Специфическая адаптивная клеточная иммунотерапия онкогематологических заболеваний и инфекций иммунной системы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, доктор медицинских наук Дубровина, Екатерина Сергеевна

• Дубровина, Екатерина Сергеевна
• доктор медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Дубровина, Екатерина Сергеевна

Введение.стр.

Глава 1. Обзор научной литературы: Адоптивная клеточная иммунотерапия в онкологии и гематологии.стр.

Предпосылки к развитию адоптивной клеточной иммунотерапии.стр.

Клеточный иммунный ответ.стр.

Методы иммунокоррекции:.стр.

Антиген-специфичная вакцинация.стр.

Адоптивная клеточная иммунотерапия.стр.

Экстракорпоральная активация антиген-специфических Т клеток.стр.

- роль антиген-презентирующих клеток в экстракорпоральной активаили Т лимфоцитов.стр.

- селекция антиген-специфических Т клеток.стр.

Идентификация специфичных антигенов для противовирусного и противоопухолевого ответа.стр.

Факторы, влияющие на эффективность Т клеточного иммунного ответа.стр.

- Миграция Т клеток.стр.

- Отношение числа антиген-специфичных Т клеток к числу клеток мишеней.стр.

- Фенотип эффекторных клеток.стр.

ЫК клетки как компонент НЬА независимого иммунного ответа.стр.

Планирование АКИТ: показания к применению и прогноз.стр.

- Несостоятельность Т клеточного ответа как фактор риска развития заболеваний, подлежащих лечению АКИТ. .стр.

- Клиническое применение АКИТ.стр.

- Прогностические факторы эффективности АКИТ.стр.

- Аутологичные или аллогенные эффекторные клетки.стр-

Глава 2. Материалы и методы.стр.

Клеточные культуры.стр.

Методика управляемой экстракорпоральной активации ЦТЛ .стр.74 стимуляция аллогенными гомозиготными ЭБВ-В-ЛКЛ.стр.

Стимуляция ИАПК.стр.

ЫК клетки.стр.

Генная модификация эффекторных клеток.стр.

Пептиды.стр.

Метод картирования пептидов.стр.

Измерение продукции внутриклеточного .стр.

Определение специфической цитотоксичности

Т клеток.стр.

Определение уровня предшественников ЦТЛ.стр.

Производство тетрамеров.стр.

Экспериментальные модели опухолей.стр.

Аппаратура.стр.

Клинические исследования. Общая характеристика больных.стр.

Статистический анализ.стр.

Глава 3. Антиген-лрезентируюшие клетки: дифференцированное использование для управляемой стимуляции Т лимфоцитов.—.стр.103.

3.1 Аутологичные ЭБВ-В-ЛКЛ (ЭБВ-В-ЛКЛ) как эффективные АПК для презентации низкоиммуногенных эпитопов.стр.

3.2. Аллогенные гомозиготные ЭБВ-В-ЛКЛ.стр.

3.3. Искусственные антиген-презентирующие клетки.стр.

Глава 4. Обогащенные антиген-специфичные Т лимфоциты: методы ранней селекции.стр.

4.1.Деплеция ЫК клеток.стр.

4.2. Ретровирус-обусловленная селекция антиген-специфичных

Т клеток.стр.

Глава 5. Новые иммуногенные эпитопы вирусов и опухолевых клеток как специфичные антигены для Т клеточного ответа при адоптивной иммунотерапии онкогематологических; иммунных и вирусных заболеваний.стр.

Глава 6. Факторы, влияющие на эффективность Т клеточной адоптивной иммунотерапии.стр.

6.1. Изучение специфичности миграции и персистенции ЦТЛ при проведении адоптивной клеточной иммунотерапии.стр.

6.2. Определение терапевтической дозы ЦТЛ.стр.

6.3. Роль CD4* и CD8" субпопуляций Т клеток в противоопухолевом/противовирусном ответе антиген-специфичных ЦТЛ.стр.

Глава 7. Активированные НК клетки онкологических больных как эффективный компонент HLA-независимой аутологичной клеточной иммунной терапии солидных опухолей.стр.

Главы 8. Характеристика типа рестрикции Т клеточного ответа к ЭБВ у больных после различных протоколов ТКМ.стр.

Глава 9. Терапевтическая эффективность и безопасность специфической адоптивной клеточной иммунокоррекции у иммунокомпрометированных больных с

ЭБВ-ЛПЗ и ЦМВ.стр.

9.1. Адоптивная иммунотерапия онкогематологических заболеваний неселектированными лейкоцитами доноров. .стр.

9.2. Адоптивная иммунотерапия ЭБВ-ЛПЗ. развивающихся у больных после ТКМ.стр.

9.3. Адоптивная иммунная терапия с применением антиген-специфичных ЦТЛ в лечении ЭБВ-ЛПЗ.стр.

9. 4. Адоптивная иммунная терапия с применением антиген-специфичных ЦТЛ в лечении ЦМВ.стр.

Глава 10. Определение прогностических факторов эффективности WT1-специфичной противоопухолевой клеточной терапии и прогностической значимости экспрессии WT1 для прогноза течения заболевания целом.стр.

Глава 11: Особенности противоопухолевого клеточного иммунного ответа у онкологических больных и возможности проведения адоптивной противоопухолевой иммунотерапии аутологичными эффекторными клетками.стр.

11.1. Оценка состоятельности WT1 специфичных Т клеток, циркулирующих в организме больных с \\Т опухолями.стр.

11.2 Получение \УТ1 специфичных ЦТЛ у больных с раком толстого кишечника.стр.

11.3. Изучение особенностей функциональной активности НК клеток больных с М1СА/В+ злокачественными новообразованиями.стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Специфическая адаптивная клеточная иммунотерапия онкогематологических заболеваний и инфекций иммунной системы»

Актуальность проблемы.

Данные исследований последних лет показали, что развитие оикогематологических. иммунологических и вирусных заболеваний, как правило, коррелирует со снижением иммунного клеточного ответа на чужеродные антигены [Lucas К. 1996 Collins RH. 1997]. Эффективность лечения этих заболеваний ограничена, с одной стороны, резистентностью опухоли или вируса к проводимой терапии, а, с другой стороны, невозможностью эскалации терапевтических доз в связи с риском развития системной токсичности по отношению к здоровым органам и тканям [Koid HJ, 1990]. Поиск высокоспецифичных биологических методов лечения, базирующихся на естественных механизмах распознавания и удаления чужеродного агента без повреждения здоровых тканей организма, привел к разработке методов адоптивной клеточной иммунотерапии, основанной на введении в организм больного аутологичных или аллогенных клеток иммунной системы, способных специфически распознавать и убивать вирус-инфицированные или опухолевые клетки.

Основы развития адоптивной клеточной иммунотерапии были заложены на стыке иммунологии, гематологии, онкологии, и вирусологии [Walter ЕА. 1995]. В частности, терапевтический эффект пересадки аллогенных стволовых клеток костного мозга при лечении гемобластозов связывали не только с циторедуктивным действием химиотерапии и общего облучения, но также и с дополнительным иммунологическим воздействием Т лимфоцитов донора стволовых клеток. Позже была доказана корреляции между частотой развития РТПХ и сниженным риском развития рецидивов лейкемии после пересадки костного мозга что позволило предположить, что Т лимфоциты, отвечающие за развитие РТПХ. могут являться также медиаторами противолейкемического эффекта, так называемого эффекта «трансплантат-против-лейкемии» (ТПЛ). Подтверждением этой гипотезы являлось повышение частоты развития рецидивов лейкозов при проведении аллогенной трансплантации костного мозга с деплецией зрелых Т лимфоцитов донора [Goldman JM. 1988: Apperley JF.I988]. Более того, было показано, что введение мононуклеарных клеток периферической крови. полученных от донора стволовых клеток, при рецидивах XMJ1 после ТКМ может приводить к гематологической и цитогенетической ремиссии в 70-80% случаев [Kolb HJ. 1990]. В дальнейшем острая необходимость проведения специфической иммунотерапии возникла в результате выявления ЭБВ-ассоциированных лимфопролиферативных заболеваний (ЭБВ-ЛПЗ) у больных с иммунодефицитами различной природы (в том числе после химиолучевой терапии злокачественных новообразований и длительной иммуносуппрессии после пересадки органов и тканей) в корреляции с низким уровнем предшественников ЭБВ-специфичных Т лимфоцитов в крови пациентов [Heslop Н. 1996. Rooney С. 1998]. Введение неселектированных донорских лейкоцитов для лечения ЭБВ. так же как и для лечения ХМЛ. приводило к регрессии опухоли и коррелировало с повышением предшественников антиген-специфичных Т лимфоцитов [O'Reilly RJ. 1997]. демонстрируя, таким образом, перспективность применения адоптивной клеточной иммунотерапии в лечении опухолевых и вирусных заболеваний. Однако, в связи с высоким риском развития РТПХ в результате аллогенного ответа вводимых неселектированных Т лимфоцитов [Mackinnon S. 1995] представляется важным использовать этот подход в направлении поиска биологических мишеней для антиген-специфичного Т клеточного ответа и развития методик экстракорпоральной антиген-специфической стимуляции Т лимфоцитов, позволяющих обогащать вводимую Т клеточную популяцию эффекторными клетками, способными оказывать дифференцированное цитотоксическое воздействие на опухолевые и пораженные вирусом клетки организма, не повреждая при этом здоровые ткани.

Несмотря на корреляцию между частотой развития РТПХ и достижением ремиссии у больных с лейкозами после проведения иммунотерапии неселектированными лейкоцитами донора, исчезновение лейкемических клеток также отмечалось и у больных, не развивающих симптомов РТПХ. что позволило предположить, что ТПЛ и РТПХ не всегда вызываются теми же эффекторными клетками. Проведенные за последние годы исследования позволили выявить целый ряд антигенов, специфически представленных на опухолевых и вирус-пораженных клетках и не экспрессирующихся в достаточном количестве в здоровых тканях организма [Riddell SR, 1991: Kern F. 1999; Ohminami H. 2000]. В результате этого стало возможно разрабатывать методы антиген-специфичной Т клеточной терапии таких заболеваний как ОМЛ. ОЛЛ. ХМЛ, раки толстого кишечника, простаты, яичников. легких. мезотелиомные опухоли. рабдомиосаркомы. десмопластические мелко-круглоклеточные опухоли, опухоль Вильмса, неходжкинские лимфомы. первичные лимфомы головного мозга, а также таких жизнеугрожающих осложнений высокодозной химиотерапии и длительной иммуносуппрессии как ЭБВ-ЛПЗ и ЦМВ [Small Т. 1999].

Исключительно важное значение приобретают данные о том. что эффективность адоптивной клеточной иммунотерапии зависит не только от функциональной активности эффекторных клеток, но и от восприимчивости опухолевых или вирус-инфицированных клеток к их цитотоксическому действию [Knutson К. 2006]. Способность таких аномальных клеток избегать контроля со стороны клеточного звена иммунитета путем изменения своих функционально-морфологических характеристик зачастую приводит к развитию злокачественных заболеваний у иммунокомпетентиых больных [Falkenberg F. 2000]. В связи с этим чрезвычайно актуальным является проведение исследований, направленных на изучение механизмов противовирусного и противоопухолевого клеточного иммунного ответа с целью выявления причин его несостоятельности и разработки методов ее коррекции [Speiser D. 2005]. Проводимые в настоящее время доклинические и клинические испытания безопасности и эффективности адоптивной клеточной иммунотерапии позволяют разработать оптимальный дозо-временной режим проведения такого метода иммунокоррекции для лечения злокачественных и вирусных заболеваний у онкогематологических и иммунологических больных.

Таким образом, адоптивная специфическая клеточная иммунотерапия представляет собой новый прогрессивный и перспективный подход в лечении широкого спектра онкогематологических. иммунных и вирусных заболеваний. позволяющий осуществлять направленное удаление пораженных клеток из организма без повреждения здоровых органов и тканей. Разработка, изучение и внедрение в клиническую практику данного метода лечения является актуальной проблемой, так как его применение способно расширить терапевтические возможности современной медицины в лечении онкогематологических и вирусных заболеваний и повысить эффективность существующих в настоящее время методов лечения этого спектра заболеваний.

Лель исследования.

Обосновать, разработать и внедрить в клиническую практику методы направленной специфической иммунокоррекции клеточного звена противоопухолевого и противовирусного иммунитета для проведения антиген-специфичной биологической терапии онкогематологических, иммунных и вирусных заболеваний

Задачи:

1. Обосновать необходимость дифференцированного использования различных видов антиген-лрезентируюших клеток для направленной экстракорпоральной стимуляции антиген-специфических Т лимфоцитов.

2. Разработать методы селекции Т лимфоцитов для получения популяции эффекторных клеток путем экстракорпоральной антиген-специфичной стимуляции с целью последующего их использования при проведении адоптивной клеточной иммунотерапии опухолевых и вирусных заболеваний без риска развития РТПХ.

3. Разработать и внедрить в практику методику идентификации новых иммуногенных вирус- или опухолеспецифичных лигандов, позволяющую проводить антиген-специфичную клеточную иммунотерапию широкому спектру больных вне зависимости от их НЬА типа.

4. Изучить факторы Т клеточного ответа, влияющие на эффективность адоптивной клеточной иммунотерапии.

5. Разработать и внедрить в практику методику экстракорпоральной активации аутологичных ЫК клеток, специфичных к опухолевому лиганду М1СА/В. для проведения НЬА-независимой аутологичной адоптивной клеточной иммунотерапии опухолей эпителиального происхождения, не экспресснрующих на своей поверхности Н1А молекулы.

6. Изучить особенности антиген-специфичного Т клеточного ответа, развивающегося у больных после ТКМ в зависимости от интенсивности подготовительного режима циторедукции с целью выявления способности Т клеток донора узнавать опухолевые и вирусные антигены в контексте НЬА типа донора и больного.

7. Исследовать терапевтическую эффективность и безопасность адоптивной клеточной иммунотерапии у больных с онкогематологическими заболеваниями, ЭБВ-ЛПЗ и ЦМВ.

8. Определить прогностические факторы эффективности противоопухолевой терапии -специфичными Т клетками

9. Изучить особенности противоопухолевого клеточного иммунного ответа у онкологических и онкогематологических больных и возможности проведения адоптивной противоопухолевой иммунотерапии аутологичными эффекторными клетками, полученными в результате экстракорпоральной активации.

Научная новизна

Адоптивная иммунотерапия в данной работе представлена составной частью комбинированного лечения больных с онкогематологическими. иммунными и вирусными заболеваниями. Для проведения адоптивной иммунотерапии разработаны эффективные методики специфической экстракорпоральной стимуляции эффекторных клеток, применимые в клинической практике, изучены механизмы их действия, разработаны дозово-временные режимы проведения адоптивной клеточной иммунотерапии и особенности антиген-специфичного клеточного иммунного ответа у групп больных с онкогематологическими. иммунными и вирусными заболеваниями для разработки показаний и наиболее эффективных режимов лечения.

8 связи с этим в данной работе впервые. Обоснована необходимость дифференцированного использования различных видов антиген-презентирующих клеток, которые избирательно экспрессируют требуемый антиген в контексте требуемого HLA аллеля/аллелей на основании комбинированного анализа типа химеризма. развивающегося у больных после трансплантации костного мозга с различными режимами кондиционирования, определения доминантного антигенного эпитопа и рестриктирующего доминантного HLA аллеля цитотоксических антиген-специфичных Т клеток.

Разработана методика избирательной управляемой экстракорпоральной стимуляции антиген-специфичных Т лимфоцитов, позволяющая получить цитотоксические Т лимфоциты, специфичные к субдоминантным эпитопам. таким как LMPI и WT1. для лечения ЭБВ-ЛПЗ и лейкемий соответственно. Показано, что цитотоксические Т лимфоциты, полученные путем избирательной управляемой экстракорпоральной стимуляции опухолевым или вирусным антигеном, обладают специфической противоопухолевой цитотоксичностью в лабораторных условиях и позволяют подавлять рост опухоли в экспериментальной модели адоптивной клеточной иммунотерапии лейкозов и ЭБВ лимфом в условиях живого организма без риска развития РТПХ. Опухолеспецифические Т лимфоциты, полученные путем антиген-специфической управляемой экстракорпоральной стимуляции, не оказывают побочного воздействия на здоровые гемопоэтические клетки костного мозга и пуповинной крови.

Разработаны методы ранней селекции Т лимфоцитов с помощью деплеции NK клеток и избирательной трансдукции ретровирусным вектором, позволяющие получать в короткие сроки ЦТЛ, обладающие высокой антиген-специфичностью и низкой аллореактивностью. Разработана эффективная методика идентификации новых иммуногенных вирус- и опухолеспецифичных эпитопов-мишеней индивидуально для Т клеток конкретного донора с помощью перекрывающихся пентадекапептидов. кодирующих полную последовательность антигенного белка. Такая методика позволяет проводить антиген-специфичную противоопухолевую Т клеточную терапию онкогематологическим больным вне зависимости от их HLA типа.

В условиях живого организма показана корреляция между специфическим противоопухолевым ответом адоптивно введенных ЭБВ специфичных ЦТЛ и их специфической миграцией, инфильтрацией и персистенцией. наблюдаемых в области специфической опухоли-мишени при динамической прижизненной визуализации Т клеток.

Выявлено, что направление миграции ЭБВ специфичных Т клеток в аутологичную ЭБВ-ассоциированную опухоль определяется экспрессией в опухоли специфического антигена ЭБВ и иммунодоминантного рестриктирующего HLA аллеля. С помощью неинвазивного длительного повторного мониторинга введенных ЦТЛ описаны факторы, такие как экспрессия специфического антигена, доминантного HLA аллеля. CCR7 и LFAI молекул, которые влияют на длительность циркуляции антиген-специфичных Т лимфоцитов, направленность их миграции в опухоль-мишень и эффективность противоопухолевого ответа. Снижение экспрессии одного из этих факторов предотвращает специфическую инфильтрацию опухоли цитотоксическими Т лимфоцитами и снижает эффективность проводимой адоптивной клеточной иммунотерапии. Впервые была изучена динамическая роль CD4+ и CD8" субпопуляций Т клеток в противоопухолевом ответе на модели адоптивной иммунотерапии. продемонстрировав предпочтительность использования поликлональной популяции Т клеток, содержащей как CD8*. так и CD4+ Т лимфоциты, необходимые для их сочетанного действия, позволяющего повысить эффективность проводимого лечения.

С помощью неинвазивной визуализации определена эффективная терапевтическая доза ЭБВ-специфичных Т клеток, составившая 4400 клеток на 1см3 опухолевой массы.

Разработана методика активации аутологичных клинически применимых НК клеток больных с аденокарциномой толстого кишечника, способных проявлять цитотоксическую специфическую активность против опухолевых клеток больного в лабораторных условиях и в экспериментальной модели адоптивной иммунотерапии рака толстого кишечника, для иммунотерапии опухолей эпителиального происхождения со сниженной экспрессией молекул HLA 1 класса и повышенной экспрессией NKG2D лиганда (MICA). Продемонстрирована корреляция между типом химеризма, развивающимся у пациентов после пересадки костного мозга, мнелоаблативным режимом и типом HLA рестрикции антиген-специфичных Т клеток донора, развивающихся в микроокружении организма реципиента.

Показано, что доминантные рестриктирующие HLA аллели Т клеток донора, развивающихся в организме реципиента стволовых клеток костного мозга, могут отличаться от доминантных рестриктирующих элементов основного комплекса гистосовместамости Т клеток той же генетической природы, развивающихся в организме самого донора, и являются общими для HLA типа как донора, так и больного при их неполной тканевой совместимости.

Проведенное клиническое исследование по изучению клинической эффективности ЭБВ специфичных и ЦМВ специфичных Т клеток при лечении ЭБВ-ЛПЗ и ЦМВ у иммунокомпрометированных больных после пересадки органов и тканей продемонстрировало терапевтическую эффективность этого метода лечения и приводило к ремиссии заболевания у 76% больных с ЭБВ-ЛПЗ и не вызывало побочных эффектов и признаков РТПХ в 100% случаев. Разработаны прогностические факторы течения заболевания и эффективности адоптивной клеточной иммунотерапии для больных с опухолями, экспрессирующими WTI антиген.

Внутриклеточная экспрессия WTI белка в более чем 20% клеток-мишеней была определена как благоприятный прогностический фактор эффективности ответа антиген-экспрессирующей опухоли на специфическую клеточную иммунотерапию WT1 специфичными Т клетками.

• Описан механизм устойчивости аденокарциномы толстого кишечника к лизису NK клетками, основанный на снижении поверхностной экспрессии их активирующего рецептора NKG2D за счет его интернализации под действием высоких концентраций растворимого лиганда этого рецептора. MICA, секретируемого опухолью

• Продемонстрирована возможность получения аутологичных WT1-специфичных Т лимфоцитов, обладающих противоопухолевой активностью, у больных с WT1-позитивной опухолью для проведения противоопухолевой иммунотерапии.

Научно-практическое значение.

Разработанные виды антигеп-презептирующих клеток позволили создать универсальный банк различных АПК, экспрессирующих один или несколько наиболее распространенных HLA аллелей и заблаговременно прошедших все необходимые тесты. Наличие такого банка АПК дает возможность при первой необходимости использовать эти клетки для производства клинически применимых эффекторных клеток адоптивной иммунотерапии, таким образом экономя время и средства, затрачиваемые для получения конечного продукта. Кроме того, такие АПК могут, путем соответствующей генной модификации. селективно представлять низкоиммуногенные опухолевые или вирусные эпитопы, такие как LMP1. которые зачастую являются единственными потенциальными мишенями для ЦТЛ (например, при ЭБВ* Ходжкинской лимфоме. ЭБВ' леомиосаркоме. ЭБВ" назофаренгиальной карциноме), но в силу своей низкой иммуногенности могут вызывать Т клеточный ответ только в случае обеспечения им преимущественной экспрессии на АПК. Дифференциальное использование различных АПК позволяет также проводить направленную стимуляцию Т лимфоцитов с заданной HLA рестрикцией и эпитоп-специфичностью в зависимости от вида патологии. степени гистосовместимости донора и реципиента и запланированных сроков проведения клеточной иммунокоррекции.

Выбор иммуногенных эпитопов для экстракорпоральной стимуляции опухоле- или вирусспецифических Т клеток проводился до настоящего времени, как правило, с помощью компьютеризированной системы прогнозирования вероятности связывания и скорости диссоциации той или иной аминокислотной последовательности в отношении наиболее распространенных НЬА аллелей. Метод идентификации новых опухоле- ми вирусспецифических эпитопов с помощью пулирования перекрывающихся пентадекапептидов, кодирующих полную белковую последовательность выбранного антигена позволяет выявить индивидуальный иммунодоминантный эпитоп для Т клеток любого донора вне зависимости от его НЬА типа. Благодаря такому подходу предоставляется возможность синтезировать противоопухолевые или противовирусные ЦТЛ не только для реципиентов, экспрессирующих наиболее распространенные НЬА аллели, но и для большой группы больных, имеющих более редкий тип НЬА. Кроме того, наши исследования показали, что определяемые с помощью пулированных пентадекапептидов эпитопы часто являются более значимыми с точки зрения противоопухолевого ответа эффекторных клеток, чем последовательности, выбранные на основании компьютерного алгоритма.

Разработанный метод экстракорпоральной стимуляции антиген-специфических ЦТЛ после предварительной селекции Т лимфоцитов позволяет на ранних этапах культивирования обогащать Т клеточную популяцию антиген-специфичными эффекторными клетками путем негативной селекции неспецифических аллореактивных лимфоцитов. Благодаря такому подходу предоставляется возможность в короткие сроки производить необходимое количество противоопухолевых или противовирусных ЦТЛ для проведения адоптивной клеточной иммунотерапии без риска развития РТПХ. Сокращение сроков получения таких ЦТЛ критически необходимо при лечении больных с ЦМВ в раннем постгрансплантационном периоде и с фульминантными формами ЭБВ-ЛПЗ, приводящими к летальному исходу в течении 21 дня в отсутствии специфической терапии. Кроме того, деплеция аллореактивных Т лимфоцитов необходима для проведения адоптивной иммунотерапии ЭБВ-ЛПЗ аллогенными Т клетками больным с длительной иммуносуппрессией после пересадки органов экстрамедулярной локализации, при которой с одной стороны сохраняется собственная гемопоэтнческая система реципиента . а с другой стороны присутствует трансплантат второго донора. Таким образом, при проведении адоптивной клеточной иммунотерапии Т лимфоцитами, содержащими аллореактивную популяцию, повышается риск не только РТПХ, но и отторжения пересаженного органа. Предотвратить подобные осложнения можно путем изначальной деплеции аллореактивных Т клеток, предложенной в данном исследовании.

Проведенные исследования по мониторированию миграции, персистенции и пролиферации адоптивно введенных Т и NK клеток в условиях живого организма позволяют рассчитать дозу и режим введения клеточных препаратов, а также дополнительно использовать компоненты, повышающие экспрессию ключевых молекул взаимодействия эффекторных клеток с их специфическими мишенями. Кроме того, понимание роли различных субпопуляций Т клеток в противоопухолевом ответе способствует разработке критериев качественного контроля вводимых больному ЦТЛ и методов их экстракорпоральной активации.

Идентификация на опухолевых клетках эпителиального происхождения специфического лиганда (MICA), вступающего во взаимодействие с активирующим рецептором на NK клетках (NKG2D), а также описание механизмов их ингибирования позволило разработать адоптивную клеточную терапию с помощью активированных NK клеток для опухолей, не экспрессирующих HLA I и II класса и. соответственно, резистентных к цитотоксическому действию Т клеток.

Изучение типа ЭБВ-специфичного Т клеточного ответа у больных после ТКМ с различными режимами кондиционирования выявило ожидаемый тип рестрикции антиген-специфических ЦТЛ. развивающихся в организме больного. Этот тип рестрикции зависел от химеризма циркулирующих антиген-презентирующих клеток. Полученные данные могут с высокой вероятностью использоваться при планировании профилактической адоптивной клеточной иммунотерапии, выборе донора Т клеток и необходимости дифференцированного применения различных видов АПК при экстракорпоральной стимуляции клеток-эффекторов для получения ЦТЛ, способных распознавать клетки-мишени генетической природы донора или реципиента в контексте соответствующих HLA аллелей.

Проведенные клинические исследования адоптивной иммунотерапии ЭБВ-ЛПЗ продемонстрировали эффективность и безопасность этого метода лечения для различных групп больных, включая пациентов после пересадки костного мозга и органов. Изученные случаи резистентности к терапии ЦТЛ способствовали выявлению факторов, отрицательно влияющих на терапевтический эффект ЦТЛ, что позволит проводить их коррекцию в будущем.

Проведенная в данном исследовании характеристика групп онкологических и онкогематологических больных в зависимости от уровня экспрессии \УТ1 и различных ко-стимуляторных молекул позволила разработать прогностические критерии чувствительности к Т клеточной терапии этих патологий для набора групп пациентов при проведении клинических исследований по изучению эффективности и безопасности лечения \\'Т1 -реактивными ЦТЛ.

Благодаря проведенным исследованиям по выращиванию противоопухолевых Т клеток из образцов МКПК больных с опухолями, экспрессирующими \УТ1, представляется возможным проводить лечение таких пациентов аутологичными Т клетками, которые могут циркулировать в организме дольше чем аллогенные ЦТЛ, и обеспечивать более длительную противоопухолевую защиту, и. одновременно, не создают риск развития РТПХ.

Внедрение в практику:

Разработанный метод определения частоты предшественников антиген-специфических Т клеток с помощью измерения уровня продукции 1Жу широко применяется для характеристики интенсивности специфического ответа различных Т клеточных популяций как на этапах разработки новых подходов к клеточной иммунотерапии, так и для оценки Т клеточного ответа у больных, получающих адоптивную терапию по поводу ЭБВ-ЛПЗ и ЦМВ в МСКОЦ и Пресвитерианском Нью-Йоркском Госпитале .

Метод стимуляции пулом перекрещивающихся пентадекапептидов применятся в лаборатории АКИТ МСКОЦ для определения типа антигенного ответа отдельного взятого донора и его характеристики.

Стадию клинического внедрения прошли ряд методов, разработанных в ходе описанных ниже исследований:

Клинические испытания адоптивной клеточной иммунотерапии с применением Т клеток, полученных из фракционированных МКПК путем экстракорпоральной активации аутологичными В-ЛКЛ при лечении больных с ЭБВ-ЛПЗ после ТКМ и пересадки органов проводится на базе МСКОЦ. На данный момент ЭБВ-специфичные Т клетки были введены 25 больным с клинико-морфологическими и лабораторными признаками ЭБВ-ЛПЗ.

Адоптивная терапия ЦМВ специфичными Т клетками, полученными путем экстракорпоральной стимуляции Т лимфоцитов пулом пентадекапептидов. кодирующих полную последовательность рр65 -иммуногенного белка ЦМВ проводилась в рамках ограниченных клинических испытаний 4 больным после пересадки костного мозга на базе МСКОЦ и Пресвитерианского Госпиталя в Нью-Йорка. Результаты, полученные в ходе данных исследований, легли в основу клинического протокола, подготовленного и одобренного для лечения аналогичной группы больных на базе МСКОЦ.

Результаты исследований по анализу НЬА рестрикции Т клеток донора, развивающихся в микроокружении организма реципиента после гаплотип-идентичной пересадки костного мозга, проведенные на группе из 22 больных на базе МСКОЦ были использованы для разработки клинического протокола по применению искусственных антиген-презентирующих клеток для экстракорпоральной активации опухоле- и вирус-специфических Т клеток, одобренного к клиническому применению в МСКОЦ.

Разработанная система генетической модификации антиген-специфичных Т клеток путем внедрения ретровирусного вектора, кодирующего тимидин киназу вируса герпеса в качестве «суицидального», визуализирующего и «селектирующего» маркера на образцах от 30 доноров, позволила внедрить методы ускоренной селекции и размножения антиген-специфичных Т клеток для лечения больных с фульминантной формой ЭБВ-ЛПЗ. На основании проведенных исследований совместно со службой молекулярной визуализации МСКОЦ внедрены методы биологической оценки и визуализации эффективности Т клеточной терапии путем неинвазивного мониторирования адоптивно введенных Т клеток при лечении

ЭБВ-ЛПЗ. рака толстого кишечника, рака яичников. ОМЛ. и ОЛЛ на основе молекулярного анализа.

Данные, полученные в ходе динамического наблюдения за миграцией и персистенцией адоптивно введенных компонентов Т клеточной терапии, положены в основу доз и режимов клинических протоколов адоптивной клеточной иммунотерапии, проводимой на базе МСКОЦ и Уэйльского Корнельского Университета.

Благодаря данным, полученным в ходе исследований факторов, необходимых для взаимодействия эффекторных клеток с клетками-мишенями. разработана система повышения экспрессии ключевых молекул этого процесса, которая применяется при оценке опухолеспецифической цитотоксичности ЦТЛ к клеткам рака яичника, рака толстого кишечника, раб дом иосарком ы.

На основании результатов исследований по экстракорпоральной активации WT1-специфичных Т лимфоцитов и изучению механизмов их действия были подготовлены и одобрены к применению клинические протоколы 1-2 фазы по лечению ОМЛ. ОЛЛ. ХМЛ. и рака яичников на базе МСКОЦ и Пресвитерианского Нью-Йоркского Госпиталя.

Результаты, полученные в ходе оценки прогностической значимости фенотипической характеристики злокачественных клеток в отношении эффективности адоптивной иммунотерапии и прогноза заболевания были внедрены в создание скрининговой системы, позволяющей в ходе анализа полученных при заборе образцов тканей и клеток устанавливать чувствительность опухоли к цитотоксическому воздействию Т клеток, вероятность их миграции и персистенции в опухоли, а также степень опухолевой активности по подавлению их действия и прогноз течения заболевания в целом.

Благодаря проведенным исследованиям по изучению механизмов ингибирования активности NK клеток у больных с раком эпителиального происхождения разработана и внедрена в практику методика активации NK клеток для проведения адоптивной иммунотерапии опухолей со сниженной экспрессией HLA молекул I класса с одновременным блокированием растворимой формы MICA.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Дифференцированное использование антигенпрезентирующих клеток позволяет осуществлять направленную экстракорпоральную активацию антиген-специфических Т клеток с управляемой рестрикцией по заданному НЬА аллелю с целью их последующего использования для проведения адоптивной клеточной иммунотерапии опухолевых и вирусных заболеваний.

2. Трансдукция антиген-специфичных Т лимфоцитов ретровирусным вектором, кодирующим тимидинкиназу вируса простого герпеса, осуществленная после специфической антигенной экстракорпоральной стимуляции на ранних сроках культивирования обеспечивает быструю селекцию высокоспецифичных ЦТЛ, не имеющих аллореактивности против здоровых тканей больного, и контролируемых при введении пациентам с помощью «суицидальной» функции данного вектора.

3. Неинвазивное мониторирование адоптивно введенных иммунных клеток позволяет изучить механизм и динамику клеточного ответа при проведении клеточной иммунотерапии, коррегировать ее дозово-временной режим в масштабе реального времени и изучать и коррегировать факторы опухолевой резистентности и функциональные особенности вводимых клеточных субпопуляций, снижающие эффективность проводимого лечения.

4. Экстракорпоральная активация Т клеток пулом перекрещивающихся по аминокислотным последовательностям пентадекапептидов дает возможность идентифицировать новые наиболее иммуногенные эпитопы, имеющие наибольшее функциональное значение в противовирусном и противоопухолевом Т клеточном ответе каждого отдельно взятого донора, для проведения более эффективной адоптивной клеточной иммунотерапии этих заболеваний у широкого спектра больных вне зависимости от их НЬА типа.

5. Активация аутологичных ЫК клеток больных с опухолями эпителиального происхождения путем блокирования подавляющих их активность растворимых молекул, выявленных в данном исследовании. предоставляет эффективный инструмент направленной клеточной иммунокоррекции для лечения опухолей со сниженной экспрессией НЬА молекул 1 класса и. следовательно, резистентных к НЬА-зависимоЙ Т клеточной противоопухолевой цитотоксичности.

6. Изучение типов НЬА рестрикции и доминантных эпитопов ЭБВ-специфического Т клеточного ответа, формирующегося у больных после ТКМ на фоне различных видов химеризма и выявляемого для Т клеток той же генетической природы, развивающихся в организме донора. подтверждает необходимость применения разработанного выше метода экстракорпоральной стимуляции Т клеток с управляемой рестрикцией по заданному НЬА аллелю и антигенному эпитопу.

7. Адоптивная Т клеточная терапия ЭБВ-ЛПЗ является эффективным и безопасным методом направленной иммунокоррекции для лечения этих состояний у больных с длительными иммуносуппрессивными состояниями после пересадки костного мозга и органов.

8. Экстракорпоральная активация Т лимфоцитов с помощью пула перекрещивающихся пентадекапептидов. кодирующих полную последовательность белка рр65. позволяет проводить эффективную иммунотерапию тяжелых форм ЦМВ инфекции, развивающейся у больных после ТКМ и резистентной к терапии ганцикловиром.

9. Фенотипический анализ опухолевых клеток, характеризующий экспрессию опухолеспецифического антигена \УТ1 и ко-стимуляторных молекул, необходимых для эффективного взаимодействия ЦГЛ с клетками-мишенями, позволяет прогнозировать терапевтическую эффективность планируемой клеточной иммунокоррекции и течение заболевания в целом.

10. Выявление WT1 специфичных Т лимфоцитов в крови онкологических больных с новообразованиями, экспрессирующими белок-онкоген WT1. делает возможным проведение опухолеспецифической адоптивной клеточной иммунотерапии у этой группы больных с использованием аутологичных Т клеток, активированных экстракорпорально.

11. Характеристика NK-клеточного ответа у больных с опухолями эпителиального происхождения, экспрессирующими MICA/B, и определение уровня растворимого MICA может являться показанием к проведению терапии активированными аутологичными NK клетками в сочетании с антителами, связывающими MICA молекулу.

Место выполнения работы.

Экспериментально-теоретическая часть выполнена на базе Мемориал Слоан-Кетгеринг Онкологического Центра, Нью-Йорк. США. Исследования проводились в отделениях педиатрии, гинекологии, гастроэнтерологии, трансплантации костного мозга, радиологии, ядерной медицины и терапии.

Клиническая часть работы, включая ретроспективный анализ популяций онкологических и гематологических пациентов и клинические испытания, проводилась на базе отделений педиатрии МСКОЦ Пресвитерианского Нью-Йоркского госпиталя и Корнельского Университета, отделений гинекологии, гастроэнтерологии, трансплантации костного мозга и терапии МСКОЦ. и научно-клинического отделов ФГУ ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава. Москва. РФ.

Апробация работы

Материалы и основные положения работы доложены на VI. VII и VIII Всероссийских Конгрессах «Человек и лекарство» (Москва. 2000. 2001. 2002 и 2003гг.). на ежегодных конференциях Американского Общества

Гематологов (Майами. 1998; Сан-Франциско. 2000; Филадельфия. 2001. 2002. 2003), Американского общества детских гематологов/онкологов (Чикаго. 1998). Международного общества гематологов (Амстердам. 1998). Сероно симпозиум (США, 1999). Международного общества клеточной терапии (Сан-Диего. 2000; Барселона. 2002), Американского общества Трансплантации костного мозга (Майами. 2002; Колорадо. 2003; Орландо. 2004; Колорадо. 2005; Гонолулу. 2006). Общества Ядерной Медицины (Орландо. 2002; Новый Орлеан. 2003); Общества Молекулярной Визуализации (Сан-Франциско. 2003).

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Дубровина, Екатерина Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Дифференцированное использование аутазогнчпых ЭБВ-В-ЛКЛ, аллогетиаи гомозиготных ЭБВ-В-ЛКЛ и H ЛПК, итбиразелыю зкспрессирующих предопределенные антигенные эпитопы и №~А адледи, совместимые е общими HLA аллелями донора Т клеток и реципиента, позволяет в короткие сроки получать от KLA неполностью совместимых доноров Т клетки с задай нов антиген-специфичностью и JILA рестрикцией, способные распознавать заданные низкойнмуногеиные опухолевые или вирусные эпитопы а контексте заданных IILA аллелей. представленных на клетках

2- Селекция вапнгсн-сисцифнчсских Т лимфоцитов на ранних сроках антиген-специфической экстракорпоральной стимул «пин путем деллеоии CD56* клеток нз МКПК донора и трансдукнии ретроаируеным вектором. кодирующим одновременно «сунцндальнои-марксрныЛ и селекционный белки, позволяет проводить 8-кратную лешицню аллорсяктнвиых Т лимфоцитов н получать в короткие сроки (менее 10 дней) контролируемую по «суицидальному» гену популяцию ЦТЛ. обогащенную в 6 раз антиген-специфичными Т клетками и содержащую <1% неещящфичеекгк М1А-иеэавнсимых NK клеток или NK-подобиых Т личфоиигоа. применимую в клинической практике без риска развития РТТ1Х.

3. Метод картирования мини-пудов перекрывающихся пентадекаппгзидов. кодирующих полиузо последовательность специфических опухолевых или вирусных имчуиогсииых белков. выбранных дли атпнген-спсиифичиоП стимуляции ЦТ Л, позволяет идентифицировать новые специфические вирусные н.ти опухолевые зпитопы. являющиеся иммуногеииынн функционалы» значимыми доминантами и противовирусном или противоопухолевом Т клеточном ответе юиивндувяьио подобранного донор» зффекторных клеток и. таким образом, производить, вне зависимости от HLA типа донора и реципиента, ЦТЛ. содержащие как CDS', так it CD4" популяцию Т лимфоцитов и обладающие противоопухолевой или противовирусной активность», для .течения больных с WT1* мокзчсственными заболеваниями и пист-трансплаиацнонной ЦМВ инфекцией

4. Эффективность адоптивной Т клеточной терапии зависит от I) уровня экспрессии специфического антигена н презеитирующего его иммунодоминаитиого HLA аяледя на клетках-мишенях. 2) взаимодействия ко-сгниуляторных молекул (CXCR1. CCR7 н I.FAI), предопределяющих нитрацию Ц'1Л в место локализации опухоли, с их лига идами, 3) соотношения доты азгпнеи-спеиифнчиых Т клеток н размера опухоли (0,0044x10* ЦТЛ на 1см5 опухоли) и 4) соотношения СЕЛ" и CDS" субиооуляиий Т клеток, содержащихся it используемой смешанной нскяоиыыюй популяции антигсн-спеиифичных ЦТЛ и оказывающих кумулятивное цитрлнтичеехос воздействие на опухоль, осуществляемому при вннмодествии с антигенами, представленными в контексте HLA аллелей 1 и I! класса комплекса гютюоймсспгмоспг. и кедперной активности cj» *Т лммфечыгтов.

5. Разработанная методика экстракорпоральной активации аутологичиых NK клеток больных с опухолями эпителиального происхождения в аутологнчной системе путем блокирования подавляющих их активность растворимых молекул MICA'В, выявленных в данном исследовании, даст возмоиоюсть производить ауюлоптчные противоопухолевые NK Клетки больных, способные оказывать специфическое противоопухолевое воздействие на аутологнчные опухолевые клетки и предоставляет эффективны!! инструмент направленной клеточной нммунокоррекцнн для

КЛС1 КаМИ-МИШСНЯ МИ. ПОЗВОЛЯСТ (IpOtHOHIpOBaih ТСраПСВТИЧССКУЮ >ффсКтНпи<>£11, Планируемой к.'ГСТОЧПОЙ ИММуНОКОррСКИИИ И течение заболевания а целом

10. Циркуляция WT1 специфичных Т клеток у больных с раком яичников и толстой кишки определяется у 67% и 80% больных соответственно и коррелирует с экспрессией этого антигена на опухолевых клетккх, выявляемою 60% и 80S случаев данных заболеваний соответственно, позволяя получить вутолотичнис ЦТ Л. обладающие ^политической активностью против ауто логичной WTt* опухоли для 80-90% больных с WTI" злокачественными новообразованиями с целые последующего проведения «утоаогичиой нммуиокоррежпии

11. Сниженная противоопухолевая активность NK клеток выявляется у 100% больных с MICAi'B" адсиокдрциномой толстого кишечника и обуславливается высоким уровнем растворимого MICAi'B, секретируемого опухолевыми клетками. вызывая ннгернализаиию н деградацию активирующего NK клетки рецептора NKG2D, а также друтих важных хсмокиновых молекул, таких как CXCRL блокируя |ффск1инлый противоопухолевый ответ аутологичиых эффекторных клеток больного, подтверждая необходимость их эффективной экстракорпоральной активации для последующей аутологичной иммуиокоррекпии.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Дубровина, Екатерина Сергеевна, 2007 год

1. Hansen JA. Gooiey ТА. Martin PJ. Appelbaum F. Chauncey TF. Clift RA. Petersdorf EW: Bone marrow transplantation from unrelated donors for patients with chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 338:962. 1998

2. P. Ehrlich. Ned. Tijdschr. Geneeskd. 5. 273 (1909).

3. M. Burnet. Cancer: a biological approach. I. The processes of control. Br Med. J. 5022. 779(1957).

4. O. Slutman. Tumor Development after 3-Methylcholanthrene in Immunologically Deficient Athymic-Nude Mice Science 183. 534 (1974).

5. V. Shankaran Ikeda H. Bruce AT. White JM. Swanson PE. Old LJ. Schreiber RD. IFNgamma and lymphocytes prevent primary tumour development and shape tumour immunogenicity. Nature 410. 1107 (2001).

6. G. P. Dunn. L. J. Old. R. D. Schreiber. The three Es of cancer immunoediting. Armu. Rev. Immunol. 22. 329 (2004).

7. Antin JH. Graft-versus-Ieukemia: no longer an epiphenomenon. Blood 1993: 82: 2273-2277

8. Weiden, P. L„ N. Flournoy. E. D. Thomas. R. Prentice, A. Fefer. С D. Buckner. and R. Storb. 1979. Antileukemic effect of graft-versus-host disease in human recipients of allogeneic -marrow grafts N. Engl. J Med. 300:1068-1073.

9. Weiden. P. L.. K. M. Sullivan. N. Floumoy. R. Storb, and E. D. Thomas. 1981. Antileukemic effect of chronic graft-versus-host disease: contribution to improved survival after allogeneic marrow transplantation. N. Engl. J. Med. 304:1529-1533.

10. Frassoni, F., M. Sessarego. A. Bacigalupo, P Strada, M. Repetto. S. Occhini. R. Defferari, and A. Marmont. 1988 Competition between recipient and donor cells after bone marrow transplantation for chronic myeloid leukemia. Br. J. Haematol. 69:47M75.

11. Martin, P.J ., J.A . Hansen. R Storb. and ED Thomas 1987 . Human marrow transplantation: an immunological perspec- live Adv. Immunol 40 :379 .

12. Neudorf. S., A. Filipovich. N. Ramsay, and J. Kersey. 1984 . Prevention and treatment of acute graft-versus-host-disease Semin. Hematol. 21 :91.

13. Hale. G.. S. Cobbold. H. Waldman for Campath-1 users. 1988 . T cell depletion with Campath-1 in allogeneic bone marrow transplantation . Transplantation (Baltimore) 45 :753 .

14. Maraninchi D. Blaise D. Rio В et al. Impact of T-cell depletion on outcome of allogeneic bone marrow transplantation for standard risk leukemias. Lancet 1987:11: 175-178

15. Goldman JM. Gale RP. Horowitz MM et al. Bone marrow transplantation for chronic myelogenous leukemia in chronic phase: increased risk for relapse associated with T-cel! depletion. Ann Intern Med 1988: 108: 806-814

16. Horowitz MM. Gale RP. Sondel PM et al. Graft-versus-leukemia reactions after bone marrow transplantation. Blood 1990:75: 555-562.

17. Ridell S Finding a place for tumor-specific T cells in targeted cancer therapy. J Exp Med. 2004. vol.200. 1533-1537.

18. Kurtzman.G., N. Frickhofen, J. Kimball. D.W. Jenkins, AW. Nienhuis, and N.S. Young. 1989 . Pure red cell aplasia of 10 years' duration due to persistent Parvovirus BI9 infection and its cure with immunoglobulin therapy.N. Engl.j Med. 321:519.

19. Rickinson A. Moss D. Human cytotoxic T lymphocyte responses to Epstein- Barr virus infection. Annu Rev Immunol. 1997:15:405-431

20. O'Reilly R. Small T, Papadopoulos E, Lucas K, Lacerda J. Koulova L. Biology and adoptive cell therapy of Epstein-Barr virus associated lymphoproliferative disorders in recipients of marrow allografts. Immunol Rev. 1997:157:195-216

21. Lim JB, Kwon OH. Kim HS, Kim HO, Choi JR. Provenzano M. Stroncek D. Adoptive immunotherapy for cytomegalovirus (CMV) disease in immunocompromised patients. Yome> M«/J2004.45:S18-22. 22. Brennan DC Cytomegalovirus in renal transplantation J Am SQC Nephrol 2001;12:848-55.

23. Pouria S. State Oi. WongW. Hendry BM, CMV infection is associated with transplant renal artery stenosis. QJM 1998:91:18-9.

24. Hosenpud JD. Coronary artery disease after heart transplantation and its relation ot cytomegalovirus. Am Heart J\ 999;138:S469-72.

25. Ljungman P. Engelhard D. Link H. et al. 'treatment of interstitial pneumonitis due to cytomegalovirus with ganciclovir and intravenous immunoglobulin: experience of European Bone Marrow Transplant Group. Clin Infect Dis. 1992;14:83l-835.

26. Boeckh M. Bowden RA, Gooley T. Myerson D, Corey L. Successful modification of a pp65 anti-genemia-based early treatment strategy for prevention of cytomegalovirus disease in allogeneic transplant recipients. Blood. 1999;93: 1781-1782.

27. Krause H. Hebart H, Jahn G, Mueller CA. Einsele H. Screening for CMV- specific T-cell proliferation to identify patients at risk of developing late-onset CMV disease Bone Marrow Transplant. 1997:19: 1111-1116.

28. Stuge ТВ. Holmes SP. Saharan S. Tueltenberg A. Roederer M, Weber JS. Lee PP: Diversity and Recognition Efficiency of T Cell Responses to Cancer. Plos Med 2004. I:e28.

29. Kolb HJ. Mittermu "Her J. Ciemm Ch el al. Donor leukocyte transfusions for treatment of recurrent chronic myelogenous leukemia in marrow transplant patients. Blood 1990; 76: 2462-2465.

30. Ba " г ВМАМ. Schattenberg A. Mensink EJBM et al. Donor leukocyte infusions for chronic myeloid leukemia relapsed after allogeneic bone marrow transplantation. J Cltn Oncol 1993; 11: 513-519.

31. Porter DL. Roth MS. McGarigle С el al. induction of graft versus- host disease as immunotherapy for relapsed chronic myeloid leukemia. New Engl J Med 1994; 330: 100-106.

32. Kolb HJ. Schattenberg A. Goldman JM el al. Graft-versusleukemia effect of donor lymphocyte transfusions in marrow grafted patients. Blood 1995: 86: 2041-2050.

33. Collins RH. Shpilberg O. Drobyski WR el al Donor leukocyte infusions in 140 patients with relapsed malignant.-) niter allogeneic bone marrow transplantation J Clin Oncol 1997; 15:433-444.

34. Kolb HJ. Schattenberg A. Goldman JM. et al Graft-versus-leukemia effect of donor lymphocyte transfusions in marrow grafted patients. European Group for Blood and Marrow Transplantation Working Party Chronic Leukemia. Blood 1995:86:2041-50.

35. Collins RH. Jr. Shpilberg O. Drobyski WR. et al Donor leukocyte infusions in 140 patients with relapsed malignancy after allogeneic bone marrow transplantation. J Clin Oncol 1997:15:433-44.

36. Falkenburg JH. Wafelman AR. Joosten P. et al Complete remission of accelerated phase chronic myeloid leukemia by treatment with leukemia-reactive cytotoxic T lymphocytes. Blood 1999:94:1201 -8.

37. Marijt WA. Heemskerk MH, Kloosterboer FM, et al Hemaiopoiesis-restricted minor histocompatibility antigens HA-l-or HA-2-specific T cells can induce complete remissions of relapsed leukemia. Proc Natl Acad Sci USA 2003; 100:2742-

38. Goulmy. E. 1988 Minor histocompatibility antigens in man and their role in transplantation. Transplant. Rev. 2:29-53.

39. Goulmy. E.. A. Termijtelen. B. A Bradley, and J. J. van Rood. 1977. Yantigen killing by T cells of women is restricted by HLA. Nature (Lond.). 266:544-545.

40. Goulmy. E., J. W. Gratama, E. Blokland, F. E. Zwaan. and J. J. van Rood. 1983. A minor transplantation antigen detected by МИС-restricted cytotoxic T lymphocytes during graft-versus-host disease. Nature (Lond). 302:159-161.

41. Janeway, C.A. Jr., Walport, M. & Shlomchik, M.J. Immunobiohgy- e(ln. 5 (Garland Publishing, New York, 2001).

42. Banchereau, J. & Steinman, R.M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature 392. 245-252 (1998).

43. Pardoll. D.M. Spinning molecular immunology into successful immunotherapy. Nat Rev Immunol 2. 227-238 (2002).

44. Stoll, S., Delon. J.. Brotz. T.M. & Germain. R.N. Dynamic imaging of T cell- dendritic cell interactions in lymph nodes. Science 296. 1873-1876 (2002)

45. Sun 0 ' Pollok KE. Burton RL. et al. Simultaneous ex vivo expansion of cytomegalovirus and Fpslein-Barr virus-specific cytotoxic T lymphocytes using B-lymphoblastoid cell lines expressing cytomegalovirus pp65. Blood 1999:94: 3242-3250.

46. Latouche JB. Sadelain M. Induction of human cytotoxic T lymphocytes by artificial antigen-presenting cells. Nat Biotechnol. 2000 Apr:l 8(4}:405-9.

47. Lenschow DJ. Walunas TL. Bluestone JA. CD28/B7 system of T cell costimulation Annu Rev Immunol. 1996:14:233-58. Review.

48. Wijnaendts L. Le Deis! F. Griscelli C. Fischer A Development of immunologic functions after bone marrow transplantation in 33 patients with severe combined immunodeficiency. Blood. 1989 Nov l:74(6):22I2-9.

49. Keenan RD, Ainsworth J. Khan N, Bruton R, Cobbold M, Assenmacher M, Milligan DW. Moss PA. Br J Haematol. Purification of cytomegaiovirus-specific CD8 T cells from peripheral blood using HLA-peptide tetramers.2001 Nov;ll5(2):428-34.

50. Iezzi G. Karjalainen K. Lanzavecchia A. The duration of antigenic stimulation determines the fate of naive and effector T cells. Immunity. 1998 Jan;8{l):89-95.

51. Faber LM, van Luxemburg-Heijs SAP, Willemze R. Falkenburg JHF. Generation of leukemia-reactive cytotoxic T lymphocyte clones from the HLA-identical donor of a patient with leukemia. J Exp Med 1992: 176: 1283-1289

52. Cheever MA. Chen W (1997) Therapy with cultured T cells: principles revisited. Immunol Rev 157:177-194

53. Dudley ME. Wunderlich JR. Robbins PF et al (2002) Cancer regression and autoimmunity in patients after clonal rcpopulation with antitumor lymphocytes. Science 298 850-854.

54. KAMMULA US. MARINCOLA FM: Cancer immunotherapy: is there real progress at last? Biodrugs 11:249-260. 1999.

55. Mocellin S. Mandruzzato S. Bronte V. Lise M. Nitti D (2004) Part I: vaccines for solid tumours. Lancet Oncol 5:681-689

56. Friedmann-Morvinski D. Bendavid A. Waks T. Schindler D, Eshhar Z: Redirected primary T-cells harboring a chimeric receptor require co-stimulation for their antigen-specifi с activation. Blood 2004.

57. Jensen. MC. Cooper. L) and Wu. AM el al. (2003) Engineered CD20-specific primary human cytotoxic T lymphocytes for targeting B-cell malignancy. Cyloiheiapy. 5. pp. 131-8.

58. Cooper. LJ. Al-Kadhimi. Z and DiGiusto. D et al. (2004) Development and application of CD19-specific T cells for adoptive immunotherapy of В ceil malignancies. Blood Cells Mol Dis. 33. pp. 83-9.

59. Gonzalez. S. Naranjo. A and Serrano. LM et al. (2004) Genetic engineering of cytolytic T lymphocytes for adoptive T-cell therapy of neuroblastoma. J Gene Med, 6, pp. 704-11.

60. Kahlon. KS. Brown. С and Cooper. LJ et al. (2004) Specific recognition and killing of glioblastoma multiforme by interleukin 13-zetakine redirected cytolytic T cells. Cancer Res. 64. pp. 9160-6.

61. Cooper, UN. Kalos. M and DiGiusto. DL et al. (2005) T-cell genetic modification for re-directed tumor recognition. Cancer Chemother Biol Response Modifiers. 22. pp. 293-324.

62. STANC0VSK1 I. SCHINDLER DC, WAKS T, YARDEN Y. SELA M. ESHHAR Z: Targeting of T lymphocytes to Neu/HER2-expressing cells using chimeric single chain Fv receptors. J Immunol 15!: 6577-6582. 1993.

63. Holler PD. Chlewicki LK, Kranz DM: TCRs with high affinity for foreign pMHC show self-reactivity. Nat Immunol 2003, 4:55-62.

64. Berger CL, Longley J, Hanlon D, Girardi M, Edelson R. The clonotypic T cell receptor is a source of tumor-associated antigens in cutaneous T cell lymphoma. Ann N Y Acad Sci 2001;941:106-22.

65. Nelson EL. Li X, Hsu FJ, et al Tumor-specific, cytotoxic T-lymphocyte response after idiotype vaccination for B-cell. non-Hodgkin's lymphoma. Blood 1996;88:580-9.

66. Pinilla-lbarz J, Cathcart K. Korontsvit T. et al Vaccination of patients with chronic myelogenous leukemia with bcr-abl oncogene breakpoint fusion peptides generates specific immune responses. Blood 2000:95:1781-7.

67. Greenberg PD. Yee C. Warren EH. Gavin M. Topp M, Cooper L, Nelson B. Ohlen C. Riddell SR: Therapy of human viral and malignant diseases with gene-modified T cell clones European Cytokine Network 2000, 11:304-305.

68. Berger С Blau CA, Huang ML. luliucci JD, Daigamo DC, Gaschet J, Heimfeld S, Clackson T. Riddell SR: Pharmacologically regulated Fas-mediated death of adoptively transferred T cells in a nonhuman primate model. Blood 2004. 103:1261-1269.

69. VAN DER BRUGGEN P, TRAVERSARI C, CHOMEZ P. LURQU1N C. DE PLAEN E. VAN DER EYNDE B, KNUTH A. BOON T: A gene encoding an antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes on a human melanoma. Science 254: 1643-1647, 1991.

70. SAHIN U. TURECI O, SCHMITT H, COCHLOVIUS B, JOHANNES T. SCHM1TS R. STENNER F, LUO G, SCHOBERT I. PFREUNDSCHUH M: Human neoplasms elicit multiple specific immune responses in the autologous host. Proc Natl Acad Sci USA 92: 11810-11813, 1995.

71. Ohminami H. Yasukawa M. Fujita S. HLA class I-restricted lysis of leukemia cells by a CD8(+) cytotoxic T-lymphocyte clone specific for w'l'l peptide. Blood 2000:95:286-93.

72. Oka Y. Elisseeva OA. Tsuboi A. et al Human cytotoxic T-lymphocyte responses specific for peptides of the wild-type Wilms' tumor gene (WTl) product. Immunogenetics 2000;51:99-107.

73. Gao L. Bellantuono I, Elsasser A, et al Selective elimination of leukemic CD34(+) progenitor cells by cytotoxic T lymphocytes specific for WTl. Blood 2000;95:2198-203.

74. Call KM, Glaser T. Ito CY. et al Isolation and characterization of a zinc finger polypeptide gene at the human chromosome II Wilms' tumor locus. Cell 1990;60:509-20.

75. Maurer U, Brieger J, Weidmann E, Mitrou PS, Hoelzer D, Bergmann L. The Wilms' tumor gene is expressed in a subset of CD34+ progenitors and downregulated early in the course of differentiation in vitro. Exp Hematol 1997;25:945-50.

76. Miwa H, Beran M, Saunders GF. Expression of the Wilms* tumor gene (WTl) in human leukemias. Leukemia (Baltimore) 1992;6:405-9.

77. Inoue K. Ogawa H. Sonoda Y. et al Aberrant overexpression of the Wilms tumor gene (WTl) in human leukemia. Blood 1997:89:1405-12

78. Inoue K, Sugiyama H. Ogawa H. et al WTl as a new prognostic factor and a new marker for the detection of minimal residual disease in acute leukemia. Blood 199:84:3071-9.

79. Cilloni D. Gottardi E, Messa F, et al Significant correlation between the degree of WTl expression and the International Prognostic Scoring System Score in patients with myelodysplasia syndromes. J Clin Oncol 2003:21:1988-95.

80. Ueda T. Oji Y, Naka N. et al Overexpression of the Wilms' tumor gene WTl inhuman bone and soft-tissue sarcomas Cancer Sci 2003;94:271-6.

81. Oji Y, Miyoshi S. Maeda H, et al Overexpression of the Wilms' tumor gene WTl in de novo lung cancer. Int J Cancer 2002;100:297-303.

82. Miyoshi Y. Ando A, Egawa C, et al High expression of Wilms' tumor suppressor gene predicts poor prognosis in breast cancer patients. Clin Cancer Res 2002;8:1167-71.

83. Makifa M, Hiraki A, Azuma T, et at Antilung cancer effect of WT!-specific cytotoxic T lymphocytes. Clin Cancer Res 2002;8:2626-31.

84. Wang P. Munger CM, Joshi AD, Pirruccello SJ, Joshi SS. Cytotoxicity of cord blood derived Her2/neu-speciflc cytotoxic T lymphocytes against human breast cancer in vitro and in vivo. Breast Cancer Res Treat. 2004 Jan;83(l): 15-23

85. Rammensee H, Bachmann J, Emmerich NP, Bachor OA, Slevanovic S. SYFPE1TH1: database for MHC ligands and peptide motifs. Immunogenetics 1999;50:213-9.

86. Kern F, Surel IP. Faulhaber N. el al. Target structures of the CD8+ T-cell response to human cytomegalovirus: the 72-kilodalton major immedmteearly protein revisited. J Virol. 1999;73:8179-8184.

87. Kent F. Faulhaber N. Froemmel C. et al. Analysis of CDS T-cell reactivity to cytomegalovirus using protein-spanning pools of overlapping pentadecapeptides. EurJImmunoI. 2000;30: 1676-1682

88. Palmer DC. Balasubramaniam S. Hanada К el al (2004) Vaccine-slimulaled. adoptively transferred CD8+ T cells traffic indiscriminately and ubiquitously while mediating specific tumor destruction. J Immunol 173:7209-7216

89. Vitale M. Pelusi G, Taroni В et al (2005) HLA class 1 antigen down- regulation in primary ovary carcinoma lesions: association with disease stage. Clin Cancer Res 11:67-72

90. Romero JM, Jimenez P. Cabrera T et al (2005) Coordinated downregulation of the antigen presentation machinery and HLA class l/beta2-microglobulin complex is responsible for HLA-ABC loss in bladder cancer. Int J Cancer 113:605-610

91. Saio M, Teicher M. Campbell G. Feiner H. Delgado Y, Frey AB (2004) Immunocytochemical demonstration of down regulation of NLA class-1 molecule expression in human metastatic breast carcinoma. Clin Exp Metastasis 21:243-249

92. Knutson KL, Wagner W, Disis ML Adoptive T cell therapy of solid cancers. Cancer Immunol Immunolher. 2006 Jan;55(l):96-103. Epub 2005 Oct 27. Review.

93. Chang CC, Campoli M, Ferrone S (2003) Hl.A class I defects in malignant lesions: what have we learned? Keio J Med 52:220-229

94. Campbell, J. J., S. Qin, D. Unutmaz, D. Soler, K. E. Murphy. M. R. Hodge, L. Wu, E. С Butcher. 2001. Unique subpopulations of CD56+ NK and NK-T peripheral blood lymphocytes identified by chemokine receptor expression repertoire. J Immunol 166:6477.

95. Liyanage UK. Moore TT, Joo HG et al (2002) Prevalence of regulatory T cells is increased in peripheral blood and tumor microenvironment of patients with pancreas or breast adenocarcinoma J Immunol 169:2756-2761

96. Curiel TJ, Coukos G, Zou L. et al. (2004) Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival. Nat Med 10942-949

97. Viguier M. Lemaitre F. Verola О et al (2004) Foxp3 expressing CD4-KTD25(high) regulatory T cells are overrepresented in human metastatic melanoma lymph nodes and inhibit the function of infiltrating T cells. J Immunol 173:1444-1453

98. Jones E. Dahm-Vicker M. Simon AK et al (2002) Depletion of CD25+ regulatory cells results in suppression of melanoma growth and induction of autoreaciivity in mice. Cancer Immun 2:1

99. CurielTJ. Wei S, Dong H ctal(2O03) Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity Nat Med 9:562-567

100. Almand B. Clark Jl, Nikitina E et al (2001) Increased production of immature myeloid cells in cancer patients: a mechanism of immunosuppression in cancer. J Immunol 166:678-689

101. Dudley ME. Wunderlich J. Nishimura MI, et al. (2001) Adoptive transfer of cloned melanoma-reactive T lymphocytes for the treatment of patients with metastatic melanoma. J Immunother 24:363-373

102. Topalian SL. Muul LM. Solomon D, Rosenberg SA: Expansion of human tumor infiltrating lymphocytes for use in immunotherapy trials. Journal of Immunological Methods 1987. 102:127-141.

103. Ho WY. Blattman JN, Dossett ML, Yee C, Greenbcrg PD: Adoptive immunotherapy: engineering T cell responses as biologic weapons for tumor mass destruction. Cancer Cell 2003, 3.431-437.

104. Riddell SR. Greenberg PD: The use of anti-CD3 and anti-CD28 monoclonal antibodies to clone and expand human aniigen-specific T cells. Journal of ImmunologicalMethods 1990, 128:189-201.

105. Kunzmann V. Wilhelm M. Anti-lymphoma effect of gammadelta T cells. 1.euk Lymphoma. 2005 May;46(5):671-80. Review.

106. Knutson KL, Disis ML (2005) Tumor antigen-specific T helper cells in cancer immunity and immunotherapy. Cancer Immunol lmmunother DOl:10.!007/s00262-004-0653-2.2005;On-Line.

107. Dudley ME. Wunderlich JR, Yang JC et al (2002) A phase I study of nonmyeloablative chemotherapy and adoptive transfer of autologous tumor antigen-specific T lymphocytes in patients with metastatic melanoma. J lmmunother 25:243-251

108. Dudley. M.E. et al. 2001. . Adoptive transfer of cloned melanoma-reactive T lymphocytes for the treatment of patients with metastatic melanoma. J. lmmunother 24::363-373.

109. Dudley, M.E. et al. 2002. . A phase 1 study of nonmyeloablative chemotherapy and adoptive transfer of autologous tumor antigen-specific T lymphocytes in patients with metastatic melanoma. J lmmunother 25::243-251.

110. Korf, J., Veenma-van der Duin, L„ Brinkman-Medema, R, Niemarkt, A. & de Leij, L.F. Divalent cobalt as a label to study lymphocytes distribution using PET and SPECT. J. Nucl. Med 39, 836-841 (1998).

111. Gobuty. A.H-. Robinson. R.G. & Barth, R.F. Organ distribution of 'WmTc- and 5lCr-labeled autologous peripheral blood lymphocytes in rabbits. J. Nucl Med 18. 141-146(1977).

112. Lewin, M. et at. Tat peptide-derivatized magnetic nanoparticles allow in vivo tracking and recovery of progenitor cells. Nat Biotechnol 18, 410-414 (2000).

113. Dodd, C.H. et at. Normal T-cell responses and in vivo magnetic resonance imaging of T-cells loaded with HIV transactivator-peptide-derived superparamagnetic nanoparticles. У Immunol Methods 256, 89-105 (2001).

114. Schelper. R.L. & Adrian, E.K Jr. Monocytes become macrophages: they do not become microglia: a light and electron microscopic autoradiographic study using 125-iododeoxyuridine. J Neuropalhol. Exp. Neurol. 45, 1-19 (1986).

115. Blasberg. R.G. ei at Imaging brain tumor proliferative activity with l24l.iododeoxyuridine. Cancer Res 60. 624-635 (2000)

116. Tjuvajev, J.G. et at. Imaging of brain tumor proliferative activity with iodine- 131-iododeoxyuridine. J. Nucl Med 35, 1407-1417 (1994).

117. Tjuvajev, J.G. et ai. Imaging the expression of transfected genes in vivo. CancerRes. 55,6126-6132(1995).

118. Tjuvajev, J.G. el al. Noninvasive imaging cif herpes virus thymidine kinase gene transfer and expression; a potential method for monitoring clinical gene therapy. Cancer Res 56,4087^095(1996).

119. Larson, S.M.. Tjuvajev, J & Blasberg, R. Triumph over mischance: a role for nuclear medicine in gene therapy. J. Nuci Med. 38, 1230-1233(1997).

120. Tjuvajev, J.G. et al. imaging herpes virus thymidine kinase gene transfer and expression by positron emission tomography. Cancer Res 58, 4333-4341 (1998).

121. Costa, G.L. e! al. Adoptive immunotherapy of experimental autoimmune encephalomyelitis via T-cell delivery of the IL-12 p40 subunit. J Immunol 167.2379-2387(2001).

122. Дубровин M.M. Неинвазивная визуализация гемопоэтических и опухолевых клеток с использованием молекулярно-биологических методов (экспериментальное обоснование и клинические исследования) Автореферат к диссертации Москва. 2006г.

123. Biron. А.. К. В. Nguyen, G. Pien, L. P. Cousens. Т. P. Salazar-Mather. 1999. Natural killer cells in antiviral defense: function and regulation by innate cytokines Ann» Rev Immunol 17:189.

124. Diefenbach. A., D. H. RauSet. 2002. The innate immune response to tumors and its role in the induction of T-cell immunity. Immunol. Rev. 188:9.

125. Kiessling. R., G. Bataillon, E. W. Lamon. E. Klein. 1974. The lymphocyte response fo primary Moloney sarcoma virus tumors: definition of a nonspecific component of the in vitro cellular hypo reactivity of tumor-bearing hosts./и/ J Cancer 14:642.

126. Herberman. R. B„ M. E. Nunn, D. H. Lavrin. 1975. Natural cytotoxic reactivity of mouse lymphoid cells against syngeneic acid allogeneic tumors. I. Distribution of reactivity and specificity. Int J Cancer 16:216.

127. Ljunggren, H. G„ K. Karre. 1990. In search of the "missing self: MHC molecules and NK cell recognition. Immunol Today 11:237.

128. Groh. V.. S. Bahram, S. Bauer, A. Herman, M. Beauchamp, T. Spies. 1996. Cell stress-regulated human major histocompatibility complex class I gene expressed in gaslroinleslinal epithelium. Prvc. Nail Acad. Sci USA 93:12445.

129. Cerwenka, A.. J. L. Baron. L. L. Lanier. 2001. Ectopic expression of retinoic acid early inducible-. gene (RAE-I) permits natural killer cell-mediated rejection of a MHC class 1-bearing tumor in vivo. Proc Natl Acad Sci USA 98:11521.

130. Groh. V.. R. Rhinehart. J. Randolph-Habecker. M. S. Topp. S. R. Ridded. T. Spies. 2001. Costimulation of CD8<iP T cells by NKG2D via engagement by MIC induced on virus-infected cells. Nat Immunol. 2:255.

131. Sivori. S.. M. Vitale. L. Morelli. L. Sanseverino. R. Augugliaro. C. Bottino. 1.. Moretta. A. Moretta. 1997. p46. a novel natural killer cell-specific surface molecule that mediates cell activation. J Exp Med. 186:1129.

132. Robertson. M. J.. 2002. Role of chemokincs in the biology of natural killer cells../. Leukocyte Biol. 71:173

133. Rossi. D.. A. Zlotnik. 2000. The biology of chemokines and their receptors Annu Rev Immunol. 18:217.

134. Robertson. M. J.. B. T. Williams. K. Christopherson. Z. Brahmi, R. Hromas. 2000. Regulation of human natural killer cell migration and proliferation by the exodus subfamily of CC chemokines. Cell Immunol 199:8.

135. Walz. A.. R. Burgener. B. Car. M. Baggiolini. S. L. Kunkel. R. M. Strieter. 1991. Structure and neutrophil-aciiv;ii.iig piiwmos ofa novel inflammatory peptide (ENA-78) with homology to interleukin 8. J Exp Med. 174:1355.

136. Li. A.. S. Dubey. M L. Varney. B. J. Dave. R. K. Singh. 2003. IL-8 directly enhanced endothelial cell survival. proliferation. and matrix metal ioproteinase production and regulated angiogenesis. J Immunol 170:3369.

137. Vihinen. P.. V. M. Kahari. 2002. Matrix metal loproteinases in cancer: prognostic markers and therapeutic targets .In! .1 Cancer 99:157.

138. Levy, A. T„ V. Cioce. M. E. Sobei. S. Garbisa. W. F. Grigioni, L. A. Liotta, W. G. Stetler-Stevenson. 1991. Increased expression of the M, 72.000 type IV collagenase in human colonic adenocarcinoma. Cancer Res 51:439.

139. MacDougall. J. R.. M. R. Bani. Y Lin. J. Rak. R. S. Kerbel. 1995. The 92- kDa gelatinase В is expressed by advanced stage melanoma cells: suppression by somatic cell hybridization with early stage melanoma cells. Cancer Res. 55:4174.

140. Salih. H. R.. H. G. Rammensee. A. Steinle. 2002. Cutting edge: down- regulation of MICA on human tumors by proteolytic shedding ./ Immunol 169:4098.

141. Hale G, Slavin S. Goldman JM. Mackinnon S. Giralt S. Waldmarm H.Alemtuzumab (Campath-IH) for treatment of lymphoid malignancies in the age of nonmyeloaNative conditioning? Bone Marrow Transplant. 2002 Dec;30(l2):797-804

142. Hale G., Waldmann H. Risks of developing Epstein-Barr virus-related lymphoproliferative disorders after T cell depleted marrow transplants. CAMPATH users. Blood, 1998; 91:3079-3083.

143. AnrJerlini P. Korbling M The use of mobilized peripheral blood stem cells from normal donors for allografting Stem Cells. 1997:15:9-17

144. Sirvent N, Reviron D, deLamballerie X, Michel G. First report of Epstein- Barr virus lymphoproliferative disease after cord blood transplantation. Bone Marrow Transplant. 2000:25:120-121

145. Ohga S. Kanaya Y. Maki H, et al. Epstein-Barr virus-associated lymphoproliferative disease after a cord blood transplant for Diamond-Blackfan anemia. Bone Marrow Transplant. 2000:25:209-212

146. Fisher A. Severe combined immunodeficiencies. Immunodef Rev. 3:83, 1992.

147. Gatti RA. Alien HD. Meeuwissen HJ, Hong R, Good RA: Immunological reconstitution of sex-linked lymphopenic immunological deficiency. Lancet 2:1366, 1968

148. De Koning J, Dooren LJ, van Bekkum DW, van Rood JJ, Dicke KA, Radl J: Transplantation of the bone marrow cells and fetal thymus in an infant with lymphopenic immunological deficiency. Lancet 1:1223. 1969.

149. Kenny AB. Hitzig WH: Bone marrow transplantation for severe combined immunodeficiency disease. Eur J Paediatr 131:155,1979

150. O'Reilly RJ. Brochstein J. Dinsmore L. Kirkpatrik D: Marrow transplantation for congenital disorders Semin Hematol 21:188.1984

151. Fischer A. Friedrich W, Levinsky R, Vossen J. Griscelli C. Kubanek B. Morgan G. Wagermakcr G, Landais P: Bone marrow transplantation for immunodeficiency and osteopetrosis. European survey 1968-1985. Lancet 1:1080. 1986

152. Buckley RH, Schiff SE. Schiff RI. Marker! ML, Williams LW, Roberts JL. Myers LA. Ward FE: Hematopoietic stem-cell transplantation for the treatment of severe combined immunodeficiency N Engl J Med 340:508. 1999

153. Buckley RH. Schiff SE, Schiff RI. Roberts JL. Markert ML. Peters W, Williams LW. Ward FE: Hapl о identical stem cell transplantation in human severe combined immunodeficiency Semin liematol 30:92.1993 (suppl 4)

154. Knobloch C. Friedrich W..T cell receptor diversity in severe combined immunodeficiency following HLA-hapl о identical bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplant. 1991 Nov;8(5):383-7

155. Chu E, Umetsu D. Rosen F. Geha RS. Major histocompatibility restriction of antigen recognition byT cells in a recipient of haplotype mismatched human bone marrow transplantation. . J Clin Invest. 1983 Sep:72(3):l 124-9.

156. RIDDELL SR. GREENBERG PD: Cellular adoptive immunotherapy after bone marrow transplantation. Cancer TrcaiRes 76: 337-369. 1995.

157. BRODIE SJ. LEWINSOHN DA. PATTERSON BK, JIYAMAPA D, KRIEGER J. COREY L. GREENBERG PD. RIDDELL SR: In vivo migration and function of transferred HlV-l-specific cytotoxic T cells. Nature Med5: 34-41,1999.

158. Blatlman J Greenberg P Cancer Immunotherapy: a Treatment Ibr thi: Masses Science. Jul 2004, vol 305. 200-205.

159. Gaiger A. Carter L. Greinix H. et al WTI-specific serum antibodies in patients with leukemia. Clin Cancer Res 200l;7(Suppl):761s-5s.

160. Elisseeva OA, Oka Y, Tsuboi A, et al Humoral immune responses against Wilms tumor gene WT1 product in patients with hematopoietic malignancies Blood 2002,99:3272-9.

161. Scheibenbogen C, Letsch A, Thiel E, et al CDS T-cell responses to Wilms tumor gene product WT1 and proteinase 3 in patients with acute myeloid leukemia. Blood 2002,100:2132-7.