Сорбционно-хроматографическая очистка ДНК-азы и цитохрома С в технологии получения фармацевтической композиции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.01, кандидат наук Сальникова, Светлана Александровна

• Сальникова, Светлана Александровна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Сальникова, Светлана Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 . Полимерные сорбенты и носители для выделения биологически активных веществ

1.2. Полимерные сетчатые сорбенты, применяемые для сорбции макромолекул

1.3. Макропористые сорбенты

1.4. Гетеросетчатые сорбенты

1.5. Макросетчатые сорбенты

1.6. Новые подходы к синтезу сорбентов

1.7. Особенности при использовании сорбционных методов при выделении и очистке белков

1.8. Виды хроматографических процессов. Ионообменная и гидрофобная хроматография

1.9. Термодинамический и кинетико-динамический анализ сорбционных процессов

1.10. Модификация биологически активных веществ

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Структура и свойства панкреатической дезоксирибонуклеазы

2.2. Структура и свойства цитохрома С

2.3. Физико-химические характеристики сорбентов

2.4. Физико-химические характеристики применяемых ПАВ

2.5. Носители для иммобилизации

2.6. Свойства хлоргексидина биглюконата

2.7. Определения концентрации белка по методу Лоури

2.8. Определение концентрации белка по методу с биуретовым реактивом (связыванием с Кумасси синим)

2.9. Определение ферментативной активности ДНК-азы в растворе

2.10. Количественное определение цитохрома С

2.11. Гельхроматографический анализ

2.12. Метод определения концентрации хлоргексидинабиглюконата

2.13. Метод кислотно-щелочной обработки сорбентов

2.14. Модификация сорбентов

2.15. Методика по изучению комплексов с липосомами и гликосферами

2.16. Исследование сорбции белков в статических условиях (рН-зависимость и изотермические процессы сорбции)

2.17. Исследование кинетики сорбции белков

2.18. Проведение процесса сорбции и десорбции в динамических условиях

2.19. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3 ИЗУЧЕНИЕ РАВНОВЕСНЫХ И КИНЕТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ

СОРБЦИИ ФЕРМЕНТОВ НА РАЗЛИЧНЫХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ НОСИТЕЛЯХ

3.1. Сорбция ферментов на ионогенных и молекулярном сорбентах с модифицированной и немодифицированной поверхностью

3.2. Термодинамический анализ сорбции

3.3. Кинетический анализ сорбции

ГЛАВА 4 ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ СОРБЦИИ И

ДЕСОРБЦИИ

4.1. Теоретический анализ условий оптимизации. Изучение влияния скорости подвижной фазы на процесс сорбции ферментов из многокомпонентной смеси

4.2. Изучение динамического процесса выделения цитохрома С на сульфокатионитах КУ-23 и С-160

4.3. Изучение динамического процесса выделения ДНК-азы на сульфокатионитах КУ-23 и С-160

4.4. Разработка гибкой технологической схемы выделения и очистки цитохрома С и ДНК-азы на сульфокатионите КУ-23

ГЛАВА 5 МОДИФИКАЦИЯ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ДНК-АЗЫ С ЦЕЛЬЮ СОЗДАНИЯ НОВЫХ ГОТОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

5.1. Изучение влияния антисептика, липосом и глигосфер на активность ДНК-азы

5.2. Изучение процесса связывания ДНК-азы с наноматериалами и хлоргексидином по кинетике диффузии через пористые мембраны

5.3. Изучение процесса связывания фермента с антисептиком

5.4. Изучение процесса связывания фермента с липосомами и гликосферами

5.5. Влияние гликосфер на стабильность активности ДНК-азы в растворе

5.6. Салфетки медицинские для обработки воспаленных участков кожи, слизистой, а также профилактики герпетических высыпаний «Герпестоп»108

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ А АКТЫ АПРОБАЦИИ И ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

«ГЕРПЕСТОП»

ПРИЛОЖЕНИЕ В ЗАЯВКА НА ИЗОБРЕТЕНИЕ № 2013144910 ОТ 07.10

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сорбционно-хроматографическая очистка ДНК-азы и цитохрома С в технологии получения фармацевтической композиции»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Производство ферментных препаратов является одним из перспективных направлений в биотехнологии. Ферментные препараты широко используются во многих отраслях промышленности: медицинской, микробиологической и других. Особое значение в настоящее время приобретает получение лекарственных средств на основе ферментов из животного сырья, которые могут успешно заменить продукты аналогичного действия, производимые химическим и микробиологическим синтезом. Гидролитические ферменты имеют ряд особенностей, выгодно отличающих их от другого вида сырья: высокая эффективность в микроколичествах, высокая специфичность, быстрое достижение желаемого результата, возможность создания на их основе продукта с заданными свойствами. Однако, расширение номенклатуры новых лекарственных форм, включающих ферменты, затруднено в виду их высокой лабильности, а также инактивации ферментов за счет взаимодействия с компонентами лекарственных форм. Все это не позволяет выдерживать срок хранения готового продукта (2-3 года). Современные достижения позволяют использовать такие носители, которые могут не только устранить негативное воздействие сопутствующих компонентов, но и стабилизировать сами ферменты.

Потребность в ферментных препаратах определяет необходимость совершенствования технологии их выделения с целью получения высокоочищенных ферментов. В настоящее время при получении высокоочищенных ферментных препаратов значительную роль играют сорбционные методы, которые, однако, недостаточно широко используются в промышленности. Особенности физико-химических свойств белковых макромолекул, а именно: большая молекулярная масса, лабильность молекулы, с одной стороны, и многокомпонентность растворов, содержащих помимо целевых компонентов большое количество примесных соединений различной природы, с другой стороны, свидетельствуют о том, что выделение и очистка ферментов представляет определенные трудности.

Наиболее эффективной является гибкая технологическая схема, где на одном и том же оборудовании можно получать несколько препаратов в зависимости от потребности рынка. Задачей работы является разработка сорбционно-хроматографического метода выделения и очистки панкреатической ДНК-азы и цитохрома С на одном хроматографическом носителе.

Целью работы явилась разработка эффективной гибкой схемы выделения и очистки ДНК-азы и цитохрома С, которая позволит оптимизировать существующую технологию, увеличить выход и чистоту целевого продукта, а также создать новую фармацевтическую композицию для профилактики герпетических высыпаний.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить равновесные, термодинамические и кинетические закономерности сорбции цитохрома С и ДНК-азы на различных хроматографических носителях (ионогенных и неиногенных), на основании чего выбрать оптимальный сорбент для препаративной хроматографии.

2. Теоретически обосновать условия разделения компонентов смеси, на примере смеси цитохрома С и ДНК-азы; оптимизировать хроматографический процесс по скорости подвижной фазы.

3. Подобрать селективные параметры выделения и очистки ферментов с целью разработки гибкой технологической схемы для имеющихся производственных мощностей.

4. Разработать состав и технологию производства изделия медицинского назначения на основе ДНК-азы и носителя, которая может использоваться для лечения заболеваний, вызванных вирусами герпеса.

5. Разработать методики качественного и количественного анализа изделия медицинского назначения с целью стандартизации.

6. Разработать нормативную документацию на изделие медицинского назначения салфетки медицинские для обработки воспаленных участков кожи, слизистой, а также профилактики герпетических высыпаний «Герпестоп» - проект ТУ и лабораторный регламент.

7. Изучить стабильность ДНК-азы в полученном изделии для обоснования сроков годности.

Научная новизна. Впервые созданы и изучены комплексы ДНК-азы с липосомами и гликосферами, позволяющие получить на их основе новые лекарственные средства, обеспечивающие стабильность ДНК-азы в течении срока годности.

Впервые разработана и оптимизирована гибкая схема выделения и очистки ферментов, имеющих различные физико-химические свойства, с использованием одной и той же хроматографической системы.

Теоретически обоснованы условия разделения компонентов смеси, на примере смеси цитохрома С и ДНК-азы; оптимизирован хроматографический процесс по скорости подвижной фазы.

Практическая значимость. На основании проведенных теоретических и экспериментальных исследований:

• Разработаны состав и технология производства изделия медицинского назначения салфетки медицинские для обработки воспаленных участков кожи, слизистой, а также для профилактики герпетических высыпаний «Герпестоп»;

• Разработан лабораторный регламент на производство салфеток медицинских «Герпестоп»;

• Составлены технические условия (ТУ 9393-021-01899876-2009) на салфетки медицинские для обработки воспалённых участков кожи, слизистой, а также для профилактики герпетических высыпаний "Герпестоп» для ЗАО «Московская фармацевтическая фабрика», данный вид продукции внедрен в производства и реализуется на территории РФ (Акт о внедрении от 17.04.2014 г.);

• Предложен эффективный масштабируемый способ очистки ДНК-азы и цитохрома С, исключающий недостатки известной схемы очистки фермента и позволяющий увеличить выход целевого продукта, сократить время технологического цикла процесса получения фермента и повысить удельную активность препарата (номер заявки на патент 2013144910). Предложенный

способ апробирован в цехе ферментных препаратов ООО «Самсон-Мед» (Акт о внедрении от 10.02.2014 г.);

• Результаты выполненной работы используются в учебном процессе СПХФА при изучении дисциплины «Химия и технология выделения и очистки биологически активных веществ» (Акт о внедрении от 18.03.2014 г.).

Апробация работы

Основные результаты исследований были доложены на научно-практической конференции «Фармация из века в век» (СПб, 2008), IV международной научно-практической конференции «Наука: теория и практика» (Прага, 2008), III международной конференции «Сорбенты как фактор качества жизни» (Белгород, 2008), XV Международный конгресс «Человек и лекарство» (Москва, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 3 статьи, входящие в перечень периодических изданий, рекомендуемых ВАК РФ и подана 1 заявка на патент.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экспериментальное доказательство эффективности модели оптимизации хроматографического разделения в двухкомпонентной системе по скорости подвижной фазы при разделении цитохрома С и ДНК-азы.

2. Показана возможность выделения и очистки различных ферментов (ДНК-азы и цитохрома С) с использованием гибкой технологической схемы.

3. Результаты исследований по обоснованию состава и технологии получения изделия медицинского назначения.

4. Результаты изучения стабильности изделия салфеток медицинских «Герпестоп» для обоснования срока годности.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Полимерные сорбенты и носители для выделения биологически активных веществ

В основе большинства методов препаративных сорбционных выделений БАВ лежит избирательное взаимодействие этих веществ с селективными сорбентами различной структуры. Эффективное применение сорбентов для препаративной хроматографии БАВ предусматривает знание их физико-химических свойств, а также механизмов межмолекулярных взаимодействий в системе сорбат-сорбент [68, 72, 83, 114].

Несмотря на разнообразие сорбентов большинство применяемых для сорбции материалов по своему происхождению может быть отнесено к одному из следующих классов: минеральные, синтетические неорганические и синтетические органические сорбенты. Большинство же известных к настоящему времени промышленных сорбентов, применяемых для селективной сорбции БАВ, представляют собой синтетические органические материалы. Важным свойством этих сорбентов является способность селективно сорбировать то или иное вещество. Вследствие этого именно синтетические материалы получили широкое распространение, как в препаративной, так в индустриальной хроматографии. Модификация синтетических материалов с целью селективной сорбции целевого вещества является главным направлением в развитии химии синтетических органических сорбентов [98].

Полимерные сетчатые сорбенты представляют собой нерастворимые, в большинстве случаев набухающие в растворителе вещества, способные поглощать из раствора молекулы или ионы (при ионном обмене). Каркас синтетических полимерных сорбентов состоит из линейных углеводородных цепей, сшитых необходимым количеством поперечных связей. Сорбционные свойства таких материалов зависят как от пространственной структуры полимерной сетки, так и от свойств олигомерных участков полимерных цепей,

находящихся между химическими узлами, а также от количества связывающего агента [87, 138].

Следует отметить, что высокоэффективные сорбенты для препаративной хроматографии БАВ должны характеризоваться следующим комплексом свойств: относительной жесткостью структуры, высокой сорбционной емкостью и быстрой кинетикой сорбции целевого продукта или примесей, возможностью осуществления селективной элюции целевых компонентов и получения высококонцентрированных элюатов, легкостью регенерации и возможностью реализации многократно повторяющихся хроматографических процессов [54, 140].

Большинство известных синтетических полимерных материалов можно классифицировать исходя из особенностей структуры полимерной матрицы. В зависимости от типа сетчатой структуры свойства полимерных сорбентов сильно различаются.

1.2. Полимерные сетчатые сорбенты, применяемые для сорбции макромолекул

Структуры сетчатых сополимеров возникают при полимеризации с использованием взаиморастворимых мономеров, каждый из которых является хорошим растворителем для образующегося сополимера. При дегидратации сетчатые сорбенты образуют непроницаемые блочные структуры [44, 72]. Разработка наиболее регулярных сетчатых полимерных структур развивалась на основе реакций в цепях полимеров, когда уже образованные линейные полимерные макромолекулы, содержащие реакционноспособные мономеры, вступают во взаимодействие между собой, образуя наиболее регулярные структуры изопористых сорбентов [11].

Среди сетчатых полиэлектролитов наибольшее значение для выделения и очистки БАВ имеют карбоксильные сорбенты. В отличие от поликислот, содержащих сульфогруппы, они не проявляют существенной каталитической активности даже при значительном повышении кислотности раствора [43, 89].

Вместе с тем, возможность плавного изменения степени ионизации в карбоксильных ионитах позволяет регулировать энергию их межмолекулярного взаимодействия с органическими противоионами. При этом образуются обратимо диссоциирующие полимерные комплексы, в которых можно осуществлять полную десорбцию БАВ. Кроме того, низкие величины значений рКа фиксированных групп сульфо- и фосфорнокислых ионитов требуют применения сильнокислых и сильнощелочных растворов при сорбции и десорбции органических веществ. На карбоксильных катеонитах эти же процессы протекают в относительно «мягких» физико-химических условиях, при которых в большинстве случаев не происходит структурных изменений нативной формы БАВ [66].

Полимерные сетчатые сорбенты могут быть синтезированы на основе процессов полимеризации или поликонденсации. В сравнении с поликонденсационными полимеризационные сорбенты обладают большей механической прочность [66].

Среди катеонитов поликонденсационного типа главное место занимают сорбенты фенолформальдегидной природы. Поликонденсационные иониты обычно получают на основе формальдегида и простых эфиров фенола, содержащих карбоксильные группы, - феноксиуксусной, оксифеноксиуксусной. Поликонденсационные карбоксильные иониты мало набухают в водородной форме, что обусловлено гидрофобной природой сетчатой матрицы [66].

Сорбционная емкость полимерных сорбентов по отношению к ионам органических веществ составляет лишь часть от емкости тех же сорбентов по отношению к ионам металлов. Одной из причин снижения сорбционной емкости органических веществ является незначительная степень пористости зерен ионитов, ограничивающая доступность функциональных групп для ионов большого размера. У поликонденсационных гелевых ионитов происходит увеличение размеров пор по сравнению с полимеризационными. Это, по-видимому, обусловлено образованием большого числа физических узлов в сетчатых структурах, возникающих при полимеризации [66].

Показано, что термодинамические константы ионного обмена, характеризующие избирательность сорбции ионов органических веществ при их конкуренции с ионами натрия или водорода, возрастают при усложнении как структуры сорбируемого иона, так и структуры полиэлектролита. Это обусловлено полифункциональными взаимодействиями различного типа [4, 30, 31]. В частности, наблюдалось увеличение избирательности сорбции ионов органических веществ при переходе от полимеризационных ионитов к поликонденсационным, включающим, например, значительное количество щестичленных циклических структур. Так, иониты КФУ и КФУХ по отношению к антибиотикам эритромицину, неомицину, стрептомицину и др. имеют константы избирательности более высокие, чем иониты КБ-4П-2 и КБ-4 [4, 31]. Этот эффект был объяснен как неоднородностью химической и физической структур поликонденсационных ионитов, так и наличием ароматических ядер и фенольного гидроксила, что ведет к проявлению дополнительного взаимодействия ионитов с сорбируемыми ионами.

Полимеризационные сетчатые карбоксильные катиониты обычно получают на основе метакриловой и акриловой кислот или их эфиров, так как эти соединения наиболее доступны и относительно легко сополимеризуются с другими мономерами. В качестве сшивающих агентов применяют дивинилбензол, диметакрилаты этилен- и диэтиленгликоля, алилметакрилат [89].

Карбоксильные катиониты, полученные сополимеризацией указанных мономеров характеризуются невысоким набуханием, как и поликонденсационные иониты, особенно в неионизированной водородной форме, несмотря на использование гидрофильных алифатических кислот и их производных. Дополнительной причиной формирования мало набухающих сеток является проведение сополимеризации в отсутствии разбавителя мономерной смеси, приводящее к образованию большого количества физических узлов и к увеличению плотности сетки, вследствие значительного переплетения цепей в процессе сополимеризации. При этом использование поливинильных соединений

гидрофобной природы еще в большей степени снижает способность матрицы к набуханию [89].

1.3. Макропористые сорбенты

Применение сетчатых катионитов для сорбции крупных ионов БАВ ограничено не только по причине их невысокой проницаемости. Такие иониты, несмотря на слабую гидратацию водородной формы, при ионизации функциональных групп сильно увеличивают степень гидратации. Это сопровождается значительным изменением объема сорбента, что часто приводит к необратимому связыванию БАВ с сорбентом при осуществлении процессов сорбции-десорбции. Предполагают, что причиной необратимого связывания белков может быть усиление дополнительных взаимодействий сорбата с матрицей полиэлектролита, а также возможное изменение нативной структуры БАВ под влиянием сжатия и расширения пор при изменении рН в процессах сорбции-десорбции [89]т

Поэтому, кроме стремления к получению наиболее однородных полимерных сеток, наблюдается обратная тенденция - создание максимально неоднородных сетчатых сополимеров [119]. Предельная неоднородность наблюдается у макропористых ионитов, полученных путем сополимеризации винильных мономеров и полимеров при большом относительном содержании первых в присутствии порообразователей, которыми обычно являются осадители или разбавители [68]. У данного вида сорбентов среди уплотненных участков находится большой объем свободного пространства. Аналогами макропористых полиэлектролитов, а также и основными матрицами для их синтеза являются сополимеры стирола с дивинилбензолом и нейтральные полимеры типа Сферой [68]. Большинство макропористых ионитов не являются абсолютно жесткими материалами с постоянными размерами пор. Для этих ионитов характерно различие между транспортом ионов в каналах с сорбцией на внутренней поверхности макропористых ионитов и перемещением противоионов в уплотненным, плотно сшитых участках [68].

В работах [22, 23, 63] впервые была показана принципиальная возможность использования сульфокатионита КУ-23 для выделения комплекса ферментов из поджелудочной железы крупного рогатого скота [63], а также для выделения и очистки гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота [23], молок рыб и микроорганизмов [22].

Преимуществами использования макропористых сульфокатионитов являются малая набухаемость, высокая проницаемость для крупных органических молекул, устойчивость структуры в широком диапазоне значений рН, что очень важно для колоночных хроматографических процессов, а также успешный опыт использования этих сорбентов при сорбции БАВ.

1.4. Гетеросетчатые сорбенты

Промежуточными между сетчатыми и макропористыми являются такие неоднородные сетчатые структуры, которые характеризуются проницаемостью для макромолекул при наличии меньшего различия в плотности отдельных участков сетчатых структур [68]. Эти промежуточные типы ионитов называются гетеросетчатыми, или гетерогенными по плотности. В основе возникновения гетерогенных по плотности структур сетчатых полимеров лежит образование первичных уплотненных формирований типа ядер или глобул различных размеров [68]. Этот тип пористости возникает при синтезе сетчатых полиэлектролитов с использованием инертных разбавителей в процессе сополимеризации. Большой интерес для сорбции органических ионов представляют карбоксильные иониты, отличающиеся от макропористых сульфоионитов не только химической природой, но и менее жесткой структурой матрицы [89].

Пористые карбоксильные катиониты получают в основном на основе тех же соединений, что и карбоксильные катиониты гелевого типа, с той разницей, что сополимеризацию осуществляют в среде термодинамически «плохого» растворителя, в котором растворяются мономеры, а образующийся сополимер выпадает из раствора [116, 117, 118]. Получение сополимеров пористой

структуры при осадительной полимеризации обусловлено микрорасслоением системы с образованием дисперсии на ранних стадиях. Структурирование дисперсии приводит к образованию негелевой пористости. Факторами, влияющими на характер и размеры пор, являются сродство полимера к осадителю, количество и полифункциональность сшивающего агента, а также степень разбавления мономерной смеси [89].

Комплекс исследований структурных особенностей гелевых и гетеросетчатых сополимеров [49] позволяет заключить, что в любом гетерогенном карбоксильном катионите имеются области с большим числом поперечных связей и области, в которых число поперечных связей настолько мало, что свойства его в некоторых участках подобны свойствам линейного полимера. В предельной ситуации полиэлектролитная сетка (независимо от степени дисперсности) может содержать участки, сравнимые с единичными полимерными цепями, свойства которых могут существенно отличаться от свойств всего ионита. В этом случае структуру гетерогенного сорбента можно трактовать как двухфазную систему, в которой сосуществуют подвижные и неподвижные участки, причем их содержание можно варьировать, изменяя количество сшивающего агента и термодинамическое качество растворителя. Свойства гелевых и гетеросетчатых полиэлектролитов изучены в ряде работ [10, 38, 39, 55, 56, 62, 67, 71, 74, 133]. Значительное внимание было уделено системе метакриловая кислота (МАК) — диметакрилат этиленгликоля (ДМЭГ). Сорбционная емкость сополимеров МАК-ДМЭГ по ряду БАВ демонстрирует необычную зависимость от содержания сшивающего агента. В области гелевых сополимеров МАК и ДМЭГ наблюдается хорошо известная тенденция падения сорбционной емкости при увеличении количества сшивающего агента. В области гетеросетчатых сорбентов, напротив, с увеличением количества сшивающего агента сорбционная емкость БАВ растет, что соответствует возрастанию гетерогенности структуры и увеличению размеров пор [56].

Гетеросетчатые полиэлектролиты, полученные с большим содержанием кроссагентов в условиях гетерофазной сополимеризации, обладают еще одним

важным свойством, резко отличающим их от гелевых ионитов: при изменении рН и ионной силы раствора набухание их мало меняется, т.е. они характеризуются значительной осмотической или структурной устойчивостью. Среди сетчатых полиэлектролитов особое место занимают структурно устойчивые карбоксильные катиониты типа Биокарб, мало меняющие свою конформацию при изменении степени нейтрализации и ионной силы окружающего раствора и сохраняющие почти без изменения степень набухания при ионизации или протонировании карбоксильных групп [89]. Такие иониты обладают гетерогенностью в набухшем состоянии и содержат в своей структуре крупные каналы, проницаемые для сложных противоионов большого размера. Сорбционные свойства этих материалов зависят от пространственной структуры полимерной сетки, от характера олигомерных полиэлектролитных цепей, находящихся между химическими узлами, а также от количества сшивающего мономера [87, 89]. В качестве мономеров чаще всего используют акриловую и метакриловую кислоты, которые образуют гидрофильные сополимеры, хорошо набухающие в воде и полярных растворителях. Высокая сорбционная емкость Биокарба по отношению к белкам различных молекулярных масс и сохранение нативной конформации белков обеспечили его широкое применение в различных областях биохимии, микробиологии и медицинской промышленности для получения высокоочищенных ферментов из естественных источников. С помощью Биокарба удалось выделить микробные ферменты: пектиназу, целлюлазу, полигалактуроназу, протеазу из Bacillus subtitis и Aspergillus terrícola [89], а также ферменты и гормоны животного происхождения. Описан способ выделения физиологически активных веществ из экстракта поджелудочной железы млекопитающих путем сорбции на метакриловой катионообменной смоле с последующим элюированием ферментов [53].

1.5. Макросетчатые сорбенты

Особый класс высокопроницаемых сорбентов получен на основе сополимеризации с использованием длинноцепных сшивающих агентов [8, 16,

21]. Сетчатые полиэлектролиты этой группы могут быть получены как в гелевом, так и в гетеросетчатом или макропористом состоянии, в зависимости от количества введенного сшивающего агента и растворителя, используемого в процессе сополимеризации и модификации сополимеров [68]. Одной из особенностей этой группы сетчатых полиэлектролитов является высокая степень проницаемости по отношению к различным ионам органических веществ как в гелевом, так и в гетеросетчатом состоянии.

Гетеросетчатые, макропористые, макросетчатые и гранулированные сорбенты следует считать бипористыми, если для сорбируемых молекул доступны сорбционные центры, как в областях уплотнения полимерной матрицы, так и на «поверхности» пор в межглобулярном пространстве. При исследовании структурно-динамических характеристик полиэлектролитов установлена корреляция между локальной внутримолекулярной подвижностью и реакционной способностью фрагментов полимерных цепей. Показано, что наибольшей реакционной способностью обладают группы, расположенные на более подвижных участках полимерной цепи [36].

1.6. Новые подходы к синтезу сорбентов

Следует отметить, что, чем выше объем пор, тем ниже удельная поверхность сорбентов, и соответственно меньше сорбционная емкость. Для улучшения процессов гетерогенного массопереноса без заметного снижения сорбционной емкости разработаны перфузионные (гигапористые) сорбенты, в которых из-за отсутствия затруднений диффузионного транспорта веществ внутри матрицы сорбента эффективность разделительного процесса определяет конвективная диффузия [112, 115, 141]. Большинство перфузионных сорбентов являются макропористыми сетчатыми сополимерами, при этом отличительной их чертой является сочетание в пористой структуре транспортных пор очень большого размера (600-800 нм) с относительно малыми порами (50-100 нм). Показано, что такая комбинация размеров пор облегчает транспорт сорбируемого вещества и способствует резкому увеличению скорости гетерогенного

массообмена. В отличие от полимерных сорбентов других типов эффективные коэффициенты диффузии сорбируемых БАВ в зерна перфузионных сорбентов из-за конвективного лимитирования возрастают с увеличением скорости протекания подвижной фазы, что способствует лучшей производительности препаративных хроматографических процессов. В настоящее время разработана теория разделения веществ на перфузионных сорбентах, основанная на концепции «приращения» величин эффективных коэффициентов диффузии за счет транспорта в гигапорах [132]. Показаны преимущества перфузионных сорбентов (главным образом, возможность осуществления препаративных процессов при высоких скоростях подвижной фазы) для выделения и очистки нестабильных белков [132].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сальникова, Светлана Александровна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Альтшуллер, Г.Н. Термодинамика обмена ионов сульфаниламидов пиримидинового ряда на высокоосновных анионитах / Г.Н. Альтшуллер, Е.А. Савельев // ЖФХ. - 1971. - Т.45, №5. - С.1301-1305.

2. Батурина, И.Д. Дезоксирибонуклеазы из внутренних органов карпа. Выделение и некоторые свойства. В кн.: Разнокачественность онтогенеза у рыб / И.Д. Батурина, Г.Д. Бердышев - Киев: Науковая думка, 1980. - С. 114-128.

3. Безбородова, С.И. Рибонуклеазы и родственные белки, а также ингибиторы рибонуклеаз / С.И. Безбородова // Прикладная биохимия и микробиология - 1991.

- Т.27, №3. - С. 308-329.

4. Белая, С.Ф. Кинетика сорбции стрептомицина карбоксильными ионообменными смолами.// В кн.: Избирательная ионообменная сорбция антибиотиков / С.Ф. Белая, Г.Э. Елькин, Г.В. Самсонов - Л.: Тр. ЛХФИ. - вып. 25.

- 1968. - С.147-163.

5. Белякова, Л.Д. Хроматографические и адсорбционные свойства сверхсшитых полистирольных сорбентов «Стиросорб».// В сб.: Всероссийский симпозиум по теории и практике хроматографии и электрофореза / Л.Д. Белякова. - Самара: Самарский Университет. - 1999. - С.151-162.

6. Белякова, Л.Д. Адсорбционные и хроматографические свойства полимерных сорбентов типа «Стиросорб» / Л.Д. Белякова, О.В. Василевская, М.П. Цюрупа,

B.А. Даванков// ЖФХ. - 1995. - Т.69, №4. - С.696-700.

7. Белякова, Л.Д. Адсорбционные и хроматографические свойства микросферических полимерных сорбентов типа «Стиросорб» / Л.Д. Белякова, О.В. Василевская, М.П. Цюрупа, В.А. Даванков // ЖФХ. - 1996. - Т.70, №8. -

C.1476-1481.

8. Ванштейдт, A.A. Способ получения монофункциональных ионообменных смол / A.A. Ванштейдт, В.А. Динабург, K.M. Генендер и др.// Авт.свид. СССР №168427. - Бюл.изобр. - 1965. - №4. - С.59.

9. Варламов, В.П. Хроматографическое выделение гидролаз (нуклеаз, фосфатаз, хитиназ) и их использование в биотехнологических процессах.: автореф. дис. ...докт. хим. наук.:03.00.23/ Варламов Валерий Петрович. -М., 1994. - 51с.

10. Гаврилова, H.H. Исследование взаимосвязи структуры сетчатых полиэлектролитов основного типа и кинетики взаимодействия их с органическими ионами / H.H. Гаврилова, B.C. Пирогов, А.Д. Морозова и др..// ЖПХ. - 1981. - Т.54, №5. - С.1190-1192.

11. Гельферих, Г.С. Иониты / Г.С. Гельферих. - Москва: Иностранная литература. 1962. -490с.

12. Глазова, Н.В. Сорбционное разделение смесей БАВ в квазиравновесных и неравновесных условиях / Н.В. Глазова. // Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». - СПб. - 1996. - С.11.

13. Оптимизация ионообменных процессов с использованием ПЭВМ / Н.В. Глазова, Г.Э. Елькин, Н.В. Рудометова. - СПб.:СПХФИ, - 1993. - 19 с.

14. Глазова, Н.В. Использование молекулярных сорбентов марки СКН в процессе выделения и очистки гидролаз, продуцируемых Asp. Oryzae и Вас. Subtilis / Н.В. Глазова, Н.В. Рудометова, JI.B. Дмитренко. // В кн.: Молекулярная сорбция биологически активных веществ. Тезисы докладов зональной конференции,— Пенза. - 1989. - С. 56.

15. Гуторов, А.Н. ДНК-аза в терапии простого рецидивирующего герпеса / А.Н. Гуторов, Е.П. Лесников, Р.И. Салгалик, Б.Н. Кривошеее. // Вестник дерматологии и венерологии. - 1976. - №11. - С. 75-78.

16. Динабург, В.А. Синтез и изучение свойств макросетчатых ионообменных смол с N. N'-алкилендиметакриламидами в качестве сшивающих агентов / В.А. Динабург, Г.В. Самсонов, K.M. Генендер, В.А. Пасечник и др. // ЖПХ. - 1968. -Т.41, №4. - С.891-897.

17. Елькин, Г.Э.Концепция регулярности режима сорбции в теории и практике ионного обмена органических ионов / Г.Э. Елькин. // Межвузовский сборник: Ионный обмен и ионометрия. - 1990. - Вып. 7. - С.3-15.

18. Елькин, Г.Э. Теоретические основы выбора оптимальных режимов сорбции и хроматографии БАВ / Г.Э. Елькин. // Тезисы докладов Всерос.симпозиума «Биосепарация-96». - СПб. - 1996. - С.11.

19. Елькин, Г.Э. Кинетика сорбции белков ионообменными смолами. Сорбция химотрипсиногена карбоксильными катеонитами / Г.Э. Елькин, Г.А.. Бабенко, A.A. Селезнева, Г.В. Самсонов.// Коллоидный Журнал. - 1972. - Т.34, №2. - С.208-212.

20. Елькин, Г.Э. Модификация свойств поверхности макропористых сополимеров путем адсорбции поверхностно-активных веществ. / Г.Э. Елькин, Н.В. Глазова, Л.В. Курдявка.// ЖФХ. - 1994. - №10. - С.1782-1783.

21. Ергожин, Е.Е. Новые высокопроницаемые слабо- и сильносшитые катеониты для селективной сорбции органических и неорганических ионов. / Е.Е. Ергожин, Л.Н. Продиус, H.A. Асанов и др.// Второй Всесоюзный симп. по термодинамике ионного обмена. Расш. тезис, доклад. - Минск - 1975. - С.36.

22. Заинкова, Н.В. Получение и сравнительный анализ свойств гиалуронидаз из различных источников: дис. ...канд. биол. наук: 03.00.04 / Заинкова Наталья Вячеславовна. - СПб, 1998. - 140 с.

23. Игонина, Л.М. Хроматографическое выделение и изучение свойств фермента гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота: дис. ...канд.биол.наук: 03.00.04 / Игонина Людмила Михайловна. - СПб, 1996. - 134 с.

24. Игонина, Л.М. Применение сорбционно-хроматографических методов очистки ферментного препарата «Лидаза» / Л.М. Игонина, Н.В. Глазова, Л.В. Дмитренко, Н.В. Заинкова. // Химия и технология лекарственных веществ. - СПб. - 1994. -С.14.

25. Игонина, Л.М. Использование сорбентов для удаления примесей из инъекционного препарата «Лидаза» / Л.М. Игонина, Н.В. Глазова, Н.В. Заинкова. // Тез .докладов Международного симпозиума «Проблемы сорбционной детоксикации внутренней среды организма. - Новосибирск - 1995.

26. Игонина, Л.М. Влияние ионов двухвалентных металлов на порядок следования белков при ионообменной ВЭЖХ. / Л.М. Игонина, Д. Коррадини, Н.В.

Глазова, Г.Э. Елькин, Д. Канарса.// Журнал прикладной химии. - 1998. - Т.78. -№7. - С.1094-1098.

27. Иониты. - Черкассы: НПО «Пластмассы», 1980. - 32 с.

28. Кадолина, И.Б. Разработка методов выделения и очистки бактериальных эндотоксинов: дис. ... канд.биол.наук: 03.00.07 / Кадолина Ирина Борисовна. -СПб, 1995.- 116 с.

29. Каталог хроматографических материалов для научных исследований.// РАН, Главное управление Материально-технического обеспечения. - М.: Наука, 1992. -63 с.

30. Кильфин, Г.Н. Избирательность сорбции неомицина (мицерина) на сульфо- и карбоксильных катеонитах. / Г.Н. Кильфин, Г.В. Самсонов Г.В. // В кн.: Избирательная ионообменная сорбция антибиотиков. - Ленинград: ЛХФИ, 1968. -С.74-84.

31. Клих, С.Ф. Влияние структуры ионитов на сорбцию эритромицина. / С.Ф. Клих, H.H. Кузнецова, Г.Э. Елькин, Г.В. Самсонов. // В кн.: Избирательная ионообменная сорбция антибиотиков. — Ленинград, ЛХФИ,. 1968 - С.37-41.

32. Кокотов, Ю.А. Теоретические основы ионного обмена / Ю.А. Кокотов, П.П. Золотарев, Г.Э. Елькин. - Ленинград: Химия, 1986. - 280 с.

33. Коликов, В.М. Хроматография белков на макропористых кремнеземах. / В.М. Коликов, Б.В. Мчедлишвили. - Ленинград: Химия, 1986. - 192 с.

34. Коршак, В.В. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений / В.В. Коршак, М.И. Штильман - Москва: Наука, 1984. — 261 с.

35. Кривошеее, Б.Н. ДНК-аза в комплексной терапии герпетиформной экземы Капоши. / Б.Н. Кривошеев, H.H. Мотовилова, Р.И. Салгалик, Ж.М. Савиных, К.И. Стадник. //Вестник дерматологии и венерологии. - 1987. - №1. - С. 29-33.

36. Краковяк, М.Г. Реакционная способность и внутримолекулярная подвижность макромолекул в растворе. / М.Г. Краковяк, Е.В. Ануфриева, Ю.Я. Готлиб и др. // ДАН СССР. - Т.224, №4. - С.873-876.

37. Краснопольский, Ю.М. Некоторые аспекты технологии получения липосомальных форм лекарственных препаратов. / Ю.М. Краснопольский, А.Е. Степанов, В.И. Швец.// Хим. Фарм. Ж. - 1999.

38. Кузнецова, Н.П. Исследование неоднородности структуры карбоксильных сетчатых полиэлектролитов методом потенциометрического титрования. / Н.П. Кузнецова, Р.Н. Мишаева, H.H. Кузнецова и др. // Высокомолек. соед. - 1980. -Т.22Б, №11. - С.874-877.

39. Кузнецова, Н.П. Карбоксильные сетчатые полиэлектролиты как сорбенты для выделения биологически активных веществ. / Н.П. Кузнецова, И.М. Рожецкая, Б.В. Москвичев и др. // Высокомолек. соед. - 1976. - Т18А, №2. - С.355-360.

40. Лапик, A.C. Фармакологическая активность и токсичность нуклеаз. / A.C. Лапик, И.С. Губенко, Л.И. Корочкин, Р.И. Салганик. // Фармакология и токсикология. - 1977. - Т.ЗЗ, №2. - С. 210-212.

41. Лебедев, Ю.Я. Теория хроматографии медленно диффундирующих веществ. Типы режимов. / Ю.Я. Лебедев. // ЖФХ. - 1995. - Т.69, №6. - С.1080-1084.

42. Лебедев, Ю.Я. Теория хроматографии медленно диффундирующих веществ. Обращение порядка элюирования компонентов. / Ю.Я. Лебедев. // ЖФХ. - 1997. -Т.71, №6. - С.1117-1120.

43. Либинсон Г.С. Сорбция органических соединений ионитами.// М.: Медицина. 1979. 182с.

44. Либинсон, Г.С. Физико-химические свойства карбоксильных катионитов / Г.С. Либинсон. - Москва: Наука, 1969. - 168с.

45. Лукьянова, О.Н. Десорбция противоопухолевого антибиотика даунорубицина с гелевых и гетеросетчатых карбоксильных катионитов. / О.Н. Лукьянова, O.A. Писарев, Т.Д. Муравьева и др..//ЖПХ. - 1991. - Т.64, №6. - С. 1361-1363.

46. Макаров, К.А. Иммобилизованные биопрепараты в медицине / К.А. Макаров. -Москва: Медицина, 1980. - 126 с.

47. Максимов, В.И. Стабильность ферментов при очистке. / В.И. Максимов // В кн.: Кристаллические ферменты: методы получения, их характеристика и использование. - Вильнюс. - С.22-25.

48. Мосолов, B.B. Протеолитические ферменты / B.B. Мосолов - Москва: Наука,

1971.-404 с.

49. Муравьева, Т.Д. Синтез, структура и свойства гетеросетчатых сорбентов на основе акриловых кислот: дис. ...канд. биол. наук: 03.00.04/ Муравьева Татьяна Дмитриевна. - Л., 1989 129 с.

50. Нолтинг, Б. Мир биологии и медицины. Новейшие методы исследования биосистем / Б. Нолтинг. - Москва: Техносфера, 2005. - 256 с.

51. Павлюченко, И.И. Сравнительная биохимическая и физиологическая характеристика ферментных препаратов поджелудочной железы: автореф. дис. ...канд. мед. наук: 14.00.33 / Павлюченко Иван Иванович. - Ростов-на-Дону, 1987. - 16 с.

52. Паскевич, И.Ф. Исследование РНК-азы, связанной с гистонами печени и селезенки крыс. / И.Ф. Паскевич, М.А. Чисханова, B.C. Лиходед // Биохимия. -

1972. - Т.37, №3. - С. 585-589.

53. Патент US № 4973554. Аффинный способ очистки и стабилизации трипсина. -Опубл. 27.11.90.

54. Писарев, O.A. Применение новых методов препаративной хроматографии низкого давления для повышения качества лекарственных препаратов / O.A. Писарев, Н.В. Глазова // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2001. -Т.1., №2. -С.415-423.

55. Писарев, O.A. Вторичная пористость и состояние воды в гетеросетчатых карбоксильных электролитах / O.A. Писарев, A.B. Добродумов, Т.Д. Муравьева и др. // Высокомолекулярные соединения. - 1987. - Т.28Б. №1. - С. 14-16.

56. Писарев, O.A. Энергетическая неравноценность карбоксильных групп сшитых гетерогенных полиэлектролитов / O.A. Писарев, Т.Д. Муравьева, Г.В. Самсонов // Высокомолекулярные соединения. - 1987. - Т.28Б., №4. - С.262-264.

57. Писарев, O.A. Ионно-гидрофобное взаимодействие эремомицина с сетчатыми структурно сегрегированными биосорбентами / O.A. Писарев, Г.В. Самсонов. Л.П. Богданова, Т.Д. Муравьева // ЖПХ. - 1993. - Т.66, №12. - С.2825-2828.

58. Платэ, H.A. Физиологически активные полимеры / H.A. Платэ, А.Е. Васильев. - Москва: Химия, 1986. - 294 с.

59. Полянский, Н.Г. Методы исследования ионитов / Н.Г. Полянский, Г.В. Горбунов, H.J1. Полянская. - Москва: Химия, 1976. - 208 с.

60. Прищеп, Т.П. Основы фармацевтической биохимии: учебное пособие / Т.П. Прищеп. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2006. - 256 с.

61. Регирт М. Инкапсулирование посредством циклодекстринов / М. Регирт // Sofw Journal (Russian version). - 2003. - №4. - С. 42-45.

62. Рожецкая, K.M. Химические и структурные превращения при радикальной сополимеризации метакриловой кислоты и N, N'-этилендиметакриламида в растворе на начальной стадии формирования сетчатых структур / K.M. Рожецкая, H.A. Калинина, К.П. Папукова и др. // Высокомолекулярные соединения. - 1989. Т.31А., №12. - С.2532-2537.

63. Рудометова, Н.В. Разработка сорбционного хроматографического выделения панкреатических ферментов: рибонуклеазы, дезоксирибонуклеазы, трипсина и химотрипсина: дис. ...канд. биол. наук: 03.00.23 / Рудометова Наталья Викторовна. - СПб, 1994. - 156 с.

64. Рудометова, Н.В. Феноменологический подход к оптимизации сорбционно-хроматографических процессов выделения лекарственных веществ / Н.В. Рудометова, Н.В. Заинкова, Н.В. Глазова, Г.Э. Елькин Г.Э. // Тез. Докладов 7-го Всероссийского симпозиума по молекулярной жидкостной хроматографии. -Москва, 1996.-С.36.

65. Савельев, Е.А. Термодинамика и кинетика молекулярной сорбции ß-лактамных и тетрациклиновых антибиотиков на гидрофобные сорбенты / Е.А. Савельев, Л.Д. Лосева, А.Н. Пушков // В кн.: Препаративная масштабируемая хроматография биологически активных веществ и альтернативные методы. -Ленинград, 1991. - С. 18-25.

66. Самсонов, Г.В. Изучение распределения пор по размерам в ионообменных смолах / Г.В. Самсонов, Л.В. Дмитренко, B.C. Юрченко // В кн.: Синтез и свойства ионообменных материалов. - Москва, 1968. - С. 169-172.

67. Самсонов, Г.В. О структуре и проницаемости биосорбента «КМТ-М» / Г.В. Самсонов, H.H. Кузнецова, B.C. Юрченко и др. // Высокомолекулярные соединения. - 1979. - Т.29Б., №4. - С.244-248.

68. Самсонов, Г.В. Сорбционно-хроматографические методы физико-химической биотехнологии / Г.В. Самсонов, А.Т. Меленевский. - Ленинград: Наука, 1986. -230 с.

69. Самсонов, Г.В. Обоснование методов и режимов селективной препаративной хроматографии физиологически активных веществ с использованием кинетических и равновесных факторов / Г.В. Самсонов, B.C. Пирогов, А.Г. Меленевский, A.A. Демин, Е.Б. Чижова, К.П. Папукова // В кн.: Синтез, структура и свойства полимеров. - Ленинград: Наука, 1989. - С.248-253.

70. Самсонов, Г.В. Новые принципы ионообменной препаративной хроматографии и их применение для выделения, очистки и суперочистки антибиотиков / Г.В. Самсонов, O.A. Писарев // Прикладная химия и микробиология. - 1992. - Т.28, №1. - С. 5-18.

71. Самсонов, Г.В. Проницаемость карбоксильных катионитов для белков и ферментов / Г.В. Самсонов, A.A. Селезнева // Химико-фармацевтический журнал. - 1981. - С.77-85.

72. Самсонов, Г.В. Ионный обмен. Сорбция органических веществ / Г.В. Самсонов, Е.Б. Троснянская, Г.Э. Елькин - Ленинград: Наука, 1969. - 336 с.

73. Салгалик, Р.И. Противовирусное действие дезоксирибонуклеазы и рибонуклеазы / Р.И. Салгалик, A.A. Тухачев, Т.А. Баталина / В кн.: Ингибиторы вирусной активности. - Рига: Зинатне, 1972. - С. 147-152.

74. Селезнева, A.A. Кинетика сорбции ферментов в поверхностном слое карбоксильных катионитов / A.A. Селезнева, Г.А. Бабенко, Г.Э. Елькин и др. // Коллоидный Журнал. - 1974. - Т.36, №3. - С.511-514.

75. Селеменов, В.Ф. Обменные процессы и межмолекулярные взаимодействия в системе ионит-вода-аминокислота: автореф. дис. ...д-ра хим. наук:02.00.04 / Селеменов Владимир Федорович. - Воронеж: ВГУ, 1993. - 49 с.

76. Сернов, Л.Н. Биотехнологический цитохром С / Л.Н. Сернов, В.В. Береговых, Е.Р. Давидов, В.В. Гацура - Москва: Антекс, 1997. - 239с.

77. Скоупс, Р. Методы очистки белков / Р. Скоупс - Москва: Мир, 1985. - 224 с.

78. Тащевикова, А.Ю. Равновесие, кинетика и динамика сорбции антрациклиновых антибиотиков на полимерных сорбентах: дис. ...канди. биол. наук: 03.00.23 / Тащевикова Анастасия Юрьевна. - Санк-Петербург, 2005. - 136 с.

79. Тенникова, Т.Б. Полимерные мембранные адсорбенты. Высокоэффективная мембранная хроматография белков / Т.Б. Тенникова // Тезисы докладов Всерос. Симпозиума «Биосепарация-96». - С-Петербург, 1996. - С.13-14.

80. Тривен, М. Иммобилизованные ферменты / М. Тривен - Москва: Мир, 1983. -213 с.

81. Троицкая, В.Б. Электролиты и ферменты поджелудочного сока / В.Б. Троицкая // В кн.: Руководство по физиологии. Физиология пищеварения - Ленинград: Наука, 1974. - С.339-359.

82. Тугунов, С.С. Заводское производство аморфных и кристаллических лечебных препаратов ферментов трипсина, химотрипсина и РНК-азы из панкреатической железы // С.С. Тугунов, В.Л. Константинов, С.Е. Манойлов, В.А. Дмитриева // Труды ЛХФИ, 1967. - Вып.20. - С.9-18.

83. Хиггинс, И. Биотехнология / И. Хиггинс, Д. Бест, Дж. Джонс. - Москва: Мир. 1988.-298 с.

84. Цюрупа, М.П. Поглощение окрашенных веществ из ферментационных растворов лизина сверхсшитым сорбентом / М.П. Цюрупа, В.А. Даванков, Л.Г. Кривоносова, В.Ф. Селеменов, Г.А. Чикин // Прикладная биохимия и микробиология, 1985. - Т.21, №1. - С.72-77.

85. Цюрупа, М.П. Влияние среды синтеза на физико-химические свойства макросетчатых изопористых полимеров стирола / М.П. Цюрупа, Е.А. Панкратов, В.А. Даванков // ВМС. - 1980. - Т.22Б, №10. - С.746-748.

86. Цюрупа, М.П. Структура и свойства полимерных сорбентов на основе сверхсшитого полистирола: дис. ...д-ра хим. наук / Цюрупа Мария Петровна. -Москва, 1988,- 184 с.

87. Черкасов, А.Н. Мембраны и сорбенты в биотехнологии / А.Н. Черкасов, В.А. Пасечник - Ленинград: Химия, 1991. - 240 с.

88. Шапот, B.C. Нуклеазы / B.C. Шапот,- М.: Медицина, 1968. - 212 с.

89. Шатаева, Л.К. Карбоксильные катеониты в биологии / Л.К. Шатаева, Н.П. Кузнецова, Г.Э. Елькин - Ленинград: Наука. - 1979. - 288 с.

90. Яскович, Г.А. Кинетика сорбции дезоксирибонуклеазы Actinomyces streptomycini из нативного раствора карбоксильным катеонитом КМТ / Г.А. Яскович, Е.П. Кознева, Г.Э. Елькин, В.Я. Воробьева, Г.В. Самсонов // Химико-фармацевтический журнал. - 1974. - №10. - С.47-51.

91. Aranyl, P. Sorption equilibria between proteins and cation exchangers / P. Aranyl, B. Laszlo// J.Chromatogr. - 1974. - V.89. - P.239-250.

92. Bell, D.J. Formation of Protein Precipitates and Their Centrifugal Recovery / D.J. Bell, M. Hoare M, P. Dunnill // Adv. Biochem. Eng./ Ed. Fiechter A. - Berlin, N.Y., 1983.-V.26.-P.2.

93. Ben-Nairn, A. Water aqueous solutions interactions to a molecular theory / A. Ben-Nairn - N.Y., L.: Plenum Press, 1974. - 474 p.

94. Biotechnological Applications of Proteins and Enzymes./ Ed. By: Zvi Bohak, Nathan Sharon. - N.Y., San-Francisco, London: Academic Press, 1977. - 368 p.

95. Blackburn, P. The Enzymes / P. Blackburn, S. Moore/ Ed. P.D. Boyer, 1982. -V.15.-P. 317-433.

96. Boshetti, E. Advanced sorbents for preparative protein separation purpose / E. Boshetti //J. Chromatogr.A. - 1994. - V.658. №1. - P.207-236.

97. Brooks, C.L. Proteins: A theoretical perspective of dynamics, structure and thermodynamics / C.L. Brooks - N.Y. etc.: Wiley and Sons, 1988. - 259 p.

98. Buchmeiser, M. New synthetic ways for preparation of high-performance liquid chromatography supports / M. Buchmeiser // J.Chromatogr. A. - 2001. - V.918. №2. -P.233-266.

99. Bucke, C. The biotechnology of enzyme isolation and purification / C. Bucke // In Principles of Biotechnology. - Glasgow: Blackie and Son Ltd. - P. 151-171.

100. Chen, H. High-speed high-performance liquid chromatography of peptides and proteins / H. Chen, C. Horvath // J.Chromatogr. A/ - 1995. - V.705. №1. - P.4-20.

101. Curling, J.M. Methods of plasma protein fractionation / J.M. Curling- N.Y.: Academic Press, 1980. - 532 p.

102. Davankov, V.A. Structure and properties of porous hypercrosslinked polystyrene sorbents Styrosorb / V.A. Davankov, M.P. Tsyurupa // Pure and Appl. Chem. - 1989. -V.61. №11. - P. 1881-1888.

103. Davankov, VA. Structure and properties of hypercrosslinked polystyrene sorbents - the 1st representative of a new class of polymer networks / V.A. Davankov, M.P. Tsyurupa // Reactive Polymers. - 1990. - V.13. №1. - P.27-42.

104. Desnuelle, P. In the Enzymes / P. Desnuelle // 2nd Ed. Academic Press, New York, 1960. - V.4. - P.53.

105. Ezhova, N.M. The new approach to constructing of the grain network polymers with ionogenic groups on surface layer / N.M. Ezhova, I.S. Garcushina, A.Y. Toshchevikova, I.V. Polykova, O.A. Pisarev // 4-th International Symposium "Molecular Order and Mobility in Polymer Systems". - 2002. - P.32.

106. Glazova, N.V. Chromatographic purification of enzyme medicines from macromolecular impurities / N.V. Glazova, L.M. Igonina, G.E. Elkin // Marcomolecular Symposia. - Braticlava, - 1995.

107. Glazova, N.V. Sorption technology protein medicines including of non-equilibrium chromatographic effects / N.V. Glazova // 10-th International Symp. of Chromatography in Industry - Bratislava, 1996. - P. 173-174

108. Gozzini, L. High performance liquid chromatography in protein and peptide chemistry / L. Gozzini, P.C. Montecucchi - Berlin, N.Y.: Walter de Gruyter. - 1981. -365 p.

109. Granbender, G.C. Protein precipitation: analysis of particle size distribution and kinetics / G.C. Granbender, C.E. Glatz // Chem. Eng. Commun. - 1981. - V. 12. - P.203.

110. Jansen, J.C. Large scale chromatography of proteins / J.C. Jansen, P. Hedman // Advances in Biochemical Engineering/ - 1982. V.25. - P. 43-49.

111. Josic, D. Practical aspect of modern HPLC / D. Josic, W. Reutter, I. Molnar -Berlin, N.Y.: Walter de Gruyter, 1982. - 123 p.

112. Kalghatgi, K. Rapid peptide mapping by high-performance liquid chromatography / K. Kalghatgi, C. Horvath // J.Chromatogr.A - 1988. - V.443. №2. - P.343-354.

113. Karlston, B. A simple purification method of squeezed krill for obtaining high levels of hydrolytic enzymes / B. Karlston, J. Vincent, B. Jochanson, C. Bryno // Prep.Biochem. - 1991. - V.21, №4. - P. 237-256.

114. Leonard, M. New packing materials for protein chromatography / M. Leonard // J.Chromatogr. - 1997. - V/699. №1. - P.3-27.

115. Liapis, A.I. Affinity adsorption separation in high-performance liquid chromatography and perfusion chromatography system. The effects of pore-size distribution and fractal pores on column performance / A.I. Liapis // Math. Modeling. Sci. Comput. - 1993. - V.l. - P.397-414.

116. Millar, J.R. Solvent-modified polymer networks. Part I. The preparation and characterization of expanded network and macroporous styrene-divinylbenzene copolymers and their sulphonates / J.R. Millar, D.G. Smith, W.E. Marr, T.R.E. Kressman//J. Chem. Soc. - 1963. - P.218-225.

117. Millar, J.R. Solvent-modified polymer networks. Part II. Effection of structure on cation-exchange kinetics in sulphonated styren-divinylbenzene copolymers / J.R. Millar, D.G. Smith, W.E. Marr, T.R.E. Kressman // J. Chem. Soc. - 1963. - P.2779-2784.

118. Millar, J.R. Solvent-modified polymer networks. Part III. Cation-excgange equilibria with some univalent inorganic and organic ions / J.R. Millar, D.G. Smith, W.E. Marr, T.R.E. Kressman//J. Chem. Soc. - 1964. - P,2740-2744.

119. Millar, J.R. Solvent-modified polymer networks. Styrene-divinylbenzene copolymers made in presence of non-solvating diluents / J.R. Millar, D.G. Smith, T.R. Kressman//J.Chem.Soc. - 1965. - P.304-310.

120. Moore, S. Chemical structure of pancreatic ribonuclease and deoxyribonuclease / S. Moore, W.H. Stein // Science/ - 1973. - V. 180, № 4085. - P. 458-464.

121. Morita, T. Distribution of a kidney acid-ribonuclease-like enzyme and the other ribonucleases in bovine organs and body fluids / T. Morita, A. Sanda, Y. Takizava, K. Ohgi, K. Irie // Agr. Biol. Chem. - 1987. - V.51. - P.2751-2761.

122. Nash, D.C. Modification of polystyrenic matrices for the purification of proteins. Effects of poly(vinylalcohol)modification on the characteristics protein adsorption on conventional and perfusion polystyrenic matrices / D.C. Nash., H.A. Chase H.A. // J.Chromatogr. - 1997. - V.776. №1. - P.65-73.

123. Optimization of Chromatographic Selectivity.// Ed. Peter G. Schoenmakers. -Amsterdam etc., 1986.

124. Paul, A.B. Bioseparations: Downstream processing for biotechnology / A.B. Paul, E.L. Cusseler - N.Y. etc.: Wiley and Sons, 1988. -XVI, 368 p.

125. Pelzbauer, Z. Morphology of polymeric sorbents based on glycidyl methacrylate copolymers / Z. Pelzbauer, J. Lukas, F. Svec, J. Kadal // J.Chromatogr. - 1979. - V.171, №1. - P. 101-107.

126. Proteases and antiproteases // American J. of respiratory and critical care medicine/ - V/150,№6.-P.2.

127. Protein Missassembly // Ed. By R. Wetzel. - San Diego etc.: Academic Press, 1997.-XX, 282 p.

128. Ravindranath, B. Principles and practice of chromatography / B. Ravindranath -Chichester: Horwood; N.Y. etc.: Halsted Press, 1989. - 502 p.

129. Recovery and Purification of Bioproducts.// Ed. M.-R.Kula, Steven M. Cramer. -N.Y. etc.: Wiley, 1995. - P. 301-427, 429-555.

130. Richards, F.M. Bovine pancreatic ribonuclease / F.M. Richards, H.G. Wichoff // The Enzymes/ Ed. Boyer P.D. - New York: Academic Press, 1971. - V.4. - P. 647-806.

131. Richards, F.M. Atlas of molecular structures in biology / F.M. Richards, H.G. Wichoff- Oxford: Clarendon Press, 1973. - V.l. - 369 p.

132. Rodrigues, A. Permeable packing and perfusion chromatography in protein separation / A. Rodrigues //J.Chromatogr.B - 1997. - V.699. №1. - P.47-61.

133. Samsonov, G.V. Sorption and chromatography of organic ions / G.V. Samsonov, G.E. Elkin // In: Marinsky J.A.; Marcus J. (eds) Ion Exchange and Solvent Extraction. Dekker.Inc.N.Y. - 1985. - V.9. - P.211-301.

134. Sewell, P.A. Chromatographic separations / P.A. Sewell, B. Clarke - London: Chichester etc.: Wiley and sons on behalf of ACOL, Thames Polytechnic, 1987. - XX, 333 p.

135. Svec, F. Modified poly(glycidyl methacrylate-co-ethylene dimethacrylate) continuous rod columns for preparative scale ion-exchange chromatography of proteins / F. Svec, J.M.J. Frechet // J. Chromatogr. - 1995. - V.702A. - P.89-95.

136. Tanford, C. The hydrophobic effect. Formation of micelles and biological membranes / C. Tanford - N.Y.: Willey-Interscience, 1973. - 200 p.

137. Tennikova T.B., Svec ¥.// J. Chromatogr., 1992. - V.590. - P.353.

138. Tsyurupa, M.P. Hypercrosslinked polymers: basic principle of preparing the new class of polymeric materials / M.P. Tsyurupa, V.A. Davanov // Reactive Polymers / 2002. - V.53. №2. - P. 193-203.

139. Ultrafiltration, Membranes and Application.// Ed. By A. Cooper. - N.Y.: Plenum Press, 1980.-705 p.

140. Unger, K.K. Packing and Stationary Phases In Chromatographic Techniques / K.K. Unger // N.Y., 1990.-252 p.

141. Unger, K.K. Evaluation of advanced silica packing for the separation of biopolymers by high-performance liquid chromatography. Performance of non-porous monodisperse 1.5 (xm silica beads in separation of proteins by reverse-phased gradient elution high-performance liquid chromatography / K.K. Unger, G. Jilge, J.N. Kinkel, M.T.W. Hearn // J.Chromatogr.A. - 1986. - V.359. №1. - P.61-72.

142. Wang, Q.C. Reversed-phase chromatography of small molecules and peptides on a continuous rod of macroporous poly (sterene-co-divinulbenzene) / Q.C.Wang, F. Svec, J.M.J. Frechet / J. Chromatogr. - 1994. - V.669. - P.230-235.

143. Wolf, M. Enzyme-therapy / M. Wolf, K. Ransberger - New York: Vantage Press, 1972.-232 p.

144. Zhao, W. Ribonucleases from rat and bovine liver: purification, specifity and structural characterization / W. Zhao, Z. Kote-Jarai, Y. van Santen, J. Hofsteenge, J.J. Beintema // Biochem. Et Biophys. Acta.Protein Struct. And Molecular/ Enzymol. -1998. - V.1384, №1. - P.55-65.