Синтез и противовирусная активность новых производных 1-(арилоксиалкил)урацила тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Тимофеева, Юлия Александровна

• Тимофеева, Юлия Александровна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Тимофеева, Юлия Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ИНГИБИТОРЫ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПТАЗЫ ВИЧ-1 -

ОСНОВА СОВРЕМЕННОЙ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Жизненный цикл ВИЧ-1 и основные мишени для химиотерапевти-ческого воздействия

1.2 Лекарственные средства, применяемые в лечении ВИЧ-1 инфекции

1.2.1 Нуклеозидные ингибиторы репродукции ВИЧ-1

1.2.2 Ненуклеозидные ингибиторы репродукции ВИЧ-1

1.3 Выводы по обзору литературы

ГЛАВА 2 СИНТЕЗ НОВЫХ 1-(АРИЛОКСИАЛКИЛ)ПРОИЗВОДНЫХ

УРАЦИЛА

2.1 Получение 1-(2-феноксиэтил)производных урацила

2.2 Получение 1-(2-феноксиэтил)-3-бензилпроизводных урацила

2.3 Получение 1-(2-бензилоксиэтил)- и 1-(3-феноксипропил)-производных урацила

2.4 Получение 1-[(2-феноксиэтокси)метил]производных урацила

2.5 Получение 1-[(2-бензилоксиэтокси)метил]- и 1-[(3-бензилокси-пропокси)метил]производных урацила

2.6 Получение 1-[(2-бензилоксиэтоксикарбонил)метил]производных урацила

2.7 Выводы по главе 2

ГЛАВА 3 'НЯМР-СПЕКТРОСКОПИЯ 1-(АРИЛОКСИАЛКИЛ)-

ПРОИЗВОДНЫХ УРАЦИЛА

3.1 Спектральные характеристики 1-(арилоксиалкил)производных

урацила

3.2 Выводы по главе 3

ГЛАВА 4 ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ 1-(АРИЛОКСИ-

АЛКИЛ)ПРОИЗВОДНЫХ УРАЦИЛА

4.1 Методы исследования

4.2 Экспериментальное исследование активности 1-(арилоксиалкил)-урацилов в отношении ВИЧ-1 in vitro

4.3 Вычислительный прогноз фармакологических свойств, метаболизма и токсичности 1-[2-(4-метилбензилокси)этоксиметил]-5-бром-6-метилурацила

4.4 Выводы по главе 4

ГЛАВА 5 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез и противовирусная активность новых производных 1-(арилоксиалкил)урацила»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Органические соединения гетероциклической природы составляют в настоящее время около 70% всех применяемых в клинике лекарственных средств. Наиболее широко используются препараты, содержащие в своей структуре азотсодержащие гетероциклические системы. Особое место среди них занимают лекарственные средства, созданные на основе пиримидиновых нуклеиновых оснований и обладающие широким спектром фармакологической активности, включающим психотропные, сердечно-сосудистые, иммуномодулирующие, противоопухолевые,

антибактериальные и, конечно же, противовирусные эффекты. Во многом именно с развитием химии и фармакологии соединений пиримидиновой природы связан наблюдающийся в последние десятилетия значительный прогресс в области химиотерапии вирусных инфекций [52]. Однако широко распространенные и особо опасные инфекционные заболевания вирусной этиологии (СПИД, вирусные гепатиты, герпесвирусные инфекции) до сих пор представляют серьезную проблему современного здравоохранения [55, 61]. В этой связи направленный поиск новых высокоэффективных ингибиторов вирусной репродукции остается одной их самых актуальных задач современной фармации. Значительный интерес в плане создания новых противовирусных средств, применяемых в терапии таких заболеваний, как инфекция вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), представляют соединения, содержащие в своем составе урацил -пиримидиновое основание, входящий в состав нуклеиновых кислот.

Степень разработанности темы. Последние достижения фармацевтической и медицинской химии в области поиска высокоэффективных антивирусных агентов пиримидиновой природы, связанные с успешным завершением доклинических и клинических испытаний целого ряда оригинальных антивирусных лекарственных средств, свидетельствуют о том,

что развитие пиримидинового направления может способствовать эффективному контролю и лечению инфекционных вирусных заболеваний [54, 60, 70]. Многие из высокоактивных в отношении ВИЧ-1 соединений имеют именно пиримидиновую природу и широко используются в клинической практике в качестве ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ-1. Однако химическая структура этих соединений не оптимизирована, не решены проблемы, связанные с необходимостью преодоления лекарственной резистентности, возникающей при длительном использовании препаратов, некоторые из них имеют неудовлетворительные фармакокинетические характеристики и вызывают ряд побочных эффектов. В связи с этим направленный поиск новых высокоселективных ингибиторов репродукции ВИЧ-1 остается актуальной проблемой фармации.

Целью работы является синтез новых потенциальных ненуклеозидных ингибиторов вирусной репродукции на основе функциональных производных 1 -[(арилокси)алкил]урацила.

Достижение указанной цели потребовало решения следующих задач:

1. Разработать эффективные методы М-алкилирования урацила и его производных низкореакционноспособными алкилирующими агентами в условиях силильного варианта реакции Гилберта-Джонсона.

2. Изучить особенности алкилирования 2,4-бис(триметилсилилокси)-пиримидинов эфирами бромуксусной кислоты.

3. Исследовать физико-химические и спектральные свойства синтезированных соединений.

4. Определить основные качественные соотношения структура противовирусная активность в ряду новых производных 1-[(арилокси)алкил]-урацила.

5. Выявить соединения-лидеры для дальнейшей структурной модификации с целью создания на их основе перспективных лекарственных средств для профилактики и лечения ВИЧ-1 инфекции.

Научная новизна. Впервые показана возможность региоселективного ТЧ'-алкилирования 2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидинов низкореакционно-способными феноксиалкилбромидами без растворителя при температуре 180190 °С.

Обнаружено, что алкилирование 2,4-бис(триметилсилилокси)-пиримидинов 2-бензилоксиэтиловыми эфирами бромуксусной кислоты легко протекает в положение N1 при кипячении эквимолярной смеси реагентов в безводном 1,2-дихлорэтане.

Выявлены основные особенности соотношения структура -противовирусная активность в ряду новых N1-замещенных производных урацила, связывающие химическое строение боковой цепи со способностью веществ подавлять репликацию ВИЧ-1 in vitro.

Показано, что наиболее перспективным направлением поиска новых противовирусных агентов является синтез замещенных в ароматическом ядре производных 1-[(2-бензилоксиэтокси)метил]урацила, обладающих выраженной анти-ВИЧ-1 активностью in vitro в микромолярном диапазоне концентраций.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость. Осуществлен синтез 117 новых производных 1-[(арилокси)алкил]урацила, обладающих выраженной анти-ВИЧ-1 активностью in vitro. Выявлены основные закономерности, связывающие химическое строение боковой цепи и природу заместителей в пиримидиновом ядре со способностью веществ подавлять репродукцию ВИЧ-1 и их цитотоксическим действием. Выявлены соединения-лидеры и определены направления их дальнейшей химической модификации с целью создания высокоэффективных антиретровирусных лекарственных веществ.

Практическая значимость. Разработаны усовершенствованные препаративные методики региоселективного N1 -алкилирования урацила и его производных замещенными феноксиалкилбромидами, а-хлорэфирами и

эфирами бромуксусной кислоты, значительно расширен круг алкилирующих агентов для силильного варианта реакции Гилберта-Джонсона.

На основании результатов составлено информационное письмо «Синтез и противовирусная активность новых производных 1-(арилоксалкил)урацила», материалы которого использованы в учебном и научно-исследовательском процессах на кафедре химии и общей химической технологии Волжского политехнического института (филиала ФБОУ ВПО «Волгоградский государственный технический университет» Министерства образования и науки Российской Федерации) (акт внедрения от 14.05.13) и лаборатории лекарственной безопасности ФГУП «Научно-исследовательский институт гигиены, токсикологии и профпатологии» ФМБА России (акт внедрения от 17.09.13).

Методология и методы исследования. На основании анализа литературных данных о строении и фармакологических свойствах соединений пиримидиновой природы была разработана общая концепция синтеза базовых соединений ряда 1-(арилоксиалкил)урацила и их дальнейшей направленной химической модификации с целью усиления противовирусного действия. Для первичной оценки токсических свойств и возможных побочных фармакологических эффектов соединений-лидеров были использованы с современные компьютерные технологии. При осуществлении синтеза новых соединений были использованы эффективные методы очистки и разделения сложных смесей, основанные на аналитической и препаративной хроматографии. Для доказательства строения полученных веществ применяли актуальные спектральные методы - ЯМР спектроскопию !Н и 13С и масс-спектрометрию.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Алкилирование 2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидинов такими низкореакционноспособными алкилирующими агентами, как 1-бром-2-(фенокси)этан, 1-бром-2-(бензилокси)этан и 1-бром-3-(фенокси)пропан, с

высоким выходом и селективно протекает в положение N1 в отсутствие растворителя при температуре 180-190 °С и не затрагивает положение N3 пиримидиновой системы. Наличие заместителя в положении 6 значительно снижает выход целевых продуктов N'-алкилирования.

2. Взаимодействие 2-бензилоксиэтиловых эфиров бромуксусной кислоты с 2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидинами, не содержащими заместителей в положении 6, протекает в мягких условиях в инертном апротонном растворителе и приводит исключительно к продуктам N1-монозамещения. Наличие заместителя в положении 6 пиримидиновой системы препятствует N1-алкилированию.

3. Новые производные 1-[(арилокси)алкил]урацила демонстрируют, в зависимости от химического строения боковой цепи, выраженную способность подавлять репликацию ВИЧ-1 in vitro в микро- и наномолярном диапазоне концентраций и могут служить основой для дальнейшего направленного поиска эффективных анти-ВИЧ-1 агентов ненуклеозидной природы.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов исследования определяется выбором современных методов идентификации вновь синтезированных соединений на основе ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, чистота и индивидуальность новых веществ подтверждена хроматографически. Результаты противовирусного скрининга in vitro получены в научных центрах мирового уровня (Rega Institute for Medical Research, Бельгия и Therlmmun Inc., Мэриленд, США) аккредитованных в соответствии со стандартами надлежащей лабораторной практики (GLP). Результаты определения эффективных и цитотоксических концентраций исследуемых соединений обработаны методами математической статистики и являются достоверными.

Основные фрагменты диссертационной работы докладывались и обсуждались на Международной конференции «Естествознание на рубеже столетий» (Дагомыс, 2001 г.), VII, VIII, IX региональной конференции молодых

исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2002-2004 г.), 62-ой открытой итоговой научной конференции студентов и молодых ученых ВолгГМУ «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 2004 г.), Международной научной конференции РАЕ «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Дубай, 2012 г.). По материалам диссертации опубликовано 14 статей и тезисы 5 научных докладов, в том числе 9 статей в журналах перечня ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав, заключения и списка использованной литературы. Работа изложена на 118 страницах компьютерного набора, содержит 14 таблиц, 21 рисунок, 107 литературных ссылок, в том числе 41 на русском языке.

ГЛАВА 1 ИНГИБИТОРЫ ОБРАТНОЙ ТРАНСКИПТАЗЫ ВИЧ-1 -ОСНОВА СОВРЕМЕННОЙ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Жизненный цикл ВИЧ-1 и основные мишени для химиотерапевтического воздействия

Синдром приобретенного иммунного дефицита (СПИД), впервые описанный в 1981 году в США [83], захватывает все новые страны и континенты. Существует мнение, что в настоящее время все человечество в целом может рассматриваться как группа риска по СПИД. Заболевание характеризуется длительным бессимптомным, но высокоинфекционным инкубационным периодом (5 лет и более) и полной потерей иммунитета, что приводит к неизбежному летальному исходу от оппортунистических инфекций.

Со времени открытия СПИД развился в мировую пандемию. В настоящее время в мире живет 33,4 миллиона ВИЧ-инфицированных. Всего за последние 30 лет «чумой XX века» заразились около 60 миллионов человек. Почти половина из них умерли. Согласно прогнозам ВОЗ, до 2020 года только в Африке от СПИД погибнут 55 миллионов человек. По данным Федерального научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИД, по состоянию на 18 мая 2012 года в России было зарегистрировано 664976 ВИЧ-инфицированных. Только за первые 3 месяца 2012 года было выявлено 14876 новых случаев ВИЧ-инфекции, а всего за время наблюдения в России от СПИД и оппортунистических инфекций погибло более 85 тысяч человек.

СПИД - это тяжелейшая экономическая проблема, связанная с содержанием и лечением больных и инфицированных, разработкой и производством диагностических и лечебных препаратов, проведением фундаментальных научных исследований. СПИД - генерализованное

инфекционное заболевание, характеризующееся тяжелым дефектом клеточного иммунитета с предрасположением к так называемым оппортунистическим инфекциям и некоторым опухолям у ранее здоровых людей. В патогенезе СПИД решающее значение имеет избирательное цитопатическое воздействие вируса СПИД на Т-лимфоциты-хелперы-индукторы, что проявляется в снижении противовирусного, противомикробного и противоопухолевого иммунитета [53].

Вирион ВИЧ имеет сферическую форму диаметром 100-150 нм. Наружная оболочка вируса состоит из бимолекулярного слоя липидов, который имеет происхождение из клеточной мембраны клетки хозяина. В эту мембрану встроены рецепторные образования четырех молекул гликопротеида £р120. Каждая молекула РНК содержит 9 генов ВИЧ. Три из них являются структурными, три - регуляторными и три дополнительными. Эти гены содержат информацию, необходимую для продукции белков, которые управляют способностью вируса инфицировать клетку, реплицироваться и вызывать заболевание. Концы каждой молекулы РНК содержат дублированную последовательность РНК. Кроме РНК, вирус содержит вирусные ферменты: обратную транскриптазу (ревертазу), протеазу, эндонуклеазу (интегразу). Обратная транскриптаза осуществляет синтез вирусной ДНК по матрице вирусной РНК. Эндонуклеаза производит встраивание вирусной ДНК в геном клетки хозяина, в результате чего образуется провирус. Протеаза участвует в «нарезании» предшественников вирусных белков при созревании новой вирусной частицы. Процесс транскрипции генома ВИЧ протекает в тысячу раз быстрее, чем у клеточных генов, что в значительной степени объясняет поразительную скорость размножения ВИЧ [81].

ВИЧ и родственные лентивирусы имеют репликативный цикл, характерный для всех ретровирусов. В репликативном цикле ВИЧ можно выделить несколько главных этапов:

• узнавание рецепторов клеток-мишеней, прикрепление к ним, слияние вириона с клеткой и депротеинизация;

• обратная транскрипция и интегрирование вирусного генома в ДНК клетки-хозяина;

• экспрессия вирусного генома;

• созревание, самосборка и отпочковывание вирионов.

Мишенями ВИЧ являются клетки, содержащие на клеточной мембране клеточный антиген С04. Вирус узнает клеточный антиген при помощи вирусного гликопротеина gpl20 и прикрепляется к нему. Стадией, следующей непосредственно за прикреплением, является слияние, которое зависит от вирусного гликопротеина gp41. Этот гликопротеин как бы «протыкает» клеточную мембрану, мембраны клетки и вириона становятся общими и, таким образом, вирусный капсид оказывается внутри клетки. После проникновения в клетку вирус претерпевает частичную депротеинизацию в цитоплазме и при этом высвобождается вирусная РНК, которая в дальнейшем выступает в качестве матрицы. Под действием обратной транскриптазы на ее основе вначале синтезируется РНК-ДНК гибридный интермедиат, в котором РНК под действием той же обратной транскриптазы деградирует, и синтезируется вторая цепь вирусной ДНК, которая транслоцируется в ядро клетки и под действием вирусного фермента - интегразы сливается с клеточной ДНК. Последующая экспрессия вирусного генома регулируется как клеточными, так и вирусными регуляторными белками и имеет сложный механизм. На поздних стадиях жизненного цикла вируса осуществляется синтез вирусных структурных белков, их созревание, самосборка и отпочковывание вирусных частиц [89].

При проведении поисковых работ в качестве потенциальных мишеней воздействия химиотерапевтических препаратов на ВИЧ используются следующие стадии развития вируса:

• адсорбция вируса на клетке-мишени, взаимодействие gp-120 ВИЧ-1 (или Яр-105 ВИЧ-2) с рецептором СБ4 клетки-мишени и последующее проникновение вируса в клетку;

• синтез вирусной ДНК с участием ревертазы ВИЧ;

• процессинг структурных вирусных белков с участием протеазы ВИЧ.

Успехи в химиотерапии ВИЧ-инфекции связаны в настоящее время с

созданием и применением в клинике ингибиторов обратной транскриптазы (ОТ), а также с применением ингибиторов протеазы ВИЧ. ОТ является одной из наиболее важных мишеней химиотерапевтического воздействия. Она входит в состав вириона и проникает в клетку вместе с вирусной РНК и другими вирусными белками. Обратная транскриптаза осуществляет синтез вирусной ДНК с молекулы вирусной РНК. Следует особо отметить, что в ОТ отсутствуют механизмы, корректирующие ошибки транскрипции, поэтому ОТ характеризуется значительно более низкой точностью по сравнению с клеточными ДНК-полимеразами. ОТ индуцирует, в среднем, до 10 ошибок на геном за одну репликацию. Высокий уровень ошибок помогает понять, почему существуют широкие вариации в геномной последовательности штаммов ВИЧ и почему при лечении ВИЧ-инфекции быстро вырабатывается лекарственная резистентность [65, 67].

1.2 Лекарственные средства, применяемые в лечении ВИЧ-1 инфекции

Лечение ВИЧ-инфекции зависит от стадии заболевания, конкретных клинических проявлений и включает собственно антивирусную (этиотропную) терапию, иммунокоррекцию и лечение оппортунистических заболеваний.

Наиболее эффективной при ВИЧ-инфекции следует признать этиотропную терапию. На начальных стадиях ВИЧ-инфекции она направлена на подавление репродукции возбудителя, ослабление его

иммуносупрессивного действия и прерывание дальнейшей передачи вируса здоровым людям.

Предложенные для лечения ВИЧ-инфекции средства по механизму действия относятся в основном к ингибиторам протеазы и обратной транскриптазы, т.е. воздействуют на универсальные мишени (биосинтез вирусных белков и обратную транскрипцию) в цикле репликации вируса инфекции, приводя к подавлению размножения ВИЧ.

Используемые в терапии ингибиторы ОТ ВИЧ препараты можно разделить на две группы: нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы.

Первыми препаратами стали синтетические аналоги нуклеозидов, подавляющие вирусную репликацию за счет ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ. Первым соединением, изначально синтезированным в качестве противоракового препарата и показавшим мощный ингибиторный эффект в отношении ВИЧ-1, оказался З'-азидо-З'-дезокситимидин (АЗТ, 1) [43]. АЗТ является в настоящее время самым применяемым средством при лечении СПИД. Он замедляет развитие инфекции и уменьшает симптоматику оппортунистических заболеваний. Позднее были описаны анти-ВИЧ-1 свойства других 2',3'-дидезоксинуклеозидных аналогов: 2',3'-дидезоксицитидина (2), 2',3'-дидезоксиаденозина (3) [78], которые способны ингибировать ВИЧ-1 в тех же концентрациях, что и АЗТ.

1.2.1 Нуклеозидные ингибиторы репродукции ВИЧ-1

1

2

3

К нуклеозидным ингибиторам, используемым в настоящее время, относятся: диданозин (4), зидовудин (5), абакавир (6), зальцитабин (7), ставудин (8), ламивудин (9) [5].

Н1Ч

но-, о.

о

1.А,

N О

НО-1 ^о.

Н1Ч РГ

Л

к

но

N

N

N1^

N

'гЛо

НОт^О^

\ /

О

НОп .О

8

О

НО-^О в—

N О

Механизм действия всех вышеуказанных 2',3'-дидезоксинуклеозидных аналогов во многом сходен. Они являются терминаторами роста цепи вирусной ДНК. Однако, каждый из них нуждается в предварительном фосфорилировании клеточными киназами до соответствующих 5'-трифосфатов, которые являются конкурентными субстратами для обратной транскриптазы ВИЧ-1 и, включаясь в цепь ДНК, блокируют ее дальнейший синтез [44, 77, 82]. Все-таки, несмотря на очевидную селективность ингибирования обратной транскриптазы ВИЧ-1, трифосфаты этих нуклеозидных аналогов ингибируют также клеточные ДНК-полимеразы [82] и проявляют значительные побочные токсические эффекты [50, 76, 86]. Кроме того, при длительном применении нуклеозидных ингибиторов появляются резистентные штаммы ВИЧ-1 [85]. Отмечено также, что при отмене монотерапии наблюдается быстрое восстановление содержание вирусного антигена р24 в крови [84].

1.2.2 Ненуклеозидные ингибиторы репродукции ВИЧ-1

В настоящее время разработан еще один класс ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ-1, которые не имеют нуклеозидной природы и поэтому называются ненуклеозидными ингибиторами.

Ненуклеозидные ингибиторы связываются с гидрофобным «карманом» активного центра ОТ и образуют прочные комплексы, которые к настоящему времени хорошо изучены [59]. Следует отметить то, что гидрофобный «карман» в ОТ появляется лишь тогда, когда фермент связывается с ненуклеозидным ингибитором. В свободном состоянии «карман» отсутствует. По-видимому, именно высокой подвижностью границ гидрофобного «кармана» можно объяснить столь большое количество соединений, обладающих ингибиторной способностью в отношении ОТ ВИЧ-1.

В противоположность нуклеозидным, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ-1 не нуждаются в предварительном фосфорилировании. Они высокоспецифичны в отношении обратной транскриптазы ВИЧ-1 и не проявляют ингибиторной активности против клеточных полимераз. Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ-1 имеют низкую токсичность, что делает эти соединения особенно привлекательным и многообещающим классом ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ-1 [80].

К ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы ВИЧ-1, применяющимся в клинике относятся: эфавиренц (10) [80], невирапин (11) [69], эмевирин (12) [95].

10

11

Наиболее перспективным классом ингибиторов ОТ являются соединения, содержащие в своем составе пиримидиновый цикл [80].

В 1989 году Танака с соавторами описали синтез и противовирусные свойства 1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(фенилтио)тимина (13). Соединение проявило высокоспецифическую активность, было эффективно только в отношении ВИЧ-1 в концентрации ИК50 7,0 Ц.М, и имело индекс селективности, равный 100. Другие вирусы, включая ВИЧ-2, были нечувствительны к соединению 13 [46]. С целью улучшения противовирусных свойств структура соединения 13 была разбита на четыре региона К1 - II4, которые подвергались широким модификациям.

О

13

о

Н1Ч

'и

А*'

и3

Модификация в регионе Я1 и изучение противовирусных свойств полученных производных соединения 13 показали, что незамещенный аналог (Я1 = Н) полностью неактивен. Также неактивны были аналоги соединения 13, содержащие галоген (II1 = Б, С1, Вг) [59]. Замещение метальной группы в соединении 13 большими объемными заместителями, например, фенилтио-, бензильной, бензоильной группами ведет, как правило, к неактивным соединениям. При замещении метальной группы в соединении 13 атомом иода,

2,2-дифенилвинильной или винильной группой привело к соответствующим производным, которые ингибировали репродукцию ВИЧ-1 в более низких концентрациях, чем соединение 13. Однако эти соединения были высокотоксичными, вследствие этого их индекс селективности был низким [45]. В то же время, замещение метальной группы соединения 13 небольшими алкильными фрагментами повышало противовирусную активность. Закономерное изменение активности наблюдалось в ряду соединений, содержащих следующие заместители: г'-Рг > Ш > Ме.

Так, 1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-5-этил-6-(фенилтио)урацил имел ИК50 0,12 цМ, а 5-изопропил-1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(фенилтио)урацил (14) показал наивысшую ингибиторную активность в отношении ВИЧ-1 в концентрации ИК50 0,063 цМ. Индекс селективности обоих соединений превышал 3000. Другие алкильные заместители (например, пропильный фрагмент) понижали противовирусную активность [46, 71].

Изучение закономерности структура-активность (ЗСА) аналогов

заместителя наиболее предпочтительным является бензольный цикл, связанный с пиримидиновым основанием через атом серы, поскольку заместители в виде алкокси- и циклогексиламиногрупп приводили к неактивным соединениям. Также неактивными были соединения, содержащие в качестве заместителя алкилтиогруппу [45].

Высокую анти-ВИЧ-1 активность проявил селеновый аналог соединения 13 - 1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(фенилселенил)тимин (17) с концентрацией

А А

НзС^Анз НзС^^СНз

15 16

14

соединения 13, имеющих модификации в регионе Ы2 показало, что в качестве

ИК5о 0,96 рМ [68], в котором бензольное кольцо связано с пиримидиновым циклом через атом селена. Также активными были производные соединения 13, в которых бензольный цикл связан с пиримидиновым основанием метиленовой группой [95, 104]. Другие атомы (кислород и азот) приводили к потере противовирусных свойств [104].

о

НЯ-^уСНз О^ГГ^ве

17

Изучение ЗСА аналогов соединения 13, имеющих заместители в бензольном кольце, показывает, что противовирусная активность заметно возрастает в случае наличия небольших заместителей в жета-положении. Усиление вирусингибиторных свойств наблюдается при введении в бензольное кольцо двух метальных групп, находящихся в л/ета-положении. Так, 6-[(3,5-диметилфенил)тио]-1-[(2-гидроксиэтокси)метил]тимин (15) проявил ингибиторные свойства в концентрации ИК50 0,26 цМ и имел индекс селективности, превышающий 900. Его аналог, содержащий в качестве заместителя 6-(3,5-дихлорфенил)тиольный фрагмент, был менее активен и более токсичен.

Комбинация изопропильного заместителя в положении 5 и (3,5-диметилфенил)тиольного фрагмента в положении 6 привела к 6-[(3,5-диметил фенил)тио] -1 - [(2-гидроксиэтокси)метил] -5 -изопропилурацилу (16), активность которого более чем в 500 раз превосходила активность исходного соединения 13. Полученное соединение проявляло вирусингибиторную активность в концентрации ИК50 0,0027 цМ, и индекс селективности превышал 47000.

Модификации в регионе Я и изучение противовирусных свойств полученных соединений показало, что наличие гидроксигруппы в боковой

цепи - необязательное условие для проявления вирусингибиторных свойств. Кроме того, было найдено, что гидроксильная группа не участвует в ингибировании ОТ ВИЧ, не фосфорилируется клеточными киназами, а ее трифосфатное производное не ингибирует ОТ [31]. Было обнаружено, что многие производные соединения 13, которые не имеют гидроксигруппы, проявили эквивалентную, а некоторые соединения - значительно более высокую активность. Так, 1-(этоксиметил)-6-(фенилтио)тимин (18) проявил ингибиторные свойства в концентрации ИК50 0,33 ц.М, а его гомологи 1-(метоксиметил)- и 1-(пропоксиметил)производные были менее активны, чем соединение 18. В то же время, 1-(бензилоксиметил)-6-(фенилтио)тимин (19) проявил ингибиторные свойства в более низкой концентрации ИК50 0,088 }хМ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тимофеева, Юлия Александровна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анти-ВИЧ-1 активность новых производных 1-(бензилоксиметил)-5-(ариламино)урацила / A.A. Озеров, A.A. Лобачев, М.С. Новиков, Р.У. Букхайт // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2006. - №1. - С.7-8.

2. Влияние алкильных заместителей в боковой цепи при экзоциклическом атоме азота на анти-ВИЧ-1 активность in vitro новых производных 1-(бензилоксиметил)-5-(ариламино)урацила / A.A. Озеров [и др.] // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2006. - №3. - С.4-6.

3. Гуреева, Е.С. Синтез 1-[4-(фенокси)бензил]-5-(фениламино)урацилов как потенциальных противовирусных агентов / Е.С. Гуреева, A.A. Озеров, М.С. Новиков // Волгоградск. научно-мед. журн. - 2012. - №2. - С.22-24.

4. 1 - [(3,5 -Диметиларилокси)алкил]производные урацила как потенциальные противовирусные агенты / М.С. Новиков, A.A. Озеров, Ю.А. Орлова, Р.У. Букхайт // Вестн. Волгоградск. мед. ун-та. - 2005. - №3. - С.27-31.

5. Ершов, Ф.И. Современные средства терапии наиболее распространенных вирусных инфекций / Ф.И. Ершов, Н.В. Касьянова // Consilium-Medicum. -2004.-№1.-С.24-30.

6. Кубеков, К.В. Синтез новых производных 5-(ТМ-пиперазино)- и 5-(N-пирролидино)урацила как потенциальных противовирусных средств / К.В. Кубеков, Е.С. Афанасьева, A.A. Озеров // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2006. - № 1. - С. 10-11.

7. Новиков, М.С. Исследование соотношения структура - анти-ВИЧ-1 активность в ряду новых производных 5-(фениламино)урацила / М.С. Новиков, A.A. Озеров // Вестн. Волгоградск. мед. академии. - 1999. -

№ 5. - С. 44-46.

8. Новиков, М.С. Синтез 1-[2-(фенокси)этил]-3-бензилурацилов, как вероятных противовирусных соединений / М.С. Новиков, A.A. Озеров,

Ю.А. Орлова // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2006. - №1. -С.13-14.

9. Новиков, М.С. Синтез 5-(ариламино)-1-бензилурацилов / М.С. Новиков, A.A. Озеров // Химия гетероциклич. соединений. - 2005. - №6. - С. 887892.

10. Новиков, М.С. Синтез 5-[2-(фенокси)этил]производных 6-метилурацила, 6-метил-2-тиоурацила и 2-амино-6-метилпиримидин-4(ЗН)-она / М.С. Новиков, A.A. Озеров, О.Г. Сим // Химия гетероциклич. соединений. -2005. - №8. - С.1213-1217.

11. Новиков, М.С. Синтез новых 2-аминопроизводных 5-[2-(арилокси)этил]-6-метилпиримидин-4(ЗН)-онов как вероятных противовирусных и антибактериальных агентов / М.С. Новиков, О.Г. Сим, A.A. Озеров // Фундаментальные исследования. - 2005. - №3. - С.94.

12. Новиков, М.С. Синтез новых анти-ВИЧ-1 агентов - потенциальных ингибиторов обратной транскриптазы на основе 5-(ариламино)производных урацила / М.С. Новиков, А.К. Брель, A.A. Озеров // Современные проблемы фармацевтической науки и практики. -М.: НИИ фармации, 1999. - Ч. 2. - С. 75-79.

13. Озеров, A.A. Ациклические аналоги пиримидиновых нуклеозидов. Синтез 1-(2-гидроксиэтоксиметил)- и 1-(4-гидроксибутил)-5-аминопроизводных урацила / A.A. Озеров, М.С. Новиков // Химия гетероциклич. соединений. - 1998. - №7. - С.971-978.

14. Озеров, A.A. Синтез З-О-ариловых эфиров (R,S)-9-(2,3-дигидроксипропил)аденина и его пиримидиновых аналогов - новых потенциальных ингибиторов S-аденозил-Ь-гомоцистеингидролазы / A.A. Озеров, М.С. Новиков, А.К. Брель // Химия гетероциклич. соединений. -1999.-№1,-С. 82-86.

15. Озеров, A.A. Синтез новых производных 5-(1Ч-пиперазино)- и 5-(N-пирролидино)урацила как потенциальных противовирусных средств /

A.A. Озеров, K.B. Кубеков, E.C. Афанасьева // Совр. наукоемкие технологии - 2006. - №3. - С.61-62.

16. Оптимизация структуры метилированных производных 1-(бензилоксиметил)-5-(ариламино)урацила, обладающих анти-ВИЧ-1 активностью / A.A. Лобачев [и др.] // Вестн. Волгоградск. мед. ун-та. -2012.-№1.-С.91-93.

17. Орлова, Ю.А. Синтез 1-[(2-(арилокси)этокси)алкил]урацилов как потенциальных противовирусных агентов / Ю.А. Орлова // 7 региональная конф. молодых исследователей Волгоградской области, 1215 нояб. 2002 г. - Волгоград, 2002. - С.60-61.

18. Орлова, Ю.А. Синтез 1-[2-(арилокси)этил]-3-бензилпроизводных урацила и изучение их противовирусных свойств / Ю.А. Орлова // 9 региональная конф. молодых исследователей Волгоградской области, 16-18 нояб. 2004 г. - Волгоград, 2004. - С.57-58.

19. Орлова, Ю.А. Синтез 1-[2-(арилокси)этил]производных урацила и изучение их противовирусных свойств / Ю.А. Орлова // 8 региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области, 11-14 нояб. 2003 г. - Волгоград, 2003. - С. 15-16.

20. Плиев, Т.Н. Молекулярная спектроскопия: 5-ти т. / Т.Н. Плиев-Владикавказ: Иристон, 2001. - Т. 5. - С. 238-291.

21. Поконова, Ю.В. Галоидэфиры. Способы получения, свойства, применение /Ю.В. Поконова - М; Л.: Химия, 1966. - 340 с.

22. Противовирусная активность 1-[[2-(бензилокси)этоксикарбонил]-метил]производных урацила и их аналогов / М.С. Новиков [и др.] // Фундаментальн. исследования. - 2004. - № 1. - С.74.

23. Синтез [[2(3)-(арилокси)алкил]тио]-6-метилпиримидин-4(ЗН)-онов как вероятных противовирусных агентов / М.С. Новиков [и др.] // Химия и технология элементоорганических мономеров и полимерные материалы. -Волгоград, 2002. - С.53-56.

24. Синтез 1-(арилоксиалкил)-5-(ариламино)урацилов / М.С. Новиков, A.A. Озеров, А.К. Брель, Г.Н. Солодунова // Химия гетероциклич. соединений. - 1998.-№5.-С.691-697.

25. Синтез 1-бензил-5-(фениламино)производных урацила / М.С. Новиков, К.В. Тимофеева, Г.Н. Солодунова, A.A. Озеров // Совр. пробл. науки и образования. - 2008. - №1. - С.29.

26. Синтез 1-бензилпроизводных 5-(фениламино)урацила как потенциальных противовирусных агентов / М.С. Новиков [и др.] // Современная инновационная медицина - населению Волгоградской области под. ред. В.И.Петрова - Волгоград: Изд. ВолГМУ, 2008. - С. 158159.

27. Синтез 2-бензилтио-5-бензил-6-метилпиримидин-4(ЗН)-онов как потенциальных противовирусных агентов / М.С. Новиков, A.A. Озеров, М.Б. Бараташвили, Е.В. Варавкина // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2008. - №4. - С.20-21.

28. Синтез 6-арилметил- и 6-арилоксиметил-2-тиоурацилов / М.Б. Навроцкий [и др.] // Вестн. Волгоградск. мед. академии. - 2002. - №8. - С.27-30.

29. Синтез аминозамещенных 1-(2-феноксиэтил)урацилов как потенциальных биологически активных веществ / М.С. Новиков, A.A. Озеров, А.К. Брель, К.В. Тимофеева // Естествознание на рубеже столетий Дагомыс : тез. докл. междунар. конф, 2001г. - Дагомыс, 2001. - Т.2. -С.105.

30. Синтез ацетанилидов - производных 2-тио-6-фенилурацила как вероятных анти-ВИЧ-1 агентов / М.С. Новиков, А.А Озеров, Г.Н. Солодунова, М.П. Парамонова // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2010. - №4. -С.17-19.

31. Синтез ациклических аналогов пиримидиновых нуклеозидов с ароматическим ядром в боковой цепи / A.A. Озеров, М.С. Новиков, А.К.

Брель, Г.Н. Солодунова // Химия гетероциклич. соединений. - 1996. - №3.

- С.380-385.

32. Синтез и анти-ВИЧ-1 активность 1-[2-(2-бензил-4-метил-фенокси)этил]производных урацила / М.С. Новиков [и др.] // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2006. - №4. - С.11-15.

33. Синтез и анти-ВИЧ-1 активность 2-[[2-(3,5-диметилфенокси)этил]тио]пиримидин-4(ЗН)-онов / М.С. Новиков, A.A. Озеров, О.Г. Сим, Р.У. Букхайт // Химия гетероциклич. соединений. -2004. -№1.-С.35-42.

34. Синтез и противовирусная активность 1-[[2-(бензилокси)-этоксикарбонил]метил]производных урацила / М.С. Новиков, А.К. Брель, A.A. Озеров, Ю.А. Орлова // Вестн. Волгоградск. мед. ун-та. - 2002. - № 8.

- С. 30-32.

35. Синтез и противовирусная активность 1-[2-(фенокси)этил]-3-бензилпроизводных урацила / М.С. Новиков, Ю.А. Орлова, A.A. Озеров, Р.У. Букхайт // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2005. - №2. -С.27-32.

36. Синтез и противовирусная активность 3-бензил-1-[2-(фенокси)-этил]производных урацила / М.С. Новиков, A.A. Озеров, Ю.А. Орлова, Р.У. Букхайт // Вестн. Волгоградск. мед. ун-та. - 2004. - №6. - С.29-33.

37. Синтез и противовирусные свойства 1-[[2-(фенокси)этокси]-метил]производных урацила / М.С. Новиков, A.A. Озеров, Ю.А. Орлова, Р.У. Букхайт // Химия гетероциклич. соединений. - 2005. - № 5. - С. 726731.

38. Синтез и противовирусные свойства в отношении ВИЧ-1 новых метилированных производны 1 -(бензилоксиметил)-5-(ариламино)урацила / A.A. Лобачев, М.С. Новиков, A.A. Озеров, Р.У. Букхайт // Известия ВУЗов. Прикладная химия и биотехнология. - 2011. - №1. - С.35-37.

39. Синтез новых несимметричных 1,3-дизамещенных производных урацила и исследование их анти-ВИЧ-1 активности in vitro / М.С. Новиков [и др.] // Бюл. Волгоградск. научн. центра РАМН. - 2006. - № 4. - С. 6-8.

40. Синтез новых потенциальных противовирусных и противоопухолевых агентов на основе 5-(ТЧ-пиперидино)- и 5-(М-морфолино)урацилов / A.A. Озеров, М.С. Новиков, А.К. Брель, Г.Н. Солодунова // Вестн. Волгоградск. мед. академии. - 1998. - № 4. - С. 38-40.

41. Тимофеева, К.В. Синтез 1-бензил-5-(бензил- и фенетиламино)урацилов / К.В. Тимофеева, М.С. Новиков, A.A. Озеров // Совр. пробл. науки и образования. - 2008. - №1. - С.30.

42. 2-(Alkyl/aryl)amino-6-benzylpyrimidin-4(3H)-ones as inhibitors of wild-type and mutant HTV-1: enantioselectivity studies / D. Rotiii [et al.] // J. Med. Chem. - 2012. - Vol.55. - P.3558-3562.

43. 3'-Azido-3'-deoxythymidine (BW A509U): an antiviral agent that inhibits the infectivity and cytopathic effect of human T-lymphotropic virus type III/lympho-adenopathy-associated virus in vitro / H. Mitsuya [et al.] // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. - 1985. - Vol.82, №10. -P.7096-7100.

44. 3'-Azido-3'-deoxythymidine triphosphate as an inhibitor and substrate of purified human immunodeficiency virus reverse transcriptase / M.H. St. Clair [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. - 1987. - Vol.31, №12. - P.1972-1977.

45. A new class of HIV-1-specific acyclouridine derivatives: synthesis and anti-HIV-1 activity of 5- or 6-substituted analogues of l-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-6-(phenylthio)thymine (HEPT) / H. Tanaka [et al.] // J. Med. Chem. - 1991. - Vol.34, №1. - P.349-357.

46. A novel lead for specific anti-HIV-1 agents: l-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-6-(phenylthio)thymine / T. Miyasaka [et al.] // J. Med. Chem. - 1989. - Vol.32, №12. - P.2507-2509.

47. An expeditious synthesis of pyrrolo[3,4-d]pyrimidine-2,4-dione from uracil / M.N. Zimmerman, N.H. Nemeroff, C.W. Bock, K.L. Bhat // Heterocycles. -2000.-Vol.53, № 1. -P.205-211.

48. Anti-human immunodeficiency virus type-1 activity of the nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors GW 678248 in combination with other antiretrovirals agants clinical isolate viruses and in vitro selection for resistance / R. Hazen [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. - 2005. - Vol.49. -P.4465-4473.

49. Antiviral activity of GW 678248, a novel benzophenone nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors / R. Ferris [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. -2005. - Vol.49. - P.4046-4051.

50. AZT collaborative working group. The toxicity of azidothymidine (AZT) in the treatment of patients with AIDS and AIDS-related complex (a double-blind, placebo-controlled trial) / D.D. Richman [et al.] // New Engl. J. Med. - 1987. -Vol.317, №4.-P. 192-197.

51. l-[2-(2-Benzoyl- and 2-benzylphenoxy)ethyl]uracils as potent anti-HIV-1 agents / M.S. Novikov [et al.] // Bioorg. Med. Chem. - 2011. -Vol.19. - P.5794-5902.

52. 1-Benzyl derivatives of 5-(arylamino)uracils as anti-HIV-1 and anti-EBV agents / M.S. Novikov [et al.] // Bioorg. Med. Chem. - 2010. - Vol.18, №23. -P.8310-8314.

53. Bower, M. AIDS-related malignancies: changing epidemiology and the impact of highly active antiretroviral therapy / M. Bower, C. Palmieri, T. Dhillon // Curr. Opin. Infect. Dis. - 2006. - Vol.19, №1. - P.14-16.

54. Buckheit, K.W. Development of dual-acting pyrimidinediones as novel and highly potent topical anti-HIV microbicides / K.W. Buckheit, L. Yang, R.W. Buckheit // Antimicrob. Agents Chemother. - 2011. - Vol.55, №11. - P.5243-5254.

55. Buckheit, R.W. An algorithm for the preclinical development of anti-HIV topical microbicides / R.W. Buckheit, K.W. Buckheit // Curr. HIV Res. - 2012. - Vol.10, №1.-P.97-104.

56. Characterization of the anti-HIV-1 activity of 3,4-dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs), new non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors / E. Tramontano [et al.] // Microbiologica. - 1994. - Vol.17. -7 P. 269 - 279.

57. Computational strategies in discovering novel non-nucleoside inhibitors of HIV-1 RT / M.L. Barreca [et al.] // J. Med. Chem. - 2005. - Vol.48. - P.3433-3437.

58. Computationally-guided optimization of a docking hit to yield catechol diethers as potent anti-HIV agents / M. Bollini [et al.] // J. Med. Chem. -2011.-Vol.54.-P.8582-8591.

59. Crystal structure at 3. 5A resolution of HIV-1 reverse transcriptase complexed with an inhibitor / L.A. Kohlstaedt [et al.] // Science. - 1992. - Vol.256. -P.1783-1790.

60. Development of a combination microbicide gel formulation containing IQP-0528 and tenofovir for the prevention of HIV infection / A.S. Ham [et al.] // J. Pharm. Sci. - 2012. - Vol.101, №4. - P.1423-1435

61. Development of topical microbicides to prevent the sexual transmission of HIV / R.W. Buckheit, K.M. Watson, K.M. Morrow // Antiviral Res. - 2010. -Vol.85, №1.-P.142-158.

62. Dihydro(alkylthio)(naphthylmethyl)-oxopyrimidines: novel non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors of the S-DABO series / A. Mai [et al.] // J. Med. Chem. - 1997. - Vol.40, №10. - P.1447-1454.

63. 3,4-Dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs): a new class of specific inhibitors of human immunodeficiency virus / M. Artico [et al.] // Antiviral Chem. Chemother. - 1993. - Vol.4, №6. - P.361-368.

64. Discovery of wild-type and Y181C mutant non-nucleoside HIV-1 reverse transcriptase inhibitors using virtual screening with multiple protein structures / S.E. Nichols [et al.] // J. Chem. Inf. Model. - 2009. - Vol.49. - P. 12721279.

65. Drug resistance mutations in the nucleotide binding pocket of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase differentially affect the phosphorolysis-dependent primer unblocking activity in the presence of stavudine and zidovudine and its inhibition by efavirens / E. Crespan [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. - 2005. - №1. - P. 342-349.

66. Evolution of anti-HIV drug candidates. Part 3: diarylpyrimidine analogues / D. Ludovici [et al.] // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2001. - Vol.11. - P.2235-2239.

67. Gallant, J.E. Antiretroviral drug resistance and resistance testing / J.E. Gallant // Top. HIV Med. - 2005. - Vol.13, №5. - P.138-142.

68. Goudgaon, N.M. Activity of acyclic 6-(phenylselenenyl)-pyrimidine nucleoside analogues against HIV in primary lymphocytes / N.M. Goudgaon, R.F. Schinazi // J. Med. Chem. - 1991. - Vol.34, №11. - P. 3305-3309.

69. Hargrave, K.D. Novel non-nucleoside inhibitors of HIV-1 reverse transcriptase. 1. Tricyclic pyridobenzo- and dipyridodiazepinones / K.D. Hargrave, J.R. Proudfoot, K.G. Grozinger // J. Med. Chem. - 1991. - Vol.34, №7. -P.2231-2241.

70. Hartman, T.L. Antiviral interactions of combinations of highly potent 2,4(1 H,3H)-pyrimidinedione congeners and other anti-HIV agents / T.L. Hartman, L. Yang, R.W. Buckheit // Antiviral Res. - 2011. - Vol. 92, №3. -P.505-508.

71. Highly potent and selective inhibition of HIV-1 replication by 6-phenylthiouracil derivatives / M. Baba [et al.] // Antiviral Res. - 1992. -Vol.17.-P.245-264.

72. Highly specific inhibition of human immunodeficiency virus type I by a novel 6-substituted acyclouridine derivatives / M. Baba [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1989.-Vol.165.-P.1375-1781.

73. HIV/AIDS: nonnucleaside reverse transcriptase inhibitor resistance and the role of second-generation agents / J. Adams [et al.] // Ann. Pharmacother. -2010.-Vol.44.-P.157-165.

74. Holy, A. Aliphatic analogues of nucleosides, nucleotides, and oligonucleotides / A. Holy // Collect. Czech. Chem. Commun. - 1975. - Vol.40, №1. -P.187-214.

75. In search of a novel anti-HIV drug: multidisciplinary coordination in the discovery of 4- [ [4- [[4- [( 1 E)-2-cyanoethenyl] -2,6-dimethylphenyl] amino] -2-pyrimidinil]amino]benzonitrile (Rilpivirine) / P.A.J. Janssen [et al.] // J. Med. Chem. - 2005. - Vol.48. - P.2901-2909.

76. Inhibitory effect of azidothymidine, 2',3'-dideoxyadenosine, and 2',3'-dideoxyxycytidine on in vitro growth of hematopoietic progenitor cells from normal persons and from patients with AIDS / A. Ganser [et al.] // Exp. Hematol. - 1989. - Vol.17, №4. - P.321-325.

77. Initial studies on the cellular pharmacology of 2',3'-dideoxyinosine, an inhibitor of HIV infectivity / G.S. Ahluwalia [et al.] // Biochem. Pharmacol. -1987. - Vol.36, №22. - P.3797-3801.

78. Mitsuya, H. Inhibition of in vitro infectivity and cytopathic effect of human T-lymphotropic virus type III/lymphoadenopathy-associated virus (HTLV-III/LAV) by 2',3'-dideoxynucleosides / H. Mitsuya, S. Broder // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. - 1986. - Vol.83, №6. - P.1911-1915.

79. Novel benzophenones as non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors of HIV-1 / J.H. Chan [et al.] // J. Med. Chem. - 2004. - Vol.47. - P.l 175-1182.

80. Patel, M. Synthesis and evaluation of quinoxalinones as HIV-1 reverse transcriptase inhibitors / M. Patel, R.J. McHugh, B.C. Cordova // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2000. - Vol. 10, № 15. - P. 1729-1731.

81. Persistence of wild-type virus and lack of temporal structur in the latent reservoir for human immunodeficiency virus type 1 in pediatric patients with extensive antiretroviral exposure / C.T. Ruff [et al.] // J. Virol. - 2002. -Vol.76, №18. - P.9481-9492.

82. Phosphorylation of 3'-azido-3'-deoxythymidine and selective interaction of the 5'-triphosphate with human immunodeficiency virus reverse transcriptase / P.A. Furman [et al.] // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. - 1986. - Vol.83. - P.8333-8337.

83. Pneumocystis carinii pneumonia and mucosal candidiasis in previously healthy homosexual men: evidence of a new acquired cellular immunodeficiency / M.S. Gottlieb [et al.] // New Engl. J. Med. - 1981. - Vol.305, №24. - P.1425-1431.

84. Rapid rebound of serum human immunodeficiency virus antigen after discontinuing zidovudine therapy / J.B. Spear [et al.] // J. Infec. Dis. - 1988. -Vol.158, №5.-P.l 132.

85. Richman, D.D. Susceptibility to nucleoside analogues of zidovudine-resistant isolates of human immunodeficiency virus / D.D. Richman // Amer. J. Med. -1990. - Vol.88, №58. - P.8-10.

86. Richman, D.D. The toxicity of azidothymidine (AZT) in the therapy of patients with AIDS and AIDS-related complex / D.D. Richman, M.A. Fischl, M.H. Grieco // New Engl. J. Med. - 1987. - Vol.317, №4. - P.l 85-191.

87. Robins, M.J. Nucleic acid related compounds. 37. Convenient and high-yield synthesis of N-[(2-hydroxyethoxy)methyl]heterocycles as "acyclic nucleoside" analogues / M.J. Robins, P.W. Hatfield // Can. J. Chem. - 1982. - Vol.60, № 5. - P.547-553.

88. SJ-3366, a unique and highly potent nonnucleoside reverse transcriptase inhibitor of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) that also inhibits HIV-2 / R.W. Buckheit [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. - 2001. -Vol.45.-P.393-400.

89. Structure of unliganded HIV-1 reverse transcriptase at 2.7 Â resolution implications of conformational changes for polymerization and inhibition mechanisms / Y. Hsiou [et al.] // Structure. - 1996. - №4. - P.853-860.

90. Structure-activity relationship studies of novel benzophenones leading to the discovery of a potent next generation HIV nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors / K. Romines [et al.] // J. Med. Chem. - 2006. - Vol.49. - P.727-739.

91. Structure-activity relationship studies on new DABOs: effect of substitutions at pyrimidine C-5 and C-6 positions on anti-HIV-1 activity / G. Sbardella [et al.] // Antiviral Chem. Chemother. - 2001. - Vol. 12, № 1. - P.37-50.

92. Synthesis and anti-HIV-1 activity of thio analogues of dihydroalkoxy-benzyloxopyrimidines / A. Mai [et al.] // J. Med. Chem. - 1995. - Vol.38, №17. - P.3258 - 3263.

93. Synthesis and anti-HIV-1 and anti-HCMV activity of 1-substituted 3-(3,5-dime-thylbenzyl)uracil derivatives / T. Maruyama [et al.] // Chem. Pharm. Bull. -2006.-Vol.54.-P.325-333.

94. Synthesis and antiviral activity of 1,3-disubstituted uracils against HIV-1 and HCMV / T. Maruyama [et al.] // Antiviral Chem. Chemother. - 2003. -Vol.14.-P.271-279.

95. Synthesis and antiviral activity of 6-benzyl analogs of l-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-6-(phenylthio)thymine (HEPT) as potent and selective anti-HIV-1 agents / H. Tanaka [et al.] // J. Med. Chem. - 1995. - Vol.38, №15. - P.2860-2865.

96. Synthesis and antiviral activity of new 3,4-dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs), specific inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 / S. Massa [et al.] // Antiviral Chem. Chemother. - 1995. - Vol.6, №1. - P.l-8.

97. Synthesis and potent anti-HIV-1 activity of novel 6-benzyluracil analogues of l-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-6-(phenylthio)thymine / K. Danel [et al.] // J. Med. Chem. - 1996.-Vol.39, №12.-P.2427-2431.

98. Synthesis of 6-arylvinyl analogues of the HIV drugs SJ-3366 and Emivirin / M. Wamberg, E.B. Pedersen, N.R. El-Brollosy, C. Nielsen // Bioorg. Med. Chem. - 2004. - Vol.12. - P.l 141-1149.

99. Synthesis of aliphatic nucleoside analogues with potential antiviral activity / L. Colla, R. Busson, E. De Clercq, H. Vanderhaeghe // Eur. J. Med. Chem. -1982. - Vol.17, №6. - P.569-576.

100. Synthesis of an acyclic analogue of azidothymidine / G.L. Koomen, L.M. Provoost, D.A.H. van Maarschalkerwaart, N.P. Willard // Nucleosides Nucleotides. - 1992. - Vol.11, №7. - P.1297-1303.

101. Synthesis of new MKC-442 analogues containing alkenyl chains or reactive functionalities at C-5 / L. Petersen [et al.] // Monatshefte fur Chemie. - 2002. -Bd.133. -P.1031-1043.

102. Synthesis of novel diarylpyrimidine analogues and their antiviral activity against human immunodeficiency virus type 1 / J. Guillemont [et al.] // J. Med. Chem. - 2005. - Vol.48. - P.2072-2079.

103. Synthesis of novel HEPT analogues with anti-HIV-1 activity / S. Massa [et al.] // Med. Chem. Res. - 1994. - Vol.4. - P.554-562.

104. Synthesis of some analogues of l-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-6-(phenylthio)thymine (HEPT) which have different types of acyclic structures / H. Tanaka [et al.] // Nucleosides Nucleotides. - 1992. - Vol.11, №2-4. -P.447-456.

105. Synthesis, antimicrobial and antiviral activities of isotrimethoprim and some related derivatives / M. Botta [et al.] // Eur. J. Med. Chem. - 1992. - Vol.27. -P.251-257.

106. The challenge of finding a cure for HIV infection / D.D. Richman [et al.] // Science. - 2009. - Vol.323. - P.1304-1307.

107. Unique anti-human immunodeficiency virus activities of the nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors calanolide A, costatolide, and

dihydrocostatolide / R.W. Buckcheit [at al.] // Antimicrob. Agents Chemother. - 1999. - Vol.43, №8. - P. 1827-1834.