Роль Rho-киназы и протеинкиназы C в регуляции сокращения подкожной артерии новорожденных и взрослых крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.01, кандидат биологических наук Мочалов, Степан Вячеславович

  • Мочалов, Степан Вячеславович
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2010, Москва
  • Специальность ВАК РФ03.03.01
  • Количество страниц 161
Мочалов, Степан Вячеславович. Роль Rho-киназы и протеинкиназы C в регуляции сокращения подкожной артерии новорожденных и взрослых крыс: дис. кандидат биологических наук: 03.03.01 - Физиология. Москва. 2010. 161 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мочалов, Степан Вячеславович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Гладкая мышца: роль в регуляции тонуса сосудов и артериального давления.

1.2 Регуляция концентрации Са" в цитоплазме гладкомышечных клеток.

1.2.1 Механизмы повышения Са2+в цитоплазме гладкомышечных клеток

1.2.2 Механизмы снижения Са" в цитоплазме гладкомышечных клеток.

1.3 Механизмы сокращения гладкой мышцы при повышении внутриклеточной концентрации Са2+.

1.4 Повышение чувствительности сократительного аппарата к Са2+ - важный механизм сокращения гладкой мышцы.

1.4.1 Механизмы Са" -сенситизации, связанные с повышением степени фосфорилирования РЛЦ миозина.

1.4.2 Механизмы Са" -сенситизации без изменения степени фосфорилирования РЛЦ миозина.

1.4.3 Временные характеристики Са -зависимого и Са" -независимого сокращения.

1.5 Регуляция активности ФЛЦМ.

1.5.1 Механизм действия ПКС.

1.5.2 Механизм действия Rho-киназы.

1.5.3 Временные характеристики Са2+-сенситизации с участием протеинкиназы С и Rho-киназы.

1.5.4 Относительный вклад ПКС и Rho-киназы в разных кровеносных сосудах.

1.6 Возрастные изменения механизмов сокращения гладкой мышцы.

1.6.1 Изменения на уровне регуляции Са2+-гомеостаза.

1.6.1.1 Изменение мембранного потенциала.

1.6.1.2 Изменение калиевых и кальциевых каналов.

1.6.1.2.1 Калиевые каналы.

1.6.1.2.2 Кальциевые каналы.

1.6.2 Изменения на уровне регуляции чувствительности сократительного аппарата к Са2+.

1.6.3 Изменения экспрессии/активности белков, регулирующих сокращение гладкой мышцы.

1.6.3.1 Изменения вклада протеинкиназы С и Шю-киназы в регуляцию сокращения.

1.7 Актуальность и логика построения данной работы.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Животные и объект исследования.

2.2. Физиологические эксперименты.

2.2.1 Растворы, использованные в физиологической части работы.

2.2.2 Приготовление препарата. Измерение силы сокращения в изометрическом режиме.

2.2.3 Нормализация растяжения препарата.

942.2.4 Измерение концентрации Са внутри клеток.

2.2.5 Активация препарата.

2.2.6 Общий протокол эксперимента.

2.2.7 Обработка результатов.

2.2.7.1 Нормирование силы сокращения.

2.2.7.2 Нормирование Р340/Р380.

2.2.8 Вычисление Са -чувствительности.

2.2.9 Статистическая обработка результатов.

2.2.10 Реактивы, использованные в экспериментах на изолированных сосудах.

2.3 Биохимические эксперименты.

2.3.1 Получение образцов для биохимического анализа.

2.3.2 Гомогенизация и экстрагирование образцов.

2.3.3 Электрофорез.

2.3.4. Иммуноблоттинг.

2.3.5 Обработка результатов.

2.3.6 Статистическая обработка результатов.

2.3.7 Реактивы, использованные в биохимической части работы.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Результаты физиологических экспериментов.

3.1.1 Эффекты МХ и ингибитора Шю-киназы У27632 на силу сокращения, [Са~ ], и Са -чувствительность. Серия экспериментов «КС15-МХ-У».

3.1.2 Воспроизводимость эффектов МХ на силу сокращения, [Са~ ], и

Са2+чувствительность (контроль к серии «КС15-МХ-У»). Серия экспериментов «Кон-МХ-У».

3.1.3 Эффекты МХ и ингибитора протеинкиназы С ОР109203Х на силу сокращения, [Са2+], и Са2+-чувствительность. Серия экспериментов «КС15-МХ-вР».

3.1.4 Воспроизводимость эффектов МХ на силу сокращения, [Са2+], и Са2+-чувствительность для серии экспериментов «КС15-МХ-ОР». Серия экспериментов «Кон-МХ(ОР)».

3.1.5 Эффекты МХ и ингибитора Ь-типа Са2+ каналов нимодипина на силу сокращения, [Са2+], и Са2+-чувствительность. Серия экспериментов «КС15-МХ-№ш».

3.1.6 Эффекты К+-деполяризации и ингибитора Шю-киназы У27632 на силу сокращения, [Са2+]; и Са2+-чувствительность. Серия экспериментов «КС15-КС142-У».

3.1.7 Воспроизводимость эффектов К+-деполяризации на силу сокращения,

Са ]; и Са" -чувствительность - контроль к серии экспериментов «КС15-КС142-У». Серия экспериментов «Кон-КС142(У)».

3.1.8 Эффекты К+-деполяризации и ингибитора протеинкиназы С вР109203X на силу сокращения, [Са2+]! и Са2+-чувствительность.Серия экспериментов «КС15-КС142-СР».

3.1.9 Воспроизводимость эффектов К+-деполяризации на силу сокращения, [Са21 и Са2+-чувствительность - контроль к серии экспериментов «КС15-КС142-ОР». Серия экспериментов «Кон- КС142(ОР)».

1/¥ 4*

3.1.10 Изменения [Са^ и силы сокращения при разной степени К -деполяризации (42 и 120 мМ КС1). Серия экспериментов «КС1120-КС142-КС15».

3.1.11 Эффекты ингибитора Шю-киназы У27632 на силу сокращения, [Са2+]; и Са2+-чувствительность при действии МХ на фоне К+-деполяризации. Серия экспериментов «КС142(МХ-У)».

3.1.12 Сопоставление эффектов МХ и К+-деполяризации на силу сокращения, [Са" и Са -чувствительность. Серия экспериментов «Кон

КС142-МХ».

3.1.12 Сопоставление эффектов МХ и К+-деполяризации на силу

•у, 9-4сокращения, [Са ]; и Са -чувствительность. Серия экспериментов «Кон-КС142-МХ».

943.1.13 Расслабление гладкой мышцы сосудов при высокой [Са ]0: влияние капсайцина.•.

3.1.14 Сопоставление эффектов МХ и ингибитора Шю-киназы У27632 на сокращение сосудов с эндотелием и без эндотелия. Серия экспериментов

Кон-Энд».

3.2 Результаты биохимических экспериментов.

3.2.1 Измерение фосфорилирования МУРТ в гладкой мышце сосудов взрослых животных.

3.2.2 Измерение фосфорилирования МУРТ в гладкой мышце сосудов новорожденных животных.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

4.1 Основные результаты работы.

4.2 Базальная Са2+-чувствительность сокращения.

4.3 Изменения регуляции [Са2+]; у новорожденных крыс.

4.4 Роль Шю-киназы и протеинкиназы С в изменении Са2+-чувствительности сокращения подкожной артерии крысы.

4.5 Роль других путей регуляции Са2+-чувствительности сокращения подкожной артерии у новорожденных и взрослых крыс.

4.6 Механизмы активации Шю-киназы при активации а 1 - адр с н о р еце птор о в МХ и при деполяризации.

944.7 Роль Шю-киназы в повышении [Са в гладкой мышце сосудов взрослых крыс.

4.8 Роль Юю-киназы в регуляции Са -чувствительности адренергического сокращения сосудов новорожденных крыс по сравнению со взрослыми.

4.9 Оценка активности Шю-киназы в сосудах взрослых и новорожденных крыс по фосфорилированию МУРТ.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Физиология», 03.03.01 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль Rho-киназы и протеинкиназы C в регуляции сокращения подкожной артерии новорожденных и взрослых крыс»

Гладкая мышца образует средний слой стенки всех кровеносных сосудов. Правильное функционирование гладкой мышцы очень важно для нормального кровоснабжения органов и тканей. Нарушение регуляции тонуса гладкой мышцы сосудов ведет к развитию артериальной гипертензии, спазм)- мозговых и коронарных сосудов и другим патологическим состояниям (Uehata et al., 1997; Mukai et al., 2001; Wettschureck, Offermanns, 2002; Jarajapu, Knot, 2005; Salamanca, Khalil, 2005). Для разработки новых способов коррекции тонуса гладкой мышцы необходимо понимать принципы его поддержания и регуляции.

В раннем постнатальном онтогенезе происходят значительные изменения регуляции кровообращения. Динамика процессов возрастных изменений кровообращения различается у разных видов млекопитающих и коррелирует с темпом общего созревания организма. Удобной экспериментальной моделью таких изменений в организме человека являются крысы: по степени зрелости систем организма новорожденный крысенок сходен с недоношенным (рожденным на 7-8 месяце беременности) ребенком. Изучение механизмов регуляции кровообращения у новорожденных крысят позволяет понять, как происходят соответствующие изменения в организме человека, а также моделировать различные патологические процессы и разрабатывать новые способы их коррекции.

Следует отметить, что созревание механизмов регуляции кровообращения в модельных экспериментах на крысах исследуется весьма интенсивно. Показано, что в первые неделп постнатального развития у крыс происходит формирование и функциональное созревание симпатической иннервации сосудов (Todd, 1980; Hill et al., 1983; Hill et al., 1999; Luff, 1999; Sandow, Hill, 1999), увеличивается вклад симпатической системы в формирование уровня системного артериального давления (АД). У новорожденных крысят уровень среднего АД очень низкий (всего 40-50 мм рт.ст.), но в течение месяца он достигает «взрослого» уровня - 90-100 мм рт.ст. (Mills, Smith, 1986; Kasparov, Patón, 1997). Известно, что симпатические нервы не только регулируют просвет сосудов, но и оказывают на них трофическое влияние: они регулируют пролиферацию, рост и дифференцировку гладкомышечных клеток (Орбели, 1962; Bevan, 1984: Damon, 2005). Симпатическая иннервация необходима для формирования сократительного фенотипа гладкомышечных клеток в онтогенезе, чго связано с экспрессией специфических гладкомышечных изоформ белков сократительного аппарата -актина и миозина (Bevan, 1984; Damon, 2005). Кроме того, трофическое влияние симпатических нервов на сосуды обеспечивает формирование специфического сократительного фенотипа гладкой мышцы сосудов, что обеспечивает возможность динамической регуляции тонуса сосудов симпатическими вазомоторными влияниями (Пуздрова, 2007).

Различия в регуляции гладкой мышцы сосудов между новорожденными и взрослыми проявляются как в регуляции кальциевого гомеостаза гладкомышечных клеток, так и на этапе взаимодейс i вия Са2+ с сократи гельным аппаратом клетки. Хотя экспрессия и активность ионных каналов, которые обеспечивают формирование уровня мембранного потенциала и могут влиять на концентрацию Са2+ в цитоплазме клеток, являются предметом многолетних исследований, ясного ответа на этот вопрос нет. Согласно литературным данным из разных источников, активность кальциевых каналов у новорожденных животных по сравнению со взрослыми может быть повышена (Long et al., 1999; Blood et al., 2002) или снижена (Quignard et al., 1996); также противоречивы данные об активности калиевых каналов ( Reeve et al., 1998; Belevych et al., 2002). По-видимому, характер этих изменений может зависеть от вида используемых животных или от типа сосудов, на которых проводится исследование.

Вместе в тем, многие авторы единодушны во мнении, что созревание гладкой мышцы сосудов в постпаталыюм онтогенезе сопряжено со снижением Са2+-чувствительности сократительного аппарата гладкомышечных клеток (Пуздрова, 2007; Àkopov et al., 1997; Bruce, Nixon, 1997; Akopov et al., 1998b; Ekman et al., 2005; Sandoval et al., 2007a). Са2+-чувствительность сократительного аппарата характеризуется зависимостью сокращения от [Са2+];: увеличение силы сокращения на фоне относительно неизменной [Са2+], обозначается как повышение Са~ -чувствительности (Са~ -сенситизация), а уменьшение сократительного ответа - как снижение Са2+-чувствительности

Л I десенситизация к Са ).

Выраженность гладкомышечного сокращения в основном зависит от степени фосфорилирования регуляторных легких цепей миозина (ЛЦМ), то есть от баланса активностей киназы (КЛЦМ) и фосфатазы (ФЛЦМ) легких цепей миозина. Основным механизмом повышения Са" -чувствительности является ингибирование ФЛЦМ. это замедляет дефосфорилирование ЛЦМ и поддерживает сокращение даже при сравнительно низкой активности зависимой от Са2+ КЛЦМ. Такое ингибирование ФЛЦМ может происходить в результате активности внутриклеточных сигнальный путей, сопряженных, в первую очередь, с активацией протеинкиназы С и Rho-киназы (Somlyo, Somlyo, 2003; Hirano, 2007). Механизм действия протеинкиназы С включает фосфорилирование белка CPI-17, в результате чего CPI-17 становится очень сильным ингибитором ФЛЦМ (Eto et al., 1997; Eto el al., 1995; Somlyo, Somlyo, 2003; Hirano, 2007). Rho-киназа ингибирует ФЛЦМ путем фосфорилирования ее регуляторной субъединицы MYPT по двум сайтам - Thr и

Thr850 (Somlyo,

Somlyo, 2003; Hirano, 2007;). Фосфорилирование no Thr850 приводит к диссоциации ФЛЦМ и миозина (Velasco et al., 2002), тогда как фосфорилирование по Thr696 приводит к снижению каталитической активности ФЛЦМ, но не сродства к субстрату (Feng et al., 1999).

Таким образом, Са2+-чувствительность сократительного аппарата гладкой мышцы на позднем эмбриональном периоде развития и в раннем постнатальном развитии выше, чем у взрослых животных. Вместе с тем, механизмы этого явления остаются во многом неясными. Результаты ингибиторного анализа свидетельствуют о возможном повышении активности Rho-киназы (Akopov et al., 1998с; Ekman et al., 2005; Belik et al., 2006). Следует отметить, что трактовка этих данных может быть неоднозначной, поскольку они получены либо в экспериментах на пермеабилизованной гладкой мышце сосудов (Akopov et al., 1998с), либо без измерения [Ca2+]j. Наряду с данными о важной роли Rho-киназы показано, что активация протеинкиназы С может приводить к более значительному увеличению Са2+-чувствительности у развивающихся животных, чем у взрослых (Akopov et al., 1998с). Такая разнородность данных литературы также может быть связана с использованием разных объектов исследования, поскольку известно, что относительный вклад протеинкиназы С и Rho-киназы в регуляцию Са -чувствительности сокращения может существенно различаться не только для артерий эластического и мышечного типа (Budzyn et al., 2006), но и для мышечных артерий, приносящих кровь к разным органам (Mueed et al., 2004; Budzyn et al., 2006).

Кроме того, относительный вклад протеинкиназы С и Rho-киназы может зависеть от стимула, который вызывает сокращение гладкой мышцы сосуда. Например, сигнализация через Gq/n белки ведет к активации фосфолипазы С и, следовательно, протеинкиназы С (Varma, Deng, 2000). тогда как путь от G12/13-белков сопряжен с активацией малого G-белка RhoA и его мишени - Rho-киназы (Seasholtz et al., 1999). Долгое время считали, что сокращение, вызванное деполяризацией мембраны является полностью Са" -зависимым, но впоследствии было показано, что увеличение [Са2+]; также может приводить к активации Rho-киназы и тем самым к повышению Са2+-чувствительности сокращения (Ratz et al., 2005).

Таким образом, данная работа направлена на изучение механизмов регуляции чувствительности сократительного аппарата гладкой мышцы артерий к Са2+ у крыс в раннем постнатальном онтогенезе. Она включает исследование роли двух ключевых сигнальных путей, регулирующих активность ФЛЦМ. В качестве объекта исследования была выбрана подкожная артерия - ветвь бедренной артерии, приносящая кровь к плюсне и стопе. Эта артерия является сосудом мышечного типа, под действием различных стимулов она способна значительно изменять свой просвет и тем самым регулировать кровоснабжение дистальных отделов задней конечности. Хорошая сократительная активность стенки подкожной артерии и способность развивать значительную силу сокращения- делает её удобным объектом для сравнительного изучения механизмов регуляции работы сократительного аппарата гладкой мышцы у взрослых и новорожденных животных.

Целью настоящей работы являлось провести сравнительное исследование участия Шю-киназы и протеинкиназы С в регуляции сокращения артерий у новорожденных (в возрасте 5-10 дней) и взрослых (в возрасте 2,5 -3,5 месяца) крыс.

В работе решались следующие задачи:

1) исследовать роль Шю-киназы и протеинкиназы С в регуляции сокращения подкожной артерии новорожденных и взрослых крыс при активации агадренорецепторов;

2) исследовать участие Шю-кииазы и протеинкиназы С в регуляции сокращения подкожной артерии новорожденных и взрослых крыс при деполяризации гладкой мышцы;

3) оценить при этих воздействиях активность Шю-киназы в гладкой мышце новорожденных и взрослых крыс по изменению фосфорилпрования регуляторной субъединицы ФЛЦМ (МУРТ) по сайтам ТЬг606 и ТЬг850.

Научная новизна работы.

Впервые исследованы механизмы регуляции Са2+-чувствительности сокращения гладкой мышцы для периферических артерий большого круга кровообращения новорожденных крыс, у которых динамика созревания гладкой мышцы сосудов сходна с таковой у человека. Исследование проведено на сосуде с интактной гладкой мышцей, что имеет несомненное преимущество, поскольку пермеабилизация гладкомышечных клеток сопряжена с изменением их белкового состава. Полученные результаты однозначно свидетельствуют о ведущей роли Шю-киназы в регуляции сокращения сосудов новорожденных крыс как при активации агадренорецепторов, так и при К+-деполяризации.

Впервые установлено, что весомый вклад Шю-киназы в регуляцию сокращения сосудов новорожденных крыс проявляется в увеличении степени сайт-специфического фосфорилирования регуляторной субъединицы ФЛЦМ -МУРТ. Такой комплексный анализ участия Шю-киназы в регуляции Са2+-чувствительности гладкой мышцы сосудов новорожденных и взрослых крыс, как в данной работе, ранее не проводился.

Впервые показано, что в гладкой мышце новорожденных крыс активация Rho-киназы при К -деполяризации не зависит от изменения [Ca

С использованием двух взаимодополняющих подходов - селективной блокады каналов и их активации К+-деполяризацией - установлено, что в сосудах взрослых крыс Rho-киназа регулирует активность Са2+ каналов L-типа.

Практическая значимость работы.

Значимость работы для фундаментальной и практической медицины обусловлена необходимостью разработки новых способов коррекции гипертонуса кровеносных сосудов при различных регуляторных расстройствах. Как известно, у преждевременно рожденных детей существует высокий риск развития артериальной гипертензии как в первые дни и месяцы после рождения (Fanaroff, Fanaroff, 2006), так и на более отдаленных этапах постнатального онтогенеза (Johansson et. al„ 2005). В данной работе обнаружены существенные различия механизмов регуляции сокращения сосудов у новорожденных и взрослых животных, что говорит о необходимости использования разных подходов для коррекции сосудистых нарушений на разных этапах постнатального онтогенеза. Основываясь на полученных в данной работе результатах, можно предположить, что для коррекции тонуса развивающейся гладкой мышцы нужно использовать фармакологические препараты, действие которых направлено на сигнальные пуги, регулирующие Са2+-чувствительность сократительного аппарата, тогда как в зрелой гладкой мышце вероятной мишенью для терапии является Са2+-зависимый путь сокращения.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Высокая Са~ -чувствительность сократительного аппарата гладкой мышцы артериальных сосудов на ранних этапах постнатального онтогенеза в основном обусловлена высокой активностью Rho-киназы; вклад протеинкиназы С намного меньше.

2. В раннем постнатальном периоде Rho-киназа регулирует в основном Ca -чувствительность сокращения гладкой мышцы сосудов, тогда как во взрослом организме она может влиять и на Са2+-гомеостаз гладкомышечных клеток путем активации потенциалзависимых Са2+ каналов L-типа.

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы были представлены на Международных симпозиумах «Биологическая подвижность» (Пущино, 2006, 2010); на Международной конференции «Центральные и периферические механизмы вегетативной нервной системы» (Донецк-Славянск, Украина, 2007); на XX съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007); на V и VII Всероссийских конференциях с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2007. 2009), на XXXVII Европейской мышечной конференции (Оксфорд, Великобритания. 2008), на Ежегодном съезде Скандинавского физиологического общества 2008 (Оулу, Финляндия, 2008), на IX Всероссийской научно-теоретической конференции «Физиологические механизмы адаптации растущего организма» (Казань, 2008); на XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2009" (Москва, 2009); на VI Конгрессе международного общества по автономной нервной системе (Сидней, Австралия, 2009); на Съезде Немецкого и Скандинавского физиологических обществ (Копенгаген, Дания, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликована 1 статья и 15 тезисов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Похожие диссертационные работы по специальности «Физиология», 03.03.01 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Физиология», Мочалов, Степан Вячеславович

ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнение механизмов регуляции сокращения подкожной артерии крыс разного возраста. Показано, что сокращение артерии при активации агадренорецепторов метоксамином или при деполяризации (42 мМ К+) у взрослых крыс связано с повышением [Са2+]; и Са2+-чувствительности сокращения, а у крыс в возрасте 5-10 дней - только с повышением Са2+-чувствительности.

2. Увеличение [Са2+]; в гладкой мышце сосудов взрослых крыс при активации агадренорецепторов метоксамином происходит в основном за счет входа Са2+ в клетку через потенциалзависимые Са2+ каналы Ь-типа, в регуляции активности этих каналов участвует Шю-киназа.

3. Повышение Са2+-чувствительности сокращения подкожной артерии при активации агадренорецепторов у 5 - 10 дневных крысят происходит за счет активности Шю-киназного сигнального пути, тогда как у взрослых крыс проявляется вклад и других механизмов.

4. Вклад протеинкиназы С в регуляцию Са2+-чувствительности сокращения подкожной артерии намного меньше, чем Шю-киназы, как у взрослых крыс, так и у крыс в возрасте 5-10 дней. У взрослых животных он проявляется при активации сокращения метоксамином, а у 5 - 10 дневных - при активации сокращения гладкой мышцы деполяризацией.

5. При активации агадренорецепторов у 5 - 10 дневных крыс, в отличие от взрослых, наблюдается увеличение фосфорилирования регуляторной субъединицы фосфатазы легких цепей миозина. Такое увеличение происходит за счет дополнительной активации Шю-киназы.

6. Шю-киназный сигнальный путь является основным механизмом регуляции Са2+-чувствительности сократительного аппарата гладкой мышцы в сосудах 5-10 дневных крысят.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе показано, что вклад Rho-киназы в регуляцию сокращения подкожной артерии крысы значительно больше, чем протеинкиназы С, как при активации агадренорецепторов, так и при К+-деполяризации. Такой характер регуляции наблюдается как для развивающейся, так и для развитой гладкой мышцы. Сокращение гладкой мышцы сосудов новорожденных животных почти полностью зависит от увеличения Са2+-чувствительности по Ию-киназному пути. Сокращение сосудов у взрослых крыс зависит не только от этого механизма, но таюке и от [Ca2+]i5 которая регулируется, в частности, активностью Rho-киназы.

Исследование активности Rho-киназы показало, что у обеих групп крыс в уровень фосфорилирования MYPT в базальных условиях высокий, причем это связано с активностью Rho-киназы. Базовая активность Rho-киназы позволяет взрослым крысам эффективно реализовывать Са2+-зависимый путь сокращения. В гладкой мышце новорожденных крыс Са" -зависимый путь сокращения не выражен, поэтому для обеспечения сокращения их сосудов необходима дополнительная активация Rho-киназы и еще большее увеличение степени фосфорилирования/ингибирования MYPT.

Подводя итог, можно сказать, что изменение активности Rho-киназы является основным механизмом регуляции сокращения подкожной артерии новорожденных крыс, тогда как у взрослых, кроме этого механизма, большую роль играют

Са2+ -зависимый путь сокращения и другие пути, способные ингибировать ФЛЦМ.

Следует отметить, что наряду с участием в регуляции сокращения, Rho-киназа важна для осуществления других, более длительных процессов в гладкой хмышце: она участвует в регуляции экспрессии генов, миграции и пролиферация клеток и др. (Loirand et al., 2006). На культуре гладкомышечных клеток аорты крысы с конститутивно активным RhoA белком было показано, что такие клетки в большей степени экспрессируют гены, ответственные за дифференцировку по мышечному типу (кодирующие гладкомышечные изоформы актина и миозина), а ингибирование Rho-киназы Y27632 сильно снижает уровень экспрессии этих генов и тормозит дифференцировку (Mack et al., 2001). Эти данные говорят о том, что Rho-киназа может регулировать не только сокращение гладкой мышцы сосудов, но ее развитие в онтогенезе.

Есть основание полагать, что механизмы регуляции тонуса сосудов у новорожденных и взрослых крыс, обнаруженные нами на примере подкожной артерии, реализуются и в других артериальных сосудах. Это подтверждается результатами, полученными в экспериментах in vivo (на целом животном) (Тарасова, 2010). В этих экспериментах обнаружено более выраженное влияние ингибиторов Rho-киназы на повышение артериального давления при активации агадренорецепторов у крыс в первые недели постнатального развития по сравнению со взрослыми. Таким образом, высокая активность Rho-киназы. характерная для сосудов новорожденных крыс, проявляется не только на уровне отдельного сосуда, но и на системном уровне и является важным механизмом регуляции гемодинамики в перинатальный период развития организма.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мочалов, Степан Вячеславович, 2010 год

1. Ашмарин И.П., Каменский A.A., Сухова Г.С. Руководство к практическим занятиям по физиологии человека и животных // М.: Изд-во МГУ 2004 - 256 с.

2. Воротников A.B. Крымский М.А. Ширинский В.П. Внутриклеточная сигнализация и фосфорилирование белков при сокращении гладких мышц I! Биохимия 2002. - Т.67; - С. 1587-1610.

3. Воротников A.B., Крымский, М.А. Хапчаев, А.Ю., Серебряная, Д.В. Сигнальные механизмы регуляции сократительной активности гладких мышц // Физиол. ж. им. ILM.Сеченова. 2004. - Т.90; - С.705-718.

4. Воротников A.B., Щербакова О.В., Кудряшова Т.В., Тарасова О.С., Ширинский В.П., Пфитцер Г., Ткачук В.А. Фосфорилирование миозина как основной путь регуляции сокращения гладких мышц // Физиол. ж. им. И.М. Сеченова 2009. - Т. 95; №10 - С.1058-1073.

5. Гусев Н.Б. Основы биохимии мышечных тканей в кн.: Мышечные ткани. Под ред. Ю.С. Ченцова. -.М.: Медицина 2001. - С. 176-226.

6. Костюк П.Г. Кальций и клеточная возбудимость. Наука - 1986. - 255 с.

7. Морман Д., Хеллер JL Физиология сердечно-сосудистой системы. СПб.: Питер - 2000. - 256 с.

8. Орбели J1.A. Избранные труды в пяти томах. Том второй: Адаптационно-трофическая функция нервной системы. M.-JL: Изд-во Академии наук СССР. - 1962.-606 с.

9. Пуздрова В.А. Трофическое влияние симпатической иннервации на кальциевую чувствительность сократительного аппарата подкожной артерии крысы — Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. 2007. - 132 с.

10. Тарасова Н.В. Снижение роли Rho-киназы в регуляции тонуса сосудов иартериального давления при созревании симпатической нервной системы у крыс — Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. 2010. - 178 с.

11. Хапчаев А.Ю., Ширинский В.П., Воротников А.В. Структура, свойства и регуляция белковых продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина // Успехи биологической химии 2003. - Т. 43; - С.365-420.

12. Akopov S.E., Zhang L., Pearce W.J. Physiological variations in ovine cerebrovascular calcium sensitivity // Am J Physiol 1997. - V. 272; №5 Pt 2 -P.H2271-2281.

13. Akopov S.E., Zhang L., Pearce W.J. Developmental changes in the calcium sensitivity of rabbit cranial arteries // Biol Neonate 1998a. - V. 74; №1 -P.60-71.

14. Akopov S.E. Zhang L. Pearce W.J. Maturation alters the contractile role of calcium in ovine basilar arteries // Pediatr Res 1998b. - V. 44; №2 - P. 154160.

15. Akopov S.E., Zhang L., Pearce W.J. Regulation of Ca2+ sensitization by PKC and rho proteins in ovine cerebral arteries: effects of artery size and age // Am J Physiol 1998c. - V. 275; №3 Pt 2 - P.H930-939.

16. Albert A.P., Large W.A. Signal transduction pathways and gating mechanisms of native TRP-like cation channels in vascular myocytes // J Physiol 2006. -V. 570; №Pt 1 - P.45-51.

17. Ark M., Kubat H., Beydagi H., Ergenoglu T., Songu-Mize E. Involvement of rho kinase in the ouabain-induced contractions of the rat renal arteries // Biochem Biophys Res Commun 2006. - V. 340; №2 - P.417-421.

18. Azam M.A., Yoshioka K., Ohkura S., Takuwa N., Sugimoto N., Sato K.,94

19. Takuwa Y. Ca -independent, inhibitory effects of cyclic adenosine 5-monophosphate on Ca2+ regulation of phosphoinositide 3-kinase C2alpha, Rho, and myosin phosphatase in vascular smooth muscle // J Pharmacol Exp Ther 2007. - V. 320; №2 - P.907-916.

20. Belevych A.E., Beck R., Tammaro P., Poston L., Smirnov S.V. Developmental changes in the functional characteristics and expression of voltage-gated K+ channel currents in rat aortic myocytes // Cardiovasc Res -2002,- V. 54; №1 P. 152-161.

21. Belik J., Kerc E., Pato M.D. Rat pulmonary arterial smooth muscle myosin light chain kinase and phosphatase activities decrease with age // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2006. - V. 290; №3 - P.L509-516.

22. Bevan R.D. Trophic effects of peripheral adrenergic nerves on vascular structure // Hypertension 1984. - V. 6; №6 Pt 2 - P.I1I19-26.

23. Blaustein M.P., Lederer W.J. Sodium/calcium exchange: its physiological implications // Physiol Rev 1999. - V. 79; №3 - P.763-854.

24. Blood A.B., Zhao Y., Long W., Zhang L., Longo L.D. L-type Ca channels in fetal and adult ovine cerebral arteries // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2002. - V. 282; №1 - P.R131-138.

25. Bregestovski P.D., Printseva O., Serebryakov V., Stinnakre J., Turmin A.,• 2+ + Zamoyski V. Comparison of Ca -dependent K channels in the membrane ofsmooth muscle cells isolated from adult and foetal human aorta // Pflugers

26. Arch 1988. - V. 413; №1 - P.8-13.

27. Brock J.A., Cunnane T.C. Studies on the mode of action of bretylium and guanethidine in post-ganglionic sympathetic nerve fibres // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 1988. - V. 338; №5 - P.504-509.

28. Bruce L., Nixon G.F. Increased sensitization of the myofilaments in rat neonatal portal vein: a potential mechanism // Exp Physiol 1997. - V. 82; №6- P.985-993.

29. Budzyn K., Paull M., Marlcy P.D., Sobey C.G. Segmental differences in the roles of rho-kinase and protein kinase C in mediating vasoconstriction // J Pharmacol Exp Ther 2006. - V. 317; №2 - P.791-796.

30. Bukoski R.D. Dietary Ca" and blood pressure: evidence that Ca -sensing receptor activated, sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca with vascular tone // Nephrol Dial Transplant 2001. - V. 16; №2 -P.218-221.

31. Burn J.H. Release of noradrenaline from sympathetic endings // Nature 1971.- V. 231; №5300 P.237-240.

32. Camello-Almaraz C., Macias B., Gomez-Pinilla P.J., Alcon S., Martin-Cano F.E., Baba A., Matsuda T., Camello P.J., Pozo M.J. Developmental changes in

33. Ca homeostasis and contractility in gallbladder smooth muscle // Am J Physiol Cell Physiol 2009. - V. 296; №4 - P.C783-791.

34. Chikumi H., Vazquez-Prado J., Servitja J.M., Miyazaki H., Gutkind J.S. Potent activation of RhoA by Galpha q and Gq-coupled receptors // J Biol Chem 2002. - V. 277; №30 - P.27130-27134.

35. Clapham D.E. TRP channels as cellular sensors // Nature 2003. - V. 426; №6966-P.517-524.

36. Cogolludo A., Moreno L., Lodi F., Tamargo J., Perez-Vizcaino F. Postnatal maturational shift from PKCzeta and voltage-gated K+ channels to RhoA/Rho kinase in pulmonary vasoconstriction // Cardiovasc Res 2005. - V. 66; №1 -P.84-93.

37. Colyer J. Phosphorylation states of pliospholamban // Ann N Y Acad Sci -1998.-V. 853; P.79-91.

38. Cosens D.J., Manning A. Abnormal electroretinogram from a Drosophila mutant // Nature 1969. - V. 224; №5216 - P.285-287.

39. Damon D.FI. Sympathetic innervation promotes vascular smooth muscle differentiation // Am J Physiol Heart Circ Physiol 2005. - V. 288; №6 -P.H2785-2791.

40. Davies S., Reddy H.,Caivano M., Cohen P. Specificity and mechanism of action of some commonly used protein kinase inhibitors // Biochem. J. 2000. -V. 351;-P.95-105.

41. De Mey J.G., Megens R., Fazzi G.E. Functional antagonism between endogenous neuropeptide Y and calcitonin gene-related peptide in mesenteric resistance arteries // J Pharmacol Exp Thcr 2008. - V. 324; №3 - P.930-937.

42. Devine C.E., Somlyo A.V., Somlyo A.P. Sarcoplasmic reticulum and excitation-contraction coupling in mammalian smooth muscles // J Cell Biol -1972.-V. 52; №3 P.690-718.

43. Dimopoulos G.J., Semba S., Kitazawa K., Eto M., Kitazawa T. Ca2+-dependent rapid Ca2+ sensitization of contraction in arterial smooth muscle // Circ Res 2007. - V. 100; №1 - P.121-129.

44. Ekman M., Andersson K.E., Arner A. Developmental regulation of nerve and receptor mediated contractions of mammalian urinary bladder smooth muscle //Eur J Pharmacol 2006. - V. 532; №1-2 - P.99-106.

45. Ekman M., Fagher K., Wede M., Stakeberg K., Arner A. Decreased phosphatase activity, increased Ca~ sensitivity, and myosin light chain phosphorylation in urinary bladder smooth muscle of newborn mice // J Gen Physiol 2005. - V. 125; №2 - P. 187-196.

46. Eto M., Ohmori T., Suzuki M., Furuya K., Morita F. A novel protein phosphatase-1 inhibitory protein potentiated by protein kinase C. Isolation from porcine aorta media and characterization // J Biochem 1995. - V. 118; №6-P.l 104-1107.

47. Eto M., Senba S. Morita F., Yazawa M. Molecular cloning of a novel phosphorylation-dependent inhibitory protein of protein phosphatase-1 (CPI17) in smooth muscle: its specific localization in smooth muscle // FEBS Lett 1997. - V. 410; №2-3 - P.356-360.

48. Evans A.M., Osipenko O.N., Haworth S.G., Gurney A.M. Resting potentials and potassium currents during development of pulmonary artery smooth muscle cells // Am J Physiol 1998. - V. 275; №3 Pt 2 - P.H887-899.

49. Fanaroff J.M., Fanaroff A.A. Blood pressure disorders in the neonate: hypotension and hypertension // Seminars in Fetal and Neonatal Medicine -2006.-V. 11; P.174-181.

50. Feng J., Ito M., Ichikawa K., Isaka N., Nishikawa M., Hartshorne D.J., Nakano T. Inhibitor}' phosphorylation site for Rho-associated kinase on smooth muscle myosin phosphatase // J Biol Chem 1999. - V. 274; №52 -P.37385-37390.

51. Fleischmann B.K., Murray R.K., Kotlikoff M.I. Voltage window for sustained elevation of cytosolic calcium in smooth muscle cells // Proc Natl Acad Sci U S A 1994. - V. 91; №25 - P. 11914-11918.

52. Fukuhara S., Chikumi FT., Gutkind J.S. RGS-containing RhoGEFs: the missing link between transforming G proteins and Rho? // Oncogene 2001. - V. 20; №13 - P.1661-1668.

53. Ghisdal P., Vandenberg G., Morel N. Rho-dependent kinase is involved in agonist-activated calcium entry in rat arteries // J Physiol 2003. - V. 551; №Pt 3 - P.855-867.

54. Gollasch M., Haase H. Ried C., Lindschau C„ Morano I., Luft F.C., Haller H. L-type calcium channel expression depends on the differentiated state of vascular smooth muscle cells // FASEB J 1998. - V. 12; №7 - P.593-601.

55. Gomez J.P., Ghisdal P., Morel N. Changes of the potassium currents in rat aortic smooth muscle cells during postnatal development // Pflugers Arch -2000. V. 441; №2-3 - P.388-397.

56. Greene E.C. Anatomy of the rat. Hafner Publishing Company, New York and London. - 1968.

57. Haase PL, Pfltzmaier B., McEnery M., Morano I. Expression of Ca~ channel subunits during cardiac ontogeny in mice and rats: identification of fetal aicand (3 subunit isoforms // Journal of Cellular Biochemistry 2000. - V. 76; -P.695-703

58. Haeusler G., Haefely W., Huerlimann A. On the mechanism of the adrenergic blocking action of bretylium and guanethidine // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmakol 1969. - V. 264; №3 - P.241-243.

59. Hart M.J., Jiang X., Kozasa T., Roscoe W. Singer W.D., Oilman A.G., Sternweis P.C., Bollag G. Direct stimulation of the guanine nucleotide exchange activity of pi 15 RhoGEF by Galphal3 // Science 1998. - V. 280; №5372 -P.2112-2114.

60. Hartshorne D.J. Myosin phosphatase: subunits and interactions // Acta Physiol Scand 1998. - V. 164; №4 - P.483-493.

61. Hartshorne D.J., Ito M., Erdodi F. Role of protein phosphatase type 1 in contractile functions: myosin phosphatase // J Biol Chem 2004. - V. 279; №36-P.37211-37214.

62. Hill C.E., Hirst G.D., van Helden D.F. Development of sympathetic innervation to proximal and distal arteries of the rat mesentery // J Physiol -1983. -V. 338; -P.129-147.

63. Hill C.E., Phillips J.K., Sandow S.L. Development of peripheral autonomic synapses: neurotransmitter receptors, neuroeffector associations and neural influences // Clin Exp Pharmacol Physiol 1999. - V. 26; №8 - P.581-590.24*

64. Hirano K. Current topics in the regulatory mechanism underlying the Ca sensitization of the contractile apparatus in vascular smooth muscle // J Pharmacol Sci 2007. - V. 104; №2 - P. 109-115.

65. Hirano K., Phan B.C., Hartshorne D.J. Interactions of the subunits of smooth muscle myosin phosphatase // J Biol Chem 1997. - V. 272; №6 - P.3683-3688.

66. Ito M., Nakano T., Erdodi F., Hartshorne D.J. Myosin phosphatase: structure, regulation and function // Mol Cell Biochem 2004. - V. 259; №1-2 - P. 197209.

67. Jaggar J.H., Porter V.A., Lederer W.J., Nelson M.T. Calcium sparks in smooth muscle // Am J Physiol Cell Physiol 2000. - V. 278; №2 - P.C235-256.

68. Janssen L.J., Lu-Chao H. Netherton S. Excitation-contraction coupling in pulmonary vascular smooth muscle involves tyrosine kinase and Rho kinase // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2001. - V. 280; №4 - P.L666-674.

69. Jarajapu Y.P. Knot H.T. Role of phospholipase C in development of myogenic tone in rat posterior cerebral arteries // Am J Physiol Heart Circ Physiol -2002. V. 283; №6 - P.H2234-2238.

70. Jarajapu Y.P., Knot H.J. Relative contribution of Rho kinase and protein kinase C to myogenic tone in rat cerebral arteries in hypertension // Am J Physiol Heart Circ Physiol 2005. - V. 289; №5 - P.H1917-1922.

71. Jensen P.E., Mulvany M.J., Aalkjaer C. Endogenous and exogenous agonist-induced changes in the coupling between Ca2+.j and force in rat resistance arteries // Pflugers Arch 1992. - V. 420; №5-6 - P.536-543.

72. Jernigan N., Walker B.,Resta T. Reactive oxygen species mediate RhoA/Rho kinase-induced Ca" sensitization in pulmonary vascular smooth muscle following chronic hypoxia // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2008. -V.295; - P.L515-L529.

73. Jin L.M. Rock 'n' Rho: regulation of ion channels // Am J Physiol Heart Circ Physiol 2009. - V. 296; №4 - P.H908-909.

74. Johansson S., Iliadou A., Bergvall N., Tuvemo T., Norman M., Cnattingius S. Risk of high blood pressure among young men increases with the degree of immaturity at birth // CJ Am J Physiol Heart Circ Physiol 2005 - V. 112: -P.3430-3436.

75. Kasparov S., Paton J.F. Changes in baroreceptor vagal reflex performance in the developing rat // Pflugers Arch 1997. - V. 434; №4 - P.438-444.

76. Khan I., Sandhu V., Misquitta C.M., Grover A.K. SERCA pump isoform expression in endothelium of veins and arteries: every endothelium is not the same // Mol Cell Biochem 2000. - V. 203; №1-2 - P.ll-15.

77. Kitazawa T., Eto M., Woodsome T.P., Khalequzzaman M. Phosphorylation of the myosin phosphatase targeting subunit and CPI-17 during Ca" sensitization in rabbit smooth muscle // J Physiol 2003. - V. 546; №Pt 3 - P.879-889.

78. Kitazawa T., Takizawa N., Ikebe M., Eto M. Reconstitution of protein kinase C-induced contractile Ca~ sensitization in triton X-100-demembranated rabbit arterial smooth muscle // J Physiol 1999. - V. 520 Pt 1; - P.139-152.

79. Knok G., Snetkov V. Shaifta Y„ Drndarski S„ Ward J., Aaronson P. Role of src-family kinases in hypoxic vasoconstriction of rat pulmonary artery // Cardiovascular Research 2008. V.80; - P.453-462.

80. Knot H.J. Nelson M.T. Regulation of arterial diameter and wall Ca2+. in cerebral arteries of rat by membrane potential and intravascular pressure // J Physiol 1998. - V. 508 ( Pt 1); - P. 199-209.

81. Koyama M., Ito M., Feng J., Seko T., Shiraki K., Takase K., Hartshome D.J., Nakano T. Phosphorylation of CPI-17, an inhibitory phosphoprotein of smooth muscle myosin phosphatase, by Rho-kinase // FEBS Lett 2000. - V. 475; №3 - P.197-200.

82. Kozasa T., Jiang X., Hart M.J., Sternweis P.M., Singer W.D., Gilman A.G., Bollag G., Sternweis P.C. pi 15 RiioGEF, a GTPase activating protein for Galphal2 and Galphal3 // Science 1998. - V. 280; №5372 - P.2109-2111.

83. Laufs U., Liao J. Post-transcriptional Regulation of Endothelial Nitric Oxide Synthase mRNA Stability by Rho GTPase // J Biol Chem 1998. - V. 273; №37 - P.24266-24271.

84. Li S., Moon J., Miao H„ Jin G., Chen B., Yuan S., Hu Y., Usami S„ Chien S. Signal transduction in matrix contraction and the migration of vascular smooth muscle cells in three-dimensional matrix // J Vase Res 2003. - V.40; -P.378-388.

85. Lin M.T., Hessinger D.A., Pearce W.J. Longo L.D. Developmental differences in Ca~ -activated K channel activity in ovine basilar artery // Am J PhysiofHeart Circ Physiol 2003. - V. 285; №2 - P.H701-709.

86. Loirand G., Guerin P., Pacaud P. Rho kinases in cardiovascular physiology and pathophysiology // Circ Res 2006. - V. 98; - P.322-334.

87. Long W., Zhang L., Longo L.D. Cerebral artery sarcoplasmic reticulum Ca stores and contractility: changes with development // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2000. - V. 279; №3 - P.R860-873.

88. Long W., Zhao Y., Zhang L., Longo L.D. Role of Ca2+ channels in NE9.Jinduced increase in Ca and tension in fetal and adult cerebral arteries // Am J Physiol 1999. - V. 277; №1 Pt 2 - P.R286-294.

89. Luff S.E. Development of neuromuscular junctions on small mesenteric arteries of the rat // J Neurocytol 1999. - V. 28; №1 - P.47-62.

90. MacDonald J.A., Borman M.A., Muranyi A., Somlyo A.V., Hartshorne D.J., Haystead T.A. Identification of the endogenous smooth muscle myosin phosphatase-associated kinase // Proc Natl Acad Sci U S A 2001. - V. 98; №5 -P.2419-2424.

91. Mack C., Somlyo A., Hautmann M., Somlyo A., Owens G. Smooth muscle differentiation marker gene expression is regulated by RhoA-mediated actin polymerization // J Biol Chem 2001. - V. 276; №1 - P.341-347.

92. Maguire J.J., Davenport A.P. Regulation of vascular reactivity by established and emerging GPCRs // Trends Pharmacol Sci 2005. - V. 26; №9 - P.448-454.

93. McFadzean I., Gibson A. The developing relationship between receptor-operated and store-operated calcium channels in smooth muscle // Br J Pharmacol 2002. - V. 135; №1 - P.l-13.

94. Mills E., Smith P.G. Mechanisms of adrenergic control of blood pressure in developing rats // Am J Physiol 1986. - V. 250; №2 Pt 2 - P.R188-192.

95. Mita M., Yanagihara H., Hishinuma S„ Saito M., Walsh M.P. Membrane depolarization-induced contraction of rat caudal arterial smooth muscle involves Rho-associated kinase // Biochem J 2002. - V. 364; №Pt 2 - P.431-440.

96. Mizuno Y., Isotani E., Huang J., Ding H., Stull J.T., Kamm K.E. Myosin light chain kinase activation and calcium sensitization in smooth muscle in vivo // Am J Physiol Cell Physiol 2008. - V. 295; №2 - P.C358-364.

97. Mueed I., Bains P., Zhang L., Macleod K.M. Differential participation of protein kinase C and Rho kinase in alpha 1 -adrenoceptor mediated contraction in rat arteries // Can J Physiol Pharmacol 2004. - V. 82; №10 - P.895-902.

98. Mukai Y., Shimokawa H. Matoba T., Kandabashi T., Satoh S., Hiroki J., Kaibuchi K., Takeshita A. Involvement of Rho-kinase in hypertensive vascular disease: a novel therapeutic target in hypertension // FASEB J 2001. - V. 15; №6-P. 1062-1064.

99. Mulvany M.J., Halpern W. Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats // Circ Res -1977.-V. 41; №1 -P.19-26.

100. Nakanishi T., Gu H. Abe K., Momma K. Developmental changes in the contractile system of the mesenteric small artery of rabbit // Pediatr Res -1997. V. 41; №1 -P.65-71.

101. Nelson M.T., Patlak J.B., Worley J.F., Standen N.B. Calcium channels, potassium channels, and voltage dependence of arterial smooth muscle tone // Am J Physiol 1990. - V. 259; №1 Pt 1 - P.C3-18.

102. Nelson M.T., Standen N.B., Brayden J.E., Worley J.F., 3rd Noradrenaline contracts arteries by activating voltage-dependent calcium channels // Nature -1988. V. 336; №6197 - P.382-385.

103. Nelson M.T., Worley J.F. Dihydropyridine inhibition of single calcium channels and contraction in rabbit mesenteric artery depends on voltage // J Physiol 1989. - V. 412; - P.65-91.

104. Nilius B., Droogmans G. Ion Channels and Their Functional Role in Vascular Endothelium // Physiological Reviews 2001. - V. 81; - P. 1415-1459.

105. Nilsson H. Adrenergic nervous control of resistance and capacitance vessels. Studies on isolated blood vessels from the rat // Acta Physiol Scand Suppl -1985.-V. 541; P.1-34.

106. Nilsson H., Sjoblom N. Distension-dependent changes in noradrenaline sensitivity in small arteries from the rat // Acta Physiol Scand 1985. - V. 125; №3 - P.429-435.

107. Nishizuka Y. The molecular heterogeneity of protein kinase C and its implications lor cellular regulation // Nature 1988. - V. 334; №6184 - P.661-665.

108. Nixon G.F., Iizuka K., Haystead C.M., Haystead T.A., Somlyo A.P., Somlyo A.V. Phosphorylation of caldesmon by mitogen-activated protein kinase with no effect on Ca2+ sensitivity in rabbit smooth musclc // J Physiol 1995. - V. 487 (Pt 2); - P.283-289.

109. Nobe K., Paul R.J. Distinct pathways of Ca2+ sensitization in porcine coronary artery: effects of Rho-related kinase and protein kinase C inhibition on force and intracellular Ca2+ // Circ Res 2001. - V. 88; №12 - P.1283-1290.

110. Noma K., Oyama N., Liao J.K. Physiological role of ROCKs in the cardiovascular system // Am J Physiol Cell Physiol 2006. - V. 290; №3 -P.C661-668.

111. Osol G., Laher I., Kelley M. Myogenic tone is coupled to phospholipase C and G protein activation in small cerebral arteries // Am J Physiol 1993. - V. 265; №1 Pt 2-P.H415-420.

112. Parekh A.B., Putney J.W., Jr. Store-operated calcium channels // Physiol Rev -2005.-V. 85; №2 P.757-810.

113. Patel C.A., Rattan S. Spontaneously tonic smooth muscle-has characteristically higher levels of RhoA/ROK compared with the phasic smooth muscle // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2006. - V. 291; №5 - P.G830-837.

114. Payne M.C., Zhang H.Y., Prosdocimo T., Joyce K.M., Koga Y., Ikebe M., Fisher S.A. Myosin phosphatase isoform switching in vascular smooth muscle development // J Mol Cell Cardiol 2006. - V. 40; №2 - P.274-282.

115. Perez G.J., Bonev A.D., Nelson M.T. Micromolar Ca2+ from sparks activates Ca2+ -sensitive K channels in rat cerebral artery smooth muscle // Am J Physiol Cell Physiol 2001. - V. 281; №6 - P.C1769-1775.

116. Quignard J.F., Grazzini E., Guillon G., Harricane M.C., Nargeot J., Richard S. Absence of calcium channels in neonatal rat aortic myocytes // Pflugers Arch -1996. V. 431; №5 - P.791-793.

117. Ramsey I.S. Delling M., Clapham D.E. An introduction to TRP channels // Annu Rev Physiol 2006. - V. 68; - P.619-647.

118. Ratz P.H., Berg K.M., Urban N.H., Miner A.S. Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KC1 as a calcium-sensitizing stimulus // Am J Physiol Cell Physiol 2005. - V. 288; №4 - P.C769-783.

119. Redwood C.S., Marston S.B., Gusev N.B. The functional effects of mutations Thr673~>Asp and Ser702—>Asp at the Pro-directed kinase phosphorylation sites in the C-terminus of chicken gizzard caldesmon // FEBS Lett 1-993. - V. 327; №1 - P.85-89.

120. Reeve H.L., Weir E.K., Archer S.L., Cornfield D.N. A maturational shift in4. 94pulmonary K channels, from Ca sensitive to voltage dependent // Am J Physiol 1998.-V. 275; №6 Pt 1 - P.L1019-1025.

121. Sakurada S., Takuwa N., Sugimoto N. Wang Y., Seto M., Sasaki Y., Takuwa94

122. Y. Ca -dependent activation of Rho and Rho kinase in membrane depolarization-induced and receptor stimulation-induced vascular smooth muscle contraction // Circ Res 2003. - V. 93; №6 - P.548-556.

123. Salamanca D.A., Khalil R.A. Protein kinase C isoforms as specific targets for modulation of vascular smooth muscle function in hypertension // Biochem Pharmacol 2005. - V. 70; №11 - P.1537-1547.

124. Sandow S.L., Goto K., Rummery N.M., Hill C.E. Developmental changes in myoendothelial gap junction mediated vasodilator activity in the rat saphenous artery // J Physiol 2004. - V. 556; №Pt 3 - P.875-886.

125. Sandow S.L., Hill C.E. Physiological and anatomical studies of the development of the sympathetic innervation to rat iris arterioles // J Auton Nerv Syst 1999. - V. 77; №2-3 - P. 152-163.

126. Seasholtz T.M., Majumdar M., Brown J.H. Rho as a mediator of G proteincoupled receptor signaling // Mol Pharmacol 1999. - V. 55; №6 - P.949-956.

127. Shabir S., Borisova L., Wray S.s Burdyga T. Rho-kinase inhibition and• 9 4electromechanical coupling m rat and guinea-pig ureter smooth muscle: С a" -dependent and -independent mechanisms // J Physiol 2004. - V. 560.; №Pt 3 -P.839-855.

128. Sigma-RBl eHandbook. Электронный ресурс. Систем, требования: Adobe Acrobat Reader. URL: http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/ Sigma/RBIHandbook/rbibook5pkc.Par.0001 .File.tmp/rbibook5pkc.pdf (дата обращения: 27.04.2010)

129. Somlyo A.P., Somlyo A.V. Signal transduction by G-proteins, rho-kinase and protein phosphatase to smooth muscle and non-muscle myosin II // J Physiol -2000.-V. 522 Pt 2; P.177-185.

130. Somlyo A.P., Somlyo A.V. Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase // Physiol Rev-2003. -V. 83; №4 P.1325-1358.

131. Strehler E.E., Zacharias D.A. Role of alternative splicing in generating isoform diversity among plasma membrane calcium pumps // Physiol Rev -2001.- V. 81; №1 -P.21-50.

132. Su B.Y. Reber K.M., Nankervis C.A., Nowicki P.T. Development of the myogenic response in postnatal intestine: role of PKC // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2003. - V. 284; №3 - P.G445-452.

133. Takai Y., Sasaki T., Matozaki T. Small GTP-binding proteins // Physiol Rev -2001. -V. 81; №1 P.153-208.

134. Takashima S. Phosphorylation of myosin regulatory light chain by myosin light chain kinase, and muscle contraction // Circ J 2009. - V. 73; №2 -P.208-213.

135. Biological motility: basic research and practice. Pushino. - 2006. - V. - P.2.

136. Thomeloe K.S., Nelson M.T. Ion channels in smooth muscle: regulators of intracellular calcium and contractility // Can J Physiol Pharmacol 2005. - V. 83; №3 -P.215-242.

137. Todd M.E. Development of adrenergic innervation in rat peripheral vessels: a fluorescence microscopic study // J Anat 1980. - V. 131; №Pt 1 - P.121-133.

138. Toh C.C., Lee T.S., Kiang A.K. The pharmacological actions of capsaicin and analogues // Br J Pharmacol Chemother 1955. - V. 10; №2 - P. 175-182.

139. Trendelenburg U., Maxwell R.A., Pluchino S. Methoxamine as a tool to assess the importance of intraneuronal. uptake of 1-norepinephrine in the cat's nictitating membrane // J Pharmacol Exp Ther 1970. - V. 172; №1 - P.91-99.

140. Tribe R.M., Moriarty P., Poston L. Calcium homcostatic pathways change with gestation in human myometrium // Biol Reprod 2000. - V. 63; №3 -P.748-755.

141. Varma D.R., Deng X.F. Cardiovascular alpha 1-adrenoceptor subtypes: functions and signaling // Can J Physiol Pharmacol 2000. - V. 78; №4 -P.267-292.

142. Yelasco G., Armstrong C., Morrice N., Frame S., Cohen P. Phosphorylation of the regulatory subunit of smooth muscle protein phosphatase 1M at Thr850 induces its dissociation from myosin // FEBS Lett 2002. - V. 527; №1-3 -P.101-104.

143. Villalba N., Stankevicius E., Simonsen U., Prieto D. Rho kinase is involved in Caentry of rat penile small arteries // Am J Physiol Heart Circ Physiol -2008. V. 294; №4 - P.H1923-1932.

144. Vogt S., Grosse R., Schultz G., Offermanns S. Receptor-dependent RhoA activation in G12/G13-deficient cells: genetic evidence for an involvement of Gq/Gu // J Biol Chcm 2003. - V. 278; №31 - P.28743-28749.

145. Wang J., Weigand L., Foxson J., Shimoda L.A., Sylvester J.T. Ca signaling in hypoxic pulmonary vasoconstriction: effects of myosin light chain and Rho kinase antagonists // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2007. - V. 293; №3 - P.L674-685.

146. Wettschureck N., Offermanns S. Rho/Rho-kinase mediated signaling in physiology and pathophysiology // J Mol Med 2002. - V. 80; №10 - P.629-638.

147. Williams D.A., Fay F.S. Calcium transients and resting levels in isolated smooth muscle cells as monitored with quin 2 // Am J Physiol 1986. - V. 250; №5 Pt 1 -P.C779-791.

148. Woodsome T.P., Eto M. Everett A., Brautigan D.L., Kitazawa T. Expression of CPI-17 and myosin phosphatase correlates with Car sensitivity of protein kinase C-induced contraction in rabbit smooth muscle // J Physiol 2001. - V. 535; №Pt 2 - P.553-564.

149. Wu K.D., Bungard D., Lytton J. Regulation of SERCA Ca2+ pump expression by cytoplasmic Ca" in vascular smooth muscle cells // Am J Physiol Cell Physiol 2001. - V. 280; №4 - P.C843-851.

150. Xiao D., Longo L.D., Zhang L. Alpha 1-adrenoceptor-mediated phosphorylation of MYPT-1 and CPI-17 in the uterine artery: role of ERK/PKC // Am J Physiol Heart Circ Physiol 2005. - V. 288; №6 - P.H2828-2835.

151. Yamboliev I.A., Hedges J.C., Mutnick J.L., Adam L.P., Gerthoffer W.T. Evidence for modulation of smooth muscle force by the p38 MAP kinase/HSP27 pathway // Am J Physiol Heart Circ Physiol 2000.- V. 278; №6-P.H 1899-1907.

152. Yanagisawa T., Okada Y. KC1 depolarization increases Ca sensitivity of contractile elements in coronary arterial smooth muscle // Am J Physiol -1994. V. 267; №2 Pt 2 - P.H614-621.

153. Yatani A., Irie K., Otani T., Abdellatif M., Wei L. RhoA GTPase regulates L-type Ca currents in cardiac myocytes // Am J Physiol Heart Circ Physiol -2005. V. 288; №2 - P.H650-659.

154. Yu S.M., Tsai S.Y., Guh J.H., Ko F.N., Teng C.M., Ou J.T. Mechanism of catecholamine-induced proliferation of vascular smooth musclc cells // Circulation 1996. - V. 94; №3 - P.547-554.

155. Zemlickova E., Johannes F.J. Aitken A., Dubois T. Association of CPI-17 with protein kinase C and casein kinase I // Biochem Biophys Res Commun -2004. -V. 316; №1 P.39-47.

156. Zoer B., Blanco C.E. Villamor E. Role of Rho-kinase in mediating contraction of chicken embryo femoral arteries // J Comp Physiol B 2010. -V. 180; №3 - P.427-435.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.