Разработка технологии получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской (Pelargonium grandiflorum (ANDREWS) WILLD.) в культуре микроспор тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат наук Корчагин Антон Владимирович

• Корчагин Антон Владимирович
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Корчагин Антон Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.......................................................................... 5

ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ СЕЛЕКЦИИ И БИОТЕХНО- 11 ЛОГИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА PELARGONIUM. ПОЛУЧЕНИЕ УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ ПЕЛАРГОНИИ КОРОЛЕВСКОЙ

(PELARGONIUM GRANDIFLORUM (ANDREWS) WILLD)..................

1.1. Морфологические особенности представителей рода Pelargonium 11

1.2 Основные представители рода Pelargonium................................ 13

1.3 Отношение к факторам окружающей среды............................ 21

1.4 Селекции пеларгонии королевской....................................... 22

1.5 Использование методов культуры in vitro органов и тканей для селекционно-генетических целей представителей рода Pelargonium............................................................................ 26

1.6 Андрогенез in vitro сельскохозяйственных культур................... 33

1.7 Влияние ряда факторов на андрогенез in vitro............................ 38

ГЛАВА 2 УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ, ИСХОД- 49 НЫЙ МАТЕРИАЛ, СХЕМЫ И МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ОПЫТОВ

2.1 Цель, задачи и схема исследований..............................................................................49

2.1.1 Схема исследований..................................................................................................................50

2.2 Материал и методика проведения исследований............................................56

2.2.1 Материал исследований..........................................................................................................56

2.3 Условия проведения исследований..............................................................................59

2.3.1 Почвенные и агрохимические условия проведения исследований 59

2.3.2 Условия выращивания донорных растений.............................. 60

2.4 Методы исследований....................................................... 63

2.4.1 Методика лабораторных опытов.......................................... 63

2.4.2 Оценка растений-регенерантов........................................... 66

2.4.3 Математическая обработка экспериментальных данных............ 72

ГЛАВА 3 РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ ПЕЛАРГОНИИ КОРОЛЕВСКОЙ В 70 КУЛЬТУРЕ МИКРОСПОР.........................................................

3.1 Оптимизация режимов стерилизации первичных эксплантов

для введения в культуру in vitro.............................................. 70

3.2 Влияние температуры на эмбриоидогенез в культуре микроспор.. 73

3.3 Определение стадии развития микроспоры в зависимости от длины бутона.................................................................. 77

3.4 Изучение влияния стадии развития микроспор на интенсивность эмбриоидогенеза.............................................................. 81

3.5 Изучение влияния аскорбиновой кислоты на ингибирование фе-нольных соединений в условиях in vitro.................................... 84

3.6 Влияние питательной среды на эмбриоидогенез и каллусогенез

пеларгонии королевской в культуре микроспор................................................88

3.7 Влияние регуляторов роста на эмбриоидо- и каллусогенез пеларгонии королевской в культуре микроспор............................................................90

3.8 Влияние сахарозы на эмбриоидо- и каллусогенез пеларгонии королевской в культуре микроспор....................................................................................97

3.9 Изучение регенерационной активности каллусных тканей пеларгонии королевской, полученных в культуре микроспор........................98

3.10 Клональное размножение и получение растений-регенерантов ... 103

3.11 Укоренение побегов..................................................................................................................104

3.12 Адаптация растений-регенерантов..............................................................................105

ГЛАВА 4 ОЦЕНКА РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ПЕЛАРГОНИИ 108 КОРОЛЕВСКОЙ, ПОЛУЧЕННЫХ В КУЛЬТУРЕ МИКРОСПОР.........

4.1 Определение плоидности растений-регенерантов пеларгонии королевской числу хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и 108 по количеству хромосом .................

4.2 Характеристика удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской

по морфологическим признакам......................................... 112

4.3 ПЦР - анализ растений-регенерантов................................... 116

ГЛАВА 5 ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ РЕГЛАМЕНТ И ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОЛУЧЕНИЯ УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ ПЕ- 118 ЛАРГОНИИ КОРОЛЕВСКИЙ.....................................................

5.1 Особенности технологии получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской с использованием культуры микроспор ... 118

5.2 Расчет экономической эффективности технологии получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской....................... 123

127

ЗАКЛЮЧЕНИЕ........................................................................

129

ВЫВОДЫ ...........................

131

РЕКОМЕНДАЦИИ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКЕ .........

132

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ ..........

ПРИЛОЖЕНИЕ А Лабораторный технологический регламент получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской в культуре микро- 161 спор.......................................................................................

ФГБНУ ВНИИО

BAP

NАА

2,4 Д

ТDZ

Kin

1ЛЛ

АС

МБ В5

NLN

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно - исследовательский институт овощеводства»

6 - бензиламинопурин (6 - БАП) а - нафтилуксусная кислота (а - НУК) 2,4 Д - дихлорфеноксиуксусная кислота тидиазурон

6 - фурфуриламинопурин (кинетин) 3 - индолилуксусная кислота аскорбиновая кислота

питательная среда Мурасиге - Скуга (МигавЫ§е Т., Бкоов Б., 1962)

питательная среда Гамборга В5 (ОашЬог§ O.L., 1984) питательная среда Нитча (N^8^ I. Р., 1967)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской (Pelargonium grandiflorum (ANDREWS) WILLD.) в культуре микроспор»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Представители рода Pelargonium L'Her относятся к одной из самых распространенных цветочных культур. Отсутствие проблем с размножением и нетребовательность к условиям выращивания достаточно быстро сделали ее одним из самых любимых комнатных растений. Сегодня тысячи высокодекоративных сортов пеларгоний (зональных, крупноцветковых, плющелистных, душистых, уникумов, и ангелов) используются в озеленении городов всего мира [28-32].

Пеларгония королевская (Pelargonium grandiflorum (Andrews) Willd.) является важнейшей горшечной цветочной культурой в России, на нее приходится более 15 % рынка декоративных растений [95]. В этот вид растений входят самые эффектные и изысканные сорта, которые обладают мощным, но не обязательно высоким «кустом» с прямыми, ровными побегами, крупными зазубренными складчатыми листьями и огромными цветками, достигающими размера до 7 см. Окраска яркая, двухцветная или пятнистая [98]. Пеларгония королевская представлена в основном сортами немецкой и голландской селекции [30].

В нашей стране опубликовано несколько монографий [50,51,95,98] по культуре представителей рода Pelargonium. В основном в них затрагиваются вопросы ассортимента и агротехнических приемов выращивания различных групп пеларгоний в условиях закрытого грунта [29]. В последние годы появились публикации [28-32] о начале селекционных работ по созданию гибридов пеларгонии королевской для открытого грунта с целью озеленения садов и парков Черноморского побережья. Таким образом, отсутствие сортов отечественной селекции подтверждает актуальность селекционных исследований данной культуры.

Для получения новых конкурентоспособных отечественных сортов с высокими декоративными качествами, а также устойчивыми к болезням и вредителям необходимо создание нового исходного материала. Использование биотехнологических подходов в селекции пеларгонии королевской позволит

значительно уменьшить затраты времени и средств на выведение новых сортов и изменить акценты в селекционном процессе.

К наиболее перспективным методам ускорения селекционного процесса относится метод гаплоидии, интерес к которому все более возрастает в последнее время, когда с особой остротой встал вопрос сокращения сроков выведения новых сортов и гибридов, наиболее полно отвечающих современным требованиям производства [17]. Применение гаплоидов в селекции позволяет быстрее найти нужную комбинацию, обнаружить рецессивные мутации, и как следствие выявить ценные признаки, создавать стабильные гомозиготные линии [4,5,9,10,56,58,95] для получения которых традиционными методами гибридизации и отбора требуется длительный инбридинг [189]. С помощью культуры пыльников и микроспор (андрогенез in vitro) от гибридных растений первого поколения, можно получать гомозиготные растения в первой генерации и, таким образом, сократить селекционный процесс на 3-4 генерации, необходимые для обычной схемы селекции [17]. Мутации, возникающие на уровне гаплоидов - быстродоступны для отбора и диагностики [72]. Полученные удвоенные гаплоиды можно использовать непосредственно для создания сортов, либо в качестве исходного материала для последующей селекции путем вовлечения их в скрещивания.

Однако, несмотря на перспективы метода гаплоидии, использование его на представителях рода Pelargonium достаточно ограничено. Работы по культуре пыльников пеларгонии проводятся в Германии, Польше, Китае, Японии и других странах, но достигнутые результаты весьма ограничены: только у отдельных генотипов получены с небольшой частотой андрогенные новообразования - каллусы, эмбриоиды различного уровня плоидности и побеги-регенеранты, среди которых обнаружены удвоенные гаплоиды [100,101,120,121,232,249]. Это связано с тем, что в настоящее время не достаточно эффективно разработана система получения гаплоидов при культивировании пыльников и микроспор, не решены проблемы состава питательных сред и регуляторов роста для данной культуры, регенерации и других

факторов, влияющих на процесс культивирования пыльников и микроспор in vitro [100,101,103,120,121,232,249,260]. Недостаточно изученными являются вопросы, связанные с индукцией первичных андрогенных образований (каллусов, эмбриоидов), а также прямого и непрямого эмбриоидо- и каллусо-генеза [100,125,192,249].

Исходя из вышеописанных проблем, целью исследований является разработка технологии получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской в культуре микроспор для последующего использования в селекционном процессе.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Выявить сорта пеларгонии королевской, наиболее подходящие для использования в культуре микроспор.

2. Изучить факторы, влияющие на культивирование микроспор in vitro и получение удвоенных гаплоидов.

3. Изучить особенности морфогенеза в культуре микроспор на питательных средах различного состава и установить оптимальные концентрации и соотношения регуляторов роста для индукции этого процесса.

4. Получить и оценить растения-регенеранты.

5. Разработать лабораторный технологический регламент получения удвоенных гаплоидов в культуре микроспор пеларгонии королевской.

Объект исследований: технология получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской в культуре микроспор.

Предмет исследований: бутоны, пыльники, микроспоры, эмбриоиды, растения - регенеранты пеларгонии королевской.

Научная новизна работы: Впервые в России разработана технология, позволяющая получать гаплоиды и удвоенные гаплоиды пеларгонии королевской в культуре микроспор.

В результате проведённых исследований оптимизированы факторы, влияющие на культивирование микроспор пеларгонии королевской in vitro:

- установлена оптимальная длина бутона пеларгонии королевской - 10 мм, содержащая невакуолизированные микроспоры, обладающие мор-фогенетической активностью;

- установлено, что для индукции андрогенеза в культуре пыльников и микроспор пеларгонии королевской не требуется воздействия шоковыми температурами, что позволяет исключить из технологии предварительное выдерживания пыльников при шоковых температурах;

- определена оптимальная питательная среда MS, содержащая сахарозу — 120 г/л, аскорбиновую кислоту — 100 мг/л, агар - 5 г/л для эмбриоидо-генеза микроспор пеларгонии королевской in vitro;

- установлены оптимальные концентрации и соотношения регуляторов роста для индукции прямого эмбриоидогенеза [0,25 мг/л 2,4-D + 1,0 мг/л BAP]; [0,5 мг/л 2,4-D + 1,0 мг/л BAP]; [4 мг/л BAP + 0,3 мг/л НУК] и непрямого эмбриоидогенеза [2 мг/л BAP + 0,1 мг/л НУК].

Проведена оценка с помощью RAPD-анализа полученных растений-регенерантов, в результате которой установлена их генетическая гетерогенность в сравнении с исходными сортами. С помощью цитологического анализа доказана гаплоидная природа растений-регенерантов пеларгонии королевской, полученных в культуре микроспор. Получены гаплоиды и удвоенные гаплоиды.

Практическая ценность.

1. Разработана технология получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской, которая может быть применена и к другим представителям рода Pelargonium.

2. Элементы технологии получения удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской в части получения маточных растений и клонального микроразмножения ценного селекционного материала используются в работе тепличного комбината ООО «ПО Егорьевское».

3. Получены удвоенные гаплоиды пеларгонии королевской сортов Лотос, Шоко, Петтикот, которые могут быть использованы в селекционном процессе данной культуры.

Обоснование и достоверность научных положений. Исследования выполнены по методикам, рекомендованным научными учреждениями страны. Все выводы и предложения подтверждены экспериментальными исследованиями, статистической обработкой полученных данных.

Апробация работы. Основные результаты экспериментальной работы по диссертации были доложены на VIII Международном симпозиуме «Фе-нольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты» (г. Москва, 2-5 октября 2012 г.); XI Международной научно-практической конференции «Становление современной науки -2015» (г. Прага. Чехия, 20-30 сентября 2015 г.).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Определение оптимальной длины бутона, содержащую невакуолизиро-ванные микроспоры;

2. обоснование необходимости предварительного выдерживания пыльников при пониженных и повышенных температурах;

3. разработка состава питательных сред и оптимальных концентрации и соотношения регуляторов роста для индукции прямого и непрямого эмбриоидо- и каллусогенеза;

4. сорта пеларгонии королевской, характеризующиеся высоким андро-генным потенциалом in vitro;

5. растения-регенеранты (R1) пеларгонии королевской, полученные на основе удвоенных гаплоидов, характеризующиеся высокой выравненно-стью по декоративным и хозяйственно-ценным признакам.

Личный вклад соискателя: автор осуществил планирование исследования, сформулировал его цель и задачи, провел обзор литературе по тематике

диссертации. В ходе выполнения работы лично проводил исследования в экспериментах in vitro и in vivo. Эффективно применил методы статистической обработки и анализа полученных результатов исследований, сформулировал выводы и разработал практические рекомендации. Все научные положения, представленные в диссертации, автором получены лично.

Внедрение результатов в практику: результаты исследований, включающие получение и размножение маточных растений, элементов технологии клонального микроразмножения пеларгонии королевской внедрены в работу тепличного комбината ООО «ПО Егорьевское» (Московская область, Егорьевский район, поселок Новый, Промзона 9).

Публикации результатов исследований:

По результатам исследований по теме диссертации опубликовано 4 работы, в том числе две в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 170 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей, 23 рисунками и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, предложений для использования в селекционной практике, приложения и списка использованных источников, содержащего 269 наименование, в том числе 168 иностранных авторов.

ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ СЕЛЕКЦИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА PELARGONIUM. ПОЛУЧЕНИЕ УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ ПЕЛАРГОНИИ КОРОЛЕВСКОЙ (PELARGONIUM GRANDIFLORUM (ANDREWS) WILLD.)

1.1. Морфологические особенности представителей рода Pelargonium

Род Pelargonium L'Her. самый многочисленный из семейства Geraniaceae, включает около от 230 до 300 видов растений [120,205,206,239,247,251], распространенных преимущественно в тропической и Южной Африке, а также на Канарских островах, в восточном Средиземноморье, Южной Азии, Австралии и Новой Зеландии, на Ближнем Востоке и на островах Мадагаскар, остров Святой Елены, Тристан и де Cuhna [130,222,247]. Несколько разновидностей пеларгонии встречаются в Абиссинии, Сирии, Испании (Р. graveoles L'Her). В зоне влажных субтропиков Южной Африки встречается пеларгония щитовидная (P.peltatum L'Her.) [205,206]. Высота пеларгонии обычно составляет от 1 до 6 футов [247] в зависимости от вида, сорта или гибрида, но некоторые виды могут расти еще выше в их родной среде обитания [222].

В само же семейство Geraniaceae входит около 800 видов, произрастающих от тропиков Южной Америки почти до полярного круга в Северном полушарии. Многие виды являются эфироносными и декоративными растениями. Среди них есть травы, полукустарники, кустарники, суккуленты [20,205,206,248], являющиеся вечнозелеными и листопадными растениями [205,206].

Стебли прямостоячие или стелющиеся. Некоторые виды пеларгонии имеют колючие стебли [205], что подтверждает, что изначально травянистое растение со временем стало древесной культурой [247]. Ряд видов являются прямостоячими, другие стелются по поверхности земли, а некоторые имеют клубневые корни [106,248]. Пеларгонии распространены в районах с малым количеством осадков и низкой влажностью [120] и в различных местах оби-

тания: на скалистых склонах, лугах, лесах и вдоль потоков рек [205,206,247,248].

Листья Pelargonium бывают различных форм и размеров, и может напоминать папоротники, виноградные листья или дубовые листья и может быть глубоко разделены или почти круглые. Листья расположены поочередно или супротивно, с прилистниками, округлые, цельные, лопастные или глубоко-рассеченные, часто с железистым опушением. Часто формируются как прикорневые - на длинных черешках, так и стеблевые - почти сидячие листья пальчато-лопастные, пальчато- или перисторассеченные. У некоторых видов листовая пластинка цельная с зубчатым краем. Они могут быть малой или большой, может быть покрыта тонкими волосками и может быть грубым, липкой или имеют бархатистость. Могут появиться края листьев "фигурные" или «хрустящей» у некоторых видов [106]. У некоторых видов, например у пеларгонии зональной, край листа с широкой беловатой, бурой или красной каймой, создающей дополнительный декоративный эффект [120]. Одним из характерных признаков является опушение практически всех частей растения простыми или железистыми волосками. Последние имеют на кончике вздутие, в котором собираются эфирные масла, придающие характерный аромат многим представителям семейства, в первую очередь из группы душистых пеларгоний [79,131,248].

Соцветия, расположенные на верхушках побегов, представляют собой производные зонтиковидного типа, иногда они принимают почти шаровидную форму [79].

Цветок обоеполый, пятичленный, зигоморфный. Цветки имеют богатую гамму по окраске: белые, розовые, оранжевые и огненно-красные, пурпурные и малиновые, сиреневые и фиолетовые, почти черные и пестрые.

Чашечка пятираздельная, с длинным шпорцем, приросшим во всю свою длину к цветоножке, состоит из свободных, реже сросшихся до половины чашелистиков. Венчик двугубый, пятилепестковый; тычинок 10 (из них 3, а

изредка 5 - без пыльников), расположенных в 2 круга. Завязь пестика верхняя, он возвышается над остальными частями цветка [52].

В естественных условиях произрастания пеларгония - перекрестноопыля-емое растение. Для нее характерная энтомофилия — опыление с помощью таких насекомых как пчел, шмелей, бабочек. У пеларгонии блестящей опыление также осуществляют птицы. У некоторых видов возможно самоопыление. В процессе созревания плода верхняя часть завязи значительно удлиняется. Плод пеларгонии - коробочка с остающимися чашелистиками, она вскрывается путем отделения гнезд снизу вверх. Плод распадается на 5 односемянных плодиков [20].

1.2. Основные представители рода Pelargonium

Род пеларгонии весьма гетерогенен: в нем встречаются растения, значительно отличающиеся по внешнему виду, условиям обитания, декоративным качествам [20].

В Европу пеларгония впервые была привезена в конце XVI века и считалась редким аристократическим растением. Но с середины XIX века этот цветок приобрел большую популярность и широкое распространение. Садоводы и любители из завезенных пеларгоний и появившихся при культивировании естественных гибридов и мутантных форм отбирали наиболее декоративные виды с яркими цветами и листьями [28].

Пеларгония зональная (P. zonale (L.) L'Her ). Пеларгония зональная наиболее широко распространена, ее сорта наиболее многочисленны - этих растений описано свыше 75 тысяч. В культуре пеларгония зональная с 1710 года это гибридная форма. Селекция была направлена на создание более низкорослых форм с крупными соцветиями, и подобные сорта появились в 1844 г. По высоте их делят на растения нормального размера (более 20 см), карликовые (12,5-20 см), миниатюрные (10-12,5 см в высоту) и микроминиатюрные (не более 10 см). Зональные пеларгонии отличаются большим разнообразием формы отдельного цветка, и по этому признаку тоже происходит де-

ление на классы. Эти растения могут иметь простые цветки (не более 5 лепестков), полумахровые (6-8 лепестков), махровые (более 8 лепестков, без скрученной серединки), розовидные (махровые, напоминающие по форме бутон розы), тюльпановидные, кактусовидные, звездчатые и т.д. [265]. Основной отличительной особенностью растений данной группы является наличие на листьях темной полосы, расположение, размеры и окраска которой могут в значительной мере варьироваться, образуя регулярную и нерегулярную, или корончатую зоны.

По окраске листьев пеларгонии делят на следующие группы: bicolor (двухцветные) - листья различных оттенков зеленого цвета с белым или кремовым краем; tricolor (трехцветные) - на листьях наблюдаются сочетания зеленых, желтых и красных тонов; bronze - листья зеленые или желто-зеленые c явным красновато-коричневым оттенком; gold — золотистые листья с явной бронзовой или каштановой центральной зоной, зеленые тона составляют не более 50% и четко отделены от золотисто-желтых; black — листья почти черные или пурпурно-черные с отчетливой большой зоной или центром и слегка маркированы по краю зеленым; butterfly — на листовой пластинке вдоль жилок формируется маркировка в форме стилизованной бабочки, либо другого тона, либо другого цвета [130,222].

Основой для получения практически всех сортов данной группы было растение Пеларгонии зональной - P. zonale. Это вечнозеленый полукустарник, до 30-40 см высотой. Стебель зеленый, плотный, сочный, довольно хрупкий, в нижней части одревесневающий, хорошо облиственный. Листья черешковые, округлые, многолопастные, по краю слабо-дольчатые, опушены в разной степени. На листьях с верхней стороны довольно ясно выделяются концентрические круги переходных цветов - от ярко- до темно-зеленого. Часто имеются коричневые или палевые ободки. Диаметр листа 7-10 см. Цветки до 4 см в диаметре, простые, полумахровые и махровые, разнообразной окраски, представлены практически все тона, за исключением голубого и ярко-желтого. Цветки имеют слабый приятный аромат. Соцветия на длинных

цветоносах зонтиковидные, диаметром до 15-20 см, у сортов имеющее эффектное букетное строение. Цветки в зонтике начинают раскрываться от центра.

Растения обладают фитонцидными свойствами, листья имеют своеобразный аромат [42]. В народной медицине пеларгония зональная применяется при ожогах, экземе, обморожениях, педикулезе и грибковых заболеваниях кожи, бронхите, ожирении и целлюлите и т.д. [19,130,222]. Такой широкий спектр фармакологической активности делает растение перспективным для более широкого использования [12], т.к. все растение содержит дубильные вещества (максимум в фазе бутонизации). Листья и цветки содержат углеводы (глюкоза, сахароза, рибоза, крахмал и др.), витамины, фенолкарбоновые кислоты, их производные, эллаготаннины, флавоноиды (авикулярин, изокверцетин, рутин, геранин, кверцетин и др.) и их производные, а также эфирное масло, пигменты, кумарины (7-гидроксикумаринн, 8-гидроксикумарин) [24,60]. Эфирное масло применяется для повышения умственной и физической активности, для восстановления психологической гармонии, уравновешивания эмоций, а также в мыловарении и парфюмерной промышленности. В лечебных целях используют листья и корни пеларгонии [12,222].

Пеларгония плющелистная (P. peltatum (Efeu-Pelargonie) (L.) L'Her.).

Происходит из прибрежных районов Южной Африки. Одна из наиболее популярных балконных ампельных культур. Отличается длительным периодом цветения и неприхотливостью. Растение со стелящимися декоративно-лиственными побегами (до 90 см длиной) и соцветиями розовых или красных тонов. Встречаются также почти белые и двухцветные пеларгонии плюще-листные. Период цветения в течение всего лета и начала осени [269].

Листья у растений этой группы мясистые, кожистые, блестящие (с воско-видным налетом), на длинных черешках, напоминают листья плюща обыкновенного. В пределах группы отмечается значительное разнообразие листьев, у некоторых сортов они очень жесткие и толстые, у других нежные тонкие.

Большинство сортов представляют типичные трейлинги - с простертыми или ниспадающими побегами. Среди них встречаются растения с простыми и махровыми цветками. Исходный вид - Пеларгония плющелистная peltatum) - травянистое растение от 40 до 150 см высотой. Стебли стелющиеся. Листья щитовидные, почти округлые, пятиугольные, 5-8 см в диаметре, гладкие, глянцевые, иногда тонко опушенные. Окраска темно-зеленая, изредка с красноватой каймой [197].

Благодаря сильно ветвящимся стеблям из щитовидных пеларгоний создают каскады с многочисленными соцветиями-зонтиками, расположенными на длинных (около 15-18 см) вертикальных цветоносах. Цветки простые или махровые, до 4 см в диаметре, белые, розовые, красные, сиреневые, с пурпурными жилками на двух верхних лепестках. Цветки собраны по 5-8 штук в малоцветкаовые щитковидные или зонтиковидные соцветия.

Сорта и гибриды пеларгонии плющелистной в культуре с 1701 г. Это самые лучшие пеларгонии для подвесных корзин, особенно в районах с сырым, прохладным климатом. Их толстые кожистые листья обеспечивают устойчивость к различным заболеваниям [12].

Пеларгония душистая (Р. graveolens L'Her). Пеларгония душистая, или сильнопахнущая, - более крупное растение (около 70-100 см в высоту), с разрезными на 5-7 частей листьями, каждая из которых также имеет рассечения, имеющими ощутимый аромат лимона. Растение многолетнее с сильно-разветвленным светло-зеленым стеблем. Листья зеленые, пальчато-лопастные, с неровными волнистыми лопастями; все растение - с легким опушением. Цветки лиловато-розовые, мелкие, собранные в многцветковые зонтиковидные соцветия. Листья и стебли содержат алкалоиды, придающие растению специфический запах [106,145,250].

Основными родоначальниками этой группы являются пеларгония ароматная (^ graveolens L'Her), пеларгония ароматнейшая odoratissimum (Ь.) L'Her), пеларгония курчавая (^ crispum (Р.! Вея01Ш) L,HËR.), пеларгония розовая (P. radens Н.Е.Мооие), пеларгония дуболистная (^ quercifolium (Ь.

F.) L'Her.), пеларгония головчатая (P. capitatum (L.) L'Her.), пеларгония войлочная (P. tomentosum Jacq), а также пеларгония пахучая (P. fragrans Willd.) [268].

В настоящее время к данному виду относят 100-150 сортов и разновидностей. Селекция пеларгонии душистой велась на содержание ароматических масел в листьях. Широкая гамма ароматов, свойственных диким формам пеларгонии душистой, позволяет экспериментировать в создании растений с принципиально новыми ароматами, обладающими кроме того также фитонцидными свойствами. Сорта также отличаются значительным разнообразием формы и окраски листьев. Форма меняется от почти цельных до лопастных раздельных и рассеченных. У большинства сортов листья окрашены в различные оттенки зеленого, иногда серо-зеленые. В то же время есть сорта с коричневыми или почти черными пятнами, с белой или золотистой каймой.

Аромат: роза или мятная роза [106,145], лайма [146], мелисса [146], клубника-лимон [242], оттенки персика, корицы и апельсина [242]. Аромат листвы у гибридов может кардинально отличаться от исходных видов, а иногда теряется совсем, поэтому процесс получения новых гибридов душистых пеларгоний не так уж прост.

К более редким видам пеларгоний с ароматной листвой относятся [14]: пеларгония березолистная (P. betulinum (L.) L'Her.) - с острым ароматом; пеларгония виноградолистная (P. vitifolium) (L.) L'Her.) - с запахом мелиссы; пеларгония гитаровидная (P. panduriforme Eckl. & Zeyh.) - с ароматом герани; пеларгония дихондролистная (P. dichondraefolium(L.) L'Her.) - с запахом черного перца; пеларгония клейкая (P. glutinosum (Jacq.) L'Her.) - с запахом мелиссы; пеларгония клобучковая (P. cucullatum (L.) L'Her.) - с лимонным ароматом; пеларгония крыжовниколистная (P. grossularioides) (L.) L'Her.) -с лимонным ароматом; пеларгония мелиссовая (P. х melissimum Sweet) - со сладко-лимонным ароматом; пеларгония мелкоцветковая (P. parviflorum) - с запахом кокоса; пеларгония мохнатая (P. hirtum) - с острым ароматом; пеларгония серпниколистная (P. crithmifolium Sm.) - с ароматом имбиря и

мускатного ореха; пеларгония шероховатая (P. scabrum (L.) L'Hér.) - с запахом лимона; пеларгония шершавая (P. x asperum); P. abrotanifolium (L. F.) Jacq. - с острым ароматом [106,145,250].

В России виды душистых пеларгонии, таких как P. denticulatum Jacq., P. capitatum (L.) L'Her., Р. roseum (Andrews) W.T. Aiton, P. x fragrans Willd. и P. odoratissimum (L.) L'Her. используются для создания ароматных садов и производства эфирных масел (geraniol и citronellol), которые используется в медицине, парфюмерии, пищевой промышленности [28].

Пеларгония клобучковая P. cucullatum Ait. - полукустарник высотой до 90 см, стебли полуодревесневшие, густо опушенные, листья округло-воронковидные, мягкоопушенные на длинных черешках. Соцветие - многоцветковый зонтик на густо опушенном цветоносе. Цветки диаметром 2,5 см с красным или розовым венчиком [42,66].

Пеларгония ароматнейшая - P. odoratissimum (L.) L'Herit. ex Ait. Это один из самых распространенных в культуре видов. Представляет собой компактный кустарник с коротким разветвленным стеблем высотой 10-15 см. Листья жесткие, сердцевидные, со слегка волнистыми краями, железистым опущением и яблочным ароматом. Цветки белые, мелкие, до 1,5 см в диаметре, собраны в соцветия от 3 до 11 штук [42,66].

Пеларгония благоухающая - P. x fragrans Willd. Компактный кустарник высотой до 15 см, с шелковистыми голубовато-зелеными листьями с запахом мускатного ореха. Цветки белые, мелкие 0,5-1 см [28].

Пеларгония виноградолистная - P. vitifolium L'Herit. Прямостоячий кустарник высотой до 80 см. Стебли толстые волосисто-опушенные, полуодревесневшие. Листья густо опушенные, глубокоразрезные на черешках в 2-3 раза длиннее листовой пластинки, благодаря чему растение выглядит очень ажурным. Листья обладают приятным ароматом лимона. В соцветии от 6 до 10 светло-сиреневых цветков диаметром 1,5-2 см. Два верхних лепестка окрашены более интенсивно и имеют темно-фиолетовые прожилки [28].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Корчагин Антон Владимирович, 2015 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Абрамов, С.Н. Морфогенез в культуре изолированнх пыльников яровой мягкой пшеницы: автореф. дисс.... канд. биол. наук /03.00.12- физиология растений /Сергей Николаевич Абрамов.-Уфа, 1999.-22с.

2. Абрамов, С.Н. Статусы пыльника пшеницы при холодовом стрессе: Доклады. /С.Н. Абрамов //Вестн. Башк. Ун-та.-2001.- №2. - С.100-102.

3. Александрова, Л.Г. Пыльниковая культура ячменя: эффективность, воспроизводимость /Л.Г. Александрова, С.Ф. Лукьянюк //Мат. науч. конф. по с.-х. биотехнологии.- Целиноград, 1991.-С.63-65.

4. Анапияев, Б.Б. Экспериментальный морфогенез и биотехнология получения гаплоидов в культуре микроспор пшеницы: автореф. дис... докт. биол. наук /Б.Б. Анапияев.- М., 2001.-42с.

5. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве /А. Атанасов. -Новосибирск, 1993.- 242 с.

6. Багратишвши, Д.Г. Образование фенольных соединений в суспензионной культуре клеток чайного растения и влияние уровня нитрита и гормональных эффектов в питательной среде /Д.Г. Багратишвши, М.Н. Запрометов, Р.Г. Бутенко //Физиология растений.-1980.-Т.27.-Вып.2.- С.404.

7. Батыгина, Т.Б. и др. От микроспоры - к сорту /Т.Б. Батыгина, Н.Н. Круг-лова, В.Ю. Горбунова и др. - М.: Наука, 2010.-174 с.

8. Батыгина, Т.Б. Пыльник как модель изучения морфогенетических потенций и путей морфогенеза //Тез. докл. Всесоюзн. симп. «Развитие мужской генеративной сферы растений (морфофизиологические аспекты)».- Симферополь, 1983.-С.9-10.

9. Батыгина, Т.Б. Эмбриоид /Т.Б. Батыгина //Эмбриология цветковых растений. Терминология и концепции. Семя.- СПб.: Мир и семья, 1997.-Т.2.-С.624-627.

10. Батыгина, Т.Б. Эмбриоидогенез как способ образования индивидуума в естественных условиях и в культуре in vitro - Т.Б. Батыгина //Тез. докл. II съезда ВОФР. М., 1990.- С.114.116.

11. Беккужина, С.С. Сигнальные функции гормонов и реакция ответа на стрессоры при индукции пыльцевого эмбриогенеза /С.С. Беккужина, С. Н. Боровиков, И. Рахимбаев //Биотехнология. Теория и практика.- 2014. - № 3. - С.28-36.

12. Благоразумная, Н.В. Фармако-технологическое исследование сухого экстракта пеларгонии зональной /Н.В. Благоразумная, И.В. Пшукова и др. //Известия Самарского научного центра Российской академии наук. -2013.-Т.15, №3(2). - С.703 -705.

13. Бобков, С.В. Способ получения растений-регенерантов в культуре пыльников проса (Panicum miliaceum l.) с использованием теплового стресса (RU 2312491), 2003.

14. Бриллиантова, Р. Душистые пеларгонии (Scented Leaf Pelargoniums) /Р. Бриллиантова/ЮгеептЮ .ru-2013.-

http://www.greeninfo.ru/indoor_plants/pelargonium_graveolens/aromatnie-i-poleznie-pelargonii_art.html.

15. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе. Учебное пособие /Р.Г. Бутенко. - М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. -160с.

16. Былов, В.Н. Основы сравнительной сортооценки декоративных растений /В.Н. Былов //Интродукция и селекция цветочно-декоративных растений. М., 1978. -С.7-31.

17. Ван-Ункан, Н.Ю. Регенерация растений колонновидных слаборослых генотипов яблони из эксплантов различного происхождения: дисс. канд. с.-х. наук /06.01.05 - селекция и семеноводство /Надежда Юрьевна Ван-Ункан.-Мичуринск, 2014.-132 с.

18. Галиева, Э. Р. Влияние низких положительных температур на индукцию эмбриоидогенеза и формирование регенерантов в культуре in vitro пыль-

ников пшеницы /Э.Р. Галиева, Н.Н. Круглова, С.Н. Абрамов //Физиол. и биохимия культ. рас. - 2005. - Вып. 37, №2. - С. 132-138.

19. Головкин, Б.Н. Биологически активные вещества растительного происхождения /Б.Н. Головкин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова и др. - М.: Наука, 2002.- 328 с.

20. Гончарова, Е.Ю. Пеларгонии /Е.Ю. Гончарова, Е.П. Кравченко.- М.:Мир книги, 2006.- 54с.

21. Горбунова, В. Ю. Эмбриоидогенез в культуре пыльников пшеницы: цито-лого-гистологические аспекты /В.Ю. Горбунова, Н.Н. Круглова, Н.Н. Потапова. - Уфа: БНЦ УрО РАН, 1992.- Ч.1.- 63 с.

22. Горбунова, В.Ю. Физиологические основы андрогенеза in vitro у злаков /В.Ю. Горбунова, Н.Н. Круглова //Тез. докл. III съезда ВОФР. Ч.1.- СПб., 1993.- С.86.

23. ГОСТ 24933.2-81 - Семена цветочных культур. Методы определения всхожести и энергии прорастания.

24. Государственная фармакопея СССР: Общие методы анализа /МЗ СССР. 11-е изд. доп. - М.: Медицина, 1987.- Т.1.- 336с.

25. Градова, Н.Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии /Н.Б. Градова. - М.: ДеЛи принт, 2001. -131с.

26. Грибова, Т.Н. Создание гаплоидных растений масленичного рапса Brassica napus с использованием культуры микроспор /Т.Н. Грибова, А.Н. Князев, А.Н. Камионская //Биотехнология.- 2012.-№ 2.- С.59-65.

27. Губаз, С.Л. Введение в культуру in vitro и микроразмножение декоративных горшечных растений /С.Л. Губаз, Л.С. Самарина //Материалы всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (26 -28 ноября 2013 г. и 2-4 декабря 2014 г).- Краснодар, 2014.-С.19-20.

28. Гутиева, Н.М. К вопросу об адаптации рода Pelargonium в субтропиках России /Н.М. Гутиева //Вестник ИрГСХА.- 2011.-№44 (июль).-С.22-27.

29. Гутиева, Н.М. Культура Pelargonium grandiflorum в условиях влажных субтропиков Черноморского побережья Кавказа /Н.М. Гутиева //Сб. тру-

дов «Декоративное садоводство Сибири: проблемы и перспективы» - Барнаул: Европринт, 2010.-С.131-134.

30. Гутиева, Н.М. Особенности отбора гибридов при селекции пеларгонии крупноцветковой /Н.М. Гутиева //Садоводство и виноградарство.-2014.-№4.-С. 32-36.

31. Гутиева, Н.М. Род Pelargonium и его перспективы в озеленении садов и парков Черноморского побережья /Н.М. Гутиева //Науч. тр. ВНИИЦиСК. Вып. 40 «Биоресурсы, биотехнология, экологически безопасное развитие агропромышленного комплекса» - Сочи: ВНИИЦиСК, 2007.- С.62-68.

32. Гутиева, Н.М. Селекционные исследования по культуре пеларгонии крупноцветковой /Н. М. Гутиева //Субтропическое и декоративное садоводство: научные труды.-2011.-Вып. 45.-С.109-114.

33. Давыдова, Н.Н. Усовершенствование метода культуры пыльников для использования в селекционном процессе капусты (Brassica oleracea L.): дисс... канд. с.-х. наук /06.01.05 - селекция и семеноводство; 03.00.23 -биотехнология /Наталья Николаевна Давыдова.-М., 2008.- 125 с.

34. Данилова, Т. В. Оптимизация методики получения гаплоидов мягкой пшеницы в культуре пыльников in vitro и возможности их использования в селекции: автореф. дис.канд. биол. наук /Т.В. Данилова. - Москва, 2000. -16 с.

35. Домблидес, Е.А. Развитие пыльников капусты брокколи in vivo и при культивировании in vitro /Е.А. Домблидес, Н.А. Шмыкова. //Сб. науч. труд. Всероссийский НИИ селекции и семеноводства овощных культур. -2002 г.- Выпуск 37.- С.82-92.

36. Дьячук, Т.И. Цитологическое подтверждение спорофитного развития микроспор в культуре пыльников тритикале без холодового воздействия Дьячук Т.И., Хомякова О.В., Дугина Т.О. //Сельскохозяйственная биология, 2010.-№ 5.-С.61-65.

37. Дьячук, Т.И. Технологические и селекционные аспекты гаплоидии (на примере пшеницы и ячменя): дисс... докт. с.-х. наук /06.01.05 - селекция и семеноводство /Т.И. Дьячук.-Саратов, 2003.

38. Егорова, Н.А. Клональное микроразмножение герани эфиромасличной в культуре изолированных органов и тканей in vitro /Н.А. Егорова //Образовательная публичная библиотека. Растениеводство.-2013.-http://po-teme.com.ua/rastenievosdstvo/stati-po-rastenievodcheskim-

temam/1435-klonalnoe-mikrorazmnozhenie-gerani-efiromaslichnoj -v-kulture-izolirovannykh-organov-i-tkanej -in-vitro. html.

39. Егорова, Н.А. Получение исходного материала для селекции эфиромас-личной герани методами культуры ткани /Н.А. Егорова, А. М. Бугара, А. М. Ермилова //Труды ИЭЛР.-1998.- т 24.- С.98-110.

40. Ермаков, И.П. Диморфизм пыльцы и андрогенез в культуре пыльников и микроспор /И.П. Ермаков //Вестн. Моск. ун-та. Сер. 16, Биология. - 1986. - № 3. - С. 28-40.

41. Загоскина, Н.В. Способность различных сортов пшеницы к образованию фенольных соединений /Н.В. Загоскина, Н.А. Олениченко //Прикладная биохимия и микробиология.- 2005.- Т.41.- №1.- С.113-116.

42. Зинина, В.Ф. Первичная оценка декоративных признаков у интродуциро-ванных сортов пеларгонии зональной /В.Ф. Зинина //Бюлл. Никитского бот. сада.- Ялта: Изд-во Укр. Академии аграрных наук, 1985. Вып 60. -С.34-38.

43. Уланов, А.В. Фенольные соединения клеточных стенок в культурах in vitro: Изменение состава под действием различных факторов: автореф. дис....канд. биол.наук /03.00.12 /Уланов, Александр Владимирович.- Казань, 2000.-23с.

44. Зонтиков, Д.Н. Влияние температурного стресса и кислотности среды на эмбриоидогенез капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) в культуре микроспор /Д.Н. Зонтиков //Сб. науч. трудов IX Молодежной научной

конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва, 8 апреля 2009 г.).- М.: ГНУ ВНИИСБ, 2009.-С.13-14.

45. Зонтиков, Д.Н. Температурный стресс повышает выход эмбриоидов капусты белокочанной в культуре микроспор /А.В. Поляков, Д.Н. Зонтиков //Картофель и овощи.- 2009.- №7.- С.25.

46. Зонтиков, Д.Н. Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор: авто-реф. дисс... канд. с.-х. наук /06.01.05 - селекция и семеноводство; 03.00.23 - биотехнология /Дмитрий Николаевич Зонтиков.- М., 2009.- 24 с.

47. Зонтиков, Д.Н. Эмбриоидогенез капусты белокочанной (Brassica oleracea

L.) в культуре микроспор /А.В. Поляков, Д.Н. Зонтиков, С.А. Зонтикова //Тезисы IX Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 8-12 сентября 2008 г.).- М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008.-С.306-307.

48. Калинин, Ф.Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений /Ф.Л. Калинин, В.В. Сарнацкая, В.Е. Полищук.- К.: Наук. думка, 1980.- 488 с.

49. Киракосян, Р.Н. Получение растений-регенерантов из репродуктивных органов растений капусты белокочанной (Brassica oleracea L) in vitro /Р.Н. Киракосян, Е.А. Калашникова //Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии.-2015.- №1.-С.18-25.

50. Клименко, З.К. Пеларгонии /З.К. Клименко, В.К. Зыкова.- М.: Фитон, 2003.-21с.

51. Клименко, З.К. Пеларгонии в доме и в саду /З.К. Клименко, В.Ф. Зинина. М.: Фитон, 2003.-140 с.

52. Комарова Г.В. Пеларгония /Г.В. Комарова.-Москва, Донецк АСТСталкер, 2007.-56с.

53. Корчагина, А.В. Влияние аскорбиновой кислоты на образование фенолов и морфогенез эксплантов Пеларгонии королевской (P. grandiflorum) in vitro /А.В. Корчагина, А.В. Корчагин, А.В. Поляков //Тез. док. VIII Меж-

дународного симпозиума «Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты» (2-5 октября 2012 г).-М., 2012.-С.337-341.

54. Круглова, H.H. Каллусогенез как путь морфогенеза в культуре изолированных пыльников злаков /Н.Н. Круглова, В.Ю. Горбунова //Успехи со-времен. биол.-1997.- Т.117 -Вып.1.-С.83-94.

55. Круглова, H.H. Эмбриоидогенез как путь морфогенеза в культуре изолированных пыльников злаков /Н.Н. Круглова, В.Ю.Горбунова, Т.Б. Батыги-на //Успехи соврем биол.-1995.- Т.115.-Вып.6.-С.692-705.

56. Круглова, Н.Н. Эбриологические основы андроклинии пшеницы /Н.Н. Круглова, Т.Б. Батыгина, В.Ю. Горбунова.- М.: Наука, 2005.-101с.

57. Кучулория, Т.Л. Итоги селекции герани розовой /Т.Л. Кучулория //Эфирномасличные растения, их культура и переработка. - М.: Пищевая промышленность, 1968. - С.39-51.

58. Лаврова, Н.В. Технологические аспекты создания андрогенных гаплоидов озимой мягкой пшеницы /Н.В. Лаврова - МСХА им. К.А. Тимирязева Москва [ФГОУ ВПО РГАУ-МСХА], 2006 - 127 с.

59. Ли, И. Новый стресс-зависимый ген в развивающихся пыльниках перца /И. Ли, Ц.К. Ча Ха и др. /Физиология растений.-2009.-Т.56.-С.726-735.

60. Лобанова, А.А. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья /А.А. Лобанова, В.В. Будаева, Г.В. Сако-вич //Химия растительного сырья.- 2004.- №1.-С.47-52.

61. Лозариду, Т. В. Влияние холодовой предобработки на культивируемые пыльники ячменя разных генотипов /Т.В. Лозариду, А.С. Литургидис, С.Т. Котцаманидис, Д. Г. Рупакиас //Физиология растений.- 2005.- №2.- С.781-785.

62. Май Дык Чунг. Технология получения гаплоидных растений рапса (Brassica napus) in vitro /Май Дык Чунг, Е.А. Калашникова, А.А. Соловьев //Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. - 2010.-№1.-С.86-91.

63. Маруненко, И.М. Физиологические аспекты получения гаплоидов картофеля методом культуры пыльников /И.М. Маруненко, А.А. Кучко, Р. Г. Бутенко //Физиология растений.-1988.- Т.35.-Вып.1.-С.136-143.

64. Мельничук, М.Д. Бютехнолопя рослин: Шдручник /М.Д. Мельничук, Т.В. Новак, В.А. Кунах.- К.: Полкраф Консалтинг, 2003. - 520 с.

65. Методика государственного сортоиспытания сельскохозяйственных культур. Вып. 6 (декоративные культуры).- М.: Колос, 1968.-223 с.

66. Методические рекомендации по культуре декоративных пеларгоний //Гос. Никит. ботан. сад.- Ялта.-1983.-14 с.

67. Митрофанова, И.В. Соматический эмбриогенез и органогенез как основа биотехнологии получения и сохранения многолетних садовых культур: ав-тореф. дис.... докт. биол. наук /03.00.20 -биотехнология /И.В. Митрофанова. - Ялта, НБС-ННЦ, 2007. - 40с.

68. Мохно, В.С. О селекции тюльпанов и пеларгонии для выращивания во влажных субтропиках /В.С. Мохно, Е.В. Братухина, Н.М. Гутиева, О.И. Пащенко //Сельскохозяйственная биология.-2014.-№3.-С.70-75.

69. Нуржанова А.А. Генотипические особенности морфогенеза и регенерации в культуре пыльников ярового ячменя /А.А. Нуржанова, С.К. Турашева и др. //KazNU Bulletin. Biology series.-2013.- №3/1 (59).- С.155-158.

70. Орлов, П. А. Темпы развития морфогенных структур в культуре пыльников пшеницы в зависимости от генотипа сорта /П.А. Орлов //Сельскохозяйственная биотехнология: Матер. междунар. науч.- практ. конф. - Горки, 1998. - С.124-128.

71. Паушева, З.П. Практикум по цитологии растений.- М., 1970.-58с.

72. Поляков, А.В. Культура микроспор: состояние и перспективы /А.В. Поляков, Д.Н. Зонтиков, Р.В. Сергеев //Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты. Сб. Науч. тр.-М.: РАЕН, 2007.-Вып. 16.-С.126.

73. Поляков, А.В. Температурный стресс повышает выход эмбриоидов капусты в культуре микроспор /А.В. Поляков, Д.Н. Зонтиков //Картофель и овощи.-2009.-№°7.-С.25 .

74. Потемкина, Н.В. Цитогенетические исследования растений эфиромаслич-ной герани, полученных в культуре тканей /Н.В. Потемкина, Н.А. Егорова, А.М. Бугара //Цитология и генетика.-2004.- №2.- С.26-30.

75. Размахин, Е.П. Влияние продолжительности холодовой предобработки на стимуляцию андрогенеза у пырея сизого /Е.П. Размахин, В.М. Чекуров //Стрессовые белки растений: Матер. Всерос. науч. конф. (Иркутск, 6-10 сент., 2004 г.).- Иркутск, 2004.- С.88-90.

76. Резникова, С.А. Цитология и физиология развивающегося пыльника. М., 1984.

77. Сапиев, А.М. Субтропическое садоводства России //А.М. Сапиев, В.В. Воронцов, В.В Кобляков.- М.: «Родник», 1997.-183 с.

78. Саркисян, Э.Д. Культивирование герани сопряженным методом клональ-ного микроразмножения и гидропоники /Э.Д. Саркисян, С.Х. Майрапетян, Н.Н. Тамбиян и др. //Тез. докл. межд. конф. «Физиология растений - наука 3-го тысячелетия» (Москва, 4-9 октября 1999 г.).-М., 1999.-Т.2. -С.688.

79. Свами, К.Н. Влияние 24-эпибрассинолида на рост, фотосинтез и содержание эфирных масел у растений Pelargonium graveolens /К.Н. Свами, С.С. Р. Рао //Физиология растений.-2009.-Т.56, N5. - С.682-687.

80. Сельдимирова, О.А. Комплексный цито-физиологический подход к изучению андроклинного эмбриоидогенеза /О.А. Сельдимирова, Н.Н. Круглова //Современные проблемы науки и образования.-2015.-С.56-59.

81. Сельдимирова, О.А. Формирование полиэмбриоидов в культуре in vitro пыльников пшеницы //Физиология и биохимия культурных растений.-2009.-Т.41.-№6.-С.531-538.

82. Слободчикова, Е.С. Герань, или пеларгония: Виды, уход, размножение /Е.С. Слободчикова.- Ростов на Дону: Феникс, 2004, - 5с.

83. Смолянов, А.М. Эфиромасличные культуры /А.М. Смолянов, А.Т. Ксендз. - М., Колос.-1976.- 336с.

84. Сорока, А.И. Влияние состава среды на процессы каллусогенеза и регенерации в культуре пыльников льна /А.И. Сорока //Цитология и генетика.- 2004.-Т.38.-№2.-С.20-25.

85. Старцев, С.В. Совершенствование технологии получения удвоенных гаплоидов брокколи /С.В. Старцев, А.В. Поляков, В.В. Введенский //Картофель и овощи.-2012.-№5.-С.24.

86. Сторожик, Л.И. Ингибирование фенольных соединений сорго сахарного in vitro /Л.И. Сторожик, В.И. Войтовская, Т.Н. Недяк //«SCI-ARTICLE.RU».-2015. - http://sci-article.ru/stat.php?i=1428251593.

87. Суханов, В.М. Андроклиния и ее особенности у пшеницы: автореф. дисс....канд. с.-х. наук /В.М. Суханов.- Саратов, 1983.- 22с.

88. Тимофеева, О.А. Культура клеток и тканей растений: учебное пособие /О.А. Тимофеева, Н.И. Румянцева.- Казань, 2012.-91с.

89. Тимофеева, О.А. Морфолого-физиологические характеристики каллусных и суспензионных культур /О.А. Тимофеева, Н.И. Румянцева.- Казань: КГУ, 1998.-78с.

90. Ткаченко, О.В. Культура тканей in vitro короткостебельной мягкой и твердой пшеницы: автореф. дис.... канд. с.-х. наук /О.В. Ткаченко.- Саратов, 2001.-22с.

91. Тюкавин, Г.Б. Основы метода андрогенеза моркови in vitro путем каллусогенеза /Г.Б. Тюкавин.- ГАВРИШ.-2006.- №4.-С.28-32.

92. Хочачка, П. Биохимическая адаптация /П. Хочачка, Дж. Сомеро.- М.: «Мир», 1988.- С.568.

93. Чуйкина, А.Ю. Цитологический мониторинг развития микроспор и пыльцевых зерен яровой мягкой пшеницы в культуре in vitro /А.Ю. Чуйкина А.Ю. //Перспективы развития и проблемы современной ботаники.- М., 2007. - С. 365.

94. Шамина, З.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культуре пыльников и микроспор /З.Б. Шамина //Культура клеток растений.-М., 1981.-С.124-136.

95. Широкова, Н.В. Пеларгонии /Н.В. Широкова.-М.: Кладезь Букс, 2006.-95с.

96. Шмыкова Н.А. Получение удвоенных гаплоидов у видов рода Brassica L. /Н.А. Шмыкова, Д.В. Шумилина, Т.П. Супрунова //Вавиловский журнал генетики и селекции.- 2015.-№19 (1).-С. 111-120.

97. Шмыкова, Н.А. Разработка системы биотехнологических методов, направленных на ускорение селекционного процесса овощных культур: автореф. дис...д-ра с.-х. наук /Н.А. Шмыкова. - М., 2006. - 48 с.

98. Эсер М. Пеларгонии /М. Эсер.- М.: Лабиринт Пресс, 2003.- 143 с.

99. Abdel Nasser Bedawy Singab. Standardization of Polyphenol Content for certain Species Belonging to Genus Pelargonium cultivated in Egypt /Abdel Nasser Bedawy Singab, Hala Mohamed El-Hefnawy, Dalia Galal El-Kolobby //Abdel Nasser Bedawy Singab.-2014.-12.-01.

100. Aboel-Nil, M.M. Effect of auxin-cytokinin interaction on organogenesis in haploid callus of pelargonium hortorum /M.M. Aboel-Nil, А.С. Hildebrandt, R.F. Evert //In Vitro.- August 1976.-Vol.12 (8).-Р.602-604.

101. AboEl-Nil, M.M. Geranium (Pelargonium). /In: Ammirato P. V., Evans D. R., Sharp W. R., Bajaj Y. P. S. (Eds.). Handbook of Plant Cell Culture, Aboel-Nil, M.M., Hildebradt A. С Volume 5. //McGraw Hill Publishing Company.-New York, 1983.-P.439-460.

102. Aboel-Nil, M.M. Origin of androgenetic callus and haploid geranium plants /M.M. Aboel-Nil, A.C. Hildebrandt //Canadian Journal of Botany.-1973.-V.51(11).-P.2107-2109.

103. Acharjee, S. Effect of thidiazuron (TDZ) on in vitro regeneration of blackgram (Vigna mungo L.) embryonic axes. /S. Acharjee, P.J. Handique, B.K. Sarmah //J. Crop Sci. Biotech.-2012.- Vol.15.-P.311-318.

104. Aderkas, P. Abscisic acid and its influence on development of the embryonal root cap, storage product and secondary metabolite accumulation in hybrid larch somatic embryos /P. Aderkas, R. Rohr, B. Sundberg et al /Plant Cell Tissue Organ Cult.-2002.-Vol.69.-P. 111-120.

105. Agarwal, P.K. Regeneration of plantlets from leaf and petiole explants of Pelargonium x hortorum /P.K. Agarwal, R.S. Ranu //In Vitro Cell Dev Biol Plant.-2000.- Vol.36.-P.392-397.

106. Amidon, C. To grow pelargoniums is to know them /C. Amidon, Joyce Brobst //The herbarist.-2005.-Vol.71.-P.4-10.

107. Aremu, A.O. In vitro pharmacological evaluation and phenolic content of ten South African medicinal plants used as anthelmintics /A.O. Aremu, A.R. Ndhla-la et al //South African Journal of Botany.-2010.- Vol.76.-P.558-566.

108. Arshad, M. Thidiazuron-induced shoot organogenesis from mature leaf explants of scented Pelargonium capitatum cultivars /M. Arshad, J. Silvestre et al //Springer Verlag (Germany).-2012.-P.315-322.

109. Baetz, G. Einführung in die Methodik des Feldversuchs /G. Baetz, H. Doerfel at al.- Berlin: VEB Deutscher Landwirtschaftsverlag, 1982.- 327p.

110. Barany, I. The Switch of the Microspore Developmental Program in Capsicum Involves HSP70 Expression and Leads to the Production of Haploid Plants /I. Barany, P.S. Testillano, J. Mityko, M.C. Risueno //Int. J. Dev. Biol.-2001.-Vol.45(S1).- P.539-540.

111. Batygina T.B. New concept of asexual reproduction in flowering plants /T.B. Batygina, J. Pare, M. Bugnicourt //Some aspects and actual orientation in plant embryology //Amiens: Univ. Picardie, 1989.- P.28-44.

112. Batygina, T.B. A new approach to the system of flowering plants /T.B. Batygina //Phytomorphology.- 1989.-Vol.39.-N.4.- P.311-325.

113. Batygina, T.B. Embrioidogenic types of reproduction in flowering plants /T.B. Batygina //Apomixis Newsletter.-1991.-N 2.- P.58-66.

114. Batygina, T.B. New approach to the system of reproduction in flowering plants /T.B. Batygina //Apomixis Newsletter.-1989.- N1.-P.52-55.

115. Batygina, T.B. New concept of asexual reproduction in flowering plants /T.B. Batygina //Abstr. XIV Int. Bot. Congress. Berlin, 1987.-566p.

116. Batygina, T.B. Parallel development of somatic and sexual embrios /T.B. Batygina //Abstr. XIV Internat. Congr. On Sexual Plant Reproduction. Lome, 1996.- P.4.

117. Batygina, T.B. Position of the phenomenon of embryoidogeny in the system of flowering plants reproduction /T.B. Batygina //Proceed. XI internat. sympos. «Embryology and seed reproduction».-St. Petesburg: Nauka, 1992.-P.6-8.

118. Batygina, T.B. Problems of morphogenesis in situ, in vivo and in vitro /T.B. Batygina //Proceed. internat. sympos. «Plant tissue and cell culture: application to crop improvement».- Prague: Czechosl. Acad sci. press, 1984.- P.43-55.

119. Batygina, T.B. The place of embryoidogeny in system of flowering plants reproduction /T.B. Batygina //Abstr. XI internat. sympos. «Embryology and seed reproduction». Leningrad: Nauka, 1990.-P.17.

120. Becker, J. Scented geraniums: knowing, growing and enjoying scented pelargoniums /J. Becker, B. Faye //Loveland, CO: Interweave Press.-1996.

121. Becker, Zens R. Anther and embryo culture in Pelargonium zonale-hybrids //In Vitro Culture, XXI IHC.-1997.-P.236.

122. Begona, Garcia-Sogo. Production of engineered long-life and male sterile Pelargonium plants /Begona Garcia-Sogo, Benito Pineda et al //BMC Plant Biology..- 2012.-P.1112.

123. Benazir, J.F. In vitro regeneration and transformation studies on Pelargonium graveolens (geranium) - an important medicinal and aromatic plant /J.F. Benazir, R. Suganthi et al //J. Med. Plants Res.-2013.-V.7(38).-P.2815-2822.

124. Bennici, A. Nuclear conditions in haploid Pelargonium in vivo and in vitro /A. Bennici, M. Buiatti, F. D'Amato //Chromosoma.-1968.-Vol.24.-P.194-201.

125. Bennici, A.Cytological analysis ofroots, shoots and plants regenerated from suspension and solid in vitro cultures of haploid Pelargonium //Zeitschrift für Pflanzenzüchtung.-1974.-Vol.72.-P.199-205.

126. Bi, Y.M. Resistance to Botrytis cinerea in scented geranium transformed with a gene encoding the antimicrobial protein Ace-AMPl /Y.M. Bi, B.P.A. Cammue et al //Plant Cell Rep.-1999.-Vol.l8.-P.835-840.

127. Boase, M.R. An improved method for transformation of regal pelargonium (Pelargonium 9 domesticum Dubonnet) by Agrobacterium tumefaciens /M.R. Boase, J.M. Bradley, N.K. Borst //Plant Sci.-1998.-Vol.139.-P.59-69.

128. Boase, M.R. Genetic transformation of regal pelargonium (Pelargonium x domesticum 'Dubonnet') by Agrobacterium tumefaciens /M.R. Boase, S.C. Deroles, C.S. Winnefield, S.M. Butcher, N.K. Borst, R.C. Butler //Plant Sci 1996.-Vol.121.-P.47-61.

129. Borja, M. Pelargonium embryogenesis /M. Borja, M. Alonso //Floriculture, Ornamental and Plant Biotechnology Advances and Topical Issues.-2014.-P.527-532.

130. Bown, D. The Herb Society of America new encyclopedia of herbs & their uses /D. Bown //New York: DK.-2001.

131. Brawner, F. Geraniums: the complete encyclopedia /F. Brawner //Atglen, PA: Schiffer Publishing Ltd.-2003.

132. Brown, J.T. The accumulation of essential oils by tissue cultures of Pelargonium fragrans (Wild) /J.T. Brown, B.V. Charlwood //Fed. Eur. Biochem. Soc.-1986.-Vol.204.-P. 117-120.

133. Candida, H.T.M. Caracteres morfológicos e número de cromossomos em Pelargonium /H.T.M. Candida, M. Conagin et al //Morphological characters and chromosome numbers in Pelargonium //Bragantia.-1970.-Vol.29(unico).-P.249-261.

134. Cassells, A.C. Adventitious regeneration in Pelargonium x domesticum /A.C. Cassells, B.F. Carney IIActa //ori.-1987.-Vol.212.-P.419-423.

135. Cassells, A.C. Plant and in vitro factors influencing the micropropagation of Pelargonium cultivars by bud-tip culture /A.C. Cassells, G. Minas //Sci. Hort.-1983. -N21.-P.53-65.

136. Cassells, A.C. The effect of 2,3.5 Triiodbenzoic acid on caulogenesis in callus

cultures of Tomato and Pelargonium //Physiologia Plantarum.-June 1979.-Vol.46.-N.2.-P.159-164.

137. Chen, Y. Anther and pollen culture of rice. In: Haploids in higher plants in vitro /Y. Chen //Springer Verlag Publishers.-1986.-P.3-25.

138. Choi, Yong-Eui. Induction of somatic embryos by macrosalt stress from mature zygotic embryos of Panax ginseng /Choi, Yong-Eui; Yang G., Deok-Chun and Choi, Kwang-Tae //Plant Cell, Tissue and Organ Culture.-March 1998.-Vol.52.-N.3.-P.177-181.

139. Cordewener, J.H.G. Changes in Synthesis and Localization of the 70kDa Class of Heat Shock Proteins Accompanied the Induction of Embryogenesis in Bras-sica napus L. Microspores /J.H.G. Cordewener, G. Hause et al // Planta.-1995.-Vol.196.-P.747-755.

140. Croke, Joseph T. Dark induction and genetic stability of somatic embryos of zonal geraniums (Pelargonium x hortorum Bailey) /Croke, Joseph T., Cassells, Alan C. //Journal of Applied Botany.-November 1997.-Vol.71.-N.3-4.-P.119-124.

141. Daker, M.G. «Kleine Liebling», a haploid cultivar of Pelargonium //Nature.-1966.-Vol.211.-P.549-550.

142. Daker, M.G. Cytological studies on a haploid cultivar of Pelargonium and its colchicine induced diploids /M.G. Daker //Chromosoma.-1967.-Vol.21.-P.251-271.

143. Ding, Yu-mei, Cheng Zai-quan, Hiang Xing-qi, Wang Ling-xian, Wu Chengjun, Xibei Zhiwu xuebao //Acta Bot. Boreali.-Occident. Sin.-2003.-Vol.23.-N.11.-P.1922-1926.

144. Dunbar, K.B. Shoot regeneration of hybrid seed geranium (Pelargonium x hortorum) and regal geranium (Pelargonium x domesticum) from primary callus cultures /K.B. Dunbar, C.T. Stephens //Plant. Cell.Tiss. Org. Cult.-1989.-Vol.19.-P.13-21.

145. Faizal A, Lambert E, Foubert F, Apers S, Geelen D (2011) In vitro propagation of four saponin producing Maesa species //Plant CellTiss Organ Cult.-2011.-Vol. 106.-P.215-223.

146. Facciola, Stephen. 1998. Cornucopia II: a source book of edible plants. Vista: Kampong Publications.-

147. Gallard, A. Cryopreservation of Pelargonium apices by droplet-vitrification /A. Gallard, B. Panis, N. Dorion, R. Swennen, A. Grapin //Cryo Letters.- 2008, May-Jun. - Vol .29(3).-P.243-251.

148. Gamborg, O.L. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells /O.L. Gamborg, R.A. Miller, K. Ojima //Exp. Cell. Res.-1968.-Vol.21.-P.359-368.

149. Garcia R, Pacheco G, Falca ~o E, Borges G, Mansur E (2011) Influence of type of explant, plant growth regulators, salt composition of basal medium, and light on callogenesis and regeneration in Passiflora suberosa L. (Passifloraceae) / Garcia R, Pacheco G, Falca ~o E, Borges G, Mansur E //Plant Cell Tiss Organ Cult.-2011.- 106:47-54

150. Gauri, Saxena. Rose-scented geranium (Pelargonium sp.) generated by Agro-bacterium rhizogenes mediated Ri-insertion for improved essential oil quality /R. Garcia, G. Pacheco, E. Falca ~o, G. Borges, E. Mansur //Plant Cell Tiss Organ Cult.-2007.-Vol.90.-P.215-223.

151. Gruz, J. Rapid analysis of phenolic acids in beverages by UPLC-MS/MS /J. Gruz, O. Novak, M. Strnad //Food Chemistry.-2008.-Vol.111.-P.789-794.

152. Guha, S. Cell division and differentiation of embryos in the pollen grains of Datura in vitro /S. Guha, S. Maheshwari //Nature.-1966.-Vol.212.- N.-5057.- P.97-98.

153. Guha, S. In vitro production of embryos from anther of Da-tura /S. Guha, S. Maheshwari //Natute.-1964.-Vol.204.-N.4957.- P.497.

154. Gupta, R. Development of a superior somaclone of rose-scented geranium and a protocol for inducing variants /R. Gupta, S. Banerjee, G.R. Mallavarapu, S. Sharma, S.P.S. Khanuja, A.K. Shasany, S. Kumar // HortScience.-2002.-

Vol.37.-N.4.-7p.

155. Haccius, B. Question of unicellular origin of non-zygotic embryos in callus cultures /B. Haccius //Phytomorphology.-1978, March.-Vol.28.-N.1.-P.74-81.

156. Haensch, K.T. Influence of 2, 4-D and BAP on callus growth and the subsequent regeneration of somatic embryos in long-term cultures of Pelargonium x domesticum cv. Madame Layal /K.T. Haensch //Elec. J. Biotech.-2007.-Vol.7.-N.10.-P.69-77.

157. Haensch, K.T. Morpho-histological study of somatic embryo-like structures in hypocotyls culture of Pelargonium x hortorum Bailey /K.T. Haensch /Plant Cell Rep.-2004.-Vol.22.-P.376-381.

158. Haensch, K.T. Somatic embryogenesis in vitro from adult plants of pelargonium: Influence of genotype and basal medium /K.T. Haensch //Gartenbauwissenschaft.-1999.-Vol.64.-P. 193-200.

159. Haensch, K.T. Somatic embryogenesis in vitro from adult plants of Pelargonium: influence of genotype and basal medium /K.T. Haensch //Gartenbauwissenschaft.-1999 (September-0ctober).-Vol.64.-N.5.-P.193-200.

160. Haensch, K.T. Thidiazuron-induced morphogenetic response in petiole cultures of Pelargonium x hortorum and Pelargonium x domesticum and its histological analysis / K.T. Haensch //Plant Cell Reports.-2004 (October).-Vol.23.-N.4.-P.211-217.

161. Han, K.H. An Agrobacterium tumefaciens protocol effective on a variety of cotton wood hybrids (genus Poplus) /K.H. Han, C. Meilan, C. Ma, S.H. Strauss//Plant Cell Rep.-2000.-Vol.19.-P.315-320.

162. Hassanein A. Efficient plant regeneration system from leaf discs of zonal (Pelargonium x hortorum) and two scented geraniums /A. Hassanein, N. Dorion //Plant Cell, Tissue and Organ Culture.-2005.-Vol.83.-N.2.-P.231-240.

163. Henry, Y. Wheat anther culture. In: Biotechnology in agriculture and forestry (Wheat) /Y. Henry, J. de Buyser //Springer-Verlag.-1990.-P.283-326.

164. Hildebrandt, V. Identity of a phenolic exudate inhibitor from geranium explants /V. Hildebrandt, P.M. Harney //Canad. J. Plant Sc.-1989.-Vol.69.-N.2.-P.569-575.

165. Hoekstra, S. Microspore culture of Hordeum vulgare L.: the influence of dencity and osmolality /S. Hoekstra, M.H. Zijderveld, F. Heidekamp, F. Mark //Plant Cell Reprod.-1993.-Vol.12.-P.661-665.

166. Horn, W. Chromosome numbers and fertility of ivy-leaved geraniums (Pelargonium-Peltatum-hybrids) /W. Horn, K. Zerr //Papers.-1987.-P.20-29.

167. Hu, H. Application of pollen-derived plants to crop improve-ment /H. Hu, B. Huang //Inrernational review of cytology.Orlando.-1987.-Vol.107.-P.293-313.

168. Hu, H. Wheat: improvement through anther culture /H. Hu //Biotechnology in agriculture and forestry. Berlin.-1986.- P.56-66.

169. Hu, T.C. Isolated microspore culture of wheat (Triticum aestivum L.) in a defined media. Effects of pretreatments, isolation methods and hormones /T. Og-awa, H. Fukuoka, Y. Ohkawa //In vitro Cell Dev. Biol. (Plant).-1995.-Vol.31.-P.79-83.

170. Hua, Y.M. A simple cryopreservation protocol of Dioscorea bulbifera L. em-bryogenic calli by encapsulation-vitrification /Y.M. Hua, H.N. Rong //Plant Cell Tissue Organ Cult.-2010.-Vol.101.-P.349-358.

171. Huang, B. Wheat anther culture: effect of temperature. In: Biotechnology in agriculture and forestry (Wheat). V. 13 /B. Huang //Y.P.S. Bajaj (ed.). SpringerVerlag, 1990.-P.403-415.

172. Hutchinson, M.J. Acetylsalicylic acid enhances and synchronizes thidiazuron-induced somatic embryogenesis in geranium (Pelargonium x hortorum Bailey) tissue cultures /M.J. Hutchinson, P.K. Saxena //Plant Cell Reports.-1996a (March).-Vol.15.-N.7.-P.512-515.

173. Hutchinson, M.J. Does ethylene play a role in thidiazuron-regulated somatic embryogenesis of geranium (Pelargonium x hortorum Bailey) hypocotyl cultures? /M.J. Hutchinson, D. Murr et al //In Vitro Cellular and Developmental Biology - Plant.-1997 (April).-Vol.33.-N.2.-P.136-141.

174. Hutchinson, M.J. Inhibitory effect of GA3 on the development of thidiazuron-induced somatic embryogenesis in geranium (Pelargonium x hortorum Bailey) hypocotyl cultures /M.J. Hutchinson, S. Krihnaraj, P.K. Saxena //Plant Cell Reports, March 1997a.-Vol.16.-N.6.-P.435-438.

175. Hutchinson, M.J. Light mediates endogenous plant growth substances in thidi-azuron-induced somatic embryogenesis in geranium hypocotyl cultures /M.J. Hutchinson, T. Senaratna et al //Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology. -2000 (January). -Vol.9.-N. 1.-P.1-6.

176. Hutchinson, M.J. Morphological and physiological changes during thidiazuron-induced somatic embryogenesis in geranium (Pelargonium x hortorum Bailey) hypocotyl cultures /M.J. Hutchinson, S. Krihnaraj, P.K. Saxena //International Journal of Plant Sciences, July 1996a.-Vol.157.-N.4.-P.440-446.

177. Hutchinson, M.J. Morphoregulatory role of thidiazuron: evidence of the involvement of endogenous auxin in thidiazuron-induced somatic embryogenesis of geranium (Pelargonium x hortorum Bailey) /M.J. Hutchinson, S.J. Murch, P.K. Saxena //Journal of Plant Physiology, October.- 1996b.-Vol.149.-N.5.-P.573-579.

178. Hutchinson, M.J. Role of purine metabolism in thidiazuron-induced somatic embryogenesis of geranium (Pelargonium x hortorum) hypocotyl cultures. /M.J. Hutchinson, P.K. Saxena //Physiologia Plantarum, November.-1996b.-Vol.98.-N.3.-P.517-522.

179. Jeong, J.H. Production of eleutherosides in vitro regenerated embryos and plant-lets of Eleutherococcus chiisanensis /J.H. Jeong, S.J. Jung, H.N. et al //Biotechnol Lett.-2005.-Vol.27.-P.701-704.

180. Khateeb, W.A. In vitro propagation and characterization of phenolic content along withantioxidant and antimicrobial activities of Cichorium pumilum Jacq /W.A. Khateeb, E. Hussein, L. Quota et al //Plant Cell, Tissue and Organ Culture.-2012.-Vol.110.-P.103-110.

181. Kim, M. The Influence of Temperature Pretreatment on the Production of Microspore Embryos in Anther Culture of Capsicum annuum L. /M. Kim //Kor. J. Plant Tissue Cult.-1999.-Vol.26.-P.71-76.

182. Klaus-Thomas, Haensch. Influence of 2,4-D and BAP on callus growth and the subsequent regeneration of somatic embryos in long-term cultures of Pelargonium x domesticum cv. Madame Layal /Haensch Klaus-Thomas //Electronic Journal of Biotechnology.-2007.-Vol.10.-N.1 (Jan 15).-P.1-9.

183. Komamine, Atsushi. Mechanisms of somatic embryogenesis in cell cultures -physiology, biochemistry and molecular biology. In: Nijkamp, H.J.J.; Van der Plas, L.H.W. and Van Aartrijk, J. eds. Progress in plant cellular and molecular biology /Atsushi Komamine, Masami Matsumoto //Dordrecht Kluwer Academic Publishers ,1990.-P.307-313.

184. Konieczhy, R. Two pathways of plant regeneration in wheat anther culture /R. Konieczhy, A. Z. Czaplicki, H. Golczyk, L. Przywara //Plant Cell, Tissue and Organ Cult.-2003.-73, №2.-P.177-187.

185. KrishnaRaj, S. Somatic embryogenesis and Agrobacterium-mediated transformation system for scented geranium (Pelargonium sp. 'Frensham ') /S. KrishnaRaj, Y.M. Bi, P.K. Saxena //Planta.-1997.-Vol.201.-P.434-440.

186. Kulkarni, Swaroop S. A somaclonal variant of rose-scented geranium (Pelargonium spp.) with moderately high content of isomenthone in its essential oil. /S.S Kulkarni et al //Nat Prod Commun.-2012 (Sep).-Vol.7(9).-P.1223-1224.

187. Kumar, De K. Callus culture. Cytodifferentiation. Organogenesis /De K. Kumar //In: Plant tissue cultures.-1992.-P.35-78.

188. Kumar, V. High frequency somatic embryogenesis and synthetic seed production of the endangered species Swertia chirayita /V. Kumar, S. Chandra //Biologia.-2014.- Vol.69.-P.186-192.

189. Lespinasse, Y. Création et description d'une plante haploïde de pommier (Malu.s pumila Mill.) /Y. Lespinasse, M. Godicheau //Ami. Anulio Plante. -1980.-Vol.30(1).-P.39-44.

190. Li, H.C. The influence of different temperature treatments on anther culture response of spring wheat (Triticum aestivum L.) /H.C. Li, J. Qureshhi, K.K. Kar-tha //Plant Sci.-1988.-Vol.57.-P.55-61.

191. Li, Ming-Yin. Observation of Diploid Selection Phenomena in vitro culture of the Cytochimeral Explants of Pelargonium zonale /M.Y. Li //http: //www.paper.edu.cn.-2002.

192. Li, Ming-Yin. Observation of High-Frequency Occurrence of Chimeral Adventitious Shoots in Tissue Culture from the Chimeral Tissues of Pelargonium zonale /M.Y. Li //HortScience.-2005.-Vol.40(5).-P.1461-1463.

193. Loehrlein, M. Floral ontogeny of Pelargonium x domesticum /M. Loehrlein, R. Craig //J.Am. Soc. Hortic. Sc.-2000.-Vol.125.-N.1.-5p.

194. Mack, Moyo. Johannes Van Staden a Conservation strategy for Pelargonium sidoides DC: Phenolic profile and pharmacological activity of acclimatized plants derived from tissue culture /M. Mack, O. Adeyemi et al //Journal of Ethnopharmacology. -2013. - Vol .149.-P.557-561.

195. Madakadze, R.M. Effect of growth regulators on maturation of geranium (Pelargonium x hortorum) somatic embryos /R.M. Madakadze, T. Senaratna //Plant Growth Regulation.-2000 (January).-Vol.30.-N.1.-P.55-60.

196. Madakadze, R.M. Identification and characterization of storage proteins in zygotic and somatic embryos of geranium (Pelargonium x hortorum) /R.M. Madakadze, J.E Krochko, T. Senaratna //Journal of the American Society for Horticultural Science.-2000 (July).-Vol.125.-N.4.-P.525-529.

197. Madden, J.I. Modes of regeneration in Pelargonium x hortorum (Geraniaceae) and three closely related species /J.I.Madden, C.S. Jones, C.A. Auer //In Vitro Cellular and Developmental Biology - Plant.-2005 (January-February).-Vol.41.-N.1.-P.37-46.

198. Manjkhola, S. Organogenesis, embryogenesis, and synthetic seed production in Arnebia euchroma - a critically endangered medicinal plant of the Himalaya. //In Vitro Cell Dev Biol Plant.-2005.-Vol.41.-P.244-248.

199. Marsolais, A.A. Somatic embryogenesis and artificial seed production in zonal (Pelargonium x hortorum) and regal (Pelargonium x domesticum) geranium /A.A. Marsolais, D.P.M. Wilson //Canadian Journal of Botany.-1991 (June).-Vol.69.-N.6.-P. 1188-1193.

200. Martin, K.P. Plant regeneration through somatic embryogenesis in medicinally important Centella asiatica L. /K.P. Martin //In Vitro Cell Dev Biol-Plant.-2004.-Vol.40.-P.586-591.

201. Mathis, N.L. Agrobacterium inoculation techniques for plant tissues /N.L. Mathis, M.A.W. Hinchee //Plant molecular biology manual. Kluwer Academic Publisher, Boston,1994.-P.1-9.

202. Meijer, E.A. Co-culture with Daucus carota somatic embryos reveals high 2,4-D uptake and release rates of Arabidopsis thaliana cultured cells /E.A. Meijer, S.C. de Vries, A.P. Mordhorst //Plant Cell Reports, March.-1999.-Vol.18.-N.7-8.-P.656-663.

203. Meilan, R. The CP4 transgene provides high levels of tolerance to Roundupw herbicide in field-grown hybrid poplars /R. Meilan, K.H. Han et al //Can. J. For. Res.-2002.-Vol.32.-P.967-976.

204. Mejza, S.J. Plant regeneration from isolated microspores of Triticum aestivum L. /S.J. Mejza, V. Morgant, D. Di Bona, I.R. Wong //Plant Cell Rep., 1993.-Vol.12.-P.149-153.

205. Miller, D.M. Pelargoniums: a gardener's guide to the species and their cultivars and hybrids. Portland, OR: Timber Press,1996.-56p.

206. Miller, D.M. The taxonomy of Pelargonium species and cultivars, their origins and growth in the wild /In: Lis-Balchin, Maria (ed). Geranium and pelargonium: The genera Geranium and Pelargonium-New York: Taylor & Francis.-2002.-P.49-79.

207. Mithila, J. Recent advances in Pelargonium in vitro regeneration systems /J. Mithila, S. Murch, S. KrishnaRaj, P.K. Saxena //Plant Cell Tiss Org Cult.-2001.-Vol.67.-P.1-9.

208. Moyo, M. Conservation strategy for Pelargonium sidoides DC: phenolic profile and pharmacological activity of acclimatized plants derived from tissue culture /M. Moyo, A.O. Aremu, J. Gruz et al //J. Ethnopharma-col.-2013.-Vol.149.-P.557-561.

209. Moyo, M. Phenolic composition, antioxidant and acetylcholinesterase inhibitory activities of Sclerocarya birrea and Harpephyllum caffrum (Anacardiaceae) extracts /M. Moyo, A.R. Ndhlala, J.F. Finnie, J.Van Staden //Food Chemistry.-2010.-Vol.123.-P.69-76.

210. Moyo, M. Topolins in Pelargonium sidoides micropropagation: do the new brooms really sweep cleaner? /M. Moyo, J.F. Finnie, J.Van Staden //Plant Cell Tissue Organ Cult.-2012.-Vol.110.-P.319-327.

211. Murashige, T.A. Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures /T. Murashige, F. Skoog //Physiologia Plantarum. -1962.-Vol.15.-P.473-497.

212. Murch, S.J. Molecular fate of thidiazuron and its effects on auxin transport in hypocotyls tissues of Pelargonium x hortorum Bailey /S.J Murch, P.K. Saxena //Plant Growth Regulation.-2001 (November).-Vol.35.-N.3.-P.269-275.

213. Murthy, B.N.S. Characterization of somatic embryogenesis in Pelargonium x hortorum mediated by a bacterium /B.N.S. Murthy, N.N. Vettakkorumakankav, S. Krishnaraj, J. Odumeru, P.K. Saxena //Plant Cell Reports, March.-1999.-Vol.18.-N.7-8.-P.607-613.

214. Murthy, B.N.S. Induction of high-frequency somatic embryogenesis in geranium (Pelargonium x hortorum Bailey cv. Ringo Roso) cotyledonary cultures /B.N.S. Murthy, R.P. Singh, P.K. Saxena //Plant Cell Repts.-1996.-Vol.15.-N.6.-P.423-426.

215. Nitsch, P.C. Effect dun choc termigue sur lepouvoir embryogenis pollen de Du-ture in noxia culture dans lanthereon isole de lantoure /P.C. Nitsch, B. Noreel //C.R. Acad. Sci.-1973.-276D (3). - P.305-306.

216. Nomura, K. Long-term conservation of embryogenic competence by induction and disorganization of somatic embryos in carrot /K. Nomura //Plant Breeding, August.-2003.-Vol.122.-N.4.-P.343-346.

217. Nowak, K. Regeneracja Pelargonium graveolens L. w kulturze in vitro /K. Nowak, K. Zajac //Pr. nauk. USI. Katowicach. Acta biol. Siles.-1987.-N7.- P.9-14.

218. Ogawa T. Induction of cell division of isolated pollen grains by sugar starvation in rice /T. Ogawa, H. Fukuoka, Y. Ohkawa //Breed. Sci. Jpn., 1994.-Vol.44.-P.75-77.

219. Onisei, T. Rapid clonal propagation of scented geranium /T. Onisei //An. Sti. Univ./Sec.2.-1993.-N39.- P.125-127.

220. Ouyang, J.W. The response of anther culture to culture temperature varies with growth conditions of anther-donor plants /J.W. Ouyang, D.G. He, G.H. Feng, S.E. Jia //Plant Sci.-1987.-Vol.49.-P.145-148.

221. Pathi, K.M. High frequency regeneration via direct somatic embryogenesis and efficient Agrobacterium mediated genetic transformation of tobacco /K.M. Pathi, S. Tula, N. Tuteja //Plant Signal Behav.-2013.-Vol.8(6).-P.243-54.

222. Pelargoniums: An Herb Society of America Guide.- Kirtland, 2006.-73p. [http: //www.herbsociety.org].

223. Pellegrineschi, A. Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of scented geranium /A. Pellegrineschi, O. Davolio-Mariani //Plant Cell Tiss Org Cult.-1996.-Vol.47.-P.79-86.

224. Pera, F. Studies of multipolar mitoses in euploid tissue cultures, I. Somatic reduction to exactly haploid and triploid chromosome sets /F. Pera, B. Rainer //Chromosoma.-1973.-Vol.42.-P.71-86.

225. Pohlheim, E. Untersuchungen zur Mutationsauslösung und Mutagenitätstestung an einem monohaploiden Klon von Pelargonium zonale (L.) LHerit. ex. Ait. /E. Pohlheim //Dissertation, Pädagogische Hochschule " Karl Liebknecht" Potsdam, 1978.

226. Pohlheim, F. Die haploide Pelargonium zonale 'Kleiner Liebling' als Testsystem für Mutagene /F. Pohlheim, E. Pohlheim, G. Günther //Wissenschaftliche Zeitschrift der Pädagogischen Hochschule Potsdam, 1972.-N.16.-P.65-70.

227. Rajinder, S. Ranu. Agrobacterium tumefaciens Based Transformation of Pelargonium x Hortrum cv. 'Samba' with Anti-1-aminocyclopropane-1-carboxylate Synthase cDNA to Regulate Ethylene Biosynthesis /Rajinder S. Ranu, Jianguo Fan, Sarada Krishnan, Pradeep Agarwa, Amitva Mitra //Engineering. -2012.-Vol.5.-P.4-7.

228. Rao, P.V.L. In vitro plant regeneration of scented-leaved geranium Pelargonium graveolens /P.V.L. Rao //Plant Sci.-1994.-Vol.98.-P.193-198.

229. Reuther, G. Untersuchungen zur Vermehrung von Pelargonienvarietaten durch Gewebekultur /G. Reuther //Gartenbauwissenschaft.-1975.-N4.- P.181-187.

230. Robichon, M.P. Plant regeneration of ivy leaved geranium through shoot organogenesis /M.P. Robichon, J.P. Renou, R. Jalouzot //Plant Cell Tiss Org Cult.-1997.-Vol.49.-P.209-212.

231. Rössel, K. Genetische Markierungen zur quantitativen Musteranalyse an somatischen Varianten eines homohaploiden Pelargonium Klons /K. Rössel //Dissertation, Humboldt-Universität zu Berlin, 1990.

232. Satoru, Tokumasu. Variation of chromosome numbers and essential oil components of plants derived from anther culture of the diploid and the tetraploid in Pelargonium roseum /Satoru Tokumasu, Masahiro Kato in Euphytica //Euphytica June.- 1979.-Vol.28 (2).-P.329-338.

233. Savitsky, H. Effectiveness of selection for tetraploid plants in Cogeneration on the basis of the number of chloroplasts in stomata /H. Savitsky //Journal of the A.S.S.B.T.-1966.-Vol.13.-N.8.-P. 655-661.

234. Saxena, G. An efficient in vitro procedure for micropropagation and generation of somaclones of rose scented Pelargonium /G. Saxena, S. Banerjee, L. Rahman [et al.] //Plant Science.-2000.-Vol.155, N2.-P.133-140.

235. Saxena, G. An efficient, in vitro procedure for micropropagtion and generation of somaclones of Rose scented Geranium /G. Saxena, S. Banerjee, L. Rahman et al //Pubmed.-2001.-P.1081-1086.

236. Segui-Simarro, J.M. Hsp70 and Hsp90 Change Their Expression and Subcellular Localization after Microspore Embryogenesis Induction in Brassica napus L. /J.M. Segui-Simarro, P.S. Testillano, M.C.Risueno //J. Struct. Biol.- 2003.-Vol.142.-P.379-391.

237. Senaratna, T. Smoke-saturated water promotes somatic embryogenesis in geranium /T. Senaratna, K. Dixon, E. Bunn, D. Touchell //Plant Growth Regulation, June.-1999.-Vol.28.-N.2.-P.95-99.

238. Senaratna, T. Triazole treatment of explant source provides stress tolerance in progeny of geranium (Pelargonium hortorum Bailey) plants regenerated by somatic embryogenesis /T. Senaratna, E. Bunn, A. Bishop //Plant Growth Regulation, February.- 2002.-Vol.36.-N.2.-P.169-174.

239. Small, Ernest. Culinary herbs. Ottawa: NRC Research Press.-1997.

240. Song, J.Y. Efficiency of shoot regeneration from leaf, stem, petiole and petal explants of six cultivars of Chrysanthemum morifolium /J.Y. Song, N.S. Mattson, B.R. Jeong //Plant Cell Tiss Organ Cult.-2011.

241. Sreedhar, D. Tissue culture of Pelargonium graveolens (Geranium) //In: Role of Biotechnology in Medicinal and Aromatic Plants. Vol.2. Eds:Irfan. A.Khan, Atiya Khanum /D. Sreedhar, J.Y. Song, N.S. Mattson, B.R. Jeong //Ukaaz Pub-lications.-1999.-P.177-184.

242. Talbert, Rexford. Personal communication. April 7.-2006.

243. Tokumasus, K. Variation of chromosome numbers and essential oil components of plants derived from anther culture of the diploid and the tetraploid in Pelargonium roseum. Euphytica.-1979.-Vol.28.-P.329-338.

244. Touraev, A. Efficient microspore embryogenesis in wheat (Triticum aestivum L.) induced by starvation at high temperature /A. Touraev, A. Indrianto, I. Wratchko, E. Heberle-Bors //Sex Plant Reprod.-1996.-Vol.9.-P.209-215.

245. Touraev, A. Stress as the Major Signal Controlling the Development Fate of Tobacco Microspores: Toward a Unified Model of Induction of Microspore /Pollen Embryogenesis /A. Touraev, M. Pfosser, O. Vicente, E. Heberle-Bors //Planta.-1996.-Vol.200.- P.144-152.

246. Tsuwamoto, R. Identification and Characterization of Genes Expressed in Early Embryogenesis from Microspores of Brassica napus /R. Tsuwamoto, H. Fuku-oka, Y. Takahata //Planta.-2007.- Vol. 225.- P.641-652.

247. Tucker, A.O. The big book of herbs: a comprehensive illustrated reference to herbs of flavor and fragrance /A.O. Tucker, T. DeBaggio. //Loveland, CO: Interweave Press.-2000.

248. Tucker, Arthur O. Personal communication. October 27.-2005.

249. Tuleja M. Morphological and histological events in the preliminary tissue culture of haploid and diploid pelargonium zonale var. «Kleiner libeling» /M. Tuleja, A. Krupa, G. Goralski, Bartosz J. Plachno //Modern Phytomorphology.-2014.-Vol.6.-P.39-40.

250. U.S. Food and Drug Administration. 2002. Code of federal regulations Ch.21 Section 182.20 [online]. Office of the Federal Register and NARA. [accessed June 2005].

251. USDA, ARS, National Genetic Resources Program. Germplasm resources information network - (GRIN) [online]. Beltsville, Maryland: National Germplasm Resources Laboratory. [accessed December 12, 2005]. Available from World Wide Web (http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/npgs/html/taxgenform.pl).

252. Vasudevan, R. Cytokinin and explant typesinfluence in vitro plant regeneration of Leopard Orchid (Ansellia africana Lindl.) /R. Vasudevan, J.V. Staden //Plant Cell Tiss Organ Cult.-2011.

253. Verma, R.S. Changes in the essential oil composition of rose-scented geranium (Pelargonium graveolens L Herit.ex. Ait.) due to date of transplanting under hill conditions of Uttarakhand /R.S. Verma, R.K. Verma, A.K. Yadav, C. Amit //Indian J. Nat. Prod. Resourc.-2010.-Vol.1(3).-P.367-370.

254. Vijay Kumar, Mack Moyo, Johannes Van Staden. Somatic embryogenesis of Pelargonium sidoides DC /Vijay Kumar, Mack Moyo, Johannes Van Staden. //Springer - Plant Cell Tiss Organ Cult.-Dordrecht 2015.

255. Wang, Yu. Mailei zuowu xuebao /Wang Yu, Fan Qing-qi, Zhaug Li, Sui Xin-xia, Li Yen-ying, Chi Xiu-sheng, Zhang Xian-sheng, Hiang Cheng-yan // Acta Tritical Crops.-2007.-N. 5.-P.755-760.

256. Webb, W.J. The Pelargonium family. The species of Pelargonium, Monsonia and Sarcocaulon London Croom Helm.-1984.-P. 11.

257. Wilson, D.P.M. Histology of somatic embryogenesis in regal geranium /D.P.M Wilson, J.A. Sullivan, A.A. Marsolais, M.J. Tsujita //Journal of the American Society for Horticultural Science, May.-1994.-Vol.119.-N.3.-P. 648-651.

258. Wilson, D.P.M. Improvement of somatic embryogenesis in zonal geranium /D.P.M Wilson, J.A. Sullivan, A.A. Marsolais, M.J. Tsujita //Plant Cell, Tissue and Organ Culture, February.-1996.-Vol.47.-N.1.-P.27-32.

259. Winkelmann, T. Development of a shoot regeneration protocol for genetic transformation in Pelargonium zonale and Pelargonium peltatum hybrids /T. Winkelmann, K. Kaviani, M. Serek //Plant Cell Tiss Org Cult.-200.-Vol. 80.-P.33-42.

260. Wojtana, A. Regeneracja pelargonii w warunkach in vitro /A. Wojtana, E. Gabryszewska //Acta agrobotanica.- Lublin.-2003.-Vol.56.- 5p.

261. Wojtania, A. Regeneration of Pelargonium x hederaefolium "Bonete" from petiole explants //A.Wojtana, E.Gabryszewska, A.Marasek //Acta Physiol. Plantarum.-2004.-Vol.26.-N.3-P.255-262.

262. Xynias, I.N. Effect of cold pretreatment and incubation temperature on bread wheat (Triticum aestivum L.) anther culture /I.N. Xynias, I.A. Zamani, E. Goul - Vavdinoudi //Cer. Res. Com.- 2001.-Vol.29.-P.331-338.

263. Ysugi, S. Inducing callus formation from leaf or petiole segments and culture of callus in Pelargonium /S. Ysugi, Y. Mochiyama //Comb. Proc./ Intern. Plant Propagators Soc.. - [Seattle[Wash.]], 1997.-Vol.46.-10p.

264. Zarsky, V. The Expression of a Small Heat Shock Gene Is Activated during Induction of Tobacco Pollen Embryogenesis by Starvation /V. Zarsky, D. Garrido et al //Plant Cell Environ.-1995.-Vol.18.- P.139-147.

265. http://fuchsia-pelargonium.narod.ru/photoalbum-katalog-pelargonium-zon.html

266. http://posowetuem.ru/ogorod/torfyanye-tabletki-dlya-rassady/

267. http://www.geraniumsonline.com/numbers.htm

268. http: //www.greeninfo .ru/indoor_plants/pelargonium_graveolens/dushistie-pelargonii-scented-leaf-pelargoniums_art.html/

269. http: //www.vertograd- s .com/news/planting-cultures/pelargonium_peltatum/

ПРИЛОЖЕНИЕ А

ЛАБОРАТОРНЫЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ РЕГЛАМЕНТ ПОЛУЧЕНИЯ УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ ПЕЛАРГОНИИ КОРОЛЕВСКОЙ В КУЛЬТУРЕ МИКРОСПОР

Характеристика готовой продукции производства

Наименование продукции: удвоенные гаплоиды пеларгонии королевской, полученные с помощью культуры микроспор и последующим клональным микроразмножением.

Характеристика готовой продукции: укорененные растения с закрытой корневой системой, адаптированные к условиям окружающей среды.

Упаковка: пластиковые кассеты, содержащие укорененные и адаптированные растения возрастом 4-8 недель в почвенном субстрате.

Хранение: продукция может храниться до 3 месяцев (в зависимости от вида) при температуре 20-25 С и обеспечении освещением, водой и питательными веществами.

Применение: получение ценного селекционного материала пеларгонии королевской.

1 Спецификация оборудования

Перечень и назначение оборудования, необходимого для обеспечения производственного процесса, приведены в таблицах (Таблица 1,

Таблица 2).

Таблица 1- Оборудование для получения растений в условиях in vitro

№ Оборудование Назначение

1 автоклав стерилизация жидкостей и пластика

2 весы аналитические взвешивание небольших количеств веществ (регуляторов роста)

3 весы лабораторные взвешивание больших количеств веществ (минеральных солей, агара, углеводов)

4 дистиллятор очистка воды для приготовления питательных сред, мытья посуды и пр.

5 электроплитка разогрев среды

6 кондиционер обеспечение температурного режима для культивирования растений in vitro

7 ламинарный бокс манипуляции с растительными объектами in vitro

8 магнитная мешалка с подогревом размешивание и подогрев растворов

9 рН-метр измерение рН среды

10 спиртовка (стерилизатор) стерилизация инструмента

11 стеллажи культуральные культивирование растений in vitro

12 сухожаровой шкаф стерилизация металлических инструментов и стеклянной посуды

13 холодильник хранение сред, стоков, реактивов

Таблица 2 - Оборудование для анализа плоидности растений-регенерантов

№ Оборудование Назначение

1 дистиллятор очистка воды для приготовления растворов, мытья посуды и пр.

2 весы аналитические взвешивание небольших количеств веществ

3 рН-метр измерение рН растворов

4 магнитная мешалка с подогревом размешивание и подогрев растворов

5 холодильник хранение растворов и реактивов

6 мини-центрифуга осаждение в растворах

7 вортекс перемешивание растворов

8 водяная баня инкубация растворов

9 амплификатор ПЦР в реальном времени проведение ПЦР в реальном времени

10 источник тока для электрофореза проведение электрофореза

11 электрофорезная камера проведение электрофореза

12 транс-иллюминатор визуализация ДНК в гелях

13 микроскоп визуализация хромосом и хлоропластов

ВР. 1.1 Подготовка вентиляционного воздуха

ВР. 1.2 Приготовление стерильной дистиллированной воды

ВР. 1.3 Приготовление дезрастворов

ВР. 1.4 Подготовка «чистых помещений»

ВР. 1.5 Подготовка оборудования

ВР. 1.6 Подготовка технологической одежды

ВР. 1.7 Подготовка персонала

ВР.1 Санитарная подготовка производства

<

Отходы

ТП.10.1 Обработка колхицином

1

ТП.10.2 Стратификация

ВР.2 Основная

подготовка

производства

ТП.3 Изолирование и стерилизация бутонов

ТП.4 Введение в -культуру in vitro

1 г

ТП.5 Культивирование in vitro

1

ТП.6 Клон мик] ние альное юразмноже-

1 г

ТП.7 Анализ плоид-ности растений

ТП.8 У поб коренение егов in vitro v

1 г

ТП.9 А адаптация эастений -

ТП.10 У ш зеличение тоидности

1 г

ТП.11 Высадка в теплицу

ВР.2.1 Приготовление и

розлив питатель-

ных сред

ВР.2.2 Подготовка посу-

ды и инструмен-

тов

ВР.2.3 Подготовка вспо-

могательных ма-

териалов

ТП.4.1 Стерилизация бутонов

ТП.4.2 Извлечение пыльников

ТП.4.3 Выделение микроспор

Отходы

ТП.6.1 Цитологический анализ

ТП.6.2 ПЦР-анализ

Отходы

Отходы

Рисунок 1 - Технологическая схема производства удвоенных гаплоидов пеларгонии королевской в культуре микроспор

2 Описание технологического процесса Санитарная подготовка производства.

Подготовка вентиляционного воздуха.

Вентиляционный воздух, поступающий в зону производства, должен проходить через НЕРА-фильтры.

Приготовление стерильной дистиллированной воды.

Стерильная дистиллированная вода используется для приготовления питательных сред, растворов для стерилизации эксплантов, мытья посуды, инструментов и других целей.

Воду дистиллированную можно получать с помощью ионного обмена и с помощью методов разделения через мембрану (обратного осмоса, электродиализа, ультрафильтрации и др.), однако чаще всего ее получают методом перегонки питьевой или обессоленной воды в специальных дистилляторах. Основными узлами дистилляторов являются испаритель, конденсатор и сборник. Питание апппарата осуществляется водой, которая подается через регулятор давления и через регулятор уровня поступает в нижнюю часть конденсатора-холодильника, заполняет его межтрубное пространство, направляется в камеру предварительного нагрева, а из нее - в трубки испарителя. Здесь предварительно нагретая вода доводится до кипения и образующийся пар откачивается из парового пространства компрессором. В камере испарения создается небольшое разрежение закипание воды в трубках - при температуре 96°С. Вторичный пар в компрессоре снимается, его температура повышается до 103-120°С. Как греющий он проходит в межтрубное пространство испарителя и нагревает воду в трубках до кипения. В межтрубном пространстве образуется конденсат, который направляется в верхнюю часть конденсатора-холодильника, охлаждается и собирается в сборнике дистиллята. Качество воды, получаемой в этом аппарате, высокое, так как капельная фаза испаряется на стенках трубок. Нагревание и кипение в трубках испарителя происходит в тонком слое равномерно и без перебросов. Задерживанию капель из пара способствует также высота парового пространства. Наиболее часто в промышленном производстве применяют дистилляторы- многоступенчатые; они имеют три и более корпусов, расположенных вертикально или горизонтально.

Дистилляторы Finn-Aqua предназначены для перегонки воды, прошедшей ионообменную очистку. Работа ди-стилляционных колон Finn-Aqua основана на двух принципах: мгновенном испарении подаваемой воды и механическом центробежном отделении пирогенных веществ и механических включений.

Стерилизацию воды осуществляют в автоклавах при температуре 121С и давлении в одну атмосферу в течение 20 мин.

Приготовление дезинфицирующих растворов.

Для дезинфекции помещений в качестве дезрастворов используется отбеливатель «Белизна», разведенный в 100 раз в водопроводной воде. Для дезинфекции оборудования используется 70% раствор этанола в дистиллированной воде.

Подготовка «чистых» помещений.

Получение растений в условиях in vitro должно быть организовано в чистых помещениях (зонах) с воздушными шлюзами для обеспечения доступа персонала и (или) перемещения оборудования и материалов. В чистых помещениях необходимо поддерживать соответствующий уровень чистоты и подавать воздух через фильтры необходимой эффективности (НЕРА-фильтры).

Манипуляции с растительными объектами, а также выращивание растений должны выполняться в отдельных чистых зонах.

Чистые помещения для получения растений путем клонального микроразмножения классифицируются в соответствии с требованиями к окружающей среде. Каждая производственная операция требует определенного уровня чистоты окружающей среды в эксплуатируемом состоянии. Для обеспечения соответствия чистых помещений требованиям, предъявляемым к эксплуатируемому состоянию, их проект должен предусматривать достижение заданных классов чистоты воздуха в оснащенном состоянии.

Оснащенное состояние - состояние, в котором чистое помещение функционирует, технологическое оборудование полностью укомплектовано, но персонал отсутствует.

Эксплуатируемое состояние - состояние чистого помещения, в котором технологическое оборудование функционирует в требуемом режиме с заданным числом работающего персонала.

Чистые зоны для получения растений in vitro подразделяются на два типа: