Разработка метода идентификации видовой принадлежности мясных и растительных ингредиентов на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.04, кандидат технических наук Фомина, Татьяна Алексеевна

• Фомина, Татьяна Алексеевна
• кандидат технических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат технических наук Фомина, Татьяна Алексеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Научная новизна работы

Практическая значимость

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Мясо и мясная продукция как объект технического регулирования в

РФ

1.2. Фальсификация мяса и мясных продуктов

1.3. Методы идентификации мясного сырья и готовой продукции

1.4. Полимеразная цепная реакция

Заключение по литературному обзору

Цель и задачи исследования

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ,

ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

2.1. Объекты исследований

2.2. Методы исследований

2.3. Организация эксперимента

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Разработка метода на основе ПЦР в реальном времени

3.1.1. Изучение генетической базы данных NCBI, подбор генов-мишеней

3.1.2. Конструирование праймеров программой Primer Express 2

3.1.3. Подбор оптимальных условий амплификации

3.1.4. Составление панели эталонных образцов

3.2. Оценка диагностической способности разработанного метода идентификации на основе ПЦР в реальном времени

3.2.1. Оценка специфичности метода

3.2.2. Определение предела обнаружения метода

3.3. Определение лимитирующих факторов применения метода ПЦР в реальном времени

3.4. Определение возможности идентификации животных белков

3.5. Анализ практических возможностей применения разработанного метода идентификации на основе ПЦР в реальном времени

3.6. Разработка нормативной документации на применение разработанного метода идентификации на основе ПЦР в реальном времени

3.7. Расчет экономической эффективности применения разработанного

метода идентификации на основе ПЦР в реальном времени

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка метода идентификации видовой принадлежности мясных и растительных ингредиентов на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени»

ВВЕДЕНИЕ

Обеспечение населения России высококачественной и безопасной продовольственной продукцией является одной из главных задач нашей страны.

Резкое возрастание количества мясоперерабатывающих предприятий в России привело к ослаблению контроля качества и безопасности мясной продукции и, как следствие, к увеличению риска реализации на потребительском рынке недоброкачественных и даже фальсифицированных товаров, не соответствующих требованиям, установленным нормативными и техническими документами, что представляет серьезную угрозу здоровью населения.

Важное место в оценке качества мясопродуктов занимает контроль за соблюдением научно обоснованных рецептур и определение сырьевого состава готовых мясопродуктов. Известно, что ГОСТы и ТУ определяют показатели, нормы и требования к качеству сырья и готовой продукции. В нормативной документации, разработанной и утвержденной на каждый вид мясной продукции, прописывается состав используемого сырья и его соотношения. Такие законы как закон «О ветеринарии» (14.05.1993), «О сертификации продукции и услуг» (10.06.1993), «О стандартизации» (10.06.1993), «О защите прав потребителя» (05.12.1995), «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (30.03.1999), «О защите прав юридических лиц и индивидуальных предпринимателей при проведении Госконтроля» (14.07.2001), «О техническом регулировании» (27.12.2002), обязывают изготовителей данной продукции выполнять заданные требования. Выпуская пищевой продукт, не соответствующий требованиям нормативных документов, и на этикетках которого нет данных о добавлении или замене тех или иных ингредиентов, производитель также нарушает закон

РФ «О качестве и безопасности пищевых продуктов» (02.01.2002), в котором указано, что такая продукция является некачественной и небезопасной.

В связи с этим для исключения из торговли недоброкачественной и фальсифицированной продукции необходимо разработать объективный метод идентификации видовой принадлежности мяса, мясных и растительных ингредиентов, в том числе входящих в состав готовых мясных продуктов, соответствующий передовому уровню в науке и технике.

На данный момент используемые методы органолептического, физико-химического и микробиологического контроля дают возможность надежно определить свежесть и безопасность конкретной партии мясного сырья и готовых мясных изделий. Гистологический анализ в ряде случаев позволяет выявить использование субпродуктов, соевых белковых и углеводных добавок. Но с помощью данных методов нельзя решить не менее важную задачу, возникающую в практике определения качества мясной продукции -установление видовой принадлежности мясных и растительных ингредиентов, особенно если количество видоизмененной мышечной ткани незначительное по отношению к основному сырью.

Наиболее перспективным для решения данной задачи является метод, основанный на ДНК-диагностике, а именно метод полимеразной цепной реакции с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени (ПЦР в реальном времени).

В мировой практике методы, основанные на ПЦР, применяют для диагностики инфекционных заболеваний, в том числе вызванных возбудителями, трудно поддающимися культивированию, также технологию ПЦР применяют для генотипирования различных микроорганизмов и вирусов, оценки их вирулентности и определения устойчивости к антибиотикам, генодиагностики и генетической дактилоскопии, пренатальной диагностики и для биологического контроля препаратов крови. И это далеко не полный перечень областей, где с успехом применяется ПЦР.

Применение метода ПЦР при анализе мясной продукции имеет ряд преимуществ, такие как быстрота и легкость использования; высокие показатели специфичности, которые обусловлены тем, что в исследуемом образце выявляется уникальный характерный только для данного вида сельскохозяйственных животных или растений фрагмент ДНК, что исключает возможность получения ложных результатов; возможность применения метода, как для качественной, так и для количественной оценки содержания того или иного ингредиента. Также метод отличается универсальностью, т.е. данным методом возможно исследовать как сырье, так и продукты, прошедшие технологическую обработку.

Вопросами применения ПЦР для идентификации сырьевого состава посвящены работы как отечественных, так и зарубежных авторов, таких как: Комаров А.Б., Анисимова О.В., Галкин A.B., Lopez-Andreo M., Binke R., Schwägele F., Müller E., и т.д. Однако проведенных исследований по возможностям применения данного метода ко всему ассортименту мясных продуктов было не много.

В связи с вышеизложенным крайне важным и актуальным становится разработка метода на основе технологии ПЦР в реальном времени для целей идентификации видового состава мясных продуктов и возможность внедрения его в лабораторную практику, как метода, отвечающего за контроль качественных показателей сырья и готовой мясной продукции.

Научная новизна работы

> определены консервативные участки последовательности генов митохондриальной ДНК следующих биологических объектов: род Настоящие быки (лат. Bos) вид Дикий бык (лат. Bos taurus) подвид Домашний бык (лат. Bos taurus taurus) и подвид Зебу (лат. Bos taurus indiens); род Кабаны (лат. Sus) вид Кабан, или Дикая свинья (Sus scrofa) подвид Домашняя свинья (лат. Sus scrofa domesticus); род Гребенчатые куры (лат. Gallus) вид Банкивский петух (лат. Gallus gallus) подвид

Домашняя курица (лат. Gallus gallus domesticus); род Индейки (лат. Meleagris) вид Индейка (лат. Meleagris galloopavo); род Соя (лат. Glycine) вид Соя культурная (лат. Glycine max) с различной разрешающей возможностью, что позволяет конструировать на их основе различные тест-наборы с идентификацией до рода, вида или подвида.

> научно обоснована и экспериментально доказана высокая эффективность применения разработанного метода на основе ПЦР в реальном времени для ускоренной идентификации биологического материала, принадлежащего КРС, свинье, сельскохозяйственной птице и сое, в составе сырья, полуфабрикатов и готовых продуктов питания.

> доказано, что разработанный метод на основе ПЦР в реальном времени позволяет идентифицировать видовое происхождение сырья в составе продуктов, подвергнутых, в ходе их выработки, различным физическим, химическим и механическим воздействиям.

Практическая значимость

> разработан и внедрен в лабораторную практику метод идентификации видового состава мясных продуктов на основе ПЦР в реальном времени, отличающийся низким пределом обнаружения, так как необходимый биологический объект может быть достоверно обнаружен при наличии не менее 20 копий его специфической ДНК в анализируемой пробе ДНК. К преимуществам данного метода относятся идентификация по ДНК, которая является высокоустойчивым к различным физическим, химическим и механическим воздействиям материалом, что делает его универсальным по отношению к продуктам, выработанным по различным технологиям.

> разработан метод на основе ПНР в реальном времени, не имеющий аналогов среди методов, применяемых в мясной промышленности для контроля качества продукции.

> разработаны:

-ГОСТ Р 52 723-2007 Продукты пищевые и корма «Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)», стандарт введен в действие с 01.06.2008 г;

- Методические рекомендации МР 4.2.0019-11 Методы контроля. Биологические факторы. «Идентификация сырьевого состава мясной продукции», МР введены в действие с 18.04.2001 г. По данной нормативной документации работают Испытательный центр «ВНИИМП им. В.М. Горбатова», ООО «Биоком», Институт питания РАМН, городская ветеринарная лаборатория «ГВЛ», лаборатория ОПВК ЗАО «Микояновский мясокомбинат» и др.

Заключение диссертации по теме «Технология мясных, молочных и рыбных продуктов и холодильных производств», Фомина, Татьяна Алексеевна

выводы

1. На основании компьютерного анализа нуклеотидных последовательностей генов митохондриальной и ядерной ДНК сельскохозяйственных животных, птиц и растений выбраны гены-мишени и определены их консервативные участки. Сконструированы оригинальные видоспецифические праймеры и оптимизированы параметры ПЦР. Собраны наборы, позволяющие идентифицировать ДНК следующих биологических объектов: бык, зебу, свинья, курица, индейка, соя.

2. По итогам оценки диагностической способности разработанного метода на основе ПЦР в реальном времени установлено, что необходимый биологический объект может быть достоверно обнаружен при наличии не менее 20 копий его специфической ДНК в анализируемом аналите, что является практическим пределом обнаружения. Разработан образец ДНК, по которому можно отличить намеренную фальсификацию от случайной контаминации не декларируемым ингредиентом.

3. Исследования по определению лимитирующих факторов применения метода ПЦР в реальном времени показали, что метод позволяет идентифицировать необходимый биологический объект в составе продуктов, подвергнутых в ходе выработки, различным физическим, химическим и механическим воздействиям, и, таким образом, является универсальным по отношению к любым мясным продуктам.

4. Анализ практических возможностей применения метода идентификации на основе ПЦР показал необходимость и целесообразность его использования для определения видовой принадлежности мяса, мясных и растительных ингредиентов.

5. Разработан ГОСТ Р 52723-2007 Продукты пищевые и корма. «Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)», введенный в действие с 01.06.2008 г., а также Методические рекомендации МР 4.2.0019-11 Методы контроля. Биологические факторы. «Идентификация сырьевого состава мясной продукции» используемые мясоперерабатывающими предприятиями с целью контроля качества сырья и мясной продукции, введенные в действие с 18.04.2011 г.

6. Расчет экономической эффективности применения метода показал, что при исследовании партии (10 тонн) мясных изделий затраты составят в среднем порядка 75 рублей. При этом ущерб за счет обмана потребителей, например, для предприятий с мощностью 100 тонн, снижается на 500 000 рублей в год, кроме того, исследование имеет большую социальную значимость.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Фомина, Татьяна Алексеевна, 2012 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Автандилов Г.Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической гистоцитопатологии. -М.: РМАПО, 1996. - 256 с.

2. Ассонов Н.Р. Микробиология. - М.: Колос, 2002. - 352 с.

3. Бараников А.И., Приступа В.Н., Колосов Ю.А. Технология интенсивного животноводства. - Ростов н/Д.: Феникс, 2008. - 602 с.

4. Батинг Г, Контор Ч., Коллинз Ф. Анализ генома. Методы. Пер. с англ. -М.: Мир, 1990.-479 с.

5. Беркинблит М.Б., Глаголев С.М., Фуралев В.А. Общая биология. - М.: МИРОС, 1999.-224 с.

6. Большая советская энциклопедия [Электронный ресурс]. - М: Научное издательство «Большая Российская энциклопедия», 2001. - Режим доступа: http://slovari.yandex.ru/~KHHra/BC3/KpynHbm рогатый скот/

7. Бонецкий A.A., Таирова М.М., Кутукеев Т.С. и др. Использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) в клинической практике [Электронный ресурс]. - 2008. - Режим доступа: www.medicus.ru

8. Боровков М.Ф., Швец О.М., Кириллов А.К. Определение видовой принадлежности мяса животных. Методическое пособие. - М.: АМБагро, 1998. - 34 с.

9. Бутвиловский A.B., Барковский Е.В., Бутиловский В.Э. Сравнительная характеристика вариантов ncbi blast-анализа ряда митохондриальных ферментов различных животных. - Минск: БГМУ, 2006. - № 3(17). - 6 с. - [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.bsmu.by

10. Ванюшин Б.Ф. Молекулярная биология. История биологии с начала XX века до наших дней. - М.: Наука, 1975. - с. 454.

11. Галактионов В.Г. Иммунология. Учебник. - М.: изд-во МГУ, 1998. - 480 с.

12. Гаузе Г.Г. Митохондриальная ДНК. - М.: Наука, 1977. - 288 с.

13. ГОСТ Р 52427-2005. Промышленность мясная. Продукты пищевые. Термины и определения. - Введ. 28.12.05. - М.: Стандартинформ , 2007. -24 с.

14. Егоров А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилова Е. М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. - 288 с.

15. Езерская Е.Я., Галочкин В. А. Идентификация видоспецифичных

мышечных белков сельскохозяйственных животных и птиц // Сельскохозяйственная биология. Серия биология животных. - 1999. - № 6.-С. 3-9.

16. Екимов А.Н., Шипулин Г.А., Бочкарев Е.Г., Рюмин Д.В. Новейшие технологии в генодиагностике: полимеразная цепная реакция в реальном времени. Центральный НИИ Эпидемиологии МЗ РФ [Электронный ресурс]. - 7 с. - Режим доступа: www.pcr.ru

17. Журавская Н.К., Алехина Л.Т., Отряшенкова Л.М. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов. - М.: Агропромиздат, 1985. -296 с.

18. Иванов В.И., Барышникова Н.В., Билева Д.С. и др. Генетика. - М.: ИКЦ «Академкнига», 2006. - 638 с.

19. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология - М.: КолосС, 2003. - 423 с.

20. Комарова И.Н., Серегин И.Г., Валихов А.Ф. Полимеразная цепная реакция - современной метод выявления фальсификации мясного сырья и продуктов // Мясная индустрия. - 2004. - № 2. - С. 37-41.

21. Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии - М.: Колос, 2001. - 344 с.

22. Костенко Ю.Г., Бутко М.П., Ковбасенко В.М. и др. Руководство по ветеринарно-санитарной экспертизе и гигиене производства мяса и мясных продуктов. - М.: РИФ «Антиква», 1994. - 607 с.

23. Костомахин Н.М. Породы крупного рогатого скота - М.: КолосС, 2011. -119 с.

24. Кузьмина H.A. Генная инженерия. Методы клонирования ДНК [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.biotechnolog.ru/ge/ge8_2.htm

25. Кулаев И.С. Происхождение эукариотических клеток // Соросовский Образовательный Журнал. - 1998. - № 5. - С. 17-22.

26. Кунаков A.A. Журавлева И.А., Серегин И.Г. Методы определения видовой принадлежности мясопродуктов мелких животных // Материалы конференции «Современные вопросы интенсификации кормления, содержания животных и улучшения качества продуктов животноводства». -М. - 1999. - С. 95-96.

27. Лисицын А.Б., Хвыля С.И., Бурлакова С.С., Пчелкина В.А. Результаты мониторинга мясных продуктов за 2008 год // Сборник докладов 11-ой МНПК памяти В.М. Горбатова. - 2008. - С. 97-102.

28. Лопухов Л.В., Эйделынтейн М.В. Полимеразная цепная реакция в клинической микробиологической диагностике. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2000. - том 2. - № 3-С. 96-106.

29. Лынчиков Д.С., Николаева М.А., Гильмитова И. Идентификация и фальсификация товаров: причины и следствия // Международный сельскохозяйственный журнал. - 1993. - № 3. - С. 61-64.

30. Макаров В.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза пищевых продуктов на рынках и в хозяйствах: Справочник. - М.: Колос, 1992. - 304 с.

31. Макаров В.А., Боровков М.Ф., Ермолаев Е.П. и др. Практикум по ветеринарно-санитарной экспертизе с основами технологии продуктов животноводства. - М.: ВО «Агропромиздат», 1987. - 271 с.

32. Минченко А.Г., Дударева H.A. Митохондриальный геном. -Новосибирск: «Наука», 1990. - 194 с.

33. Никитченко В.Е., Серегин И.Г., Никитченко Д.В. Технология переработки продуктов животноводства. Учебное пособие. - М.: Изд-во РУДН, 2004. - 60 с.

34. Николаева М.А., Лычников Д.С., Неверов А.Н. Идентификация и фальсификация пищевых продуктов. - М.: Экономика, 1996. - 108 с.

35. Обухов И.Л., Панин А.Н. Применение полимеразной цепной реакции в ветеринарии // Аграрная Россия. - 2002. - № 2. - С. 62-64.

36. Окара А.И. О возможности и целесообразности использования полимеразной цепной реакции // Мясная индустрия. - 2004. - № 9. - С. 28-29.

37. Окара А.И., Алешков A.B., Кольцов И.П., Лопатин С.И., Генетические модифицированные ингредиенты в мясных продуктах: декларация и реальность // Мясная индустрия. - 2006. - № 5. - С. 22-24.

38. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие). -М.: Наука, 1981.-288 с.

39. Остерман М.Б. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. -М.: Наука, 1988 - 303 с.

40. Патрушев М.В., Возняк М.В., Возняк В.М., Генетически модифицированные источники: введение в проблему анализа // Партнеры и конкуренты. - 2006. - № 6. - С. 13-22.

41. Петров Р.В. Иммунология. - М.: Медицина, 1987. - 414 с.

42. Писарева В.М. Идентификация и качество мясной продукции // Мясная индустрия. - 2007. - № 5. - С. 65-66.

43. Письменская В.Н., Ленченко Е.М., Кузнецова Т.Г., Ванина H.H. Микроструктура мяса и мясопродуктов. -М.: МГУПБ, 2005. - 85 с.

44. Письмо от 24 января 2006 г. N 0100/446-06-32 об этикетировании пищевых продуктов, содержащих ГМО. Министерство здравоохранения и социального развития РФ. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека [Электронный ресурс]. - 2006. - Режим доступа:

http://base.consultant.ru/cons/cgi/online.cgi?req=doc;base=LAW;n=58276;íra

me=0

45. Рогов И.A., Забашта А.Г., Казюлин Г.П. Общая технология получения и переработки мяса. - М.: Колос, 1994. - 367 с.

46. Рогов И.А., Логинова E.H., Гурова Н.В. и др. Функциональные свойства соевых белков, полученные из генетически модифицированных источников // Мясная индустрия. - 2004. - № 1. - С. 28-30.

47. Рычкова Ю.Г. Генофонд и геногеография народонаселения. Геногеографический атлас населения России и сопредельных стран [Электронный ресурс]. СПб.: Наука, (в печати). - том 2. - Режим доступа: http://humgenlab.vigg.ru/Atlas/C_4_2.htm

48. Свободная энциклопедия Википедия [Электронный ресурс]. - М. -Режим доступа: http://ru.wikipedia.org/wiki/

49. Селиванова Е.Б. Разработка метода оценки свежести свинины с использованием мультисенсорной системы «VOCmeter». Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук. -М., 2008.-23 с.

50. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. - М.: Мир, 1998. - том 1. - 392 с.

51. Скурихина И.М., Волгарева М.Н. Химический состав пищевых продуктов. Справочные таблицы содержания основных пищевых веществ и энергетической ценности пищевых продуктов. - М.: Агропромиздат, 1987. - Т. 1. - 224 с.

52. Слесаренко H.A., Курмакаева Т.В., Якушев C.B. Морфологические критерии определения видовой принадлежности мяса // Материалы конференции «Современные вопросы интенсификации кормления, содержания животных и улучшения качества продуктов животноводства». - М. - 1999. - С. 103-105.

53. Соколов A.A. Физико-химические и биологические основы технологии мясопродуктов. - М.: Пищевая промышленность, 1965. - 490 с.

54. Соловейчик Л.Л., Басанец А.И. Справочное пособие по ветеринарно-санитарной экспертизе мясных, молочных, рыбных и растительных

продуктов, меда и яиц. - М.: Колос, 1976. - 136 с.

55. Стариков И.В. ГМО - скрытая угроза России, материалы к Докладу Президенту РФ «По анализу эффективности государственного контроля за оборотом генетически модифицированных продуктов питания». - М., 2004. - 143 с.

56. Тарасов С.А. Случаи судебно-ветеринарной экспертизы на мясокомбинате // Ветеринария. - 1993.-№6.-С. 53-54.

57. Тейлор Д., Грин Н., Стаут У. Биология. - М.: МИР, 2006 - том 3. - 453 с.

58. Тертон М., Бангхем Д.Р., Колкотт К.А. и др. Новые методы иммуноанализа. - М.: Мир, 1991. - 116 с.

59. Тиняков Г.Г. Гистология мясопромышленных животных. - М.: Пищевая промышленность, 1983. - 450 с.

60. Тихомирова Т.А., Горожанина Е.С., Ефремова A.C., Авылов Ч.К. Идентификация сырья и продуктов животного и растительного происхождения методом SDS-электрофореза // Все о мясе. - 2007. - № 2. -С. 29-31.

61. TP Таможенного союза «О безопасности мяса и мясной продукции». Проект [Электронный ресурс]. ТР201_/00/ТС. - 2011. - 37 с. - Режим доступа: http://www.vniimp.ru/index.php/services-and-products/normative-document/technical-regulations

62. TP Таможенного союза «Пищевая продукция в части ее маркировки». Проект [Электронный ресурс]. TP 201_/00_/ТС. - 2010. - 25 с. - Режим доступа: http ://www.rostest.ru/old/TRTS_markirovka.pdf

63. Тутельян В.А., Филатов H.H., Сорокина Е.Ю. и др. Мониторинг отбора пищевой продукции из генетически модифицированных источников в Москве // Вопросы питания. - 2003. - № 3. - С. 2-23.

64. Федеральный закон «О техническом регулировании» от 27.12.2002 N 184-ФЗ (принят ГД ФС РФ 15.12.2002). Официальный сайт компании «Консультант Плюс» [Электронный ресурс]. - М. - Режим доступа: http://www.consultant.ru/popular/techreg/

65. Франк-Каменецкий М.Д. Век ДНК. - М.: КДУ, 2004. - 240 с.

66. Фримель X. Иммунологические методы. - М.: Мир, 1979. - 472 с.

67. Фролов Д. Казань - реклама - бик эйбэт. Казанские рекламодатели используют этнический маркетинг, но не признаются в этом // Индустрия рекламы. - 2006. - № 22. - С. 30-34.

68. Хвыля С.И. Идентификация генетически модифицированного сырья и методы ДНК - диагностики (ПЦР) // Все о мясе. - 2004. - № 4. - С. 48-49

69. Хвыля С.И. Научно-методические рекомендации по микроструктурному анализу мяса и мясных продуктов. - М., 2002. - 41 с.

70. Хвыля С .И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г. Практическое применение гистологических методов анализа // Мясная промышленность. - 1994. -№6.-С. 9-11.

71. Хвыля С.И., Бурлакова С.С., Пчелкина В.А. Результаты мониторинга мясных продуктов за 2009 г. // Сборник докладов 12-ой МНПК памяти В.М. Горбатова. - 2009. - С. 230-236.

72. Хвыля С.И., Бурлакова С.С., Пчелкина В.А. Результаты мониторинга мясных продуктов за 2009-2010 год. // Сборник докладов 13-ой МНПК памяти В.М. Горбатова. - 2010. - С. 104-107.

73. Хвыля С.И., Бурлакова С.С., Пчелкина В.А. Результаты мониторинга мясных продуктов за 2010-2011 год. // Сборник докладов 14-ой МНПК памяти В.М. Горбатова. - 2011. - С. 225-229.

74. Хвыля С.И., Донскова Л. А., Менухов Н.В., Использование гистологического метода для идентификации мясных продуктов // Мясная индустрия. - 2006г. - № 12. - С. 32-34.

75. Хвыля С.И., Паршенкова Р.В. Мясная промышленность России: проблема фальсификации // Мясной бизнес. - 2006. - № 5(45). - С. 104105.

76. Хвыля С .И., Паршенкова Р.В. Разработка нового стандарта для ускоренной идентификации состава продукта гистологическим методом // Все о мясе. - 2006. - № 2. - С. 34-35.

77. Хрусталева И.В., Михайлова Н.В., Шнейберг Я.И. и др. Анатомия домашних животных. - М.: Колос, 2000. - 704 с.

78. Чемерис Д.А., Изотермические и управляемые сменой температур реакции амплификации и высокочувствительной детекции специфических последовательностей нуклеиновых кислот в реальном времени. Автореферат диссертации. - Уфа, 2006. - 23 с.

79. Чепурной И.П. Идентификация и фальсификация продовольственных товаров. - М.: Издательско-торговая корпорация «Дашков и К0», 2002. -460 с.

80. Чернуха И.М., Кузнецова Т.Г., Селиванова Е.Б. Использование сенсорной системы VOCmeter для оценки качества мясного сырья // Мясная индустрия. - 2008. - май. - С. 9-12.

81. Чернуха И.М., Кузнецова Т.Г., Селиванова Е.Б. Сенсорные системы «электронный нос» для контроля качества мяса // Tehnologija mesa. -Osnivac i izdavac: Institut za higijenu i tehnologiju mesa, Beograd. - 50 (2009) 1-2,159-165.

82. Чернявский M.B. Анатомо-топографические основы технологии, ветеринарно-санитарной экспертизы и товароведческой оценки продуктов убоя животных. - М.: Колос, 2002. - 376 с.

83. Черняева М.Н., Галочкина В.А., Матвеев В.А. и др. Анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов // Ветеринария. - 2001. - № 6. -С. 45-51.

84. Черняева М.Н., Галочкина В.А., Матвеев В.А., Езерская Е.Я. Количественный анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2002. - № 2. - С. 38-45.

85. Шалимова O.A., Козлова Т.А., Зубарева К.Ю., Радченко М.В. Анализ основных тенденций фальсификации мясопродуктов, реализуемых на потребительском рынке Орловской области // Сборник докладов 14-ой МНПК памяти В.М. Горбатова. - 2011. - С. 252-259.

86. Швегеле Ф. Оценка иммунологических и генно-технических методов.

Аналитика мяса. Экспресс-методы, методы оценки и измерения. Кульмбахская серия, 1999. - Том 16. - Ст. 90-115.

87. Bellis С.А. Molecular genetic approach for forensic animal species identification // Forensic science international. - 2003. - № 2. - p. 99-108.

88. Bernardi G., Olofsson В., Filipski J., Zerial M., Salinas J., Cuny G., Meunier-Rotival M., Rodier F. The mosaic genome of warm-blooded vertebrates // Science. - 1985. - № 228. - P. 953-958.

89. Binke R. et al. Influencing factors for the quantification of animal species in meat by means of PCR // Innovations in Food Technology. - 2033. -November. - P. 130.

90. Binke R., Altmann K., Fischer K., Müller E., Schwägele F. Semiquantitative Bestimmungen von Ziegengewebe in Fleischerzeugnissen mittels PCR: Bestimmung auf Basis der nucleären single-copy Gene beta-Casein and Myostatin // Mitteilungsblatt der Fleischforschung, Kulmbach. - 2004. - V.3. -№ 164.-P. 155-161.

91. Binke R., Eichner R., Zäh M., Schwädele F.. Entwicklung eines leistungsfähigen Extraktionssystems zur Isolierung von Nucleinsäure aus Fleisch und Fleischerzeugnissen für die PCR // Archiv für Lebensmittelhygiene. - 2003. - Mai/Juni. - 54. - P. 52-55.

92. Binke R., Schwägele F. Identifizierung und Quantifizierung pflanzlicher und tierischer Bestandteile in Fleischerzeugnssen // Kurzfassungen der Fachvorträge der 40. Kulmbacher Woche, Kulmbach. - 2005. - P. 35.

93. Blanchard G.C., Taylor C.G., Busey B.R., Williamson M.I. Regeneration of immunosorbent surfaces in clinical industrial and environmental biosensors-role of covalent and non covalent interactions // J. of Immunological Methods. - 1990. - So-130/2 - P. 263-275.

94. Bobo L.D. PCR Detection of Chlamydia trachomatis. Diagnostic Molecular Microbiology. Principles and Applications // ASM Press: -Washington. -1993.-P. 235-241.

95. Borgo R., Soulie-Crosset C., Bounchon D., Gomot L. PCR-RFLP analysis of

mitochondrial DNA for identification of snail meat species // J. of food science. - 1996. - № 1. - P. 1-4.

96. Calvo J.H., Zaragoza P., Osta R. Random amplified polymorphic DNA fingerprints for identification of species in poultry pate // Poultry science. -2001. - So-80/4. - P. 522-524.

97. Chargaff E., Lipshitz R., Green C. and Hodes M.E. The composition of the deoxyribonucleic acid of salmon sperm // Journal of Biological Chemist. -1951.-V. 192.-p. 223-230

98. Christopher T. Cordle. Soy Protein Allergy: Incidence and Relative Severity // American Society for Nutritional Sciences. - 0022-3166/04 - P.1213S-1218S.

99. Church R.B. Method for study of hybridization and reassociation of nucleic acids extracted from cells of higher animals // In: Molecular techniques and approach in developmental biology. - 1973. - P. 223-301.

100. Cota-Rivas M. Vallejo-Cordoba B.V. Capillary electrophoresis for meat specias differentiation // J. Capillary Electrophoresis. - 1999. - V. 4. - P. 195199.

101. Coutlee F., He Y., Saint-Antoine P., Olivier C., Kessous A. Coamplification of HIV type 1 and beta-globin gene DNA sequences in a nonisotopic polymerase chain reaction assay to control for amplificstion efficiency // AIDS Res. Hum. Retroviruses. - 1995. - № 11. - P. 336-337.

102. Crotchfelt K.A., Welsh L.E., DeBonville D., Rosenstraus M., Quinn T.C. Detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis in Genitourinary Specimens from Men and Women by a Coamplification PCR Assay // J Clin Microbiol. - 1997. - 35:1536 - 40.

103. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA // Biochem. Byophys. Res. Commun. - 1966. - So-23. -P. 641-646.

104. Frey W. Kennzeichnung. Allergene Stoffe sind schwer zu fassen // Fleischwirtschaft. - 2005. - So-10. - P. 69-72.

105. Gabaldon T., Snel B., Zimmeren F., Hemrika W., Tabak H. and Huynen M. Origin and evolution of the peroxisomal proteome // Biology Direct. - 2006. - 1 (8).

106. Haarmann M., Lewitzki J. Nachweis von Milcheiweiss in Lebensmitteln mittels Enzymimmunassay // Fleischwirtschaft. - 2007. - So-5. -P. 111-113.

107. Hasegawa T., Fujimura T., Matsumoto T., Tanabe S., Morimatsu F.. Detection method of chicken contained in processed foods by polymerase chain reaction // 53rd International Congress of Meat Science and Technology. -P. 71-72.

108. Heid C.A. Real-time quantitative PCR // Genome Res. - 1996. - № 6. -p. 986-994.

109. Hendolin P.H., Markkanen A., Ylikoski J., Wahlfors J.J. Use of Multiplex PCR for Simultaneous Detection of Four Bacterial Species in Middle Ear Effusions // J. Clin Microbiol. - 1997. - 35:2854 - 8.

110. Higuchi R. Kinetic PCR Analysis: Real-time monitoring of DNA amplification reaction // Biotechnology. - 1993. - № 11. - P. 1026-1030.

111. Hofinann K. Nachweis der Tierart bei Fleisch und Fleischerzeugnissen // Fleischwirtschaft. - 1997. - 77. - 1. - P. 38-40.

112. Horn D. Zum histologischen Nachweis von Blutpulver in Fleischerzeugnissen // Fleischwirtschaft. - 1988. - 68. - 699.

113. Image Analysis. Principles and Practice, Joyce-Loeble, First Edition, 1985.

114. Jae Kyun Rho, Lee T., Soon-Il Jung. Qualitative and Quantitative PCR Methods for Detection of Three Lines of Genetically Modified Potatoes // J. Agric. Food Chem. - 2004. - 52. - P. 3269-3274.

115. Jones S.J., Patterson R.L.S. A modified indirect ELISA procedure for raw meat speciation using crude anti-species antisera and stabilized immunoreagents // J. of the Sei. of Food and Agricult. - 1986. - So-37. - P. 767-775.

116. Kabat E.A. Structural concept in immunology and immunochemistry, 2nd edition. -N.Y., Hotel, Rinehart and Winston. - 1976.

117. Kitchin P.A., Szotyori Z., Fromholc C., Almond N. Avoidance of false positives // Nature. - 1990. - V.-344. - № 6263. - P. 201.

118. Lindahl T. Instability and decay of the primary structure of DNA // Nature. -1993.-P. 709-715.

119. Lockey A. K, Jones C.G., Bruce J.S., Franclin S.J., Bardsley R.G. Colorimetric detection of immobilized PCR products generated on a solid support // Nucleic acids research. - 1997. - So-25. - P. 1313-1314.

120. Manz J. Detection heat-denatured muscle proteins by means of ELISA: determining kangaroo muscle proteins // Fleischwirtschaft. - 1983. - V. 63. -P. 1767.

121. Maria Lopez-Andreo, Laura Lugo, Amando Garrido-Pertierra, Isabel Prieto M., Antonio Puyet. Identification and quantitation of species in complex DNA mixtures by real-time polymerase chain reaction // Analytical biochemistry - 2004.

122. Milgrom F., Witebsky E. Immunological studies on adrenal glands // Immunol. - 1962. - v.5. - P. 46.

123. Modica-Napolitano J.S., Singh K.K. Mitochondria as targets for detection and treatment of cancer // Exp. Rev. Mol. Med.. - 2002. - P. 1-19.

124. Newton C.R., Graham A. PCR. Oxford: Bios Scientific Publishers. - 1996. -P.18- 19.

125. Paolettii C., Mazzara M. Definition of minimum performance requirements for analytical methods of GMO testing. European Network of GMO laboratories (ENGL). Version 25-01-2005, 6.

126. Persing D.H. et al. Target selection and optimization of amplification reaction // In: Diagnostic molecular microbiology. - ASM, 1993. - P. 88-102.

127. Petros J.A., Baumann A.K., Ruiz-Pesini, Amin M.B., Sun C.Q., Hall J. et al. mtDNA mutations increase tumorigenicity in prostate cancer // Proc. Natl. Acad Sci. USA. - 2005. - So-102. - p. 719-724.

128. Popping B. Methods for the detection genetically modified organisms: precision, pitfalls, and proficiency // International laboratory. - May, 2001. -

P.23-29.

129. Richter C. Biophysical consequence of lipid peroxidation in membranes // Chem. Phys. Lipids. - 1987. - V. 44. - P. 175-189.

130. Rösch P. Allergene in Lebensmitteln - Auch ein Identifikations problem // Kurzfassungen der Fachvorträge der 40. Kulmbacher Woche. - Kulmbach. -2005.-P. 38.

131. Saccone S., De Sarjo, Wiegant J. et al. Correlation between isochores and chromosomal bands in the human genome // Proc. Natl. Acad. Sei. - 1993. -V. 90.-P. 11929-11933.

132. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Higuchi R. // Science. - 1988. - V.239. -N. 2.-P.487.

133. Saiki R.K., Scharf S., Fallona F., Mullis K., Horn G. // Science. - 1985. - V. 230. -N. 6. -P.1350.

134. Schwägele F., Stirtzel S., Andrée S. Authentication of domestic poultry species in meat and meat products // 53rd International Congress of Meat Science and Technology. - P.617-618.

135. Somma M., Querci M. The Polymerase Chain Reaction (PCR) // The Analysis of Food Samples for the Presence of Genetically Modified Organisms. - Session 6.

136. Sutovsky P., et. al. Ubiquitin tag for sperm mitochondria // Nature. - 1999. -402: 371-372.

137. Sykes P.J., Neoh S.H., Brisco M.J., Hughes E., Condon J., Morley A.A. Quantitation of targets for PCR by use of limiting dilution // Bio Techniques. - 1995. -№ 13. - P. 444-449.

138. Tartaglia M. et al. Detection of bovine mitochondrial DNA in ruminant feeds: a molecular approach to test for the presence of bovine-derived materials // J. of food protection. - 1198. - V. 61. - P. 225-228.

139. Tyagi S., Kramer F.R. Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization // Nat Biotechnol. - 1996. - № 14. - P.303-308.

140. Walker J.A. et al. Quantitative intra-short interspersed element PCR for

species-specific DNA identification // Analytical biochemistry. - 2003. - So-316.-P. 259-269.

141. Weir D.M. Handbook of experimental immunology. - 3rd edition. - V. 1. -Immunochemistry. - Oxford, London, Blackwell Scientific Publications. -1978.

142. Weiss H., Hildebrandt G., Sinei H.-J. Statistische Beurteilung histometrischer Analysen im der Lebensmitteluberwachung. 4. Mitteilung: Konstruktion geschlossener sequentieller Stichprobeplane zur Qualitatsbeurteilung von Fleisch- und Wurstwaren // Fleischwirtschaft. - 1974. - So-54. - P. 93.

143. White T.J. Amplification Product Detection Methods. Diagnostic Molecular Microbiology. Principles and Applications // ASM Press. - Washington. -1993.-P. 138-148.

144. Wiesner RJ, Ruegg JC, Morano I. Counting target molecules by exponential polymerase chain reaction, copy number of mitochondrial DNA in rat tissues // Biochem Biophys Res Commun. - 1992. - So-183(2). - P. 553-5599.

145. Yetim H., Kesmen Z., Sahin F., Ockerman H.W. Real-time PCR assay for highly specific determination of pork in raw and heat treated meat mixtures // 53rd International Congress of Meat Science and Technology. - P. 401-402.