Производные цитокининов: синтез и биологическая активность тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат химических наук Колячкина, Светлана Викторовна

• Колячкина, Светлана Викторовна
• кандидат химических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат химических наук Колячкина, Светлана Викторовна

Содержание

Стр

Список использованных сокращений

Введение

Глава 1. Цитокинины и их свойства (Литературный обзор)

1.1. История открытия цитокининов

1.2. Структура природных цитокининов

1.3. Распространенность цитокининов

1.5. Биосинтез цитокининов

1.6. Метаболизм цитокининов

1.7. Сигнальная трансдукция

1.8. Взаимосвязь между структурой и их биологической активностью

1.8.1. Эффект заместитетлей в ТУ6 -положение аденина

1.8.2. Влияние заместителей в различном положении пуринового кольца

2. Противоопухолевая активность

3. Цитокинины как косметические средства

4. Методы синтеза производных аденозина 36 Глава 2. Обсуждение результатов

2.1. Препаративный метод получения А^-ацетил-2',3',5'-три-0-ацетиладенозина

2.2. Алкилирование Л^-ацетил-^'З'^'-три-О-ацетиладенозина

2.3. Получение Л^-замещенных аденинов

2.4. Алкилирование инозина

2.5. Реакции пропаргильных производных пуриновы нуклеозидов

2.6. Биологическая активность пуриновых оснований и их нуклеозидов 66 Глава 3. Экспериментальная часть 73 Список литературы

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

В работе использованы символы и сокращения структурных компонентов нуклеиновых кислот и их производных в соответствии с рекомендациями Комиссии по номенклатуре Международного Союза чистой и прикладной химии (IUPAC) и Международного Союза биохимиков (IUB), а также следующие обозначения: AMP - аденозин 5'-монофосфат ADP - аденозин 5'-дифосфат АТР - аденозин 5'-трифосфат DBU - 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен DEAD - диэтиловый эфир азодикарбоновой кислоты DMF - Ы,Ы-диметилформамид DMSO - диметилсульфоксид

IC50 - концентрация ингибитора, вызывающая гибель 50% клеток HeLa - - клетки раковой опухоли шейки матки человека БАП - 6-бензиламинопурин

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

THF - тетрагидрофуран

ТСХ - тонкослойная хроматография

МТТ-тест используется для оценки цитотоксичности потенциально противоопухолевых соединений в эксперименте и основан на способности дегидрогеназ живых клеток восстанавливать неокрашенные формы 3-4,5-диметилтиазол-2-ил-2,5-дифенилтераразола (МТТ-реагента) до голубого кристаллического фармазана

Нумерация схем, таблиц и рисунков в экспериментальной части соответствует нумерации в обсуждении результатов. В литературном обзоре используется отдельная нумерация.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Производные цитокининов: синтез и биологическая активность»

ВВЕДЕНИЕ

Аденозин и его производные играют важную роль во многих биохимических процессах. Аденозин и 2'-дезоксиаденозин входят в состав РНК и ДНК. Из тРНК выделено более 20 минорных адениновых нуклеозидов, таких как М -метиладенозин, N6-метиладенозин, 2'-Ометиладенозин, 2'-0-(3-В-рибофуранозиладенозин, N6-изопентениладенозин и другие. АТР и ADP играют исключительно важную роль в энергетическом обмене во всех живых организмах. ¿"-Аденозилметионин принимает участие в реакциях переноса метальных групп, а кофермент А - в реакциях переноса ацильных групп. Никотинамидадениндинуклеотид (НАД) - кофермент, присутствующий во всех живых клетках, входит в состав ферментов, катализирующих окислительно-восстановительные реакции. Важными метаболитами НАД являются поли(АОР-рибоза) и цикло(АОР-рибоза). 2'-5'-Олигоаденилаты являются медиаторами антивирусного действия интерферона.

Еще одной биологически важной группой адениновых производных являются цитокинины. Классифицируют два типа цитокининов: ароматические - 6-бензиламинопурин, тополины, кинетин, и алифатические - N6 -изопентениладенин, цис- и транс-зеатины [1]. Цитокинины обладают многообразным физиологическим действием на растения [2]. Биосинтез цитокининов включает введение изопренильного остатка в 6-ое положение AMP, ADP и АТР с помощью аденозинфосфат-изопентенилтрансферазы, последующее дефосфорилирование осуществляется фосфатазой, и гидролиз N-гликозидной связи - пуриннуклеозидфосфорилазой[3]. Поэтому соответствующие N6-замещенные рибонуклеозиды также проявляют цитокининовую активность[1,4,5].

Первые работы по синтезу и цитотоксичной активности N6 -замещенных аденозинов появились 50 лет назад [6]. В 70-е годы проводились клинические испытания N6-изопентениладенозина и А^-бензиладенозина на пациентах с различными формами рака. Положительные результаты были получены при лечении некоторых форм лейкемии, лимфолейкоза, саркомы и карциномы [7]. Вышесказанное свидетельствует об актуальности и важности получения цитокининовых нуклеозидов и изучения их биологической активности.

В последние годы возобновился интерес к этой группе соединений [8, 9]. Было обнаружено, что N6 -изопентениладенозин обладает выраженной цитотоксичностью к клеткам рака мочевого пузыря [10]. Были предприняты попытки оптимизации структуры соединения, однако модификация в углеводной части и гетероциклическом N6 -алкильном заместителе не привела к созданию более активных соединений.

Известно несколько методов получения А/6 -замещенных аденозинов. Первый и самый распространенный заключается в реакции 6-хлорпуринрибозида с аминами [9]. К недостаткам этого способа можно отнести использование избытков аминов, которые в большинстве случаев малодоступны, а также сложность выделения и очистки незащищенных нуклеозидов. Второй путь - алкилирование аденозина галоидными алкилами в N1 -положение с последующей перегруппировкой Димрота в щелочной среде [11]. Однако только метилирование протекает количественно. При использовании же высших галоидных алкилов требуется повышенная температура, что сопровождается расщеплением гликозидной связи.

Было показано, что ТУ6 -ацетил-2',3',5'-три-0-(трет-бутилдиметисилил)аденозин акликилируется по 6-му положению в условиях межфазного катализа [12]. А/6 -Ацетильная группа увеличивает 1Ч-Н кислотность и обеспечивает региоселективное алкилирование. Было целесообразно использовать в качестве исходного соединения в реакции алкилирования -ацетил-2',3',5'-три-(9-ацетиладенозин. Применение защитных и активирующих групп одного типа существенно упрощает синтез исходных соединений, деблокирование промежуточных и выделение конечных продуктов.

Целью работы являлся синтез и изучение биологических свойств известных и новых А^-замещенных аденозинов. В ходе работы решались следующие задачи:

- разработка удобного региоселективного метода алкилирования

А/6

ацетиладенозина;

- препаративный синтез А^-ацетил-2',3',5'-три-0-ацетиладенозина;

- синтез А^-замещенных аденинов;

- синтез пропаргилзамещенных пуриновых нуклеозидов и изучение их реакций, катализируемых одновалентной медью;

- изучение цитокининовой и цитотоксической активности полученных соединений.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Колячкина, Светлана Викторовна

выводы

1. Разработан препаративный метод синтеза N6 -ацетил-2',3',5'-три-0-ацетиладенозина. Показано, что это соединение региоселективно алкилируется по А^-положению. Предложенный новый подход позволяет синтезировать широкий ряд А^-производных аденозина, исходя из галоидных алкилов и спиртов. Предложен простой способ синтеза А^-замещенных аденинов кислотным гидролизом соответствующих защищенных нуклеозидов.

2. Показана возможность использования пропаргильных производных пуриновых нуклеозидов для их дальнейшей модификации [3+2]- циклоприсоединением с азидами и реакциями с аллилбромидами, катализируемыми одновалентной медью.

3. С использованием разработанных методов синтезировано 34 новых соединения, структура которых подтверждена данными масс-спектрометрии, УФ- и ЯМР-спектроскопии.

4. Исследована цитокининовая активность синтезированных соединений в тест-системах проростков арабидопсиса и амаранта. Показано, что цитокининовая активность ряда N6-производных аденозина близка к активности 6-бензиламинопурина.

5. Исследовано цитотоксическое действие полученных нуклеозидов на культуры опухолевых клеток in vitro. Наиболее перспективными оказались А^-(гекс-5-ен-2-инил)аденозин и УЧ6 -метилгепт-5-ен-2-инил)аденозин, активность которых превышает активность А^-изопрениладенозина и сравнима с известным препаратом гемцитабином.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Колячкина, Светлана Викторовна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Sakakibara Н. Cytokinins: activity, biosynthesis, and translocation. // Annu Rev Plant Biol. 2006, 57, P. 431-449

2. Haberer G., Kieber J. Cytokinins. New Insights into a Classic Phytohormone // Plant Physiology 2002,128, P. 354-362.

3. Kakimoto T. Biosynthesis of cytokinins. IIJ Plant Res. 2003,116, P. 233-239.

4. Романов Г.А. Как цитокинины действуют на клетку. // Физиология растений 2009, том 56, 2, Р. 295-319.

5. Matsubara S. Structure-Activity Relationships of Cytokinins. // Pytochemistry 1980, 19 (11), P. 2239-2253.

6. Kieber J., Schaller E. The Perception of Cytokinin: A Story 50 Years in the Making. // Plant Physiology. 2010,154, P. 487-492.

7. Mittelman A., Evans J., Chheda G. Cytokinins as chemotherapeutic agents. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1976, 255, P. 225-234.

8. Voller J., Zatloukal M., Lenobel R., Dolezal K., Beres Т., Krystof V., Spichal L., Niemann P., Dzvubak P., Hajduch M., Strnad M. Anticancer activity of natural cytokinins: A structure-activity relationship study. // Phytochemistry 2010, 71, P. 1350-1359.

9. Ottria R., Casati S., Baldoli E., Maier J. 6-Alkyladenosines: Synthesis and evaluation of in vitro anticancer activity. // Bioorganic & Medicinal Chemistry 2010,18, P. 8396-8402.

10. Ottria R., Casati S., Maier J.A., Mariotti M., Ciuffreda P. Novel isopentenyladenosine analogues: synthesis, characterization, and evaluation of antiproliferative activity on bladder carcinoma cells. // Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 2009, 28, P. 736-751.

11. Ottria R, Casati S., Manzocchi A., Baldoli E., Mariotti M., Maier J. Synthesis and evaluation of in vitro anticancer activity of some novel isopentenyladenosine derivative. // Bioorganic & Medicinal Chemistry 2010,18, P. 4249-4254.

12. Aritomo K., Wada Т., Sekine M. J. Alkylation of 6-iV-acylated adenosine derivatives by the use of phase transfer catalysis. // Chem. Soc. Perkin Trans. 1995,1, P. 1837-1844.

13. Miller C., Skoog F., Saltza M., Strong M. Kinetin, a cell division factor from deoxyribonucleic acid. II J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, P. 1329-1334.

14. Letham D. Zeatin, a factor inducing cell division from Zea mays. II Life Sci 1963, 8, P. 569573.

15. Elmerich C., Newton W. Microbial production of plant hormones. // Associative and Endophytic Nitrogen-fixing Bacteriaand Cyanobacterial Associations, 2007, P. 113-143.

16. Entsch B., Letham D., Parker C., Summons R., Gollnow B. Metabolites of cytokinins. // Plant Growth Substances 1980, P. 109-118.

17. Koenig R., Morris R., Polacco J. tRNA Is the Source of Low-Level iram-Zeatin Production in Methylobacterium spp. // JBacteriol. 2002,184, P. 1832-1842.

18. Sugawara H., Ueda N., Kojima M., Makita N., Yamaya T., Sakakibara H. Structural insight into the reaction mechanism and evolution of cytokinin biosynthesis. // Proc Natl Acad Sci USA 2008,105, P.2734-2739.

19. Barciszewski J., Massino F., Clark B. Kinetin - a multiactive molecule. // International Journal of Biological Macromolecules 2007, 40, P. 182-192.

20. Barciszewski J., Siboska G., Pedersen B., Clark B., Rattan S. A mechanism for the in vivo formation of A^-furfuryladenine, kinetin, as a secondary oxidative damage product of DNA. // FEBS Letters 1997, 414, P. 457-460

21. Letham D. Cytokinins as phytohormones-sites of biosynthesis, translocation, and function of translocated cytokinin. // Cytokinins: chemistry, activity and function CRC Press, Boca Raton, Florida, 1994, P.57-80.

22. Chen C., Kristopeit S. Metabolism of cytokinin: Dephosphorylation of cytokinin ribonucleotide by 5'-nucleotidases from wheat germ cytosol. // Plant Physiol. 1981, 67, P. 494498.

23. Galuszka P., Frebort I., Sebela M., Sauer P., Jacobsen S., Pec P. Cytokinin oxidase or Dehydrogenase, Mechanism of cytokinin degradation in cereals.// Eur J Biochem 2001, 268, P. 450-461.

24. Chen C-M., Petschow B. Metabolism of cytokinin: Ribosylation of cytokinin bases by adenosine phosphorylase from wheat germ. // Plant Physiol 1978, 62, P. 871-874.

25. Schwartzenberg K., Kruse S., Reski R., Moffatt B., Laloue M. Cloning and characterization of an adenosine kinase from Physcomitrella involved in cytokinin metabolism. // Plant J 1998, 13, P. 249-257.

26. Entsch B., Parker C., Letham D., Summons R. Preparation and characterization, using highperformance liquid chromatography of an enzyme forming glucosides of cytokinins. // Biochim BiophysActa 1979, 570, P.124-139.

27. Entsch B., Letham D. Enzymic glycosylation of the cytokinin, 6-benzylaminopurine. // Plant Sci. Lett. 1979,14, P. 205-212.

28. Brownlee B., Hall R., Whitty C. 3-Methyl-2-butenal: an enzymatic degradation product of the cytokinin A/6-(2-isopentenyl)adenine. // Can. J. Biochem. 1975, 53, P. 37-41.

29. Muller B., Sheen J. Advances in Cytokinin Signaling. // Science 2007, 318, P. 68-69.

30. Miiller В., Sheen J. Arabidopsis Cytokinin Signaling Pathway. // Science Signaling 2007, 407, cm5.

31. Ferreira F. J., Kieber J. J. Cytokinin signaling. // Current opinion in plant biology 2005, 5, P. 518-525.

32. Heyl A., Schmtilling T. Cytokinin signal perception and transduction. // Curr. Opin. Plant Biol. 2003, 6, P. 480-488.

33. West A.H., Stock A.M. Histidine kinases and response regulator proteins in two-component signaling systems. // Trends Biochem. Sci. 2001, 26, P. 369-376.

34. Hutchison C., Kieber J. Cytokinin signaling in Arabidopsis. // Plant Cell 2002,14, P.47-59.

35. Rijavec Т., Dermastia M. Cytokinins and their Function in Developing Seeds. // Acta Chim. Slov. 2010, 57, P. 617-629.

36. Riefler M., Novak O., Strnad M., Schmulling T. Arabidopsis cytokinin receptor mutants reveal functions in shoot growth, leaf senescence, seed size, germination, root development and cytokinin metabolism. // The Plant Cell, 2006,18, P. 40-54.

37. Heyl A., Schmulling T. Cytokinin signal perception and transduction. // Current Opinion in Plant Biology 2003, 6, P.480-488.

38. Ломин C.H., Кривошеев Д.М., Стеклов М.Ю., Осолодкин Д.И., Романов Г.А. Свойства рецепторов и особенности сигналинга цитокининов. // Acta Naturae 2012,14, P.34-47.

39. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. // Physiol. Plant. 1962,15, P. 473-497.

40. Bottomley W., Kefford N., Zwar J., Goldacre P. Kinin activity from plant extracts. Biological assay and sources of activity. // Aust. J. Biol. Sci. 1963,16, P. 395 - 406.

41. Linsmaier E. M., Skoog F. Organic growth factor requirements of tobacco tissue cultures. // Physiol. Plant. 1965,18, P. 100-127.

42. Miller С. O. Kinetin and kinetin-like compounds. // Modern Methods of Plant Analysis 1963, 6, P. 194-202.

43. Letham D. S. Regulators of cell division in plant tissues. A comparison of the activities of zeatin and other cytokinins in five bioassays. // Planta 1967, 74, P. 228-236.

44. Strong F. M. Kinetin and kinins. // Topics in Microbial Chemistry 1958, P. 98-157.

45. Skoog F., Hamzi H. Q., Szweykowska A. M., Leonard N. J., Carraway K. L., Fujii Т., Helgeson J. P., Loeppky R.N. Cytokinins: structure/activity relationships. // Phytochemistry 1967,6, P. 1169-1174.

46. Skoog F., Armstrong D. J. Cytokinins. // Annu. Rev. Plant Physiol. 1970, 21, P. 359-384.

47. Skinner C.G., Claybrook J.R., Talbert F., Shive W. Effect of 6-(substituted)thio- and amino-purines on germination of lettuce seed. // Plant Physiol. 1957, 32, P.117-120.

48. Shaw G., Smallwood B.M., Steward F.C. The structure and physiological activity of some A^-substituted adenines. // Phytochemistry 1971,10, P. 2329-2336.

49. Lethara D.S. Chemistry and physiology of kinetin-like compounds. // Amu. Rev. Plant Physiol. 1967,18, P. 349-354.

50. Matsubara S., Koshimizu K., Nakahira R. Cytokinin activities of dihydrozeatin in several bioassays. II Sei. Rep. Kyoto Prefect. Univ. Agric. 1968,19, P. 19-24.

51. Hecht S.M., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Cytokinins: influence of side-chain planarity of /^-substituted adenines and adenosines on their activity in promoting cell growth. // Phytochemistry 1970, 9, P. 1907-1913.

52. Leonard N.J., Hecht S.M., Skoog F., Schmitz R.Y. Cytokinins: synthesis of 6-(3-methyl-3-butenylamino)-9-ß-D-ribofuranosylpurine (3iPA), and the effect of side-chain unsaturation on the biological activity of isopentenylaminopurines and their ribosides. // Proc.Nati. Acad. Sei. U.S.A. 1968,59, P. 15-21.

53. Schmitz R.Y., Skoog F., Playtis A.J., Leonard N.J. Cytokinins: synthesis and biological activity of geometric and position isomers of zeatin. // Plant Physiol. 1972, 50, P.702-705.

54. Leonard N.J., Hech S.M., Skoog F., Schmitz R.Y. Cytokinins: synthesis, mass spectra and biological activity of compounds related to zeatin. // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 1969, 63, P. 175-182.

55. Letham D.S. Cytokinin activities of compounds related to zeatin. // Photochemistry 1972, 11, P. 1023-1025.

56. Schmitz R.Y., Skoog F., Hecht S.M., Leonard N.J. Cytokinins: synthesis and biological activity of zeatin esters and related compounds. // Phytochemistry 1971,10, P. 275-280.

57. Staden J., Drewes S.E. Properties and activity of 7V-(purin-6-yl)glycine in the soya bean callus bioassay. II Ann. Bot. 1983, 51, P. 149-151.

58. Vreman H.J., Schmitz R.Y., Skoog F., Playtis A.J., Frihart C.R., Leonard N.J. Synthesis of 2-methylthio-cis- and /ramribosylzeatin and their isolation from Pisum tRNA. // Phytochemistry 1974,13, P. 31-37.

59. McDonald J.J., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Cytokinins: synthesis and biological activity of ureidopurines. // Phytochemistry 1971,10, P. 1429-1439.

60. Matsubara S., Shiojiri S., Fujii T., Ogawa N., Imamura K., Yamagishi K., Koshimizu K. Synthesis and ctyokinin activity of (R)-( + )- and (S)-(-)-dihydrozeatins and their ribosides. // Phytochemistry 1977, 16, P. 933-937.

61. Koshimizu K., Kobayashi A., Fujita T., Mitsui T. Structure-activity relationships in optically active cytokinins. // Phytochemistry 1968, 7, P. 1989-1994.

62. Matsubara S., Koshimizu K., Fujii T. Growth-promoting activity of optically active cytokinins in tobacco tissue culture. // Plant Growth Substances 1973, P. 462-468.

63. Dyson W.H., Chen C.M., Alam S.N., Hall R.H., Hong C.I., Chheda G.B. Cytokinin activity of ureidopurine derivatives related to a modified nucleoside found in transfer RNA. // Science 1970,170, P. 328-330.

64. Dyson W.H., Hall R.H., Hong C.I., Dutta S.P., Chheda G.B. Cytokinin activity of a group of ureidopurine derivatives related to the tRNA component, ¿V-(purin-6-ylcarbamoyl)threonine. // Can. J.Biochem. 1972, 50, P. 237-243.

65. Armstrong D.J., Burrows W.J., Skoog F., Roy K.L., Soil D. Cytokinins: distribution in transfer RNA species of Escherichia coli. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1969, 63, P. 834-841.

66. McDonald J.J., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Cytokinins: synthesis and biological activity of ureidopurines. // Phytochemistry 1971,10, P. 1429-1439.

67. Hong C.I., Chheda G.B., Dutta S.P., O'Grady-Curtis A., Tritsch G.L. Synthesis and biological activity of analogs of naturally occurring 6-ureidopurines and their nucleosides. // J. Med. Chem. 1973,16, P.139-147.

68. Henderson T.R., Frihart C.R., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Cytokinins with different connecting links between purine and isopentenyl or benzyl groups. // Phytochemistry 1975,14, P. 1687-1690.

69. Hashizume T., Sakai S., Sugiyama T., Matsubara S. Cytokinin activity of (/-substituted guanine and hypoxanthine derivatives. // Phytochemistry 1976, 15, P. 1813-1815.

70. Hamzi H.Q. , Skoog F. Kinetin-like growth-promoting activity of 1-substituted adenines [1-benzyl-6-aminopurine and l-(y,y-dimethylallyl)-6-aminopurine]. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1964, 51, P. 76-83.

71. Burrows W.J., Armstrong D.J., Skoog F., Hecht S.M., Boyle J.T.A., Leonard N.J., Occolowitz J. The isolation and identification of two cytokinins from Escherichia coli transfer ribonucleic acids. // Biochemistry 1969, 8, P. 3071-3076.

72. Hecht S.M., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Cytokinins: synthesis and growth-promoting activity of 2-substituted compounds in the A^-isopentenyladenine and zeatin series. // Phytochemistry 1970, 9, P. 1173-1180.

73. Dammann L.G., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Cytokinins: synthesis of 2-, 8-, and 2,8-substituted 6-(3-methyl-2-butenylamino)purines and their relative activities in promoting cell growth. //Phytochemistry 1974,13, P.329-336.

74. Theiler J.B., Leonard N.J., Schmitz R.Y., Skoog F. Photoaffinity-labeled cytokinins: synthesis and biological activity. // Plant Physiol. 1976, 58, P. 803-805.

75. Schmitz R.Y., Skoog F., Hecht S.M., Bock R.M., Leonard N.J. Comparison of cytokinin activities of naturally occurring ribonucleosides and corresponding bases. // Phytochemistry 1972,11, P. 1603-1610.

76. Garin J., Vinqon M., Gagnon J., Vignaisl P. Photolabeling of Mitochondrial FI -H + ATP by 2-Azido[3H]ADP and 8-Azido[3H]ADP Entrapped as Fluorometal Complexes into the Catalytic Sites of the Enzyme. // Biochemistry 1994, 33, P. 3772-3777.

77. Leonard N.J., Deyrup J.P. The chemistry of triacanthine. // J. Am. Chem. Soc. 1962, 84, P. 2148-2160.

78. Leonard N.J., Henderson T.R. Purine ring rearrangements leading to the development of cytokinin activity. Mechanism of the rearrangement of 3-benzyladenine to A^-benzyladenine. // J. Am. Chem.Soc. 1975, 97, P. 4990-4999.

79. Abe H., Uchiyama M. Relative cytokinin activity of 3-methyl substituted adenylate cytokinins. // Agric. Biol. Chem. 1978, 42, P.487-493.

80. Shaw G., Smallwood B.M., Steward F.C. Synthesis and cytokinin activity of the 3-, 7- and 9-methyl derivatives of zeatin. // Experientia 1968, 24, P. 1089-1090.

81. Schmitz R.Y., Skoog F., Vincze A., Walker G.C., Kirkegaard L.H., Leonard N.J. Comparison of cytokinin activities of the base, ribonucleoside and 5'- and cyclic-3',5'-monophosphate ribonucleotides of A^-isopentenyl-, A^-benzyl- or 8-bromo-adenine. // Phytochemistry 1975, 14, P. 1479-1484.

82. McLennan B.D., Peter A. Evidence for the oxidation of iV6-(A2-isopentenyl)adenine and N6-(3-hydroxy-3-methylbutyl)adenine by xanthine oxidase. // Can. J. Biochem. 1973, 51, P. 11231126.

83. Chen C.M., Smith O.C., McChesney J.D. Biosynthesis and cytokinin activity of 8-hydroxy and 2,8-dihydroxy derivatives of zeatin and A^-(A2-sopentenyl)adenine. // Biochemistry 1975, 14, P. 3088-3093.

84. Gasque C.E. Comparison of cytokinin activities of 9-substituted A^-benzyladenines in the Cucumis and Amaranthus bioassays. // Phytochemistry 1982, 21, P.1501-1507.

85. Fox J.E., McChesney J.D. Cytokinin-7-glucosides: some properties of synthetic analogs of a naturally occurring cytokinin metabolite. // Plant Growth Substances 1973, P.468-472.

86. Young H., Letham D.S. 6-[Substituted amino]purines: synthesis by a new method and cytokinin activity. // Phytochemistry 1969, 8, P. 1199-1203.

87. Fox J.E., Sood C.K., McChesney J.D. Effect of substituents at the 9-position on cytokinin activity. // Phytochemistry 1973,12, P. 1531-1533.

88. Hashizume T., Iizuka M., Matsubara S., Yoshida K., Kobayashi T. Synthesis and biological activity of some new 6-benzyIamino- 9-alkylpurines. // Plant Growth Substances 1973, P. 462466.

89. Dutta S.P., Mittelman A., Chen C.M., Chheda G.B. Synthesis and biological activities of some analogs of iV6-(A2-isopentenyl) adenosine. // J. Carbohyd. Nucleosides Nucleotides 1978, 5, P.47-51.

90. Kende H., Tavares J.E. On the significance of cytokinin incorporation into RNA. // Plant Physiol. 1968, 43, P. 1244-1248.

91. Elliott D.C., Murray A.W., Saccone G.T., Atkinson M.R. Use of structural analogues in the study of cytokinin action. // Plant Growth Substances 1970, P. 459-464.

92. Schmitz R.Y., Skoog F., Playtis A.J., Leonard N.J. Cytokinins: synthesis and biological activity of geometric and position isomers of zeatin. // Plant Physiol. 1972, 50, P.702-705.

93. Whitaker B.D., Kende H. Bud formation in Funaria hygrometrica: a comparison of the activities of three cytokinins with their ribosides. // Planta 1974,121, P.93-101.

94. Spiess L.D. Comparative activity of isomers of zeatin and ribosylzeatinon Funaria hygrometrica. //Plant Physiol. 1975, 55, P.583-585.

95. Hecht S.M., Frye R.B., Werner D., Hawrelak S.D., Skoog F., Schmitz R.Y. On the 'activation' of cytokinins. II J. Biol. Chem. 1975, 250, P.7343-7351.

96. Ishii Y., Hori Y., Sakai S., Honma Y. Control of differentiation and apoptosis of human myeloid leukemia cells by cytokinins and cytokinin nucleosides, plant redifferentiation-inducing hormones. // Cell Growth Differ 2002,13, P. 19-26.

97. Colombo F., Falvella F., De C., Tortoreto M., Pratesi G., Ciuffreda P., Ottria R., Santaniello E., Cicatiello L., Weisz A., Dragani T. Pharmacogenomics and analogues of the antitumour agent N6-isopentenyladenosine. II Int. J. Cancer 2009,124, P. 2179-2185.

98. Mlejnek P., Kuglik P. Induction of apoptosis in HL-60 cells by A^-benzyladenosine. // J. Cell Biochem. 2000, 77, P. 6-17.

99. Tiedemann R.E., Mao X., Shi C.X., Zhu Y.X., Palmer S.E., Sebag M., Marler R., Chesi M., Fonseca R., Bergsagel P.L., Schimmer A.D., Stewart A.K. Identification of kinetin riboside as a repressor of CCND1 and CCND2 with preclinical antimyeloma activity. // J. Clin. Invest. 2008, 118, P. 1750-1764.

100. Cabello C.M., Bair W., Ley S., Lamore S., Azimian S., Wondrak G. The experimental chemotherapeutic A^-furfuryladenosine (kinetin-riboside) induces rapid ATP depletion,

genotoxic stress, and CDKN1A (p21) upregulation in human cancer cell lines. // Biochem. Pharmacol. 2009, 77, P. 1125-1138.

101. Cheong J., Goh D., Yong J.W., Tan S.N., Ong E.S. Inhibitory effect of kinetin riboside in human hepatoma, HepG2. // Mol. Biosyst. 2009, 5, P. 91-98.

102. Laezza C., Caruso M.G., Gentile T., Notarnicola M., Malfitano A., Di M., Messa C., Gazzerro P., Bifulco M. A^-isopentenyladenosine inhibits cell proliferation and induces apoptosis in a human colon cancer cell line DLD1. // J. Cancer. 2009,124, P. 1322-1329.

103. Laezza C., Notarnicola M., Caruso M., Messa C., Macchia M., Bertini S., Minutolo F., Portella G., Fiorentino L., Stingo S., Bifulco M. A^-isopentenyladenosine arrests tumor cell proliferation by inhibiting farnesyl diphosphate synthase and protein prenylation. // FASEB J. 2006, 20, P. 412-418.

104. Dolezval Igor Popa, Vladimir Krys"tof, Luka'sv Spi'chal, Martina Fojti'kova',Jan Holub, Rene' Lenobel, Thomas Schmu'lling, Miroslav Strnad Preparation and biological activity of 6-benzylaminopurine derivatives in plants and human cancer cells. // Bioorganic & Medicinal Chemistry 2006,14, P. 875-884.

105. Griffaut B., Bos R., Maurizis J.C., Madelmont J.C., Ledoigt G. Cytotoxic effects of kinetin riboside on mouse, human and plant tumour cells. II J. Biol. Macromol. 2004, 34, P. 271-275.

106. Mlejnek P., Prochazka S. Activation of caspase-like proteases and induction of apoptosis by isopentenyladenosine in tobacco BY-2 cells. // Planta 2002, 215, P. 158-166.

107. Mlejnek P., Dolezel P., Prochazka S. Intracellular phosphorylation of benzyladenosine is related to apoptosis induction in tobacco BY-2 cells. // Plant Cell Environ. 2003, 26, P. 17231735.

108. Mlejnek P., Dolezel P. Apoptosis induced by //-substituted derivatives of adenosine is related to intracellular accumulation of corresponding mononucleotides in HL-60 cells. // Toxicology In Vitro. 2005,19, P. 985-990.

109. Carimi F., Zottini M., Formentin E., Terzi M., Lo S.F. Cytokinins: new apoptotic inducers in plants. II Planta 2003, 216, P. 413-421.

110. Mlejnek P., Dolezel P., Prochazka S. Intracellular conversion of cytokinin bases into corresponding mononucleotides is related to cell death induction in tobacco BY-2 cells. // Plant Sci. 2005,168, P. 389-395.

111. Fleysher M.H., Hakala M.T., Bloch A., Hall R.H. Synthesis and biological activity of some N-alkyladenosines. II J. Med.Chem. 1968,11, P. 717-720.

312. Grindey G.B., Divekar A.Y., Hakala M.T. Antitumor activity of i^-phenyladenosine, an inhibitor of adenosine utilization, in combination with related purine analogs. // Cancer Res. 1973, 33, P. 2459-2463.

113 Kikugawa K., Iizuka K., Ichino M. Plateletaggregation inhibitors. A'6-Substituted adenosines . /IJ.Med.Chem., 1973,16, P. 358.

114. Hampton A., Biesele J.J., Moore A.E., Brown G.B. 6-Furfurylamino-9-(3-D-ribofuranosylpurine: synthesis and differential toxicity to mammalian cells in vitro. // J. Am. Chem. Soc 1956, 78, P. 5695-5699.

115. Fleysher M.H., Bloch A., Hakala M.T., Nichol C.A. Synthesis and biological activity of some new A^-substituted purinenucleosides. // J. Med. Chem. 1969,12, P. 1056-1061.

116. Vesely J., Havlicek L., Strnad M., Blow J.J., Donella-Deana A., Pinna L., Letham D.S., Kato J., Detivaud L., Leclerc S. Inhibition of cyclin-dependent kinases by purine analogues. // Eur. J. Biochem., 1994, 224, P. 771-786.

117. Mlejnek P., Dolezel P. Induction of apoptosis by A3 adenosine receptor agonist N(6)-(3-iodobenzyl)-adenosine-5'-N-methylcarboxamide in human leukaemia cells: a possible involvement of intracellular mechanism. // Acta Physiol (Oxf) 2010, 199, P. 171-179.

118. Voller J. Anticancer activity of cytokinins: structure-activity relationship studies. // Faculty of science, 2010, P. 1-67.

119. Rattan S.I., Clark B.F. Kinetin delays theonset of ageing characteristics in human fibroblasts. II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 201, P.665-672.

120. Vicanova J., Bouez C., Lacroix S., Lindmark L., Damour O., Epidermal and dermal characteristics in skin equivalent after systemic and topical application of skin care ingredients. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006,1067, P. 337-342.

121. Sziicova L., Zatloukal M., Spichal L., Frolich L., Dolezal K., Strnad M., Massino F.J. 6,9-disubstituted purine derivatives and their use for treating skin. Patent application (W0/2008/008770).

122. McCullough J.L., Garcia R.L., Reece B., A clinical study of topical Pyratine 6 for improving the appearance of photodamaged skin. // J. Drugs Dermatol. 2008, 7, P. 131-135.

123. Ortiz A., Elkeeb L., Truitt A., Hindiyeh R., Aquino L., Tran M., Weinstein G.Topical PRK 124 (0.125%) lotion for improving the signs and symptoms of rosacea. // J. Drugs Dermatol. 2009, 8, P. 459-462.

124. Berge U., Kristensen P., Rattan S.I. Kinetin-induced differentiation of normal human keratinocytes undergoing aging in vitro. II Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006,1067, P. 332-336.

125. Kim S., Lee J., Jung E., Lee J., Huh S., Hwang H., Kim Y., Park D. 6-Benzylaminopurine stimulates melanogenesis via cAMP-independent activation of protein kinase A. // Arch. Dermatol Res. 2009, 301, P. 253-258.

126. Jones J.M., Robins R.K. Potential Purine Antagonists. XXX. Purine Betaines and Related Derivatives Prepared by Direct Methylation of the Simple Purines. // Journal of the American Chemical Society 1962, 8, P.1914-1919.

127. Leonard N. J., Fujii T. The synthesis of 7-substituted adenines through the use of a blocking group at the 3-position. Site of alkylation of 7-substituted adenines. // Journal of the American Chemical Society 1963, 85 (22), P. 3719-3719.

128. Mikhailov S. N., Blaton N., Rozenski J., Balzarini J., De Clercq E., Herdewijn P. Use of Cyclohexene Epoxides in the Preparation of Carbocyclic Nucleosides. // Nucleosides and Nucleotides 1996,15, P. 867-878.

129. Efimtseva E.V., Mikhailov S.N., Fomicheva M.V., Meshkov S.V., Rodionov M.S., Khomutov A.R., De Clercq E. Acyclic nucleotide analogues based on phosphonic acids. // Bioorganicheskaia khimiia 1998, 24, P. 16.

130. Holy A., Giinter J., Dvorakova H., Masojidkova M., Andrei G., Snoeck R., Balzarini J., De Clercq E. Structure-antiviral activity relationship in the series of pyrimidine and purine N-[2-(2-phosphonomethoxy) ethyl] nucleotide analogues. 1. Derivatives substituted at the carbon atoms of the base. II Journal of medicinal chemistry 1999, 12, P. 2064-2086.

131. Enkvist E., Raidaru G., Uri A., Patel R., Redick C., Boyer J.L., Subbi J., Tammiste I. Synthesis of Potential Purinoceptor Antagonists: Application of Pl-tBu Phosphazene Base for Alkylation of Adenine in Solution and on Solid Phase. // Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acids. 2006, 25, P. 141-157.

132. Jones J.W., Robins R.K. Purine nucleosides. Methylation studies of certain naturally occurring purine nucleosides. II Journal of the American Chemical Society 1963, 85, P. 193-201.

133. Dimroth Rearrangement Comprehensive Organic Name Reactions and Reagents, by Zerong Wang Comprehensive Organic Name Reactions and Reagents, by Zerong Wang P/905909 V 194.

134. James B. Wolfenden M. and R. 1-Methyladenosine. Dimroth Rearrangement and Reversible Reduction. // Biochemistry 1968, 7, P. 3453-3458.

135. Wan Z., Binnun E., Wilson D., Jinbo L. A Highly Facile and Efficient One-Step Synthesis of Л^-Adenosine and A^-2'-Deoxyadenosine Derivatives. // Org. Lett 2005, 7, P. 5877-80.

136. Lescrinier E., Pannecouque C., Rozenski J., Aerschot A Van, Kerremans L., Herdewijn P. Synthesis of /^-alkylated adenosine derivatives. // Nucleosides and Nucleotides 1996, 15, P. 1863-1869.

137. Fletcher S. Regioselective alkylation of the exocyclic nitrogen of adenin and adenosine by the Mitsunobu reaction. // Tetrahedron Lett. 2010, 51, P.2948-2950.

138. Adamska E., Barciszewski J., Markiewicz W.T. Convenient and efficient syntheses of 7V6-and M-substituted adenines and cytosines and their 2'-deoxyribosides. // Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 2012,31, P. 861-871.

139. Car Z., Petrovic V.; Tomic S.J. Synthesis and Enzymic Hydrolysis of Acylated Adenosine Derivatives. // Carbohyd. Chem. 2006, 25, P. 713-723.

140. Nowak I., Conda-Sheridan M.; Robins M.J. Nucleic Acid Related Compounds. 127. Selective N-Deacylation of N,0-Peracylated Nucleosides in Superheated Methanol. // J. Org. Chem. 2005, 70, P. 7455-7458.

141. Robins M., Uznanski B. Nucleic acid related compounds. Conversion of adenosine and guanosine to 2,6-dicloro, 2-amino-6-cloro, and derived purine nucleosides. // Can. J. Chem 1981, 59, P.2601-2607.

142. Swamy K., Kumar B., Balaraman N., Kumar P. A review on Mitsunobu reaction. // Chem. Rev. 2009, 109, P. 2551-2651.

143. Seebach D.; Beck A.K.; Studer A. In: Modern Synthetic Methods', Ernst B., Leumann C., Eds.; Verlag Helvetica Chim. Acta: Basel, 1995, 27.

144. Mikhailov S.N., Blaton N., Rozenski J.; Balzarini J.; De Clercq E., Herdewijn P. Use of cyclohexene epoxides in the preparation of carbocyclic nucleosides. // Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids 1996, 15, P.867-878.

145. Efimtseva E.V., Mikhailov S.N., Fomicheva M.V., Meshkov S.V., Rodionov M.S., Khomutov A.R., De Clercq E. Acyclic nucleotide analogues based on phosphonic acids. // Bioorganicheskaia khimiia 1998, 24, P. 16.

146. Enkvist E., Raidaru G., Uri A.; Patel R., Redick C., Boyer J.L., Subbi J., Tammiste I. Synthesis of Potential Purinoceptor Antagonists: Application of Pl-tBu Phosphazene Base for Alkylation of Adenine in Solution and on Solid Phase. // Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acids. 2006, 25, P. 141-157.

147. Casati S., Manzocchi A., Ottria R.; Ciuffreda P. 1H, 13C and 15N NMR assignments for A^-isopentenyladenosine/inosine analogues. // Magnetic Resonance in Chemistry, 2010, 48, P. 745-748.

148. Vicha, J., Malon, M., Vesela P., Humpa O., Strnad M., Marek R. 1H-, 13C-, and 15N-NMR chemical shifts for selected glucosides and ribosides of aromatic cytokinins. // Magnetic Resonance in Chemistry 2010, 48, P. 318-322.

149. Matsubara S. Structure-activity relationships of cytokinins. // Critical reviews in Plant sciences 1990, 9, P. 17-57.

150. Jones J., Robins R., Methylation studies of certain naturally occurring purine nucleosides.// JACS 1963, 85, P. 193-201.

151. De Napoli L., Di Fabio G., Messere A., Montesarchio D., Piccialli G., Varra M. Synthetic studies on the glycosylation of the base residues of inosine and uridine. // J.Chem. Soc., Perkin Trans. 1999,1, P.3489-3493.

152. A.Van Aershot, Herdewijn P., Janssen G., Vanderhaeghe H. Protection of the lactam function of 2'-deoxyinosine with a 2-(4-nitro-phenil)-ethyl moiety. // Nucleosides and nucleotides 1988, 7(4), P.519-536.

153. Dafeng Li, Yin K., Li J., Jia X. Cul/iodine-mediated homocoupling reaction of terminal alkynes to 1,3-diynes. // Tetrahedron Letters 2008, 49, P.5918-5919.

154. Balaraman K., Kesavan V. Efficient copper (II) acetate catalyzed homo- and heterocoupling of terminal alkynes at ambient conditions. // Synthesis 2010, 20, P.3461-3466.

155 Jeffery T. Copper (I) and phase transfer catalysed allylig suestitutiqn by terminal alkynes. // Tetrahedron Letters 1989, 30, P. 2225-2228.

156. Meldal M., Tornoe C.W. Cu-catalyzed azide-alkyne cycloaddition. // American Chemical Society, 2008,108, P. 2952-3015.

157. Philipp M.E. Gramlich, Christian T. Wirges, Manetto A., Carell T. Postsynthetic DNA Modification through the Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition Reaction Angew. // Chem. Int. Ed. 2008, 47, P. 8350 - 8358.

158. Siemsen P., Livingston R., Diederich F. Acetylenic coupling: a powerfull tool in molecular construction. II Angew. Chem. Int. Ed. 2000, 39, P.2632-2657.

159. Lindsell W.E, Murray C., Preston P.N., Woodman T Synthesis of 1,3-Diynes in the Purine, Pyrimidine, 1,3,5-Triazine and Acridine Series. // Tetrahedron 2000, 56, P. 1233-1245.

160. Caplar V., Zinic M. Bis-adeninyl and bis-uracilyl hexadiyne derivatives of nucleobases. // Tetrahedron Letters, 1995, 30, P. 4455-4458.

161. Grushin V., Alper H. Copper (I) and phase transfer catalyzed allylation of alkynes. // J. Org.Chem. 1992,57, P. 2188-2192.

162. Spichal L., Werner T., Popa I. The purine derivative PI - 55 blocks cytokinin action via receptor inhibition. // FEBS Journal. 2009, 276, P.244-253.

163. Nisler J., Zatloukal M., Popa I Cytokinin receptor antagonists derived from 6-benzylaminopurine. // Phytochemistry 2010, 71, P. 823-830.

164. Кривошеее Д. M, Колячкина С. В., Михайлов С. Н., Тараров В. И., Ванюшин Ф., Романов Г. А. А^-(Бензилоксиметил)аденозин - новый антицикинин, антагонист для рецептора CRE1/AHK4 арабидопсиса. II Доклады академии наук, 2012, 444, с. 687-690.

165. Kolyachkina S.V., Tararov V.I., Alexeev С.S., Krivosheev D.M., Romanov G.A., Stepanova E.V., Solomko E.S, Inshakov A.N., Mikhailov S.N. N6- substituted adenosines cytokinins and antitumor activités. // Collect. Czech. Chem. Commun. 2011, 76, P. 1361-1378.

166. Blad C., von Frijtag Drabbe Kiinzel J. K. Putative role of the adenosine A3 receptor in the antiproliferative action of A/6-(2-isopentenyl)adenosine. // Purinergic Signalling 2011, 7, P. 453462.

167. Ottria R., Casati S., Maier J., Mariotti M., Ciuffreda P. Novel isopentenyladenosine analogues: synthesis, characterization and evaluation of antiproliferative activity on bladder carcinoma cells. И Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 2009, 28, P. 736-751.

168. Casati S., Ottria R., E. Baldoli, E. Lopez, Maier J., Ciuffreda P. Effects of Cytokinins, Cytokinin Ribosides and their Analogs on the Viability of Normal and Neoplastic Human Cells. И Anticancer research 2011, 31, P. 3401-3406.

169. Naus P., Pohl R., Votruba I., Dzubak P., Hajduch M., Ameral R., Birkus G., Wang T., Ray A.S., Mackman R., Cihlar T., Hocek M. 6-(Het)aryl-7-Deazapurine Ribonucleosides as Novel Potent Cytostatic Agents. II J. Med. Chem. 2010, 53, P.460-470.

170. Parker W.B. Enzymology of purine and pyrimidine antimetabolites used in the treatment of cancer. // Chem. Rev. 2009, 109, P. 2880-2893.

171. De Clercq E. Highlights in antiviral drug research: antivirals at the horizon.// Med. Res. Rev. 2012, P. 1-34.

172. Гордон А., Форд P. Спутник химика. M: Мир. 1976, С. 437-444.

173. Gottlieb Н.Е., Kotlyar V., Nudelman A. NMR Chemical Shifts of Common Laboratory Solvents as Trace Impurities. И J. Org. Chem. 1977, 62, P.7512-7515.

174. Fleysher M.H., Bernaki R.G., Bullard G.A., Fogt S.W. Lipophilic and hydrophilic esters of 4-acetyl-2-(2-hydroxyethyl)-5, 6-bis (4-chlorophenyl)-2H-pyridazin-3-one as antihypertensive agents. II Journal of Medicinal Chemistry 1980, 23, P. 1445-1448.

175. Lin X., Robins M. Mild and Efficient Functionalization at C6 of Purine 2'-Deoxynucleosides and Ribonucleosides. // Organic Letters 2000, 2, P. 3497-3499.

176. Martin D.M.G., Reese C.B., Stephenson G.F. The action of diazomethane on ribonucleosides. Preparation of ribonucleoside 2'-and З'-methyl ethers. // Biochemistry 1968, 7, P. 1406-1412.

177. Hampton A., Biesele J.J., Moore A.E., Brown G.B. 6-Furfurylamino-9-p-D-ribofuranosylpurine: Synthesis and differential toxicity to mammalian cells in vitro. II Journal of the American Chemical Society 1956, 78, P. 5695-5695.

178. Zhou J., Shevlin P. A short synthesis of 1-vinyluracil and 1-vinilthymine. // Synthetic communications, 1997, 27(20), P. 3591-3597.

Автор благодарит за помощь в выполнении и оформлении работы научного руководителя д.х.н. проф. С.Н. Михайлова, сотрудников лаборатории стереохимии ферментативных реакций ИМБ РАН, в особенности с.н.с., к.х.н. В.И. Тарарова, за помощь в проведении исследований, а так же профессора Г.А. Романова в Институте физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН и д.м.н. Е.В. Степанову ФГБУ «Российский Онкологический Научный Центр имени Н.Н. Блохина» РАМН.