Роль ангиогенного фактора VEGF, его рецепторов и антиапоптотических сигнальных белков Аkt и BCL-2 в развитии гормональной резистентности рака молочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Щербаков, Александр Михайлович

• Щербаков, Александр Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Щербаков, Александр Михайлович

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления о гормональной регуляции роста опухолей молочной железы и возникновении гормонорезистентности.

1.2 Фактор роста эндотелия сосудов и его рецепторы первого и второго типа в опухолях молочной железы. Гормональная регуляция экспрессии VEGF.

1.3 Роль антиапоптотических сигнальных белков Akt и Вс1-2 при раке молочной железы. Механизмы взаимосвязи Akt и Вс1-2 с гормональной регуляцией роста опухолей молочной железы.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Культивирование клеток. Получение гормононезависимой линии клеток рака молочной железы человека.

2.2 Получение клеточных экстрактов. Иммуноблоттинг.

2.3 Характеристика больных.

2.4 Получение и обработка тканей.

2.5 Иммуноферментное определение содержания VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, pAkt и Вс1-2.

2.6 Определение рецепторов стероидных гормонов.

2.7 Статистический анализ данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА 3. АКТИВАЦИЯ ФАКТОРА РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ В ГОРМОНОНЕЗАВИСИМОЙ СУБЛИНИИ КЛЕТОК РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.

3.1 Характеристика гормононезависимой сублинии клеток рака молочной железы.

3.2 Гормональная регуляция экспрессии VEGF и Вс1-2 в клетках рака молочной железы.

3.3 Экспрессия VEGF и его рецептора второго типа в гормононезависимой сублинии клеток рака молочной железы.

3.4 Влияние ингибитора VEGF на рост клеток рака молочной железы и активность митогенпых путей (ERK1 и ERK2).

3.5 Экспрессия и активность Akt в гормононезависимой и родительской линии клеток рака молочной железы.

ГЛАВА 4. ЭКСПРЕССИЯ ФАКТОРА РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ, ЕГО РЕЦЕПТОРОВ ПЕРВОГО И ВТОРОГО ТИПА, АКТИВИРОВАННОЙ ПРОТЕИНКИНАЗЫ АКТ И BCL-2 В ПЕРВИЧНЫХ ОПУХОЛЯХ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.

4.1. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецепторы в первичных опухолях и гистологически неизмененных тканях молочной железы.

4.2 Активированная протеинкиназа Akt и Вс1-2 в первичных опухолях и гистологически неизмененных тканях молочной железы.

4.3 Взаимосвязь митогенных и антиапоптотических факторов при РМЖ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль ангиогенного фактора VEGF, его рецепторов и антиапоптотических сигнальных белков Аkt и BCL-2 в развитии гормональной резистентности рака молочной железы»

Актуальность проблемы. Рак молочной железы (РМЖ) - одно из самых распространенных онкологических заболеваний у женщин [6, 69, 88]. Несмотря на значительный прогресс в его лечении, достигнутый благодаря увеличению чувствительности диагностических процедур и совершенствованию хирургических и лекарственных методов, уровень смертности от РМЖ остается достаточно высоким [6, 13, 20, 88]. Одним из факторов, определяющих высокий уровень смертности больных РМЖ, является существование резистентности опухоли к различным видам терапии [8, 13, 20]. В этой связи не теряет актуальности изучение молекулярных механизмов развития резистентности на моделях in vitro и выявление новых клеточных маркеров, характеризующих чувствительность опухоли к лекарственным препаратам in vivo.

Более 30 лет антиэстроген тамоксифен (Nolvadex, ICI 46474) успешно применяется для лечения больных гормонозависимым РМЖ [4, 13, 20, 54, 61, 83]. Тамоксифен выбран в качестве основного препарата, применяемого в эндокринной терапии первой линии больных РМЖ в постменопаузе, благодаря относительно слабым побочным эффектам и низкой общей стоимости лечения [20]. Данные ретроспективных клинических исследований свидетельствуют о том, что использование тамоксифена на ранних стадиях РМЖ значительно увеличивает общую выживаемость и способствует торможению опухолевого роста [20, 88]. Однако применение тамоксифена осложнено существованием форм РМЖ, резистентных к антиэстрогенам de novo или приобретающих гормональную резистентность в процессе терапии [2, 83].

В настоящее время в клинической практике используется только два молекулярно-биологических маркера чувствительности опухоли к эндокринной терапии - рецепторы эстрогенов (РЭ) и рецепторы прогестерона

РП). По некоторым данным, существует достоверная прямая корреляция между уровнем рецепторов стероидных гормонов в опухолевой ткани и чувствительностью больного к терапии тамоксифеном [20]. К сожалению, данные исследования РЭ и РП не всегда точно отражают чувствительность РМЖ к гормонотерапии. Известно, что только 75% опухолей положительных по рецепторам эстрогенов и прогестерона (РЭ+/РП+) чувствительны к тамоксифену [88].

В связи с этим особую актуальность в клинической практике приобретают исследования дополнительных клеточных маркеров, характеризующих чувствительность опухолевых клеток к гормонотерапии. Среди возможных маркеров эффективности гормональной терапии особое место занимает фактор роста эндотелия сосудов (VEGF/VEGF-A). Уже не вызывает сомнения тот факт, что уровень VEGF - важная характеристика опухолевого ангиогенеза - процесса развития новых сосудов в опухоли [70]. Кроме того, данные исследований последних лет свидетельствуют о возможной взаимосвязи уровня VEGF как с содержанием рецепторов стероидных гормонов в опухоли [32], так и с эффективностью адъювантной гормонотерапии больных РМЖ [121]. В литературе, тем не менее, не существует единого мнения о роли VEGF и его рецепторов (VEGFR-1 и VEGFR-2) в оценке прогноза гормональной чувствительности РМЖ [25, 120, 121]; также недостаточно изучен вопрос о взаимосвязи VEGF и его нижележащих эффекторов с классическими показателями гормонозависимости опухоли (РЭ и РП).

Разработка экспериментальных моделей развития гормональной резистентности РМЖ является перспективным направлением экспериментальной онкологии, расширяющим представления об устойчивости опухоли к антиэстрогенам. За последние годы с помощью исследований in vitro выявлено несколько ключевых механизмов, поддерживающих гормононезависимый рост опухолевых клеток: активация рецепторных тирозинкиназ, нарушение регуляции белков клеточного цикла, активация митогенных путей, изменение функциональной активности рецепторов эстрогенов и др. [8, 54, 89, 148]. Известно, что одним из возможных механизмов гормональной резистентности РМЖ является активация сигнальных путей факторов роста. В частности, экспериментальные данные последних лет свидетельствуют о возможном участии в поддержании роста опухолевых клеток сигнальных путей ключевого ангиогенного белка - VEGF [56, 84, 113, 186]. Интерес к этой проблеме обострился в последнее время в связи с данными некоторых исследовательских групп об экспрессии в опухолевых клетках рецепторов VEGF [30, 84, 188]. Коэкспрессия VEGF и его рецепторов в опухолевых клетках может свидетельствовать об участии этих белков в аутокринной регуляции роста опухоли, однако механизм подобной регуляции и его роль в поддержании гормононезависимого роста опухоли в настоящее время изучены недостаточно. Все это и определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель работы: изучение роли VEGF-зависимых сигнальных путей в развитии гормональной резистентности рака молочной железы.

Задачи исследования:

1. Получение и характеристика гормононезависимой сублинии клеток рака молочной железы человека в условиях in vitro.

2. Анализ экспрессии Bcl-2, VEGF, VEGFR-2 в гормононезависимых и родительских клетках MCF-7.

3. Оценка возможной роли VEGF в регуляции роста гормононезависимых клеток рака молочной железы.

4. Анализ экспрессии и активности Akt, одного из нижележащих эффекторов VEGF, в гормононезависимых и родительских клетках MCF-7.

5. Иммуноферментное исследование содержания VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, pAkt, Bcl-2 в первичных опухолях больных раком молочной железы и изучение взаимосвязи этих показателей с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания (в том числе показателями гормоночувствительности опухоли).

Научная новизна: впервые параллельно исследовано изменение экспрессии ключевого фактора неоваскуляризации рака молочной железы VEGF, его рецепторов и антиапоптотических факторов Akt и Вс1-2 в процессе развития гормональной резистентности клеток рака молочной железы в культуре, а также оценена взаимосвязь этих показателей с клинико-морфологическими особенностями рака молочной железы на клиническом материале. Впервые показано, что развитие гормональной резистентности сопровождается увеличением экспрессии VEGF и его рецептора второго типа. Продемонстрировано, что пролиферация как родительских клеток РМЖ, так и гормононезависимой сублинии, находится под частичным аутокринным контролем со стороны сигнального пути VEGF. При исследовании первичных опухолей молочной железы показано, что уровень VEGF, рецепторов VEGFR-1, VEGFR-2 и антиапоптотического белка Вс1-2 достоверно выше в опухоли по сравнению с окружающими гистологически неизмененными тканями. Впервые установлено, что экспрессия VEGF и VEGFR-2 существенно увеличивается в РП-отрицательных опухолях. В 48% опухолей обнаружено повышение активности Akt, которая имеет тенденцию к увеличению в РЭ-положительных и РП-отрицательных опухолях. В целом, впервые продемонстрировано участие сигнального пути VEGF в аутокринной регуляции и поддержании гормононезависимого роста опухолей молочной железы.

Практическая значимость работы: результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что развитие гормональной резистентности РМЖ сопровождается активацией УЕвР-зависимых сигнальных путей. Некоторые из нижележащих эффекторов УЕвР являются новыми перспективными маркерами гормонорезистентности рака молочной железы и возможными мишенями для ее преодоления.

Основные положения, выносимые на защиту: активация сигнальных путей УБвР как механизм, поддерживающий гормононезависимый рост клеток рака молочной железы.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Щербаков, Александр Михайлович

выводы

1. Получена новая клеточная субпопуляция, MCF-7/T, характеризующаяся устойчивым гормононезависимым ростом, низкой чувствительностью к цитостатическому действию тамоксифена и незначительным, на 25-30%, снижением содержания и связывающей способности рецепторов эстрогенов по сравнению с клетками MCF-7.

2. Продукция эстроген-зависимых белков VEGF и Вс1-2 в клетках MCF-7/T практически полностью теряет зависимость от эстрадиола.

3. Обнаружено достоверное повышение базалыюго уровня экспрессии VEGF и рецептора второго типа VEGFR-2 в клетках MCF-7/T по сравнению с родительской клеточной линией, при этом пролиферация как родительских, так и гормонорезистентных клеток, находится под частичным аутокринным контролем со стороны VEGF-сигнального пути.

4. Существенных отличий в экспрессии и активности Akt, одного из нижележащих эффекторов VEGF, в сублинии MCF-7/T по сравнению с клетками MCF-7 не выявлено.

5. При исследовании первичных опухолей молочной железы показано, что уровень VEGF, рецепторов VEGFR-1, VEGFR-2 и антиапоптотического белка Вс1-2 достоверно выше в 73-85% опухолей по сравнению с окружающими гистологически неизмененными тканями.

6. Установлено, что экспрессия VEGF и VEGFR-2 существенно увеличивается в РП-отрицательных опухолях по сравнению с РП-положительными.

-1117. Тенденция к повышенной продукции VEGF проявляется уже на ранних стадиях рака молочной железы и не сопровождается увеличением активности Akt, которая повышена лишь в 48% опухолей и имеет тенденцию к увеличению на поздних стадиях заболевания, а также в РЭ-положительных и РП-отрицательных опухолях. 8. В целом, полученные данные демонстрируют важную роль VEGF-сигнального пути в аутокринной регуляции и поддержании гормононезависимого роста опухолей молочной железы, что может послужить основой для использования VEGF и его рецепторов в качестве дополнительных маркеров чувствительности опухолей молочной железы к гормонотерапии и мишеней для преодоления гормонорезистентности.

ГЛАВА 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы стало известно, что большое значение в регуляции метаболизма опухоли имеют факторы роста, воздействующие на пролиферацию, выживаемость и процессы апоптоза в опухолевых клетках. Кроме того, повышенная экспрессия некоторых факторов роста и/или их рецепторов рассматривается в настоящее время как один из возможных механизмов, участвующих в формировании устойчивости рака молочной железы к действию гормональных цитостатиков - в частности, к тамоксифену. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) - ключевой регулятор ангиогенеза, белок, индуцирующий активный рост клеток эндотелия сосудов и формирование новых капилляров. Результаты исследований последних лет свидетельствуют о том, что функции VEGF не ограничиваются стимуляцией роста сосудов в опухоли, но могут также иметь большое значение в регуляции внутриклеточного защитного механизма и пролиферации опухолевых клеток. Однако роль сигнальных путей VEGF в поддержании роста рака молочной железы, в том числе и гормононезависимого, до конца не ясна.

В экспериментальной части настоящей работы была охарактеризована эстроген-независимая сублиния клеток рака молочной железы, полученная из гормонозависимой линии MCF-7. Было показано, что длительное культивирование клеток MCF-7 в присутствии тамоксифена приводит к формированию клеточной субпопуляции, устойчивой как к рост-стимулирующему действию эстрогенов, так и к цитостатическому действию тамоксифена. В полученной сублинии клеток выявлено лишь незначительное снижение уровня рецепторов эстрогенов по сравнению с родительскими клетками. Обнаружено также, что в гормононезависимых клетках снижается лиганд-связывающая способность РЭ по сравнению с родительской линией, но

-104в целом, полученную гормононезависимую сублинию можно охарактеризовать как положительную по РЭ.

Учитывая тот факт, что под контролем эстрогенов в РМЖ находится экспрессия большого количества белков, отвечающих за передачу митогенного и антиапоптотического сигнала - в частности, по данным литературы, эстрогены принимают участие в регуляции экспрессии \TEGF и белка Вс1-2, был проведен анализ влияния 17Р-эстрадиола и тамоксифена на уровень Вс1-2 и УЕОБ в родительских и гормононезависимых клетках. Продемонстрировано, что экспрессия УЕвР и Вс1-2 в родительской линии клеток РМЖ значительно увеличивается в присутствии 17(5-эстрадиола и снижается при добавлении тамоксифена. Напротив, в гормононезависимых клетках культивирование с 17р-эстрадиолом не приводило к значительному увеличению экспрессии УЕСР и Вс1-2, а в присутствии тамоксифена уровень этих белков в гормононезависимых клетках практически не снижался. В целом, отсутствие значимых изменений базального уровня УЕСБ и Вс1-2 в сублинии МСР-7/Т в присутствии 17р-эстрадиола или тамоксифена свидетельствует о значительном снижении ответа этих клеток на эстрогены/антиэстрогены по сравнению с родительской линией МСР-7.

В дальнейших экспериментах по исследованию роли сигнальных путей УЕСБ в поддержании роста РМЖ была использована методика краткосрочного культивирования клеток в среде с бесстероидной сывороткой, что позволило исключить влияние стероидных гормонов, содержащихся в стандартной коммерческой сыворотке, на базальный уровень экспрессии генов-мишеней эстрогенов (в частности, УЕСБ). Было отмечено, что гормононезависимая сублиния клеток обладает более высокой скоростью роста при культивировании в бесстероидной среде по сравнению с родительской клеточной линией. Учитывая высокую скорость роста гормононезависимой линии МСР-7/Т в бесстероидной среде, мы предположили, что в условиях отсутствия эстрогенов рост клеток поддерживается за счет повышенной активности отдельных митогенных сигнальных путей, в частности - УЕвР-ассоциированных молекул. Иммуноферментный анализ выявил значительное увеличение содержания УЕвР в гормононезависимой линии МСР-7/Т по сравнению с родительскими клетками в этих условиях культивирования, в гормононезависимой линии МСР-7/Т была обнаружена также повышенная экспрессия рецептора УЕвР второго типа. Таким образом, в гормононезависимых клетках РМЖ наблюдается повышенная продукция УЕвБ с параллельным увеличением экспрессии УЕОРЯ-2. Полученные нами результаты, свидетельствующие об экспрессии УЕвР и УЕОРЯ-2 в клетках МСР-7 и МСР-7/Т, позволяют рассматривать активацию УЕОР/УЕСР11-2-сигнального пути как один из возможных аутокринных механизмов, поддерживающих рост клеток рака молочной железы и играющих, в частности, важную роль в регуляции гормононезависимого роста РМЖ.

Для подтверждения этой гипотезы мы использовали ингибитор УЕвР -растворимый фрагмент его рецептора первого типа, снижающий биологическую доступность УЕвР в среде. Как в родительской, так и в гормононезависимой сублинии МСР-7/Т ингибитор УЕвР вызывал достоверное снижение скорости роста клеток. Кроме того, продемонстрировано, что культивирование клеток с ингибитором УЕвР приводит к снижению активности МАР-киназ (ключевых белков, участвующих в контроле пролиферации) как в родительской, так и в гормононезависимой сублинии МСР-7/Т.

Взятые вместе, представленные результаты показывают, что пролиферация клеток МСР-7, в том числе и гормононезависимой сублинии МСР-7/Т, находится под частичным аутокринным контролем со стороны сигналыгого пути VEGF. Конститутивная активация VEGF и VEGFR-2, обнаруженная в гормононезависимых клетках MCF-7/T, свидетельствует о важной роли сигнального пути VEGF/VEGFR-2 в аутокринной регуляции и поддержании гормононезависимого роста РМЖ.

Также в родительских и гормононезависимых клетках оценена также активность антиапоптотического сигнального белка Akt - одного из нижележащих эффекторов VEGF [145]. Учитывая повышенную продукцию VEGF в гормононезависимой сублинии по сравнению с родительскими клетками, можно было ожидать, что в этих клетках повышается содержание активированной (фосфорилированной) формы Akt. Однако отличий в активности и экспрессии Akt в родительских и гормононезависимых клетках не выявлено. Отсутствие отличий в активности Akt в клетках MCF-7 и MCF-7/Т (при значительной разнице в продукции VEGF и VEGFR-2 в этих линиях) косвенно свидетельствует о возможном нарушении передачи сигнала от VEGF к Akt в полученной гормононезависимой линии РМЖ.

Следует подчеркнуть, что активация сигнального пути VEGF может рассматриваться лишь как один из возможных механизмов, участвующих в преодолении опухолевой клеткой цитостатического действия антиэстрогенов. Данные современной литературы свидетельствуют о том, что изменения метаболизма, происходящие в опухоли при возникновении гормонорезистентности, охватывают широкий спектр молекулярных путей: активацию некоторых рецепторных тирозинкиназ, нарушение регуляции белков клеточного цикла, изменения активности цитоплазматических белков семейства Hsp, активацию митогенных путей, изменение функциональной активности рецепторов эстрогенов и других транскрипционных факторов и др. [2, 3, 8, 13, 39, 49, 53, 54, 56, 68, 85, 148, 156]. Все это определяет целесообразность дальнейших исследований, направленных, с одной стороны, на оценку роли различных внутриклеточных путей в возникновении гормонорезистентности, с другой - на разработку новых методов лекарственной терапии гормононезависимых форм РМЖ с использованием ингибиторов сигнальных молекул.

В клинико-лабораторной части настоящего исследования нам удалось продемонстрировать увеличение уровня VEGF и его рецепторов VEGFR-1 и VEGFR-2 в первичных опухолях больных раком молочной железы по сравнению с окружающими гистологически неизмененными тканями. Продемонстрированная достоверная корреляция показателей содержания VEGF в опухолевой ткани с уровнями VEGFR-1 и VEGFR-2 указывает на возможную коэкспрессию некоторых компонентов VEGF-сигнального пути в клетках рака молочной железы. В целом, эти результаты свидетельствуют об активации некоторых VEGF-зависимых механизмов в опухоли и косвенно подтверждает аутокринную роль VEGF при РМЖ, продемонстрированную в экспериментальной части нашей работы.

Проведенная параллельно оценка содержания в опухолевой и неизмененной ткани молочной железы нижележащих эффекторов сигнального пути VEGF - белка Вс1-2 и активированной формы антиапоптотического белка Akt (pAkt) - показала, что увеличение уровня pAkt относительно окружающей неизмененной ткани молочной железы происходит лишь в половине исследованных опухолей, а уровень другого антиапоптотического белка, Вс1-2, достоверно возрастает в опухолях 82% обследованных больных.

Сопоставление с основными клинико-морфологическими факторами прогноза свидетельствует о том, что уже на ранних стадиях заболевания проявляется способность опухоли к повышенной продукции VEGF, а также тенденция к увеличению уровня VEGFR-1 в ткани РМЖ. Повышенная экспрессия VEGF отмечена в опухолях небольших размеров и у больных без поражений лимфатических узлов. Уровень VEGFR-2 не зависит от клинической стадии заболевания, размера опухоли и вовлеченности лимфатических узлов. С другой стороны, уровень нижележащего эффектора VEGF - pAkt - наиболее низок на ранних стадиях заболевания, и его содержание не связано с размером опухоли и вовлеченностью лимфатических узлов, а уровень антиапоптотического белка Вс1-2 не был взаимосвязан ни с одним из показателей распространенности РМЖ.

Различия во взаимосвязи клинико-морфологических характеристик РМЖ с уровнями VEGF и его рецепторов с одной стороны, и с уровнями нижележащих эффекторов этого сигнального пути, с другой, указывают на отсутствие согласованных изменений экспрессии различных сигнальных молекул при прогрессировании рака молочной железы. В пользу этого предположения свидетельствует и отсутствие корреляционных зависимостей между уровнями VEGF/VEGFR и эффекторных антиапоптотических белков.

Одной из важнейших задач работы была оценка возможной взаимосвязи экспрессии компонентов сигнального пути VEGF с классическим показателем гормоночувствительности рака молочной железы, используемым в клинической практике, - статусом рецепторов стероидных гормонов в опухоли. Оказалось, что уровни VEGF и VEGFR-2 были повышены в РП-отрицательных опухолях по сравнению с РП-положительными, наблюдалась также и тенденция к увеличению содержания VEGF в РЭ-отрицательных образцах. В то же время, уровни как pAkt, так и Вс1-2 достоверно положительно коррелировали со статусом РЭ. Для РП, напротив, проявлялась противоположная тенденция: содержание pAkt в опухоли и частота его повышения по сравнению с неизмененной тканыо при рецепторотрицательных опухолях была достоверно выше, чем при РП-положителыюм РМЖ.

Полученные данные о связи pAkt с показателями гормоночувствительности свидетельствуют о возможной роли этого белка в прогнозе эндокринной терапии РМЖ. В настоящее время Akt рассматривается многими авторами [47, 91, 160] как перспективная мишень для направленной противоопухолевой терапии, так как воздействие на этот фермент возможно использовать для преодоления лекарственной, гормональной и радиорезистентности опухолей.

Таким образом, некоторые компоненты сигнального пути УЕвР являются достаточно перспективными биомаркерами рака молочной железы не только в качестве показателей неоангиогенеза, но и в качестве возможных факторов неблагоприятного прогноза гормонотерапии. По-видимому, утрата опухолью гормональной зависимости может быть ассоциирована в некоторых случаях с повышенной продукцией ангиогенных факторов, их рецепторов, а также с изменениями в балансе между белками, регулирующими апоптоз и выживаемость клеток.

В целом, полученные в настоящей работе данные демонстрируют важную роль сигнального пути УЕОР/УЕОРЯ в аутокринной регуляции и поддержании гормононезависимого роста опухолей молочной железы, что может послужить основой для использования УЕвР, его рецепторов и некоторых нижележащих эффекторных белков в качестве дополнительных маркеров чувствительности опухолей молочной железы к эндокринной терапии и иметь значение для разработки подходов к преодолению исходной и/или приобретенной гормонорезистентности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Щербаков, Александр Михайлович, 2006 год

1. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. Эдиториал УРСС - М.-2002.

2. Берштейн JI.M. Онкоэндокринология. Традиции, современность и перспективы. Наука СП6.-2004.

3. Берштейн J1.M., Саптен Р. Молекулярные механизмы резистентности к тамоксифену // Вопросы онкологии.-2002.-Т. 48 (1).-С. 17-23.

4. Гарин A.M. Эндокринная терапия и гормонозависимые опухоли. Триада М.-2005.

5. Герштейн Е.С., Смирнова К.Д., Моисеенко Е.И., Бассалык JT.C. Прогностическое значение уровня рецепторов глюкокортикоидов в бластных клетках костного мозга детей, больных лейкозами // Вопросы онкологии.-1987.-Т. 33 (1).-С. 20-24.

6. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Злокачественные заболевания в России и странах СНГ. М.-2004.

7. Жукова Л.Г., Жуков Н.В., Личиницер М.Р. Экспрессия рецепторов VEGF FLT-1 и FLK-1 на опухолевых клетках новый фактор прогноза при местно-распространенном раке молочной железы // Бюлл эксп биол мед -2003.-Т. 135 (5).-С. 478-481.

8. Красильников М.А. Современные подходы к изучению механизма эстроген-независимого роста опухолей молочной железы // Вопросы онкологии.-2004.-Т. 50 (4).-С. 399-405.

9. Красильников М.А. Сигнальные пути, регулируемые фосфатидилинозит-3-киназой и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток// Биохимия.-2000.-Т. 65 (1).-С. 68-78.

10. Красильников М.А., Лузай Е.В., Щербаков A.M. и др. Участие фосфатидилинозит-3 киназы в регуляции дифференциальной чувствительности клеток меланомы к противоопухолевым агентам.

11. Модель развития гормональной резистентности опухолевых клеток. // Биохимия.-2004.-Т. 69 (З).-С. 399-409.

12. Кушлинский Н.Е., Герштейн Е.С. Роль фактора роста эндотелия сосудов при раке молочной железы // Бюлл эксп биол мед -2002.-Т. 133 (6).-С. 604-613.

13. Кушлинский Н.Е., Портной С.М., Лактионов К.П., Аксель Е.М. Рак молочной железы. Изд-во РАМН М.-2005.

14. Летягин В.П. Опухоли молочных желез. М.-2004.

15. Летягин В.П. Первичные опухоли молочной железы. Практическое руководство по лечению. Миклош М.-2005.

16. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. Издательство РАМН -М.-2000.

17. Семиглазов В.Ф., Иванов В.Г., Моисеенко В.М. и др. Адъювантная гормонотерапия рака молочной железы // Вопросы онкологии.-1995.-Т. 41 (2).-С. 126.

18. Семиглазов В.Ф., Костетская Т.В. Тамоксифен "золотой стандарт" в лечении больных ранним раком молочной железы // Вопросы онкологии.-2001 .-Т. 47 (1).-С. 108-112.

19. Tamoxifen for early breast cancer: an overview of the randomised trials. Early Breast Cancer Trialists' Collaborative Group // Lancet.-1998.-T. 351 (9114).-C. 1451-1467.

20. Aaronson S.A., Abbruzzese J.L., Abosch A. et al. Cancer Medicine. B.C. Decker Inc. London.-2000.

21. Adams J., Carder P.J., Downey S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in breast cancer: comparison of plasma, serum, and tissue VEGF andmicrovessel density and effects of tamoxifen // Cancer Res.-2000.-Vol. 60 (ll).-P. 2898-2905.

22. Ahmad S., Singh N., Glazer R.I. Role of AKT1 in 17beta-estradiol- and insulin-like growth factor I (IGF-I)-dependent proliferation and prevention of apoptosis in MCF-7 breast carcinoma cells // Biochem Pharmacol.-1999.-Vol. 58 (3).-P. 425-430.

23. Al-Moundhri M., Nirmala V., Al-Mawaly K. et al. Significance of p53, Bcl-2, and HER-2/neu protein expression in Omani Arab females with breast cancer//Pathol Oncol Res.-2003.-Vol. 9 (4).-P. 226-231.

24. Altiok S., Batt D., Altiok N. et al. Heregulin induces phosphorylation of BRCA1 through phosphatidylinositol 3-Kinase/AKT in breast cancer cells // J Biol Chem.-1999.-Vol. 274 (45).-P. 32274-32278.

25. Altundag K., Elkiran E.T., Altundag O. Vascular endothelial growth factor is associated with the efficacy of endocrine therapy in patients with advanced breast carcinoma//Cancer.-2004.-Vol. 100 (8).-P. 1768-1769; author reply 1769.

26. Anan K., Morisaki T., Katano M. et al. Vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor are potential angiogenic and metastatic factors in human breast cancer // Surgery.-1996.-Vol. 119 (3).-P. 333-339.

27. Attwell S., Roskelley C., Dedhar S. The integrin-linked kinase (ILK) suppresses anoikis // Oncogene.-2000.-Vol. 19 (33).-P. 3811-3815.

28. Bachelder R.E., Crago A., Chung J. et al. Vascular endothelial growth factor is an autocrine survival factor for neuropilin-expressing breast carcinoma cells//CancerRes.-2001.-Vol. 61 (15).-P. 5736-5740.

29. Bachelder R.E., Lipscomb E.A., Lin X. et al. Competing autocrine pathways involving alternative neuropilin-1 ligands regulate chemotaxis of carcinoma cells // Cancer Res.-2003.-Vol. 63 (17).-P. 5230-5233.

30. Bachelder R.E., Wendt M.A., Mercurio A.M. Vascular endothelial growth factor promotes breast carcinoma invasion in an autocrine manner by regulating the chemokine receptor CXCR4 // Cancer Res.-2002.-Vol. 62 (24).-P. 7203-7206.

31. Bachleitner-Hofmann T., Pichler-Gebhard B., Rudas M. et al. Pattern of hormone receptor status of secondary contralateral breast cancers in patients receiving adjuvant tamoxifen // Clin Cancer Res.-2002.-Vol. 8 (11).-P. 34273432.

32. Bando H., Weich H.A., Brokelmann M. et al. Association between intratumoral free and total VEGF, soluble VEGFR-1, VEGFR-2 and prognosis in breast cancer // Br J Cancer.-2005.-Vol.-P.

33. Bargou R.C., Daniel P.T., Mapara M.Y. et al. Expression of the bcl-2 gene family in normal and malignant breast tissue: low bax-alpha expression in tumor cells correlates with resistance towards apoptosis // Int J Cancer.-1995,-Vol. 60 (6).-P. 854-859.

34. Beierle E.A., Strande L.F., Chen M.K. VEGF upregulates Bcl-2 expression and is associated with decreased apoptosis in neuroblastoma cells // J Pediatr Surg.-2002.-Vol. 37 (3).-P. 467-471.

35. Bellacosa A., de Feo D., Godwin A.K. et al. Molecular alterations of the AKT2 oncogene in ovarian and breast carcinomas // Int J Cancer.-1995.-Vol. 64 (4).-P. 280-285.

36. Benz C.C., Scott G.K., Sarup J.C. et al. Estrogen-dependent, tamoxifen-resistant tumorigenic growth of MCF-7 cells transfected with HER2/neu // Breast Cancer Res Treat.-1993.-Vol. 24 (2).-P. 85-95.

37. Berardo M.D., Elledge R.M., de Moor C. et al. bcl-2 and apoptosis in lymph node positive breast carcinoma // Cancer.-1998.-Vol. 82 (7).-P. 1296-1302.

38. Berstein L.M., Zheng H., Yue W. et al. New approaches to the understanding of tamoxifen action and resistance // Endocr Relat Cancer .-2003 .-Vol. 10 (2).-P. 267-277.

39. Bogin L., Degani H. Hormonal regulation of VEGF in orthotopic MCF7 human breast cancer // Cancer Res.-2002.-Vol. 62 (7).-P. 1948-1951.

40. Bollag D.M., Edelstein S.J. Protein methods. Wiley-Liss.-1991.

41. Brieger J., Schroeder P., Gosepath J., Mann W.J. VEGF-subtype specific protection of SCC and HUVECs from radiation induced cell death // Int J Mol Med.-2005.-Vol. 15(1).-P. 145-151.

42. Brockdorff B.L., Heiberg I., Lykkesfeldt A.E. Resistance to different antiestrogens is caused by different multi-factorial changes and is associated with reduced expression of IGF receptor Ialpha // Endocr Relat Cancer.-2003.-Vol. 10 (4).-P. 579-590.

43. Brooks S.C., Locke E.R., Soule H.D. Estrogen receptor in a human cell line (MCF-7) from breast carcinoma // J Biol Chem.-1973.-Vol. 248 (17).-P. 6251-6253.

44. Burgering B.M., Coffer P.J. Protein kinase B (c-Akt) in phosphatidylinositol-3-OH kinase signal transduction//Nature.-1995.-Vol. 376 (6541).-P. 599602.

45. Burow M.E., Weldon C.B., Melnik L.I. et al. PI3-K/AKT regulation of NF-kappaB signaling events in suppression of TNF-induced apoptosis // Biochem Biophys Res Commun.-2000.-Vol. 271 (2).-P. 342-345.

46. Campbell R.A., Bhat-Nakshatri P., Patel N.M. et al. Phosphatidylinositol 3-kinase/AKT-mediated activation of estrogen receptor alpha: a new model for anti-estrogen resistance // J Biol Chem.-2001.-Vol. 276 (13).-P. 9817-9824.

47. Chang J., Ormerod M., Powles T.J. et al. Apoptosis and proliferation as predictors of chemotherapy response in patients with breast carcinoma // Cancer.-2000.-Vol. 89 (ll).-P. 2145-2152.

48. Chung J., Bachelder R.E., Lipscomb E.A. et al. Integrin (alpha 6 beta 4) regulation of eIF-4E activity and VEGF translation: a survival mechanism for carcinoma cells//J Cell Biol.-2002.-Vol. 158 (l).-P. 165-174.

49. Clark A.S., West K., Streicher S., Dennis P.A. Constitutive and inducible Akt activity promotes resistance to chemotherapy, trastuzumab, or tamoxifen in breast cancer cells // Mol Cancer Ther.-2002.-Vol. 1 (9).-P. 707-717.

50. Clarke R., Liu M.C., Bouker K.B. et al. Antiestrogen resistance in breast cancer and the role of estrogen receptor signaling // Oncogene.-2003.-Vol. 22 (47).-P. 7316-7339.

51. Coradini D., Daidone M.G. Biomolecular prognostic factors in breast cancer // Curr Opin Obstet Gynecol.-2004.-Vol. 16 (l).-P. 49-55.

52. Coradini D., Pellizzaro C., Speranza A., Daidone M.G. Hypoxia and estrogen receptor profile influence the responsiveness of human breast cancer cells to estradiol and antiestrogens // Cell Mol Life Sci.-2004.-Vol. 61 (l).-P. 76-82.

53. Cosman F., Lindsay R. Selective estrogen receptor modulators: clinical spectrum // Endocr Rev.-1999.-Vol. 20 (3).-P. 418-434.

54. Cross M.J., Dixelius J., Matsumoto T., Claesson-Welsh L. VEGF-receptor signal transduction // Trends Biochem Sci.-2003.-Vol. 28 (9).-P. 488-494.

55. Dimitrakakis C., Konstadoulakis M., Messaris E. et al. Molecular markers in breast cancer: can we use c-erbB-2, p53, bcl-2 and bax gene expression as prognostic factors?//Breast.-2002.-Vol. 11 (4).-P. 279-285.

56. Dotzlaw H., Leygue E., Watson P.H., Murphy L.C. Estrogen receptor-beta messenger RNA expression in human breast tumor biopsies: relationship to steroid receptor status and regulation by progestins // Cancer Res.-1999.-Vol. 59 (3).-P. 529-532.

57. Duan R., Porter W., Safe S. Estrogen-induced c-fos protooncogene expression in MCF-7 human breast cancer cells: role of estrogen receptor Spl complex formation//Endocrinology.-1998.-Vol. 139 (4).-P. 1981-1990.

58. Elledge R.M., Green S., Howes L. et al. bcl-2, p53, and response to tamoxifen in estrogen receptor-positive metastatic breast cancer: a Southwest Oncology Group study //J Clin Oncol.-1997.-Vol. 15 (5).-P. 1916-1922.

59. Eng C. PTEN: one gene, many syndromes // Hum Mutat.-2003.-Vol. 22 (3).-P. 183-198.

60. Faridi J., Wang L., Endemann G., Roth R.A. Expression of constitutively active Akt-3 in MCF-7 breast cancer cells reverses the estrogen and tamoxifen responsivity of these cells in vivo // Clin Cancer Res.-2003.-Vol. 9 (8).-P. 2933-2939.

61. Ferguson S.J., Kasper A.S. Breast cancer: society shapes an epidemic. St. Martin's Press,.-2002.

62. Ferrara N. The role of VEGF in the regulation of physiological and pathological angiogenesis // Exs.-2005.-Vol. (94).-P. 209-231.

63. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress // Endocr Rev.-2004.-Vol. 25 (4).-P. 581-611.

64. Ferrara N., Gerber H.P., LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors // Nat Med.-2003.-Vol. 9 (6).-P. 669-676.

65. Foekens J.A., Peters H.A., Grebenchtchikov N. et al. High tumor levels of vascular endothelial growth factor predict poor response to systemic therapy in advanced breast cancer// Cancer Res.-2001.-Vol. 61 (14).-P. 5407-5414.

66. Franke T.F., Horaik C.P., Segev L. et al. PI3K/Akt and apoptosis: size matters // Oncogene.-2003.-Vol. 22 (56).-P. 8983-8998.

67. Garvin S., Dabrosin C. Tamoxifen inhibits secretion of vascular endothelial growth factor in breast cancer in vivo // Cancer Res.-2003.-Vol. 63 (24).-P. 8742-8748.

68. Gasparini G. Clinical significance of determination of surrogate markers of angiogenesis in breast cancer // Crit Rev Oncol Hematol.-2001.-Vol. 37 (2).-P. 97-114.

69. Gasparini G. Prognostic value of vascular endothelial growth factor in breast cancer//Oncologist.-2000.-Vol. 5 Suppl l.-P. 37-44.

70. Gershtein E.S., Shatskaya V.A., Ermilova V.D. et al. Phospatidylinositol 3-kinase expression in human breast cancer // Clin Chim Acta.-1999.-Vol. 287 (l-2).-P. 59-67.

71. Apoptosis in breast carcinoma // Pathol Res Pract.-2000.-Vol. 196 (3).-P. 167-174.

72. Gradishar W.J. Tamoxifen-what next? // Oncologist.-2004.-Vol. 9 (4).-P. 378-384.

73. Guo P., Fang Q., Tao H.Q. et al. Overexpression of vascular endothelial growth factor by MCF-7 breast cancer cells promotes estrogen-independent tumor growth in vivo // Cancer Res.-2003.-Vol. 63 (15).-P. 4684-4691.

74. Gutierrez M.C., Detre S., Johnston S. et al. Molecular changes in tamoxifen-resistant breast cancer: relationship between estrogen receptor, HER-2, and p38 mitogen-activated protein kinase // J Clin Oncol.-2005.-Vol. 23 (11).-P. 2469-2476.

75. Guvakova M.A., Surmacz E. Overexpressed IGF-I receptors reduce estrogen growth requirements, enhance survival, and promote E-cadherin-mediated cell-cell adhesion in human breast cancer cells // Exp Cell Res.-1997.-Vol. 231 (l).-P. 149-162.

76. Haldar S., Negrini M., Monne M. et al. Down-regulation of bcl-2 by p53 in breast cancer cells // Cancer Res.-1994.-Vol. 54 (8).-P. 2095-2097.

77. Harris J.R. Diseases of the breast. Lippincott-Raven.-1996.

78. Henderson B.E., Ponder B.A.J., Ross R.K. Hormones, genes, and cancer. Oxford University Press,.-2003.

79. Holle L., Hicks L., Song W. et al. Bcl-2 targeting siRNA expressed by a T7 vector system inhibits human tumor cell growth in vitro // Int J 0ncol.-2004.-Vol. 24 (3).-P. 615-621.

80. Iervolino A., Trisciuoglio D., Ribatti D. et al. Bcl-2 overexpression in human melanoma cells increases angiogenesis through VEGF mRNA stabilization and HIF-1 -mediated transcriptional activity // Faseb J.-2002.-Vol. 16 (11).-P. 1453-1455.

81. Joensuu H., Pylkkanen L., Toikkanen S. Bcl-2 protein expression and long-term survival in breast cancer // Am J Pathol.-1994.-Vol. 145 (5).-P. 11911198.

82. Johnston S.R. Clinical trials of intracellular signal transductions inhibitors for breast cancer-a strategy to overcome endocrine resistance // Endocr Relat Cancer.-2005.-Vol. 12 Suppl l.-P. S145-157.

83. Johnston S.R., Saccani-Jotti G., Smith I.E. et al. Changes in estrogen receptor, progesterone receptor, and pS2 expression in tamoxifen-resistant human breast cancer//Cancer Res.-1995.-Vol. 55 (15).-P. 3331-3338.

84. Jordan N.J., Gee J.M., Barrow D. et al. Increased constitutive activity of PKB/Akt in tamoxifen resistant breast cancer MCF-7 cells // Breast Cancer Res Treat.-2004.-Vol. 87 (2).-P. 167-180.

85. Jordan V.C. Targeting antihormone resistance in breast cancer: a simple solution // Ann Oncol.-2003.-Vol. 14 (7).-P. 969-970.

86. Kandouz M., Siromachkova M., Jacob D. et al. Antagonism between estradiol and progestin on Bcl-2 expression in breast-cancer cells // Int J Cancer.-1996.-Vol. 68 (l).-P. 120-125.

87. Kapranos N., Karaiosifidi H., Valavanis C. et al. Prognostic significance of apoptosis related proteins Bcl-2 and Bax in node-negative breast cancer patients // Anticancer Res.-1997.-Vol. 17 (4A).-P. 2499-2505.

88. Kawai H., Li H., Chun P. et al. Direct interaction between BRCA1 and the estrogen receptor regulates vascular endothelial growth factor (VEGF) transcription and secretion in breast cancer cells // Oncogene.-2002.-Vol. 21 (50).-P. 7730-7739.

89. Knowlton К., Mancini M., Creason S. et al. Bcl-2 slows in vitro breast cancer growth despite its antiapoptotic effect // J Surg Res.-1998.-Vol. 76 (l).-P. 2226.

90. Knuefermann C., Lu Y., Liu B. et al. HER2/PI-3K/Akt activation leads to a multidrug resistance in human breast adenocarcinoma cells // Oncogene.-2003,-Vol. 22 (21).-P. 3205-3212.

91. Krajewski S., Thor A.D., Edgerton S.M. et al. Analysis of Bax and Bcl-2 expression in p53-immunopositive breast cancers // Clin Cancer Res.-1997.-Vol. 3 (2).-P. 199-208.

92. Krasil'nikov M.A., Shatskaya V.A., Stavrovskaya A.A. et al. The role of phosphatidyl inositol 3-kinase in the regulation of cell response to steroid hormones // Biochim Biophys Acta.-1999.-Vol. 1450 (3).-P. 434-443.

93. Kumar R., Vadlamudi R.K., Adam L. Apoptosis in mammary gland and cancer // Endocr Relat Cancer.-2000.-Vol. 7 (4).-P. 257-269.

94. Kymionis G.D., Dimitrakakis C.E., Konstadoulakis M.M. et al. Can expression of apoptosis genes, bcl-2 and bax, predict survival and responsiveness to chemotherapy in node-negative breast cancer patients? // J SurgRes.-2001.-Vol. 99 (2).-P. 161-168.

95. Larsen S.S., Heiberg I., Lykkesfeldt A.E. Anti-oestrogen resistant human breast cancer cell lines are more sensitive towards treatment with the vitamin D analogue EB1089 than parent MCF-7 cells // Br J Cancer.-2001.-Vol. 84 (5).-P. 686-690.

96. Lee J.E., Chung K.W., Han W. et al. Effect of estrogen, tamoxifen and epidermal growth factor on the transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor in breast cancer cells // Anticancer Res.-2004.-Vol. 24 (6).-P. 3961-3964.

97. Li F., Srinivasan A., Wang Y. et al. Cell-specific induction of apoptosis by microinjection of cytochrome c. Bcl-xL has activity independent of cytochrome с release // J Biol Chem.-1997.-Vol. 272 (48).-P. 30299-30305.

98. Liang K., Jin W., Knuefermann C. et al. Targeting the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway for enhancing breast cancer cells to radiotherapy // Mol Cancer Ther.-2003.-Vol. 2 (4).-P. 353-360.

99. Liang Y., Hyder S.M. Proliferation of endothelial and tumor epithelial cells by progestin-induced vascular endothelial growth factor from human breast cancer cells: paracrine and autocrine effects // Endocrinology.-2005.-Vol. 146 (8).-P. 3632-3641.

100. Lilling G., Hacohen H., Nordenberg J. et al. Differential sensitivity of MCF-7 and LCC2 cells, to multiple growth inhibitory agents: possible relation to highbcl-2/baxratio?//CancerLett.-2000.-Vol. 161 (l).-P. 27-34.

101. Longva K.E., Pedersen N.M., Haslekas C. et al. Herceptin-induced inhibition of ErbB2 signaling involves reduced phosphorylation of Akt but not endocytic down-regulation of ErbB2 // Int J Cancer.-2005.-Vol. 116 (3).-P. 359-367.

102. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J Biol Chem.-1951.-Vol. 193 (l).-P. 265-275.

103. Ludovini V., Sidoni A., Pistola L. et al. Evaluation of the prognostic role of vascular endothelial growth factor and microvessel density in stages I and II breast cancer patients // Breast Cancer Res Treat.-2003.-Vol. 81 (2).-P. 159168.

104. Manders P., Beex L.V., Tjan-Heijnen V.C. et al. The prognostic value of vascular endothelial growth factor in 574 node-negative breast cancer patients who did not receive adjuvant systemic therapy // Br J Cancer.-2002.-Vol. 87 (7).-P. 772-778.

105. Manders P., Beex L.V., Tjan-Heijnen V.C. et al. Vascular endothelial growth factor levels do not predict efficacy of systemic adjuvant treatment asassessed in 1127 breast cancer patients // Int J Oncol.-2004.-Vol. 25 (2).-P. 511-517.

106. Manders P., Beex L.V., Tjan-Heijnen V.C. et al. Vascular endothelial growth factor is associated with the efficacy of endocrine therapy in patients with advanced breast carcinoma // Cancer.-2003.-Vol. 98 (10).-P. 2125-2132.

107. Martinez-Arribas F., Nunez-Villar M.J., Lucas A.R. et al. Immunofluorometric study of Bcl-2 and Bax expression in clinical fresh tumor samples from breast cancer patients // Anticancer Res.-2003.-Vol. 23 (1B).-P. 565-568.

108. Matsumoto T., Claesson-Welsh L. VEGF receptor signal transduction // Sei STKE.-2001.-Vol. 2001 (112).-P. RE21.

109. Merlin J.L., Azzi S., Lignon D. et al. MTT assays allow quick and reliable measurement of the response of human tumour cells to photodynamic therapy // Eur J Cancer.-1992.-Vol. 28A (8-9).-P. 1452-1458.

110. Miralem T., Steinberg R., Price D., Avraham H. VEGF(165) requires extracellular matrix components to induce mitogenic effects and migratory response in breast cancer cells // Oncogene.-2001.-Vol. 20 (39).-P. 55115524.

111. Mirkin S., Wong B.C., Archer D.F. Effect of 17beta-estradiol, progesterone, synthetic progestins, tibolone, and tibolone metabolites on vascular endothelial growth factor mRNA in breast cancer cells // Fertil Steril.-2005.-Vol. 84 (2).-P. 485-491.

112. Monaghan P., Robertson D., Amos T.A. et al. Ultrastructural localization of bcl-2 protein//J Histochem Cytochem.-1992.-Vol. 40 (12).-P. 1819-1825.

113. Mosselman S., Polman J., Dijkema R. ER beta: identification and characterization of a novel human estrogen receptor // FEBS Lett.-1996.-Vol. 392 (l).-P. 49-53.

114. Mueller M.D., Vigne J.L., Minchenko A. et al. Regulation of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene transcription by estrogen receptors alpha and beta // Proc Natl Acad Sei U S A.-2000.-Vol. 97 (20).-P. 1097210977.

115. Nakatani K., Thompson D.A., Barthel A. et al. Up-regulation of Akt3 in estrogen receptor-deficient breast cancers and androgen-independent prostate cancer lines //J Biol Chem.-1999.-Vol. 274 (31).-P. 21528-21532.

116. Nakopoulou L., Stefanaki K., Panayotopoulou E. et al. Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-2/Flk-l in breast carcinomas: correlation with proliferation // Hum Pathol.-2002.-Vol. 33 (9).-P. 863-870.

117. Nathan B., Gusterson B., Jadayel D. et al. Expression of BCL-2 in primary breast cancer and its correlation with tumour phenotype. For the International (Ludwig) Breast Cancer Study Group //Ann Oncol.-1994.-Vol. 5 (5).-P. 409414.

118. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S., Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors // Faseb J.-1999.-Vol. 13 (l).-P. 9-22.

119. Nicholson R.I., Hutcheson I.R., Britton D. et al. Growth factor signalling networks in breast cancer and resistance to endocrine agents: new therapeutic strategies // J Steroid Biochem Mol Biol.-2005.-Vol. 93 (2-5).-P. 257-262.

120. Nicholson R.I., Hutcheson I.R., Harper M.E. et al. Modulation of epidermal growth factor receptor in endocrine-resistant, oestrogen receptor-positive breast cancer //Endocr Relat Cancer.-2001.-Vol. 8 (3).-P. 175-182.

121. Obermair A., Kucera E., Mayerhofer K. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in human breast cancer: correlation with disease-free survival // Int J Cancer.-1997.-Vol. 74 (4).-P. 455-458.

122. Olea-Serrano N., Devleeschouwer N., Leclercq G., Heuson J.C. Assay for estrogen and progesterone receptors of breast cancer cell lines in monolayer culture // Eur J Cancer Clin Oncol.-1985.-Vol. 21 (8).-P. 965-973.

123. Olopade O.I., Adeyanju M.O., Safa A.R. et al. Overexpression of BCL-x protein in primary breast cancer is associated with high tumor grade and nodal metastases // Cancer J Sci Am.-1997.-Vol. 3 (4).-P. 230-237.

124. Panigrahi A.R., Pinder S.E., Chan S.Y. et al. The role of PTEN and its signalling pathways, including AKT, in breast cancer; an assessment of relationships with other prognostic factors and with outcome // J Pathol.-2004,-Vol. 204 (l).-P. 93-100.

125. Perez-Tenorio G., Stal O. Activation of AKT/PKB in breast cancer predicts a worse outcome among endocrine treated patients // Br J Cancer.-2002.-Vol. 86 (4).-P. 540-545.

126. Perillo B., Sasso A., Abbondanza C., Palumbo G. 17beta-estradiol inhibits apoptosis in MCF-7 cells, inducing bcl-2 expression via two estrogen-responsive elements present in the coding sequence // Mol Cell Biol.-2000.-Vol. 20 (8).-P. 2890-2901.

127. Pidgeon G.P., Barr M.P., Harmey J.H. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) upregulates BCL-2 and inhibits apoptosis in human and murine mammary adenocarcinoma cells // Br J Cancer.-2001.-Vol. 85 (2).-P. 273-278.

128. Prager G.W., Breuss J.M., Steurer S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) induces rapid pro-urokinase (pro-uPA) activation on the surface of endothelial cells//Blood.-2004.-Vol. 103 (3).-P. 955-962.

129. Pratt M.A., Niu M.Y. Bcl-2 controls caspase activation following a p53-dependent cyclin Dl-induced death signal // J Biol Chem.-2003.-Vol. 278 (16).-P. 14219-14229.

130. Price D.J., Miralem T., Jiang S. et al. Role of vascular endothelial growth factor in the stimulation of cellular invasion and signaling of breast cancer cells // Cell Growth Differ.-2001.-Vol. 12 (3).-P. 129-135.

131. Pugazhenthi S., Nesterova A., Sable C. et al. Akt/protein kinase B upregulates Bcl-2 expression through cAMP-response element-binding protein // J Biol Chem.-2000.-Vol. 275 (15).-P. 10761-10766.

132. Ring A., Dowsett M. Mechanisms of tamoxifen resistance // Endocr Relat Cancer.-2004.-Vol. 11 (4).-P. 643-658.

133. Ring A.E., Ellis P.A. Predictors of response to systemic therapy in breast cancer//Forum(Genova).-2002.-Vol. 12 (l).-P. 19-32.

134. Ruohola J.K., Valve E.M., Karkkainen M.J. et al. Vascular endothelial growth factors are differentially regulated by steroid hormones and antiestrogens in breast cancer cells // Mol Cell Endocrinol.-1999.-Vol. 149 (l-2).-P. 29-40.

135. Ryden L., Linderholm B., Nielsen N.H. et al. Tumor specific VEGF-A and VEGFR2/KDR protein are co-expressed in breast cancer // Breast Cancer Res Treat.-2003.-Vol. 82 (3).-P. 147-154.

136. Safe S. Transcriptional activation of genes by 17 beta-estradiol through estrogen receptor-Spl interactions //Vitam Horm.-2001.-Vol. 62.-P. 231-252.

137. Santen R.J., Song R.X., McPherson R. et al. The role of mitogen-activated protein (MAP) kinase in breast cancer // J Steroid Biochem Mol Biol.-2002.-Vol. 80 (2).-P. 239-256.

138. Sarbassov D.D., Guertin D.A., Ali S.M., Sabatini D.M. Phosphorylation and regulation of Akt/PKB by the rictor-mTOR complex // Science.-2005.-Vol. 307 (5712).-P. 1098-1101.

139. Sastre-Garau X., Genin P., Rousseau A. et al. Increased cell size and Akt activation in HER-2/neu-overexpressing invasive ductal carcinoma of the breast//Histopathology.-2004.-Vol. 45 (2).-P. 142-147.

140. Schmitz K.J., Otterbach F., Callies R. et al. Prognostic relevance of activated Akt kinase in node-negative breast cancer: a clinicopathological study of 99 cases//Mod Pathol.-2004.-Vol. 17 (l).-P. 15-21.

141. Sliva D., Rizzo M.T., English D. Phosphatidyl inositol 3-kinase and NF-kappaB regulate motility of invasive MDA-MB-231 human breast cancer cells by the secretion of urokinase-type plasminogen activator // J Biol Chem.-2002.-Vol. 277 (5).-P. 3150-3157.

142. Soderlund K., Perez-Tenorio G., Stal 0. Activation of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway prevents radiation-induced apoptosis in breast cancer cells // Int J Oncol.-2005.-Vol. 26 (l).-P. 25-32.

143. Somai S., Chaouat M., Jacob D. et al. Antiestrogens are pro-apoptotic in normal human breast epithelial cells // Int J Cancer.-2003.-Vol. 105 (5).-P. 607-612.

144. Sounni N.E., Devy L., Hajitou A. et al. MT1-MMP expression promotes tumor growth and angiogenesis through an up-regulation of vascular endothelial growth factor expression // Faseb J.-2002.-Vol. 16 (6).-P. 555564.

145. Sounni N.E., Devy L., Hajitou A. et al. MT1 -MMP expression promotes tumor growth and angiogenesis through an up-regulation of vascular -endothelial growth factor expression // Faseb J.-2002.-Vol. 16 (6).-P. 555564.

146. Staal S.P. Molecular cloning of the akt oncogene and its human homologues AKT1 and AKT2: amplification of AKT1 in a primary human gastric adenocarcinoma // Proc Natl Acad Sei U S A.-1987.-Vol. 84 (14).-P. 50345037.

147. Stal 0., Perez-Tenorio G., Akerberg L. et al. Akt kinases in breast cancer and the results of adjuvant therapy // Breast Cancer Res.-2003.-Vol. 5 (2).-P. R37-44.

148. Stephen R.L., Shaw L.E., Larsen C. et al. Insulin-like growth factor receptor levels are regulated by cell density and by long term estrogen deprivation in

149. MCF7 human breast cancer cells // J Biol Chem.-2001.-Vol. 276 (43).-P. 40080-40086.

150. Stoica G.E., Franke T.F., Moroni M. et al. Effect of estradiol on estrogen receptor-alpha gene expression and activity can be modulated by the ErbB2/PI 3-K/Akt pathway // Oncogene.-2003.-Vol. 22 (39).-P. 7998-8011.

151. Stoica G.E., Franke T.F., Wellstein A. et al. Estradiol rapidly activates Akt via the ErbB2 signaling pathway // Mol Endocrinol.-2003.-Vol. 17 (5).-P. 818-830.

152. Strange R., Metcalfe T., Thackray L., Dang M. Apoptosis in normal and neoplastic mammary gland development // Microsc Res Tech.-2001.-Vol. 52 (2).-P. 171-181.

153. Strom A., Hartman J., Foster J.S. et al. Estrogen receptor beta inhibits 17beta-estradiol-stimulated proliferation of the breast cancer cell line T47D // Proc Natl Acad Sei U S A.-2004.-Vol. 101 (6).-P. 1566-1571.

154. Sun M., Wang G., Paciga J.E. et al. AKTl/PKBalpha kinase is frequently elevated in human cancers and its constitutive activation is required for oncogenic transformation in NIH3T3 cells // Am J Pathol.-2001.-Vol. 159 (2).-P. 431-437.

155. Sundlad A.S., Ahn C., Battifora H. Immunohistochemical detection of bcl-2 and MIB-l/Ki-67 in breast cancer: retrospective analysis of 238 cases. // Medicina (B Aires).-1996.-Vol. 56 (3).-P. 252-258.

156. Swiatecka J., Dzieciol J., Anchim T. et al. Influence of estrogen, antiestrogen and UV-light on the balance between proliferation and apoptosis in MCF-7 breast adenocarcinoma cells culture // Neoplasma.-2000.-Vol. 47 (l).-P. 1524.

157. Takahashi H., Shibuya M. The vascular endothelial growth factor (VEGF)/VEGF receptor system and its role under physiological and pathological conditions // Clin Sci (Lond).-2005.-Vol. 109 (3).-P. 227-241.

158. Thompson J.E., Thompson C.B. Putting the rap on Akt // J Clin Oncol.-2004.-Vol. 22 (20).-P. 4217-4226.

159. Toi M., Bando H., Ogawa T. et al. Significance of vascular endothelial growth factor (VEGF)/soluble VEGF receptor-1 relationship in breast cancer // Int J Cancer.-2002.-Vol. 98 (l).-P. 14-18.

160. Tokunaga E., Kimura Y., Oki E. et al. Akt is frequently activated in HER2/neu-positive breast cancers and associated with poor prognosis among hormone-treated patients // Int J Cancer.-2006.-Vol. 118 (2).-P. 284-289.

161. Troussard A.A., McDonald P.C., Wederell E.D. et al. Preferential dependence of breast cancer cells versus normal cells on integrin-linked kinase for protein kinase B/Akt activation and cell survival // Cancer Res.-2006.-Vol. 66 (l).-P. 393-403.

162. Tsujimoto Y., Cossman J., Jaffe E., Croce C.M. Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lymphoma // Science.-1985.-Vol. 228 (4706).-P. 1440-1443.

163. Viacava P., Naccarato A.G., Bocci G. et al. Angiogenesis and VEGF y expression in pre-invasive lesions of the human breast // J Pathol.-2004.-Vol. 204 (2).-P. 140-146.

164. Villar E., Redondo M., Rodrigo I. et al. bcl-2 Expression and apoptosis in primary and metastatic breast carcinomas // Tumour Biol.-2001.-Vol. 22 (3).-P. 137-145.

165. Walter P., Green S., Greene G. et al. Cloning of the human estrogen receptor cDNA // Proc Natl Acad Sci U S A.-1985.-Vol. 82 (23).-P. 7889-7893.

166. Wang L., Chen L., Benincosa J. et al. VEGF-induced phosphorylation of Bcl-2 influences B lineage leukemic cell response to apoptotic stimuli // Leukemia.-2005.-Vol. 19 (3).-P. 344-353.

167. Weigand M., Hantel P., Kreienberg R., Waltenberger J. Autocrine vascular endothelial growth factor signalling in breast cancer. Evidence from cell linesand primary breast cancer cultures in vitro // Angiogenesis.-2005.-Vol. 8 (3).-P. 197-204.

168. Westermeier R., Barnes N. Electrophoresis in practice : a guide to methods and applications of DNA and protein separations. Wiley-VCH.-2001.

169. Xie B., Tarn N.N., Tsao S.W., Wong Y.C. Co-expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors (flk-1 and flt-1) in hormone-induced mammary cancer in the Noble rat // Br J Cancer.-1999.-Vol. 81 (8).-P. 1335-1343.

170. Yang Q., Sakurai T., Yoshimura G. et al. Prognostic value of Bcl-2 in invasive breast cancer receiving chemotherapy and endocrine therapy // Oncol Rep.-2003.-Vol. 10 (l).-P. 121-125.

171. Yoshiji H., Gomez D.E., Shibuya M., Thorgeirsson U.P. Expression of vascular endothelial growth factor, its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer // Cancer Res.-1996.-Vol. 56 (9).-P. 2013-2016.

172. Zapata J.M., Krajewska M., Krajewski S. et al. Expression of multiple apoptosis-regulatory genes in human breast cancer cell lines and primary tumors // Breast Cancer Res Treat.-1998.-Vol. 47 (2).-P. 129-140.

173. Zhang G.J., Kimijima I., Abe R. et al. Correlation between the expression of apoptosis-related bcl-2 and p53 oncoproteins and the carcinogenesis and progression of breast carcinomas // Clin Cancer Res.-1997.-Vol. 3 (12 Pt 1).-P. 2329-2335.

174. Zhou X., Tan M., Stone Hawthorne V. et al. Activation of the Akt/mammalian target of rapamycin/4E-BPl pathway by ErbB2overexpression predicts tumor progression in breast cancers // Clin Cancer Res.-2004.-Vol. 10 (20).-P. 6779-6788.