Роль протеинкиназы PAK1 в регуляции роста эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат наук Авилова, Екатерина Анатольевна

• Авилова, Екатерина Анатольевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Авилова, Екатерина Анатольевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Механизм действия стероидных гормонов

1.2. Пути развития гормональной резистентности РМЖ

1.2.1. Потеря рецептора эстрогена

1.2.2. Лиганд-независимая активация рецептора эстрогена

1.2.3. Митогенные сигнальные пути, поддерживающие рост РМЖ в отсутствие эстрогенов

1.3. Терапия эстрогензависимого и эстрогеннезависимого РМЖ

1.4. РАКв - важные регуляторы ключевых функций клеток

1.4.1. Структура семейства РАК-киназ

1.4.2. Механизмы регуляция РАК1

1.4.3. Эффекторы РАК1

1.4.4. Особенности экспрессии РАК1 в опухолях молочной железы

1.5. Роль РАК1 в регуляции гормональной чувствительности РМЖ

1.5.1. Развитие гормональной резистентности РМЖ и РАК1

1.5.2. Рецепторные тирозинкиназы и РАК1 в регуляции гормональной чувствительности РМЖ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Культивирование клеток

2.2. Транзиторная трансфекция экспрессионных и репортерных плазмидных конструкций

2.3. Репортерный анализ

2.4. Получение клеточных экстрактов для 808-электрофореза в полиакриламидном геле

2.5. Иммуноблоттинг

2.6. Определение скорости роста клеток МТТ-тестом

2.7. Определение метилирования гена в культуре клеток

2.7.1. Выделение геномной ДНК

2.7.2. Определение метилирования гена

2.8. Статистическая обработка результатов

2.9. Список использованных реактивов

2.10. Оборудование и приборы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Сравнительный анализ экспрессии РАК1 в клетках эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы

3.1.1. Определение содержания РАК1 методом иммуноблотинга

3.1.2. Изучение зависимости экспрессии РАК1 от плотности клеточной культуры

3.1.3. Влияние ингибитора протеосомной деградации 1УКл-132 на содержание РАК1

3.2. Роль РАК1 в регуляции роста клеток эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы

3.2.1. Влияние РАК1 на рост клеток

3.2.2. Влияние РАК1 на активность митогенных сигнальных путей

3.2.3. Роль а-Р1х, ко-активатора РАК1, в регуляции активности клеточных сигнальных белков

3.2.4. Влияние РАК1 на активность рецептора эстрогенов в клетках эстрогензависимого рака молочной железы МСБ-7

3.3. РАК1 и выживаемость клеток: роль РАК1 в регуляции роста клеток в условиях гипоксии

3.3.1. Сравнительный анализ чувствительности к гипоксии клеток МСБ-7 и НВЬ-100

3.3.2. Роль РАК1 в адаптации клеток МСБ-7 к гипоксии

3.4. Метилирование РАК1 и его роль в регуляции дифференциальной

экспрессии РАЮ в клетках эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака

молочной железы

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. Экспрессия РАК1 в различных линиях РМЖ

4.2. РАК1 в стимуляции митогенных путей в клетках РМЖ

4.3. РАК1 и выживаемость клеток

4.4. Метилирование РАК1

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

РМЖ - рак молочной железы

NR3 - подсемейство ядерных рецепторов

ER - рецептор эстрогена

ERa -эстрогеновый рецептор-а

ERP - эстрогеновый рецептор-Р

PR - прогестероновый рецептор

VD - N-концевой домен

AF1 - активаторная функция

AF2 - активаторная функция

LBD - лиганд-связывающий домен

DBD - ДНК-связывающий домен

HD (Hinge Domain) - шарнирный домен

NLS - последовательность сигнала ядерной локализации

CD - С-концевой домен

ERE - эстроген-респонсивный элемент

GPCR - поверхностные рецепторы, связанные с G-белками

RTK - рецепторные тирозинкиназы

EGF - эпидермальный фактор роста

EGFR (ErbBl / HER1), HER2 (HER2/neu / ErbB2), ЕгЬВЗ (HER3), и ErbB4 (HER4) -

- рецепторе эпидермального фактора роста

ЕВР1 - ЕгЬВЗ-связывающий белок

МАРК - митогенактивирующие протеинкиназы

Rail - серин-треониновая киназа, часть МАРК-каскада

ERK1/2 (Extracellular signal-regulated kinases) и МЕК1/2 - МАР-киназы

PI3K - фосфоинозитид-3-киназа

АКТ (РКВ) - протеинкиназа В

PTEN (фосфатидитинозитол-3,4,5-трифосфат-3-фосфотаза) - негативный регулятор АКТ

STAT (Signal transducers and activators of transcription) - сигнальные трансдукторы и активаторы транскрипции NF-kB - ядерный фактор-кВ

RANKL - рецепторный активатор лиганда ядерного фактора кВ АР-1 - активирующий Fos/Jun-комплекс протеин-1 Pakl - р21-активированная киназа

GEF (Guanine nucleotide Exchange Factors) - гуанин-нуклеотид обменный фактор GAP (GTPase-activating proteins) - белки, активирующие ГТФазы GDI (Guanine nucleotide-Dissociation Inhibitors) - ингибиторы диссоциации гуанинового нуклеотида

Pix (PAK-interactive exchange factor) - фактор обмена, связывающийся с РАК DH - домен, гомологичный Dbl

Dbl - трансформированный ген из клеток диффузной В-клеточной лимфомы

РН - домен, гомологичный плекстрину

SH3 - домен, гомологичный Src

PRD (Proline rich domain) - домен, богатый пролином

CBD (Cat-binding domain) - домен, связывающий Cat

LZ (leucine zipper) - лейциновая молния

CH (Calponin Homology) - домен, гомологичный с кальпонином IPA3 (1,1 -Dithiodi-2-naphthol) - специфический ингибитор РАК1 dn-PAKl(K299R) - доминантно-негативный РАК1 (киназно-неактивная мутантная форма РАК1)

hPIP (human PAKl-interacting protein 1) - человеческий белок, связывающийся с РАК1)

CRIPAK (Cys-rich inhibitor of РАК1) - цистеин-богатый ингибитор РАК1

GRB2 и NCK - адапторные белки

ЕТК - нерецепторные тирозинкиназы

PDK1 - фосфоинозитид-зависимая киназа-1

РКА - протеин-киназа А

PLC - фосфолипаза С

PIP2 - фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат

DAG -1,2-диацилглицерин

IP3 - инозитолтрифосфат

РКС - протеинкиназа С

PLK1 - поло-подобная киназа-1

NCK, Grb2 - адапторные белки

CpG-островки - цитозин-гуанин богатые последовательности SERMs - селективные модуляторы рецепторов эстрогена

TNBC (Triple Negative Breast Cancer) - ER-, РС-,Нег2-негативные клетки РМЖ ЕМТ - эпителиально-мезенхимальный переход ( TGFP - трансформирующий фактора рост-бета

HIF-1 (hypoxia-inducible factor-1) - индуцируемый гипоксией фактор-1 HRE - гипоксия-респонсивный элемент 5-aza-dC - 5-аза-2'-дезоксицитидин ПЦР - полимеразная цепная реакция

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль протеинкиназы PAK1 в регуляции роста эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы»

ВВЕДЕНИЕ

Развитие гормональной резистентности злокачественных опухолей молочной железы (РМЖ) - переход опухолевых клеток от эстрогензависимого к эстрогеннезависимому росту — является одной из главных причин, ограничивающих эффективность гормональной терапии опухолей. Ранее считалось, что в основе становления гормональной резистентности лежит утрата клетками РМЖ рецепторов эстрогенов (ER). Однако, снижение гормональной чувствительности клеток РМЖ также может происходить и при сохранении ER -при нарушении баланса между белками-активаторами и супрессорами данных рецепторов, лиганд-независимой активации ER, стимуляции сигнальных путей, идущих в обход ER. Среди последних ведущее значение принадлежит рецепторным тирозинкиназам (EGFR, PI3K, NF-kB), активации которых достаточно для прохождения митогенного сигнала без участия ER. До сих пор неясно, какие из эффекторов тирозинкиназ являются ключевыми для поддержания эстрогеннезависимого роста и могут ли они играть самостоятельную роль в развитии гормональной резистентности РМЖ.

Одним из важнейших эффекторов тирозинкиназных рецепторов является РАК1 (р21 -активированная киназа 1) - серин-треониновая протеинкиназа, которая путем фосфорилирования различных сигнальных белков участвует в регуляции ключевых функций в клетке: рост, выживаемость, организация цитоскелета, клеточная подвижность. Одна из мишеней РАК1 - это ER, который активируется в присутствие РАК1 независимо от лиганда, что может приводить, в случае гиперэкспрессии РАК1, к снижению гормональной зависимости ER-положительных клеток РМЖ. В ER-негативных опухолях действие РАК1 ограничивается стимуляцией митогенных стигнальных путей без участия ER. В таких опухолях РАК1 участвует в поддержании уже эстрогеннезависимого роста клеток, о чем косвенно свидетельствует описываемая в литературе повышенная экспрессия Pakl в ER-негативных клетках. С похожей ситуацией столкнулись и мы в своих исследованиях, обнаружив высокий уровень экспрессии РАК в

культивируемых in vitro ER-негативных клеточных линиях. Поскольку РАК1 способна фосфорилировать большое количество различных эффекторов, можно предположить ее участие в регуляции сигнальных путей, идущих в обход ER в клетках РМЖ и приводящих к формированию гормональной резистентности.

Регуляция активации РАК1 происходит путем присоединения малых Rho-ГТФаз: Rae и Cdc42, переведенных с помощью гуанин нуклеотид обменных факторов (GEF) в ГТФ-связанную активную форму. Таким вышележащим GEF-фактором для РАК является Pix (PAK-interactive exchange factor). Ранее было показано, что РАК1 фосфорилирует альфа-Pix по серину в 488 положении, которое приходится на PH-домен, выполняющий функцию ко-активатора DH-домена в гуанин-нуклеотидном обмене на Rae и Cdc42. Однако, в целом, значение взаимодействия Pix-PAKl в реализации промитогенных эффектов последнего остается неизвестным.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы явилось изучение некоторых аспектов функционирования протеинкиназы РАК1 в регуляции роста эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Сравнительный анализ экспрессии РАК1 в клетках эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы:

1.1. Определение содержания РАК1 методом иммуноблотинга;

1.2. Изучение зависимости экспрессии РАК-1 от плотности клеточной культуры;

1.3. Влияние ингибитора протеосомной деградации MG-132 на содержание РАК1.

2. Роль РАК1 в регуляции роста клеток эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы:

2.1. Влияние РАК1 на рост клеток;

2.2. Влияние РАК1 на активность митогенных сигнальных путей: АР-1, бета-катенина и Snail 1;

2.3. Роль a-Pix, ко-активатора РАК1, в регуляции активности клеточных сигнальных белков;

2.4. Влияние РАК1 на активность рецептора эстрогенов в клетках эстрогензависимого рака молочной железы MCF-7.

3. РАК1 и выживаемость клеток: роль РАК1 в регуляции роста клеток в условиях гипоксии:

3.1. Сравнительный анализ чувствительности к гипоксии клеток МСР-7 и НВЬ-100;

3.2. Роль РАК1 в адаптации клеток МСБ-7 к хронической гипоксии.

4. Метилирование РЛК1 и его роль в регуляции дифференциальной экспрессии РАК1 в клетках эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы.

Научная новизна работы

В настоящей работе был проведен сравнительный анализ изменений экспрессии РАК1 в эстрогензависимых и эстрогеннезависимых опухолях; выявлены возможные эпигенетические причины сниженной экспрессии РАК1 в ER-позитивных клетках рака молочной железы; исследован механизм поддержания эстрогеннезависимого роста ER-негативных клеток, в том числе с участием ключевых транскрипционных факторов АР-1, бета-катенина/TCF и Snaill; установлена роль Pix в регуляции эффектов РАК1; впервые продемонстрировано участие РАК1 в поддержании роста клеток РМЖ в условиях гипоксии. Полученные данные свидетельствуют, что РАК1 является важным фактором, участвующим в поддержании эстрогеннезависимого роста РМЖ, и позволяют рассматривать РАК1 в качестве перспективного объекта таргетной терапии рака молочной железы.

Научно-практическая значимость

Получены новые данные о роли РАК-сигнального пути в развитии и поддержании гормональной резистентности клеток рака молочной железы, что позволит установить механизмы регуляции РАК и его эффекторов для эстрогеннезависимого роста клеток РМЖ, а также оценить перспективность таргетной терапии РМЖ, направленной на подавление РАК.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Механизм действия стероидных гормонов

Стероидные гормоны представляют собой группу физиологически

активных веществ, участвующих в регуляции процессов жизнедеятельности в

клетке и в целом организме. Их синтез происходит из холестерина в коре

надпочечников, клетках Лейдига семенников, фолликулах и желтом теле

яичников, а также в плаценте, откуда стероидные гормоны, находящиеся, как

правило, в комплексе с белками, разносятся по крови к клеткам-мишеням, где они

взаимодействуют со специфическими рецепторами, которые, в свою очередь,

передают гормональный сигнал в клетке. В процессе биохимических

исследований рецепторы стероидных гормонов обнаруживаются как на

плазматической мембране, так и в цитозоле и в ядре клеток-мишеней. Так

например, существуют данные о том, что рецепторы стероидных гормонов могут

транслоцироваться через липидный бислой цитоплазматической мембраны на

поверхность клетки для взаимодействия с гормонами, находящимися во

внеклеточном пространстве [1], или о том, что некоторые поверхностные

рецепторы, связанные с в-белками (вРСЯ), могут также выступать в качестве

этих рецепторов, как, например, вРЛЗО для эстрогена [2] [3]. Согласно

классической двухступенчатой модели, предложенной в 1972 году Дженсеном,

считается, что рецепторы стероидных гормонов в отсутствие лиганда

располагаются в цитоплазме (рис. 1) [4]. Согласно этой модели стероидные

гормоны, являясь липофильными молекулами, легко проникают через

цитоплазматическую мембрану клетки-мишени, в цитозоле которой связываются

со специфическими рецепторами, изменяя их конформацию, приводя к

значительному повышению сродства последних к ядерному хроматину. В

результате активированный гормон-рецепторный комплекс транслоцируется из

цитоплазмы в ядро, где он связывается с акцепторными участками ДНК с

последующим изменением траскрипции определенных генов, после чего

12

происходит распад гормон-рецепторного комплекса под действием специальных выключающих механизмов.

Стероид

Рисунок 1. Механизм действия стероидных гормонов (модель Дженсена) (4)

На данный момент наиболее изученными являются рецепторы стероидных гормонов, относящиеся к подсемейству ядерных рецепторов 3 (n13.3), которое включает рецепторы эстрогенов (группа ^ЗА) [5] и 3-кетостероидов (группа n1330) [6]. Подсемейтсво n13.3 включает 3 группы ЕЯ-подобных рецепторов [7]: Группа А - эстрогеновые рецепторы:

1. Эстрогеновый рецептор-а (ЕЯа; NRЗA1, Е8Я1)

2. Эстрогеновый рецептор-(3 (ЕЯ(3; NRЗA2, Е8Я2) Группа Б - эстроген-связанные рецепторы:

1. Эстроген-связанный рецептор-а (ЕЯЯа; NRЗB1, ESRRA)

2. Эстроген-связанный рецептор-(3 (ERRP; ^ЗВ2, ESRRB)

3. Эстроген-связанный рецептор -у (ERRy; NRЗBЗ, ESRRG) Группа С: 3-кетостероидные рецепторы

1. Глюкокортикоидный рецептор (СЯ; N1*30)

2. Минералокортикоидный Группа (МЯ; N1*302)

3. Прогестероновый рецептор (РЯ; N1*303, РвЯ)

4. Андрогеновый рецептор (АЯ; N1*304, А1*)

Все рецепторы стероидных гормонов, относящиеся к подсемейству N1*3, имеют в своей структуре 5 доменов [8] [9] (рис. 2):

гормон

1. Вариабельный ^концевой домен (УЭ), структура которого зависит от типа рецептора. Данный домен в своей структуре содержит последовательность, ответственную за активаторную функцию 1 (АП) рецептора [10], действие которой не зависит от присутствия лиганда и сопряжено с аналогичной активаторной функцией 2 (АР2), последовательность последней приходится на лиганд-связывающий

домен LBD. Данные активаторные функции участвуют в регуляции транскрипционной активности рецепторов стероидных гормонов [11].

2. Крайне консервативный ДНК-связывающий домен (DBD), состоящий из двух мотивов [12], отличных по пространственной структуре от классических цинковых пальцев, так как в данном случае цинк сопровождается 4-мя цистеиновыми остатками в отсутствие гистидиновых.

3. Шарнирный домен (Hinge Domain, HD), включающий последовательность сигнала ядерной локализации NLS, ответственный за перемещение активированного гормон-рецепторного комплекса в ядро.

4. Умеренно консервативный С-концевой лиганд-связывающий домен (LBD), ответственный за связывание с гормоном и шапероном Hsp90 [13], а также за активаторную функцию AF2 [10,11].

5. Вариабельный С-концевой домен (CD), структура которого также зависит от типа рецептора.

Известно, что все рецепторы, входящие в группу ядерных рецепторов NR3,

действуют как транскрипционные факторы, перемещаясь в ядро при активации.

За данное перемещение ответственен регион сигнала ядерной локализации NLS,

приходящийся на шарнирную область рецептора. В отсутствие гормонов этот

регион закрыт белками теплового шока (HSPs), при этом рецепторы находятся в

неактивном состоянии в виде олигомерных комплексов. Например, было

показано, что рецепторы стероидных гормонов образуют комплексы с

шаперонами Hsp90, Hsp40 и Hsp70, иммунофилинами и другими белками [13],

что необходимо для созревания рецептора для высокоаффинного взаимодействия

с гормоном. После синтеза рецепторы стероидных гормонов проходят АТФ-

зависимый путь сборки с Н5р90-ассоциированными белками,

присоединяющимися к лиганд-связывающему доменому (LBD) рецептора.

Первоначально связывается шаперон Hsp40, далее присоединяются Hsp70 и Hip,

затем происходит связывание с Нор и Hsp90 с образованием промежуточного

рецепторного комплекса, который после модифицируется путем отсоединения

15

Hsp70 и Hop, что открывает возможость рецептору связываться с гормоном. Привлечение р23 приводит к формированию зрелого рецепторного комплекса, способного связываться с гормоном с высокой степенью аффинности и, также, характеризующегося присутствием в комплексе дополнительных белковых участников: шарнирный домен (Hinge Domain, HD последовательность сигнала ядерной локализации NLS, С-концевой домен (CD). Взаимодействие стероидного гормона с лиганд-связывающим доменом рецептора приводит к высвобождению Hsp90 и его кошаперонов и конформационной экспозиции элементов, необходимых для димеризации рецептора, его ядерной транслокации и связыванию с ДНК. Ранее для рецептора глюкокортикоидов (GR) был обнаружен регион в домене LBD длиной 114 аминокислотных остатков (550-653), необходимый для взаимодействия с Hsp90 [14]. Также оказалось, что данный регион включает консервативную и для других рецепторов стероидных гормонов последовательность (577-596), возможно определяющую стабильность комплекса рецептора с Hsp90 и его кошаперонами. В результате аналогичных исследований для рецептора прогестерона (PR) и рецептора эстрогена (ER) также было выявлено несолько участков LBD, ответственных за связывание с Hsp90. Однако для ER также была определена роль С-концевого региона (аминокислотные остатки 251-271), с которым связывается кошаперон FKBP52, что необходимо для более стабильного взаимодействия LBD с Hsp90 [13].

Связывание гормона с рецептором приводит к диссоциации последнего от

белков теплового шока, его гомодимеризации, транслокации в ядро, где

активированный рецептор связывается со специфическими последовательностями

ДНК - гормон-респонсивными элементами, состоящие из инвертированных

повторов, разделенных разным количеством нуклеотидом. Так например,

известно, что рецепторы эстрогенов связываются с инвертированными повторами

A/GGGTCA, разделенными тремя нуклеотидами, а рецепторы андрогенов,

глюкокортикоидов и прогестинов - с инвертированными повторами AGA/GACA,

также разделенными тремя нуклеотидами [15, 16]. Образовавшийся комплекс

рецептор-ДНК рекрутирует значительное число других белков

16

(транскрипционных сорегуляторов), что усиливает или ингибирует транскрипцию в мРНК ассоциированного гена-мишени [17]. Функции этих сорегуляторов включают перестройку хроматина, что делает ген более или менее доступным для траскрипции, а также подготовку к взаимодействию с другими регуляторными белками. Данные регуляторные молекулы могут выступать в качестве коактиваторов, которые обладают гистонацетилтрансферазной активностью, что ослабляет связь гистонов с ДНК, и способствует транскрипции генов, или в качестве корепрессоров с гистондезацетилазной активностью, что усиливает ассоциацию гистонов с ДНК, и, следовательно, подавляет транскрипцию гена. Ядерные рецепторы могут напрямую или опосредованно через другие белки связываться с корегуляторами, вовлекаясь во многие внутриклеточные сигнальные пути [18]. Наиболее распространенным механизмом действия рецепторов стероидных гормонов является прямое связывание ядерных рецепторов с гормон-респонсивными элементами, называемый трансактивация. Однако некоторые ядерные рецепторы не могут непосредственно связываться с ДНК, обладая трансрепрессорной активностью в отношение некоторых транскрипционных факторов. Так например, глюкокортикоидный рецептор вЯ ингибирует промотирующую транскрипционную активность АР-1 и №-кВ [19].

Для молочной железы основными стериодными гормонами, участвующими в регуляции ее роста, являются эстроген и прогестерон [20, 21]. Данные гормоны регулируют развитие молочной железы во время полового созревания, беременности, а также вовлечены в процессы инициации и прогрессии РМЖ.

Самым важным из эстрогенов является эстрадиол (Е2), секретируемый яичниками от начала полового созревания до наступления менопаузы. Его уровень колеблется в течение менструального цикла, достигая пика непосредственно перед овуляцией, после которой эстрадиол в сочетании с прогестероном изменяет эндометрий матки для возможной имплантации оплодотворенной яйцеклетки. В период беременности в дополнение к яичникам эстрадиол секретируется также плацентой. Во время полового созревания,

эстрадиол способствует росту и развитию молочных желез и окружающих тканей.

17

В зрелом возрасте он способен усиливать пролиферацию и скорость деления клеток молочной железы, активируя сигнальные пути ERK, PI3K и STAT [22]. Так, было показано, что в ER-позитивных клетках рецептор эстрогена напрямую связывается с тирозинкиназой c-Src и другими цитоплазматическими сигнальными и адапторными молекулами: She, PI3K, MNAR, и р130 Cas. С помощью «knock-down» исследований было найдено, что в ответ на Е2 и на действие эпидермального фактора роста EGF, с участием c-Src происходит фосфорилирование по тирозину транскрипционного фактора STAT5, после чего последний транслоцируется в ядро для запуска транскрипции генов пролиферации клеток. Таким образом, существуют перекрестные связи между действием стероидных гормонов, в частности эстрогена Е2, и факторов роста, что может играть важную роль в возможном снижении устойчивости некоторых опухолей к эндокринной терапии.

Прогестерон секретируется яичниками во время менструального цикла после овуляции (лютеиновой фазы) в том случае, если яйцеклетка не оплодотворена, а также при наступлении беременности в течение первых нескольких недель яичниками, а затем в течение всего срока беременности в плаценте. Прогестерон регулирует развитие протоковой системы, альвеол, необходимых для секреции и доставки молока [23], а также осуществляет контроль за паракринными сигнальными путями через рецепторный активатор лиганда ядерного фактора к-В (RANKL). В середине и в конце беременности прогестерон подавляет секреторную активность через перекрестные PR -, пpoлaктин/Stat5 - сигнальные пути. Потеря прогестеронвых рецепторов в первичной опухоли ассоциируется со снижением дифференцировки, более инвазивным фенотипом и плохим прогнозом.

Эстроген и прогестерон функционируют в клетках молочной железы через

связывание с соответствующими внутриклеточными рецепторами, ER и PR,

которые являются членами подсемейства ядерных рецепторов NR3 [6]. Так

эстроген, проникая в клетку, связывается с ER, который диссоциирует из

комплекса с белками теплового шока, претерпевая конформационные

18

перестройки, фосфорилирование и димеризацию, взаимодействуя с эстроген-респоисивными элементами (ERE) эстроген-зависимых генов [4]. Также рецептор эстрогена способен регулировать экспрессию генов без прямого взаимодействия ER с ДНК, а именно через другие транскрипционные факторы, например активирующий Fos/Jun-комплекс протеин-1 (АР-1), представляя неклассическое геномное действие ER [24], [25]. В дополнение, рецептор эстрогена обладает негеномным действием, в частности, участвуя в активации PI3k- и Akt-сигнальных путей [26].

Для рецептора эстрогена известно 2 изоформы: ERa и ER0, активация которых приводит к изменениям в экспрессии многих генов, участвующих в регуляции клеточной пролиферации и апоптоза [27]. Известно, что ER0 обладает схожими с ERa аффинностью к эстрадиолу и способностью связываться в виде гомодимера с эстроген-респонсивными элементами ДНК. Предполагается, что эстрогеновый сигнальный путь может проходить как через ERa, так и ER0, или ER(3/ERa, в зависимости от того, какая изоформа эстрогенового рецептора более экспрессирована в клетках. Кроме того, были получены данные о том, что эстрадиол может оказывать быстрое негеномное воздействие на сигнальные пути, взаимодействуя с мембранными рецепторами [2]. Прогестероновый рецептор также представлен 2-мя основными изоформами: PR-A и PR-B, но в отличие от ER подтипов, каждый из которых ассоциирован с отдельным геном, эти изоформы транскрибируются из двух различных сайтов инициации транскрипции в пределах одгого и того же гена [28]. Известно, что изоформы PR обладают различной транскрипционнй активностью, например, PR-A способен как ингибировать, так и усиливать активность изоформы PR-B. Также существует укороченная на 594 нуклеотида с N-конца изоформа PR-C, которая может образовывать гетеродимеры с PR-B. Формы PR-A и PR-B также способны модулировать ER и эстрогензависимую экспрессию генов [27].

Таким образом, существуют перекрестные связи между действием стероидных гормонов, в частности эстрогена и прогестерона и другими

сигнальными путями, что может играть важную роль в возможном снижении устойчивости рака молочной железы к эндокринной терапии.

1.2. Пути развития гормональной резистентности РМЖ

Одним из методов лечения рака молочной железы (РМЖ) является гормональная или антиэстрогеновая терапия, действие которой направлено на блокирование активности эстрогенов в опухолевых клетках. На сегодняшний день содержание рецепторов эстрогенов (ЕЯ) относится к основным критериям определения чувствительности больных раком молочной железы к гормональным противоопухолевым препаратам [29-34]. Если опухолевые клетки содержат рецепторы эстрогена (ЕЯ), то такой РМЖ является ЕЯ-позитивным или эстрогензависимым. Примерно 70% случаев рака молочной железы оказывается ЕЯ-положительным, большая часть которых также содержит рецепторы прогестерона [35].

Одной из основных причин, ограничивающих эффективность гормональной терапии, является развитие гормональной резистентности. Различают врожденную и приобретенную гормональную резистентность РМЖ; если приобретенная резистентность развивается в процессе гормональной терапии, то врожденная резистентность, как правило, связана с предсуществующими нарушениями гормонального сигналинга клеток. В обоих случаях снижение гормональной зависимости может быть обусловлено рядом причин:

- уменьшение содержания или полная потеря рецептора эстрогена;

- лиганд-независимая активация ЕЯ;

- стимуляция митогенных сигнальных путей, идущих в обход рецептора эстрогена.

1.2.1. Потеря рецептора эстрогена

Примерно 2/3 типов рака молочной железы экспрессируют ЕЯа, остальная

1/3 - не экспрессируют и характеризуются резистентностью к гормональной

терапии, уменьшением степени дифференцировки и ухудшением клинического

20

прогноза [21]. Более того, от 30 до 40% метастазов из первичной ЕЯ-положительной опухоли молочной железы устойчивы к эндокринной терапии, и одной из причин такой устойчивости является снижение или полная утрата клетками рецептора эстрогена [35].

Потеря экспрессии ЕЯа может быть объяснена либо эпигенетическими

модификациями гена, либо утратой транс-активирующих факторов, необходимых

для экспрессии гена. Один из возможных механизмов, который может

блокировать транскрипцию, является метилирование цитозин-гуанин богатых

последовательностей, так называемых Срв-островков, располагающихся в 5'-

регуляторных регионах некоторых генов [36]. Опухолевые клетки часто

характеризуются повышенным паттерном метилирования. Например, для клеток

рака молочной железы было найдено, что гены Е-кадгерина [37], ВЯСА1 [38] и

Н1С-1 [39] гиперметилированы. В гене ЕЯа типичные Срв-островки

располагаются в промотере и первом экзоне. Они присутствуют в

неметилированном виде и в нормальной ткани и в клетках, не экспрессирующих

ЕЯа. Было показано, что метилирование данных СрС-островков ассоциировано с

потерей экспрессии ЕЯа [40]; продемонстрировано, что при обработке

деметилирующим агентом 5-аза-2'-дезоксицитидином (5-ага-ёС) ЕЯ-негативных

клеток 1уГОА-МВ-231 происходит индукция экспрессии ЕЯа [41]. Также было

найдено, что метилирование промотеров А и В гена ЕЯа может как напрямую

влиять на активность рецептора в клетках РМЖ, так и опосредованно - через

транскрипционные факторы ЕЯВЕ-1 и ЕЯ-фактор 1 (ЕЯЕ-1), регулирующий

промотер А [42]. Известны и другие механизмы, приводящие к потере экспрессии

рецептора эстрогена, к которым относится гипоксия, гиперэкспрессия рецепторов

эпидермального фактора роста (ЕвБЯ или НЕЯ2), гиперактивация касакада

митогенактивирующих протеинкиназ (МАРК). Так например, гипоксия вызывает

протеосомную деградацию ЕЯ в клетках РМЖ гЯ-75, что приводит к снижению

уровня белка [43]. Наблюдающаяся в ЕЯ-негативных клетках рака молочной

железы гиперэкспрессия ЕОБЯ и НЕЯ2 свидетельствует об активизации ЕвЕ- и,

следовательно, МАРК-каскада, что может способствовать подавлению

21

транскрипции гена ЕЯ, и, в результате, эндокринной устойчивости [44, 45]. Существуют данные о том, что р53 регулирует экспрессию гена ЕЯ через элементы, расположенные выше ЕЯ-промотера. Необходимо отметить, что большая часть опухолей молочной железы с мутацией гена р53 являются ЕЯ-негативными [46, 47]. рЯЬ2 / Р130 также регулирует транскрипцию промотера ЕЯ [48]. Стоит отметить, что некоторые мутации гена могут привести к снижению активности ЕЯа без потери его экспрессии. Об этом свидетельствуют данные сайт-направленного мутагенеза в АЕ-2 области ЕЯа, показавшие снижение эстроген-зависимой транскрипции при сохраненной способности рецептора взаимодейстовать с гормоном и связываться с ДНК [49], а также данные о замене аспартата на глицин в 351 положении рецептора, что приводит к снижению эффективности действия 4-гидрокситамоксифена [50].

Для изоформы рецептора ЕЯ(3, которая обнаруживается и в нормальных, и в опухолевых клетках молочной железы [51, 52], показано снижение экспрессии в преинвазивных опухолях по сравнению с доброкачественными и нормальными тканями [53]. Установлено, что уровень мРНК ЕЯР примерно в 2 раза выше, чем мРНК ЕЯа в устойчивых к тамоксифену опухолях по сравнению с тамоксифен-чувствительными [54]. Несмотря на схожие гомологию по доменам ЬЕШ и ОВБ и сродство к эстрадиолу, изоформы ЕЯа и ЕЯр обладают различными транскрипционными активностями [55], однако роль ЕЯ(3 в развитии резистентности к тамоксифену мало изучена.

Утрата клетками рецептора эстрогенов приводит к развитию гормональной резистетности РМЖ, однако лишь у части (17%-28%) пациентов, для которых гормонотерапия оказывается неэффективной, клетки не экспрессируют рецептор эстрогена [56-58], в остальных случаях резистентность к тамоксифену развивается при сохраненном рецепторе эстрогенов [59, 60].

1.2.2. Лиганд-независимая активация рецептора эстрогена

Гормональная резистентность также может развиваться вследствие

независимой активации рецептора эстрогена в отсутствие лиганда при

22

сохраненной экспрессии рецептора (в ЕЯ-позитивных клетках). Как правило, данная активация может происходить за счет вовлечения перекрестных сигнальных путей с фосфорилированием рецептора, что приводит к конформационным изменениям последнего. Для ЕЯа был определен ряд сайтов фосфорилирования по серину и тирозину, которые влияют на устойчивость клеток к тамоксифену (рис. 3) [61].

Заключение диссертации по теме «Онкология», Авилова, Екатерина Анатольевна

выводы

1. Сравнительный анализ содержания серин-треониновой протеинкиназы РАК1 в клетках культивируемых in vitro эстрогензависимой и эстрогеннезависимых линий рака молочной железы показал значительное превышение уровня РАК1 в эстрогеннезависимых сублиниях

2. Продемонстрировано, что РАК1 является одним из факторов, необходимых для поддержания роста клеток рака молочной железы, в большей степени - для роста эстрогеннезависимых опухолей молочной железы

3. Установлено, что митогенный эффект РАК1 ассоциирован со стимуляцией ключевых сигнальных путей опухолевой клетки: МАРК/ АР-1 каскада, WNT-P-катенинового пути, Snaill-сигнэльного пути. Для реализации действия РАК1 необходимым фактором является фосфорилирование a-Pix, ко-активатора РАК1, по серину в положении 488.

4. Продемонстрировано участие РАК1 в регуляции выживаемости клеток рака молочной железы, в частности - в условиях хронической гипоксии. Одним из возможных механизмов участия РАК1 в поддержании роста опухолевых клеток в условиях гипоксии является обнаруженная нами способность РАК1 стимулировать транскрипционную активность HIF-1, одного из основных гипоксия-зависимых протективных факторов клетки.

5. При определении статуса метилирования промотора гена РАК1 установлено, что низкий уровень РАЮ в эстрогензависимых линиях ассоциирован с высоким уровнем метилирования, в то время как в эстрогеннезависимых линиях, отличающихся высоким содержанием РАК1, его промотор полностью деметилирован.

6. В целом, полученные данные свидетельствуют, что эпигеномная регуляция РАК1, в частности - метилирование ДНК, может являться одним из факторов, определяющим повышение уровня РАК1 в эстрогеннезависимых клетках рака молочной железы. Продемонстрированная нами протективная функция РАК1 позволяет рассматривать его в качестве перспективной мишени для таргетной терапии рака молочной железы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Авилова, Екатерина Анатольевна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Luconi, М. Human spermatozoa as a model for studying membrane receptors mediating rapid nongenomic effects of progesterone and estrogens / M. Luconi, F. Francavilla, I. Porazzi et al // Steroids - 2004. - Vol. 69, № 8-9 - P.553-559.

2. Maggiolini, M. The unfolding stories of GPR30, a new membrane-bound estrogen receptor / M. Maggiolini, D. Picard // J. Endocrinol. - 2010. - Vol. 204, № 2 -P.105-114.

3. Prossnitz, E.R. Estrogen signaling through the transmembrane G protein-coupled receptor GPR30 / E.R. Prossnitz, J.B. Arterburn, H.O. Smith et al.// Ann. Rev. Physiol. - 2008. - Vol. 70 - P.165-190.

4. Jensen, E.V. Mechanism of action of the female sex hormones / E.V. Jensen, E.R. DeSombre // Ann. Rev. Biochemistry - 1972. - Vol. 41 - P.203-230.

5. Dahlman-Wright, K. International Union of Pharmacology. LXIV. Estrogen receptors / K. Dahlman-Wright, V. Cavailles, S.A. Fuqua et al. // Pharmacol. Rev. -2006. - Vol. 58, № 4 - P.773-781.

6. Lu, N.Z. International Union of Pharmacology. LXV. The pharmacology and classification of the nuclear receptor superfamily: glucocorticoid, mineralocorticoid, progesterone, and androgen receptors / N.Z. Lu, S.E. Wardell, K.L. Burnstein et al. // Pharmacol. Rev. - 2006. - Vol. 58, №4 - P.782-797.

7. Whitfield, G.K. Steroid hormone receptors: evolution, ligands, and molecular basis of biologic function / G.K. Whitfield, P.W. Jurutka, C.A. Haussler et al. // J Cell Biochem - 1999. - Vol. Suppl 32-33, P.110-122.

8. Kumar, R. The structure of the nuclear hormone receptors / R. Kumar, E.B. Thompson // Steroids - 1999. - Vol. 64, № 5 _ p.310-319.

9. Klinge, C.M. Estrogen receptor interaction with co-activators and co-repressors / C.M. Klinge // Steroids - 2000. - Vol. 65, № 5 - P.227-251.

10. Warnmark, A. Activation functions 1 and 2 of nuclear receptors: molecular strategies for transcriptional activation / A. Warnmark, E. Treuter, A.P. Wright et al. // Mol. Endocrinol. -2003. - Vol. 17, № 10 - P.1901-1909.

11. Metivier, R. Synergism between ERalpha transactivation function 1 (AF-1) and AF-2 mediated by steroid receptor coactivator protein-1: requirement for the AF-1 alpha-helical core and for a direct interaction between the N- and C-terminal domains /

R. Metivier, G. Penot, G. Flouriot et al. // Mol. Endocrinol. - 2001. - Vol. 15, № 11 -P.1953-1970.

12. Schwabe, J.W. The crystal structure of the estrogen receptor DNA-binding domain bound to DNA: how receptors discriminate between their response elements / J.W. Schwabe, L. Chapman, J.T. Finch et al. // Cell - 1993. - Vol. 75, № 3 - P.567-578.

13. Ratajczak, T. Functional Protein Interactions in Steroid Receptor-Chaperone Complexes / T. Ratajczak, R.K. Allan, C. Cluning et al. // Protein Interactions - 2012. -Vol.5-P.7M02.

14. Pratt, W.B. Steroid receptor interactions with heat shock proteins and immunophilin chaperons / W.B. Pratt, D.O. Toft // Endocrine Reviews - 1997. - Vol. 18 -P.306-360.

15. Mangelsdorf, D.J. The nuclear receptor superfamily: the second decade / DJ. Mangelsdorf, C. Thummel, M. Beato et al. // Cell - 1995. - Vol. 83 - P.835-839.

16. Linja, M.J. Expression of androgen receptor coregulators in prostate cancer / M.J. Linja, K.P. Porkka, Z. Kang, K.J. Savinainen, O.A. Jänne, T.L. Tammela, R.L. Vessell, JJ. Palvimo, T. Visakorpi // Clin. Cancer Res. - 2004. - Vol. 10, № 3 - P.1032-1040.

17. Aranda, A. Nuclear hormone receptors and gene expression / A. Aranda, A. Pascual // Physiol. Rev. - 2001. - Vol. 81, № 3 - P.1269-1304.

18. Copland, J.A. Sex steroid receptors in skeletal differentiation and epithelial neoplasia: is tissue-specific intervention possible differentiation and epithelial neoplasia: is tissue-specific intervention possible / J.A. Copland, M. Sheffield-Moore, N. Koldzic-Zivanovic et al. // Bioessays - 2009. - Vol. 31, № 6 - P.629-641.

19. Lin, C. Trans-Activation and repression properties of the novel nonsteroid glucocorticoid receptor ligand 2,5-dihydro-9-hydroxy-10-methoxy-2,2,4-trimethyl-5-(l-methylcyclohexen-3-yl)-lH-lbenzopyrano3,4-fquinoline (A276575) and its four stereoisomers / C. Lin et al. // Molecular Pharmacology - 2002. - Vol. 62, № 2 - P.297-303.

20. Russo, I.H. Role of hormones in mammary cancer initiation and progression / I.H. Russo, J. Russo // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia - 1998. - Vol. 3, № 1 -P.49-61.

21. Lapidus, R.G. The loss of estrogen and progesterone receptor gene expression in human breast cancer / R.G. Lapidus, SJ. Nass, N.E. Davidson // J. Mammary Gland Biology and Neoplasia - 1998. - Vol. 3 - P.85-94.

22. Fox, E.M. Novel actions of estrogen to promote proliferation: integration of cytoplasmic and nuclear pathways / E.M. Fox, J. Andrade, M.A. Shupnik // Steroids -2009. - Vol. 74, № 7 - P.622-627.

23. Obr, A.E. The biology of progesterone receptor in the normal mammary gland and in breast cancer / A.E. Obr, D.P. Edwards // Mol. Cell Endocrinol. - 2012. - Vol. 357, № 1-2-P.4-17.

24. Kushner, P.J. Estrogen receptor pathways to AP-1 / P.J. Kushner, D.A. Agard, G.L. Greene et al. // J. Steroid Biochemistry and Molecular Biology - 2000. - Vol. 74 -P.311-317.

25. De Nardo, D. Estrogen's ability to stimulate breast cancer growth does not require ER DNA binding / D. De Nardo, H. Kim, C. Thorn et al. // San Antonio Breast Cancer Symposium - 2003. - Vol. 82. - Abstr. 1002.

26. Aquila, S. Estrogen receptor (ER)alpha and ER beta are both expressed in human ejaculated spermatozoa: evidence of their direct interaction with phosphatidylinositol-3-OH kievidence of their direct interaction with phosphatidylinositol-3-OH kinase/Akt pathway / S. Aquila, D. Sisci, M. Gentile et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2004. -Vol. 89, № 3 - P.1443-1451.

27. Hansen, R.K. Tissue architecture and breast cancer: the role of extracellular matrix and steroid hormones / R.K. Hansen, M.J. Bissell // Endocr. Relat. Cancer. -2000. - Vol. 7, № 2 - P.95-113.

28. Giangrande, P.H. The A and В isoforms of the human progesterone receptor: two functionally different transcription factors encoded by a single gene / P.H. Giangrande, D.P. McDonnell // Recent Progress in Hormone Research - 1999. - Vol. 54 - P.291-313.

29. Красильников, M. А. Современные подходы к изучению механизма эстрогеннезависимого роста опухолей молочной железы / М. А. Красильников // Вопросы онкологии.- 2004. - Т.50, № 4 - С.399-405.

30. Normanno, N. Mechanisms of endocrine resistance and novel therapeutic strategies in breast cancer / N. Normanno, M. Di Maio, E. De Maio et al. // Endocrine-Related Cancer - 2005. - Vol. 12 - P.721-747.

97

31. Clarke, R. Antiestrogen resistance in breast cancer and the role of estrogen receptor signaling / R. Clarke, M.C. Liu, K.B. Bouker et al. // Oncogene - 2003. - Vol. 22-P.7316-7339.

32. Jordan, V.C. Targeting antihormone resistance in breast cancer: a simple solution / V.C. Jordan // Ann. Oncol. - 2003. - Vol. 14 - P.969-970.

33. Герштейн, E.C. Биологические маркеры рака молочной железы: методологические аспекты и клинические рекомендации / Е.С. Герштейн, Н.Е. Кушлинский // Маммология - 2005. - Vol.1 - Р.:65-69.

34. Henderson, В.Е. Hormones, Genes and Cancer / B.E. Henderson, B.A.J. Ponder, R.K. Ross // New York: Oxford University Press - 2003. - P.120-139.

35. Kuukasjarvi, T. Loss of estrogen receptor in recurrent breast cancer is associated with poor response to endocrine therapy / T. Kuukasjarvi, J. Kononen, H. Helin et al. // J. Clin. Oncol. - 1996. - Vol. 14, № 9 - P.2584-2589.

36. Bird, A.P. CpG-rich islands and function of DNA methylation / A.P. Bird // Nature - 1986. - Vol. 321 - P.209-213.

37. Hiraguri, S. Mechanisms of inactication of E-Cadherine in breast cancer cell lines / S. Hiraguri, T. Godfrey, H. Nakamura et al. // Cancer Res. - 1998. - Vol. 58 - P.1972-1977.

38. Dobrovic, A. Methylation of BRCA1 gene in sporadic breast cancer / A. Dobrovic, D. Simpfendorfer // Cancer Res. - 1997. - Vol. 57 - P.3347-3350.

39. Fujii, H. Methylation of the HIC-1 candidate tumor suppressor gene in human breast cancer / H. Fujii, M.A. Biel, W. Zhou et al. // Oncogene - 1998. - Vol. 16 -P.2159-2164.

40. Ottaviano, Y.L. Methylation of the estrogen receptor Cpg island marks loss of estrogen receptor expression in human breast cancer cells / Y.L. Ottaviano, J.P. Issa, F.F. Pari et al. // Cancer Res. - 1994. - Vol. 54 - P.2552-2555.

41. Ferguson, A.T. Demethylation of the estrogen receptor gene in estrogen receptor-negative breast cancer cells can reactivate estrogen receptor gene expression / A.T. Ferguson, R.G. Lapidus, S.B. Baylin et al. // Cancer Res. - 1995. - Vol. 55 - P.2279-2283.

42. Yoshida ,T. Distinct mechanisms of loss of estrogen receptor alpha gene

expression in human breast cancer: methylation of the gene and alteration of trans-

98

acting factors / T. Yoshida, H. Eguchi, K. Nakachi et al. // Carcinogenesis - 2000. -Vol. 21, № 12 - P.2193-201.

43. Stoner, M. Hypoxia induces proteasome-dependent degradation of estrogen receptor alpha in ZR-75 breast cancer cells / M. Stoner, B. Saville, M. Wormke et al. // Mol. Endocrinol. - 2002. - Vol. 16 - P.2231-2242.

44. Creighton, C.J. Activation of mitogen-activated protein kinase in estrogen receptor a-positive breast cancer cells in vitro induces an in vivo molecular phenotype of estrogen receptor a-negative human breast tumors / C.J. Creighton, A.M. Hilger, S. Murthy et al. // Cancer Res. - 2006. - Vol. 66 - P.3903-3911.

45. Stoica, A. Regulation of estrogen receptor-a gene expression by epidermal growth factor / A. Stoica et al. // J. Endocrinol. - 2000. - Vol. 65 - P.371-378.

46. Angeloni, S.V. Regulation of estrogen receptor-a expression by the tumor suppressor gene p53 in MCF-7 cells / S.V. Angeloni, M.B. Martin, P. Garcia-Morales et al. //J. Endocrinol. - 2004 - Vol. 180 - P.497-504.

47. Martin, M.B. Regulation of estrogen receptor-a expression in MCF-7 cells by taxol / M.B. Martin., S.V. Angeloni, P. Garcia-Morales et al. // J. Endocrinol. - 2004. -Vol. 180 - P.487-496.

48. Macaluso, M. pRb2/pl30-E2F4/5-HDACl-SUV39Hl-p300 and pRb2/pl30-E2F4/5-HDAC1-SUV39H1-DNMT1 multimolecular complexes mediate the transcription of estrogen receptor-alpha in breast cancer / M. Macaluso, C. Cinti, G. Russo et al. // Oncogene - 2003. - Vol. 22 - P.3511-3517.

49. Mahfoudi, A. Specific mutations in the estrogen receptor change the properties of antiestrogens to full agonists / A. Mahfoudi, E. Roulet, S. Dauvois et al. // PNAS -1995. - Vol. 92 - P.4206-4210.

50. MacGregor Schafer, J. Allosteric silencing of activating function 1 in the 4-hydroxytamoxifen estrogen receptor complex is induced by substituting glycine for aspartate at amino acid 351 / J. MacGregor Schafer, H. Liu, D.J. Bentrem et al. // Cancer Research. - 2000. - Vol. 60 - P.5097-5105.

51. Fuqua, S.A. Expression of wild-type estrogen receptor beta and variant isoforms in human breast cancer / S.A. Fuqua. R. Schiff, I. Parra et al. // Cancer Research - 1999. - Vol. 59 - P.5425-5428.

52. Fuqua, S.A. Estrogen receptor beta protein in human breast cancer: correlation with clinical tumor parameters / S.A. Fuqua. R. Schiff, I. Parra et al. // Cancer Research - 2003. - Vol. 63 - P.2434-2439.

53. Roger, P. Decreased expression of estrogen receptor beta protein in proliferative preinvasive mammary tumours / P. Roger, M.E. Sahla, S. Makela et al. // Cancer Research - 2001. - Vol. 61 - P.2537-2541.

54. Speirs, V. Increased expression of estrogen receptor beta mRNA in tamoxifen-resistant breast cancer patients / V. Speirs, C. Malone, D.S. Walton, M.J. Kerin, S.L. Atkin // Cancer Research - 1999. - Vol. 59 - P.5421-5424.

55. Paech, K. Differential ligand activation of estrogen receptors ERalpha and ERbeta at AP-1 sites / K. Paech, P. Webb, G.G. Kuiper et al. // Science - 1997. - Vol. 277-P.1508-1510.

56. Johnston, S.R.Changes in estrogen receptor, progesterone receptor, and pS2 expression in tamoxifen-resistant human breast cancer / S.R. Johnston et al. // Cancer Res. -1995. - Vol. 55 - P.3331-3338.

57. Gutierrez, M.C. Molecular changes in tamoxifen-resistant breast cancer: Relationship between estrogen receptor, HER-2, and p38 mitogen-activated protein kinase / M.C. Gutierrez, et al. // J. Clin. Oncol. - 2005. - Vol. 23 - P.2469-2476.

58. Dowsett, M. Overexpression of HER-2 as a resistance mechanism to hormonal therapy for breast cancer / M. Dowsett // Endocr. Relat. Cancer. - 2001. - Vol. 8 -P.191-195.

59. Laenkholm, A.V. ESR1 gene status correlates with estrogen receptor protein levels measured by ligand binding assay and immunohistochemistry / A.V. Laenkholm, A. Knoop, B. Ejlertsen et al. // Mol. Oncol. - 2012. - Vol. 6, № 4 - P.428-36.

60. Conway, K. Risk factors for breast cancer characterized by the estrogen receptor alpha A908G (K303R) mutation / K. Conway, E. Parrish, S.N. Edmiston et al. // Breast cancer research: BCR - 2007. - Vol. 9, № 3 - R36.

61. De Leeuw, R. A Role for Estrogen Receptor Phosphorylation in the Resistance to Tamoxifen / R. De Leeuw, J. Neefjes, R. Michalides // Int. J. Breast Cancer - 2011. -art. ID 232435.

62. Thomas, R. S. Phosphorylation at serines 104 and 106 by Erkl/2 MAPK is important for estrogen receptor-a activity / R. S. Thomas, N. Sarwar, F. Phoenix et al. // J. Molecular Endocrinology - 2008. - Vol. 40, № 3-4, P.173-184.

63. Rogatsky I. Potentiation of human estrogen receptor a transcriptional activation through phosphorylation of serines 104 and 106 by the cyclin A-CDK2 complex / I. Rogatsky, J.M. Trowbridge, M. J. Garabedian // J. Biological Chemistry - 1999. - Vol. 274, № 32 - P.22296-22302.

64. Michalides, R. Cyclin A is a prognostic indicator in early stage breast cancer with and without tamoxifen treatment / R.Michalides, H. van Tinteren, A. Balkenende et al.// British J. Cancer - 2002. - Vol. 86, № 3 - P. 402-408.

65. Likhite, V.S. Kinase-specific phosphorylation of the estrogen receptor changes receptor interactions with ligand, deoxyribonucleic acid, and coregulators associated with alterations in estrogen and tamoxifen activity / V. S. Likhite, F. Stossi, K. Kim et al. // Molecular Endocrinology - 2006. - Vol. 20, № 12 - P.3120-3132.

66. Vendrell, J.A. Molecular changes associated with the agonist activity of hydroxy-tamoxifen and the hyper-response to estradiol in hydroxy-tamoxifen breast cancer cell lines / J. A. Vendrell, I. Bieche, C. Desmeiz et al // Endocrine-Related Cancer - 2005. -Vol. 12, № 1 -P.75-92.

67. Kato, S. Activation of the estrogen receptor through phosphorylation by mitogen-activated protein kinase / S. Kato, H. Endoh, Y. Masuhiro et al.// Science - 1995. - Vol. 270, № 5241 - P.1491-1494.

68. Cheng, J. A functional serine 118 phosphorylation site in estrogen receptor-a is required for down-regulation of gene expression by 17f3-estradiol and 4-hydroxytamoxifen / J. Cheng, C. Zhang, D. J. Shapiro // Endocrinology - 2007. - Vol. 148, № 10 - P.4634-4641.

69. Weitsman, G. E. Estrogen receptor-a phosphorylated at Serll8 is present at the promoters of estrogen-regulated genes and is not altered due to HER-2 overexpression / G. E. Weitsman, L. Li, G. P. Skliris et al.// Cancer Research - 2006., Vol. 66, № 20 -P.10162-10170.

70. Chen, D. Activation of estrogen receptor a by SI 18 phosphorylation involves a ligand-dependent interaction with TFIIH and participation of CDK7 / D. Chen, T. Riedl, E. Washbrook et al.// Molecular Cell - 2000. - Vol. 6, №1 - P.127-137.

71. Morandi, A. RET in breast cancer: functional and therapeutic implications / A. Morandi, I. Plaza-Menacho, C. M. Isacke // Trends Molecular Medicine - 2011. -Vol. 17, № 3 - P.149-157.

72. Duplessis, T.T. Phosphorylation of estrogen receptor a at serine 118 directs recruitment of promoter complexes and gene-specific transcription / T.T. Duplessis, C.C. Williams, S.M. Hill et al. // Endocrinology - 2011 - Vol. 152, №6 - P.2517-2526.

73. Kok, M. Estrogen receptor-a phosphorylation at serine-118 and tamoxifen response in breast cancer / M. Kok, C. Holm-Wigerup, M. Hauptmann et al.// J. National Cancer Institute - 2009. - Vol. 101, №24 - P.1725-1729.

74. Sarwar, N. Phosphorylation of ERa at serine 118 in primary breast cancer and in tamoxifen-resistant tumours is indicative of a complex role for ERa phosphorylation in breast cancer progression / N. Sarwar, J. S. Kim, J. Jiang et al. // Endocrine-Related Cancer - 2006 - Vol. 13, № 3 - P.851-861.

75. Martin, M. B. A role for Akt in mediating the estrogenic functions of epidermal growth factor and insulin-like growth factor I / M. B.Martin, T. F. Franke, G. E. Stoica et al.// Endocrinology - 2000io - Vol. 141, №12 - P.4503-4511.

76. Joel, P. B. pp90rskl regulates estrogen receptor-mediated transcription through phosphorylation of Ser-167 / P. B. Joel, J. Smith, T. W. Sturgill et al. // Mol. Cell. Biology - 1998. - Vol. 18, №4 - P.l978-1984.

77. Yamashita, H. Phosphorylation of estrogen receptor alpha serine 167 is predictive of response to endocrine therapy and increases postrelapse survival in metastatic breast cancer / H. Yamashita, M.Nishio, S. Kobayashi et al.// Breast Cancer Research - 2005. - Vol. 7, №5 - P.R753-764.

78. Arnold, S. F. Serine 167 is themajor estradiol-induced phosphorylation site on the human estrogen receptor / S. F. Arnold, J. D. Obourn, H. Jaffe et al. // Molecular Endocrinology - 1994. - Vol. 8, № 9 - P.l 208-1214.

79. Kirkegaard, T. AKT activation predicts outcome in breast cancer patients treated with tamoxifen / T. Kirkegaard, C. J. Witton, L. M. McGlynn, et al.// J. Pathology -2005. - Vol. 207, № 2 - P.139-146.

80. Yamashita, H. Low phosphorylation of estrogen receptor a (ERa) serine 118 and high phosphorylation of ERa serine 167 improve survival in ER-positive breast cancer / H. Yamashita, M. Nishio, T. Toyama et al.// Endocrine-Related Cancer - 2008. - Vol. 15, №3 -P.755-763.

81. Williams, C.C. Identification of four novel phosphorylation sites in estrogen receptor a: impact on receptor-dependent gene expression and phosphorylation by protein kinase CK2 / C.C. Williams, A. Basu, A. El-Gharbawy et al // BMC Biochemistry - 2009. - Vol. 10, № 1 - Article 36.

82. Skliris, G. P. A phosphorylation code for oestrogen receptor-a predicts clinical outcome to endocrine therapy in breast cancer / G.P. Skliris, Z.J. Nugent, B.G. Rowan et al. // Endocrine-Related Cancer - 2010. - Vol. 17, №3 - P.589-597.

83. Barone, I. Estrogen receptor mutations and changes in downstream gene expression and signaling / I. Barone, L. Brusco, S. A. W. Fuqua // Clinical Cancer Research - 2010. - Vol. 16, №10 - P.2702-2708.

84. Holm, C. Phosphorylation of the oestrogen receptor a at serine 305 and prediction of tamoxifen resistance in breast cancer / C.Holm, M. Kok, R.Michalides et al.// J. Pathology - 2009. - Vol. 217, №3 - P.372-379.

85. Kok, M. PKA-induced phosphorylation of ERa at serine 305 and high PAK1 levels is associated with sensitivity to tamoxifen in ER-positive breast cancer / M. Kok, W. Zwart, C. Holm et al.// Breast Cancer Research and Treatment - 2011. - Vol. 125, №1 -P.l-12.

86. Bostner, J. Estrogen receptor-a phosphorylation at serine 305, nuclear p21-activated kinase 1 expression, and response to tamoxifen in postmenopausal breast cancer / J. Bostner, L. Skoog, T. Fornander et al. // Clinical Cancer Research - 2010. -Vol. 16, 'H5 - P.1624-1633.

87. Wijayaratne, A. L. The human estrogen receptor-a is a ubiquitinated protein whose stability is affected differentially by agonists, antagonists, and selective estrogen receptormodulators / A. L.Wijayaratne, D. P. McDonnell // J. Biological Chemistry -2001. - Vol. 276, №38 - P.35684-35692.

88. Eakin, C. M. Estrogen receptor a is a putative substrate for the BRCA1 ubiquitin ligase / C. M. Eakin, M. J. MacCoss, G. L. Finney et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2007. - Vol. 104, №14 -P.5794-5799.

89. Cui, Y. Phosphorylation of estrogen receptor a blocks its acetylation and regulates estrogen sensitivity / Y. Cui, M. Zhang, R. Pestell et al. // Cancer Research -2004. - Vol. 64, №24 - P.9199-9208.

90. Giordano, С. Growth factor-induced resistance to tamoxifen is associated with a mutation of estrogen receptor a and its phosphorylation at serine 305 / C. Giordano, Y. Cui, I. Barone et al.// Breast Cancer Research and Treatment - 2010. - Vol. 119, №1 -P.71-85.

91. Wang, R.A. P21-activated kinase-1 phosphorylates and transactivates estrogen receptor-alpha and promotes hyperplasia in mammary epithelium / R.A. Wang, A. Mazumdar, R.K. Vadlamudi et al. // EMBO J. - 2002. - Vol. 21 - P.5437-5447.

92. Michalides, R. Tamoxifen resistance by a conformational arrest of the estrogen receptor a after PKA activation in breast cancer / R.Michalides, A. Griekspoor, A. Balkenende et al. // Cancer Cell - 2004. - Vol. 5, №6 - P.597-605.

93. Rayala, S.K. P21-activated kinase 1 regulation of estrogen receptor-a activation involves serine 305 activation linked with serine 118 phosphorylation / S.K. Rayala, A.H. Talukder, S. Balasenthil et al.// Cancer Research - 2006. - Vol. 66, №3 - P.1694-1701.

94. Gururaj, A.E. p21-activated kinase signaling in breast cancer /А.Е. Gururaj, S.K. Rayala, R. Kuma // Breast Cancer Res. - 2005. - Vol.7 - P.5-12.

95. Bostner, J. Amplification of CCND1 and PAK1 as predictors of recurrence and tamoxifen resistance in postmenopausal breast cancer / J. Bostner, M. A. Waltersson, T. Fornander et al. // Oncogene - 2007. - Vol. 26, №49 - P.6997-7005.

96. Arnold, S. F. Estradiol-binding mechanism and binding capacity of the human estrogen receptor is regulated by tyrosine phosphorylation / S. F. Arnold, M. Melamed, D. P. Vorojeikina et al. // Molecular Endocrinology - 1997. - Vol. 11, №1 - P.48-53.

97. Skafar, D. F. Formation of a powerful capping motif corresponding to start of "Helix 12" in agonist-bound estrogen receptor-a contributes to increased constitutive activity of the protein / D. F. Skafar // Cell Biochemistry and Biophysics - 2000. - Vol. 33, №1 -P.53-62.

98. Zhang, Q. X. An estrogen receptor mutant with strong hormone-independent activity from a metastatic breast cancer /Q. X. Zhang, A. Borg, D. M.Wolf et al. // Cancer Research -1997. - Vol. 57, №7 - P.1244-1249.

99. Берштейн, JI.M. Современная эндокринология гормонозависимых опухолей / Л.М. Берштейн // Вопросы онкологии - 2002. - Т. 48, № 4 - С.496-504.

100. Красильников, М.А. Сигнальные пути, регулируемые фосфатидилинозит-3-киназой, и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток/ М.А. Красильников // Биохимия - 2000 - Т. 65, №1 - С.68-78.

101. Kurebayashi, J. Endocrine-resistant breast cancer: underlying mechanisms and strategies for overcoming resistance / J. Kurebayashi // Breast Cancer - 2003. — Vol. 10, №2-P.l 12-119.

102. Roop, R.P. Endocrine resistance in breast cancer: molecular pathways and rational development of targeted therapies / R.P. Roop, C.X. Ma // Future Oncol. -2012. - Vol. 8, № 3 - P.273-292.

103. Щербаков, A.M. Молекулярные механизмы гормональной резистетности рака молочной железы / A.M. Щербаков, М.А. Красильников, Н.Е. Кушлинский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2013. - №3 - С.363-376.

104. Павличенко, О.В. Молекулярный механизм адаптации злокачественных опухолей к гормональным препаратам: роль фосфатидилинозит-3-киназы и фосфоинозитидзависимых белков / О.В. Павличенко, В.А. Шатская, Е.В. Лузай и др. // Вестник Российской Академии медицинских наук - 2004. - N 12 - С.20-25.

105. Mendelsohn, J. Status of epidermal growth factor receptor antagonists in the biology and treatment of cancer / J. Mendelsohn, J. Baselga // J. Clin. Oncol. - 2003. -Vol. 21 - P.2787-2799.

106. Eccles, S.A. The epidermal growth factor receptor/Erb-B/HER family in normal and malignant breast biology / S.A. Eccles // Int. J. Dev Biol. - 2011. - Vol. - P.685-696.

107. Schulze, W.X. Phosphotyrosine interactome of the ErbB-receptor kinase family / W.X. Schulze, L. Deng, M. Mann // Mol. Syst. Biol. - 2005. - Vol.1 - P.2005-2008.

108. Kandasamy, K. NetPath: A public resource of curated signal transduction pathways / K. Kandasamy et al.// Genome Biology - 2010. - Vol. 11 - P.R3.

109. Assiddiq, B.F. EGFR S1166 phosphorylation induced by a combination of EGF and gefitinib has a potentially negative impact on lung cancer cell growth / B.F. Assiddiq, K.Y. Tan, W. Toy et al. // Proteome Res. - 2012. - Vol. 11, № 8 - P.4110-4119.

110. Zarich, N. Grb2 is a negative modulator of the intrinsic Ras-GEF activity of hSosl / N. Zarich, J.L. Oliva, N. Martinez, et al.// Mol. Biol. Cell - 2006. - Vol. 17, № 8, P.3591-3597.

111. Cargnello, M. Activation and Function of the MAPKs and Their Substrates, the MAPK-Activated Protein Kinases / M. Cargnello, P.P. Roux. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 2011. - Vol 75, № 1, p.50-83.

112. Nebl,T. Membrane cytoskeleton: PIP(2) pulls the strings / T. Nebl, S.W. Oh, E.J. Luna //Current Biology - 2000. - Vol. 10 - P.R351-R354.

113. Song, G. The activation of Akt/PKB signaling pathway and cell survival / G. Song, G. Ouyang, S. Bao // J. Cell. Mol. Med. - 2005. - Vol. 9, № 1, P.59-71.

114. Hahn-Windgassen, A. Akt Activates the Mammalian Target of Rapamycin by Regulating Cellular ATP Level and AMPK Activity / A. Hahn-Windgassen, V. Nogueira, C. Chen et al. // J Biol Chem. - 2005. - Vol. 280, № 37 - P.32081-32089.

115. Fingar, D.C. mTOR controls cell cycle progression through its cell growth effectors S6K1 and 4E-BPl/eukaryotic translation initiation factor 4E // D.C. Fingar, C.J. Richardson, A.R. Tee et al. // Mol. Cell Biol. - 2004. - Vol. 24, №1 - P.200-216.

116. Heidi, C.E. Phosphoinositide 3-kinase-dependent activation of Rae / C.E. Heidi, W. Welcha, J. Coadwellb et al. // FEBS Letters - 2003. - Vol. 546 - P.93-97.

117. Wahl, M. Selective phospholipase C activation / M. Wahl, G. Carpenter // Bioassays - 1991. - Vol. 13 P.107-113.

118. La Porta, C.A. PKC-dependent modulation of IkB alpha-NFkB pathway in low metastatic B16F1 murine melanoma cells and in highly metastatic BL6 cells / C.A. La Porta, R. Comolli // Anticancer Res. -1998. - Vol. 18, № 4A - P.2591-7.

119. Brand, D. Protein Kinase C Induces Actin Reorganization via a Src- and Rho-dependent Pathway / D. Brand, M. Gimona, M. Hillmann et al. // J. Biological Chemistry - 2002. - Vol. 277 - P.20903-20910.

120. Sainsbury, J.R. Epidermal-growth-factor receptor status as predictor of early recurrence of and death from breast cancer / J.R. Sainsbury, J.R. Farndon, G.K. Needham et al. // Lancet - 1987. - Vol. 1 - P.1398-1402.

121. Salomon, D.S. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in human malignancies / D.S. Salomon, R. Brandt, F. Ciardiello et al. // Crit. Rev. Oncol. Hematol. - 1995. - Vol. 19 - P.l83-232.

122. Lurje, G. EGFR signaling and drug discovery / G. Lurje, H.J. Lenz // Oncology -2009. - Vol. 77 - P.400-410.

123. Martinazzi, M. Relationships between epidermal growth factor receptor (EGF-R) and other predictors of prognosis in breast carcinomas. An immunohistochemical study / M. Martinazzi, F. Crivelli, C. Zampatti et al. // Pathologica - 1993. - Vol. 85. - P. 637-644.

124. Menard, S. HER-2-positive breast carcinomas as a particular subset with peculiar clinical behaviors / S. Menard, A. Balsari, P. Casalini et al.// Clin. Cancer Res. - 2002. - Vol. 8 - P.520-525.

125. Burness, M.L. Epidermal growth factor receptor in triplenegative and basal-like breast cancer: promising clinical target or only a marker? / M.L. Burness, T.A. Grushko, O.I. Olopade // Cancer J. - 2010 - Vol. 16 - P.23-32.

126. Rakha, E.A. Prognostic markers in triple-negative breast cancer / E.A. Rakha, M.E. El-Sayed, A.R. Green et al. // Cancer - 2007. - Vol. 109 - P.25-32.

127. Giltnane, J.M. Rationale for Targeting the Ras/MAPK Pathway in Triple-Negative Breast Cancer / J.M. Giltnane, J.M. Balko // Discov. Med. - 2014. - Vol. 17, № 95 - P.275-283.

128. Al-Kuraya, K. Prognostic relevance of gene amplifications and coamplifications in breast cancer / K. Al-Kuraya, P. Schraml, J. Torhorst et al.// Cancer Res. - 2004. -Vol. 64 - P.8534-8540.

129. Ro, J. Amplified and overexpressed epidermal growth factor receptor gene in uncultured primary human breast carcinoma / J. Ro, S.M. North, G.E. Gallick et al. // Cancer Res. - 1988. - Vol. 48 - P.161-164.

130. Spyratos, F. Epidermal growth factor receptors and prognosis in primary breast cancer / F. Spyratos, J.C. Delarue, C. Andrieu et al. // Breast Cancer Res. Treat. - 1990. -Vol. 17-P.83-89.

131. Reis-Filho, J.S. EGFR amplification and lack of activating mutations in metaplastic breast carcinomas / J.S. Reis-Filho, C. Pinheiro, M.B. Lambros et al. // J. Pathol. - 2006. - Vol. 209 - P.445-453.

132. Bhargava, R. EGFR gene amplification in breast cancer: correlation with epidermal growth factor receptor mRNA and protein expression and HER-2 status and

absence of EGFR-activating mutations / R. Bhargava, W.L. Gerald, A.R. Li et al.// Mod. Pathol. - 2005. - Vol. 18 - P.1027-1033.

133. Weber, F. Variability in organspecific EGFR mutational spectra in tumour epithelium and stroma may be the biological basis for differential responses to tyrosine kinase inhibitors / F. Weber, K. Fukino, T. Sawada et al.// Br. J. Cancer. - 2005. - Vol. 92-P.1922-1926.

134. Baselga, J. Targeting the Phosphoinositide-3 (PI3) Kinase Pathway in Breast Cancer / J. Baselga // The Oncologist - 2011. - Vol.16, Supplement 1 - P.12-19.

135. Von Lintig, F.C. Ras activation in human breast cancer / F.C. Von Lintig, A.D. Dreilinger, N.M. Varki et al. // Breast Cancer Res Treat. - 2000. - Vol. 62, №1 - P.51-62.

136. Niemitz, E. Ras pathway activation in breast cancer / E. Niemitz // Nature Genetics - 2013. - Vol. 45 - P.1273.

137. Sivaraman, V.S. Hyperexpression of mitogen-activated protein kinase in human breast cancer / V.S. Sivaraman, H. Wang, G J. Nuovo et al. // J. Clin. Invest. - 1997 -Vol. 99, №7, P. 1478-1483.

138. Wang, Z. Expression of extracellular signal-regulated kinase and its relationship with clinicopathological characteristics of breast cancer /Z. Wang, S. Wang, F. Zhu et al. // Zhonghua Zhong Liu Za Zhi - 2002. - Vol. 24, № 4 - P.360-363.

139. Callans, L.S. Raf-1 protein expression in human breast cancer cells / L.S. Callans, H. Naama, M. Khandelwal et al. / Ann. Surg. Oncol. - 1995. - Vol. 2, № 1 - P.38-42.

140. Sainsbury, J.R. Epidermal growth factor receptor status of histological sub-types of breast cancer / J.R. Sainsbury, S. Nicholson, B. Angus et al. // Br J Cancer - 1988. -Vol. 58 - P.458-460.

141. Ozawa, S. Prognostic significance of epidermal growth factor receptor in esophageal squamous cell carcinomas / S. Ozawa, M. Ueda, N. Ando et al. // Cancer -1989. - Vol. 63 - P.2169-2173.

142. Viale, G. Invasive ductal carcinoma of the breast with the "triple-negative" phenotype: prognostic implications of EGFR immunoreactivity / G. Viale, N. Rotmensz, P. Maisonneuve et al.// Breast Cancer Res Treat. - 2009. - Vol. 116 - P.317-328.

143. Doehn, U. RSK is a principal effector of the RAS-ERK pathway for eliciting a coordinate promotile/invasive gene program and phenotype in epithelial cells / U. Doehn, C. Hauge, S.R. Frank, C.J. Jensen, K. Duda, J.V. Nielsen, et al.// Mol Cell. -2009 - Vol. 35 - P.511-522.

144. Xie, L. Activation of the Erk pathway is required for TGF-betal-induced EMT in vitro / L. Xie, B.K. Law, A.M. Chytil et al. // Neoplasia - 2004. - Vol. 6 - P.603-610.

145. Nicholson, R.I. Growth factor signalling in endocrine and anti-growth factor resistant breast cancer / R.I.Nicholson, I.R. Hutcheson, H.E. Jones et al. // Rev. Endocr. Metab. Disord. - 2007. - Vol. 8 - P.241 -253.

146. Benz, C.C.Estrogen-dependent, tamoxifen-resistant tumorigenic growth of MCF-7 cells transfected with HER2/neu / C.C. Benz, G.K. Scott, J.C. Sarup et al. // Breast Cancer Res. Treat. - 1992. - Vol. 24 - P.85-95.

147. Chung, Y.L. Resistance to tamoxifen-induced apoptosis is associated with direct interaction between Her2/neu and cell membrane estrogen receptor in breast cancer. Y.L. Chung, M.L. Sheu, S.C. Yang et al. // Int. J. Cancer - 2002. - Vol. 97 - P.306-312.

148. Massarweh, S. Mechanisms of tumor regression and resistance to estrogen deprivation and fulvestrant in a model of estrogen receptor-positive, HER-2/neu-positive breast cancer / S. Massarweh, C.K. Osborne, S. Jiang et al. // Cancer Res. — 2006. - Vol. 66 - P.8266-8273.

149. Chen, A.C.Upregulation of mucin4 in ER-positive/HER2-overexpressing breast cancer xenografts with acquired resistance to endocrine and HER2-targeted therapies / A.C. Chen, I. Migliaccio, M. Rimawi et al.// Breast Cancer Res. Treat. - 2012. - Vol. 134-P.583-593.

150. Shou, J. Mechanisms of tamoxifen resistance: Increased estrogen receptor-HER2/neu cross-talk in ER/HER2-positive breast cancer / J. Shou, S. Massarweh, C.K. Osborne et al. // J. Natl. Cancer Inst. - 2004. - Vol. 96 - P.926-935.

151. Li, J. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancer / J. Li, C. Yen, D. Liaw, K. Podsypanina et al.// Science - 1997. - Vol. 275 - P.1943-1947.

152. Miller, T.W. Loss of Phosphatase and Tensin homologue deleted on chromosome 10 engages ErbB3 and insulin-like growth factor-I receptor signaling to promote antiestrogen resistance in breast cancer / T.W. Miller, M. Perez-Torres, A. Narasanna et al.// Cancer Res. - 2009. - Vol. 69 - P.4192-4201.

109

153. Miller, T.W. Mutations in the phosphatidylinositol 3-kinase pathway: Role in tumor progression and therapeutic implications in breast cancer / T.W. Miller, B.N. Rexer, J.T. Garrett et al. // Breast Cancer Res. - 2011. - Vol. 13 - P.224.

154. Clark, A.S. Constitutive and inducible Akt activity promotes resistance to chemotherapy, trastuzumab, or tamoxifen in breast cancer cells / A.S. Clark, K. West, S. Streicher et al. // Mol. Cancer Ther. - 2002. - Vol. 1 - P.707-717.

155. Шатская, В.А. Роль фосфатидилинозитольного сигнального пути в развитии в развитии гормональной резистентности опухолевых клеток / В.А. Шатская, М.А. Красильников // Вопросы онкологии - 2001. - Т. 2 - С.218-223.

156. Generali, D. Phosphorylated ER{alpha}, HIF-l{alpha}, and МАРК signaling as predictors of primary endocrine treatment response and resistance in patients with breast cancer / D. Generali, F.M. Buffa, A. Berruti et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. - Vol. 27 -P. 227-234.

157. Rody, A. Use of goserelin in the treatment of breast cancer / A. Rody, S. Loibl, G. Von Minckwitz et al. // Expert Rev. Anticancer Ther. - 2005., Vol. 5, № 4, P.591-604.

158. Harvey, H.A. Medical castration produced by the GnRH analogue leuprolide to treat metastatic breast cancer / H.A. Harvey, A. Lipton, D.T. Max et al. // J. Clin. Oncol. - 1985. - Vol. 3, № 8 - P.1068-1072.

159. Cuzick, J. Anastrozole for prevention of breast cancer in high-risk postmenopausal women (IBIS-II): an international, double-blind, randomised placebo-controlled trial /J. Cuzick et al.// Lancet - 2014. - Vol. 383, № 9922 - P.1041-1048.

160. Dombernowsky, P. Letrozole, a new oral aromatase inhibitor for advanced breast cancer: double-blind randomized trial showing a dose effect and improved efficacy and tolerability compared with megestrol acetate / P. Dombernowsky P, et al.// J. Clin. Oncol. - 1998. - Vol. 16, №2 - P.453-461.

161. Deeks, E.D. Exemestane: a review of its use in postmenopausal women with breast cancer / E.D. Deeks, L.J. Scott // Drugs - 2009. - Vol. 69, №7 - P.889-918.

162. Bentrem, D.J. Tamoxifen, raloxifene and the prevention of breast cancer / DJ. Bentrem, V. Craig Jordan // Minerva Endocrinol. - 2002. - Vol. 27, №2, P. 127-39.

163. Johnston, S.J. Fulvestrant - a novel endocrine therapy for breast cancer / S.J. Johnston, K.L. Cheung // Curr. Med. Chem. - 2010. - Vol. 17, №10, P.902-14.

164. Vogel, V.G. Effects of tamoxifen vs raloxifene on the risk of developing invasive breast cancer and other disease outcomes: the NSABP Study of Tamoxifen and Raloxifene (STAR) P-2 trial / V.G. Vogel, J.P. Costantino, D.L. Wickerham et al.// JAMA - 2006. - Vol. 295, №23, P.2727-2741.

165. Garcia-Becerra, R. Mechanisms of Resistance to Endocrine Therapy in Breast Cancer: Focus on Signaling Pathways, miRNAs and Genetically Based Resistance / R. Garcia-Becerra, N. Santos, L. Diaz et al. // Int. J. Mol. Sci. - 2013. - Vol. 14 - P.108-145.

166. Герштейн, E.C. Рецепторы семейства c-erbB как мишени молекулярно-направленной противоопухолевой терапии: достижения, проблемы, перспективы / Е.С. Герштейн, Н.Е. Кушлинский, М.И. Давыдов // Молекулярная медицина -2010. - Т. 4 - С.5-10.

167. Ганьшина, И.П. Применение Герцептина в неоадъювантном и адъювантном лечении больных раком молочной железы с гиперэкспрессией HER2 / И.П. Ганьшина // Фарматека. Спецвыпуск ASCO - 2007. - С. 13-17

168. Красильников, М.А. Сигнальный путь mTOR: новая мишень терапии опухолей / М.А. Красильников, Н.В. Жуков // Современная онкология - 2010. - Т. 12, №2 - С.9-16.

169. Miller, T.W. Hyperactivation of phosphatidylinositol-3 kinase promotes escape from hormone dependence in estrogen receptor-positive human breast cancer / T.W. Miller, B.T. Hennessy, A.M. Gonzalez-Angulo et al. // J. Clin. Invest. - 2010. - Vol. 120 - P.2406-2413.

170. Johnston, S. Lapatinib combined with letrozole versus letrozole and placebo as first-line therapy for postmenopausal hormone receptor-positive metastatic breast cancer / S. Johnston, J. Jr. Pippen, X. Pivot et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. - Vol. 27 - P.5538-5546.

171. Evans, A.H. EGFR/HER2 inhibitor AEE788 increases ER-mediated transcription in HER2/ER-positive breast cancer cells but functions synergistically with endocrine therapy / A.H. Evans, S. Pancholi, I. Farmer et al. // Br. J. Cancer - 2010. - Vol. 102 -P. 1235-1243.

172. Creighton, С.J. Proteomic and transcriptomic profiling reveals a link between the PI3K pathway and lower estrogen-receptor (ER) levels and activity in ER+ breast

cancer / C.J. Creighton, X. Fu, B.T. Hennessy, A.J. Casa et al.// Breast Cancer Res. -2010.-Vol. 12 — P.R40.

173. Zhao, Z.S. PAK family kinases: Physiological roles and regulation / Z.S. Zhao, E. Manser // Cellular Logistics - 2012. - Vol. 2, №2 - P.59-68.

174. Poitras, L. PAK interacts with NCK and MLK2 to regulate the activation of jun N-terminal kinase / L. Poitras, S. Jean, N. Islam et al. // FEBS Letters - 2003. -Vol. 543, Issues 1-3 - P.129-135.

175. Puto, L.A. p21-activated kinase 1 (PAK1) interacts with the Grb2 adapter protein to couple to growth factor signaling / L.A. Puto, K. Pestonjamasp, C.C. King et al. // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278, №11, P.9388-9393.

176. Callow, M.G. PAK4 mediates morphological changes through the regulation of GEF-H1 / M.G. Callow, S. Zozulya, M.L. Gishizky et al. / J. Cell Sci. - 2005. - Vol. 118-P.1861-72.

177. Zenke, F.T. Identification of a central phosphorylation site in p21-activated kinase regulating autoinhibition and kinase activity / F.T. Zenke, C.C. King CC, B.P. Bohl, G.M. Bokoch // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274 - P.32565-32573.

178. Bokoch, G.M. A GTPase-independent mechanism of p21-activated kinase activation. Regulation by sphingosine and other biologically active lipids / G.M. Bokoch, A.M. Reilly, R.H. Daniels et al.// J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273, P.8137-8144.

179. Strochlic, T.I. Phosphoinositides are essential co-activators for p21-activated kinase 1 (PAK1) / T.I. Strochlic, J. Viaud, U.E. Rennefahrt et al. // Mol. Cell. - 2010. -Vol. 40, №3 - P.493-500.

180. Bokoch, G.M. Interaction of the Nek adapter protein with p21 -activated kinase (PAK1) / G.M. Bokoch, Y. Wang, B.P. Bohl et al. // J Biol Chem - 1996. - Vol. 271 -P.25746-25749.

181. Yang, Y. Activation of Racl-PI3K/Akt is required for epidermal growth factor-induced PAK1 activation and cell migration in MDA-MB-231 breast cancer cells / Y. Yang, J. Du, Z. Hu et al. // J. Biomed. Res. - 2011. - Vol. 25, №4 - P.237-245.

182. Malecka, K.A. Face-to-face, PAK-to-PAK / K.A. Malecka, J.R. Peterson// Structure - 2011. - Vol. 19 - P.1723-1724.

183. Chong, C. The mechanism of PAK activation. Autophosphorylation events in both regulatory and kinase domains control activity / C. Chong, L. Tan, L. Lim et al. // J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276 - P.17347-17353.

184. Zhao, Z.S. Interaction between PAK and nek: a template for Nek targets and role of PAK autophosphorylation / Z.S. Zhao, E. Manser, L. Lim // Mol. Cell. Biol. - 2000. - Vol. 20 - P.3906-3917.

185. Zhao, Z.S. A conserved negative regulatory region in alphaPAK: inhibition of PAK kinases reveals their morphological roles downstream of Cdc42 and Racl / Z.S. Zhao, E. Manser, X.Q. Chen et al. // Mol. Cell. Biol. - 1998. - Vol. 18 - P.2153-2163.

186. Ng, Y.W. Why an A-loop phosphomimetic fails to activate PAK1: understanding an inaccessible kinase state by molecular dynamics simulations / Y.W. Ng, D. Raghunathan, P.M. Chan et al.// Structure - 2010. - Vol. 18 - P.879-890.

187. Manser, E. A brain serine/threonine protein kinase activated by Cdc42 and Racl / E. Manser, T. Leung, H. Salihuddin et al. // Nature - 1994. - Vol. 367, № 6458 - P.40-46.

188. Etienne-Manneville, S. Rho GTPases in cell biology / S. Etienne-Manneville, A. Hall // Nature - 2002. - Vol. 420 - P.629-635.

189. Ridley, AJ. Rho GTPases and actin dynamics in membrane protrusions and vesicle trafficking / A.J. Ridley // Trends Cell Biol. - 2006. - Vol. 16 - P.522-529.

190. Cherfils, J. Regulation of small GTPases by GEFs, GAPs, and GDIs / J. Cherfils, M. Zeghouf // Physiol. Rev. - 2013. - Vol. 93, №1 - P.269-309.

191. Rossman, K.L. GEFs means go: turning on Rho-GTPases with guanine nucleotide-exchange factors / K.L. Rossman, C.J. Der, J. Sondek // Nature Reviews Molecular Cell Biology - 2005. - P.167-180.

192. Hoffman, G.R. Signaling to the Rho GTPases: networking with the DH domain / G.R. Hoffman, R.A.Cerione // FEBS Lett. - 2002. - Vol. 513, №1 - P.85-91.

193. Rossman, K.L. Multifunctional roles for the PH domain of Dbs in regulating Rho GTPase activation / K.L. Rossman et al.// J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278 - P.18393-18400.

194. Kubiseski, T.J. Functional analysis of the Caenorhabditis elegans UNC-73B PH domain demonstrates a role in activation of the Rac GTPase in vitro and axon guidance

in vivo / T.J. Kubiseski, J. Culotti, T. Pawson // Mol. Cell. Biol. - 2003. - Vol. 23 -P.6823-6835.

195. Fleming, I.N. Regulation of the Racl-specific exchange factor Tiaml involves both phosphoinositide 3-kinase-dependent and -independent components / I.N. Fleming, A. Gray, C.P. Downes // Biochem J. - 2000. - Vol. 351, Ptl - P.173-182.

196. Mertens, A.E. Regulation of Tiaml-Rac signalling / A.E. Mertens, R.C. Roovers, J.G. Collard // FEBS Lett. - 2003. - Vol. 546 - P.ll-16.

197. Baird, D. The Cool-2/alpha-Pix protein mediates a Cdc42-Rac signaling cascade / D. Baird, Q. Feng, R.A. Cerione // Curr. Biol. - 2005. - Vol. 15, № 1 - P.l-10.

198. Cotteret, S. PAK GITs to Aurora-A / S. Cotteret, J. Chernoff // Dev. Cell. - 2005.

- Vol. 9, №5 - P.573-574.

199. Feng, Q. Novel regulatory mechanisms for the Dbl family guanine nucleotide exchange factor Cool-2/alpha-Pix / Q. Feng, D. Baird, R.A. Cerione // EMBO J. - 2004.

- Vol. 23, № 17 - P.3492-3504.

200. Rosenberger, G. Interaction of aPIX (ARHGEF6) with p-parvin (PARVB) suggests an involvement of aPIX in integrin-mediated signaling / G. Rosenberger, I. Jantke, A. Gal, K. Kutsche // Human Molecular Genetics - 2003. - Vol. 12, № 2 - P. 155-167.

201. Kutsche, K. Mutations in ARHGEF6, encoding a guanine nucleotide exchange factor for Rho GTPases, in patients with X-linked mental retardation / K. Kutsche, et al.// Nat. Genet. - 2000. - Vol. 26, №2 - P.247-50.

202. Feng, Q. Regulation of the Cool/Pix proteins: key binding partners of the Cdc42/Rac targets, the p21-activated kinases / Q. Feng, J.G. Albeck, R.A. Cerione et al. // J. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277, №7 - P.5644-5650.

203. Rennefahrt, U.E. Specificity Profiling of PAK Kinases Allows Identification of Novel Phosphorylation Sites / U.E. Rennefahrt, S.W. Deacon, S.A. Parker et al. // J. Biol. Chem. - 2007. - Vol. 282, № 21 - P.15667-15678.

204. King, C.C. p21-activated kinase (PAK1) is phosphorylated and activated by 3-phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK1) / C.C. King, E.M. Gardiner, F.T. Zenke et al. // J. Biol. Chem. - 2000. - Vol. 275, № 52 - P.41201-41209.

205. Howe, A.K. Regulation of anchorage-dependent signal transduction by protein kinase A and p21-activated kinase / A.K. Howe, R.L. Juliano // Nat. Cell Biol. - 2000. -Vol. 2, № 9 - P.593-600.

206. Zhou, G.L. Akt phosphorylation of serine 21 on PAK1 modulates Nek binding and cell migration / G.L. Zhou, Y. Zhuo, C.C. King, B.H. Fryer, G.M. Bokoch, J. Field // Mol. Cell Biol. - 2003. - Vol. 23, № 22 - P.8058-8069.

207. Bokoch, G.M. Biology of the p21-activated kinases / G.M. Bokoch // Ann. Rev. Biochem. - 2003. - Vol. 72 - P.743-781.

208. Hoefen, R.J. The multifunctional GIT family of proteins / R.J. Hoefen, B.C. Berk // J. Cell Sci. - 2006. - Vol. 119 - P.1469-1475.

209. Kumar, R. p21-activated kinases in cancer / R. Kumar, A.E. Gururaj, C.J. Barnes // Nature Reviews Cancer - 2006. - Vol. 6 - P.459-471.

210. Beeser, A. Role of group A p21-activated kinases in activation of extracellular-regulated kinase by growth factors / A. Beeser, Z.M. Jaffer, C. Hofmann et al. // J. Biol. Chem. - 2005. - Vol. 280, № 44 - P.36609-36615.

211. Gallagher, E.D. Binding of JNK/SAPK to MEKK1 is regulated by phosphorylation / E.D. Gallagher, S. Xu, C. Moomaw et al. // J. Biol. Chem. - 2002. -Vol. 277, №48 - P.45785-45792.

212. Slack-Davis, J.K. PAK1 phosphorylation of MEK1 regulates fibronectin-stimulated MAPK activation stimulated MAPK activation / J.K. Slack-Davis et al.// JCB - 2003. - Vol. 162, № 2 -P.281-291.

213. Li, F. p21-activated kinase 1 interacts with and phosphorylates histone H3 in breast cancer cells / F. Li, L. Adam, R.K. Vadlamudi et al. // EMBO Rep. - 2002. -Vol. 3, №8 - P.767-773.

214. Maroto, B. P21-activated kinase is required for mitotic progression and regulates Plkl / B. Maroto, M.B. Ye, K. Von Lohneysen et al. // Oncogene - 2008. - Vol. 27, №36 - P.4900-4908.

215. Nheu, T. PAK is essential for RAS-induced upregulation of cyclin D1 during the G1 to S transition / T. Nheu, H. He, Y. Hirokawa et al. // Cell Cycle - 2004. - Vol. 3, №1 -P.71-74.

216. Arias-Romero, L.E. PAK1 kinase links ErbB2 to P-catenin in transformation of breast epithelial cells / L.E. Arias-Romero, O. Villamar-Cruz, M. Huang et al. // Cancer Res. - 2013. - Vol. 73, №12 - P. 3671-3682.

217. Ye, D.Z. p21-Activated kinase 1 (PAK1) phosphorylates BAD directly at serine 111 in vitro and indirectly through Raf-1 at serine 112 / D.Z.Ye, S. Jin, Y. Zhuo et al. // PLoS One - 2011. - Vol. 6, № 11 - P:e27637.

218. Vadlamudi, R.K. Dynein light chain 1, a p21-activated kinase 1-interacting substrate, promotes cancerous phenotypes / R.K. Vadlamudi, R. Bagheri-Yarmand, Z. Yang et al // Cancer Cell - 2004. - Vol. 5, № 6, P.575-585.

219. Mazumdar, A. Estrogen regulation of PAK1 and FKHR pathways in breast cancer cells / A. Mazumdar, R. Kumar // FEBS Letters - 2003. - Vol. 535, № 1-3 - P.6-10.

220. Frost, J.A. Stimulation of NFkappa B activity by multiple signaling pathways requires PAK1 / J.A. Frost, J.L. Swantek, S. Stippec et al. // J. Biol. Chem. - 2000. -Vol. 275, №26 - P.19693-19699.

221. Friedland, J.C. a6p4 integrin activates Rac-dependent p21-activated kinase 1 to drive NF-kB-dependent resistance to apoptosis in 3D mammary acini / J.C. Friedland, J.N. Lakins, M.G. Kazanietz et al. // J. Cell. Sci. - 2007. - Vol. 120 - P.3700-3712.

222. Wang, C.-Y. NF-kB Antiapoptosis: Induction of TRAF1 and TRAF2 and c-IAPl and c-IAP2 to Suppress Caspase-8 Activation / C.-Y. Wang, M.W. Mayo, R.G. Korneluk et al. // Science - 1998. - Vol. 281, №. 5383 - P.1680-1683.

223. Acconcia, F. Phosphorylation-dependent regulation of nuclear localization and functions of integrin-linked kinase / F.Acconcia, C.J. Barnes, R.R. Singh et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 2007. - Vol. 104, № 16 - P.6782-6787.

224. Wu, C. Integrin-linked kinase and PINCH: partners in regulation of cell-extracellular matrix interaction and signal transduction / C. Wu // J. Cell Science -1999. - Vol. 112, Pt. 24 - P.4485-4499.

225. Vadlamudi, R.K. p41-Arc subunit of human Arp2/3 complex is a p21-activated kinase-l-interacting substrate / R.K. Vadlamudi, F. Li, C.J. Barnes, R. Bagheri-Yarmand et al. // EMBO Rep. - 2004. - Vol. 5, № 2 - P.154-160.

226. Chew, T.L. Phosphorylation of non-muscle myosin II regulatory light chain by p21-activated kinase (gamma-PAK) / T.L. Chew, R.A. Masaracchia, Z.M. Goeckeler et al. // J. Muscle Res. Cell Motil. -1998. - Vol. 19, № 8 - P.839-854.

227. Edwards, D.C. Activation of LIM-kinase by PAK1 couples Rac/Cdc42 GTPase signalling to actin cytoskeletal dynamics / D.C. Edwards, L.C. Sanders, G.M. Bokoch et al. // Nat. Cell Biol. - 1999. - Vol. 1, № 5 - P.253-259.

228. Vadlamudi, R.K. Filamin is essential in actin cytoskeletal assembly mediated by p21-activated kinase 1 / R.K. Vadlamudi, F. Li, L. Adam, D. Nguyen et al. // Nature cell biology - 2002. - Vol. 4, № 9 - P.681-690.

229. Vadlamudi, R.K. p21-activated kinase 1 regulates microtubule dynamics by phosphorylating tubulin cofactor B. / R.K. Vadlamudi, C.J. Barnes, S. Rayala et al. // Mol. Cell Biol. - 2005. - Vol. 25, № 9 - P.3726-3736.

230. Wittmann, T. Regulation of microtubule destabilizing activity of Opl8/stathmin downstream of Racl / T. Wittmann, G.M. Bokoch, C.M. Waterman-Storer // Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279, №7 - P.6196-6203.

231. Yang, Z. PAK1 Phosphorylation of Snail, a Master Regulator of Epithelial-to-Mesenchyme Transition, Modulates Snail's Subcellular Localization and Functions / Z. Yang, S. Rayala, D. Nguyen et al. // Cancer Res. - 2005 - Vol. 65, № 8 - P.3179-3184.

232. Stemmer, V. Snail promotes Wnt target gene expression and interacts with (3-catenin / V. Stemmer, B. de Craene, G. Berx et al. // Oncogene - 2008. - Vol. 27 -P.5075-5080.

233. Vadlamudi, R.K. An essential role of PAK1 phosphorylation of SHARP in Notch signaling / R.K.Vadlamudi, B. Manavathi, R.R. Singh et al. / Oncogene - 2005. - Vol. 24 - P.4591-4596.

234. Liberali, P. The closure of PAKl-dependent macropinosomes requires the phosphorylation of CtBPl/BARS / P. Liberali, E. Kakkonen, G. Turacchio et al. // EMBO J. - 2008. - Vol. 27, №7 - P.970-981.

235. Balasenthil, S. p21-activated kinase-1 signaling mediates cyclin D1 expression in mammary epithelial and cancer cells / S. Balasenthil et al.// J. Biol. Chem. - 2004. -Vol. 279 - P.1422-1428.

236. Arias-Romero, L.E. p21-activated kinases in Erbb2-positive breast cancer: A new therapeutic target? / L.E. Arias-Romero, J. Chernoff // Small GTPases - 2010. - Vol. 1 - P.124-128.

237. Arias-Romero, L.E. A tale of two PAKs / L.E. Arias-Romero, J. Chernoff // Biol. Cell - 2008. - Vol. 100 - P.97-108.

238. Wang, Z. p21-Activated Kinase 1 (PAK1) Can Promote ERK Activation in a Kinase-independent Manner / Z. Wang et al. // J. Biol. Chem. - 2013. - Vol. 288 -P.20093-20099.

239. Adam, L. Heregulin regulates cytoskeletal reorganization and cell migration through the p21-activated kinase-1 via phosphatidylinositol-3 kinase / L. Adam, R. Vadlamudi, S.B. KondaPAKa et al. // J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273 - P.28238-28246.

240. Adam, L. Regulation of microfilament reorganization and invasiveness of breast cancer cells by kinase dead p21-activated kinase-1 / L. Adam, R. Vadlamudi, M. Mandal et al. // J. Biol. Chem. - 2000. - Vol. 275 - P.12041-12050.

241. Авилова, E.A. Значение протеинкиназы PAK1 в регуляции эстрогеннезависимого роста клеток рака молочной железы / Е.А. Авилова, О.Е. Андреева, В.А. Шатская, М.А. Красильников // Биомедицинская химия - 2014 - Т. 60, №3 - С.322-331.

242. Shrestha, Y. РАК1 is a breast cancer oncogene that coordinately activates МАРК and MET signaling / Y. Shrestha et al.// Oncogene - 2012 - Vol. 31 - P.3397-3408.

243. Lundgren, K. Gene products of chromosome llq and their association with CCND1 gene amplification and tamoxifen resistance in premenopausal breast cancer / K. Lundgren, K. Holm, B. Nordenskjold et al. // Breast Cancer Res. - 2008. - Vol. 10 -P.R81.

244. Bekri, S. Detailed map of a region commonly amplified at Ilql3ql4 in human breast carcinoma / S. Bekri, J. Adelaide, S. Merscher et al. // Cytogenet. Cell Genet. -1997.-Vol. 79 - P.125-131.

245. Radu, M. РАК signalling during the development and progression of cancer / M. Radu, G. Semenova, R. Kosoff, J. Chernoff / Nat. Rev. Cancer. - 2014 - Vol. 14, №1 -P.13-25.

246. Ong, C.C. Targeting p21-activated kinase 1 (PAK1) to induce apoptosis of tumor cells / C.C. Ong et al.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 2011. - Vol. 108 - P.7177-7182.

247. Holm, C. Association between PAK1 expression and subcellular localization and tamoxifen resistance in breast cancer patients / C. Holm, S. Rayala, K. Jirstrom et al. // J. Natl. Cancer Inst. - 2006. - Vol. 98, №10 - P.671-680.

248. McDonnell, D.P. The molecular pharmacology of SERMs / D.P. McDonnell / Trends Endocrinol. Metab. - 1999. - Vol. 10 - P.301-311.

249. Vadlamudi, R.K. Regulatable expression of p21-activated kinase-1 promotes anchorage-independent growth and abnormal organization of mitotic spindles in human epithelial breast cancer cells / R.K. Vadlamudi, L. Adam, R.A. Wang et al. // J. Biol. Chem. - 2000. - Vol. 275 - P.36238-36244.

250. Ghosh, A. Regulation of tamoxifen sensitivity by a PAK1-EBP1 signalling pathway in breast cancer / A. Ghosh, S. Awasthi, J.R. Peterson et al. // Br. J. Cancer -2013. - Vol. 108 - P.557-563.

251. Shrestha, Y. PAK1 is a breast cancer oncogene that coordinately activates MAPK and MET signaling / Y. Shrestha, E J. Schafer, J.S. Boehm et al. // Oncogene - 2012. -Vol. 31, №29 - P.3397-3408.

252. Yoo, J.Y. Interaction of the PA2G4 (EBP1) protein with ErbB-3 and regulation of this binding by heregulin / J.Y. Yoo, X.W. Wang, A.K. Rishi et al. // Br. J. Cancer -2000.-Vol. 82 - P.683-690.

253. Lessor, T.J. Ectopic expression of the ErbB-3 binding protein ebpl inhibits growth and induces differentiation of human breast cancer cell lines / T.J. Lessor, J.Y. Yoo, X. Xia, N. Woodford, A.W. Hamburger // J. Cell. Physiol. - 2000. - Vol. 183 -P.321-329.

254. Zhang, Y. Inhibition of heregulin mediated MCF-7 breast cancer cell growth by the ErbB3 binding protein EBP1 / Y. Zhang, D. Akinmade, A.W. Hamburger // Cancer Lett. - 2008. - Vol. 265 - P.298-306.

255. Ahn, J.Y. Nuclear Akt associates with PKC-phosphorylated Ebpl, preventing DNA fragmentation by inhibition of caspase-activated DNase / J.Y. Ahn, X. Liu, Z. Liu, L. Pereira et al. // EMBO J. - 2006. - Vol. 25 - P.2083-2095.

256. Akinmade, D. Phosphorylation of the ЕгЬВЗ binding protein Ebpl by p21-activated kinase 1 in breast cancer cells / D. Akinmade, A.H. Talukder, Y. Zhang et al. // Br. J. Cancer - 2008. - Vol. 98 - P.l 132-1140.

257. Yang, C. Essential role for rac in heregulin betal mitogenic signaling: a mechanism that involves epidermal growth factor receptor and is independent of ErbB4 / C. Yang, Y. Liu, M.A. Lemmon, M.G. Kazanietz // Molecular and Cellular Biology -2006. - Vol. 26 - P.831-842.

258. Xie, J.W. Extracellular matrix, Racl signaling, and estrogen-induced proliferation in MCF-7 breast cancer cells / J.W.Xie, S.Z. Haslam // Breast Cancer Research and Treatment - 2008. - Vol. 110 - P.257-268.

259. Rosenblatt, A.E. Inhibition of the Rho GTPase, Racl,decreases estrogen receptor levels and is a novel therapeutic strategy in breast cancer / A.E. Rosenblatt, M.I. Garcia, L. Lyons et al. // Endocrine-Related Cancer - 2011. - Vol. 18 - P.207-219.

260. Scherbakov, A.M. Snail/beta-catenin signaling protects breast cancer cells from hypoxia attack / A.M. Scherbakov, L.B. Stefanova, D.V. Sorokin, S.E. Semina, L.M. Berstein, M.A. Krasil'nikov // Exp Cell Res. - 2013. - Vol. 319, №20 - P.3150-3159.

261. Андреева, O.E. Значение транскрипционного фактора Snail 1 в регуляции гормональной чувствительности культивируемых in vitro клеток рака молочной железы / О.Е. Андреева, A.M. Щербаков, В.А. Шатская, М.А. Красильников // Вопросы онкологии - 2012. - Т. 1 - С.71-76.

262. Singh, P. HIF-lalpha and АМРК interactions regulate cellular hypoxia adaptation in the subtotal nephrectomy model of CKD // FASEB J. - 2013. - Vol 27 - P.910.10.

263. Щербаков, A.M. Сигнальный путь В-катенина и устойчивость клеток рака молоч ной железы к гипоксическим условиям / A.M. Щербаков, Л.Б. Стефанова, И.А. Якушина, М.А. Красильников // Клиническая лабораторная диагностика -2013.-Т. 10 - С.37-40.

264. Стефанова, Л.Б. Чувствительность к гипоксии культивируемых in vitro клеток рака молочной железы: роль аппарата рецептора эстрогенов / Л.Б. Стефанова, A.M. Щербаков, О.Е. Андреева, Н.А. Болотина, И.В. Терешкина, М.А. Красильников // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии - 2012. - Т. 10 - С.60-63.

265. Deacon, S.W. An isoform-selective, small-molecule inhibitor targets the autoregulatory mechanism of p21-activated kinase / S.W. Deacon, A. Beeser, J.A. Fukui, U.E. Rennefahrt et al. // Chem Biol. - 2008. - Vol. 5, №4 - P.322-331.

266. Viaud, J. An allosteric kinase inhibitor binds the p21-activated kinase autoregulatory domain covalently / J. Viaud, J.R. Peterson // Mol. Cancer Ther. - 2009. - Vol. 8, № 9 - P.2559-2565.

267. Singhai, R. The response to PAK1 inhibitor IPA3 distinguishes between cancer cells with mutations in BRAF and Ras oncogenes / R. Singhai, E.S. Kandel // Oncotarget - 2012. - Vol. - P.714-708.

268. Reid, G. Cyclic, proteasome-mediated turnover of unliganded and liganded ERalpha on responsive promoters is an integral feature of estrogen signaling / G. Reid, M.R. Hübner, R. Metivier et al. // Mol. Cell. - 2003. - Vol. 11 - P.695-707.

269. Vincent, T. A SNAIL-SMAD3/4 transcriptional repressor complex promotes TGF-beta mediated epithelial-mesenchymal transition. T. Vincent, E.P. Neve, J.R. Johnson, A. Kukalev, F. Rojo et al.// Nature cell biology - 2009. - Vol. 11 - P.943-950.

270. Batlle, E. The transcription factor snail is a repressor of E-cadherin gene expression in epithelial tumour cells / E. Batlle et al. // Nat. Cell. Biol. - 2000. - P.84-89.

271. Sells, M.A. Human p21-activated kinase (PAK1) regulates actin organization in mammalian cells / M.A. Sells, U.G. Knaus, S. Bagrodia et al. / Curr. Biol. - 1997. -Vol. 7 - P.202-210.

272. Bradford, M. M. A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding / M.M. Bradford // Anal. Biochem. - 1976. - Vol. 72 - P.248-254.

273. Кнорре, Д.Г. Биологическая химия / Д.Г. Кнорре, С.Д.Мызина. Москва: Высшая школа, 2000. 479 с.

274. Остерман, JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие) / JT.A. Остерман. М.: Наука, 1981. 288 с.

275. Merlin, J.L. МТТ assays allow quick and reliable measurement of the response of human tumour cells to photodynamic therapy / J. L. Merlin, S. Azzi, D. Lignon et al.// Eur. J. Cancer. - 1992. - P.1452-1458.

276. Gardiner-Garden, M. CpG islands in vertebrate genomes / M. Gardiner-Garden, M. Frommer // J. Mol. Biol. - 1987. - Vol. 196 - P.261-282.

277. Li L.C. MethPrimer: designing primers for methylation PCRs / L.C. Li, R. Dahiya // Bioinformatics - 2002. - Vol. 18, № 11 - P.1427-1431.

278. Кузнецова, Е.Б. Новые маркеры метилирования и экспрессии генов при раке молочной железы / Е.Б. Кузнецова, Т.В. Кекеева, С.С. Ларин, В.В. Землякова, О.В. Бабенко, М.В. Немцова, Д.В. Залетаев, В.В. Стрельников // Молекулярная биология - 2007 - Т .41, №4, С. 624-633.

279. Katargin, A. Hypermethylation of genomic 3.3-kb repeats is frequent event in HPV-positive cervical cancer / A. Katargin, L. Pavlova, F. Kisseljov, N. Kisseljova // BMC Medical Genomics - 2009. - Vol. 2 - P.30.

280. Alexandrova, A. Effects of proteasome inhibitor, MG132, on proteasome activity and oxidative status of rat liver / A. Alexandrova, L. Petrov, A. Georgieva, M. Kirkova, M. Kukan // Cell Biochem. Funct.- 2008. - Vol. 26 - P.392-398.

281. Сорокин, Д.В. Механизм адаптации клеток рака молочной железы к гипоксии: роль AMPK/mTOR-сигнального пути / Д.В.Сорокин, А.М.Щербаков, И.А.Якушина, С.Е.Семина, М.В.Гудкова, М.А.Красильников // Клеточные технологии в биологии и медицине - 2015 - В печати.

282. Dhasarathy, A. The transcription factor snail mediates epithelial to mesenchymal transitions by repression of estrogen receptor alpha / A. Dhasarathy, M. Kajita, P.A. Wade // Mol. Endocrinol. - 2007. - Vol. 21 - P.2907-2918.

283. Fujita, N. MTA3, a Mi-2/NuRD complex subunit, regulates an invasive growth pathway in breast cancer / N. Fujita, D.L. Jaye, M. Kajita et al.// Cell - 2003. - Vol. 113 - P.207-219.

284. Zhang, X. Genome wide analysis of DNA methylation in rat lungs with lipopolysaccharide induced acute lung injury / X. Zhang, C. Lv, X. Liu et al. // Molecular Medicine Reports - 2013 - Vol. 7.5 - P.1417-1424

285. Yi, C. Validation of the p21-Activated Kinases as Targets for Inhibition in Neurofibromatosis Type 2 / C. Yi et al.//Cancer research - 2008. - Vol. 68, №19 - P. 7932-7937.

286. Киселева, Н.П. Эпигеномика и канцерогенез: уникальность паттерна метилирования ДНК опухолевой клетки / Н.П. Киселева, А.Н. Катаргин, Д.В. Гра // Вопросы онкологии - 2007, № 1 - С. 14.