Совершенствование определения видовой принадлежности баранины и козлятины на основе иммуно- и ДНК-диагностики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.06, кандидат ветеринарных наук Пермяков, Александр Николаевич

• Пермяков, Александр Николаевич
• кандидат ветеринарных наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Пермяков, Александр Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Значение идентификации продукции

1.2. Методы определения видовой принадлежности мяса.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.1.1. Материалы исследований.

2.1.2. Методика идентификации мяса на основе иммунодиффузии.

2.1.3. Выделение ДНК из нетермообработанных образцов баранины и козлятины с помощью тест-системы SureFood® PREP Animal

2.1.4. Выделение ДНК из баранины и козлятины, подвергнутых термической обработке, с помощью тест-набора SureFood® PREP

Animal X.

2.1.5. Методика идентификации козлятины и баранины на основе ПЦР с последующей ДНК-гибридизацией.

2.1.6. Модифицированная методика идентификации баранины и козлятины на основе амплификации с последующей гибридизацией.

2.1.7. Методика идентификации баранины и козлятины с помощью ПЦР в режиме «реального времени».

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Усовершенствование идентификации мяса мелкого рогатого скота на основе иммунодиффузии.

2.2.2. Усовершенствование методов идентификации баранины и козлятины на основе ДНК-диагностики

2.2.2.1. Усовершенствование методов идентификации баранины и козлятины на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем SureFood (Германия)

2.2.2.2. Разработка модифицированной методики идентификации баранины и козлятины на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией.

2.2.2.3. Усовершенствование методов идентификации баранины и козлятины на основе ПЦР в режиме «реального времени».

2.2.3. Сравнительный анализ методов идентификации баранины и козлятины при различных условиях температурной обработки.

2.2.3.1. Влияние условий хранения баранины и козлятины на эффективность методов видовой идентификации на основе ДНК-диагностики и иммунодиффузии.

2.2.3.2. Влияние термической обработки мяса на эффективность методов идентификации баранины и козлятины.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование определения видовой принадлежности баранины и козлятины на основе иммуно- и ДНК-диагностики»

Актуальность темы.

Определение видовой принадлежности мяса является одной из основных характеристик технических регламентов. Замена одного вида мяса другим является фальсификацией, что может представлять, в некоторых случаях, угрозу жизни и, с другой стороны, имеет эстетические и религиозные аспекты.

Идентификация баранины и козлятины в сырье и продуктах питания, а также определение фальсифицирующих примесей, таких, например, как мышцы собаки, является актуальной проблемой.

Для идентификации используются различные методы исследований-биохимические, органолептические, микроморфологические, электрофоретические, методы ДНК- и иммунодиагностики (Писарева В.М., 1996; Кузнецова Т.Г., 1997; Комаров А.А., Обухов И.Л., 2000; Комаров А.А., 2001, Комарова И.Н., 2005; Узунян Д.Г., 2006 г.; Kappes S.M. et al., 1997; Taylor Hi et al., 2000), дальнейшая разработка и совершенствование которых имеет как научное, так и практической значение.

Для решения вопросов идентификации используются тест-системы, стандартизованные по международным требованиям ИСО, а также отечественные тест-системы.

Закон «О техническом регулировании» предусматривает, в первую очередь, применение международных стандартов, что способствует повышению качества идентификации мяса.

Эффективность тех или иных методов идентификации зависит от различных технологических воздействий на мясо (высокой и низкой температур, длительности хранения и т.д.), что может существенно влиять на чувствительность и специфичность тест-систем определения видовой принадлежности баранины и козлятины. Данная проблема является актуальной и требует дальнейшего изучения.

Цель и задачи исследований.

Целью исследований являлось совершенствование определения видовой принадлежности баранины и козлятины на основе иммуно - и ДНК-диагностики.

В задачи исследований входило:

- усовершенствовать идентификацию мяса мелкого рогатого скота на основе иммунодиагностики;

- усовершенствовать методы идентификации баранины и козлятины на основе амплификации и ДНК - гибридизации, а также ПЦР в режиме «реального времени»; провести сравнительные исследования по определению специфичности и чувствительности методов и тест-систем на основе иммуно- и ДНК-диагностики для определения видовой принадлежности мяса в сырье и мясопродуктах;

- провести сравнительный анализ влияния условий хранения и термической обработки баранины и козлятины на эффективность методов идентификации;

- разработать методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов.

Научная новизна

Проведено совершенствование метода идентификации баранины и козлятины с использованием стандартизованных по международным требованиям тест-систем SOFT (США) на основе иммунодиффузии с пропитанными моноклональными антителами фильтрами. Методика позволяет дифференцировать не термообработанную баранину от козлятины. Определена чувствительность методики, которая составляла 5% в смеси с другими видами животных, при этом время анализа сократилось в 1,5 раза.

Разработана модифицированная методика идентификации баранины и козлятины, включающая выделение ДНК с использованием 3% СТАВ-буфера, амплификацию ДНК с биотинилированными праймерами, гибридизацию меченных ампликонов с иммобилизованными ДНК-зондами и фотоколориметрическое детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с конъюгатом и субстратом.

Показана высокая чувствительность и специфичность метода на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией, позволяющего проводить идентификацию до 0,5% баранины или козлятины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных.

Проведена валидация методов пробоподготовки с сорбентом «силико» и постановки ПЦР в режиме «реального времени» (ПНР - РВ) с компонентами тест-систем SureFood® для идентификации баранины и козлятины. Данная методика позволяет дифференцировать баранину, козлятину и мышцы собаки и сократить время анализа в 3 раза.

Проведен сравнительный анализ влияния хранения и различных способов технологической обработки баранины и козлятины на эффективность методов идентификации и показано, что наиболее эффективными для идентификации как термообработанных, так и не термообработанных продуктов являются методы ДНК — диагностики.

Практическая ценность.

На основе проведённых исследований разработаны "Методические рекомендации по идентификации козлятины и баранины на основе иммунодиффузии", утверждённые Отделением ветеринарной медицины РАСХН 07.04.2008г.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- VI Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва,

2007г.);

- заседании Ученого совета ВНИИВСГЭ (2008) -межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (2008 г.). Публикации Результаты исследований отражены в 5 научных статьях.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Пермяков, Александр Николаевич

ВЫВОДЫ.

1. Усовершенствованный метод идентификации баранины и козлятины на основе иммунодиффузии позволяет существенно сократить затраты времени на проведение анализа не термообработанной продукции. Чувствительность метода составляет 5%.

2. Модифицирована методика идентификации баранины и козлятины, а также дифференциации их от мышечной ткани собаки, которая включала выделение ДНК с использованием 3% СТАВ-буфера, амплификацию ДНК с биотинилированными праймерами, гибридизацию меченных ампликонов с ДНК-зондами, иммобилизованными на планшетах, и детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с коньюгатом и субстратом.

3. Показана высокая чувствительность и специфичность методов на основе амплификации с последующей- гибридизацией, позволяющих проводить идентификацию до 0,5% баранины и козлятины в сырье и продуктах питания, в том числе термообработанных.

4. Усовершенствована методика идентификации баранины, козлятины и дифференциации их. от мышечной ткани собаки на основе ПЦР-РВ с использованием тест-системы SureFood® и выделением ДНК с помощью иммуномагнитосорбции. Данная методика позволяла проводить анализ в течение 1-2 часов, включая термообработанную продукцию. Чувствительность метода составляла 0,01%.

5. Воздействие различных факторов на сырье (высоких и низких температур, повторного замораживания, порчи) отражается на чувствительности и специфичности методов определения видовой принадлежности баранины и козлятины, но в разной степени. По сравнению с иммунологическими тестами, методы ДНК-диагностики более устойчивы к влиянию внешних факторов, что свидетельствует о высокой стабильности ДНК по сравнению с белковыми структурами.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Для использования в научных учреждениях и научно-исследовательских лабораториях могут быть рекомендованы разработанные нами «Методические рекомендации по определению видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе иммунодиффузии» (утверждены Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии 07.04.2008г.).

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Пермяков, Александр Николаевич, 2009 год

1. Александрова Н.А. и др. Методы оценки качества мяса и мясопродуктов за рубежом // М., 1997, с. 156.

2. Алехина Л.В., Андреенко В.И., Ивашов В.И. Современные методы анализа качества мяса и мясопродуктов // Мясная промышленность, АгроНИИТЭИММП, М., 1991, с. 35.

3. Беляев Е.Н., Тутельян В.А. Качество и безопасность продуктов детского питания в России: медико-биологические требования и результаты мониторинга // Вопросы питания, 1996, № 5, с. 8-12.

4. Бутко М.П. Организация и современные методы проведения ветеринарно-санитарной экспертизы. Киев, 1984.

5. Бутко М.П., Шапкина Л.П. Санитарно-гигиенические проблемы экспертизы мяса пернатой дичи // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с.90.

6. Бурков В.И., Боровков М.Ф., Колесниченко И.С., Касаткин B.C. Ветсанэкспертиза мяса и жира диких животных и пернатой дичи // Ветеринария, Москва, 2003, №2, с. 55 60.

7. Ю.Версан В.Г. Актуальные проблемы введения в действие Федерального закона «О техническом регулировании» // Стандарты и качество, 2003, № 5, с. 30-32.

8. П.Витт С.В., Сапоровская М.Б., Беликов В.Н. Об анализе аминокислот методом газо-жидкосткой хроматографии // Журнал аналитической химии, 1966, т. 21, № 2, с. 227-231.

9. Долгов В.А., Лавина С.А. Методические аспекты оценки качества и безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 162.

10. Донченко J1.B., Надыкта В.Д. Безопасность пищевого сырья и продуктов питания // М., Пищепромиздат, 1999, с. 352.

11. Донченко JI.B., Надыкта В.Д. Безопасность пищевой продукции // М., Пищепромиздат, 2001, с.525.

12. Дубцова Г.Н., Кирюхина М.Н., Дубцов Г.Г. Мясные кулинарные изделия, обогащенные растительным белком // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 166-168.

13. Езерская Е.Я., Галочкин В.А. Идентификация видоспецифичных мышечных белков сельскохозяйственных животных и птицы.// Сельскохозяйственная биология. Сер.биология животных, 1999, № 6, с.3-9.

14. Журавская Н.К., Алехина Л.Т., Опряшенкова Л.М. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов // М., Агропромиздат, 1985, с. 296.

15. Заяс Ю.Ф. Качество мяса и мясопродуктов // М., Легкая и пищевая промышленность, 1981, с. 312.

16. Кабанова Е.М. Определение видовой принадлежности мяса домашних и диких животных.// Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. Чебоксары, 1999, с.23.

17. Карелин А.И., Макаров В.А., Боровков М.Ф. Словарь ветеринарных, зоогигиенических и санитарных терминов. М.: Росагропромиздат., 1990.

18. Комаров А.А. Методы оценки качества и безопасности кормов и кормовых добавок // Ветеринария, №1, 2001, с. 51-56.

19. Комаров А.А., Обухов И.Л. Определение видовой принадлежности мясных ингредиентов в кормах для собак и кошек методом ПЦР // Восьмой Международный конгресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. М., 2000, е., 27-28.

20. Комаров А.А., Обухов И.Л., Сорокина М.Ю., Панин А.Н. Определение видовой принадлежности тканей жвачных животных.// Ветеринария, 2000., №3., с. 59-62.

21. Комаров А.А., Панин А.Н., Вылегжанина Е.С. Методы контроля анаболиков в продукции животноводства // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с.251-252.

22. Кривононосов М.В. Организация защиты качества продуктов питания // Международный медицинский журнал (г. Харьков), 1998, -4, №4, с. 104-106.

23. Крылова Н.И., Лесковская Ю.Н. Физико-химические методы исследования продуктов животного происхождения // М., Пищевая промышленность, 1968., с. 316.

24. Кузнецова Т.Г. Оценка морфологических свойств мясного сырья и колбасных изделий по микроструктурным показателям // Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. М., 1997.

25. Лабораторные исследования в ветеринарии: химико-токсикологические методы. Под ред. Антонова Б.И. // М.: Агропромиздат, 1989, с. 319.

26. Лори Т.А. Наука о мясе // М., Пищевая промышленность, 1973, с. 198.

27. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М., изд. «Мир»., 1994, с. 159-172.

28. Могильный М.П., Калашнова Т.В. Пути повышения качества продуктов питания // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 363-364.

29. Мысик А.Т., Белова С.М., Фомичев Ю.П. и др. Справочник по качеству продуктов животноводства // М., Агропромиздат, 1986, с. 254.

30. Нечаев А.П. Научные основы и технологические решения получения жировых продуктов для здорового и лечебно-профилактического питания // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 377-379.

31. Николаева М.А., Лычников Д.С., Неверов А.Н. Идентификация и фальсификация пищевых продуктов // М., Экономика, 1996, с. 84-95.

32. Новоселов В.П., Шаронова Д.А. Методы геномной «дактилоскопии» в экспертизе идентификации личности и кровного родства//Новосибирск, «Наука» РАН, 1999, с. 1- 134.

33. Остерман М.Б. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами // М., Наука, 1983, с. 4-45.

34. Парук А.П., Курмакаева Т.В. Использование биофизических методов при определении фальсификаций мяса // Практик, Москва, 2004, №7-8, с. 14-17.

35. Писарева В.М. Идентификация белков животного происхождения в пищевых продуктах электрофоретическим методом // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва, 1999.

36. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. Утв. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 27 декабря 1983 г. М., ВО «Агропромиздат», 1988.

37. Правила проведения сертификации пищевых продуктов и продовольственного сырья.//М., 1999.

38. Производственно-технический контроль и методы оценки качества мяса и птицепродуктов. Под ред. Горбатова В.М. // М., «Пищевая промышленность», 1974, с. 274.

39. Попова М.Ю., Булыгина Е.С., Кузнецов Б.Б., Жаринов А.И., Рогов И.А., Скрябин К.Г. Определение содержания и выделение ПЦРпригодной ДНК из коммерческих препаратов переработки сои // Биотехнология, Москва, 2003, № 2, с. 86-94.

40. Рогов И.А. Новые технологии производства продуктов здорового питания // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 440-441.

41. Родин В.И. Сравнительная оценка методов ветеринарно-санитарного контроля пищевого сырья и готовых продуктов.// Материалы Международной научно-технической конференции «Пищевой белок и экология». М., 2000, с. 188-189.

42. Романов Г.А. Генетическая инженерия растений и пути решения проблемы биобезопасности // Физиология растений, Москва, 2000, том 47, № з, с. 342-353.

43. Романенко Г.А. Обеспечение качества и безопасности сельскохозяйственной продукции // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с.444-445.

44. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. Под редакцией Скурихина И.М., Тутеляна В.А. // М., Изд. «Брандес», « Медицина», 1998, с. 232.

45. Самуйленко А .Я., Кузнецов Д.П., Кузнецова С.В. Иммуноферментный анализ в ветеринарной медицине // Ветеринария, № 12, с. 20-24.

46. Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.3.2.1078-01 Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов // М., 2001.

47. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды // М., изд. «Мир», 1987, с. 47-64.

48. Сафронова A.M., Батурин А.К., Старовойтов M.JI. Анализ потребления мясопродуктов населением России // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с.464-466.

49. Светличкин В.В. Сертификация животноводческой продукции // Материалы Международной научной конференции «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. Москва, 1999, с. 2131.

50. Сенченко Б.С., Кабанова Е.М. Определение видовой принадлежности мяса по температуре вспышки наружного и внутреннего жира некоторых видов животных.// Сб. трудов Кубанского государственного аграрного университета, 1999, Вып.375, с.119-121.

51. Системы анализа рисков и определения критических контрольных точек: НАССР/ХАССП // Москва, 2002, с.593.

52. Скалинский Е.И., Белоусов А.А. Микроструктура мяса.// М., Пищевая промышленность, 1978, с. 155-175.

53. Слесаренко Н.А., Курмакаева Т.В., Якушев С.В. Морфологические критерии определения видовой принадлежности мяса.// Современные вопросы интенсификации кормления, содержания животных и улучшения качества продуктов животноводства. М.,1999, с.103-105.

54. Смирнов A.M., Симецкий М.А., Таланов Г.А. Состояние и перспективы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии // Ветеринария, 2001, № 10, с. 3-7.

55. Стент Г. Молекулярная генетика // М., изд. «Мир», 1974, с. 535.

56. Татулов Ю. Качество свинины одного из основных видов сырья мясной промышленности // Свиноводство, 1997, № 6, с. 24-26.

57. Узунян Д.Г. Разработка методов и технических средств идентификации мяса на основе ДНК-и иммунодиагностики. Автореф. конд. дисс., Москва 2006

58. Указания по организации Государственного надзора за содержанием гормональных стимуляторов роста и тиреостатиков в продукции животного происхождения № 12-7/900 // Утверждены Главным государственным ветеринарным инспектором РФ 4 октября 1999.

59. Фомичев Ю.П. Техническое регулирование и контроль качества молока в процессе производства // Практик, Москва, 2004, № 7-8, с.8 -13.

60. Фрумгарц Л.Ф., Киприянов С.М., Калачиков С.М. и др. Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации // Биоорганическая химия, 1986, №11, с. 1508-1513.

61. Хвыля С.И. Микроструктурный анализ, идентификация и фальсификация мясных продуктов// Пищевая промышленность, 1998, № 5, с. 68-69.

62. Хвыля С.И. Соевые белковые продукты и возможности их идентификации // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 539-540.

63. Хвыля С.И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г. Практическое применение гистологических методов анализа// Мясная промышленность, 1994, №6, с. 9-11.

64. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика // М, изд. «Мир», 1999, с.558.

65. Чан Т.В.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот // В кн. Молекулярная клиническая диагностики. Методы. М., 1998, изд. «Мир», с. 374-394.

66. Черняева М.Н. Анализ видовой принадлежности мяса и мясопродуктов. // Ветеринария, 2001, №6, с.47-50.

67. Чумак P.M. Иммуноферментный анализ и рекомбинантные антигены // Лаб. диагностика, 1999, № 3, с. 3-6.

68. Чуркина И.В., Сазонова А.А., Черепанов С.В., Смирнов А.Ф. Геномная дактилоскопия кур с использованием в качестве зонда ТГ-обогащенной минисателлитной ДНК // Сельскохозяйственная биология, 1995, №2, с. 53-55.

69. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биотопов // В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., изд. «Мир», 1999, с. 395-425.

70. Экологическая биотехнология (Под ред. Форстера К.Ф., Вейза Д.А.) //Л., изд. «Химия», 1990, с. 21-39.

71. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Анализ пищевых продуктов и напитков с помощью хроматографических методов // Сб.трудов 7-го Всероссийского конгресса « Здоровое питание населения России». Москва, 2003, с. 595-596.

72. Abraham J., Rajulu P.V. Species identification in unprocessed meats through agarose isoelectric focusing of urea-extracted proteins and myoglobin // Indian J.anim.Sc., 1992, v. 62, № 1, p. 69-74.

73. Adessi C., Matton G., Turcatti G., Mermod J., Mayer P., Kawashima E. Solid phase DNA amplification: characterisation of primer attachment and amplification mechanisms // Nucleic Acids Research, 2000, 28, 20, p. 87.

74. Agrowal S., Cristodoulou C., Gait M. Efficient methods for attaching nonradioactive labels to the 5 ends of syntheticaligodeoxy ribonucleotides // Nucl. Acid. Res. 1986. V. 14, p. 6227-6245.

75. Araki H. Et al. Histochemical properties of muscle fiber in breiler chickens // Jap. Soc of Sci Fish. 1993, v.34, № 2, p. 137-144.

76. Bauer F., Rippel-Rachle B. Tierartenidentifizierung bei Fleisch und Fleischwaren.// Wien.tierarztl.Mschr., 1998, Jg.85,H.8.-S.260-266.

77. Beard J. Gene probes Locate waterborne diseases // New Sci, 1987, № 1562, p. 237.

78. Beneke В., Hagen M. Eignung der PCR (Polymerase-Ketten-Reaktion): Tierartennachweis in erhitzten Fleischerzeugnissen.// Fleischwirtschaft, 1998, Jg.78,N 9.-S.1016-1019.

79. Bennet H.S. The structure and functional muscle // Academic Press, New York, v.l, 1960, p. 137.

80. Berger C., Melchers F. In situ hybridization ofmRNA molecule in single cells // Annu rep, 1985, Basel Inst. Immunol, Basel, p. 1-10.

81. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isolation Procedure Based on Selective Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles // J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, № 3, p.615-619.

82. Buntjer J.B.,Lamine A.,Haagsma N.,Lenstra J.A. Species identification by oligonucleotide hybridisation: the influence of processing of meat products // J.Sc.Food Agr., 1999, v. 79, № 1, p. 5357.

83. Calvo J.H.,Zaragoza P.,Osta R. Random amplified polymorphic DNA fingerprints for identification of species in poultry pate // Poultry Sc., 2001, v. 80, № 4, p. 522-524.

84. Cassiman I. Diagnosis of genetic diseases by probes // Acta clin. Belg, 1988, p. 181-184.

85. Chikuni К, Matsunaga T, Tanabe R. Determination of mitochondrial cytochrome В gene sequence for red deer and the differentiation of closely related deer meat // Meat Sci, 1990, v. 49, № 4, p. 379-385.

86. Church R.B. Method for study of hybridization and reassociation of nucleic acids axtracted from cells of higher animals // In: Molecular techniques and approach in developmental biology, ed. by M. J. Chrispeels. N. Y., 1973, p. 223-301.

87. Codex Alimentarius // Vol. 10, FAO, WHO, 1991, 223 p.

88. Codex Alimentarius Volume Thirteen. Methods of analysis and sampling // Vol. 13, FAO, WHO, 1994, 134 p.

89. Codex Alimentarius Volume Ten. Meat and meat products including soups and broths // Vol. 10, FAO, WHO, 1994, 222 p;

90. Cooper M.G. Species identification of meat product by standard methods //Ed.Patt., 1985, v 6, p. 135-141.

91. Сох K.H., DeLeon D.V., Angerer L.M. Detection of mRNAs in sea unchin embryos by in situ hibridization using asymmetric RNA probes // Developmental Biology, 1987, v. 101, p.485-502.

92. De Ley I., Cattoir H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturatiun rates // Europ. J. Biochem., 1970, v. 12, p.133-142.

93. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA // "Biochem. Biophys. Res. Commun.", 1966, v.23, p. 641-646.

94. Ding H.,Xu R.-J.,Chan D.K.O. Identification of broiler chicken meat using a visible/near-infrared spectroscopic technique // J.Sc.Food Agr., 1999, v. 79, № 11, p. 1382-1388.

95. Erlich H.A. PCR technology.// Stockton Press, New York, 1989.

96. Fairbrother K.S.,Hopwood A.J.,Lockley A.K.,Bardsley R.G. Meat speciation by restriction fragment length polymorphism analysis using an alpha-actin cDNA probe // Meat Sc., 1998, v.50, № 1, p. 105-114.

97. Fei S.,Okayama T.,Yamanoue M.,Nishikawa I.,Mannen H.,Tsuji S. Species identification of meats and meat products by PCR // Anim.Sc.Technol., 1996, v.61, № 10. p. 900-905.

98. Fleming I., Lumbley J. Validation of new techniques for the analysis of foods // Food Sciens and technology today, v. 9., № 2, 1995, p. 84-85.

99. Forster A., Modness J., Skingle D. Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin // Nuc. Acid Res., 1985, № 3, p.745.

100. Gillespie D., Spiegelman S. A quantive assay for DNA-RNA hybrids with DNA-RNA immobilized on a membrane // J. Molecul. Biol., 1965, v.12, p.829-842.

101. Gudibande R., Kenten J. Electrochemiluminescen T-label for DNA probe assays // Biotechnol Adv, 1997, v. 15, № 3-4, p. 721.

102. Harbing S., Harbing M. Detection of DNA via an ion channel switch biosensor // Analytical Biochemistry, 2000, 282, p. 70-79.

103. Harris S., Jonet D. Optimisation of the PCR // Brit. J. Biomid. Sci., 1997, v. 54, №3, p. 166-173.

104. Hayashi K. Manipulation of DNA by PCR. In. PCR the Polimerase chain reaction, Eds // Mullis K.B., Ferre F. & Gibbs R.A., Birkhauser, 1994, p. 3-14.

105. Heinert H.H. et al. The analysis of the beef forcemeat on the contents of the alimentary components // Fleischwirtschaft, 1980, v. 2, p. 421240.

106. Heinzelmann R. Beurteilung von Eber-, Zwitter-und Kryptorchiden (Binneneber) fleisch.// Fleischwirtschaft, 1999, Jg.79,N 9.-S.34-39.

107. Helle N. Et al. Methods of allocation DNA from chicken. // Arch. Fur Lebensmittelhygiene, 1996, v. 3, № 2, p. 48-51.

108. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA // Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, v. 97 (l),p 222-227.

109. Hoffmann K. Identification and determination of meat and foreign proteins by means of dodecylsulfat poliacrylamid gel electrophoresis // Ann. Nutr. Alim., v. 31, № 2, 1997, p. 207-215.

110. Hopmar A., Wiegant J., Tesser G. A no-radioactive in situ hybridization method based on mercurated nucleic acid probes and sulfhydryl-hapten ligands // Nucl. Acud. Res., 1986, v. 14, № 16, p. 6471-6488.

111. Hopwood A.J., Fairbrother K.S., Lockley A.K., Bardsley R.G. An actin gene-related polymerase chain reaction (PCR) test for identification of chicken in meat mixtures // Meat Sc., 1999, v. 53, № 4, p. 227-231.

112. Hunt D.J. et al. Fatty acid changes deering development of zygotic // Physiol. Plantarium. 1997, v.81, № 4, p. 447-454.

113. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J., White T.J. Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications // Academic Press, San Diego, California, 1990, p. 16-21.

114. ISO 9001. Quality systems models for quality assurance in design, 1987, pp. 6-8.

115. Jannsen E. Method adapted to PhastSystem // Z. Lebensm. Unterrs. Forsh.1986.-v. 182,-p.479-483.

116. Jremstein M. and Hognes D. Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene // Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1975, p. 3961-3965.

117. Kim H. et al. Applying of different methods for allocation DNA // J. of Food Sci., 1986, v. 5, № 3, p. 68-71.

118. King N.L. Kurt L. Analysis of raw beef samples for adulterant meat species by enzyme staining of isoelectric focusing gels // J. Food Sci.,— 1982.-v.47,-p.l608-1612.

119. Kofoth M. Aktuelles aus der internationalen Fleischforschung // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 68-69.

120. Koh M.C.,Lim C.H.,Chua S.B.,Chew S.T.,Phang S.T.W. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprints for identification of red meat animal species // Meat Sc., 1998, v. 48, № 3/4, p. 275-285.

121. LeProust E., Pellois J., Yu P., Zhang H., Gao X. Digital light-detected synthesis. A microarray platform that permits rapid reaction optimization on a combinatorial basis // Journal of Combinatorial Chemistry, 2000, 2, p. 349-354.

122. Liberona H.E., Moxham J.M., Timbs D.V. Qualitty controlprocedures in an automated serological testing laboratory // N.Z. Vet. J., 1978, 26, № 23, p. 60, 65-66.

123. Longer P. Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1981, №11, p. 6633.

124. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. et al. The classical and sensitive methods for measuring the concentration of proteins // J. Biol. Chemistry., v. 193, 1951, p. 265-270.

125. Ludke H.,Bargholz J.,Leiterer M. Wertbestimmende und Einige toxische Inhaltsstoffe in Fleisch und Verarbeitungsprodukten von Pute und Schwein. Schr.-R // Verb.Dt.Landw.Unters.Forsch.-Anst., Darmstadt, 1993, № 37, -S. 669-672.

126. Macedo-Silva A.,Barbosa S.F.C.,Alkmin M.G.A.,Vaz A.J.,Shimokomaki M., Tenuta-Filho A. Hamburger meat identification by dot-ELISA // Meat Sc., 2000, v. 56, № 2, p. 189-192.

127. Marmur J., Doty P. Heterogeneity in deoxyribonucleic acids. I. Dependens on composition of the configurational stbility of deoxyribonucleic acid // Nature, 1959, v.183, p.1427-1431.

128. Marmur J., Doty P. Thermal renaturation of deoxyribonucleic acid. // J. Molecul. Biol., 1961, v.3, p.585-594.

129. Martin R., Haza A.I., Horales P. Detection and quantification of goats chees in ewes chees using a monoclonal antibody and two ELISA formats // J. Sc. Food Agr. 1997, v.79, № 7, p. 35-41.

130. Martm R. H. Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids // Biotech. Adv., 1991, v.9, p. 185-196.

131. Moio L., DiLuccia A., Addeo F. Fast isoelectric focusing of milk proteins on small ultrathin polyacrylamide gel containing urea // Electrophoresis. 1989, v. 10, p.535-539.

132. Moio L., Sasso M.L., Chianese L., Addeo F. Rapid-detection of bovin milk in ovine, caprine and water buffalo milk or cheese by gel isoelectric focusing on PhastSystem. // Ital. J. Food Sci., 1990, v.3, p. 71-176.

133. New analytical system to improve food quality management // Int. Labmate, 2001, 25, № 7, p. 36.

134. Ouchterlony O. // Progress in Allergy. 1958, v. 6, p. 30

135. Partis L.,Croan D.,Guo Z.,Clark R.,Coldham T.,Murby J. Evaluation of a DNA fingerprinting method for determining the species origin of meats // Meat Sc., 2000, v. 54, № 4, p. 369-376.

136. Paz de Репа M., Concepcion Gid M., Bello J. A method for identification of frozen meat used for production of cooked ham // Meat Sc., 1998, v. 48, № 3/4, p. 257-264.

137. Ranki M. Sandweich hybridization as a convmient method for detection ofnucleic acids in crude samples // Gene, 21, 1983, p. 77.

138. Rehbein H., Kress G., Schmidt T. Application of PCR-SSCP to cpecies identification of fishery products // J. of the Sci of Food and Agric., 1997, v. 74, № 1, p. 35-41.

139. Rehben H. Electrophoretic techniques for species identification of fichery products. -Z, Lebensm. Unters Forsch., 1990, v. 191, p. 1-38.

140. Renand G. Perspectives d'amelioration genetique de la qualite de la viande// Elevages beiges, 1993, № 12, p. 9-11.

141. Renz M., Kiirz C. A colorimetric method for DNA hybridization // Nlicleic Acids Res., 1984. v. 12, № 8, p. 13435-13444.

142. Saiki R.K., Walsh P.S., Levenson C.H., Erlich H.A. Genetic ahalisis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, vol. 86, p. 6230-6234.

143. Sakurai M., Hikono H., Ohta M. Production and characterization of monoclonal antibodyes that zecognize bovine kit zeceptor //Veter. Immunol. Immunopathol. 1997, v. 68, № 2/4, p. 101-112.

144. Sausern J. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electroohoresis // J.Molec.Biolog., 1975, 98, p. 503.

145. Seymour C. Electrophoresis technology: food and reverage analysis // Food Tech. Europe, 1993, Sept/Nov., p.127-152.

146. Skarpeid H.-J.,Moe R.E.,Indahl U.G. Detection of mechanically recovered meat and head meat from cattle in ground beef mixtures by multivariate analysis of isoelectric focusing protein profiles // Meat Sc., 2001, v. 57, №3, p. 227-234.

147. Smith D.M. Immunoassays in Process Control and Speciation of Meats // Food technologi, 1995, № 2, p. 116-117.

148. Sperner В., Schalch В., Gabert J., Greil. В., Stolle A Einsatz des Salmotyre fleischsaft ELISA // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 81-84.

149. Swatland H.J. Early PSE detection.Ontario swine research rev // Guelph,1997, 1997, p. 50-51.

150. Tartaglia M., Saulle E., Pestaloza S. Detection of bovine mitochondrial DNA in ruminant feeds: a molecular approach to test for the presence of bovine-derived material // Journal of food protection, vol. 61, №5, 1998, p. 513-518.

151. Taylor A. Et al. Extraction and ESI-CID-Ms/Ms analysis of myoglobins fran different meat species // Food Sci. &Techn. Tod., 2000, v. 69, № 1, p. 81-86.

152. Tchen P., Ranki M. Time-resolved fluoromentri, a sensitive method to quantify DNA-hybrids // Nucl. Acid Res., 1986, № 2, p. 1017-1028.

153. Todd D., Creelan J. L., MeNulty M. S. Dot-hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe // J. Clin. Microbiol., 1991, v.29,№5,p. 933-939.

154. Varga C.,Strelec V.,Volk M. Poultry meat in the production of meat products // Agriculture, 2000, v. 6, № 1, p. 49-52.

155. Vermer Wheelock. Food safety: A key issue for consumers // Int. J. . Dairy Technol., 1998, 51, №1, p. 11-14.

156. Vo-Dinh t., Anarie J., Isola N., Landis D., Wintenberg A., Ericson M, DNA biochip using a phototransistor integrated circuit // Analytical Chemistry, 1999, 71, p. 358-363.

157. Vollenhofer S., Burg K., Schmidt J., Kroath H. Genetically modified organisms in foods screening and specific detection by polymerase chain reaction // J.Agric.Food Chem/1999,47 (12): 50385043.

158. Westin L., Xu X., Miller C., Wang L., Edman C., Nerenberg M. Anchored multiplex amplification on a microelectronic chip array // Nature Biotechnology, 2000, 18, 2, p. 199-204.

159. Wolf C., Burgener M.,Hubner P.,Luthy J. PCR-RFLP analysis of mitochondrial DNA: differentiation of fish species // Food Sc.Technol., 2000, v .33, № 2, p. 144-150.

160. Wolf C.,Rentsch J.,Hubner P. PCR-RFLP analysis of mitochondrial DNA: a reliable method for species identification // J.agr.Food Chem., 1999, v. 47, № 4, p. 1350-1355.

161. Yamanaka M.,Kudo T.,Itagaki Y.,Sato S.,Nakamura T. Sex identification of beef by polymerase chain reaction // Anim Sc.J., 1999, v.70, № 8, p. 111-113.

162. Yman I. M. Meat and fish species identification by isoelectric focusing // Food laboratory news, v.6, N2, 1990, p. 28-45.

163. Zimmermann S., Zehner R.,Mebs D. Tierartenidentifizierung aus Fleischproben mittels DNA-Analyse // Fleischwirtschaft, 1998, Jg.78, № 5.-P.530-533.