Разработка прототипа ДНК-вакцины для иммунотерапии гепатоцеллюлярной карциномы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Морозов, Алексей Владимирович

• Морозов, Алексей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Морозов, Алексей Владимирович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ И ЦЕЛЬ РАБОТЫ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Первичные злокачественные опухоли печени.

1.1.1 Класси фикация гепатом.

1.1.2 Этиологические факторы.

1.1.3 Диагностика ГЦК.

1.1.4 Современные подходы, применяемые при лечении печени, пораженной ГЦК.

1.2 Альфа-фетопротеин.

1.2.1. История открытия АФП.

1.2.2. Регуляция синтеза АФП.

1.2.3. Генетические варианты АФП.

1.2.4. Структура и функции АФП.

1.2.5. Мембранные рецепторы.

1.2.6. Возможные объяснения экспрессии АФП клетками опухоли

1.2.7. Клеточный и гуморальный иммунный ответ к АФП у больных ГЦК и здоровых доноров.

1.3 ДНК-вакцины.

1.3.1 Введение.

1.3.2 История.

1.3.3 Механизм развития иммунного ответа при ДНК-вакцинации.

1.3.3.1 26Б протеасома.

1.3.3.2 Образование антигенных пемтидов.

1.3.4 Факторы, влияющие на индукцию иммунного ответа.

1.3.5 Стратегии усиления иммунного ответа.

1.3.6 Клинический опыт использования ДНК-вакцин.

1.3.7 ДНК-вакцины, кодирующие АФП.

1.4 Орнитин декарбоксилаза.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Оборудование и реактивы.

2.1.1 Оборудование.

2.1.2 Реактивы.

2.1.3 Ферменты.

2.1.4 Питательные среды.

2.1.5 Буферы.

2.1.6 Антитела.

2.2 Животные.

2.3 Клеточные линии и условия их культивирования.

2.3.1 Клеточные линии.

2.3.2 Условия культивирования клеток.

2.4 Антигены.

2.5 Векторы.

2.5.1 Конструирование вектора pAFP.

2.5.2 Конструирование вектора pAFPODCsignal.

2.5.3 Создание плазмид pAAFP и pAAFPODCsignal.

2.5.4 Получение векторов pAAFPCAG и pAAFPLCAG.

2.5.5 Использованные праймеры.

2.5.6 Получение компетентных клеток.

2.6 Трансфекция и Вестерн блоттинг.

2.6.1 Трансфекция.

2.6.2 Лизирование клеток.

2.6.3 Электрофорез в полиакриламидном геле.

2.6.3.1 Электорфорез в денатурирующих условиях.

2.6.3.2 Электрофорез в не денатурирующих условиях (Нативный ПААГ).

2.6.4 Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану.

2.6.5 Вестерн блоттинг.

2.7 Анализ культуральной жидкости трансфицированных клеток.

2.8 Изучение протеасомной деградации белков и их стабильности.

2.9 Иммунофлюоресценция.

2.9.1 Анализ скорости деградации АФП с помощью иммунофлюоресценции.

2.9.2 Двойная иммунофлюоресценция.

2.10 Получение модели перевиваемой гепатомы.

2.11 Иммуногистохимия.

2.12 Получение новых клеточных линий.

2.13 Иммунизация мышей ДНК-вакцинами.

2.14 Компьютерные программы.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1 Эксперименты in vitro.

3.1.1 Дизайн и создание ДНК-вакцин.

3.1.2 Анализ экспрессии рекомбинантных белков в трансфицированных клетках.

3.1.3 Анализ секреции рекомбинантных белков из трансфицированных клеток.

3.1.4 Анализ олигомеризации рекомбинантных белков в клетках.

3.1.5 Анализ периода полураспада рекомбинантных белков в клетках

3.1.6 Анализ эффективности протеасомной деградации рекомбинантных белков.

3.1.7 Локализация рекомбинантных белков в трансфицированных клетках.

3.1.8 AFPODCsignal накапливается в Эндоплазматическом Ретикулуме (ЭПР).

3.1.9 Создание векторов pAAFPCAG и pAAFPLCAG.

3.1.10 Анализ вероятных изменений структуры С-концевых областей модифицированых белков pAAFPCAG и pAAFPLCAG.

3.1.11 Введение ключевых аминокислот дегрона ОДК на С-конец AAFP не влияет на скорость его деградации.

3.2 Эксперименты in vivo.

3.2.1 Создание модели перевиваемой гепатомы у мышей линии C57BL/6.

3.2.1.1 Определение оптимального количества вводимых клеток Нера 1-6, вводимых животным.

3.2.1.2 Самцы линии C57BL/6 сильнее подвержены развитию опухоли после перевивки клеток Нера 1-6, чем самки.

3.2.1.3 Клетки образовавшихся у животных опухолей активно экспрессируют АФП.

3.2.2 Иммунизированные мыши эффективно вырабатывают антитела против АФП.

3.2.3 ДНК вакцинация полученными конструкциями не способствует регрессии или замедлению роста опухоли в терапевтическом эксперименте.

3.2.4 Предварительная вакцинация мышей pAAFPODCsignal способствует значительному замедлению роста опухоли у животных.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

6. БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка прототипа ДНК-вакцины для иммунотерапии гепатоцеллюлярной карциномы»

Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) - наиболее распространенная первичная злокачественная опухоль печени. Частота появления ГЦК в России составляет 1-5 случаев на 100000 населения в год, однако, при наличии у больных цирроза печени и у носителей вирусов гепатитов В и С, риск развития гепатомы резко возрастает.

К современным методам лечения ГЦК относятся: резекция, трансплантация печени, транс артериальная химоэмболизация, гормональная терапия, криохирургия. К сожалению, ни один из вышеупомянутых методов не является достаточно эффективным, особенно на поздних стадиях заболевания. В этой связи, выявление новых подходов для профилактики и лечения больных остается крайне актуальным.

Характерной особенностью большинства ГЦК является активная экспрессия клетками опухоли альфа-фетопротеина (АФП). АФП - белок, который в норме активно синтезируется только в период внутреутробного развития плода [1]. Таким образом, будучи онко-фетальным белком АФП может служить маркером ГЦК и мишенью для противоопухолевой терапии. При этом создание вакцины против ГЦК на основе АФП представляется наиболее перспективным подходом. Важно отметить, что стандартные методики вакцинации в случае противоопухолевой терапии, как правило, оказываются не достаточно эффективными ввиду того, что в результате иммунизации наблюдается стимуляция гуморального (Тх2) иммунного ответа при этом не происходит специфической активации С08+ Т-лимфоцитов способных разрушать опухолевую ткань. Поэтому результаты экспериментов по вакцинации больных ГЦК пептидами АФП не принесли ожидаемых результатов.

Одним из подходов к решению этой проблемы может быть создание ДНК-вакцины, кодирующей АФП. Важно отметить, что для стимуляции клеточного (Тх1) иммунного ответа необходимо также обеспечить протеасомную деградацию рекомбинантного белка. В течение последних 10 лет в ряде стран, но не в России, был продемонстрирован эффект усиления клеточного иммунного ответа против АФП при использовании ДНК-вакцин кодирующих АФП и производные [2-5]. Однако, в этих работах искусственного полноценного направления химерных белков на деградацию в протеасоме обеспечено не было. Интересно отметить, что одним из механизмов обеспечения протеасомной деградации рекомбинантных белков может быть создание векторов кодирующих химерный белок: сам белок-антиген с соклонированной к его С-концу орнитин декарбоксилазой или ее частью.

Орнитин декарбоксилаза (ОДК) - короткоживущий регуляторный белок млекопитающих, играющий значительную роль в клеточном цикле полиаминов. Выполнив свою функцию, ОДК быстро деградирует в протеасоме по убиквитин независимому пути. При этом, быстрая направленная протеасомная деградация ОДК обеспечивается наличием на С-конце белка 37 аминокислот известных как деградационный сигнал. Недавно нами было показано смещение иммунного ответа против обратной транскриптазы ВИЧ-1, в сторону Тх1 ответа. При этом была использована ДНК-вакцина, кодирующая ген обратной транскриптазы с соклонированным геном одк, а также для уменьшения вероятности возникновения аутоиммунных реакций, сигнальной (деградационной) последовательностью одк [6].

Целью данной работы является применение этого подхода для обеспечения стимуляции специфического клеточного (Txl) иммунного ответа против альфа-фетопротеин (АФП) экспрессирующих клеток - клеток гепатомы, т.е. попытка создания вакцины против ГЦК. Задачей данной работы было создание серии ДНК-вакцин, кодирующих АФП мышей и деградационный сигнал ОДК, а также оценка их протективных и лечебных свойств in vitro и in vivo.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Первичные злокачественные опухоли печени

Первичные опухоли печени (гепатомы) составляют до 3% злокачественных новообразований в печени; остальные случаи возникновения опухоли этого органа представляют собой метастазы злокачественных новообразований другой локализации [7]. Среди первичных опухолей печени диагностируются несколько форм, отличающихся по своим проявлениям и этиологии.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Морозов, Алексей Владимирович

5. ВЫВОДЫ

1) Показано, что отсутствие экспортационного сигнала и наличие дегрона орнитин декарбоксилазы на С-конце AAFPODCsignal - обеспечивают эффективную протеасомную деградацию рекомбинантного белка.

2) Введение ключевых аминокислот дегрона орнитин декарбоксилазы на С-конец AAFP не влияет на скорость его деградации.

3) Создана перевиваемая модель гепатомы на мышах линии C57BL/6.

4) Выявлено, что терапевтическая иммунизация мышей ДНК-вакцинами не способствует супрессии роста имеющейся опухоли.

5) Установлено, что профилактическая вакцинация вектором pAAFPODCsignal приводит к преодолению иммунологической толерантности и стимуляции иммунного ответа против альфа-фетопротеина, что обеспечивает значительное замедление роста гепатоцеллюлярной карциномы у мышей.

6. БЛАГОДАРНОСТИ

В первую очередь я хотел бы выразить глубокую признательность моему руководителю д.б.н. профессору Карпову Вадиму Львовичу, за поддержку, всестороннюю помощь в работе и организации проведения исследований, за ценные советы и комментарии, за понимание и терпение, а главное за веру в положительный исход этой работы.

Кроме того, мне хочется поблагодарить целый ряд высококлассных профессионалов в разных областях науки, помогавших мне.

В первую очередь я хотел бы поблагодарить моего папу д.б.н. Морозова Владимира Алексеевича, который несмотря на некоторые черты моего характера, нерасполагающие к этому, ценой больших усилий и огромных затрат времени заложил фундамент меня как самостоятельного ученого и привил мне основные навыки работы в лаборатории. При этом, благодаря его усилиям я приобрел умение правильно мыслить, планировать эксперимент и интерпретировать полученные результаты. Его вмешательство неоднократно обеспечивало успешное решение многих сложных вопросов и во много раз ускоряло продвижение работ.

Я также хотел бы от души поблагодарить к.б.н. Астахову Татьяну Михайловну за неоценимую помощь во всех без исключения экспериментах на животных, за поддержку в трудные минуты, когда в процессе экспериментов возникали сложные ситуации, требующие неординарного разрешения; за многочасовые дискуссии о роли АФП в организме, в опухолях и в моей работе, и конечно за помощь на заключительном этапе подготовки диссертации.

Я также очень признателен д.б.н. Тимофееву Андрею Викторовичу за большую помощь на начальном этапе работы, интересные дискуссии и активное вовлечение меня в изучение АФП. Кроме того, я хотел бы поблагодарить д.б.н. Борисову Татьяну Константиновну за плодотворное сотрудничество и большую помощь в изучении иммунного ответа у животных, вызванного ДНК-вакцинацией. Я также очень хотел бы высказать слова благодарности д. Иохиму Деннеру за предоставленные мне возможности делать часть работы в его лаборатории в Институте Роберта Коха и многочисленные полезные обсуждения. Я хотел бы также сказать спасибо д. Робину Вайсу назвавшего меня однажды: «Морозов младший», что определило мой дальнейший жизненный путь. И конечно д. Роберту Галло за предоставленную возможность учиться и работать в Институте Вирусологии Человека и замечательный бейсбольный матч, в котором, не смотря на поражение «Ориолов», я понял, как надо болеть и как надо работать, чтобы достигать поставленных целей. Я хочу также поблагодарить Карпову Ярославу за ее время, потраченное на обучение меня методам иммуногистохимии, интересные советы и предложения. И выразить признательность Бульдяевой Тамаре Васильевне, Люпиной Юлии Вячеславовне, Гореловой Вере Сергеевне, Абатуровой Светлане Борисовне и Столярову Сергею Дмитриевичу за теплый прием и доброжелательное отношение.

В заключении, я хотел бы выразить слова благодарности коллективу лаборатории структуры и функции хроматина Института Молекулярной Биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, а также коллективу Р13 Института Роберта Коха за дельные советы, хорошее отношение и готовность помочь. Кроме того я очень признателен коллективу вивария Института Биологии Развития им. Н.К. Кольцова РАН, и в частности его заведующему Подмареву Виктору Ивановичу за то, что он всегда шел нам навстречу. Наконец я также очень благодарен д.б.н. Прасолову Владимиру Сергеевичу за помощь в организации работы в клеточном блоке лаборатории биологии клетки Института Молекулярной Биологии им. В.А. Энгельгардта РАН.

Все высказанные благодарности были бы неполными без слов признательности моей маме Морозовой Любови Александровне поддерживавшей меня на всем этом трудном пути и возвращавшей мне веру в себя в минуты, когда в силу разных обстоятельств мне было непросто ее сохранять.

Посвящается памяти Морозова Алексея Ивановича (1928-2009).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Морозов, Алексей Владимирович, 2011 год

1. Blair J.1., Carachi R., Gupta R., Sim F.G., McAllister E.J., Weston R. "Plasma alpha fetoprotein reference ranges in infancy: effect of prematurity." (1987). Arch. Dis. Child. 62 (4): 362-369.

2. Tian G., Yi J., Xiong P., "Specific cellular immunity and antitumor responses in C57BL/6 mice induced by DNA vaccine encoding murine AFP" (2004) Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 3(3):440-443.

3. Wang X.P., Liu G., Song A., Li H.Y., Liu Y. "Antitumor immunity induced by DNA vaccine encoding alpha-fetoprotein/heat shock protein 70" (2004) World J. Gastroenterol. 10(21):3197-3200.

4. Lan Y., Li Y., Liang Z., Chen M., Peng M-L., Tang L., Ни H., Ren H. "A DNA vaccine against chimeric AFP enhanced by HSP70 suppresses growth of hepatocellular carcinoma" (2007) Cancer Immunol. Immunother. 56:1009-1016.

5. Kumar V., Fausto N., Abbas A. (editors). Robbins & Cotran Pathologic Basis of Disease (2003) (7th ed.). Saunders, p. 914-917.8. "Cancer". World Health Organization. February (2006).

6. Lai C.I., Lau J.Y.N., Wu P.C., Hui W.M., Lai E.S.C., Fan S.T., Ngan H., Lin H.J. "Subclinical hepatocellular carcinoma in Hong Kong Chinese". (1992) Oncology 49:347-53.

7. Lai C.L., Lam K.C., Wong K.P., Wu P.C., Todd D. "Clinical features of hepatocellular carcinoma: review of 211 patients in Hong Kong". (1981) Cancer 47:2746-2755.

8. Caselmann W.H. "Transactivation of cellular gene expression by hepatitis B viral proteins: possible molecular mechanism of hepatocarcinogenesis". (1995) J. Hepatol 22(Suppl 1): 34-37.

9. Twu J.S., Lai M.Y., Chen D.S., Robinson W.S. "Activation of protooncogene c-jun by the X protein of hepatitis B virus". (1993) Virology, 192(1): 346-350.

10. Yuen M.F., Wu P.C., Lai V.C.H., Lau J.Y.N., Lai C.L. "Expression of c-Myc, c-Fos and c-Jun in Hepatocellular carcinoma". (2001) Cancer, 91:106-112.

11. Gong G., Waris G., Tanveer R., Siddiqui A. "Human hepatitis C virus NS5A protein alters intracellular calcium levels, induces oxidative stress, and activates STAT-3 and NFkappa B". (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA; 98: 9599-9604.

12. Waris G., Huh K.W., Siddiqui A. "Mitochondrially associated hepatitis B virus X protein constitutively activates transcription factors STAT-3 and NF-kappa B via oxidative stress". (2001) Mol. Cell Biol. 21: 7721-7730.

13. Waris G., Turkson J., Hassanein T., Siddiqui A. "Hepatitis C virus (HCV) constitutively activates STAT-3 via oxidative stress: role of STAT-3 in HCV replication". (2005) J. Virol 79:1569-1580.

14. Bressac B., Kew M., Wands J., Ozturk M. "Selective G to T mutations of p53 gene in hepatocellular carcinoma from southern Africa". (1991) Nature 350:429-431.

15. Hsu I.C., Metcalf R.A., Sun T., Welsh J.A., Wang N.J., Harris C.C. "Mutational hotspot in the p53 gene in human hepatocellular carcinomas". (1991) Nature 350:427-428.

16. Morgan T.R, Mandayam S., Jamal M.M. "Alcohol and hepatocellular carcinoma". (2004) Gastroenterology 127(5):S87-S96.

17. Lee S., Lee H.J., Kim J.H., Lee H.S., Jang J.J., Kang G.H. "Aberrant CpG island hypermutation along multistep hepatocancerogenisis". (2003) Am. J. Pathol 163:13711378.

18. Татаринов Ю.С. „Обнаружение эмбриоспецифического а-глобулина в сыворотке крови больного первичным раком печени". (1964). Вопр. мед. химии 1:90-91.

19. Abelev G.I., Assecritova I.V., Kraevsky N.A., Perova S.D., Perevodchikova N.I. «Embryonal serum a-globulin in cancer patients diagnostic value» (1967) Int. J. of Cancer 2:551-558.

20. Abelev G.I. «Alpha-fetoprotein in ontogenesis and its association with malignant tumors». (1971) Adv. Cancer Res. 14:295-358.

21. Abelev G.I. «а-Fetoprotein as a marker of embryo-specific differentiations in normal and tumor tissues». (1974) Transplant. Rev. 20:3-37.

22. Ruoslahti E., Seppala M. «Alpha-Fetoprotein in cancer and fetal development» (1979) Adv. Cancer. Res. 29:276-346.

23. Tamaoki Т., Muira K., Lin Т., Banks P. «Oncodevelopmental Gene Expression (Fishman WH and Sell S)» (1976) Academic Press, New York pi 15-122.

24. Sala-Trepat J.M., Dever J., Sargent T.D., Thomas K., Sell S., Bonner J. «Changes in expression of albumin and alpha-fetoprotein genes during rat liver development and neoplasia» (1979) Biochemistry 18:2167-2178.

25. Sell S., Becker F.F., Leffert H.L., Watabe H. «Expression of an oncodevelopmental gene product (alpha-fetoprotein) during fetal development and adult oncogenesis». (1976) Cancer Res. 36:4239-4249.

26. Bergstad C.G., Czar B. «Demonstration of a new protein fraction in serum from the human fetus». (1956) Scand. J. Clin. Lab. Invest. 8:174-179.

27. Абелев Г. И., Авенирова 3. А. «Выделение преципитирующих антител к специфическим антигенам печени и гепатомы мышей». (1960) Вопр. онкологии. 6 (6): 57- 62.

28. Абелев Г. И., Цветков В. С. «Выделение специфического антигена перевивной гепатомы мышей методом иммунофильтрации». (1960) Вопр. онкологии. 6(6): 6272.

29. Mizejewski G.J. «Alpha-fetoprotein structure and function: relevance to isoforms, epitopes and conformational variants». (2001) Exp. Biol. Med. 226(5):377-408.

30. Godbout R., Ingram R.S., Tilghman S.M. «Fine-structure mapping of the three mouse alpha-fetoprotein gene enhancers». (1988) Mol. Cell. Biol. 8:1169-1178.

31. Wen P., Group E.P., Buzard G., Crawford N., Locker J. «Enhancer, repressor, and promoter specificities combine to regulate the rat alpha-fetoprotein gene». (1991) DNA cell Biol. 10:525-536.

32. Mathew J.K., Knoll B.J., Pilla A., Durham D., Sell S. «Discrete cell-type specific enhancer region 5' of the rat alpha-fetoprotein gene: identification of a highly active distal enhancer». (1994) J. Tumor Marker Oncol. 9:21-28.

33. Groupp E.R., Crawford N., Locker J. «Characterization of the distal alpha-fetoprotein enhancer, a strong, long distance, liver-specific activator». (1994) J. Biol. Chem. 269: 22178-22187.

34. Vacher J., Tilghman SM. «Dominant negative regulation of the mouse alpha fetoprotein gene in liver». (1990) Science 235:53-58.

35. Abelev G. I., Lazarevich N. L. «Alpha-Fetoprotein: Solved and Unsolved Problems. Review». (1996) McGill Journal Med. 2(2): 127-134.

36. Lazarevich N.L. «Molecular mechanisms of Alpha-fetoprotein gene expression». (2000) Biochemistry 65(1): 117-133.

37. Feuerman M.H., Godbout R., Ingram R.S., Tilghman S.M. «Tissue-specific transcription of the mouse alpha-fetoprotein gene promoter is dependent on HNF-1». (1989) Mol. Cell. Biol. 9:4204-4212.

38. Wen P., Locker J. «A novel hepatocytic transcription factor that binds the alpha-fetoprotein promoter-linked coupling element». (1994) Mol. Cell. Biol. 14:6616-6626.

39. Bois-Joyeux В., Danan J.L. «Members of CAAT/enhaneer-binding protein, hepatocyte nuclear factor-1 and nuclear factor-1 can differentially modulate the activities of rat alpha-fetoprotein promoter and enhancer». (1994) Biochem. J. 301:49-55.

40. Глейберман А. С., Храмкова H. И., Белошапкина Т. Д. «Структура печени как возможный фактор регуляции синтеза а-фетопротеина». (1979) Бюл. эксперим. биологии и медицины. 6:576-579.

41. Gleiberman A. S., Kuprina-Khramkova N. I., Rudinskaya-Beloshapkina Т. D., Abelev G. I. «Alpha-fetoprotein synthesis in relation to structural peculiarities in postnatal and regenerating mouse liver». (1983) Int. J. Cancer. 32:85-92.

42. Глейберман А. С. «Синтез альфа-фетопротеина в первичных культурах гепатоцитов взрослых мышей». (1982) Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1:5558.

43. Gleiberman A.S., Kudrjavtseva E.I., Sharovskaya Yu.Yu., and Abelev G.I. «Synthesis of alpha-fetoprotein in hepatocytes is co-ordinately regulated with cell-cell and cellmatrix interactions». (1989) Мої. Biol. Med. 6(2):95-107.

44. Kudryavtseva E.I, Engelhardt N.V. «Requirement of 3D extracellular network for maintenance of mature hepatocyte morphology and suppression of alpha-fetoprotein synthesis in vitro». (2003) Immunol. Lett. 90(1):25-31.

45. Andres O.K., Dziadek M., Tamaoki T. «Expression of methylation of the mouse alpha-fetoprotein gene in embryonic, adult, and neoplastic tissue». (1982) J. Biol. Chem. 257:5148-5153.

46. Miura K., Law S.W.T., Nishi S., Tamaoki T. «Isolation of alphafetoprotein messenger RNA from mouse yolk sac». (1979) J. Biol. Chem. 254:5515-5521.

47. Hammer R.E., Krumlauf R., Camper S.A., Brinster R.I., Tighman S.M. «Diversity of alpha-fetoprotein gene expression in mice is generated by a combination of separate enhancer elements». (1987) Science 235:53-58.

48. Tamaoki T., Fausto N. «Expression of the alpha-fetoprotein gene during development, regeneration, and carcinogenesis In: Stein G, Stein J, Eds. Recombinant DNA and Cell Proliferation». (1984) New York: Academic Press, pl45—168.

49. Petropoulos C., Andrews G., Tamaoki T., Fausto N. Alpha-fetoprotein and mRNA levels in liver regeneration and carcinogenesis. (1983) J. Biol. Chem. 258:4901-4906.

50. Chou J.Y, Savitz A.J. «AFP synthesis in transformed fetal rat liver cells». (1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 135:844—851.

51. Chou J.Y., Ito F., Evans G., Chiu F.J., Feldman M. «Alpha-fetoprotein biosynthesis and hepatocellular differentiation». (1982) Biochem. Biophys. Res. Commun. 108:15241530.

52. Lemire J.M., Fausto N. «Multiple alpha-fetoprotein RNAs in adult rat liver: Cell type-specific expression and differential regulation». (1991) Cancer Res. 51:4656-4664.

53. Wan Y.J.V, Chou J.Y. «Expression of the AFP gene in adult rat liver». (1989) Arch. Biochem. Biophys. 270:267-276.

54. Watanabe T., Jimenez-Molina J.J., Chou J.Y. «Characterization of a rat variant alpha-fetoprotein». (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 185:648-656.

55. Wan Y.J.Y., Jimenez-Molina J.J., Chou J.Y. «Fetal and variant AFPs are encoded by mRNAs that differ in sequence at the 5' end». (1988) Biochemistry 27:7269-7276.

56. Morinaga T., Sakai M., Wegmann T.G., Tomaoki T. «AFP messenger RNA in human embryonal carcinoma grown in nude mice and cloning of its complementary DNA». (1982) Oncodev. Biol. Med. 3:301-313.

57. Smalley J.R, Sarcione E.J. «Synthesis of alpha-fetoprotein by immature rat uterus». (1980) Biochem. Biophys. Res. Commun. 92:1429-1434.

58. Sarcione E.J, Zlotty M., Delluomo D.S., Mizejewski G.J., Jacobson H.I. «Detection and measurement of alpha-fetoprotein in human breast cancer cytosol after treatment with 0.4 M potassium chloride». (1983) Cancer Res. 43:3739-3741.

59. Sarcione E.J., Hart D. «Biosynthesis of alpha-fetoprotein by MCF-7 human breast cancer cell». (1985) Int. J. Cancer 35:315-318.

60. Seal W., Hanstein B., Brown M., Moore D.D. «Inhibition of estrogen receptor action by the orphan receptor SHP (short heterodimer partner)». (1998) Mol. Endocrinol. 12:1551-1557.

61. Resnick E.M., Schreihofer D.A., Periasamy A., Shupnik, M.A. «Truncated estrogen receptor product-1 suppresses estrogen receptor transactivation by dimerization with estrogen receptors a and p». (2000) J. Biol. Chem. 275:7158-7166.

62. Mizejewski G.J. «An apparent dimerization motif in the third domain of alpha-fetoprotein: Molecular mimicry of the steroid/thyroid nuclear receptor superfamily». (1993) Bioessays 15:427^132.

63. McLeod J.F., Cooke N.E. «The vitamin D-binding protein, alpha-fetoprotein, albumin multigene family:Detection of transcripts in multiply tissues». (1989) J. Biol. Chem. 264:21760-21769.

64. Naidu S., Peterson M.L., Spear B.T. «Alpha-fetoprotein related gene (ARG): a new member of the albumin gene family that is no longer functional in primates». (2010) Gene 449(l-2):95-102.

65. Carter D.C., He X.M. «Structure of human serum albumin». (1990) Science 249:302304.

66. Lufit A.J., Lorscheider F.L. «Structural analysis of human and bovine alpha-fetoprotein by election microscopy, image processing, and circular dichroism». (1983) Biochemistry 22:5978-5981.

67. Mizejewski G.J. «The phylogeny of alpha-fetoprotein in vertebrates: Survey of biochemical and physiological data». (1995) Crit. Rev. Eukaryot. Gene Expr. 5:281316.

68. Mizejewski G.J. «Alpha-fetoprotein as a biologic response modifier: Relevance to domain and subdomain structure». (1997) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 215:333-362.

69. Dudich I., Tokhtamysheva N., Semenkova L., Dudich E., Hellman J., Korpela T. «Isolation and structural and functional characterization of the two stable peptide fragments of human alpha-fetoprotein». (1999) Biochemistry 38:10406-10414.

70. Mizejewski G.J. «New insights into AFP structure and function: Potential biomedical applications». In: Mizejewski G.J. Porter I.H, Eds. «Alpha-Fetoprotein and Congenital Disorders». (1985) Orlando: Academic Press, p5-34.

71. Deutsch H.F. «Chemistry and biology of a-fetoprotein». (1991) Adv. Cancer Res. 56:253-312.

72. Энгельгардт H. В. «Синтез белков плазмы крови и альфа-фетопротеина в онтогенезе. Иммунологические аспекты биологии развития» Под ред. Н. Г. Хрущова. М. (1984): Наука С. 92.

73. Bakker J., De Mees C., Douhard Q., Balthazart J., Gabant P., Szpirer J., Szpirer C.« Alpha-fetoprotein protects the developing female mouse brain from masculinization and defeminization by estrogens». (2006) Nat. Neurosci. 9(2):220-226.

74. Murgita R.A., Tomasi T.B. «Suppression of the immune response by a-fetoprotein». (1975) J. Exp. Med. 141:269-286.

75. Semeniuk D.J., Boismenu R., Tam J., Weissenhofer W., Murgita R.A. «Evidence that immunosuppression is an intrinsic property of the alpha-fetoprotein molecule». (1995) Adv. Exp. Med. Biol. 383:25-269.

76. Toder V., Blank M., Nebel L. «Immunoregulatory mechanisms in pregnancy. Evidence for the alpha-fetoprotein-induced generation of suppressor cells in vitro». (1982) Transplantation 33( 1 ):9741 -9744.

77. Peck A.B., Murgita R.A., Wigze U.H. «Cellular and genetic restrictions in the immunoregulatory activity of AFP. II. AFP-induced supression of cytotoxic T-lymphocyte development» (1978) J. Exp. Med. 148(2):360-372.

78. Czokalo M., Wisniewski L. «Culture conditions modify the effects exerted by human fetal АФП on some lymphocyte functions in vitro». (1981) Exp.Pathol. 20(4):233-238.

79. Um S.H., Mulhall C., Alisa A., Ives AR, Karani J, Williams R, Bertoletti A, Behboudi S. Alpha-fetoprotein impairs APC function and induces their apoptosis (2004) J. Immunol. 173(3)1772-1778.

80. Murgita R.A., Goidl E.A., Kontianen S., Wigze U.H. «Alpha-Fetoprotein induces suppressor T cells in vitro». (1977) Nature 267(5608):257-259.

81. Aussel C., Masseyeff R. «Alpha-foetoprotein and oestrogen metabolism. I. Influence of alpha-foetoprotein on the metabolism of steroids by rat liver microsomes in vitro» (1976) Biochimie 58(6):737-741.

82. Aussel C., Fehlmann M «Effect of alpha-fetoprotein and indomethacin on arachidonic acid metabolism in P388D1 macrophages: role of leukotrienes». (1987) Prostaglandins Leukot. Med. 28(3):325-336.

83. Wang W., Alpert E. «Downregulation of forbol 12-myristate 13-acetate-induced TNF-alpha and IL-l-beta production and gene expression in human monocytic cells by human alpha-fetoprotein» (1995) Hepatology 22(3):921-928.

84. Cardoso E., Valdez G., Comini E., Matera L. «Effect of human A<DII on native and in vitro-stimulated NK activity» (1991) Clin. Lab. Immunol. 34(4):183-188.

85. Cohen B.L, Orn A, Gronvik K.O., Gidlund M., Wigzell H., Murgita R.A. «Suppression by alpha-fetoprotein of murine natural killer cell activity stimulated invitro and in vivo by interferon and interleukin 2». (1986) Scand. J. Immunol. 23(2):211-223.

86. Martinez J., Potier P. «Peptide hormones as prohormones». (1986) Trends Pharmacol. Sci. 7:139-147.

87. Campbell I.D, Bork P. «Epidermal growth factor-like modules». (1993) Curr. Opin. Struct. Biol 3:385-392.

88. Thim L, Moody A.J. «The primary structure of porcine glicentin (proglucagon)». (1981) Regul. Pept. 2:139-150.

89. Ohno S. «Many peptide fragments of alien antigens are homologous with host proteins, thus canalizing T-cell responses». (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:3065-3068.

90. Mizejewski G.J. «Mechanism of cancer growth suppresion of alpha-fetoprotein derived growth inhibitory peptides (GIP): comparison of GIP34 versus GIP8 (AOIlep). Updates and prospects». (2011) Cancers 3:2709-2733.

91. Mizejewski G.J. «Biological role of alpha-fetoprotein in cancer: prospects for anticancer therapy». (2002) Expert Rev. Anticancer Ther. 2:89-115.

92. Dudich E., Semenhova L., Gorbatova E., Dudich I., Khromykh L., Tatulov E., Grechko G., Sukhikh G. Growth-regulative activity of human alpha-fetoprotein for different types of tumor and normal cells. (1998) Tumor Biol. 19(l):30-40.

93. Yang X., Zhang Y., Zhang L., Zhang L., Mao J. «Silencing alpha-fetoprotein expression induces growth arrest and apoptosis in human hepatocellular cancer cell». (2008) Cancer letters 271:281-293.

94. Li M.S., Li P.F., He S.P., Du G.G., Li G. «The promoting molecular mechanism of alpha-fetoprotein on the growth of human hepatoma Bel7402 cell line». (2002) W. J. Gastroenterol. 8(3):469-475.

95. Leal J.A., Gangrade B.K., Kiser J.L., May J.V., Keel B.A. «Human mammary tumor cell proliferation: primary role of platelet-derived growth factor and possible synergism with human alpha-fetoprotein». (1991) Steroids 56:247-251.

96. Keel B.A., Eddy K.B., Cho S. «Synergistic action of purified alpha-fetoprotein and growth factors on the proliferation of porcine granulosa cells in monolayer culture». (1991) Endocrinology 129:217-225.

97. Yano H., Basaki Y., Oie S. Effects of IFN-alpha on alpha-fetoprotein expressions in hepatocellular carcinoma cells. (2007) J. Interferon Cytokine Res. 27:231-238.

98. Dudich E., Semenkova L., Dudich I., Denesyuk A., Tatulov E., Korpela T. «Alpha-fetoprotein antagonizes X-linked inhibitor of apoptosis protein anticaspase activity and disrupts XIAP-caspase interaction». (2006) FEBSJ. 273(16):3837-3849.

99. Torres J.M., Carracq N., Uriel J. «Membrane proteins from lymphoblastoid cells showing cross-affinity for alpha-fetoprotein and albumin. Isolation and characterization». (1992) Biochem. Biophys. Acta 1159:60-66.

100. Suzuki Y., Zeng C.Q.Y., Alpert E. «Isolation and characterization of a specific alpha-fetoprotein receptor on human monocytes». (1992) J. Clin. Invest. 90:1530-1536.

101. Naval J., Villacampa M.J., Goguel A.F., Uriel J. Cell type-specific receptors for AOn in a mouse T-lymphoma cell line. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:33013304.

102. Moro R., Tamaoki T., Wegmann T.G., Longnecker B.M., Laderoute M.P. «Monoclonal antibodies directed against a widespread oncofetal antigen: The alpha-fetoprotein receptor». (1993) Tumor Biol. 14:116-130.

103. Alava M.A, Sturralde M., Lampreave F., Pineiro A. «Specific uptake of alpha-fetoprotein and albumin by rat Morris 777 Hepatoma cells». (1999) Tumor Biol. 20:5264.

104. Tsuboi S., Taketa K., Nouso K., Fujikawa T., Manabe K., Ohmori H., Higashi T., Shiratori Y. «High level of expression of alpha-fetoprotein receptor in gastric cancers». (2006) Tumor Biol. 27:283-288.

105. Villacampa M.J., Moro R., Naval J., Failly-Crepin C., Lampreave F., Uriel J. «Alpha-fetoprotein receptors in a human breast cancer cell line». (1984) Biochem. Biophys. Res. Commun. 122:1322—1327.

106. Mizejewski G.J. «Review of the putative cell-surface receptors for alpha-fetoprotein: identification of a candidate receptor protein family» (2011) Tumor Biol. 32:241-258.

107. Illmensee K. and Mintz B. «Totipotency and normal differentiation of single teratocarcinoma cells cloned by injection into blastocysts». (1976) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73(2):549-553.

108. Абелев Г. И. «Эмбриональный сывороточный а-глобулин при злокачественных опухолях». (1970) Вестн. АМН СССР. 7:49-57.

109. Абелев Г.И. «Альфа-фетопротеин: Биология, биохимия, молекулярная генетика». (1994) Иммунология 3:4-9.

110. Elgort, D.A. and Abelev, G.I., «Immunoautoradiographic Assay of a-Fetoproteins of Animals and Humans». (1971) Byull. Eksp. Biol. Med. 2:118-120.

111. Abelev GI and Eraiser TL. Cellular aspects of alpha-fetoprotein reexpression in tumors. (1999) Seminars in Cancer Biology 9(2):95-107.

112. Кудрявцева E. И., Морозова О. В., Рудинская Т. Д., Энгельгардт Н. В. Нарушение межклеточных контактов и взаимодействия клеток с внеклеточным матриксом в быстрорастущей гепатокарциноме мышей (2001) Арх. патологии. 4:33-37.

113. Lee Н.С., Kim М., Wands J.R. «Wnt/Frizzled signaling in hepatocellular carcinoma». (2006) Front. Biosci. 11:1901-1915.

114. Thompson M.D., Monga S.P. WNT/beta-catenin signaling in liver health and disease. (2007) Hepatology 45(5): 1298-1305.

115. Thompson MD, Wickline ED, Bowen WB, Lu A, Singh S, Misse A, Monga SP. Spontaneous repopulation of (3-catenin null livers with P-catenin-positive hepatocytes after chronic murine liver injury. (2011) Hepatology находится в печати.

116. Zeng G., Apte U., Micsenyi A., Bell A., Monga S.P. «Tyrosine residues 654 and 670 in beta-catenin are crucial in regulation of Met-beta-catenin interactions». (2006) Exp. Cell. Res. 312:3620-3630.

117. Lee, К. C., Crowe, A. J., and Barton, M. C. «p53-mediated repression of alpha-fetoprotein gene expression by specific DNA binding». (1999) Mol. Cell. Biol., 19:1279-1288.

118. Hussain SP, Schwank J, Staib F, Wang XW, Harris CC. TP53 mutations and hepatocellular carcinoma: insights into the etiology and pathogenesis of liver cancer. (2007) Oncogene 26(15):2166-2176.

119. Bei R., Mizejewski G.J. «Alpha fetoprotein is more than hepatocellular cancer biomarker: from spontaneous immune response in cancer patients to the development of an AFP-based cancer vaccine». (2011) Current Mol. Med. 11(7) находится в печати.

120. Hogquist К.A., Baldwin Т.A., Jameson S.C. «Central tolerance: learning self-control in the thymus». (2005) Nat. Rev. Immunol. 5:772-782.

121. Toubi E., Shoenfeld Y. «Protective autoimmunity in cancer» (review). (2007) Oncol. Rep. 17: 245-51.

122. Livingston P.O., Ragupathi G., Musselli C. «Autoimmune and antitumor consequences of antibodies against antigens shared by normal and malignant tissues». (2000) J. Clin. Immunol. 20:85-93.

123. Bei R., Masuelli L., Palumbo C., Modesti M., Modesti А. «А common repertoire of autoantibodies is shared by cancer and autoimmune disease patients: Inflammation in their induction and impact on tumor growth». (2009) Cancer Lett. 281: 8-23.

124. Mizejewski G.J. «Alpha-fetoprotein (AFP)-derived peptides as epitopes for hepatoma immunotherapy: a commentary». (2009) Cancer Immunol. Immunother. 58: 159-170.

125. Butterfield L.H., Ribas A., Potter D.M., Economou J.S. «Spontaneous and vaccine induced AFP-specific T cell phenotypes in subjects with AFP-positive hepatocellular cancer». (2007) Cancer Immunol. Immunother. 56:1931-1943.

126. Behboudi S., Boswell S., Williams R. «Cell-mediated immune responses to alpha-fetoprotein and other antigens in hepatocellular carcinoma». (2010) Liver Int. 30: 521-526.

127. Nakata K., Muro T., Furukawa R., Kono K., Kusumoto Y., Ishii N., Munehisa T., Koji T., Nagataki S. «Presence of immunoglobulin G in human sera binding to alphafetoprotein» (1983) Oncodev. Biol. Med. 4:C101-104.

128. Asano T., Yamada N., Ochiai T., Sato H., Fukao T. «Presence of anti-AFP-antibody producing B cells in peripheral blood lymphocyte of hepatocellular carcinoma patient». (1984) Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi 81:278.

129. Butterfield L.H., Meng W.S., Koh A., Vollmer C.M., Ribas A., Dissette V.B., Faull K., Glaspy J.A., McBride W.H., Economou J.S. «T cell responses to HLA

130. A*0201-restricted peptides derived from human alpha-fetoprotein». (2001) J. Immunol. 166:5300-5308.

131. Liu Y., Daley S., Evdokimova V.N., Zdobinski D.D., Potter D.M., Butterfield L.H. «Hierarchy of alpha fetoprotein (AFP)-specific T cell responses in subjects with AOn-positive hepatocellular cancer». (2006) J. Immunol. 177:712-772.

132. Mizukoshi E., Nakamoto Y., Tsuji H., Yamashita T., Kaneko S. «Identification of alpha-fetoprotein-derived peptides recognized by cytotoxic T lymphocytes in HLA-A24+ patients with hepatocellular carcinoma». (2006) Int. J. Cancer 118:1194-1204.

133. Alisa A., Ives A., Pathan A.A., Navarrete C.V., Williams R., Bertoletti A., Behboudi S. «Analysis of CD4+ T-Cell responses to a novel alpha-fetoprotein-derived epitope in hepatocellular carcinoma patients». (2005) Clin. Cancer Res. 11:6686-6694.

134. Evdokimova V.N., Liu Y., Potter D.M., Butterfield L.H. « AFP specific CD4+ helper T-cell responses in healthy donors and HCC patients». (2007) J. Immunother. 30:425-437.

135. Shaw D.R, Strong T.V. «DNA vaccines for cancer». (2006) Front, in Biosci. 11:1189-1198.

136. Dunn G. P., Bruce A. T., Ikeda H., Old L. J., Schreiber R. D. «Cancer immunoediting: from immunosurveillance to tumor escape». (2002) Nat. Immunol. 3:991-998.

137. Wolff J. A, Malone R. W., Williams P., Chong W., Acsadi G., Jani A., Feigner P. L. «Direct gene transfer into mouse muscle in vivo». (1990) Science 247:1465-1468.

138. Hansen E., Fernandes K., Goldspink G., Butterworth P., Umeda P. K., Chang K. C. «Strong expression of foreign genes following direct injection into fish muscle». (1991) FEBS Lett. 290:73-76.

139. Jiao S., Williams P., Berg R. K., Hodgeman B. A., Liu L., Repetto G., Wolff J. A. «Direct gene transfer into nonhuman primate myofibers in vivo». (1992) Hum. Gene. Ther. 3:21-33.

140. Danko I., Wolff J. A. «Direct gene transfer into muscle». (1994) Vaccine 12:1499-1502.

141. Wolff J. A., Ludtke J. J., Acsadi G., Williams P., Jani A. «Long-term persistence of plasmid DNA and foreign gene expression in mouse muscle». (1992) Hum. Mol. Genet. 1:363-369.

142. Tang D. C., DeVit M., Johnston S. A. «Genetic immunization is a simple method for eliciting an immune response». (1992) Nature 356:152-154.

143. Williams R. S., Johnston S. A., Riedy M., DeVit M. J., McElligott S. G., Sanford J. C. «Introduction of foreign genes into tissues of living mice by DNA-coated microprojectiles». (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2726-2730.

144. Barry M. A., Johnston S. A. «Biological features of genetic immunization». (1997) Vaccine 15:788-1791.

145. Fynan E. F., Webster R. G., Fuller D. H., Haynes J. R., Santoro J. C., Robinson H. L. «DNA vaccines: protective immunizations by parenteral, mucosal, and gene-gun inoculations». (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:11478-11482.

146. Ross H. M., Weber L. W., Wang S., Piskun G., Dyall R., Song P., Takechi Y., Nikolic-Zugic J., Houghton A. N., Lewis J. J. «Priming for T-cell-mediated rejection of established tumors by cutaneous DNA immunization». (1997) Clin. Cancer Res. 3:21912196.

147. Cui Z., Baizer L., Mumper R. J. «Intradermal immunization with novel plasmid DNA-coated nanoparticles via a needle-free injection device». (2003) J. Biotechnol 102:105-115.

148. Klenchin, V. A., Sukharev S. I., Serov S. M., Chernomordik L. V., Chizmadzhev Y. A. «Electrically induced DNA uptake by cells is a fast process involving DNA electrophoresis». (1991) Biophys. J. 60:804-811.

149. Sukharev, S. I., Klenchin V. A., Serov S. M., Chernomordik L. V., Chizmadzhev Y. A. Electroporation and electrophoretic DNA transfer into cells — the effect of DNA interaction with electropores. (1992) Biophys. J. 63:1320-1327.

150. Eriksson K., Holmgren J. «Recent advances in mucosal vaccines and adjuvants». (2002) Curr. Opin. Immunol. 14:666-672.

151. White S. A., LoBuglio A. F., Arani R. B., Pike J. F., Moore S. E., Barlow D. L., Conry R. M. «Induction of antitumor immunity by intrasplenic administration of a carcinoembryonic antigen DNA vaccine». (2000) J. Gene Med. 2:135-140.

152. Pertmer T. M., Roberts T. R., Haynes J. R. «Influenza virus nucleoprotein-speciflc immunoglobulin G subclass and cytokine responses elicited by DNA vaccination are dependent on the route of vector DNA delivery». (1996) J. Virol. 70:6119-6125.

153. Feltquate D. M., Heaney S., Webster R. G., Robinson H. L. «Different T helper cell types and antibody isotypes generated by saline and gene gun DNA immunization». (1997) J. Immunol. 158:2278-2284.

154. Coico R., Sunshine G., Benjamini E., Immunolgy: a short course. (5th edittion) (2003) Willey-Liss. P. 113-125.

155. Rammensee H.G. «Chemistry of peptides associated with MHC class I and class II molecules». (1995) Curr. Opin. Immunol. 7:85-96.

156. York I.A., Chang S.C., Saric T., Keys J.A., Favreau J.M., Goldberg A.L., Rock K.L. «The ER aminopeptidase ERAP1 enhances or limits antigen presentation by trimming epitopes to 8-9 residues». (2002) Nat. Immonol. 3:1177-1184.

157. Reits E., Neijssen J., Herberts C., Benckhuijsen W., Janssen L., Drijfhout J.W., Neefjes J. «A major role for TPPII in trimming proteasomal degradation products for MHC class I antigen presentation». (2004) Immunity 20:495-506.

158. Groll M., Ditzel L., Lowe J., Stock D., Bochtler M., Bartunik H.D., Huber R. «Structure of 20S proteasome from yeast at a 2,4A resolution». (1997) Nature 386:463471.

159. Coux O., Tanaka K., Goldberg A.L. «Structure and functions of the 20S and 26S proteasomes». (1996) Annu. Rev. Biochem., 65:801-847.

160. Orlowski M. «The multicatalitic proteinase complex. A major extralysosomal proteolytic system». (1990) Biochemistry 29:10289-10297.

161. Kisselev A.F., Akopian T.N., Castillo V., Goldberg A.L. «Proteasome active sites allosterically regulate each other, suggesting a cyclical bite-chew mechanism for protein breakdown». (1999) Mol. Cell 4:395-402.

162. Bochtler M., Ditzel M., Groll M., Hartmann C. and Huber R. «The proteasome». (1999) Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 28:295-317.

163. Gaczynska M., Rock K.L. and Gogdberg A.L. «Gamma-interferon and expression of MHC genes regulate peptide hydrolysis by proteasomes». (1993) Nature 365:264-267.

164. Kloetzel P.M. «Antigen processing by the proteasome». (2001) Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2:179-187.

165. Rechsteiner M., Realini C. and Ustrell V. «The proteasome activator 11S REG (PA28) and class I antigen presentation». (2000) Biochem. J. 345:1-15.

166. Yewdell J.W., Bennink J.R. «Cut and trim: generating MHC class I peptide ligands». (2001) Curr. Opin. Immunol. 13:13-18.

167. Condon C., Watkins S. C., Celluzzi C. M., Thompson K., Falo L. D. «DNA-based immunization by in vivo transfection of dendritic cells». (1996) Nat. Med. 2:11221128.

168. Casares S., Inaba K., Brumeanu T. D., Steinman R. M., Bona C. A. «Antigen presentation by dendritic cells after immunization with DNA encoding a major histocompatibility complex class II-restricted viral epitope». (1997) J. Exp. Med. 186:1481-1486.

169. Doe B., Selby M., Baraett S., Baenziger J., Walker C. M. «Induction of cytotoxic T lymphocytes by intramuscular immunization with plasmid DNA is facilitated by bone marrow-derived cells». (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8578-8583.

170. Iwasaki A., Torres C. A., Ohashi P. S., Robinson H. L., Barber B. H. «The dominant role of bone marrowderived cells in CTL induction following plasmid DNA immunization at different sites». (1997) J. Immunol. 159:11-14.

171. Corr M., Damm A., Lee D. J., Tighe H. «In vivo priming by DNA injection occurs predominantly by antigen transfer». (1999) J. Immunol. 163:4721-4727.

172. Song K., Chang Y., Prud'homme G. J. «IL-12 plasmid-enhanced DNA vaccination against carcinoembryonic antigen (CEA) studied in immune-gene knockout mice». (2000) Gene Ther. 7:1527-1535.

173. Dranoff G. «Coordinated tumor immunity». (2003) J. Clin. Invest. 111:11161118.

174. Klinman D. M., Yi A. K., Beaucage S. L., Conover J., Krieg A. M. «CpG motifs present in bacteria DNA rapidly induce lymphocytes to secrete interleukin 6, interleukin 12, and interferon gamma». (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2879-2883.

175. Ashkar A. A., Rosenthal K. L. «Toll-like receptor 9, CpG DNA and innate immunity». (2002) Curr. Mol. Med. 2:545-556.

176. Agrawal S., Kandimalla E. R. «Medicinal chemistry and therapeutic potential of CpG DNA». (2002) Trends Mol. Med. 8:114-121.

177. Dalpke A., Zimmermann S., Heeg K. «Immunopharmacology of CpG DNA».2002) Biol. Chem. 383:1491-1500.

178. Davila E., Velez M. G., Heppelmann C. J., Celis E. «Creating space: an antigen-independent, CpG-induced peripheral expansion of naive and memory T lymphocytes in a full T-cell compartment». (2002) Blood 100:2537-2545.

179. Zinckgraf J. W., Silbart L. K. «Modulating gene expression using DNA vaccines with different 3'-UTRs influences antibody titer, seroconversion and cytokine profiles».2003) Vaccine 21:1640-1649.

180. Hanke T., Neumann V. C., Blanchard T. J., Sweeney P., Hill A. V., Smith G. L., McMichael A. «Effective induction of HIV-specific CTL by multi-epitope using gene gun in a combined vaccination regime». (1999) Vaccine 17:589-596.

181. Smith B. F., Baker H. J., Curiel D. T., Jiang W., Conry R. M. «Humoral and cellular immune responses of dogs immunized with a nucleic acid vaccine encoding human carcinoembryonic antigen». (1998) Gene Ther. 5:865-868.

182. Ito K., Ito K., Shinohara N., Kato S. «DNA immunization via intramuscular and intradermal routes using a gene gun provides different magnitudes and durations on immune response». (2003) Mol. Immunol. 39:847-854.

183. Gregoriadis G., Bacon A., Caparros-Wanderley W., McCormack B. «A role for liposomes in genetic vaccination». (2002) Vaccine 20 Suppl 5:Bl-9.

184. Singh M., Briones M., Ott G., O'Hagan D. «Cationic microparticles: A potent delivery system for DNA vaccines». (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:811-816.

185. Drabick J. J., Glasspool-Malone J., King A., Malone R. W. «Cutaneous transfection and immune responses to intradermal nucleic acid vaccination are significantly enhanced by in vivo electropermeabilization». (2001) Mol. Ther. 3:249255.

186. Paster W., Zehetner M., Kalat M., Schuller S., Schweighoffer T. «In vivo plasmid DNA electroporation generates exceptionally high levels of epitope-specific CD8+ T-cell responses. (2003) Gene Ther. 10:717-724.

187. Hung C. F., Wu T. C. «Improving DNA vaccine potency via modification of professional antigen presenting cells». (2003) Curr. Opin. Mol. Ther. 5:20-24.

188. Hung C. F., Hsu K. F., Cheng W. F., Chai C. Y., He L., Ling M, Wu T. C. «Enhancement of DNA vaccine potency by linkage of antigen gene to a gene encoding the extracellular domain of Fms-like tyrosine kinase 3-ligand». (2001) Cancer Res. 61:1080-1088

189. Boyle J. S., Brady J. L., Lew A. M. «Enhanced responses to a DNA vaccine encoding a fusion antigen that is directed to sites of immune induction». (1998) Nature 392:408-411.

190. Rice J., Buchan S., Stevenson F. K. «Critical components of a DNA fusion vaccine able to induce protective cytotoxic T cells against a single epitope of a tumor antigen». (2002) J. Immunol. 169:3908-3918.

191. Cid-Arregui A., Juarez V., zur Hausen H. «A synthetic E7 gene of human papillomavirus type 16 that yields enhanced expression of the protein in mammalian cells and is useful for DNA immunization studies». (2003) J. Virol. 77:4928-4937.

192. Conry R. M., Widera G., LoBuglio A. F., Fuller J. T., Moore S. E., Barlow D. L., Turner J., Yang N. S., Curiel D. T. «Selected strategies to augment polynucleotide immunization». (1996) Gene Ther. 3:67-74.

193. Irvine K. R., Rao J. B., Rosenberg S. A., Restifo N. P. «Cytokine enhancement of DNA immunization leads to effective treatment of established pulmonary metastases». (1996) J. Immunol. 156:238-245.

194. Kim J. J., Yang J. S., Dang K., Manson K.H., Weiner D. B. «Engineering enhancement of immune responses to DNA-based vaccines in a prostate cancer model in rhesus macaques through the use of cytokine adjuvants». (2001) Clin. Cancer Res. 7:882s-889s.

195. Kim J. J., Yang J. S., Dentchev T., Dang K., Weiner D. B. «Chemokine gene adjuvants can modulate immune responses induced by DNA vaccines». (2000) J. Interferon Cytokine Res. 20:487-498.

196. Kim T. W., Hung C. F., Ling M., Juang J., He L., Hardwick J. M., Kumar S., Wu T. C. «Enhancing DNA vaccine potency by coadministration of DNA encoding antiapoptotic proteins». (2003) J. Clin. Invest. 112:109-117.

197. Fong C. L., Hui K. M. «Generation of potent and specific cellular immune responses via in vivo stimulation of dendritic cells by pNGVL3-hFLex plasmid DNA and immunogenic peptides». (2002) Gene Ther. 9:1127-1138.

198. Weber L. W., Bowne W. B., Wolchok J. D., Srinivasan R., Qin J., Moroi Y., Clynes R., Song P., Lewis J. J., Houghton A. N. «Tumor immunity and autoimmunity induced by immunization with homologous DNA». (1998) J. Clin. Invest. 102:1258.1264.

199. Hawkins W. G., Gold J. S., Blachere N. E., Bowne W. B., Hoos A., Lewis J. J., Houghton A. N. «Xenogeneic DNA immunization in melanoma models for minimal residual disease». (2002) J. Surg. Res. 102:137-143.

200. Fong L., Brockstedt D., Benike C., Breen J. K., Strang G., Ruegg C. L., Engleman E. G. «Dendritic cellbased xenoantigen vaccination for prostate cancer immunotherapy». (2001) J. Immunol. 167:7150-7156.

201. Woodberry T., Gardner J., Elliott S. L., Leyrer S., Purdie D. M., Chaplin P., Suhrbier A. «Prime boost vaccination strategies: CD8 T cell numbers, protection, and Thl bias». (2003) J. Immunol. 170:2599-2604.

202. Pasquini S., Peralta S., Missiaglia E., Carta L., Lemoine N. R. «Prime-boost vaccines encoding an intracellular idiotype/GM-CSF fusion protein induce protective cellmediated immunity in murine pre-B cell leukemia». (2002) Gene Ther. 9: 503-510.

203. MacGregor R. R., Ginsberg R., Ugen K. E., Baine Y., Kang C. U., Tu X. M., Higgins T., Weiner D. B., Boyer J. D. «T-cell responses induced in normal volunteers immunized with a DNA-based vaccine containing HIV-1 env and rev». (2002) AIDS 16:2137-2143.

204. Calarota S., Bratt G., Nordlund S., Hinkula J., Leandersson A. C., Sandstrom E., Wahren B. «Cellular cytotoxic response induced by DNA vaccination in HIV-1-infected patients». (1998) Lancet 351:1320-1325.

205. Tagawa S. T., Lee P., Snively J., Boswell W., Ounpraseuth S., Lee S., Hickingbottom B., Smith J., Johnson D., Weber J.S. «Phase I study of intranodal delivery of a plasmid DNA vaccine for patients with Stage IV melanoma». (2003) Cancer 98:144-154.

206. Timmerman J. M., Levy R. «The history of the development of vaccines for the treatment of lymphoma». (2000) Clin. Lymphoma 1:129-139.

207. Kern A.D., Oliveira M.A., Coffino P., Hackert M.L. «Structure of mammalian ornithine decarboxylase at 1.6 A resolution: stereochemical implications of PLP-dependent amino acid decarboxylases». (1999) Structure 1 (5):567—581.

208. Tabor C.W., Tabor H. «Polyamines». (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:749-790.

209. McCann P.P., Pegg A.E. «Ornithine decarboxylase as an enzyme target for therapy». (1992) Pharmacol. Ther. 54(2): 195-215.

210. Coffino P., Poznanski A. «Killer polyamines?». (1991) J. Cell Biochem. 45(l):54-58.

211. Coffino P. «Regulation of cellular polyamines by antizyme». (2001) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2(3): 188-194.

212. Marton L.J., Pegg A.E. «Polyamines as targets for therapeutic intervention». (1995) Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 35:55-91.

213. Tabor C.W., Tabor H. «Polyamines in microorganisms». (1985) Microbiol. Rev. 49(l):81-99.

214. Thomas T., Thomas T.J. «Polyamines in cell growth and cell death: molecular mechanisms and therapeutic applications». (2001) Cell. Mol. Life Sci. 58(2):244-258.

215. Bercovich Z., Rosenberg-Hasson Y., Ciechanover A., Kahana C. «Degradation of ornithine decarboxylase in reticulocyte lysate is ATP-dependent but ubiquitin-independent». (1989) J. Biol. Chem. 264(27): 15949-15952.

216. Kahana C., Nathans D. «Translational regulation of mammalian ornithine decarboxylase by polyamines». (1985) J. Biol. Chem. 260(29): 15390-15393.

217. Katz A., Kahana C. «Transcriptional activation of mammalian ornithine decarboxylase during stimulated growth». (1987) Mol. Cell. Biol. 7(7):2641-2643.

218. Rosenberg-Hasson Y., Bercovich Z., Ciechanover A., Kahana C. «Degradation of ornithine decarboxylase in mammalian cells is ATP dependent but ubiquitin independent». (1989) Eur. J. Biochem. 185(2):469-474.

219. Shantz L.M., Pegg A.E. «Translational regulation of ornithine decarboxylase and other enzymes of the polyamine pathway». (1999) Int. J. Biochem. Cell. Biol. 31(1): 107122.

220. Murakami Y., Matsufuji S., Kameji T., Hayashi S., Igarashi K., Tamura T., Tanaka K., Ichihara A. «Ornithine decarboxylase is degraded by the 26S proteasome without ubiquitination». (1992) Nature 360(6404):597-599.

221. Matsufuji S., Matsufuji T., Miyazaki Y., Murakami Y., Atkins J.F., Gesteland R.F., Hayashi S. «Autoregulatory frameshifting in decoding mammalian ornithine decarboxylase antizyme». (1995) Cell 80(l):51-60.

222. Rom E., Kahana C. «Polyamines regulate the expression of ornithine decarboxylase antizyme in vitro by inducing ribosomal frame-shifting». (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91(9):3959-3963.

223. Ghoda L., van Daalen Wetters T., Macrae M., Ascherman D., Coffino P. «Prevention of rapid intracellular degradation of ODC by a carboxyl-terminal truncation». (1989) Science 243(4897): 1493-1495.

224. Takeuchi J., Chen H., Hoyt M.A., Coffino P. «Structural elements of the ubiquitin-independent proteasome degron of ornithine decarboxylase». (2008) Biochem. J. 410(2):401-407.

225. Jungbluth M., Renicke C., Taxis C. «Targeted protein depletion in Saccharomyces cerevisiae by activation of a bidirectional degron» (2010) BMC Syst. Biol. 4:176.

226. Caporale M., Arnaud F., Mura M., Golder M., Murgia C., Palmarini M. «The signal peptide of a simple retrovirus envelope functions as a posttranscriptional regulator of viral gene expression». (2009) J. Virol. 83(9):4591-4604.

227. Mizejewski G.J. «Alpha-fetoprotein signal sequences: a proposed mechanism for subcellular localization and organelle targeting». (1995) J. Theor. Biol. 176(1): 103-113.

228. Wu J.T., Waterhouse W.J. «Identification of alpha-fetoprotein polymers. Artifacts of the isolation procedure». (1982) Clin. Chim. Acta. 125(1):9-19.

229. Wu J.T., Knight J.A. «In-vitro stability of human alpha-fetoprotein». (1985) Clin. Chem. 31(10): 1692-1697.

230. Miyazaki Y., Matsufuji S., Murakami Y., Hayashi S. «Single amino-acid replacement is responsible for the stabilization of ornithine decarboxylase in HMOA cells». (1993) Eur. J. Biochem. 214(3):837-844.

231. Takeuchi J., Chen H., Coffino P. «Proteasome substrate degradation requires association plus extended peptide». (2007) EMBOJ. 26(1): 123-131.