2000.- V.190.- P. 117-125.

127. Interdigestive small bowel motility and duodenal bacterial overgrowth in experimental acute pancreatitis / I.D. Van Felius, L.M. Akkermans, K. Bosscha, et al. // Neurogastroenterol Motil.- 2003-.V.15.-№3.-P.267-276.

128. Intracapillary leukocyte accumulation as a novel antihaemorrhagic mechanism in acute pancreatitis in mice/ E. Ryschich, V. Kerkadze, O. Deduchovas, et al. // Gut.-2009.-V.58.-№l 1.- P. 1508-1516.

129. Iwata, T. Chemiluminescent detection of induced reactive oxygen metabolite production of human polymorphonuclear leucocytes by anthophyllite asbestos / T. Iwata, N. Kohyama, E. Yano //Environmental research.-2002.-V.-88.-№l.-P.36-40.

130. Lunel, F. Activation oxidant metabolism in phagocytes opsonizated by Plasmodium falciparum/ F. Lunel, Descamps-Latscha., P. Druilhe // Acta trop.-1990.-V.47.-№2.- P.61-68.

131. Marsha, A. Protein A activates membrane bound multicomponents enzyme complex NADPH-oxidase in human neutrophils/ A. Marsha // Immunopharm. and Immunotox. -1999. -V.21. -№4.- P.683-694.

132. McPhail, L. Role NADPH - oxidase of human polymorphonuclear leukocytes/ L. McPhail, C.C. Clayton // J. Biol. Chem. - 1984.-V. 72. - № 1. - P. 192 -197.

133. Morel, J Doussierre. The superoxide-generating oxidase in phagocytic cells. Physiologic, molecular and pathological aspects/ J. Doussierre Morel, P.V. Vignais // Eur. J. Biochem. - 1991. - V.202. - №3. -P. 523-546.

134. Neutrophils exposed to bacterial lipopolysacharide upregulation NADPH oxidase assembly/ F.R. Deleo, J. Rence, S. McCormick, et al. //J Clin Ivest.-1998.-V.101-P.455-463.

135. On the absorption of bacterial endotoxin from the gastro-intestinal tract of the normal and shocked animal/ H.A. Ravin, D. Rowley, C. Jenkins, J. Fine // J. Exp. Med.-1960.-V.l 12.-P.783-792.

136. Pancreatic sepsis: prevention and therapy / B. Gloor, A.B. Schmidtmann, M. Worni et al. //Best Pract &Res.Clin.Gastroenterol.-2002.-V.16.-№3. -P. 379-390.

137. Potential role of reactive oxygen species in pancreatitis-associated multiple organ dysfunction / C. Shi, R. Andersson, X. Zhao, X.Wang //Pancreatology.- 2005.-V.5.-№4.- P.492-500.

138. Rinderknecht, H. Fatal pancreatitis, a consequence of excessive leukocyte stimulation?/ H. Rinderknecht//Int. J.Pancreatol. -1988.-V.3.-P.105-112.

139. Role of procalcitonin and granulocyte colony stimulating factor in the early prediction of infected necrosis in severe acute pancreatitis/ C. Muller, W. Uhl, G. Printzen, et al. // Gut. -2000.-V.46,- P.233-238.

140. Role of neutrophils in cerulein- induced pancreatitis in rats: possible involment of apoptosis / K. Fujimoto, R. Hosotani, R. Doi, M. Wada, et al. //Pancreatology. -1997.- №58. - P.421-430.

141. Role of reactive oxygen species in the pathogenesis of caerulein-induced acute pancreatitis/ A. Dabrowski, P.C. Konturek, S.J. Konturek, A. Gabryelewicz // Acute Pancreatitis. Novel Concepts in Biology and Therapy. Berlin. Blackwell. -1999. - P. 77-87.

142. Sakorafas, G.H. Etiology and pathogenesis of acute pancreatitis: current concepts/ G.H. Sakorafas, A.G. Tsiotou //J.Clin.Gastroenterology - 2000,- V.30. -P.343-356.

143. Schoenberg, M.H. Oxygen radicals in experimental acute pancreatitis / M.H. Schoenberg, M. Biichler, H.G. Beger //Hepatogastroenterology. - 1994. - V.41. -P.313-319.

144. Schoenberg, M.H. The role oxygen radicals in experimental acute pancreatitis/ Schoenberg, M. Buchler, H.G. Beger //Free Radic. Biolog. Med.-1992.-V.12.-№6.-P.515-522.

145. Severe acute pancreatitis: the life after/ R. Gurta, J.D. Wig, D.K. Bhasin, et al. //J Gastrointest Surg.-2009.-V.13. - №7.- P. 1328-1336.

146. Sochor, M. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with doxycycline reduces pancreatitis-associated lung injury/ M. Sochor, S. Richter, A. Schmidt // Diges-tion.-2009.- V. 80.-№2,- P.65-73.

147. Targeted disruption of the beta-chemokine receptor CCR1 protects against pancreatitis-associated lung injury / C. Gerard, J.L. Frossard, M. Bhatia, et al. // J. Clin. Invest.- 1997.-V.100. -P. 2022-2027.

148. The dynamic of the oxidant-antioxidant balance in the early phase of human acute biliary pancreatitis / A. Dziurkowska-Marek, T.A. Marek, A. Nowak, et al. //Pancreatology.- 2004.-V.4.-№4.- P. 215-222.

149. The fist histological demonstration of pancreatic oxidative stress in human acute pancreatitis / K. Telek, J Regoly- Merei, G.C. Kovacs, et al.// Hepatogastroenterology.-2001.-V.48.-P. 1252-1258.

150. The pancreas misled: signal to pancreatitis / D.N. Criddle, E. McLayhlin, J.A. Murphy, et al. //Pancreatology. - 2007.-V.7.-P.436-446.

151. The potencial role of procalcitonin and interleukin 8 in the prediction of infected necrosis in acute pancreatitis/ B.M. Rau, G. Steinbach, F. Gansauge, et al. //Gut.-1997.-V.41.-№6.-P.832-840.

152. The response of tuberculosis patient neutrophils to the bacilli Calmette-Guerin stimulation / K. Zabuska, A. Ponahajba, et al. // Int.J.Tuberc.and Lung diasease.-1999.-V.3.-№3.-P.183.

153. The role of intercellular adhesion molecule 1 and neutrophils in acute pancreatitis and pancreatitis-associated lung injury / J-L. Frossard, A. Saluja, L. Bhagat, et al. //Gastroenterology. -1999.-V.116.-P.694-701.

154. The role of neutrophils and platelet-activating factor in mediating experimental pancreatitis / D. Sandoval, A. Gukovskaya, P. Reavey, et al. //Gastroenterology. -1996.- V.lll -P.1081-1091.

155. The role of polymorphonuclear leukocytes and oxygen-derived free radicals in experimental acute pancreatitis: mediators of local destruction and activators of inflammation/ B. Poch, F. Gansauge, B. M. Rau, et al. //FEBS Letters. - 1999. -V.461. -P.268-272.

156. Treatment with Met-RANTES reduces lung injury in caerulein induced pancreatitis in mice / M. Bhatia, A.E. Proudfoot, T.N.C.Wells, et al. // Brit. J. Surg.- 2003.-V. 90.- P. 698-704.

157. Upregulation of costimulatory molecules induced by lipopolysaccharide and double-stranded RNA occurs by Trif-dependent and Trif-independent pathways/ K. Hoebe, E. Janssen, S.O. Kim, et al. //Nature Immunology. - 2003.- V.4.- №12.-P.1223-1229.

158. Wilson, P.G. Acute pancreatitis as a model of sepsis. / P.G. Wilson, M. Manji, J.P. Neoptolemos //J Antimicrob Chemother.- 1998.-V.41(SupplA). - P.51-63.