Совершенствование методов спектрофотометрического и хроматографического анализа перхлозона, рифабутина и теризидона тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Коновалова Светлана Сергеевна

• Коновалова Светлана Сергеевна
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Коновалова Светлана Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика и методы анализа Перхлозона

1.2. Общая характеристика и методы анализа Рифабутина

1.3. Общая характеристика и методы анализа Теризидона

Выводы по главе

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объекты и методы исследования

2.2. Методики исследований

ГЛАВА 3. ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ИССЛЕДУЕМЫХ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЁЗНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ МЕТОДАМИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ И ХРОМАТОГРАФИИ

3.1 Разработка методик спектрофотометрического определения исследуемых препаратов

3.1.1. Изучение оптических свойств перхлозона, рифабутина и теризидона39

3.1.2. Выбор внешнего оптического образца сравнения

3.1.3. Разработка методик количественного определения с применением внешнего оптического образца сравнения

3.2 Оптимизация условий количественного анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием микроколоночного хроматографа «Милихром А-02» с УФ-детектором

Выводы по главе

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ИЗОЛИРОВАНИЯ ПЕРХЛОЗОНА, РИФАБУТИНА И ТЕРИЗИДОНА ДЛЯ ЦЕЛЕЙ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

4.1. Теоретическое прогнозирование оптимального значения рН среды для экстракции

4.2. Изучение влияния природы органического растворителя на экстракцию

4.3. Влияние присутствия электролита

4.4. Время и кратность экстракции

4.5. Апробация разработанных методик для изолирования исследуемых препаратов из биологических объектов

Выводы по главе

ГЛАВА 5. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЁЗНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ С ПРЕПАРАТАМИ ДРУГИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ГРУПП МЕТОДАМИ ХРОМАТОГРАФИИ ПРИ КОМБИНИРОВАННОМ ОТРАВЛЕНИИ

5.1. Разделение и идентификация комбинированных сочетаний противотуберкулёзных препаратов методом хроматографии в тонком слое сорбента

5.2. Разделение и идентификация комбинированных сочетаний противотуберкулёзных препаратов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Выводы по главе

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование методов спектрофотометрического и хроматографического анализа перхлозона, рифабутина и теризидона»

ВВЕДЕНИЕ

Проблема лекарственно-устойчивого туберкулёза не теряет своей актуальности по всему миру. Меры, направленные на снижение заболеваемости не имеют должного эффекта в условиях стремительно развивающейся устойчивости микобактерий к существующим препаратам [1, 2, 6, 33, 40, 41]. Данный факт побуждает фармакологов изыскивать новые препараты, обладающие противотуберкулёзным действием, а фтизиатров подбирать эффективные комбинации из существующих лекарственных средств [53, 55].

В процессе терапии одновременно могут быть назначены 5 и более препаратов, а общая длительность лечения превышать 20 месяцев. Введение вместо препаратов стандартной терапии резервных, обладающих большей токсичностью и их длительный приём значительно повышают риск возникновения негативных последствий для организма (таких как токсический гепатит, нефротоксические реакции, нейропсихологические реакции) [2, 6, 9, 33, 39, 55, 66].

Объектами данного исследования стали противотуберкулёзные препараты рифабутин, перхлозон и теризидон на данный момент активно применяющиеся для лечения широко и множественно устойчивого туберкулёза. Рифабутин -бактерицидный антибиотик ряда ансамицинов [62, 74]. Перхлозон -противотуберкулёзное средство бактериостатического действия [7, 44, 63, 65]. Теризидон - бактериостатический антибиотик широкого спектра действия [1, 69, 89].

Качество лекарственных препаратов является его основополагающей характеристикой. Именно от него зависит эффективность и безопасность препарата. В терапии туберкулёза это особенно важно, так как нарушения режима дозирования, вследствие заниженного или завышенного содержания действующего вещества, в сочетании с множеством прочих факторов может стать причиной развития лекарственно-устойчивых форм заболевания, крайне сложно поддающихся лечению [1, 6, 41].

Методы, используемые для целей фармацевтического анализа, различны. Но все же наибольшую распространённость в современном мире приобрели -методы, основанные на физико-химических процессах. Использование спектральных и хроматографических методов анализа в области контроля качества лекарственных средств с каждым годом становится более широким, что позволяет обеспечить высокую специфичность и чувствительность анализа.

Методы, рекомендованные НД требуют применения импортного оборудования и стандартных образцов (СО) произведённых по требованиям Американской (ШР RS) и Европейской фармакопеи (ЕР CRS). С учётом того, что субстанции, как и государственные стандартные образцы (ГСО) рифабутина и теризидона не производятся на территории России, их доступность для российских лабораторий в условиях санкций ограничена. Несмотря на то, что перхлозон разработан и производится в России, ГСО на данный препарат так же не выпускается. Таким образом, разработка новых и совершенствование существующих методик обнаружения и количественного определения перхлозона, рифабутина, теризидона с использованием отечественного оборудования и стандартных образцов фирм является актуальной задачей.

Для целей фармацевтического анализа активно применяются оптические методы. К их преимуществам можно отнести высокую чувствительность и воспроизводимость, простоту выполнения, меньшую токсичность используемых реактивов. Возможность замены необходимых для осуществления определения ГСО на внешние оптические образцы сравнения делает их более доступными и экономически выгодными.

Сведения о химико-токсикологическом анализе исследуемых лекарственных средств как при противотуберкулёзной терапии, так и в комбинации с препаратами других фармакологических групп в литературных источниках отражены в недостаточной степени. Следовательно, разработка методик выделения, обнаружения и количественной оценки перхлозона, рифабутина, теризидона из биологических объектов имеет большое значение для химико-

токсикологического и судебно-химического анализа исследуемых лекарственных препаратов, а также терапевтического мониторинга.

Кроме того, разработка методик для определения изучаемых препаратов одновременно в различных матрицах (фармацевтические композиции, биологические жидкости) позволит оптимизировать анализ и уменьшить время, затрачиваемое на исследования. Все это подчёркивает актуальность и необходимость проведения масштабных исследований в данной области, направленных на решение обозначенной проблемы.

Степень разработанности темы исследования. Применение в медицинской практике противотуберкулёзных препаратов - значительная область исследований, представленная в российских и зарубежных источниках, но фармацевтические исследования встречаются реже.

Использование физико-химических методов и их комбинаций с целью фармацевтического анализа наиболее широко представлено для рифабутина и теризидона в иностранных источниках. Основным методом, предлагаемым для контроля качества рифабутина в российской [52, 58] и зарубежной нормативной документации [73, 78, 81, 98], является ВЭЖХ. В качестве альтернативных описаны методики капиллярного зонного электрофореза [16], вольтамперометрического титрования [71], высокоэффективной тонкослойной хроматографии [70] и фотометрии в видимой области [83]. Для теризидона рекомендованы потенциометрическое титрование [54], варианты спектрального анализа [37, 68, 80, 82], а также ВЭЖХ [49, 79, 91] и высокоэффективной тонкослойной хроматографии [72].

Методики оценки качества перхлозона приведены только в отечественной нормативной документации, рекомендующей СФМ с использованием удельного показателя поглощения для субстанции [46] и ВЭЖХ для лекарственной формы [47].

Описанные методики значительно отличаются подходами к пробоподготовке, используемыми приборами, детекторами и реактивами, требуют

стандартных образцов, часто отсутствующих или не имеющими аналогов в российском реестре государственных стандартных образцов (ГСО).

Сведений в области химико-токсикологического анализа по всем исследуемым препаратам недостаточно. Встречаются разрозненные данные об обнаружении в биологическом материале (плазма крови человека) перхлозона [17, 38, 42, 50], рифабутина [76, 77, 92] и теризидона [90], а также в плазме крови и органах крыс [32, 34, 64, 93]. Однако данные систематических химико-токсикологических исследований и в том числе, использование для этих целей других биологических объектов в литературе не представлено.

Таким образом, целесообразно провести комплексные исследования перхлозона, рифабутина и теризидона для оптимизации методик фармацевтического и химико-токсикологического анализа. Исходя из всего вышесказанного, нами были сформулированы цель и задачи диссертационной работы.

Цель. Оптимизировать оптические и хроматографические методы, применяемые для фармацевтического и химико-токсикологического анализа препаратов противотуберкулезного действия перхлозона, рифабутина и теризидона.

Задачи исследования:

1. Обосновать применение ВООС для спектрофотометрического определения содержания перхлозона, рифабутина, теризидона в субстанциях и ЛФ. Сформировать унифицированные методики данного варианта контроля качества исследуемых ЛС и подготовить проекты изменений ФСП для анализируемых объектов.

2. Определить условия идентификации и оценки содержания действующего вещества в ЛФ, содержащих перхлозон, рифабутин, теризидон для хроматографа российского производства «Милихром А-02». Разработать проекты изменений ФСП применения новых методик для количественного определения. Провести сравнительную оценку результатов, получаемых с использованием разработанных методик хроматографии и спектрофотометрии.

3. Разработать условия разделения и методики идентификации перхлозона, рифабутина, теризидона сочетаемых с ЛП для терапии сопутствующих заболеваний в извлечениях из матриц биологического происхождения методами ТСХ и ВЭЖХ.

4. Выявить влияние различных параметров на выделение перхлозона, рифабутина, теризидона из водных растворов.

5. Разработать оптимальную методику выделения перхлозона, рифабутина, теризидона из объектов анализа биологической природы, а также методики их обнаружения и количественного определения в извлечениях методами ТСХ и ВЭЖХ.

Научная новизна работы. Экспериментально изучены и научно обоснованы условия спектрального определения перхлозона, рифабутина и теризидона (значение показателя рН среды, растворитель, аналитическая длина волны, оптимальная концентрация, ВООС) в субстанциях и фармацевтических композициях с применением оптических образцов сравнения.

Изучены особенности и разработаны унифицированные методики хроматографического определения исследуемых веществ в фармацевтических композициях с применением жидкостного микроколоночного хроматографа с УФ-детектором российского производства «Милихром А-02» (условия разделения: колонка 2 x 75 мм, заполненная сорбентом ProntoSIL-120-5 C18 AQ, подвижная фаза смесь аммония ацетата раствора 0,02 M (pH 6,5) и ацетонитрила, в соотношении 30:70 и 85:15 для перхлозона и рифабутина соответственно, смесь 0,1 % раствора ТФУ в воде и 0,1 % раствора ТФУ в ацетонитриле в соотношении 75:25 для теризидона, режим изократический, скорость потока 150 мкл/мин, температура колонки 35 0С).

Исследована вариативность степени изолирования перхлозона, рифабутина и теризидона под действием разных условий (органический растворитель, показатель рН среды, время и кратность экстракции) и разработаны оптимальные методики извлечения их из водных растворов и биообъектов мочи, слюны, плазмы крови, печени и лёгких методом жидкость-жидкостной экстракции.

Экспериментально установлено, что перхлозон наиболее эффективно изолируется этилацетатом при рН=10,0 в течение 3 минут, трехкратно; рифабутин -дихлорметаном при рН=2,0 в присутствии натрия хлорида насыщенного, в течение 3 минут, однократно; теризидон - этилацетатом при рН=3,0 в присутствии натрия сульфата насыщенного, в течение 5 минут, однократно.

Впервые изучена хроматографическая подвижность исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств и препаратов сопутствующей терапии в различных системах растворителей, выбрана система растворителей состава диоксан - хлороформ - ацетон - 25 % раствор аммиака (40:40:6:3) позволяющая обеспечить разделение перхлозона, рифабутина и теризидона в комбинациях с фтивазидом, пиразинамидом, линезолидом, левофлоксацином, анальгином, абакавиром, протионамидом, амитриптиллином, диазепамом, аминазином, фенобарбиталом и циннаризином методом хроматографии в тонком слое сорбента.

Разработаны условия разделения и идентификации перхлозона, рифабутина и теризидона при сочетании с другими противотуберкулезными противомикробными, антиретровирусными, психотропными, седативными и обезболивающими средствами в извлечениях из биообъектов мочи, слюны, плазмы крови, печени и лёгких методом ВЭЖХ на отечественном хроматографе «Милихром А-02» (условия разделения: колонка 2 х 75 мм, заполненная сорбентом ProntoSIL-120-5-C18 AQ, подвижная фаза: смесь элюэнтов: А -водного раствора перхлората лития 0,2 М и Б - ацетонитрила, линейный градиентный режим элюирования, 3800 мкл от 20 % Б до 60 % Б. Скорость подачи подвижной фазы 150 мкл/мин, температура колонки 35 0С).

Практическая значимость. По результатам исследований разработаны и предложены: 8 методик количественного определения перхлозона, рифабутина и теризидона СФ методом в субстанциях и лекарственных формах с применением калия дихромата, калия феррицианида, фенолфталеина в качестве оптических образцов сравнения; 3 методики количественного определения перхлозона, рифабутина и теризидона в лекарственных формах методом ВЭЖХ; 3 методики

экстракции перхлозона, рифабутина и теризидона из модельных смесей биологических объектов с помощью ЖЖЭ; методики установления совместного присутствия перхлозона, рифабутина и теризидона с фтивазидом, пиразинамидом, линезолидом, левофлоксацином, протионамидом, абакавиром, амитриптилином, аминазином, фенобарбиталом, циннаризином, анальгином в извлечениях из биологических объектов методами ТСХ и ВЭЖХ.

Степень внедрения. Разработанные методики апробированы и внедрены в практику работы судебно-химического отделения ГБУЗ «Иркутское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (г. Иркутск), в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии ФГБОУ ВО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ. Получено 15 актов апробации и внедрения результатов данной работы. Получен патент РФ на изобретения «Способ определения в моче, слюне и плазме крови лекарственных веществ». Предложены проекты изменения ФСП на указанные лекарственные средства.

Положения, выносимые на защиту:

- Обоснование параметров контроля качества и формирование методик оценки содержания перхлозона, рифабутина и теризидона методами спектрофотометрии с использованием ВООС и ВЭЖХ и их валидация;

- Данные об особенностях изолирования и методики экстракции перхлозона, рифабутина и теризидона из растворов с учётом влияния природы извлекающего агента, значения показателя рН среды, присутствия электролита, времени контакта и кратность обработки извлекающим агентом, а также из модельных образцов биологических объектов;

- Результаты изучения хроматографической подвижности, условий разделения и идентификации перхлозона, рифабутина и теризидона в комбинированных сочетаниях с препаратами сопутствующей терапии в извлечениях из биологических объектов методами ТСХ и ВЭЖХ.

Личный вклад автора. Автором лично выполнены все этапы работы, охватывающие подбор и критический анализ литературных источников по теме

исследования, сформулированы цели и задачи, планирование и осуществление эксперимента, обобщение полученных данных и их статистическая обработка, разработка, валидация методик. Автором сформированы обобщённые выводы, которые были отражены в статьях и доложены на конференциях. Оформлены диссертация и автореферат, представленные к защите.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертационной работы соответствуют паспорту специальности 3.4.2 - «фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведённых исследований соответствуют пунктам 2, 3, 4 паспорта специальности.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Совершенствование системы фармацевтической помощи, методов получения, анализа и стандартизации лекарственных средств растительного и синтетического происхождения» № 123021600223-0 и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии.

Апробация работы. Основные результаты диссертации были доложены и обсуждены на: Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновационные технологии в фармации» (Иркутск, 2021, 2022, 2024 г.г.); Всероссийской студенческой научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы фармацевтических и естественных наук» (Иркутск, 2021, 2022, 2023 г.г.); XVII Международной (XXVI Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых учёных (Москва 2022, 2024); VI Дальневосточном медицинском молодёжном форуме (Хабаровск, 2022, 2024); Всероссийской научно-практической конференции студентов и молодых учёных с международным участием «Природные соединения и здоровье человека» (Иркутск, 2023); Международном молодёжном форуме, посвящённом 85-летию СтГМУ «Неделя науки-2023» (Ставрополь, 2023); 91-й Всероссийской Байкальской научно-практической конференции молодых учёных и студентов с

международным участием «Наука, как искусство» (Иркутск, 2024 г.); Всероссийском инновационном форуме с международным участием «Фармация: шаг в будущее» (Тюмень, 2024).

Публикации. Основные результаты проведённых исследований отражены в 18 научных трудах, из них 3 статьи в ведущих изданиях, рекомендованных ВАК Министерства науки и высшего образования РФ и 1 патент РФ на изобретение.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертационной работы изложены на 163 страницах компьютерного текста, содержат 59 таблиц и 40 рисунков. Работа включает введение, обзор литературы (глава 1), 3 главы экспериментальной части, общие выводы и список литературных источников, объединяющий 99 наименований, из них - 67 отечественных и 32 зарубежных. В приложениях представлены материалы по внедрению и апробации разработанных методик.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Туберкулёз сложно излечимое инфекционное заболевание, остающееся важнейшей проблемой глобального здравоохранения. По мере развития медицины были открыты более 20 препаратов, эффективно воздействующих на возбудителя - микобактерии туберкулёза. В соответствии с наиболее распространённой классификацией, препараты разделены на два ряда - первого (основного) и второго (резервного) ряда. Лечение начинают с препаратов первой группы, далее в случае неэффективности, вызванной лекарственной резистентностью возбудителя вводят препараты второго ряда. Среди исследуемых ЛС, рифабутин относится к основной группе препаратов, а перхлозон и теризидон к резервному ряду [53, 55].

За время в течении которого известен туберкулёз, опубликовано достаточно различных сведений, касающихся создания и изучения лекарственных препаратов, терапии, выявления нежелательных побочных реакций, контроля концентраций препаратов в органах и тканях человека и лабораторных животных.

Далее будут рассмотрены сведения, касающиеся объектов исследования -перхлозона, рифабутина, теризидона, методов, применяемых для контроля их качества.

1.1. Общая характеристика и методы анализа Перхлозона

Тиоуреидоиминометилпиридиния перхлорат - отечественная разработка, относящаяся к классу органических соединений, обладающая высокой противотуберкулёзной активностью, препарат которому было присвоено название «Перхлозон». Активность против микобактерии у данного соединения была обнаружена при проведении скрининга, осуществлённого в 80-х годах ХХ века в лаборатории экспериментального туберкулёза и новых медицинских технологий при Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте

фтизиопульмонологии Министерства здравоохранения Российской Федерации (Спб НИИФ) [44]. Лечебная активность на модели экспериментального лекарственно - чувствительного туберкулёза, сопоставимой с существующими на то время лекарственными средствами, была подтверждена на двух видах животных (мыши и кролики), что впоследствии стало основанием для синтеза в

Иркутском институте химии СО РАН им. А.Е. Фаворского. Совместно с АО «Фармасинтез» была усовершенствована технология синтеза субстанции и разработана технология получения лекарственной формы - таблеток, покрытых оболочкой. В дальнейшем препарат успешно прошёл доклинические и клинические испытания и в 2012 году был зарегистрирован в Российской Федерации [7, 44, 63]. На данный момент выпускается фармацевтическим заводом АО «Фармасинтез» в виде таблеток, покрытых оболочкой двух дозировок 200 и 400 мг.

Перхлозон активен против Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis, обладает выраженным бактериостатическим действием, рекомендован для лечения МЛУ и ШЛУ туберкулёза в составе комбинированной терапии [51]. По данным литературы [55], перхлозон быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте. Время достижения максимальной концентрации в крови составляет 1,5-3 часа, период полувыведения - 12-27 часов. Механизм бактериостатического действия на данный момент не установлен [51].

Среди побочных эффектов наиболее распространённые лихорадка до 38 0С, гипотиреоз, головокружение, головная боль, слабость, потеря сознания, сонливость/нарушения сна, нейропсихические реакции (агрессия, депрессия), периферическая нейропатия, артралгии, гепатит, диспепсические явления, отёчность лица, век, аллергические реакции [43, 51, 55, 65, 66].

В комбинациях с другими противотуберкулёзными препаратами (изониазидом, амикацином, рифабутином, рифампицином) отмечается усиление активности в отношении микобактерий туберкулеза [55].

По структуре (рис. 1) перхлозон является солью производного тиосемикарбазона изоникотинового альдегида.

Методы анализа, предложенные НД для контроля качества перхлозона, включают ИК-спектроскопию, УФ-спектрофотометрию для установления подлинности и УФ-спектрофотометрию с использованием удельного показателя поглощения для количественной оценки препарата в субстанции [46] и ВЭЖХ для лекарственной формы [47].

Рисунок 1 - Структурная формула тиоуреидоиминометилпиридиния перхлората

(перхлозона)

(название по ШРАС 2-(пиридин-4-илметилиден)гидразин-1-карботиоамида

перхлорат) [46]

В отечественных литературных источниках приводятся методики определения перхлозона только в плазме крови человека [17, 38, 42, 50]. Сведения о применении данного препарата и контроле его качества в других странах в литературе отсутствуют.

Особенности применения различных методов представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Условия определения перхлозона различными методами

Метод Условия определения

УФ-СФМ НД 001704-011117 [46] Измеряют оптическую плотность раствора 0,0000056 мг/мл в 60 % спирте, при длине волны 317 нм. Расчет результатов относительно удельного показателя поглощения.

ВЭЖХ ФСП ЛП-001899-070920 [47] Жидкостный хроматограф с УФ-детектором; Колонка: Inerstil ODT-3V, 250x4,6 мм, с размером пор 5 мкм; Температура колонки: 35 0С; Элюент: Ацетонитрил : 2 % раствор уксусной кислоты (5:95) Скорость потока: 1 мл/мин; Объем инжекции: 10 мкл; Длина волны детектирования: 246 нм; Время анализа: 8 мин.

ВЭЖХ с МС и УФ-детектированием [42] Жидкостный хроматограф Agilent 1200; Детектор: масс-спектрометрический квадрупольный Agilent 6120; мультиволновой спектрофотометрический; Колонка: Agilent «ZORBAX SB C18 5 мкм, 150 х 2,1 мм» c предколонкой «ZORBAX SB C18 5мкм, 35 х 2,1мм»; Температура колонки: 40°С; Элюент: Ацетонитрил : 0,1 % раствор трифторуксусной кислоты (рН=2,6) (85:15); Скорость потока: 1 мл/мин; Объем инжекции: 20 мкл; Время анализа: 5 минут; время удерживания перхлозона - 3,05 мин.

Ион-парная ВЭЖХ c Жидкостный хроматограф WatersAlliance 2695 с диодноматричным

УФ-детектированием детектором 2998;

[17, 38, 50] Колонка: «ZORBAX Eclipse Plus C18 5мкм, 150 x 4,6 мм» с

предколонкой «ZORBAX Eclipse Plus C18 5 мкм, 12,5 x 4,6 мм»;

Температура колонки: 25 оС;

Элюент: 50 мМ фосфатный буфер с 5 мМ октансульфонатом натрия

(рН=2,50) : ацетонитрил (85:15);

Скорость потока: 1 мл/мин;

Объем инжекции: 50 мкл;

Длина волны детектирования: 347±4 нм;

Время анализа: 8 минут, время удерживания перхлозона 5,4 мин.

В своей работе А. М. Власов и др. предлагают использовать метод ВЭЖХ с масс-спектрометрическим и УФ-детектированием [42]. В качестве пробоподготовки описана экстракция ацетонитрилом с последующим центрифугированием, сухой остаток полученный после испарения фугата растворяли в подвижной фазе и хроматографировали.

В исследованиях Карлиной В. Ю. предложен метод ион-парной ВЭЖХ с УФ-детектированием, перхлозон обнаруживали в крови пациентов на фоне приёма других противотуберкулёзных препаратов [17, 38, 50]. В данном случае применяли предварительное осаждением белков в образце трифторуксусной кислотой (ТФУ), центрифугирование и использование полученного фугата для исследований. В качестве стандартного раствора во всех определениях использовался раствор субстанции перхлозона - стандарт фирмы (ООО «БратскХимСинтез»).

Обобщая приведённые данные для контроля качества перхлозона предложены два вида методов: СФМ и ВЭЖХ. Однако спектрофотометрический метод с применением удельного показателя поглощения, в отличие от сравнения со стандартным образцом, имеет большую погрешность анализа, достигающую 18 % [11]. Предложенные варианты метода ВЭЖХ подразумевают использование дорогостоящего импортного оборудования, имеют различные подходы как к условиям поведения анализа, так и способам пробоподготовки [17, 38, 42, 47, 50].

1.2. Общая характеристика и методы анализа Рифабутина

Рифабутин, ранее называвшийся ансамицин или LM 427, был открыт итальянскими учёными в 1975 году и зарегистрирован в 1992 году под торговой маркой «Микобутин» [62].

Рифабутин, представляет собой спиро-пиперидил-рифамицин, который имеет многие свойства препаратов семейства рифамицинов, но имеет гораздо более узкий диапазон показаний по сравнению с рифампицином [74].

Основу антибактериального действия рифабутина, как и других рифамицинов составляет процесс ингибирования ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактерий и последующее нарушение синтеза белка микробной клеткой [33, 62]. Этот механизм происходит даже в течение коротких периодов микробного метаболизма, что может объяснить уникальную активность рифамицинов при латентных инфекциях [74].

Рифабутин обладает широким спектром антибактериального действия, оказывает выраженное бактерицидное действие в отношении обширного диапазона микробной флоры, особенно на типичные и атипичные кислотоустойчивые микобактерии, а также на широкий спектр не специфических патогенных микроорганизмов [33]. Однако показания к применению рифабутина долгое время ограничивались лечением микобактериальных инфекций [33, 74].

Рифабутин быстро всасывается из кишечника, приём пищи не влияет на количество всасываемого препарата. Максимальная концентрация рифабутина в плазме крови наблюдается через 2-4 часа после приёма. Препарат эффективно распределяется в различных тканях в связи с его высокой растворимостью в липидах, наибольшая его концентрация отмечается в печени и в лёгких [33]. Среди наиболее часто регистрируемых побочные эффектов увеит, нейтропения, диспепсические реакции, полиартралгия, гепатит [55, 74].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Коновалова Светлана Сергеевна, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Баденикова, К. А. Социально-экологические и токсикологические аспекты лечения туберкулеза / К. А. Баденикова, Г. Г. Юшков // Вестник Ангарской государственной технической академии. -2010. -№. 4. - C. 71-74.

2. Барканова, О. Н. Коррекция неблагоприятных побочных реакций при химиотерапии туберкулеза / О. Н. Барканова, С. Г. Гагарина, А. А. Калуженина, Н. Л. Попкова // Лекарственный вестник. - 2021. - Т. 15, №. 1.-С. 17-23.

3. Вергейчик, Т. Х. Токсикологическая химия / Т. Х. Вергейчик; под ред. проф. Е.Н. Вергейчик. -М.: МЕДпресс-информ, 2013. -432 с.

4. Гончикова, Ю. А. Совершенствование методов анализа антиретровирусных лекарственных средств : дис. ...канд. фарм. наук: 14.04.02. - Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН. - Улан-Удэ, 2018.-188с.

5. Государственная фармакопея Российской Федерации / МЗ РФ. XV изд. М., 2023. [Электронный ресурс]. - URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/ (дата обращения: 30.05.2025).

6. Денисюк, Д. А. Сукачинская Н. В., Самко Г. Н. Фармакотерапия лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза в Приднестровье // Сборник научных трудов по материалам V Международной научн.-практ. конф. «Фармакология разных стран», посвящённой 85-летию кафедры Курского государственного медицинского университета и 10-летию Института международного образования Харбинского медицинского университета : сб. науч. трудов. Курск, 2022. - С. 105-111.

7. Доклинические и клинические исследования нового противотуберкулёзного препарата перхлозон / П. К. Яблонский [и др.] // Терапевтический архив. -2016.-Т. 88, №3.-С. 111-115.

8. Зевацкий, Ю. Э. Фотоэмиссионный метод измерения спектров для спектрофотометрического определения констант ионизации / Ю. Э. Зевацкий, Д. В. Самойлов // Известия Санкт-Петербургского государственного

технологического института (технического университета). - 2009. - № 6. -С. 44-49.

9. Иванова, Д. А. Отменить или подождать ? : Показания к отмене противотуберкулезных препаратов при нежелательных реакциях / Д. А. Иванова, С. Е. Борисов // Туберкулёз и болезни лёгких. - 2018. - Т. 96, № 2. - С. 47-54.

10. Илларионов, А. И. Оптические образцы сравнения в спектрофотометрическом анализе органических соединений : учебное пособие. / А. И. Илларионов, Е. А. Илларионова, И. П. Сыроватский. - Иркутск, 2008. - 151 с.

11. Илларионова, Е. А. Модифицированный метод сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств / Е. А. Илларионова, И. П. Сыроватский, Т. В. Плетенева // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. - 2003 - № 5 - С. 66-70.

12. Илларионова, Е. А. Новый вариант спектрофотометрического определения слабоокрашенных производных пиридина / Е. А. Илларионова, И. П. Сыроватский, Л. В. Абрамова // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2002. - Т. 68, № 2. - С. 9-13.

13. Илларионова, Е. А. Оптические характеристики внешних образцов сравнения для СФ / Е. А. Илларионова, И. П. Сыроватский, Е. М. Артасюк // Труды VII междунар. школы-семинара. Люминисценция и лазерная физика: Иркутск, 2003.-С. 87-93.

14. Илларионова, Е. А. Совершенствование спектрофотометрического и хроматографического методов анализа азотсодержащих лекарственных средств: дис. ...д-ра хим. наук: 21.01.2005 / Е. А. Илларионова. - М.: Российский университет дружбы народов, 2004. - 379 с.

15. Илларионова, Е. А. Спектрофотометрическое определение 7-[2-окси-3(№ метил-оксиэтиламино)-пропил]-теофиллина никотината с применением бихромата калия / Е. А. Илларионова, И. П. Сыроватский, Л. В. Абрамова // Известия ВУЗов. Серия: Химия и химические технология. - 2001. - Т. 44, № 4. -С. 7-10.

16. Исследование межмолекулярного взаимодействия в системе рифабутин-гидроксипропил-Р-циклодекстрин методом аффинного капиллярного электрофореза / А. В. Аншакова [и др.] // Успехи в химии и химической технологии. - 2015. - Т. 29, № 1 (160). - С. 22-24.

17. Карлина, В. Ю. Исследование фармакокинетики оригинального противотуберкулезного препарата «Перхлозон»: дис. ...канд. фарм. наук.: 14.04.02. - Первый медицинский университет им. И. М. Сеченова. - Москва, 2017. - 127 с.

18. Компанцева, Е. В. Разработка и валидация методики количественного определения биологически активного соединения п-(2-[4-оксо-3(4Н)-хиназолинил] пропионил) гуанидина / Е. В. Компанцева, Д. Н. Луценко, А. А. Глушко // Аспирантский вестник Поволжья. - 2019. - № 5-6. - С. 122127.

19. Коновалова, С. С. Исследование оптических свойств противотуберкулезного препарата «Перхлозон» / С. С. Коновалова // Актуальные вопросы фармацевтических и естественных наук : Сборник статей Всероссийской студенческой научно-практической конференции с международным участием. Иркутск, 2021. - С. 257-259.

20. Коновалова, С. С. Применение спектрофотометрического метода для контроля качества противотуберкулезных лекарственных средств / С. С. Коновалова // Природные соединения и здоровье человека : Сборник научных статей Всероссийской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Иркутск. - 2023. - С. 99-104.

21. Коновалова, С. С. Разработка методики изолирования теризидона из водных растворов и биологических жидкостей / С. С. Коновалова // Материалы Всероссийского инновационного форума с международным участием, посвященного 60-летию Института фармации Тюменского государственного медицинского университета. Тюмень, 2024. - С. 87-89.

22. Коновалова, С.С. Использование спектрофотометрического метода в анализе противотуберкулёзных средств резервного ряда / С. С. Коновалова, Е. А.

Илларионова // Инновационные технологии в фармации : мат-лы всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участием. - Иркутск, 2023. -С. 101-106.

23. Коновалова, С. С. Новые методики обнаружения противотуберкулезных средств в биологическом материале / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова // Современное медицинское образование. Достижения, проблемы, пути решения : материалы международной научно-практической конференции, (1415 ноября, 2024 г.). - Иркутск: ИГМУ, 2024. - С. 152.

24. Коновалова, С. С. Оптимизация методики спектрофотометрического анализа производного оксазолидинона / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова // Инновационные технологии в фармации : мат-лы всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвященной 100-летию со дня образования кафедры фармакологии Иркутского государственного медицинского университета. - Иркутск, 2022. - С. 100-106.

25. Коновалова, С. С. Разработка условий спектрофотометрического определения рифабутина в лекарственных формах / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова // Инновационные технологии в фармации : мат-лы всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвященной 80-летию образования фармацевтического факультета ИГМУ. - Иркутск, 2021. - С. 125-129.

26. Коновалова, С. С. Исследование процесса экстракции теризидона из биологических объектов / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова, В. С. Мошкович // Инновационные технологии в фармации : мат-лы всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участием. - Иркутск, 2024. - С. 57-61.

27. Коновалова, С. С. Оптимизация количественного определения теризидона методом спектрофотометрии / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова // Медико-фармацевтический журнал Пульс. - 2023. - Т. 25, № 2. - С. 71-76.

28. Коновалова, С. С. Изучение и валидация условий хроматографического определения противотуберкулёзных препаратов / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова // Вестник Смоленской государственной медицинской академии. - 2024. - Т. 23, № 1. - С. 223-229.

29. Коновалова, С. С. Изучение особенностей изолирования перхлозона из биологических жидкостей для целей химико-токсикологического анализа / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова, Н. В. Чмелевская // Судебно-медицинская экспертиза. - 2024. - Т. 67, № 6. - С. 38-41.

30. Коновалова, С. С. Разработка методики химико-токсикологического анализа рифабутина в объектах биологического происхождения / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова // Человек и его здоровье. 2022. - Т. 25, № 1. - С. 54-61.

31. Косицына, А. С. Спектрофотометрическое определение рКа ранее неизвестного 3-метоксиметил-4-нитрозо-5-(п-хлорфенил)-1н-пиразола / А. С. Косицына, Д. И. Персидская, А. В. Любяшкин // Лесной и химический комплексы - проблемы и решения. - 2017. - С. 442-444.

32. Косман, В. М. Опыт разработки биоаналитических методик методом ВЭЖХ с УФ-детектированием / В. М. Косман, М. В. Карлина, М. Н. Макарова // Фармация. - 2020. - Т. 69, №. 3. - С. 23.

33. Кривонос, П. С. Повышение эффективности химиотерапии туберкулеза в современных условиях / П. С. Кривонос, Г. С. Авдеев // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2000. - №. 3. - С. 97-99.

34. Кузнецова, И. Г. Биораспределение полимерной транспортной формы рифабутина / И. Г. Кузнецова [и др.] // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2015. - Т. 70, №. 3. - С. 366-371.

35. Кузнецова, И. Г. Экспериментальное исследование по распределению в тканях наноразмерной формы рифабутина / И. Г. Кузнецова // Вестник московского государственного областного гуманитарного института. Серия: Педагогика и психология. - 2014. - С. 42-44.

36. Лазицкая, А. М. Совершенствование методов анализа производных бензодиазепина и фенилалкиламина: дис. .канд. фарм. наук: 13.12.17. -Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН. - Улан-Удэ, 2017. -144 с.

37. Локсидон, капсулы 150, 250, 300 мг Фармакопейная статья предприятия ОАО «Фармасинтез», Россия ЛП-002373-140214. - 18 с.

38. Межлабораторная воспроизводимость методики количественного определения перхлозона в плазме крови / Г. В. Раменская [и др.] // Естественные и технические науки. - 2015, №. 1. - С. 25-31.

39. Можокина, Г. Н. Проблема нейротоксичности лекарственных препаратов при лечении больных туберкулезом / Г. Н. Можокина, А. Г. Самойлова, И. А. Васильева // Туберкулез и болезни легких. - 2020. - Т. 98, №10. - С. 5863.

40. Мышкова, Е. П. Сравнительный анализ эффективности и безопасности различных схем противотуберкулёзной терапии больных с МЛУ/ШЛУ-туберкулезом / Е. П. Мышкова, Т. И. Петренко, Т. А. Колпакова // Туберкулёз и болезни лёгких. - 2022. - Т. 100, №. 5. - С. 35-40.

41. Новые схемы и новые препараты в лечении туберкулеза: шагаем в ногу ? / Д. Ю. Рузанов [и др.] // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2021. - Т. 23, №. 1. - С. 27-42.

42. Определение перхлозона в плазме крови с использованием ВЭЖХ масс-спектрометрическим детектированием / А. М. Власов [и др.] // Биомедицина. -2011.-№2.-С. 73-78.

43. Оценка безопасности применения тиоуреидоимино-метилпиридиния перхлората (перхлозон) в схеме терапии лекарственно-устойчивого туберкулеза у пациентов с ВИЧ-инфекцией / Е. В. Шувалова [и др.] // Инфекционные болезни: Новости. Мнения. Обучение. -2023. - Т. 12, № 1 (44). - С. 69-74.

44. Павлова, М. В. История открытия и результаты клинических исследований нового противотуберкулёзного препарата тиоуреидоиминометилпиридиния перхлората (Перхлозон) / М. В. Павлова, Т. И. Виноградова , П. К. Яблонский // Здоровье нации - новая стратегия. - 2015. - № 1 (31). - С. 30-32.

45. Патент № 2828792 С1 Российская Федерация МПК G01N 33/15, G01N 33/487, G01N 30/90, G01N 1/28. Способ определения в моче, слюне и плазме крови лекарственных веществ / С. С. Коновалова, Е. А. Илларионова; Заявитель и

патентообладатель ФГБОУ ВО ИГМУ. - № 2023134029; заявл. 14.12.2023. опубл. 21.10.2024, Бюл. № 30. - С. 8.

46. Перхлозон субстанция НД 001704-011117 - 16 с.

47. Перхлозон, таблетки покрытые оболочкой 200 мг, 400 мг Фармакопейная статья предприятия ОАО «Фармасинтез», Россия ЛП-001899-070920. - 17 с.

48. Петров, А. Ю. Некоторые особенности применения стандартных образцов в фармации / А. Ю. Петров, Е. Б. Сысуев, Н. А. Новикова // Роль технического регулирования и стандартизации в эпоху цифровой экономики. -Екатеринбург, 2020. - 2020. - С. 21-32.

49. Раделюк, И. М. Разработка и валидация методики определения теризидона в комбинированных противотуберкулёзных препаратах / И. М. Раделюк, Р. А. Амриев // Молодежный научный форум. - 2010. - №. 3. - С. 4-10.

50. Разработка и валидация методики определения перхлозона в плазме крови методом ион-парной ВЭЖХ / Г. В. Раменская [и др.] // Известия Академии наук. Серия химическая. - 2014. - № 5. - С. 1255-1255.

51. Регистр лекарственных средств России. [Электронный ресурс]: Перхлозон. -Режим доступа: https://www.rlsnet.ru/drugs/perxlozon-40678

52. Рифабутин субстанция ФС 000184-280911 - 13 с.

53. Справочник по терапии туберкулёза у взрослых / И. А. Васильева, А. Г. Самойлова, В. Н. Зимина [и др.]. - М.: ООО «Медицинские знания и технологии», 2023. - 48 с.

54. Теризидон субстанция ЛСР-005929108-280708 - 17 с.

55. Туберкулез у взрослых: клинические рекомендации / Общероссийская общественная организация «Российское общество фтизиатров». - Москва, 2022. - 172 с.

56. Тютрина, В. А. Совершенствование методов анализа фторсодержащих лекарственных средств : дис. .канд. фарм. наук: 14.04.02. - Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН. - Улан-Удэ, 2020. - 187 с.

57. Уход иностранного капитала из фармацевтической отрасли России / А. В. Коваленко [и др.] // Медико-фармацевтический журнал «Пульс». - 2022. -Т. 24, №8.-С. 36-41.

58. Фарбутин, капсулы 150 мг Фармакопейная статья предприятия ОАО «Фармасинтез», Россия ЛСР-0017034109-200919. - 15 с.

59. Федорова, Г. А. Применение микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии в медицине / Г. А. Федорова, Л. А. Кожанова, Е. М. Полянская // Вестник восстановительной медицины. - 2008. - Т. 23, № 1. -С. 35-41.

60. Хацаюк, А. С. Роль и значение высокоэффективной жидкостной хроматографии в практике высокотехнологичных лабораторных исследований / А. С. Хацаюк, О. Е. Павлова, М. Э. Эхова // Здоровье. Медицинская экология. Наука. - 2016. - № 3 (66). - С. 215-219.

61. Химико-токсикологический анализ веществ, вызывающих одурманивание: метод. указ. М., 1989. - 122 с.

62. Цыбанев, А. А. Противотуберкулезный антибиотик пролонгированного действия - рифабутин. Антимикробный спектр, особенности фармакодинамики и фармакокинетики / А. А. Цыбанев, Г. Б. Соколова // Антибиотики и химиотерапия. - 1999. -№ 8. - С. 30-36.

63. Эволюция фтизиатрии - это поиск новых методов и препаратов, эффективных при лечении туберкулеза / А. А. Старшинова [и др.] // Практическая медицина. - 2014. - № 7 (83). - С. 133-139.

64. Экспериментальное исследование фармакокинетики рифабутина в липосомальной форме / М. В. Карлина [и др.] // Фармакокинетика и фармакодинамика. - 2013. -№ 2. - С. 37-41.

65. Эффективность и безопасность комбинированных режимов химиотерапии туберкулеза с включением препарата «Перхлозон». Методы прогнозирования, профилактики и устранения нежелательных явлений / Е. С. Ершова [и др.] // Туберкулез и социально-значимые заболевания. - 2021. - Т. 9, № 4 (36). - С. 43-53.

66. Эффективность комплексной терапии и возможные нежелательные реакции при лечении туберкулёза органов дыхания с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя / М. В. Павлова [и др.] // Туберкулёз и болезни лёгких. - 2015. - № 12. - С. 61-67.

67. Яшин, Я. И. Вклад российских специалистов в развитие высокоэффективной жидкостной хроматографии / Я. И. Яшин, А. Я. Яшин // Журнал аналитической химии. - 2020. - T. 75, № 10. - С. 885-897

68. Analytical techniques for pirfenidone and terizidone: a review / A. A. Shirkhedkar [et al.] // International Journal of Pharmaceutical Chemistry and Analysis. - 2019. -Vol. 6, №. 1. -Р. 1-5.

69. Antituberculosis drugs: drug interactions, adverse effects, and use in special situations-part 2: second line drugs / M. A. Arbex [et al.] // Jornal Brasileiro de Pneumologia. -2010. - Vol. 36. -Р. 641-656.

70. Avachat, A. Stability-indicating validated HPTLC method for simultaneous analysis of rifabutin and isoniazid in pharmaceutical formulations/ A. Avachat, S. Bhise // Journal of Planar Chromatography-Modern TLC. - 2010. - Vol. 23, №. 2. - Р. 123128.

71. Barzani, H. A. H. First approach for the voltammetric sensing of rifabutin by the use of cationic surfactant media on the boron-doped diamond electrode / H. A. H. Barzani, Y. Yardim // Diamond and Related Materials. - 2023. - Vol. 132. - Р. 109117.

72. Bhole, R. P. Development and validation of HPTLC and LC MS-MS method for estimation of Terizidone in pharmaceutical dosage form / R. P. Bhole, S. Phadke // Thai Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2018. - Vol. 42,№. 4. - Р. 196-202.

73. British Pharmacopeia, Her Majesty's, Stationery Office, London, UK, 2003. - Vol. 3.

74. Crabol, Y. Rifabutin: where do we stand in 2016? /Y. Crabol, E. Catherinot, N. Veziris, V. Jullien, O. Lortholary // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. -2016.-Vol. 71, Issue 7.-P. 1759-1771

75. Determination of pKa values of active pharmaceutical ingredients / S. Babic [et al.] // Trends in Analytical Chemistry. - 2007. - Vol. 26, № 11. - Р. 1043-1061.

76. Determination of the rifamycin antibiotics rifabutin, rifampin, rifapentine and their major metabolites in human plasma via simultaneous extraction coupled with LC/MS/MS / L. C. Winchester [et al.] // Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. -2015. - Vol. 104. -Р. 55-61.

77. Development and validation of an LC-MS/MS method for the simultaneous determination of bedaquiline and rifabutin in human plasma / W. A. Gray [et al.] // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 2019. - Vol. 176. - Р. 112119.

78. European Pharmacopoeia. 11.0/ 2022. - 4440 р.

79. Gandhi, S. V. Development and Validation of a Stability Indicating RP-HPLC Method for the Determination of Terizidone / S. V. Gandhi // Indo American Journal of Pharmaceutical Research. - 2018. - Vol. 5, № 3. - Р. 1353-1361.

80. Hemant, K. J. Estimation of terizidone in bulk and capsule dosage forms by area under curve and first order derivative spectroscopy /K. J. Hemant, R. R. Mane // International Journal of Pharm Tech Research. - 2016. - Vol. 9, № 9. - Р. 457-464.

81. Indian Pharmacopoeia. Ed. 2022. English version; 2022. - 5023 р.

82. Khairnar, S. Development and validation of UV spectrophotometric method for the estimation of terizidone in bulk and pharmaceutical dosage form / S. Khairnar, M. Nagras, A. Sonawane // Inventi Rapid: Pharm Anal Qual Assurance. - 2016. - Vol. 3. -Р. 1-4.

83. Kishore, M. Development of new Spectrophotometric methods for the quantitative determination of Rifabutin in Pharmaceutical formulations / M. Kishore // International Journal of Drug Development & Research. - 2010. - Vol. 2. - Р. 10-49.

84. Konovalova, S. S. Selection of optimal conditions for the spectrophotometric determination of a thiosemicarbazone derivative / S. S. Konovalova, V. S. Moshkovich, B. D. Tarbayeva // Сборник статей Всероссийской студенческой научно-практической конференции с международным участием

«Актуальные вопросы фармацевтических и естественных наук». - Иркутск. -2023.-С. 47-50.

85. Konovalova, S. S. Development of a method for isolating and detecting thioureidoiminomethylpyridinium perchlorate / S. S. Konovalova, E. A. Illarionova // Актуальные вопросы фармацевтических и естественных наук : Сборник статей Всероссийской студенческой научно-практической конференции с международным участием. - Иркутск, 2021. - С. 27-31.

86. Konovalova, S. S. Study of various factors affecting the extraction of a thiosemicarbazone derivative from solutions / S. S. Konovalova, K. N. Kisteneva , P. S. Lykova // Сборник статей Всероссийской студенческой научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы фармацевтических и естественных наук». - Иркутск, 2023. - С. 30-33.

87. Konovalova, S. S. Uv spectrophotometry as a promising method for quality control of anti-tuberculosis drugs / S. S. Konovalova // Сборник статей Всероссийской студенческой научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы фармацевтических и естественных наук». - Иркутск, 2023.-С. 8-12.

88. Liwa, A. C. Pharmacokinetics and dosing rationale of Para-Aminosalicylic acid in children and the evaluation of the in vitro metabolism of Ethionamide, Terizidone and Para-aminosalicylic acid in vitro : Diss. - Stellenbosch: Stellenbosch University. -2012. - 176 с.

89. Mulubwa, M. Amount of cycloserine emanating from terizidone metabolism and relationship with hepatic functionin patients with drug-resistant tuberculosis / M. Mulubwa, P. Mugabo // Drugs in R&D. - 2019. - Vol. 19. - Р. 289-296.

90. Mulubwa M. Analysis of terizidone in plasma using HPLC-UV method and its application in a pharmacokinetic study of patients with drug-resistant tuberculosis / M. Mulubwa, P. Mugabo // Biomedical Chromatography. - 2018. - Vol. 32. -№. 11. -Р. 1-7.

91. Musafili N. Y. A validated RP-HPLC method for the simultaneous detection and quantification of pyridoxine and terizidone in pharmaceutical formulations/ N. Y.

Musafil, H. Samsodien, M. E. Aucamp // Analytica. - 2021. - Vol. 2. - № 4. - Р. 206-216.

92. Quantification of rifampicin and rifabutin in plasma of tuberculosis patients by micellar liquid chromatography / M. Б. G. Bravo [et al.] // Microchemical Journal. -2020.-Vol. 157.-Р. 104865.

93. Rifabutin encapsulated in liposomes exhibits increased therapeutic activity in a model of disseminated tuberculosis / Gaspara M. M. [et al.] //International Journal of Antimicrobial Agents. - 2008. - Vol. 31. - Р. 37-45.

94. Safety of cycloserine and terizidone for the treatment of drug-resistant tuberculosis: a meta-analysis / T. J. Hwanget [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung disease. - 2013. - Vol. 17, № 10. - Р. 1257-1266.

95. Simultaneous determination of rifabutin and human serum albumin in pharmaceutical formulations by capillary electrophoresis / Ermolenko Y. [et al.] // Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. - 2017. - Vol. 85. - Р. 5560.

96. Singh, G. High-performance liquid chromatography method validation and development strategy for rifabutin / G. Singh, A. K. Srivastava // International Journal Of Pharmaceutical Sciences And Research. -2018. - Vol. 5. -Р. 3903-3907.

97. Spectrophotometric Determination of pKa and Log P of Risperidone / S. K. Dubey [et al.] // Journal of Applied Pharmaceutical Science. - 2017. - Vol. 7, № 11. -Р. 155-158. 78

98. United State Pharmacopeia. USP47-NF42; 2024.

99. World Health Organization. Technical report on the pharmacokinetics and pharmacodynamics (PK/PD) of medicines used in the treatment of drug-resistant tuberculosis. Geneva: World Health Organization Press; 2022. URL: https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/365308/9789240063129-eng.pdf. (дата обращения: 01.02.2025).

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение №1

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

ФС 001704-011117

Россия

Перхлозон

ПРОЕКТ ИЗМЕНЕНИЯ

Старая редакция Новая редакция

Количественное определение. От 98,5 до 101,5 % СуШСШ^ в пересчете на сухое вещество. Спирт 60 %. 625 мл спирта 96 % помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. Испытуемый раствор. Около 28 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 40 мл спирта 60 %, перемешивают до растворения навески, доводят объем раствора спиртом 60 % до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 60 % до метки и перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 317 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирта 60 %. Содержание перхлозона Количественное определение. Точную навеску (около 0,0500 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл спирта этилового 60 %, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 346 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (калия дихромата). Приготовления раствора

внешнего оптического образца

сравнения калия дихромата 0,003 %:

точную навеску (около 0,030 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл воды очищенной, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты

(C7H9aN4O4S) в субстанции в процентах (Х) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

А-500000

а1% •апоо-т

1 см у '

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

а - навеска препарата в граммах; 1 %

АСМ _1019 - удельный показатель поглощения перхлозона;

W - потеря в массе при высушивании в процентах.

раствором 0,1 М, перемешивают.

A¿a •К 400400400

у— х воос пеР__100

А •а 400-50-Г100-Ж)

воос х v J

где Авоос и Ax - оптические плотности оптического образца сравнения и определяемого вещества

соответственно; ах и авоос - точные навески определяемого вещества и оптического образца сравнения соответственно; Кпер - коэффициент пересчёта, равный 0,1127; W- потеря в массе при высушивании, %; 100 -коэффициент для пересчёта в проценты.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

ЛП-001899-070920 Россия

Перхлозон таблетки, покрытые пленочной оболочкой 200 мг, 400 мг

ПРОЕКТ ИЗМЕНЕНИЯ

Старая редакция Количественное определение.

Метод ВЭЖХ

2 % раствор уксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 19 мл уксусной кислоты, доводят объем раствора до метки и перемешивают.

Подвижная фаза. Смешивают ацетонитрил и 2 % раствор уксусной кислоты в соотношении 5:95.

Растворитель. Подвижная фаза.

Испытуемый раствор. Около 30 мг (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, прибавляют 8 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 15 мин, доводят объем растворителем до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр типа «Милипор» с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывая первые порции фильтрата.

Стандартный раствор. Около 10 мг (точная навеска) перхлозона (стандарт фирмы) помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 8 мл растворителя,

Новая редакция

Количественное определение

перхлозона в таблетках, покрытых оболочкой по 0,4 г: точную навеску (около 0,0525 г) порошка растёртых таблеток количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл спирта этилового 60 %, доводят тем же растворителям до метки. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата. Аликвотную часть 1 мл фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки

хлористоводородной кислоты

раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 346 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (калия дихромата).

Количественное определение перхлозона в таблетках, покрытых оболочкой по 0,2 г: точную навеску (около 0,070 г) порошка растертых таблеток количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл спирта этилового

обрабатывают ультразвуком в течение 15 мин, доводят объем растворителем до метки,

перемешивают.

Хроматографические условия.

Колонка - 1пе^Ш ODT-3V, 250 х 4,6 мм, с размером пор 5 мкм; или аналогичная; детектор - УФ спектрофотометрический, длина волны 246 нм; температура колонки -35 0С; подвижная фаза (ПФ) -ацетонитрил - уксусная кислота 2 % (5:95); скорость потока - 1 мл/мин; время хроматографирования - 8 мин; объем инжекции 10 мкл.

Хроматографируют стандартный раствор перхлозона (п=5), испытуемый раствор.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Хроматографическая система

считается пригодной, если выполняются следующие условия:

-фактор ассиметрии пика перхлозона должен быть не более 2,0;

-относительное стандартное

отклонение площади пика перхлозона при 5 повторных инжекциях должно быть не более 2,0 %;

-эффективность

хроматогррафической колонки, рассчитаная по пику перхлозона, должна быть не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание C7H9QN4O4S

60 %, доводят тем же растворителям до метки. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата. Аликвотную часть 1 мл фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки

хлористоводородной кислоты

раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 346 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (калия дихромата).

Приготовления раствора внешнего оптического образца сравнения калия дихромата 0,003 %: точную навеску (около 0,030 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл воды очищенной, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки

хлористоводородной кислоты

раствором 0,1 М, перемешивают.

Х

Ах-а„

_ Л воос пер

:К 400400400^

ср

А •а 10050Г100-Ж)

пппс X V '

100

где Авоос и Ах - оптические плотности оптического образца сравнения и определяемого вещества

соответственно; ах и авоос - точные навески определяемого вещества и оптического образца сравнения соответственно; Кпер - коэффициент пересчёта, равный 0,1127; Рср -средний вес таблетки; W - потеря в массе при высушивании, %; 100 -коэффициент для пересчёта в

(перхлозона) в таблетке в миллиграммах (Х) вычисляют по формуле:

_50а40400 %а^50

где So - площадь пика перхлозона на хроматограмме стандартного

раствора;

S - площадь пика перхлозона на хроматограмме испытуемого

раствора;

а0 - навеска стандартного образца перхлозона, в миллиграммах;

а - навеска содержимого таблеток перхлозона, в миллиграммах;

Р - содержание основного вещества в стандартном образце, в процентах;

G - средняя масса содержимого таблетки, в миллиграммах.

Содержание C7H9QN4O4S

(перхлозона) должно быть не менее 190 и не более 210 мг (для дозировки 200 мг), и от 380 до 420 мг (для дозировки 400 мг), считая на среднюю массу одной таблетки.

проценты.

Количественное определение

методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии:

Точную навеску растертых таблеток перхлозона около (0,1000 г) помещают в мерную колбу объемом 100 мл, добавляют 50 мл метанола, обрабатывают в УЗ ванне (15 мин) и доводят до метки метанолом. Аликвоту 5 мл помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят до метки тем же растворителем. Аликвоту суспензии объёмом около 1 мл переносят в пробирку и центрифугируют (5 мин., 13400 об/мин). Супернатант используют для хроматографического анализа.

Раствор готовят перед

использованием.

Приготовления стандартного раствора перхлозона: Точную навеску субстанции перхлозона (около 0,1500 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл метанола и доводят до метки тем же растворителем. Аликвоту 25 мл помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки тем же растворителем.

Последовательно хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения перхлозона. Условия хроматографирования: колонка 2 х 75 мм, неподвижная фаза ProntoSIL-120-5 С18 AQ; подвижных фаза смесь аммония ацетата раствора 0,02 М (рН 6,5) и ацетонитрила, в соотношении

30:70; скорость потока 150 мкл/мин; поддержании температуры 35 0С, режим изократический.

Приложение №3

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

ФС 000184-280911 Россия Рифабутин

ПРОЕКТ ИЗМЕНЕНИЯ

Старая редакция Новая редакция

Количественное определение. Не менее 96,0 % и не более 102,0 % в пересчете на безводное, не содержащее остаточных органических растворителей, вещество. Приготовление 0,1 М раствора калия фосфата однозамещенного, рН=6,5. Около 13,6 г калия фосфата однозамещенного помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 500 мл воды, растворяют. Измеряют рН раствора, при необходимости доводят до рН=6,5 о-фосфорной кислотой или 2 М раствором гидроксида натрия. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Приготовление подвижной фазы: 500 мл 0,1 М раствора калия фосфата однозамещенного и 500 мл ацетонитрила помещают в колбу вместимостью 2000 мл, перемешивают. Приготовление испытуемого раствора: около 50 мг субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 Количественное определение: Точную навеску (около 0,0500 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл спирта этилового 95 %, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 279 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (фенолфталеина). Приготовления раствора

внешнего оптического образца

сравнения фенолфталеина 0,004 %: точную навеску (около 0,200 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл спирта этилового 95 %, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты

мл подвижной фазы встряхивают в течение 5 мин, доводят объем раствора подвижной фазой до метки, перемешивают.

Приготовление стандартного

раствора: около 50 мг(точная навеска) рифабутина (USP RS или EP CRS) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл подвижной фазы встряхивают в течение 5 мин, доводят объем раствора подвижной фазой до метки, перемешивают.

Раствор используют

свежеприготовленным.

Приготовление раствора для проверки хроматографической системы. Около 25 мг (точная навеска) рифабутина (USP RS или EP CRS) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 2 мл метанола, прибавляют 1 мл 2 М раствора натрия гидроксида, перемешивают и оставляют на 4 мин. Затем добавляют 1 мл 2 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объем полученного раствора до метки подвижной фазой.

Раствор может храниться в плотно закрытой емкости при температуре 2-8 0С в течение 8 месяцев.

Хроматографические условия.

Колонка - Luna 3 мкм С 18 (2), размером 100 х 4,6 мм, заполненная октилсилированным силикагелем или аналогичная; подвижная фаза (ПФ) -0,1 М калия фосфат однозамещенный, рН=6,5 -ацетонитрил (50:50); скорость потока

раствором 0,1 М, перемешивают.

Аха К 400^50400

х воос пер__100

А а 400-50-Г100-Ж)

воос х к J

где Авоос и Ax- оптические плотности оптического образца сравнения и определяемого вещества

соответственно, ах и авоос - точные навески определяемого вещества и оптического образца сравнения соответственно; Кпер - коэффициент пересчёта, равный 0,4089; W - потеря в массе при высушивании, %; 100 -коэффициент для пересчёта в проценты.

- 1,0 мл/мин; детектор - УФ спектрофотометрический, длина волны 254 нм; температура колонки -35 0С; продолжительность хроматографирования - в 2 раза превышающее время удерживания пика рифабутина.

Проверка пригодности

хроматографической системы.

Хроматографируют 20 мкл раствора для проверки пригодности хроматографической системы. На хроматограмме должны

присутствовать пик рифабутина, относительное время удерживания которого принимают за 1 и пики продуктов разложения рифабутина с относительными временами

удерживания 0,5; 0,6; 0,8 по отношению к основному пику. Коэффициент разрешения между пиком рифабутина и пиком примеси с относительным временем удерживания 0,8 должен быть не менее 1,3.

Хроматографируют последовательно 5 раз стандартный раствор. Относительное стандартное

отклонение для рлощади рифабутина, рассчитанное по 5 хроматограммам должно быть не более 2,0 %. Эффективность хроматографической колонки (число теоретических тарелок), рассчитанная по основному пику должна быть не менее 2000.

Для количественного определения субстанции рифабутина

последовательно хроматографируют по 20 мкл стандартного раствора

рифабутина и испытуемого раствора. Детекцию пиков на хроматограмме проводят при 254 нм.

Содержание рифабутина в процентах (Х), в пересчете на безводное, не содержащее остаточных

органических растворителей,

вещество, вычисляют по формуле:

~50-а-50-(100-Ж) _ 50-а-(100-Ж)

где Sх - площадь основного пика на хроматограмме испытуемого

раствора;

So - площадь пика на хроматограмме стандартного раствора;

а - навеска субстанции рифабутина, в граммах;

ао - навеска СО рифабутина, в граммах;

Р - содержание рифабутина в СО, в процентах;

W - содержание воды и органических растворителей в субстанции рифабутина, %.

Приложение №4

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

ЛСР-0070034/09-200919

Россия Фарбутин капсулы 150 мг

ПРОЕКТ ИЗМЕНЕНИЯ

Старая редакция Новая редакция

Количественное определение. Метод ВЭЖХ От 135,0 мг до 165 мг рифабутина (С46Н62^0п), считая на среднюю массу содержимого капсулы. Приготовление подвижной фазы: 500 мл 0,1 М раствора калия фосфата однозамещенного и 500 мл ацетонитрила помещают в колбу вместимостью 2000 мл, перемешивают. Приготовление испытуемого раствора: около 48 мг (точная навеска) растертого содержимого капсул помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл подвижной фазы встряхивают в течение 5 мин, доводят объем раствора подвижной фазой до метки, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр типа «Милипор» с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывая первые порции фильтрата (С=0,5 мг/мл). Приготовление стандартного раствора: около 50 мг (точная навеска) рифабутина (ШР RS или ЕР CRS) помещают в мерную колбу Количественное определение рифабутина в капсулах по 0,15 г: точную навеску содержимого капсул рифабутина (около 0,0990 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл спирта этилового 95 %, доводят тем же растворителям до метки. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Приготовления раствора

внешнего оптического образца

сравнения фенолфталеина 0,004 %: точную навеску (около 0,200 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл спирта этилового 95 %, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают.

вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл подвижной фазы встряхивают в течение 5 мин, доводят объем раствора подвижной фазой до метки, перемешивают (С=0,5 мг/мл).

Приготовление 0,1 М раствора калия фосфата однозамещенного,

рН=6,5. Около 13,6 г калия фосфата однозамещенного помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 500 мл воды, растворяют. Измеряют рН раствора, при необходимости доводят до рН=6,5 ортофосфорной кислотой или 0,1 М раствором гидроксида калия. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Приготовление раствора для проверки хроматографической системы. Около 10 мг (точная навеска) рифабутина (ШР RS или ЕР CRS) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 2 мл метанола, прибавляют 1 мл 2 М раствора натрия гидроксида, перемешивают и оставляют на 4 мин. Затем добавляют 1 мл 2 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объем полученного раствора подвижной фазой до метки, перемешивают. 1 мл олученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, доводят подвижной фазой до метки, перемешивают (С=0,00025 г/мл).

Раствор для оценки

чувствительности хроматографической системы. 1 мл

раствора стандартного образца

Х

Лг • а.

_ Л воос пер '

:К- 100-50• 100-Я

ср

А а -100-50-(100-Ш

воос х 4 у

100

где Авоос и Ах - оптические плотности оптического образца сравнения и определяемого вещества

соответственно, ах и авоос - точные навески определяемого вещества и оптического образца сравнения соответственно; Кпер - коэффициент пересчёта, равный 0,4089; Рср -средний вес содержимого капсулы; W - потеря в массе при высушивании, %; 100 - коэффициент для пересчёта в проценты.

Количественное определение

методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии:

Точную навеску содержимого капсул рифабутина (около 0,2500 г) помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 20 мл метанола и доводят до метки тем же растворителем. Аликвоту 1 мл помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки метанолом. Аликвоту суспензии объемом около 1 мл переносят в пробирку и центрифугируют (5 мин., 13400 об/мин). Супернатант используют для хроматографического анализа.

Раствор готовят перед

использованием.

Приготовления стандартного раствора рифабутина: Точную навеску субстанции рифабутина (около 0,0500 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл метанола и доводят до метки тем же

рифабутина, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки подвижной фазой

Хроматографические условия.

Колонка - Luna 3 мкм С 18 (2), размером 100 х 4,6 мм, или аналогичная; элюент А - 0,1 М калия фосфат однозамещенный, рН=6,5 -ацетонитрил (50 %); элюент Б -ацетонитрил (50 %); скорость потока

- 1,0 мл/мин; детектор - УФ спектрофотометрический, длина волны 254 нм; температура колонки -35 0С; продолжительность хроматографирования - 30 мин.

Проверка пригодности

хроматографической системы.

Хроматографируют 20 мкл раствора для проверки пригодности хроматографической системы и стандартного раствора.

Хроматографическая система

считается пригодной, если выполняются следующие условия:

- на хроматограмме для проверки пригодности хроматографической системы должны присутствовать пик рифабутина и пики продуктов разложения рифабутина с относительными временами удерживания 0,5; 0,6; 0,8 по отношению к основному пику;

- разрешение между пиком рифабутина и пиком примеси с относительным временем удерживания 0,8 на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы должен

растворителем. Раствор готовят перед использованием.

Последовательно хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения перхлозона. Условия хроматографирования: колонка 2 х 75 мм, неподвижная фаза Ргон^1Ь-120-5 С18 AQ; подвижных фаза смесь аммония ацетата раствора 0,02 М (рН 6,5) и ацетонитрила, в соотношении 30:70; скорость потока 150 мкл/мин; поддержании температуры 35 0С, режим изократический.

быть не менее 1,3;

- относительное стандартное отклонение площади пика рифабутина рассчитанное по 5 хроматограммам стандартного раствора должно быть не более 2,0 %;

-эффективность хроматографической колонки (число теоретических тарелок) рассчитанная по основному пику на хроматограмме стандартного раствора должна быть не менее 2000

- фактор ассиметрии пика рифабутина на хроматограмме стандартного раствора должен быть не более 2,0;

-соотношение сигнал/шум для пика рифабутина на хроматограмме для оценки чувствительности

хроматографической системы должно быть не менее 10.

Хроматографируют испытуемый раствор.

При использовании стандартного образца ЕР CRS содержание рифабутина в одной капсуле в миллиграммах (Х) вычисляют по формуле:

а0• 50 •Р• б _ 5 а0•Р • б ~50 • 50 • а • 100 50 • а 400

где S - площадь основного пика на хроматограмме испытуемого

раствора;

So - площадь пика на хроматограмме стандартного образца рифабутина;

а - навеска порошка растертого содержимого капсул, в

миллиграммах;

а0 - навеска стандартного образца рифабутина, в миллиграммах;

G - средняя масса содержимого

капсул, в миллиграммах;

Р - содержание рифабутина в стандартном образце, в

миллиграммах.

При использовании стандартного образца ШР RS содержание рифабутина в одной капсуле в

миллиграммах (Х) вычисляют по формуле:

Х 5а0^50б _ 5 а0 б • 50 • а • 1000 " 50 • а • 1000

где S - площадь основного пика на

хроматограмме испытуемого

раствора;

Sо - площадь пика на хроматограмме стандартного образца рифабутина;

а - навеска порошка растертого

содержимого капсул, в

миллиграммах;

а0 - навеска стандартного образца рифабутина, в миллиграммах;

G - средняя масса содержимого

капсул, в миллиграммах;

Р - содержание рифабутина в стандартном образце, в

миллиграммах.

1000 - перевод микрограммов в

миллиграммы.

Приложение №5

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

НД ЛСР-005929/08-280708 Россия Теризидон

ПРОЕКТ ИЗМЕНЕНИЯ

Старая редакция Новая редакция

Количественное определение. Не менее 96 % и не более 102 % СмНм^04 в пересчете на сухое вещество. Потенциометрическое титрование. Около 0,3 г (точная навеска) теризидона помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл, добавляют 100 мл смеси диметилформамида и воды (1:1) и обрабатывают на УЗ-бане до полного растворения. Титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида, определяя точку эквивалентности потенциометрически с использованием рН-метра. 1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 15,11 мг теризидона. Количественное определение: точную навеску (около 0,0400 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 264 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (калия феррицианида или калия дихромата). Приготовления раствора

внешнего оптического образца

сравнения калия феррицианида

0,015 %: точную навеску (около 0,150 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл воды очищенной, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 5 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до

метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают.

Приготовления_раствора

внешнего оптического образца сравнения калия дихромата 0,003 %: точную навеску (около 0,030 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл воды очищенной, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают.

Приложение №6

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

ФСПЛП002373-140214 Россия

Локсидон капсулы 150 мг, 250 мг, 300 мг

ПРОЕКТ ИЗМЕНЕНИЯ

Старая редакция Новая редакция

Количественное определение. Метод УФ-спектрофотометрии. Испытуемый раствор. Около 58 мг (точная навеска) содержимого капсул, эквивалент 50,0 мг теризидона помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, прибавляют около 150 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М, встряхивают в течении 10 мин или обрабатывают ультразвуком, при необходимости охлаждают, доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до метки, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр «синяя лента», отбрасывая первые порции фильтрата. 1 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до метки, перемешивают. Раствор стандартного образца. Около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца теризидона (стандарт фирмы), помещают в Количественное определение. Методика спектрофотометрического определения теризидона в капсулах по 0,3 г: точную навеску содержимого капсулы (около 0,046 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, доводят тем же растворителям до метки, перемешивают. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата. Аликвоту 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 264 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (калия феррицианида или калия дихромата). Методика спектрофотометрического определения теризидона в капсулах по 0,25 г: точную навеску

мерную колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 100 мл

хлористоводородной кислоты

раствора 0,1 М, встряхивают в течении 10 мин или обрабатывают ультразвуком, при необходимости охлаждают, доводят объем раствора хлористоводородной кислоты

раствором 0,1 М до метки, перемешивают. 1 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора хлористоводородной

кислоты раствором 0,1 М до метки, перемешивают.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при 262 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО теризидона.

В качестве раствора сравнения используют хлористоводородной кислоты раствор 0,1.

Содержание теризидона в одной капсуле в миллиграммах (Х) вычисляют по формуле:

X

А- а0 •200-50 • 1 -Р-б А • а0 •Р•б

А0 • а-1 •200-50 • 100 А0 -а- 100

Где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

А0 - оптическая плотность раствора СО теризидона;

а - навеска препарата, в миллиграммах;

а0 - навеска СО теризидона, в

содержимого капсулы (около 0,046 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, доводят тем же растворителям до метки, перемешивают. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата. Аликвоту 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 264 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора внешнего оптического образца сравнения (калия феррицианида или калия дихромата).

Методика спектрофотометрического определения теризидона в капсулах по 0,15 г: точную навеску содержимого капсулы (около 0,046 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, доводят тем же растворителям до метки, перемешивают. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата. Аликвоту 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 264 нм одновременно с измерением оптической плотности раствора

миллиграммах;

Р - степень чистоты СО теризидона, в процентах;

G - средняя масса содержимого капсул, в миллиграммах.

Содержание СмНм№04 (теризидона) должно быть:

Для дозировки 150 мг: от 135,0 мг до 165 мг в капсуле;

Для дозировки 250 мг: от 225,0 мг до 275 мг в капсуле;

Для дозировки 300 мг: от 270,0 мг до 330 мг в капсуле.

внешнего оптического образца сравнения (калия феррицианида или калия дихромата).

Приготовления

раствора

внешнего оптического образца сравнения калия феррицианида 0,015 %: точную навеску (около 0,150 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл воды очищенной, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 5 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают.

Приготовления

раствора

внешнего оптического образца

сравнения

калия_дихромата

0,003 %:точную навеску (около 0,030 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 30 мл воды очищенной, доводят тем же растворителям до метки. Аликвотную часть 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, перемешивают.

Расчёт количественного содержания теризидона по калия феррицианиду:

Х

Ау-а К 400 • 50 • 5- 100-Я

_ Л воос пер

ср

А а -100-50•(100-Ш

воос X V '

100

Расчёт количественного содержания теризидона по калия дихромату:

Х

• а.

_ Л воос пер '

:К- 100-50• 100-Я

ср

100

Л а -100 • 100 •(100-Ш