Совершенствование технологии получения белковых гидролизатов и их использование при производстве рыборастительных продуктов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.01, кандидат технических наук Белоусова, Светлана Викторовна

• Белоусова, Светлана Викторовна
• кандидат технических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат технических наук Белоусова, Светлана Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 Аналитический обзор патентно-информационной литературы по проблеме совершенствования технологии получения белковых гидролизатов и их использование при производстве рыборастительных продуктов.

1.1 Роль белка и аминокислот в жизнедеятельности человека.

1.2 Целесообразность использования растительных компонентов в рецептурах продуктов на рыбной основе.

1.3 Существующие способы производства гидролизатов.

1.4 Особенности выбора ферментных препаратов для гидролиза растительного и животного белка.

1.5 Анализ существующих технологических приемов получения рыборастительных продуктов.^в

1.6 Задачи исследования.^g

Глава 2 Объекты и методы исследований.

2.1 Программно-целевая модель исследований.

2.2 Объекты исследований.

2.3 Методы исследований. Лабораторная аппаратура.

2.4 Методы исследования ферментативного гидролиза.

2.5 Методика проведения экспериментов по обработке биосистем электромагнитным полем.

2.6 Определение перевариваемости рыбы и рыбных продуктов.

2.7 Определение коллагена на основе предварительного гидролиза.

2.8 Определение витаминного состава.

2.9 Микробиологические исследования.

2.10 Планирование эксперимента.

Глава 3 Экспериментальная часть.у^

3.1 Теоретическое обоснование способов совершенствования технологии получения белковых гидролизатов.

3.2 Исследование особенностей совместного ферментативного гидролиза белков фасоли и рыбного сырья.

3.3 Исследование воздействия ЭМП НЧ на микрофлору сырья в процессе получения белкового рыборастительного гидролизата. ^

3.4 Совершенствование технологии получения белкового рыборастительного гидролизата.

3.5 Подбор рационального ассортимента и исследование химического состава сырья для изготовления рыборастительных продуктов.

3.6 Получение СОг- экстрактов из растительного сырья. ^ ^

3.7 Изучение влияния рН на изменение протеолитической активности КПГ мышечной ткани рыб.

3.8 Изучение влияния рН на изменение протеолитической активности КПГ мышечной ткани рыб.

Глава 4 Совершенствование технологии рыборастительных консервов с использованием рыбных гидролизатов и разработка рецептур.

4.1 Разработка усовершенствованной технологической схемы производства рыборастительных консервов.

4.2 Разработка рецептур рыборастительных продуктов, обогащенных белковым рыборастительным гидролизатом.

4.3 Оценка пищевой, биологической ценности и безопасности новых видов рыборастительных консервов.

4.4 Разработка технической документации на получение белкового рыборастительного гидролизата, на новые виды рыборастительных продуктов и оценка экономической эффективности. ^

4.5 Опытно-промышленная реализация результатов исследования.

4.6 Расчет экономической эффективности и оценка экологической безопасности новых продуктов питания.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии получения белковых гидролизатов и их использование при производстве рыборастительных продуктов»

Рыбная промышленность страны является одним из поставщиков высокобелкового сырья для производства пищевых продуктов. Однако в период перехода к рыночным отношениям добыча и переработка рыбного сырья значительно снизились, в результате чего в большинстве регионов Российской Федерации потребность в пищевом белке удовлетворяется лишь на 78-80% от нормы. В то же время, недостаточное поступление легкоусвояемых форм белка в рационах питания приводит к нарушению процессов роста, развития и иммунной устойчивости организма человека.

Известен биотехнологический метод получения белка из вторичных ресурсов сельскохозяйственного производства. В основе биотехнологии лежат ферментативные реакции. Высокая специфичность действия протеолитических ферментов, наличие в живых организмах полиферментных систем, катализирующих последовательное превращение субстратов, позволяют получать целевые продукты заданного качества наиболее экономичным путем.

Применение ферментных препаратов в рыбоперерабатывающей промышленности являются одним из эффективных и перспективных путей увеличения производства продуктов функционального назначения, повышения их качества, биологической ценности и вкусовых достоинств.

Теорией процесса регулирования скорости протеолиза занимались известные ученые и специалисты- Андреев М.П., Антипова JI.B., Вознесенский Н.А., Глотова И.А., Леванидов И.П., Левиева А.С., Логвинов М.В., Лысова А.С., Мясоедова В.М., Палагина И.А., Разумовская Р.Г., Слуцкая Т.Н., Черногорцев А.П., Шамханов Ч.Ю., Шендерюк В.И., К. Hjelmeland, J. Koffer, Y. Lida, M. Yamashita и другие.

Определенные успехи достигнуты в области теоретической энзимологии, технологии производства ферментов и очистки гидролизатов от примесей. Обоснована целесообразность обогащения белковыми рыбными гидролизатами овощных и крупяных продуктов. Установлены закономерности функциониро4 вания полиферментных систем, участвующих в последовательных превращениях субстратов, выявлен характер влияния коллоидно-химических факторов на кинетику ферментативных реакций в полидисперсных системах, образующихся при переработке сельскохозяйственного сырья. Это привело к созданию теоретической базы ферментации сырья растительного и животного происхождения.

Пищевая биотехнология принадлежит к числу приоритетных областей человеческих знаний. Эта наука сложилась на основе достижений микробиологии, биохимии, генетики и химической технологии. Весьма желательно применить достижения пищевой биотехнологии в области биотрансформации низкосортного белка на предприятиях рыбной отрасли.

Для определения наиболее рациональных путей использования маломерного и недефицитного рыбного сырья и отходов необходима систематизация и учет вторичных ресурсов переработки гидробионтов, формирование дифференцированных подходов к видам сырья, способам и методам их переработки на пищевые цели.

Традиционные технологии не предусматривают максимальное вовлечение вторичных рыбных ресурсов и не дают желаемых результатов в связи с низкими свойствами низкокалорийных компонентов в рецептурах рыбных продуктов.

Наиболее перспективным решением для получения высокобелковой пищевой добавки в комбинированные рыборастительные продукты считаем предварительную обработку малоценного рыбного сырья с помощью методов биомодификации структуры, среди которых особо выделим метод энзиматиче-ской конверсии.

Несмотря на то, что практически расшифрован механизм действия ферментов на сложные природные субстраты и установлены закономерности функционирования полиферментных систем, участвующих в последовательных превращениях субстратов, до конца не ясен характер влияния коллоидно-химических факторов на кинетику ферментативных реакций в полидисперсных системах, образующихся при переработке вторичного рыбного сырья. Решение этих вопросов может существенно продвинуть создание теоретической базы ферментации растительного и животного сырья и прослужить основой высокоэффективной технологии его переработки.

Рыбная промышленность длительное время была поставщиком полноценного белка в рационах питания различных групп населения, но резкое сокращение сырьевой базы привело к необходимости создания безотходных технологий переработки объектов речного и морского промыслов. В связи с этим, весьма рациональным представляется разработка технологии комбинированных рыборастительных продуктов с использованием ферментативных гидролизатов из малоценной и «сорной» рыбы, из отходов рыбоперерабатывающих производств.

В федеральных целевых программах «Здоровье» и «Развитие АПК» обоснована целесообразность создания безотходных технологий переработки объектов речного и морского промыслов. В связи с этим, весьма рациональным представляется получение ферментативных гидролизатов из малоценной и маломерной рыбы, вторичных ресурсов рыбоперерабатывающих производств, для конструирования сбалансированных по химическому составу рыборастительных продуктов.

Целью диссертационной работы явилась разработка новой технологии рыборастительных продуктов с использованием белковых рыбных гидролизатов.

Заключение диссертации по теме «Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства», Белоусова, Светлана Викторовна

выводы

1 Теоретически обосновано совершенствование технологии получения белкового гидролизата из смеси растительного и животного сырья с помощью мультиэнзимного протеолитического комплекса (МЭПК), содержащего амило-ризин П10Х, пепсин, каталазу, химотрипсин и коллагеназу, обладающего высокой субстратной специфичностью к белкам фасоли и рыбного сырья. Процесс интенсификации процесса гидролиза достигался за счет ступенчатого регулирования рН и температуры в биореакторе с помощью диоксида углерода и тер-мобиореактора.

2 Исследованы особенности совместного ферментативного гидролиза белков фасоли, малоценной рыбы-плотвы и вторичных ресурсов, получаемых при разделке карпа, сига и форели под действием индивидуальных протеолитиче-ских ферментов и мультиэнзимного протеолитического комплекса.

3 Исследована возможность воздействия ЭМП НЧ на снижение микроби-альной обсемененности сырья в процессе получения белкового рыбораститель-ного гидролизата. Установлена возможность подавления развития гнилостных микроорганизмов в гидролизате путем обработки ферментируемой смеси низкочастотным электромагнитным полем в диапазоне модулирующих частот от 27 до 32 Гц с несущей частотой 26,9 МГц. Оценка количественного и качественного состава МАФАнМ гидролизата в процессе ферментолиза подтвердила влияние низкочастотного электромагнитного поля на прекращение развития сапрофитных и патогенных форм микроорганизмов.

4 Усовершенствована технология получения белкового рыборастительного гидролизата из фасоли, малоценных пород рыбы и вторичных рыбных ресурсов под воздействием мультиэнзимного протеолитического комплекса (МЭПК).

5 Подобран рациональный ассортимент зернового и овощного сырья пригодного для использования в рыборастительных продуктах: гречневая.крупа, картофель, капуста белокочанная, лук, морковь, томаты. Исследован химический состав растительного сырья для изготовления рыборастительных продуктов.

6 Усовершенствована технология получения рыборастительных продуктов за счет их обогащения белковым рыборастительным гидролизатом в количестве 6-7%. С помощью математического метода последовательного симплекс-планирования разработаны рецептуры консервированных рыборастительных продуктов на основе использования белкового гидролизата и получено пять патентов РФ на изобретения.

7 Оценена пищевая, биологическая ценность и безопасность новых видов рыборастительных продуктов.

8 Разработана техническая документация на белковый рыборастительный гидролизат и 5 видов рыборастительных продуктов с использованием белкового рыборастительного гидролизата.

9 Экономический эффект от внедрения предлагаемой технологии производства рыборастительных консервов при выпуске 1 туб консервов в год составляет 9140 рублей.

По результатам экспериментальных исследований формулируют выводы и делают общее заключение по работе.

2.8 Определение витаминного состава

Содержание витаминов А и Е определяли методом капиллярного электрофореза. Содержание ниацина - колориметрическим методом /93/. Содержание витамина С - методом титрования раствором 2,6- дихлорфенолиндофено-лята натрия. Содержание витамина F (полиненасыщенных жирных кислот) -методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «Chrom - 5». Витамины Bj и В2 определяли методом инверсионной вольтамперометрии. Сущность методики состоит в кислотном гидролизе связанных форм витаминов, денатурации и осаждении белка из гидролизата с последующим определение на анализаторе ТА - 1.

2.9 Микробиологические исследования

Микробиологические исследования проводили в соответствии с требованиями СанПиН 2.3.2.1078 - 01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» и методических указаний по определению сроков годности пищевых продуктов МУ 4.2.727-99.

В образцах исследуемого объекта определяли: общее количество мезо-фильных аэробов и факультативно-анаэробных микроорганизмов, содержание бактерий группы кишечной палочки, анаэробных спорогенных сульфитредуци-рующих клостридий, сальмонелл, присутствия протея, а также содержание в образцах золотистых коагулазоположительных стафилококков по ГОСТ 26668,

ГОСТ 26934, ГОСТ 26670, в соответствии с СанПиН 2.3.2.1078. Подготовка проб-по ГОСТ 26668.

2.10 Планирование эксперимента

На кафедре технологии мясных и рыбных продуктов КубГТУ доцент Запорожский А.А. разработана программа компьютерного проектирования "Ge-neric-2.0", позволяющая создавать оптимальные по химическому составу рецептуры функционального назначения из мясного, рыбного, овощного и зернового сырья.

Программа реализует концептуальные подходы имитационного моделирования, сформулированные известными отечественными учеными. Однако, оптимизация параметров разрабатываемого продукта производится путем моделирования рецептуры с использованием интегрального критерия сбалансированности по широкому кругу показателей, в качестве которого выбрана квали-метрическая мультипликативная модель. Модель позволяет свести в одну формулу относительные комплексные и простые единичные показатели качества различного характера, обеспечивает независимость свойств каждого из показателей. Для нахождения частного критерия используется функция желательности Харрингтона. Фактор моделирования преобразуется в безразмерную величину, которая выступает показателем соответствия его значения эталону. Значения функции Харрингтона группируются в шкалы желательности (Разработанная программа использует современные программные средства для организации данных, математических расчетов, организации пользовательского интерфейса, что в значительной мере уменьшает затраты времени на проектирование и позволяет обеспечить упорядоченную работу с данными.

Источником данных для проектирования является база данных, реализующая модель рецептуры, представленную на рисунке 2.10.

Рецептура

Компонент №1

Комп<5кент №2

Компонент № N

Баз. элемент №1 | ->■ Элемент №1 1

Баз. элемент №2 | -► Элемент №2 |

Баз. элемент № N | Элемент № N |

Рисунок 2.10 - модель рецептуры, используемая для проектирования

На первом уровне модели находится рецептура (рецептурная смесь), включающая некоторое количество компонентов, содержание которых задается в г/100 г продукта. На втором уровне находится компонент - ингредиент рецептурной смеси. На третьем уровне находятся базовые элементы - макропитательные вещества (белок, липиды, углеводы) витамины, макро- и микронутриенты, содержание которых задается в г/100 г компонента. На четвертом уровне находятся элементы- микропитательные вещества, входящие в состав макропитательных (аминокислоты, жирные кислоты и т.д.), содержание которых задается в г/100г базового элемента. Методика проектирования включает в себя три этапа. Первым этапом создания композиций являлась базовая рецептура продукта для питания конкретной группы населения, в нашем случае взрослого человека среднего возраста, составленная с учетом известных медико-биологических требований. Выбор базовой рецептуры, включающей основные белоксодержащие ингредиенты, производится из пятидесяти вариантов, распределенных по значению обобщенного показателя функции желательности Харрингтона для аминокислотного состава.

На втором этапе оценивали жирнокислотный состав базовой рецептурной композиции. Корректировки производили оптимизируя введение дополнительных жиросодержащих ингредиентов. При этом расчет проводился по формуле материального баланса с учетом не варьируемых ингредиентов базовой рецептурной композиции, смоделированной на первом этапе.

На третьем этапе производилась оценка углеводного, витаминного и минерального состава, рассчитывали энергетическую ценность рецептурных композиций.

Таким образом, последовательно осуществив выше рассмотренные этапы моделирования, получали окончательную рецептуру продукта, наиболее полно соответствующего по составу физиологическим потребностям организма с учетом возраста, патологии, физических состояний и нагрузок, окружающей среды и др.

Номограммный аналог частных функций желательности и обобщенного критерия сбалансированности наглядно отражает соответствие разработанных рецептур задачам моделирования (рисунок 2.11).

Рисунок 2.11 - Мультипликативная модель частных и обобщенной функций желательности сбалансированности рецептурной композиции: D-обобщенный критерий качества; d - частные функции желательности: dr белков; d2- липидов; d3- соотношения белок-т-липиды; d4-аминокислотного состава; d5- жирнокислотного состава; d6- витаминного состава; d7- минерального состава. d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 D

Частные и обобщенная функции желательности, d, (D)

Глава 3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1 Теоретическое обоснование способов совершенствования технологии получения белковых гидролизатов

Известны ряд оригинальных технологических решений по ферментации индивидуального растительного сырья с целью получения пищевых гидролизатов (Антипова Л.В., Березов Т.Т., Кислухина О.В., Позняковский В.М., Щербаков В.Г.). Биотехнология переработки животного, в частности рыбного, сырья также основана на использовании гидролаз (Глотова И.А., Проскуряков М.Т., Черногорцев А.П., Шамханов Ч.Ю., Шендерюк В.И.). Каждый из этих процессов продолжителен, требует специализированного оборудования и использования сравнительно больших количеств ферментов.

Реакции ферментативного гидролиза комплексного сырья протекают по следующей схеме: RRi+H-OH^RH+RjOH

При гидролизе происходит образование фермент-субстратного комплекса, перегруппируемого под воздействием активного центра фермента.

Представляет интерес создание схем, позволяющих описать ход процесса гидролиза рыбного белка и тем самым приблизиться к пониманию его механизма. Уже упомянутые нами в первой главе ученые Гизелиус и Эриксон-Квенсоль предположили, что в гидролизуемом растворе присутствуют только нерасщепленные молекулы исходного белка и конечные продукты реакции, а промежуточные соединения отсутствуют. Однако описать такую схему с помощью классического уравнения Михаэлиса-Ментен оказалось невозможно. В начальный момент процесса гидролиза рыбного белка на стационарной фазе величины констант Михаэлиса имеют отрицательные значения. Как показали наши дальнейшие исследования, в реакционной среде присутствовали не только начальные и конечные продукты, но и промежуточные соединения. В связи с этим было высказано предположение о постепенном гидролизе субстрата. Наблюдаемый характер процесса зависел от соотношения скоростей отдельных стадий: если исходный белок расщеплялся быстрее, чем промежуточные продукты, то наблюдался постепенный характер процесса гидролиза; если быстрее расщеплялись промежуточные продукты, то их присутст

76 вие можно было вообще не заметить и в этом случае процесс выглядел как "взрывной распад белка" сразу же до конечных продуктов, т. е. соответствовал гипотезе Гизелиуса и Эриксон-Квенсоля.

В связи с этим обстоятельством мы предложили оригинальное техническое решение — осуществлять непрерывный отбор образовавшихся в процессе гидролиза аминокислот через поры металлокерамических фильтров.

Известен также описаны механизмы "частичного протеолиза" и "протеолиза с торможением". При "частичном протеолизе" происходит избирательное отщепление протеиназой от субстрата одного или нескольких пептидных фрагментов, в результате чего остается крупномолекулярный остаток белковой природы, т. е. механизм частичного протеолиза принципиально не отличается от механизма постепенного гидролиза белка. Примером такого процесса является гидролиз яичного альбумина протеиназой из Вас. subtilis.

Известно, что в ряде зернобобовых культур, в частности фасоле, содержатся ингибиторы ряда ферментов. Сравнительно недавно были идентифицированы белки- ингибиторы протеиназ в картофеле.

Кинетические кривые протеолиза не имеют прямолинейного начального участка, и скорость гидролиза начинает снижаться с самого начала процесса. Приближение к асимптоте происходит замедленно, и кривые имеют пологий характер. При этом довольно часто на начальном участке кинетические кривые имеют сложную S-образную форму, т. е. реакция идет с лаг-периодом. В связи с этим в некоторых работах предложено определение начальных скоростей реакции гидролиза белков по модифицированному уравнению Михаэлиса-Ментен:

P = bt + ct2 (3.1) где Р - концентрация продуктов гидролиза, t -время процесса гидролиза, а и b - эмпирические константы. Тогда можно записать dP/dt = Ъ + 2ct. (3.2)

При t = 0 начальная скорость процесса гидролиза V определяется как dP/d t= Vq = b и легко находится из экспериментальных данных, представленных в координатах P/t = f(t). Приняв, что скорость протеолиза уже с начального момента протекает не по псевдонулевому, а по псевдопервому порядку, можно рассчитать "эффективные" константы в уравнении Михаэлиса-Ментен. При этом можно зафиксировать так называемую "быструю" и "медленную" стадии гидролиза, т.е. с определенной степенью приближения объединить все три вышеизложенных механизма гидролиза.

Предложен относительно простой метод определения кинетических констант гидролиза рыбного белка каталазой с учетом ингибирования фермента продуктами реакции по уравнению = Км/Умакс [(1 + - с/кр )х In (с. - с0 )/(с, - с0) - (С, - С0 )/Кр J (3.3) где, t - время гидролиза;

С0, Ct, Coo - концентрации освобождающихся аминогрупп в начальный момент времени, в момент времени t и при теоретически полном гидролизе соответственно;

Км, Vmakc и Кр - эффективные константы гидролиза.

Вышеприведенные уравнения (3,1-3,3) во многих случаях позволяют удовлетворительно описать экспериментальные данные даже в случае многокомпонентных субстратов.

В этом случае снижение скорости реакции объясняется тем, что в белке существует большое количество пептидных связей, различающихся по реакционной способности, за счет чего концентрация каждой связи мала и быстро падает в ходе реакции. Из-за существования в белке большого количества разных по реакционной способности химических связей высказано предположение, что даже в условиях насыщения фермента субстратом гидролиз каждой из связей происходит с максимальной скоростью. Эти связи гидролизуются в порядке убывания их реакционной способности, что и приводит к снижению наблюдаемой суммарной скорости гидролитической деградации белка.

Изучение этого явления привело нас к понижению того обстоятельства, что для полного расщепления белков до свободных аминокислот необходимо

78 несколько ферментов с различной специфичностью. По месту атаки молекулы субстрата протеолитические ферменты делятся на эндопептидазы и экзопепти-дазы. Эндопептидазы, или протеиназы, расщепляют пептидную связь внутри пептидной цепи. Они связывают короткие пептидные последовательности субстратов и относительно специфично гидролизуют связи между определенными аминокислотными остатками. Сериновые протеиназы содержат в активном центре важный для каталитического действия этих ферментов остаток серина, в цистеиновых протеиназах таким является остаток цестеина и т.д. Экзопептида-зы гидролизуют пептиды с конца цепи: аминопептидазы- с N-конца, карбокси-пептидазы- с С-конца. Наконец, дипептидазы расщепляют только дипептиды.

Фермент пептидаза атакует пептидную связь и основная реакция идет по схеме: н2О—~°=<r;R +H2N-cVr

Таким образом, следует отметить, что механизма протеолиза очень сложен и до конца не изучен. На рисунке 3.1 приведена схема классификации пептидгидролаз по структуре активного центра:

ПЕПТИ^ИДРОЛАЗЫ

Пептидазы Протеиназы

-*■ Аминопептидазы -*■ Карбоксипептидазы

Дипептидилпептидазы Дипептидазы

-> Карбоксильные -> Сериновые -> Тиоловые

Металлосодержащие

Пептидилдипептидазы

Рисунок 3.1 -Структурная схема пептидгидролаз (по О.В.Кислухиной)

Основу биомассы фасоли составляют полимеры углеводной природы, а также лигнин и белок. Ферментативная деструкция зерна фасоли основана на разрушении клеточных стенок с целью высвобождения белка и других ценных компонентов.

В связи с тем, что аминокислотный состав белков фасоли не сбалансирован по ряду аминокислот, в состав гидролизуемого субстрата включены рыбные белки.

Организация и совершенствование технологических процессов переработки рыбы и морепродуктов в продукты пищевого, технического и специального назначения тесно связаны с их анатомией, которая представляет собой часть биологии и изучает закономерности строения организма в связи с его функцией, историей развития и условиями жизни. Знание закономерностей строения организма рыб дает возможность установить и понять биохимические изменения, происходящие в них после вылова, и рационально использовать образующиеся в процессе переработки ресурсы. Применение гистологического (микроструктурного) анализа рыбного сырья в состоянии оказать существенную помощь как в сознательном научно обоснованном управлении отдельными технологическими приемами, так и в интенсификации технологических процессов, обеспечении экологичности производства за счет создания безотходных и малоотходных технологий при максимальном вовлечении побочных продуктов переработки в основное производство.

Известно, что при разделке рыбы образуется около 15% коллагенсодер-жащего сырья, которое практически не используется в производстве. Нами предложено проводить ферментативную обработку такого сырья, с целью получения белковых пищевых добавок.

Протеолитические ферменты, протеазы, пептид - гидролазы, ферменты класса гидролаз: содержатся в мышечных тканях. Они катализируют гидролиз пептидных связей в клеточных белках. Пептидазы гидролизуют преимущественно внешние пептидпые связи в белках и пептидах, протеиназы - внутренние. В зависимости от особенностей строения активного центра ферменты подразделяют на сериновые, тиоловые (цистеиновые), кислые протеиназы и металло-ферменты, содержащие в активном центре атом металла (чаще Zn). К металло-ферментам относится большинство известных пептидаз. Протеиназы различают также по субстратной специфичности, т. е. способности гидролизовать связи между определёнными аминокислотными остатками. Установлена последовательность аминокислот в молекулах ряда протеолитическиих ферментов, а с помощью рентгеноструктурного алализа - и полная пространственная структура нескольких важнейших протеиназ - пепсина, трипсина, химотрипсина. Про-теолитические ферменты поджелудочной железы синтезируются в форме неактивных предшественников - проферментов и поэтому не разрушают белков ткани, в которой образовались. Препараты протеолитических ферментов применяют в лабораториях (для установления строения белков и пептидов), в пищевой промышленности и в медицине. пепсин химотрипсин

----——— протеаза С катал аза

Рисунок 3,2 - Схема воздействия протеолитических ферментов на мышечную ткань рыбы

В решении вопроса подбора протеаз в производстве пищевого продукта важное значение имеют их специфичность к определенной пептидной связи гид-ролизуемого белка, а также активность и стабильность протеаз как функции рН и температуры, присутствие активаторов и ингибиторов, стоимость и возможность приобретения препарата. С учетом этих критериев можно дать оценку пригодности протеазы для каждого конкретного случая их использования в пищевой промышленности. Использование протеолитических ферментов в рыбной отрасли промышленности зависит от некоторых критериев, которыми определяется их выбор. Самое большое значение в выборе протеаз имеет специфичность фермента, но на выбор влияют и другие факторы, такие как оптимум рН, термостабильность, присутствие активаторов и ингибиторов, стоимость фермента, наличие реального производства и возможность его приобретения.

Как правило, для производства белковых гидролизатов из сырья водного происхождения требуется применение ферментов, обладающих широкой специфичностью, что обеспечивает глубокий гидролиз труднодоступных белков упроченной структуры до низкомолекулярных пептидов и аминокислот.

В отличие от химотрипсина, гидролизующего всего 27 % пептидных связей в молекуле коллагена, протеолитические ферменты некоторых актиномицетов расщепляют 70 - 83 % связей. Некоторые из них ингибировались температурой, регулированием плазмой, рН-оптимума. Область рН-стабильности находится в широком интервале рН - от 3 до 12, они термостабильны и инактивируются при нагревании до 85 - 90°С.

С целью направленного выбора ферментов для модификации белкового сырья в экспериментах мы применяли следующие отечественные препараты протеолитического действия: амилоризин П10Х, пепсин, каталазу, химотрип-син и коллагеназу характеристика которых дана в главе II. Ферментные препараты выбирали по оптимальному значению рН для проявления их активности, совпадающему с диапазоном рН растворов (7-9) после обработки сырья 0,5 % раствором сульфита натрия.

В качестве субстрата использовали предварительно обработанное рыбное сырье. Условия гидролиза (температура и рН) корректировали в соответствии с характеристикой препаратов при идентичной дозировке 60 ед активности на 1 г белка субстрата, обеспечивающей его максимальный гидролиз.

После предварительной обработки рыбного сырья в растворе фиксировао ли: растворимый белок - 2,10 мг/см , суммарные пептиды и аминокислоты — о о

140 мкг/см , тирозин — 0,800 мкмоль/см и редуцирующие вещества - 120 мкг/см3. Доля растворенного продукта - 24,5 мас.% сырья. Навески ферментных препаратов предварительно растворяли в минимальном объеме воды.

Ферментативный гидролиз в течение 6 ч приводит к значительному растворению обработанного сырья - с 24,5 до 64,1 мас.%, например, для коллаге-назы. При действии на сырье мультиэнзимного протеолитического комплекса эта величина возрастает еще на 12-15 %.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Белоусова, Светлана Викторовна, 2009 год

1.Н., Блинов Ю.Г. Исследования в области технологии использования рыб и нерыбных объектов Дальнего Востока // Изв. ТИНРО. - 1995. -Вып. 70.-С. 32-51.

2. Ананичев, А.В. Пищеварительные ферменты рыб // Биохимия. 1969, Т. 22, вып. 6.-С. 1033-1040.

3. Антипова Л.В., Асланов С.И. Ферментная обработка комбинированной белковой композиции в разработке новых видов продуктов // Известия вузов. Пищ. технол., №5-6, 1994. С. 30-32.

4. Антипова, Л.В. Биотехнические основы получения и применения препаратов протеолитических ферментов для обработки сырья молочной и мясной промышленности. Автореф. дис. на соиск. . .д.т.н.- М.: МТИПП, 1992.- 64 с.

5. Антипова, Л.В., Глотова И.А., Жаринов А.И. Прикладная биотехнология. -СПб.: ГИОРД, 2003. -288 с.

6. Антипова, Л.В., Соскова Н.А. Роль технологических процессов в обеспечении биологической безопасности питания. М.: РосАкоАНК, 2003. - 302 с.

7. Барановский, А.Ю., Назаренко, Л.Н. Основы питания россиян Текст. -СПб.: Питер, 2007. 528 с.

8. Барышев, М.Г., Касьянов Г.И. Электромагитная обработка сырья растительного и животного происхождения, -Краснодар: КубГТУ, 2002. 217 с.

9. Белова, А.В. Разработка технологии двухстадийного гидролиза отходов птицеперерабатывающих производств. Автореф. дис. на соиск. .к.т.н. -Санкт-Петербург, 2004. - 16 с.

10. Белоусова С.В., Запорожский А.А. Переработка малоценной рыбы методаминанобиотехнологии // Изв. вузов. Пищевая технология, №3,2007.-С. 48-49.

11. Белоуеова С.В., Сарапкина С.В. Зависимость протеолитической активности ферментов мышечной ткани рыб от вида и сезона вылова // Изв. вузов. Пищевая технология, №3,2007.- С. 19-21.

12. Березин, И.В. Исследования в области ферментативного катализа и инженерной энзимологии. -М.: Наука, 1990. 382 с.

13. Биотехнологическое использование отходов растениеводства. / А.И. Осад-чая, B.C. Подгорский, В.Ф. Семенов и др. Киев: Наук, думка, 1990.- 96 с.

14. Биохимия человека / Мари, Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. : В 2-х томах. ТЛ.Пер. с англ. : М.: Мир, 1993. - 394 с.

15. Бойко, О.А. Воздействие коллагенолитического ферментного препарата на качественные показатели мясного сырья. — В сб. матер. Междун. научн. техн. конф., Воронеж, 1-4 окт. 2003 г. Воронеж: ВГТА, 2003 . - С. 352-356.

16. Влияние интродуцированных растений на ферментолиз рыбных продуктов / С.В. Золотокопова, П. Доссу-Йово, Г.И. Касьянов, И.А. Палагина. Краснодар: КрасНИИРХ, 2003. - 104с.

17. Глазунов, Ю.Т. Моделирование процессов пищевых производств /Ю.Т. Глазунов, A.M. Ершов, М.А. Ершов. -М.: Колос, 2008.- 360 с.

18. Глотова, И.А. Развитие научных и практических основ рационального использования коллагенсодержащих ресурсов в получении функциональных добавок, продуктов и пищевых покрытий. Автореф. дис. на соиск. д.т.н. -Воронеж, 2004. - 44 с.

19. Глотова, И.А. Комбинированные функциональные добавки на основе животных и растительных белков/ И.А. Глотова, А.Н. Кузнецов // Вестник ВГТА, №6, 2001.-С.93-98.

20. ГОСТ 16978-99. Консервы в томатном соусе. Технические условия.

21. ГОСТ 7457-91. Консервы рыбные. Паштеты. Технические условия.

22. ГОСТ 7636 95. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные водоросли и продукты их переработки. Методы анализа.

23. ГОСТ 814-96. Рыба охлажденная. Технические условия.

24. Гранатова, В.П. Теория и практика получения и применения натуральных структурообразователей /В.П. Гранатова, А. А. Запорожский, Г.И.Касьянов// Изв. вузов Пищевая технология, №2, 2007.- С.5-8.

25. Грачева, И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов. М.: Элевар, 2000.- 303 с.

26. Грин, Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология / Пер. с анг. И. Г. Душной, В. И. Мельгунова, М. С. Морозовой и др. М.: Мир, 1990.- Т. 1.-368 е.; Т. 2.-325 е.; Т.З.- 376 с.

27. Диетология: Руководство (Под ред. А.Ю. Барановского Текст.- СПб: Питер, 2008.-1024 с.

28. Доссу-Йово Пьер. Биохимическое обоснование совершенствования традиционных способов производства рыбных продуктов. Автореф. дис.на со-иск. . .к.т.н. - Краснодар, 2002. - 21 с.

29. Дудкин, М.С., Щелкунов Л.Ф. Новые продукты питания. М.: МАИК «Наука», 1998.-304 с.

30. Захарова, Л.А., Зверева B.C. Продукция из океанических и азово-черноморских рыб. М.: Агропромиздат, 1989. - 145 с.

31. Зуб, В.И. Краснодарский край: перспективы обнадеживают. //Рыбоводство и рыболовство. 2000. - №3. - С.6.

32. Иванова Е.Е., Григоренко С.П., Сарапкина О.В., Белоусова С.В. Пресервы из рыб внутренних водоемов Краснодарского края // Изв. вузов. Пищевая технология, №3, 2007.- С. 56-58.

33. Иванова, Е.Е. Основные принципы технологии комбинированных рыборастительных продуктов // Межвузовский сб. НИР «Прогрессивные технологические процессы и оборудование в производствах обработки рыбы и морепродуктов», Калининград, 2002. С. 21-23.

34. Иванова, Е.Е. Развитие теории и практики технологий рациональной переработки рыб, акклиматизированных на Юге России. Автореф. дис. на со-иск. . .д.т.н. - Калининград, 2004. - 54 с.

35. Иванова, Е.Е., Касьянов Г.И. Технологические аспекты разработки сбалансированных по составу продуктов на рыбной основе // Доклады Россельхо-закадемии, №2, 2004. С. 81-82.

36. Итоги Международной выставки «Современные средства воспроизводства и использования водных биоресурсов» Инрыбпром 2000 // Рыбное хозяйство. - 2000. - № 3.- С. 34 - 36.41 Касьянов Г.И.

37. Касьянов Г.И., Сарапкина О.В., Белоусова С.В. Нанобиотехнология переработки рыбного сырья. Монография. Краснодар: КрасНИИРХ, 2006. - 150с.

38. Касьянов, Г.И. Современные технологии переработки вторичных ресурсов //Известия вузов. Пищевая технология, № 2-3, 1998. С. 13-17.

39. Касьянов, Г.И. Создание комплексной технологии и оборудования для извлечения ценных компонентов из растительного сырья — В сб. проектов

40. КубГТУ «Инновационные научно-технические проекты».— Краснодар: КубГТУ, 2007.- С. 58-60.

41. Касьянов, Г.И. Ферментирование рыбного белка с целью получения пищевого концентрата. — В сб. матер, науч-техн. конф. «Химия и химическая технология». Краснодар: Краевой Совет НТО, 1970. -С. 164-167.

42. Касьянов, Г.И., Артемьев Б. В., Козмава А.В. Оценка аминокислотной сбалансированности продуктов питания // Известия вузов. Пищевая технология, № 5-6, 1998. С. 39-42.

43. Кефанова, Н.Н., Артюхов И.Л. Применение полых волокон в получении протеолитических ферментов рыбообрабатывающей промышленности // Тез. докл. регион, конф. Сибири и Дальнего Востока: Красноярск, 1989. - С. 141.

44. Кинетика гидролиза белоксодержащих отходов гидробионтов / В.Е. Куца-кова, А.Л. Ишевский, В.В. Леваков и др.//Хранение и переработка сельхоз-сырья, №12, 2002.-С.31-33.50 Кислухина

45. Климова, О. А., Ведищева Ю.В., Стронгин А .Я. Выделение и характеристика коллагенолитических ферментов из гепатопанкраеса краба стригуна Chionoecttes opilio // Доклады АН СССР, 1991. - Т. 317, № 2. - с. 482 - 484.

46. Козмава, А.В., Касьянов Г.И., Палагина И.А. Технология производства паштетов и фаршей. Ростов - на - Дону: Издательский центр «МарТ», -2002 - 208 с.

47. Колодзейская, М.В. Аффинная хроматография пептидаз // Укр. биохим. журн. 1983. Т. 55, № 5. - С. 577 - 579.

48. Колодзейская, М.М., Пилявская А.С. Пептидазы. Киев: Наукова думка, 1982.- 172 с.

49. Комаров, В.И., Иванова Е.А. Ферменты для производства продуктов питания // Пищевая промышленность, № 12, 1997. — С 12-14.

50. Коробицын B.C., Бирбасов В.А., Бородихин А.С., Белоусова С.В. Извлечение ценных компонентов из растительного сырья сжиженным диоксидом углерода // Изв. вузов. Пищевая технология, №3, 2007.- С. 82-87.

51. Косарина, Е.Б. Разработка и научное обоснование технологии получения рыбного гидролизата-основы белковой зернистой икры.-Автореф. дис. на соиск. .к.т.н.-М., 2004.-22с.

52. Кудряшева, А.А. Секреты хорошего здоровья и активного долголетия. — М.: Пищпромиздат, 2000. 320 с.

53. Куцакова, В.Е., Леваков В.В., Белова А.В. Кинетика гидролиза белокса-держащих продуктов животного происхождения // Мясная индустрия, № 12, 2002. С. 43-45.

54. Лобанов, В.Г. Перспективы развития технологии продуктов на рыбной основе /В.Г. Лобанов, Г.И. Касьянов, А.С. Шубко- Краснодар: КубГТУ, 2008.- 224с.

55. Ломачинский, В.А. Методические аспекты организации сырьевой базы консервного производства /В.А. Ломачинский, Е.Я. Мегердичев //Продукты длительного хранения, №2, 2008 С.2-6.

56. Максюта, И.В., Расулов Э.М., Сарапкина О.В. Разработка продуктов питания с использованием рыбных гидролизатов. В сб. научных трудов КубГТУ. - Краснодар: 2002. - С. 53-53.

57. Мегердичев, Е.Я. Технологические требования к сортам овощей и плодов, предназначенным для различных видов консервирования.-М.: Россельхо-закадемия, 2003. — 95 с.

58. Мезенова О.Я. Биотехнология гидробионтов / О .Я. Мезенова, JI.C. Байда-линова, В.И. Киселев и др. Калининград: КГТУ: 2004.— 461с.

59. Неверова О.А. Пищевая биотехнология Текст. / О.А. Неверова, Г.А. Горе-ликова, В.М. Позняковский —Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2007.-415с.

60. Неклюдов, А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. Получение и очистка белковых гидролизатов // Прикладная биохимия и микробиология, том 36, № 4, 2000.-С. 371-379.

61. Некрасова, Г.Т., Голенкова В.В. Технология ферментного препарата «Океан» и его модификации // Прогрессивная технология производства пресервов, соленой и копченой продукции. Калининград: АтлантНИРО, 1988-С. 67 - 70.

62. Новикова, М.В., Рехина Н.И., и др. Пищевая биологически активная добавка из мидий //Вопросы питания. 1998. - № 1 - с. 10-13.

63. Пат. 2195143 РФ, МПК А 23 L 1/325. Способ производства тефтелей на рыбной основе / Г.И. Касьянов, Е.Е. Иванова, Э.М. Расулов и др. Заявка № 2001103363 / 13. Заявл. 07.02.2001. Опубл.27.12.2002. Бюл.№ 36.

64. Пат. 2198571 РФ, МПК A 23L 1/29. Способ производства рыбных котлет. / Касьянов, Е.Е. Иванова, Э.М. Расулов и др. Заявка № 2001103375/13. Заявл. 07.02.2001. Опубл. 20.02.2003. Бюл. №5.

65. Пат. 2282378 РФ, МПК А 23 L 1/325. Способ производства консервов «Сиг тушеный с овощами» / О.И. Квасенков, В.А. Субботин, Г.И. Касьянов. Заявка № 2004137682/13. Заявл. 23.12.2004. Опубл. 27.08.2008. Бюл. № 24.

66. Пат.2196480 РФ, МПК А 23 L 1/325, 1/29, С 12 Р 1/02. Способ производства рыбоовощного продукта /О.И. Квасенков, и др. Заявка № 2001119876/13. Заявл. 17.07.2001. Опубл. 20.06.2003. Бюл.№ 17.

67. Пат.2198564 РФ,МПК А 23 L 1/29. Способ производства фрикаделей на рыбной основе / Г.И. Касьянов, Е.Е. Иванова, Э.М. Расулов и др. Заявка № 2001103363 / 13. Заявл. 07.02.2001. 0публ.20.02.2003. Бюл.№ 5.

68. Пат.2206231 РФ, МПК А 23 К1/10, А 23 J 1/10. Способ получения белкового гидролизата из кератинсодержащего сырья / В.Е. Куцакова и др. Заявка № 2001119876/13. Заявл. 17.07.2001. Опубл. 20.06.2003. Бюл.№ 17.

69. Паукова, JI.M., Байдалинова JI.C. О возможности выделения ферментов из рыбного сырья // Разраб. технол. белков продуктов из океанич. сырья. — Калининград, 1989. С. 194 - 205.

70. Получение и применение белковых гидролизатов / В.И. Ивашов, А.Д. Неклюдов, Н.В. Федорова, Р.А. Хромова.- М.: АгроНИИТЭИММП, 1990.- 44 с.

71. Попова, И.М., Бобровская Н.Д., Бикбов Т.М. Протеолитическая и липолити-ческая активность ферментных препаратов из черноморской хамсы // Соврем, проблемы рыбохозяйственных исследований. М., 1989. — С. 123 - 129.

72. Позняковский, В.М. Гигиенические основы питания, качество и безопасность пищевых продуктов Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2007 - 455 с.

73. Расулов Э.М. Разработка технологии продуктов функционального питания на основе использования белковых рыбных гидролизатов. Автореферат дисс. на соиск. .к.т.н.- Краснодар: КубГТУ,— 2006. - 23 с.

74. Рехина, Н.И., Новикова М.В., и др. Пищевой продукт из мидий для лечебно-профилактического применения // Рыбное хозяйство. 1995.- № 4 - с. 53-56.

75. Римарева, JI.B. Эффективный ферментный препарат для протеолиза растительного сырья // Хранение и переработка сельхозсырья, № 6, 1995.- С. 40.

76. Рудакова, О.Б. Жиры. Химический состав и экспертиза качества Текст. /О.Б. Рудаков, А.Н. Пономарев, К.К. Полянский, А.В. Лобарь М.: Дели-принт, 2005.-312 с.

77. Руденская, Т.Н., Исаев В.А., Степанов В.М. Выделение и свойства серино-вой протеиназы PC камчатского краба Paralityodes camtshatica протеоли-тического фермента широкой субстратной специфичности // Биохимия. -1996.-Т. 61, №6.-С. 1119-1132.

78. Руденская, Г.Н., Купенко О.Г., Исаев В.А. Выделение и свойства карбок-сипептидазы камчатского краба Paralityodes camtshatica // Биоорганическая. Химия. 1995. - Т. 211, № 4. - С. 249 - 254.

79. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов // Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. М.: Брандес, Медицина, 1998. - 340 с.

80. Сарапкина О.В., Белоусова С.В., Кудинов.В.И, Касьянов Д.Г. Технология рыбо-овощных продуктов // Изв. вузов. Пищевая технология, №3,2007 С. 61-63.

81. Сафронова, Т.М. Сырье и материалы рыбной промышленности. М.: Аг-ропромиздат, 1991. - 191 с.

82. Сахарова, И.Ю., Литвин Ф.Е. Субстратная специфичность коллагенолити-ческих протеаз из гепатопанкреаса камчатского краба // Биохимия. — 1992. Т. - 57, вып. 1. - С. 61 - 67.

83. Сахарова, И.Ю., Литвин Ф.Е., Артюков А.А. Физико-химические свойства коллагенолитической протеиназы С камчатского краба // Биохимия. 1992. -Т. — 57, № 1.-С. 40-45.

84. Серобаба, И.И. Пути оптимизации морского рыбохозяйственного научно-технического комплекса // Труды Крымской Академии наук. «Наука в Крыму. Вопросы развития Крыма». — 2000. Вып. 2. -С. 65-71.

85. Скоупс, Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985. - 358 с.

86. Слуцкая, Т.Н. Биохимические аспекты регулирования протеолиза. — Владивосток: ТИНРО-Центр, 1997. № 5 - С. 148.

87. Теплов В.И. Функциональные продукты питания Текст./В.И. Теплов, В.Е. Боряев, Н.М. Белецкая и др. М.: А- Приор, 2008.-240 с.

88. Технологическая инструкция по производству СОг-экстрактов из листового, корневого и зернового растительного сырья. К ТУ 9169-032-04801346-95.

89. Технология переработки рыбы и морепродуктов / Г.И. Касьянов, Е.Е. Иванова, А.Б. Одинцов и др. Ростов-на-Дону: Изд. центр МарТ, 2001. -416 с.

90. Технология продуктов из гидробионтов // Под ред. Т.М. Сафроновой, В.И. Шендерюка. М.: Колос, 2001. - 496 с.

91. Тимофеенко Т.И., Артеменко И.П., Корнена Е.П. Фосфолипидные продукты функционального назначения. Краснодар: КубГТУ, 2002. - 210 с.

92. Федеральный реестр биологически активных добавок к пище. М.: Гос-санэпидемнадзор, 2002. - 531 с.

93. Химический состав Российских продуктов питания /Под ред. И.М. Ску-рихина и В.А. Тутельяна Текст.-М.: ДеЛипринт, 2002 236 с.

94. Черногорцев, А.П. Теория и практика ферментативной обработки рыб. -Астрахань: Астрыбвтуз, 1974. — 183 с.

95. Шендерюк, В.И. Научные основы использования комплексов пептидгидролаз в технологии рыбных продуктов. Автореферат дисс. на соиск. д.т.н. -М., 1984- 42 с.

96. Шипулин, В.И. Упаковка и тара в мясной и консервной промышленности Текст. Ставрополь: Севкав ГТУ, 2008.- 216 с.

97. Antipova, L.V. Enzymatic purification of collagen // 37 th iupac congress in connection with the 27 th GDCh General Meeting, Berlin, Germany, August 1419,1999. S. 43-44.

98. Bavindranathan, N. A. Preservation process for ready to cook fish portions at room temperature // Seafood Export J. 1990 - N 7-8 - P. 45-47.

99. British fish consumption continues to grow in 1994// Seafood Intern. 1994. -№ 11.-P. 6.

100. Croston, C.B. Trypsin enzymes of Chinook saimon // Arch. Biochem. Biophys. 1981. - Vol. 89, N 2. - P. 202 - 226.

101. Douqlas, J. Biq on squid // Seafood Leader. 1996. № 108. - May /. June. - P. 108.

102. Gustmann, E. Feinkostsalate // Fisch Maq. 1995. N 1 - 2. - S. 125.

103. Innovation ist Chefsache // Fisch Maq. 1995. - № 9. - S. 38 - 39.

104. Inqredientsnews//FoodManuf.- 1996. V. 71. -№ 2. -P. 15.

105. Joshinaka, R., Sato M., Itoko M. Purification and characterization of colla-genolytic serine proteinase from catfisf pancreas // J. Biochem . 1986. - Vol. 99.-P. 459-467.

106. Kasyanov, G.I. Usage of secondary resource in meat and fish/ G.I Kasyanov, A.A.Zaporogsky, S.P. Grigorenko // Meat bisnes, №7, 2008.- Kiev.-P.108-110.

107. Kim, H.R., Meyers S.P., Goldberg J.S. Anionic trypsins from crayfish gepato-pancreas: effect on proteins degradation of tail meat // J. Food Science. — 1996. -Vol. 61, N 1.-P. 78-96.

108. Kindermann, E. Fishprodukt in Germany// I.Wisseschaft, №3,2007 S.73-75.

109. Klimova, D.A., Borukhov S.J., Solovjeva N.I., Balaevskaja Т.О., Strongin A.Y. The isolation and properties of collagenolytic proteases from crab hepato-pancreas // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1990. Vol. 166, N3. - P. 1411-1420.

110. Koffer, J., Fuchs K./ Ruckstandsmonitoring bei Fich. 3. Mitteilung. Organochlorpestizide in Nierenfett // Wien. Tierart L. Monatsschr. -1994. 81, № 2. P. 33-36.

111. Musil, J., Novakova O., Kunz K. Biochemistry in schematic perspective. -Pragne: Slovak medical press, 1991.- 216 p.

112. Monastyrsky, K. Functional Nutrition: the foundation of absolute health and longevitu. Lyndhurst, USA: Ageless Press, 2002. - 340p.

113. Srere, P. A. Complexes of sequential metabolic enzymes // Annual review of biochemistry, 1987. V. 56. P. 89 124.

114. Trendsin cateqories // Food Inqredients and Process.- 1991. N 6. - P. 8.128 w.w.w. pinro, murmansk. ru129 w.w.w. rubricon. com / mme130 w.w.w. inged. ru131 w.w.w. extract, ru

115. A fish is made into "sausage". Fish Intern., 1986, №3, p.28-31.