Разработка методов и средств обеспечения микробиологической безопасности объектов ветеринарного надзора тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.05, кандидат биологических наук Артемов, Артем Валерьевич

• Артемов, Артем Валерьевич
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Артемов, Артем Валерьевич

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Аспекты обеспечения безопасности объектов ветеринарного

I '

надзора

1.2. Контроль безопасности на основе методов ДНК- и иммунодиагностики

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследований

2.2. Методы исследований

2.2.1. Методы бактериологического анализа сырья, мясной продукции и помещений хладокомбината

2.2.2. Методика определения бактерицидной и бактериостатической активности препаратов кластерного серебра

2.2.3. Методика определения дезинфицирующей активности препаратов кластерного серебра

2.2.4. Методика определения бактерий на основе иммунохроматографии

2.2.5. Методика определения возбудителей инфекций на основе ГТЦР

и биочипов

2.2.6. Получение ДНК-зондов с помощью ПЦР

2.2.7. Амплификация ДНК методом рассеянной затравки с гексануклеотидными праймерами

2.2.8. ДНК-гибридизация на биочипах

2.2.9. Статистическая обработка результатов

2.3. Результаты исследований

2.3.1. Изучение биоцидных свойств препаратов кластерного серебра «Серебряный щит»

2.3.2. Разработка тест-системы индикации сальмонелл

различных серогрупп на основе ИИХЭ с наночастицами коллоидного

золота

2.3.3. Разработка методики и тест-системы индикации вобудителей

бактериальных инфекций на основе ПЦР и биочипов

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

I I

4. ВЫВОДЫ

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

7. ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методов и средств обеспечения микробиологической безопасности объектов ветеринарного надзора»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Среди различных аспектов обеспечения безопасности объектов ветеринарного надзора значительная роль принадлежит контролю

микробных контаминаций и биоцидной обработке этих объектов.

1

Разработка и совершенствование методов и средств указанных элементов безопасности связаны с достижениями различных сопряженных наук, в том числе с молекулярной биологией, иммунологией, нанотехнологией и ее разделом бионанотехнологией.

В современном представлении нанотехнология - это наука и технология коллоидных систем, коллоидная химия, коллоидная физика, молекулярная биология, микроэлектроника. Функционирование систем нанотехнологии отличается от функционирования истинных растворов и расплавов и от объектов макромира благодаря высокоразвитой поверхности. Такие эффекты начинают проявляться, когда размер частиц лежит в диапазоне 1-100 нанометров.

Бионанотехнология является разделом нанотехнологии, который занимается изучением и воздействием объектов нанодиапазона на биологические организмы или их использованием для развития наномедицины (в том числе и ветеринарной наномедицины), в частности, созданием препаратов и диагностических систем на основе наночастиц (иммунохроматографических тестов, дот-анализов, световых и электронно-микроскопических исследований). Методы исследования бионанотехнологии связаны с манипулированием отдельными атомами и молекулами (ДНК, белков). Таким образом, такие методы, как ПЦР-анализ, анализ нуклеотидных последовательностей нуклеиновых кислот, ДНК-иммуномикрочиповая технология, метод иммунохроматографии с использованием наночастиц коллоидного золота можно отнести к современному направлению в науке - бионанотехнологии.

Определенные перспективы бионанотехнологии связаны с обеспечением здоровья животных и безопасности объектов ветеринарного контроля. Широко применяемые в настоящее время антибиотики, в том числе и при откорме животных, способствуют распространению устойчивых штаммов бактерий. Остаточные количества антибиотиков накапливаются в тканях животных и в дальнейшем, попадая с пищей к человеку, оказывают негативное влияние на его здоровье. Используемые в ветеринарии дезинфектанты на основе различных химических соединений могут также отрицательно влиять на здоровье животных, человека и окружающую среду. В связи с этим актуальным является поиск новых экологичных биоцидных средств. Новые бактерицидные средства создаются на основе использования наночастиц. Так, например, показано применение наночастиц серебра при очистке воды и воздуха, или при дезинфекции одежды и спецпокрытий. Бионанотехнология имеет весьма значительные перспективы в ветеринарии (Смирнов A.M. и др., 2011). Наносеребро использовалось при создании лекарственных средств для животных (Уша Б.В. и др., 2011). Получены экспериментальные электронно-микроскопические данные по изучению механизма действия наносеребра на бактериальные клетки (Павлова И.Б. и др. 2010). Иммунохроматографические элементы применялись при ветеринарно-санитарном контроле производства мясных консервов (Горобчук Е.А., 2010).

Дальнейшее изучение возможности применения достижений бионанотехнологии в ветеринарии, создание новых методов и средств обеспечения и контроля безопасности объектов ветеринарного надзора, их адаптация к конкретным объектам весьма актуально для науки и практики.

Цель исследования

Цель настоящей работы - разработка методов и средств для обеспечения микробиологической безопасности некоторых объектов ветеринарного надзора.

Задачи исследования

1. Изучить возможность отечественного экспериментального препарата кластерного серебра «Серебряный щит» для применения его в качестве биоцидного средства в ветеринарии.

2. Разработать тест-систему индикации сальмонелл различных серогрупп с помощью иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) с наночастицами коллоидного золота, определить чувствительность и специфичность тест-системы.

3. Разработать методику и тест-систему индикации возбудителей бактериальных инфекций на основе ПЦР и биочипов, определить чувствительность и специфичность методики и тест-системы.

4. Разработать методические рекомендации по применению индикаторных иммунохроматографических элементов для выявления возбудителей инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Биоцидные характеристики отечественного экспериментального препарата «Серебряный щит» на основе кластерного серебра.

2. Тест-система индикации сальмонелл различных серогрупп с помощью иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) с наночастицами коллоидного золота.

3. Тест-система и методика индикации возбудителей бактериальных инфекций на основе ПЦР и биочипов.

Научная новизна

Проведенными опытами изучено бактериостатическое, бактерицидное действие отечественного экспериментального препарата кластерного серебра «Серебряный щит» на грамположительные и грамотрицатёльные бактерии (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteritidis), а также дезинфицирующее действие препарата в отношении золотистого стафилококка и кишечной палочки, искусственно нанесенных на

поверхности различных материалов (керамическая, кафельная плитки, резина).

На основе проведенных исследований разработана тест-система индикации сальмонелл серогрупп (А, В, С, D, Е) с помощью иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) с

' ' 7

наночастицами коллоидного золота. Определены чувствительность (1x10 м.к./мл) и специфичность тест-системы, позволяющая проводить индикацию сальмонелл различных серогрупп при наличии сопутствующей микрофлоры (шигеллы, эшерихии).

На основе проведенных исследований разработаны тест-система и модифицированная методика на основе ПЦР и ДНК-чипов для индикации возбудителей бактериальных инфекций (Salmonella typhimurium, Escherichia

2 3

coli, Yersinia enterocolitica). Определена чувствительность методики (10 - 10 клеток в пробе) и специфичность (возможность проведения анализа без предварительного обогащения и при наличии сопутствующей микрофлоры).

Экспериментально обоснована возможность применения препарата кластерного серебра «Серебряный щит» и разработанных тест-систем по индикации патогенной микрофлоры для обеспечения ветеринарно-санитарной безопасности предприятий мясоперерабатывающей промышленности.

Практическая ценность

На основании результатов исследований разработаны:

- Методические рекомендации по применению индикаторных иммунохроматографических элементов для выявления возбудителей инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора, утвержденные Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 30.09.2009 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 работ, 4 из них - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:

- на Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания», МГУПБ (2009 г.);

- на заседании Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ (2011 г.);

- на расширенном совещании сотрудников лабораторий ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии (2011 г.).

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц, 8 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их результатов, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 156 источников (51 отечественных, 105 зарубежных) и приложения.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Артемов, Артем Валерьевич

4. ВЫВОДЫ

1. Установлено бактериостатическое и бактерицидное действие отечественного препарата кластерного серебра «Серебряный щит» на грамположительные и грамотрицательные бактерии в концентрациях 5-10

I I и 20 - 40 мг/л соответственно.

2. Дезинфицирующий эффект препарата «Серебряный щит» на тест-микроорганизмы, нанесенные на поверхности из различных материалов (керамическая, кафельная плитки, резина) достигался при воздействии в течение 3 часов в концентрации 40 мг/л.

3. Разработанная тест-система на основе иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) с наночастицами коллоидного золота позволяет проводить индикацию сальмонелл различных серогрупп (А, В, С, D, Е) при наличии сопутствующей микрофлоры (шигеллы, эшерихии) в течение 1,0 ч с чувствительностью 10 м.к./мл, и с предварительным обогащением на селективных питательных средах с чувствительностью 10 -103 м.к./мл в течение 24 ч.

4. Разработанные тест-системы и методика на основе ДНК-биочипов позволяет проводить индикацию возбудителей инфекций (Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Yersinia enterocolitica) с чувствительностью 10 - 103 м.к./мл без предварительного обогащения и при наличии сопутствующей микрофлоры.

5. Разработанные методы и средства на основе бионанотехнологии могут быть использованы для обеспечения микробиологической безопасности объектов ветеринарного надзора (мясоперерабатывающих предприятий).

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

На основании результатов исследований разработаны: - Методические рекомендации по применению индикаторных иммунохроматографических элементов для выявления возбудителей ' инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора, утвержденные Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 30.09.2009 г. (п.п.2.3., 2.4.).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Артемов, Артем Валерьевич, 2012 год

Литература

1. Павлова И.Б., Смирнов A.M., Власов A.A., Голубев В.Н., ■Слепцов В.В. I Влияние раствора кластерного серебра на выживаемость и морфологию популяций патогенных бактерий // "Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук" - 2010, № 5, С. - 63-66.

2. Ревина A.A., Баранова Е.К. / Некоторые особенности воздействия кластерного серебра на дрожжевые клетки Candida utilus II Электронный научный журнал. 2005.

Таблица 1

Бактерицидная активность препарата Ne 1

Наименование тест-культуры Зона задержки роста в мм

• Концентрация кластерного серебра

20 мг/л 10 мг/л 5 мг/л 1 мг/л 500 мкг/л

Staphylococcus aureus 10 0 0 0 0

Esherichia colli 20 10 0 0 0

Proteus vulgaris 17 0 0 0 0

Pseudomonas aeruginosa 15 10 0 0 0

Salmonella typhimurium 0 0 0 0 0

Таблица 2

Бактерицидная активность препарата № 2

!

Наименование тест-культуры Зона задержки роста в мм

Кониентоация кластерного серебра

40 мг/л 20 мг/л 10 мг/л 5 мг/л 2 мг/л

Staphylococcus aureus 10 8 0 0 0

Esherichia colli 20 10 0 0 0

Proteus vulgaris 15 10 10 0 0

Pseudomonas aeruginosa 20 15 10 10 0

Salmonella typhimurium 20 15 10 0 0

Ветеринарная *

—шдг———шя— Д Ж

1 ¡атология

№ 3 (37)2011

Международный научно-практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии

Главный редактор Ермаков A.M. Редакция:

Болдовская Т.Е. - директор Карташев В.В. - зам. гл. редактора Карташов С.Н. - зам. гл. редактора Колодий И.В. - научный редактор Контарев И.В. - компьютерный дизайн

Выходит ежеквартально Распространяется в Российской Федерации, странах СНГ и Балтии

Журнал входит в Перечень ВАК ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, выпускаемых в Российской Федерации, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученой степени доктора наук.

Журнал награжден медалью отделения ветеринарной медицины РАСХН «За достижения в области ветеринарной науки»

Журнал зарегистрирован в Министерстве Российской Федерации по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций. Свидетельство о регистрации средства массовой информации ПИ М 77-11332 от 10 декабря 2001 г. Учредитель и издатель ООО «Ветеринарный консультант»

Индекс в каталоге агентства «Роспечать» «Газеты. Журналы.» — 81265

Адрес редакции:

111625, г. Москва, ул. Поселковая, д. 2, корп 5. Тт. [phone] e-mail: [e-mail] www.yetpatru

При перепечатке ссылка на журнал «Ветеринарная патология» обязательна.

Редакционный совет:

Макаров В.В. - председатель совета, доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ,Российский университет дружбы народов, Москва

Василевич Ф.И., академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина, Москва

Грубый В.А., доктор экономических наук, профессор, ВНИИ защиты животных, г. Владимир

1улюкин М.И., академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ, Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии, Москва

1усев A.A., член-корреспондент РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ, Белорусский НИИ экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского, Белоруссия

Клименко А.И., доктор сельскохозяйственных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН, СКЗНИВИ, г. Новочеркасск

Недосеков В.В., доктор ветеринарных наук, профессор, Национальный университет биоресурсов и природопользования, Украина

Паршин П.А., доктор ветеринарных наук, профессор, Российский университет дружбы народов, Москва

Сочнев В.В., член-корреспондент РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ, Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия, Нижний Новгород

Стекольников A.A., член-корреспондент РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, Санкт-Петербургская государственная академия, ветеринарной медицины, Санкт-Петербург

Simon Martin Fernando, доктор биологии, профессор паразитологии. Университет Сала-манки. Испания

Т.И. и др. //Здравоохр. Белоруссии. - 1991. - № б. -С.15-18.

22. Соколов А .Г Терапия и профилактика ассоциативных инвазий домашних плотоядных животных в Ямало-Ненецком автономном округе./ А.ГСоколов. Дисс... канд. ветер, наук. - Тюмень, 2005.-133 с.

23. Фадеева О. В. Токсокароз домашних плотоядных г. Тюмени./О. В.Фадеева Дисс... канд. ветер, наук. - Тюмень, 2007 - 127с.

I 24. Федорова Н. В. Кльминтозы домашних плотоядных животных г. Тюмени: эпизоотология, патогистология, терапия./ Н.В. Федорова. Дисс... канд. ветер, наук. - Тюмень, 2007г. -117 с.

25. Шинкаренко А.Н. Экология паразитов собак и меры борьбы с вызываемыми ими заболеваниями в Нижнем Поволжье./Шинкаренко А.Н.

Дисс... докт. ветер, наук. - Волгоград, 2005. - 269 с.

26. Ястреб В.Б., Белоусов М.Н. //Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы. М., 1994. -С.53-54.

27 Barriga Omar О. A critical look at the importance, prevalence and control of toxocariasis and the possibilities of immunological control. Vet. Parasitolog. -1988. - 29. - №2. - 3. - E196-234.

28. Kimming P., Naser K., Frank W. //Lentralbl. Hyg. und Umvof. med. - 1991. Bd. 191, - Nli 4. - E 402406. ,

29. Petithory J. Сl, Beddock A. //Bull. Soc. fr. parasitol. -1997 - Vol. 15, - Mb 2. - E 199 - 211.

30. Yamaguchi N., Macdonald D.W., Passanisi 1С., Harbour D.A., Hopper CD. Parasite prevalence in free-ranging farm cats,Felissilvestris catus.-Epidemiol-Infect, 1996 Apr. -116(2). - F. 217-223.

Контактная информации об авторах для переписки Березина Елена Сергеевна, доцент, кандидат биологических наук, научный сотрудник, [e-mail]

Лобкис Диана Валерьевна, аспирант

Старостина Ольга Юрьевна, кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник

УДК 619:579/619:614.48 \ / Артемов А.В.

(ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии)

БИОЦИДНЫЕ СВОЙСТВА КЛАСТЕРНОГО СЕРЕБРА И ПЕРСПЕКТИВЫ ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

Ключевые слова: кластерное серебро, бактерицидное и бактериостатическое действие, дезинфицирующая активность.

Введение

Использование антибиотиков в качестве биоцидов в ветеринарии способствует распространению устойчивых штаммов бактерий. Остаточные количества антибиотиков накапливаются в тканях животных и в дальнейшем попадая с пищей к человеку, оказывают негативное влияние на его здоровье.

Применяемые в ветеринарии дезин-фектанты на основе различных химических соединений могут также отрицательно влиять на здоровье животных, человека и на окружающую среду.

Обеспечение норм безопасности сырья и продукции животного происхождения, а также экологической безопасности производства пищевой продукции делает актуальным поиск экологически безопасных биоцидов, не наносящих вреда животным,

человеку и окружающей среде.

В последнее время на мировом рынке широкое применение находят специализированные биоциды на основе наносеребра. Годовой прирост этих продуктов в Европе составляет более чем 20%, в США - 25% и почти 15% в Китае.

Прогнозируется рост спроса на биоциды на серебряной основе для перерабатывающих предприятий пищевой промышленности и в медицине.

Коммерческие биоциды, как правило, состоят из одного или нескольких активных химических веществ в сочетании с жидкой, тестообразной или твердой подложкой. Материалы с адсорбированными на них частицами серебра проявляют высокую антимикробную активность и могут быть использованы для защиты широкого ассортимента пищевых продуктов.

Так, например, польская нанотехноло-гическая компания «Nanoco», разработала новый биоцид «NanoSilver», в котором сочетаются бактерицидные свойства серебра с широкими возможностями нанотех-нологии. Полимеры на основе «Nanoco» используются в пищевой промышленности для производства упаковочных материалов. I

Применение упаковочной пленки, содержащей частицы серебра, продлевает срок хранения мяса на несколько дней. На-но-партикулярное серебро включается в материал пленки и равномерно распределяется по поверхности упаковки.

Связывание ионов серебра с пленкой защищает продукты питания от контаминации серебром.

Разработаны антимикробные препараты на основе серебра для медицинских устройств,

Американская компания «Agion» выпускает продукцию для упаковки медицинских товаров. Компания из Великобритании «Addmaster» предлагает свою линию «Biomaster», предназначенную для пищевых продуктов и предметов гигиены.

Серебро завоевало сильные позиции и на японском рынке. В Японии ионы серебра наносятся на неорганическую подложку на основе цеолитов или алюмосиликатов.

В холодильниках «Samsung» серии RL используется технология «Silver Nano» (собственная разработка «Samsung»). С помощью наночастиц серебра предотвращается размножение микроорганизмов на стенках холодильной и морозильной камер. Оно уничтожает до 99,9% бактерий и предотвращает появление посторонних запахов в камерах.

Целью наших исследований было изучение биоцидных свойств препаратов на-носеребра отечественного производства (кластерное серебро «Фрактал-М»)

Материалы и методы

В качестве тест-культур использовали следющие микроорганизмы; Staphylococcus aureus, Esherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium.

Бактерии выращивали на скошенном мясопептонном агаре при 37 о С в течение 24 часов, затем производили смыв физиологическим раствором и по стандарту мутности устанавливали концентрацию 109 м.к./мл.. Готовили серийные разведения культур в физиологическом растворе до

106 м.к./мл. По 1 мл каждой культуры смешивали с 10 -12 мл расплавленного и остуженного до 45 оС мясолептонного агара и выливали в чашку Петри (глубинный посев). После застывания агара и подсушивания специальным пробойником, с соблюдением условий стерильности, в агаре делали лунки диаметром 4 мм. В лунки вносили испытуемые раствяры кластерного серебра в концентрациях от 10 до 40 мг/л. Учет результатов проводили по зоне задержки роста бактерий после 24-часового инкубирования при 37 оС.

Дезинфицирующие свойства препарата определяли в опытах с искусственно кон-таминированными тест-объектами. В качестве материалов использовали стерильные пластины (10 х 10 см) из керамической и кафельной плитки, а также резины. Суточные культуры перечисленных выше микроорганизмов в концентрации 106 м.к./ мл наносили в количестве 1 мл на указанные поверхности и подсушивали при комнатной температуре в стерильных условиях. После полного высыхания на поверхность искусственно контаминированных тест-объектов наносили по 5 мл препарата кластерного серебра, что составляет расход при влажной дезинфекции 0,5 л/м2. Время воздействия составило 3 часа. По окончании экспозиции производили смыв стерильными ватными тампонами с каждого тест-объекта в стерильный физиологический раствор с последующим десятикратным разведением материала для прекращения действия препарата кластерного серебра, т. е. нейтрализации. Контролем при этом служили смывы с искусственно контаминированных тест-объектов, обработанных водой. Затем производили высев опытного и контрольного материала в мя-со-пептонный бульон, посевы инкубировали в течение 5 суток при 37 оС, просматривая посевы каждые сутки.

Опыты ставили не менее, чем в 3-х по-вторностях.

Результаты исследований

Препараты кластерного серебра оказывали бактерицидное действие в отношении Esherichia coli и Pseudomonas aeruginosa при концентрации 20 мг/л, а также бактериостатическое действие при концентрации 10 мг/л. В отношении Proteus vulgaris также отмечено бактериостатическое действие кластерного серебра в концентрации 20 мг/л.

Концентрация, оказывающая бактериостатическое действие для Staphylococcus

aureus составляла от 20 до 40 мг/л.

Препарат обладал бактерицидной активностью в отношении Esherichia coli при содержании кластерного серебра20 мг/л и 40 мг/л.

В отношении Salmonella typhimurium препарат продемонстрировал бактерицидную активность при концентрации кластерного серебру 40 мг/л и бактериостати-ческую при 20 й 10 мг/л.

Ингибирование роста Staphylococcus aureus, рекомендованного в соответствии с методическими указаниями в качестве модельной тест-культуры для вирусов, свидетельствует о возможности применения кластерного серебра в качестве биоцида для возбудителей вирусной природы.

В ранее проведенных электронно-микроскопических исследованиях было также показано пролонгированное бактери-остатическое действие растворов кластерного серебра [1,2].

Препараты кластерного серебра в концентрации 40 мг/л в течение 3-часового воз-

действия обеззараживали тест-объекты из различного рода плитки и резины, искусственно контаминированные бактериями Staphylococcus aureus и Esherichia coli.

Таким образом, препараты кластерного серебра обладали дезинфицирующей активностью на различных поверхностях.

Заключение (

Кластерное серебро оказывает бактерицидное, бактериостатическое влияние на различные микроорганизмы. Показано дезинфицирующее действие препаратов на различных объектах (керамическая, кафельная плитки, а также резина). Препараты на основе наносеребра могут использоваться в качестве биоцидных средств для грамположительных и грамотрицатель-ных бактерий, а также вирусов. Они предг ставляются наиболее экологичными и имеют перспективу использования в ветеринарной практике при разработке дезин-фектантов и ветеринарных препаратов.

Резюме: Установлено бактерицидное и бактериостатическое действие препаратов кластерного серебра («Фрактал-М», Россия) в отношении грамположительной и грамотрицательной микрофлоры. Показана дезинфицирующая активность препаратов на различных поверхносях (керамическая, кафельная плитки, а также резина).

SUMMARY

Established bactericidal and bacteriostatic effects of drugs cluster of silver («Fractal-М», Russia) against grampositive and gram-negative microorganisms. It is shown that the activity of disinfecting agents on various surfaces (ceramic, ceramic tiles, and rubber).

Keywords: cluster silver, bactericidal and bacteriostatic action, disinfecting activity.

Литература

1. Павлова И.Б., Смирнов A.M., Власов A.A., 1Ълубев В.Н., Слепцов B.B. / Влияние раствора кластерного серебра на выживаемость и морфологию популяций патогенных бактерий // «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук»

-2010, №5, С. -63-66.

2. Ревина А.А., Баранова Е.К. / Некоторые особенности воздействия кластерного серебра на дрожжевые клетки Candida utilus // Электронный научный журнал. 2005.

Контактная информации об авторах для переписки

Артемов A.B.

ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии

И. В. Шиленко,

кандидат технических наук, старшей научный сотрудник ФГУП "Государственный научно-

исследовательский

институт

биологического

приборостроения"

Федерального

мёдико-

биологического

агентства

С. П. Яркое,

доктор

биологических наук, начальник отдела спектральных методов анализа . ФГУП "Государственный научней" " исследовательский институт »=■■ биологического приборостроения " Федерального медико-

биологического ' агентства

А.Б. Кононенко, кандидат

биологических наук, доценщ, зав. лабораторией санитарной микробиологии ■ ГНУВНИИВСГЭ

A.B. Артемов, ■ аспирант ГНУВНИИВСГЭ

A.M. Смирнов, академик" секретарь : Отделения ''ветеринарной ■медицины РАСХН, академик РАСХН, директор ГНУВНИИВСГЭ■'

Сальмонеллез относится к наиболее распространенным в мире зоонозам и ймееттенденцию крас-пространению. В эпидемиологическом отношении наиболее значимы серотипы S. typhimurium, S. enteritidis, S. derby и др./обуславливающие 91% сальмонеллезов человека на всех континентах мира [1]. Своевременное выявление сальмонелл" представляетзначительную санитарно-гигиеническую проблему. Культуральный метод выявления микроррганизмов, безусловно, надежен и д^ет однозначные результаты, но и достаточно длителен - его постановка занимает до 72 часов. Весьма привлекательными являются экспресс-методы выявления микроорганизмов, в том числе основанные на иммунохимических реакциях, такие как иммуно-'■ферментный анализ, латекс-аггЛютинация. Однако разнообразие антигенной структуры бактерий рода Сальмонелла, т.е. существование различных серологических типов, делает идентификацию сальмонелл с помощью иммунохимических тестов непростой задачей.

Иммунохроматографический ме'тод анализа хорошо зарекомендовал себя для выявления антигенов'и клеток патогенных микроорганизмов [3,5]. Ранее нами был разработан и испытан отечественной иммунохроматографическийтест для выявления сальмонелл серогруппы В в продуктах питания, продовольственном сырье и кормах [4].

Целью настоящей работы явилось изучение аналитических возможностей отечественного им-мунохроматографического теста для выявления сальмонелл серогрупп, А, В, С, D, Е. В задачи исследования входило определение чувствительности, наличия перекрестных реакций с другими микроорганизмами кишечной группы.

Материалы и методы Бактериальные культуры. Для определения порога детекции использовали инактивированные нагреванием бактериальныё'культуры сальмонелл различныхсерологическихтипо.в:8.рага1урЫА225, S. typhimurium, S. heidelberg 1150, S.choleraesuis 595, S. newport, S. typhi 33, S. enteritidis 17, S. gnaturp 161 из коллекции Санкт-Петербургского НИИ вакцин и сывороток, а также культуры S. paratyphi В yava 04 №4839, S. paratyphi В 4219, S. typhimurium 04 №4836 из коллекции ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора. Для контроля специфичности теста использовали суспензии микробных клеток шигелл в буфереанализа для хроматографии: Sh.sonnei,Sh.dysenteriae214662, Sh.flexneri3a 1289, Sh. flexneri 2a 1270, Sh. flexneri 1 a 8516, Sh. flexneri 6, Sh. newcastle 8655), Sh. flexneri 5х'--> 199, Sh. flexneri 4a 1032 (Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток),- микробные клетки кишечной палочки Escherichia coli штамм WATCC 9637(Sigma, кат.М° ЕС-9637) в концентрации 1 х107 м.к./мл, а также холерную вакцину ФС 42-3676-98 производства ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" (Саратов).

Иммунохроматография. Для проведения им-мунохроматографии применяли иммунохроматог-рафический тест для выявления сальмонелл, а также буфер анализа для иммунохроматографии производства ФГУП "ГосН ИИ биологического приборостроения" ФМБА России. Иммунохроматографию проводили при комнатной температуре. Наносили различные концентрации клеток микроорганизмов, суспендированных в буфере для проведения имму-, нохроматографического анализа, в отверстие для внесения образца теста (рисунок 1). Объем вноси- , мой пробы составлял 120 мкл. Время анализа составило 20 мин. Регистрацию результатов проводили как визуально, наблюдая образование окрашенных' зон,так и'с помощью видеоцифрового анализатора "Рефлеком" (Россия), который позволял измерять окрашенность зон иммунохроматограммы в условных • единицах. Положительным результатом, после нанесения образца, считали появление в аналитической зоне различимой глазом окрашенной полосы вишнево-красного цвета, что соответствовало

показаниям прибора "Рефлеком" не менее (0,9: усл.-'ед., а также появление окрашенной'поло контрольной зоне. Среднеквадратическое откл ние показаний прибора рефлектометра при 95°/ верительной вероятности не превышало 0,2 усг При нанесении отрицательного контроля,'или г . рологичных микроорганизмов^ на поверхности литической мембраны индикаторного>элемент; являлась одна, окрашенная полреа'в контрол! ( зоне. Измерения для каждой концентрации мик ных клеток и отрицательных контролей прово/ пятикратно, вычисляли среднее арифметиче-. показаний прибора.

Результаты и обсуждения Иммунохроматографический тест для выя нйя сальмонелл представляет собой пластикс оправу с двумя отверстиями (рис.1); Одно из от стий служит для нанесения анализируемого об ца, другое доя наблюдения результатов анал Внутри оправы помещена сборка из нескольки: ристых мембран с высушенными иммунокомпо тами. На одной из мембран были нанесены конъ ты наночастиц коллоидного золота с поликлон ными антителами ксальмонеллам. В аналитичес зону теста наносири поликлональные антите сальмонеллам в виде узкой линии. Жидкая пр . содержащая сальмонеллы, в буфере анализа рас ряет иммунокомпоненты в мембранах и взаимо, ствует с ними на аналитической мембране. В рез тате этого,взаимодействия, на аналитической ъ бране образуются окрашенные полосы, свидет ствующие о наличии сальмонелл. Наночастицы лоидного золота и .их конъюгаты с антителами i ют яркую выраженную вишнево-красную окрас являются прекрасным маркером, хорошо види! глазом. Иногда для регистрации результатов ан за применяют приборы-рефлектометры.

Для удобства нами была предложена lui-оценки интенсивности окраски аналитической и трольной зон теста при визуальном наблюдс оператором: отрицательный результат анализа в образце отсутствуют клетки сальмонелл, л ибс присутствуют в концентрации ниже чувствител сти теста; положительный результат анализа ( в образце присутствуют клетки сальмонелл-с ка заметная окрашенная линия в аналитической з (++)-хорошо заметная окрашенная линия в ан; тической зоне; (+++) - интенсивная окрашенна? ния в аналитической зоне. Подробно принцип, ствия йммунохроматографических-тестов был* j сан ранее [3]. Для создания иммунохроматогрг : •ческого теста нами были применены кроличьи и к< , "пансальмонеллезные" антитела, содержащие цифические иммуноглобулины к антигенным.ре! : торамсоматическогоО-антигенаклетоксальмон j различных серогрупп. Результаты, полученж ; помощью теста для выявления сальмонелл, раз. | ных серогрупп приведены в таблице 1. Чувствие ' ность теста по отношению к сальмонеллам раз. ; ныхсерогруппзначительноотличается. Так, Hai лее чувствительным тест был. для культур! typhimurium (1 х105м.к./мл)- серогруппа В, а найме | чувствительным - 1х10-7 м.к./мл для S. anatum -серогруппа Е. . I

Визуальная оценка результатов имму.нохре р

тографическогоанализа, вцелом.кор'релирова _ i|

показаниями видеоцифрового рефлектометра - "F леком". Применение рефлектометрической per ;j рацииле увеличило чувствительности обнаружь сальмонелл, по сравнению с визуальным наблк |! нием результата оператором. Тем не менее, реф. томёт'рия позволяет уменьшить'такие факт || субъективности при оценке результата челове! s как освещенность рабочего места-, усталость опер ; ра или индивидуальные.особеннЬсти восприятия | тов и насыщенности линий иммунохроматограмм

Специфичность иммунохроматографйчеа j теста по отношению к некоторым другим микр< j ганизмам кишечной группы показана s таблиц! i

» Л

|

О • I х 10' 5x10" 1x10" i 5x10" м.к./мл

Рисунок 1. Внешнии вид теста после проведения иммунохроматографического анализа клеток S. typhimurium взятых в различных концентрациях. Стрелками указаны: 1- отверстие для внесения образца, (2- аналитическая зона, 3- контрольная зона

Как следует из экспериментальных данных нанесение на :,тест-полоску шигелл и эшерихий в концентрации 1 х107 м.к./мл не ¡ приводило к появлению окраски аналитической зоны иммунохроматографического теста. Холерная вакцина, содержащая холе,: роген-анатоксин й соматический О-антиген возбудителя холеры, также не дает перекрестных реакций с разработанным нами им-рмунохроматографическим тестом для выявления сальмонелл. ;i;V Итак, разработан чувствительный и специфичный иммуно-тхроматографический тест для выявления сальмонелл серогрупп А В С D Е. Его чувствительность не уступает тесту Singlepath® p-Salmonella производства фирмы Merck. Тест может быть при-f менен, по нашему мнению, в испытательных лабораториях при ~ выявлении микробной контаминации сырья и пищевых продуктов. Исключительная простота постановки анализа с помощью ¡'иммунохроматографических тестов позволяет использовать их ^'.лабораториях с низкой технической оснащенностью. Прямой I анализ экстракта гомогенатов пищевых продуктов методом им-¿¡мунохроматографии возможен только при чрезвычайно высоком гуровне контаминации продуктов или сырья сальмонеллами, что является редким случаем. Длительность такой схемы анализа,

включая пробоподготовку, не превышает одногочаса. Прсбопод-готовка предусматривает гомогенизирование продукта, экстракцию клётокбуфером анализа', фильтрацию или центрифугирование в мягки\условиях, а затем последующее нанесение филь- • -трата или супернатанта на иммунохроматографйчёскийте ' было показано нами ранее, [4]

та*минированнь1х сальмонеллами серогруппы В образцов сырья и продуктов питания в хлористо-ма^^врй'-рредв^й^еЯив 17- ; 18 ч. при температуре 37 °С и послед^ющййиммуйохррматргра-фический анализ позволяет выявитьдр.102,; Х;103:М)Ь/МГ1 сальмонелл, находившихся в исходных образцах. ¡Другая схемаобога-щения [2] при анализе проб сырья и продуктов содержащих сальмонеллы предусматривает применение вначале неселекгивных ■ сред (забуференнаяпептоннаявода, +37°С,21 ч),затем селек-тивных-средаРаппопорта-Василиадиса,(+41 °С, 21 ч)микроби-ологических сред для роста сальмонелл до конечной концентрации 106-107м.к./млспоследующим иммунохроматог'рафическим 1 анализом. Применениесхем обогащения позволяет существенно сократить время выявления сальмонелл'даже при невысокий микробной контаминации, а также повысить надежность анализа за счет включения иммунохимической стадии идентификации сальмонелл. '

Р-Е 3 К ) :'\ 1 [" '/51.' ММ А К V

Разработан i i i юпытан отечественный ишгунохроматофафггчрг-кнй тест для выявления сальмонелл серогрупп А, В: С. D, Е. Чувствительность теста находится в диапазоне ] О5 -10г м.к./мл для разли чных серофупп сальмонелл. Тест не дает перекрестных реакций с клетками шигелл, эшёрихий и антигенами возбудителя холеры и может быть применен в лабораториях при выявлении микробной контами-нянин гырья ипшцевых продуктов. .

It is developed and tested domestic lateral-flowtest Tor revealing Salmonella microbe cells serum types A, B, C, D, E. Sensitivity of the test is in a range of 105-10' microbe cell./ml for various Salmonella serum types. The test does ii'ot give cross reactions with microbe cells of a Shigella, Escherichia and antigens of a Vibrio cholera and can be applied in laboratories at revealing 'microbe contamination of raw material and rnnrktufT

Ключевые слова выделены подчеркиванием

'г Интенсивность окрашивания зон

теста, определенная

If 1-Серо- Наименование Чувствитель- рефлектометрически,

Fj труппа микроорганизма ность, м.к./мл усл. ед. '

Аналитическая Контрольная .

зона зона

I А S. paratyphi А 225 5x10е ,;,.. ' 1.3 15.3

г S. paratyphi В yava 04 №4839 1xT0! 1 3 " 14.2

fe S. paratyphi В 4219 5x10* 1,2 13.0

I В S. typhimurium 04 №4836 1x10: 1,1 12.7

I. S. typhimurium 1x10" 1.0 13.5

S. heidelberg 1150 1x10s 1.0 . 12.1

t ■ С S. choleraesuis 595 5x10е 1.0 14,9

с S. newport 1x10' I 1.0 13,3

D S. typhi 33 1x10' I 0,8 ••'." 14,1

г D S.'enteritidis 17 1x10= | ■ 0,8 12,4

Е S. anatum 161 1x10' | 0,7 13,0 .

Ш кТаблица 1. Выявление клеток сальмонелл иммунохроматографическим w • методом

ч-

. Интенсивность окрашивания зон теста

Наименование микроорганизма Визуальная оценка Рефлектометрические измерения, усл. ед.

Аналитическая зона Контрольная зона Аналитичес кая зона Контрольная зона'

Отрицательный контроль 0 +++ 0 11,3

Sh. sonnei 0 +++ 0.4 11,3

Sh. dysenteriae 214662 0 +++ 0 ■13,5

Sh. flexneri 1a 8516 0 +++ 0 10,9

Sh. flexneri 2a 1270 0 +++ 0,4 10,7

Sh. flexneri 3a 1289 0 +++ 0,4 11,8

Sh. flexneri 4a 1032 0 ■ , 0,4 12,9

Sh. flexneri 5x1'' 199 0 +++ 0.4 12,4

Sh. flexneri 6 0 - + +.+ 0 11.7

E. coli штамм W ATCC9637 0 Т + + 0 12.5

Вакцина холерная. 1,0 м кг/мл 'о - +++ 0 12,7

Таблица 2. Результаты оценки специфичности иммунохроматографического теста ' '

Литература

1. Мерзленко О.В. Как получить мясо от бройлеров свободное от бактерий и антибиотиков,- Ветеринария и кормление, 2006 №5, с 10, ■ 2. "Методы выявления патогенных микроорганизмов с использованием иммунохроматографических экспресс- ' тестов производства Merck' (Германия)". Методические рекомендации. №24ФЦ/976. Введены 04 марта 2004 г.

3. Пособие "Современные методы индикации патогенов .и токсинов в объектах окружающей среды и диагностики социально-значимых инфекционных заболеваний для обеспечения химической и биологической безопасности". Под ред. В.Н. Злобина, М„ "ФГУП "ГосНИИБП",' 2010 г. с.216

4. Светличкин В'.В.,Кононенко А.Б.,' Ярков'С.Л., Стрелков A.A., Кондратьева' М.В., ПанЮшкин А.Н, Тест-системы и технические средства ускоренного контроля безопасности и • качества объектов ветеринарного надзора. Российский журнал "Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" 2010, №1 (3) с. 26-32 .

5. Яркое -С..П., Третьяков С.И., Башарова Л.А., Злобин В.Н; Индикация возбудителей особо опасных заболеванйй с помощью .. ■ иммунохроматографии и видеоцифрового анализа. Вестник Российской АМН, 2007, №12, с.22-26.

ТЕРИН/4РИЯ

( ПРАКТИКА:

ОПЫТ, ПРОБЛЕМЫ, ПЕРСПЕКТИВЫ

'ИЙФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

10

14

18

21

26

ИНВАЗИОННЫЕ БОЛЕЗНИ 36

АКУШЕРСТВО, ГИНЕКОЛОГИЯ

ЗООГИГИЕНА, САНИТАРИЯ, ЭКОЛОГИЯ

НЕЗАРАЗНЫЕ БОЛЕЗНИ 49

ФАРМАКОЛОГИЯ *и токсикология

ИЗ ИСТОРИИ ВЕТЕРИНАРИИ 62

ЕЖЕМЕСЯЧНЫЙ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ ЖУРНАЛ

УЧРЕЖДЕН МИНИСТЕРСТВОМ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ И AHO "РЕДАКЦИЯ ЖУРНАЛА "ВЕТЕРИНАРИЯ"

ЖУРНАЛ ОСНОВАН В МАЕ 1924 г. МОСКВА

В НОМЕРЕ

Сергеев В.А., Яременко H.A., Авилов В.М., Аксенов A.M., Шарнин В.Н., Куриннов В.В. Ликвидация классической чумы свиней с помощью гипервакцинации

' Макаров В.В., Сухарев О.И., Литвинов р.Б. Система "Клещи Ornithodoros-вирус" при африканской чуме свиней (часть 1) Гавриков A.B., Гараничева A.B., Воронина И.А., Оборин А.Е., Вустин М.М., Лиэпа В.Л. Особенности антимикробного действия эндометромага-Био* при эндометрите коров Юшкова Л.Я., Амироков М.А., Юдаков A.B., Балыбердин Б.Н. Средние затраты времени на оказание ветеринарных услуг

Закутский Н.И., Коломыцев A.A., КнизеА.В., Нестеров Е.А.

Особенности блютанга (эпизоотология, профилактика и меры борьбы) (Обзор литературы)

Донник И.М., Татарчук А.Т., Водиченков Ю.Ф.,Трофимов О.В., Пак И.В., Сивков Г.С., Деркач C.B. Цитогенетические и протеомные подходы к поиску маркеров лейкоза крупного рогатого скота

Беспятых О.Ю., Березина Ю.А., Бельтюкова З.Н., Домский И.А., Кокорина А.Е. Иммунобиохимические показатели крови песца ^ после вакцинации против чумы плотоядных на фоне янтарной кислоты

Кулибеков Ф.М., Макаев Х.Н. Средство для ускоренной диагностики листериоза

Мамедов И. Возрастная и сезонная динамика эймериозной ^ инвазии у крупного рогатого скота Нахчыванской Автономной Республики Азербайджана

Беспалова Н.С., Мыздриков Д.Г. Гомеостаз крови собак, повторно переболевших бабезиозом

Данилов М.С., Воробьев А.Л. Фитотерапия при маститах у коров Кротов Л.Н. Комплексная терапия коров при гнойно-катаральных эндометритах

Рубченков П.Н., Захарова Л.Л., Жоров Г.А. Применение сорбционно-детоксикационных технологий при ведении животноводства

Копылов С.Н. Вариабельность ритма сердца у коров разного возраста

Завалишина С.Ю. Тромбоцитарная активность у новорожденных телят при железодефицитной анемии

Уша Б.В., Концевова A.A., Смирнов A.M., Светличкин В.В.,

Артемов A.B., Ярова O.A., Ярков С.П. Перспективность

различных направлений нанобиотехнологии для ветеринарии Черницкий А.Е., Близнецова Г.Н. Применение тилоколина-АФ при бронхопневмонии телят

Антипов В.А., Гринь В.А., Родионова Т.Н., Москвичева Д.О.

Эффективность селенолина при беломышечной болезни новорожденных телят

Тремасов М.Я., Папуниди К.Х., Иванов A.B., Белецкии С.О.

Отравление гусей фураданом

Василевич Ф.И., Гулюкин М.И., Успенский В.А. К.И. Абуладзе (к 100-летию со дня рождения)

-30

32

38

41 44

46

51

55

57

60

IN THE fSSUE

3 Sergeev V.A., Yaremenko N.A., Avilov V.M., AksenovA.M., Sharnin V.N., Kurinnov V.V. Eradication of classical swine fever by use of hypervaccinatlon PRACTICE: EXPERIMENT, PROBLEMS, PERSPECTIVES 10 Makarov V.V., Sukharev O.I., LitvinovO.B. Ornithodoros

tick-virus system at African swine fever (part 1) 14 Gavrikov A.V., Garanicheva A.V., Voronina I.A., Oborin A.E., Vustin M.M., Liepa V.L. Features of antimicrobial action Endometromag^-Bio for the treatment of endometritis 18 Yushkova L.Ya., Amirokov M.A., Yudakov A.V.,

Balyberdin B.N. Average time expence on veterinary renders sewices INFECTIOUS DISEASES

21 Zakutsky N.I., Kolomytsev A.A., Kneize A.V., Nesterov E.A.

Characteristic properties df bluetongue (epizootology, prophylaxis and control measures) (Review of literature) 26 Donnik J.M., Tatarchuk A.T., Vodichenkov Yu.F., Trofimov O.V., Рак I.V., SivkovG.S., Derkach S.V. Cytogenetic and proteomic approaches for search of bovine leukosis markers 30 Bespyatykh O.Yu., Berezina Yu;A., Beltyukova Z.N.,

Domsky I.A., Kokorina A.E. Immunobiochemical indicators . -®f blood of a polar fox after vaccination against plague of carnivorous animals on background succinic asid 32 Kulibekov F.M., Makaev Kh.N. Facility for speed

diagnosis of listeriosis INVASIVE DISEASES -

36 Mamedov I. Age and seasonal dynamics Invasion

of eimeriiosis at horned cattle in farms of' Nakhchivan AR, in Azerbaijan

38 Bespaloya N.S., Myzdrikov D.G. Homeostasis of blood

of dogs repeatedly had been ill babesiosis OBSTETRICS, GYNECOLOGY

41 Daniiov M.S., Vorobyov A.L. Phitotherapy for treatment

mastitis of cows 44 Krotov L.N. Combined therapy of purulent-catarrhal

endometritis in cows ZOOHYGIENE, SANITATION, ECOLOGY

46 Rubchenkov P.N., Zakharova L.L., Zhorov G.A. The use

of sorption-detoxification technologies in livestock sector NONINFECTIOUS DISEASES

49 Kopylov S.N. Heart rate variability in cows of different ages 51 Zavalishina S.Yu. Platelet activity in newborn calves with iron deficiency anemia

PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY

53 Usha B.V., Kontsevova A.A., SmirnovA.M., Svetlitchkin V.V., Artemov A.V., YarovaO.A., YarkwS.P. Perspectives of the different aspects of nanobiotechnology for the veterinary medicine

55 Chernitskiy A.E., Bliznetsova G.N. Tylocolinum-AF

treatment of calves with bronchopneumonia 57 AntipovV.A., Grin V.A., RodionovaT.N., Moskvicheva D.O.

Efficiency of Selenolin at white muscle disease of newborn calves

60 Tremasov M.Ya., Papunidi K. Kh., IvanovA.V., BeletskyS.O.

Poisoning of geese with Furadan

62 FROM VETERINARY MEDICINE HISTORY

ШШЯ1Ш™ИШ1ЯШ«И«»1ШЯ»®11Я1»1!Я1ИГШ11»

•VETERINARY MEDICINE JOURNAL" printed in over 4 thousand copies and having subscribers in more than 40 countries worldwide, publishes advertisements at contractual prices. .. „. ■ For suggestions, please contact: "Vetermania journal, Voigogradskiy prospectus, 2, Moscow, 109316, Russia. Те I./fax: [phone].

© "Ветеринария", 2012

Главный редактор T.B. СТОЛЛЯР

Редакционная коллегия Ф.И. Василевич, Г.К. Волков, М.И. Гулюкин, A.B. Жаров, Д.И. Клейменов, Д.В. Колбасов, А.Г. Нежданов, Е.А. Непоклонов,

A.Н. Панин,

B.Т. Самохин, А.Я. Самуйленко, И.Г. Серегин, A.M. Смирнов, A.A. Стекольников A.B. Успенский,

Б.В. Уша, Ю.Н. Федоров

Редакция В.Н. Забелин, И.В. Кис, З.Г. Панкратова, В.Г. Строганова

Художественное и техническое редактирование Л.П.Титова

Подписано к печати 30.01.2012. Формат 70x100 )/16. Бумага офсетная № 1. Печать офсетная. Усл. печ. л. 5,2.

Тираж 2415 экз. Заказ 12 - 014.

Адрес редакции: 109316. Москва.

Волгоградский пр.. д. 2, офис 636, 637.

"Ветеринария": телефакс [phone]. e-mail: [e-mail]

С предложениями о размещении РЕКЛАМЫ

звоните по телефону [phone].

Редакция не несет ответственности за содержание рекламных объявлений. При перепечатке ссылка На журнал "Ветеринария" обязательна.

Отпечатано »типографии ООО "Группа "Море". 101898. Москва. Хохловский пер., л. 9; тел. [phone] e-mail: [e-mail]

ФАРМАКОЛОГИЯ И ТОКСИКОЛОГИЯ

i 619:615.281:546.57

ПЕРСПЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ НАПРАВЛЕНИЙ НАНОБИОТЕХНОЛОГИИ

ДЛЯ ВЕТЕРИНАРИИ

Борис Вениаминович Уша, д.в.н., академик РАСХН, декан Анна Алексеевна Концевова, к.в.н., ветеринарный врач ФГБОУ ВПО Московский государственный университет пищевых производств, belladonnas 1 @mail. ru Анатолий Михайлович Смирнов, д.в.н., академик РАСХН, директор Вячеслав Владимирович Светличкин, д.б.н., заведующий отделом Артем Валерьевич Артемов, аспирант Ольга Александровна Ярова, ветеринарный врач ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии, тел. [phone] Сергей Петрович Ярков, д.б.н., заведующий отделом ФГУП Государственный НИИ биологического приборостроения, государственный научный центр,

тел. [phone]

доказана перспективность.различных аспектов нанобиотехнологии в ветеринарии, связанная с разработкой «созданием лекарственных средств и биоцидов на основе кластерного серебра, экспрессных диагностичес-:систем с применением иммунохроматографических элементов с наночастицами коллоидного золота и етодов контроля остаточных количеств антибактериальных веществ в продукции животного происхождения 5использованием иммуномикрочиповой технологии. Ключевые слова: нанобиотехнология, лекарственное редство, кластерное серебро, дезинфектант, иммуномикрочиповая технология, сульфаниламиды, иммуно-эматографический метод.

Perspectives of the different aspects of nanobiotechnology for the veterinary medicine

B.V. Usha, A.A. Kontsevova, A.M. Smirnov, V.V. Svetlitchkin, A.V. Artemov, O.A. Yarova, S.P. Yarkov

he perspectives on the different aspects of nanobiotechnology in the veterinary science and medicine conserning a evelopment and creation of the drugs and biocides on a base of claster silver, express diagnostic systems with using ' immunochromatographic elements and nanoparticles of colloidal gold and control methods of the antibacterial ubstances residues in the production of animal origin with using the immunomicrochlp technology are demonstrated s paper. Key words: nanobiotechnology, drug, claster silver, disinfectant, immunomicrochip technology, sulfanamides, immunochromatographic method.

m

"SS

Современное развитие ветеринарной науки и практики немыслимо без достижений новых инновационных технологий, полученных в других областях знаний. Перспективными представляются направления, связанные с нанотехнологией и ее разделом -:нанобиотехнологией. Нанотехнология -¡область фундаментальной и прикладной науки и техники, имеющая дело с совокупностью теории и практики, методов исследований, а также производства и применения продуктов с задан'ной атомной структурой путем контролируемого манипулирования отдельными атомами и молекулами.

При использовании методов и средств на основе нанобиотехнологии проводят работы с нанограммовыми количествами элементов и молекул, включая молекулы нуклеиновых кислот и белка.

Различные аспекть! нанобиотехнологии в ветеринарии связаны с разработкой и соз-

данием лекарственных средств, диагностических систем, биоцидов и методов электронно-микроскопических и иммуноморфо-логических исследований. Эти направления в современной ветеринарии основаны на использовании уникальных свойств нанома-териалов и нанообъектов для конструирования, контроля и изменения биологических систем на наномолекулярном уровне.

Совместно с ООО "Фрактал - М" разработано лекарственное средство на основе кластерного серебра для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний и болезней печени животных.

Исследования показали, что препарат оказывает противовоспалительное, бакте-риостатическое и бактерицидное действие, способствует остановке мелких кровотечений, обладает вяжущим действием, нормализует моторную и секреторную функцию органов пищеварения, уменьшает процессы

I

53

Биохимические

показатели крови собак при использовании лекарственных на основе кластерного серебра

средств

Показатель

До лечения

19-й день лечения

30-й день после окончания лечения

Здоровые животные

Норма

Общий белок, г/л Альбумин, г/л Глобулин, г/л А/Г

Глюкоза, ммоль/л АсАТ, ед/л АпАТ, ед/л Коэф. де Ритиса ЩФ, МЕ/л

а-Амилаза, ед/л 1 Креатинин, мкмоль/л Билирубин, мкмоль/л общий прямой непрямой

74,13=1,58 22,33±0,46 51,8±1.32 0,55±0,01 2,04±0,04 56,61±1,13 82,43±£,47 0,68±0,02 120.72±3.62 90.97=25,82 99.71±1,98

4,05±0,04 0,15±0,002 3,90±0,03

66,86-? fn

30,15 36,71

¿X 0.75 1,01

0,92±0.01 4,77±0,08 39,81 ±0,95 • 52,62±1.47 0,604=0,02 62.73=1,25 1053,97^21.01 75,38+2.26

2.85±0.06 0,02±0,002 2,83±0,02

6S.09±1.45 31,81=0.89 36.28= 1.23 0,94=0,02 4,87+0,13 38,84±0,77 ' 57.53+1,72 0.67=0,01 61,03± 1.22 11 52.85±46.11 76.94±1.53

3,01=0.06 0

3,01±0,06

60.81=2,09 28.13=0,84 32.68=0.31 1,05=0.01 4,43±0.14 35,39+1,05 54,67+1.33 0,64±0.02 65.32+1.37 1021.53=38.81 75.62=2.27

3.15+0.06 0

3,15+0,05

55 - 79,2 25 - 33,0 24 - 37 0.89 - 1,04 3,8 - 5,7 23,8 - 45,1 29,8 - 70.5 0.42-0,97 27.0 - 112.8 395 - 1278 61-111

2.05-3.4 0-0,17 2.05-3,4

гниения и брожения в кишечнике, стимулирует секрецию печени и повышает тонус желчных путей (см. таблицу).

Как видно из представленных данных, после применения лекарственных средств на основе кластерного серебра биохимические показатели крови приходят в норму и практически соответствуют уровню здоровых животных, что также отмечается и на 30-е сутки после окончания лечения [2].

На основании полученных результатов разработаны и утверждены соответствующие методические пособия по применению кластерного серебра у животных при. патологии желудочно-кишечного тракта и печени. Поданы две заявки на изобретение.

Весьма перспективным представляется направление с применением наносеребра в качестве биоцидов, что является альтернативой использованию антибиотиков или дезинфектантов на основе различных химических соединений.

Показана возможность использования кластерного серебра для создания дезинфицирующих средств. Препараты кластерного серебра в концентрации 40 мг/л в течение 3-часового воздействия обеззараживали тест-объекты из различного рода плитки и резины, искусственно контаминирован-ные бактериями Staph, aureus и Е. coli.

Другим аспектом нанобиотехнологии в ветеринарии является применение ДНК-им-муномикрочиповой технологии для определения различных веществ у животных, в сырье и продукции животноводства: гормо-

нов, стимуляторов роста, онкомаркеров, (3-агонистов, стильбенов, синтетических стероидов. антибиотиков.-сульфаниламидов. В

частности получены данные о возможности использования указанной технологии для качественного и количественного определения сульфаниламидов и антибиотиков в меде [3].

При проведении исследований использовали тест-системы и сканирующий хеми-люминометр Randox evidence investigator. Технология evidence investigator Biochip Array предназначена для одновременной качественной и количественной оценки нескольких аналитов по одному образцу. В основе этого метода лежит технология Randox Biochip, представляющая собой твердофазный носитель (биочип) с размещенными на нем в определенном порядке тестовыми зонами, на которых иммобилизованы антитела. специфичные к различным сульфаниламидам и антибиотикам.

Биочип представляет собой керамическую пластину размером 9-9 мм2. Девять индивидуальных биочипов составляют муль-тичип. Технология основана на конкурентном хемилюминесцентном иммуноанализе.

Повышение концентрации антимикробных препаратов в образце приводит к .уменьшению связывания специального реагента - конъюгата, содержащего фермент пероксидазу и субстрат с хемилюминес-центной меткой, и таким образом наблюдают снижение интенсивности хемилюминес-ценции.

54

«

WKim

ÉÊiÈm

MM

SI

r~- E

Световой сигнал, генерируемый каждой из тестовых зон биочипа, определяется при помощи технологий получения цифрового изображения и сравнивается с полученной ; ранее калибровочной кривой. Концентрация Е аналита, присутствующего в образце, ¡вычисляется на основании калибровочной ; кривой. Конечный результат регистрируют с помощью хемилюминометра.

Время прохождения приборной реакции составляло от 10 до 20 мин^а весь анализ с пробоподготовкой - не более 1,5 - 2 ч.

Полученные данные подтверждают эффективность и перспективу внедрения/ иммуномикрочиповой технологии в практику с целью определения остаточных количеств антимикробных веществ в продукции животного происхождения при проведении государственного ветеринарного мониторинга.

На основании полученных результатов разработаны и утверждены соответствующие методические пособия по определению остаточных количеств антимикробных веществ а мёде, мясе, молоке и рыбе.

Другим направлением нанобиотехноло-гии в ветеринарии является разработка и внедрение экспрессных тест-систем контроля безопасности и объектов ветеринарного надзора (животноводческих и производственных помещений перерабатывающих предприятий, сырья и продукции животного происхождения, кормов) на основе иммунохроматографических индикаторных элементов с наночастицами коллоидного золота. Эти методы позволяют за короткий промежуток времени (от 30 мин до

4W-

2 ч) выявлять наличие патогенных возбудителей бактериальной и вирусной природы (в том числе, особо опасных инфекций), а также остаточные количества вредных веществ в продукции (гормоны, антибиотики, сульфаниламиды, токсины идр.) [1].

Нами проведены испытания отечественных тест-систем для определения сальмонелл, ботулинического и стафилококкового энтеротоксинов, а также трансгенных белков в объектах ветеринарного надзора.

Таким образом, проведенные исследо-! вания показали возможность и перспективность различных направлений нанобиотех-нологии для практического применения в ветеринарии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Светличкин В.В., Кононенко A.B., Ярков С.П. и др. Тест-системы и технические средства ускоренного контроля безопасности и качества объектов ветеринарного надзора /V Сб. ГНУ ВНИИВСГЭ "Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии". - М., 2010. № 1. С. 26 - 33.

2. Уша Б.В., Концевова A.A. Коррекция острой печеночной недостаточности (ОПН) у собак с помощью коллоидной взвеси кластерного серебра и желчи // Тезисы докл. Междунар. науч. конф. "Лекарственные препараты для животных" - М ■ ФГУ ВГНКИ, 2011. С. 150 - 152.

3. Ярова O.A., Светличкин В.В.. Михалева Л,П. Иммуномикрочиповая технология как экспресс-метод контроля за уровнем остаточных количеств антимикробных препаратов в меде // Матер. VIII Междунар. научно-пракгт. конф. "Живые системы и биологическая безопасность населения". - М.: МГУПБ, 2010. С. 221, 222.

УДК 619:577.1:616.24-002.153:636.2-053.81

ПРИМЕНЕНИЕ ТИЛОКОЛИНА-АФ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ ТЕЛЯТ

Антон Евгеньевич Черницкий, к.б.н.,"старший научный сотрудник, [e-mail] ' Галина Николаевна Близнецова, д.б.н., заведующая лабораторией ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии, тел. [phone]

Препарат тилоколин-АФ в дозе 0,05 мл/кг массы тела эффективен при лечении телят, больных бронхопневмонией^ бактериальной этиологии, и может, быть рекомендован для применения в крупных животноводческих хозяйствах. Ключевые слова: тилоколин-АФ, бронхопневмония, телята, конденсат выдыхаемого воздуха.

Tyiocolinum-AF in treatment of calves with bronchopneumonia

A.E. Chernitskiy, G.N, Bliznetsova

Drug' Tylocolinum-AF in a dose of 0,05 ml per kg of body weight Is effective in treatment of calves with bronchopneumonia of bacterial etiology, and can be recommended for using in a big cattle farm Key words: Tylocolinum-AF, bronchopneumonia, calves, exhaled breath condensate.

55