Структура и каталитические свойства системы "трипсин - обращенная мицелла" в условиях изменения температуры тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Захарченко, Наталия Леруновна

• Захарченко, Наталия Леруновна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Захарченко, Наталия Леруновна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. МИКРОЭМУЛЬСИИ ВОДА/МАСЛО КАК СРЕДА ДЛЯ

БИОХИМИЧЕСКИХ И ХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ

1.1. Высокоорганизованные системы на основе поверхностно-активных веществ

1.2. Структура и физико-химические свойства обращенных мицелл

1.3. Методы исследования структуры обращенных мицелл.

1.3.1. ЯМР самодиффузия.

1.3.2. ЭПР спиновых зондов.

1.3.3. Кондуктометрия

1.3.4. Другие методы исследования.

1.4. Мицеллярный каталитический эффект.

1.5. Ферменты в обращенных мицеллах.

Глава 2. МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ И ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования

2.2. Кондуктометрия.

2.3. Исследование структуры монослоя АОТ обращенных мицелл методом ЭПР спинового зонда.

2.4. Исследование структуры микроэмульсии методом ЯМР -самодиффузии.

2.5. Исследование структуры белка методом ИК-спектроскопии

2.6. Кинетические измерения.

Глава 3. СТРУКТУРА МИКРОЭМУЛЬСИЙ ВОДА/МАСЛО И

ЛОКАЛИЗАЦИЯ РЕАГЕНТОВ.

3.1. Температурные изменения в структуре системы обращенных мицелл, стабилизированных АОТ. ЯМР-самодиф фузия и электропроводность

Ш ' 3.2. Влияние модифицирующих добавок на процесс кластеризации обращенных мицелл

3.3. Определение локализации субстрата по данным методов ЯМР-самодиффузии и электропроводности.

3.4. Изменения в структуре гидрофобного слоя обращенных мицелл под действием иммобилизованного фермента.

Глава 4. ТЕМПЕРАТУРНЫЙ ФАКТОР И КИНЕТИЧЕСКИЕ ЭФ* ФЕКТЫ В СИСТЕМЕ ОБРАЩЕННЫХ МИЦЕЛЛ В ХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ, МОДЕЛИРУЮЩИХ ДЕЙСТВИЕ ГИДРОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ.

4.1. Щелочной гидролиз и-нитрофенил(этил)хлорметил-фосфоната в условиях кластеризации обращенных мицелл

4.2. Щелочной гидролиз и-нитрофенилацетата в системе обращенных мицелл.

Глава 5. КАТАЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ТРИПСИНА В УСЛОВИЯХ ТЕМПЕРАТУРНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В МИКРОЭМУЛЬСИОННОЙ СРЕДЕ

5.1. Температурный фактор и каталитическая активность трипсина в системе обращенных мицелл.

5.2. Температурные изменения в структуре трипсина.

5.3. Влияние микроокружения на каталитическую активность трипсина в системе обращенных мицелл.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структура и каталитические свойства системы "трипсин - обращенная мицелла" в условиях изменения температуры»

Ферментативные процессы лежат в основе функционирования любого живого организма. Особую роль в метаболизме играют процессы расщепления сложноэфирных и пептидных связей, протекающие под действием про-теолитических ферментов.

Ферментативные реакции в биологической клетке чаще всего протекают вблизи или на поверхности раздела фаз. Ферменты адсорбированы на биологических мембранах, встроены в мембрану или иммобилизованы внутри замкнутых мембранных структур. Даже плазматические ферменты зачастую образуют ассоциаты с компонентами клетки и функционируют в составе субклеточных единиц. Среда, в которой существуют ферменты in vivo, по своим физико-химическим свойствам (полярность, вязкость, диэлектрическая проницаемость и пр.) и химическому составу существенно отличается от водных растворов, используемых в большинстве энзимологических исследований.

Более двадцати пяти лет назад была предложена [Мартинек, 1977] уникальная по своим свойствам система - дисперсии обращенных мицелл, позволяющая максимально естественно моделировать природную иммобилизацию ферментов и их локальное микроокружение. Оказалось, что водорастворимые ферменты можно солюбилизировать в органических растворителях с помощью поверхностно-активных веществ (ПАВ), сохраняя при этом их каталитическую активность. Система обращенных мицелл представляет собой одну из структурных разновидностей .микроэмульсий [Миттел, 1980] - дисперсию микрокапель воды в органической жидкости. Поверхность водных микрокапель стабилизируется мономолекулярным слоем ПАВ, полярные головные группы которого расположены на водной поверхности микрокапли, а углеводородные радикалы ориентированы в сторону объемной органической фазы. Дисперсии обращенных мицелл обладают качествами, незаменимыми при исследовании механизмов функционирования ферментов [Березин, 1985]: 1) простота приготовления; 2) возможность изменения в широких пределах количества воды в микроокружении фермента; 3) термодинамическая устойчивость и оптическая прозрачность систем, позволяющая контролировать структуру и каталитическую активность фермента спектральными методами; 4) обеспечение реакционного контакта водорастворимого фермента с водонерастворимыми субстратами. Несмотря на то, что природа не подготовила ферменты для функционирования в системах с органическим растворителем, изучение закономерностей биокатализа в таких системах позволяет получать принципиально новые данные о стабильности белков и силах, поддерживающих каталитически активную конформацию ферментов [Гладилин, 1998]. Установлено, что многие ферменты демонстрируют хорошую стабильность и высокую активность в системах обращенных мицелл, хотя в сравнении с водной средой могут проявлять специфические особенности (изменение оптимума рН, субстратной специфичности и др.). Особенности поведения ферментов в системе обращенных мицелл имеют многочисленные экспериментальные подтверждения. Для объяснения «суперактивности» и субстратной специфичности ферментов в этих средах предложены теоретические модели, в которых рассматриваются различные аспекты влияния микроокружения на ферменты: изменения в структуре молекулы фермента [Walde, 1988; Stupishina, 2001], увеличение жесткости молекулы фермента под действием мицеллярной матрицы [Levashov, 2001; Klyachko, 2003], солевые эффекты [Walde, 1988; Fadnavis, 1998] и пр.

Параллельно, на протяжении последних десятилетий постоянно возрастает интерес к использованию различных микроэмульсионных сред, в частности обращенных мицелл, в качестве среды для проведения различных химических процессов не только ферментативной природы. Это обусловлено свойствами подобных систем солюбилизировать значительные количества веществ различной полярности (эффект концентрирования) и обеспечивать надежный контакт между соединениями несовместимыми в обычных условиях за счет большой межфазной поверхности [Garti, 2003; Holmberg, 2003; Kumar, 1999; Texter, 2001; Levashov, 2001; Schwuger, 1995; Qi, 1997].

Свойства микроэмульсии в первую очередь определяются составом системы. Вместе с тем, хорошо известно [Moulik, 1998], что вносимые добавки, в том числе химические и биохимические реагенты, могут существенно модифицировать ее структуру и физико-химические свойства. Одной из наиболее распространенных в мицеллярной энзимологии систем является обращенная микроэмульсия, стабилизированная анионным ПАВ Аэрозолем ОТ (АОТ). Наряду с такими свойствами, выигрышными с позиций мицеллярной энзимологии, как высокая солюбилизирующая емкость по отношению к воде, незначительное распределение по размерам мицелл, эта система характеризуется тенденцией мицелл к кластеризации [Moulik, 1998]. Условия, при которых происходит спонтанная кластеризация мицелл в обращенных микроэмульсиях на основе АОТ, являются следствием внутренних перестроек в мицеллах. При этом возможны локальные изменения параметров локального микроокружения солюбилизированных реагентов.

Основной целью работы является изучение структурных характеристик обращенных микроэмульсий на основе АОТ как среды для ферментативных процессов, а именно для гидролитического расщепления сложно-эфирных связей в присутствии трипсина, и поиск взаимосвязи между структурными и каталитическими характеристиками системы. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить температурные изменения в структуре обращенных микроэмульсий методами ЯМР-самодиффузии и кондуктометрии.

2. Исследовать влияние добавок/реагентов на структуру гидрофобной оболочки обращенных мицелл на основе АОТ методами ЭПР спинового зонда и кондуктометрии.

На примере щелочного гидролиза сложных эфиров изучить каталитический эффект системы обращенных мицелл в условиях ее структурных перестроек под действием температуры.

На примере гидролиза Ы-а-бензоил-1-аргинин этилового эфира (БАЭЭ) и и-нитрофенилацетата (ПНФА) в присутствии трипсина исследовать взаимосвязь структуры и каталитических свойств системы «фермент - обращенная мицелла».

10

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Захарченко, Наталия Леруновна

выводы

1. Особенности реакционного поведения трипсина проанализированы с позиций структурно-динамических свойств системы. Показана целесообразность применения взаимодополняющих физических методов к изучению структуры микрогетерогенных реакционных сред. Использование методов ЯМР-самодиффузии, ЭПР спиновых зондов, кондуктометрии и ИК-спектроскопии позволило получить ряд параметров, характеризующих структуру микроэмульсий на основе АОТ, применяемых в качестве среды для моделирования природной иммобилизации и функционирования ферментов.

2. При исследовании гидролитического расщепления N-a-бензоил-/,-аргинин этилового эфира трипсином в условиях изменения температуры установлено, что каталитическая активность фермента в обращенных мицеллах имеет максимум при температурах значительно ниже оптимума активности в водном растворе. Сдвиг оптимума активности трипсина не связан с температурными изменениями во вторичной структуре фермента в системе обращенных мицелл, а вызван изменениями в локальном микроокружении реагентов.

3. Выдвинуто предположение, что наиболее критичными для уровня каталитической активности трипсина в реакции гидролиза Ы-а-бензоил-Х-аргинин этилового эфира в обращенных мицеллах являются уменьшение концентрации субстрата в водном окружении фермента за счет увеличения степени диссоциации головных групп АОТ и электростатического связывания ими субстрата, а также возрастание концентрации ионов натрия вблизи активного центра фермента.

4. Установлено, что вводимые в микроэмульсию реагенты могут провоцировать структурные изменения в среде. Так, вытеснение воды в приполярную область монослоя АОТ при солюбилизации молекулы трипсина в мицелле оказывает пластифицирующее действие на гидрофобную оболочку обращенных мицелл, которое проявляется в нарушении упорядоченной ориентации углеводородных радикалов молекул АОТ.

5. Предложен способ определения локализации субстратов в структуре обращенных мицелл, основанный на относительных изменениях характеристик процесса электрической перколяции в микроэмульсиях вода/масло в присутствии добавок.

В заключение хочу выразить сердечную благодарность своему научному руководителю Зуеву Ю.Ф., проф. Федотову В.Д. за постоянное внимание и поддержку при выполнении работы, Файзуллину Д.А. за проведение ИК-эксперимента и полезное обсуждение результатов, Ступишиной Е.А., Вылегжаниной Н.Н. и Идиятуллину Б.З. за помощь и консультации при выполнении экспериментальной части, всему коллективу лаборатории молекулярной биофизики за постоянную поддержку, а также Миргородской А.Б., Захаровой Л.Я. и коллективу лаборатории высокоорганизованных сред ИОФХ им. Арбузова, за полезное сотрудничество при выполнении данной работы.

99

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Захарченко, Наталия Леруновна, 2004 год

1. Архипов В.П., Идиятуллин З.Ш., Архипов Р.В., Захарченко Н.Л., Зуев Ю.Ф., Федотов В.Д. Диффузия воды в микроэмульсии вода-Аэрозоль ОТ-декаи// Коллоидн. Ж., 2000, 62, 456-463.

2. Березин И.В. Действие ферментов в обращенных мицеллах. 39-е Бахов-ское чтение, Наука, Москва, 1985, 40 с.

3. Бреслер С.Е., Шампань М., Френкель С.Я. Исследование ферментатив-но-активных осколков трипсина// Биохимия, 1961, 26, 909-915.

4. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика: Практический курс, Изд. ФАИР-ПРЕСС, Москва, 1998, 720 с.

5. Вассерман A.M. Спиновые зонды в мицеллах// Успехи химии, 1994, 63, 391-401.

6. Гладилин А.К., Левашов А.В. Стабильность ферментов в системах с органическими растворителями// Биохимия, 1998, 63, 408-421.

7. Гринштейн С.В., Кост О.А. Структурно-функциональные особенности мембранных белков// Yen. биолог, химии, 2001, 41, 77-104.

8. Дженкс В. Катализ в химии и энзимологии, Мир, Москва, 1972, 467с.

9. Захарченко Н.Л., Зуев Ю.Ф., Рыжкина И.С., Паширова Т.Н., Кудрявцева Л.А. Электрическая перколяция в микроэмульсии вода-АОТ-декан в присутствии каликс4.резорцинарена и щелочи// Струк. и дин. молек. систем. Сб. статей, 2003, X, 75-77.

10. Клесов А.А., Федосеев В.Н., Киррет О.Г. Природа субстратной специфичности трипсина. Взаимосвязь структуры и реакционной способности квазисубстратов трипсина, производных о-алкилметилфосфоновых и карбоновых кислот// Биохимия, 1977,42, 1939-1952.

11. Клячко Н.Л., Богданова Н.Г., Мартинек К., Левашов А.В. Замена воды на водно-органическую смесь в системах обращенных мицелл — путь к повышению эффективности ферментативного катализа// Биоорган, химия, 1990,16, 581-589.

12. Клячко Н.Л., Пшежетский А.В., Кабанов А.В., Вакула С.В., Мартинек К., Левашов А.В. Катализ ферментами в агрегатах поверхностно-активных веществ: оптимальная конструкция матрицы ПАВ// Биол. мембраны, 1990, 7,467-472.

13. Котрикадзе Н.Г., Ломсадзе Б.А., Царидзе М.А., Джишкариани О.С., Левашов А.В. Регуляция каталитических свойств фермента в «обращенных мицеллах»// Биофизика, 1999, 44, 231-235.

14. Кудряшова Е.В., Гладилин А.К., Левашов А.В. Белки в надмолекулярных ансамблях: исследование структуры методом разрешенно-временной флуоресцентной анизотропии// Усп. биолог, химии, 2002, 42, 257-294.

15. Ленинджер А. Биохимия, Мир, Москва, 1976, 960 с.

16. Линдман Б., Стильбе П. Молекулярная диффузия в микроэмульсиях// в кн. Микроэмульсии. Структура и динамика, под ред. Фриберга С.Е. и Ботореля П., Мир, Москва, 1990, 177-227.

17. Мартинек К., Левашов А.В., Клячко Н.Л., Березин И.В. Катализ водорастворимыми ферментами в органических растворителях// Докл. Акад. Наук СССР, 1977, 236, 920-923.

18. Мартинек К., Левашов А.В., Клячко Н.Л., Хмельницкий Ю.Л., Березин И.В. Мицеллярная энзимология//2шол. мембраны, 1985, 2, 669-695.

19. Матвеенко В.Н., Свитова Т.Ф., Волчкова И.Л. Микроэмульсии. VI Вестн. Моск. Ун-та. Сер.2, Химия, 1996, 37, 99-115.

20. Матвеенко В.Н., Свитова Т.Ф., Волчкова И.Л. Микроэмульсии. II// Вестн. Моск. Ун-та. Сер.2, Химия, 1996, 37, 201-214.

21. Метелица Д.И., Еремин А.Н. Обращенные мицеллы поверхностно-активных веществ в органических растворителях модель биологических мембран// Усп. биол. химии, 1988, 22, 145-173.

22. Миттел К.Л., Мукерджи П. Широкий мир мицелл// в кн. Мицеллообразо-вание, солюбшизация и микроэмулъсии, под ред. Миттел K.JI., Мир, Москва, 1980, 11-31.

23. Разумов В.Ф., Барышников Б.В., Разумова М.В. Кинетика бимолекулярной химической реакции в микроэмульсиях и мицеллярных растворах// Докл. акад. наук, 1996, 348, 62-65.

24. Русанов А.И. Мицеллообразование в растворах поверхностно-активных веществ, Химия, Санкт-Петербург, 1992.

25. Рыжкина И.С., Янилкин В.В., Морозов В.И., Кудрявцева Л.А., Коновалов А.И. Одноэлектронный перенос в ряду каликс4.резорцинаренов и их аминометилированных производных в системе АОТ-декан-вода// Журн. физ. химии, 2003, 77, 491-495.

26. Шапиро Ю.Е., Горбатюк В.Ю., Левашов А.В., Клячко Н.Л. Фрагментарная подвижность молекул в обращенных мицеллах Аэрозоля ОТ в н-октане, инкапсулирующих а-химотрипсин или альбумин// Биолог. Мембраны, 1993,10, 293-306.

27. Штыков С.Н. Химический анализ в нанореакторах: основные понятия и применение// Журн. анал. химии, 2002, 57, 1018-1028.

28. Янилкин В.В., Рыжкина И.С., Настапова Н.В., Паширова Т.Н., Бабкина Я.А., Бурилов А.Р., Морозов В.И., Коновалов А.И. Одноэлектронное окисление и нуклеофильность аминометилированных калике 4.резорцинаренов// Изв. АН. Сер .хим., 2003, 5, 1082-1088.103

29. Alexandridis P, Holzwarth J.F., Hatton Т.А. Thermodynamics of droplet clustering in percolating AOT water-in-oil microemulsions// J. Phys. Chem., 1995,99, 8222-8232.

30. Almgren M., Johannsson R. Deactivation of excited species by diffusion-controlled quenching in clusters of reversed micelles// J. Phys. Chem., 1992, 96, 9512-9517.

31. Barbaric S., Luisi P.L. Micellar solubilization of biopolymers in organic solvents. 5. Activity and conformation of a-chymotrypsin in isooctane-AOT reverse micelles///. Am. Chem. Soc., 1981,103, 4239-4244.

32. Bergenholtz J., Romagnoli A.A., Wagner NJ. Viscosity, microstructure, and interparticle potential of AOT/H^O/n-decane inverse microemulsions// Lang-muir, 1995,11, 1559-1570.

33. Bhattachaiya S., Senhalatha K. Dialkylaminopyridine catalysed esterolysis of p-nitrophenyl alkanoates in different cationic microemulsions// J. Chem. Soc., Perkin Trans., 1996, 2, 2021-2025.

34. Bommarius A.S., Holzwarth J.F., Wang D.I.C., Hatton T.A. Coalescence and solubilizate exchange in a cationic four-component reversed micellar system// J. Phys. Chem., 1990, 94, 7232-7239.

35. Brinchi L., Di Proflo P., Germani R., Savelli G., Tugliani M., Bunton C.A. Hydrolyses of dinitroalkoxyphenyl phosphates in aqueous cationic micelles. Acceleration by premicelles//2000,16, 10101-10105.

36. Bumajdad A., Eastoe J., Nave S., Steytler D.C., Heenan R.K., Grillo I. Compositions of mixed surfactant layers in microemulsions determined by small-angle neutron scattering// Langmuir, 2003,19, 2560-2567.

37. Bunton C.A., Nome F., Quina F.H., Romsted L.S. Ion binding and reactivity at charged aqueous interfaces// Acc. Chem. Res., 1991, 24, 357-364.

38. Cametti C., Codastefano P., Tartaglia P., Chen S.-H., Rouch J. Electrical conductivity and percolation phenomena in water-in-oil microemulsions// Phys. Rev. A, 1992, 45, 5358-5361.

39. Chang G.-G., Huang T.-M., Hung H.-C. Reverse micelles as life-mimicking systems// Proc. Natl. Sci. Counc., 2000, 24, 89-100.

40. Chen J.M., Su T.M., Мои C.Y. Size of sodium dodecyl sulfate micelle in concentrated salt solutions// J. Phys. Chem., 1986, 90, 2418-2421.

41. De Gennes P.G., Touplin C. Microemulsions and the flexibility of oil/water interfaces// J.Phys. Chem., 1982, 86, 2294-2304.

42. Deo N., Somasundaran P. Electron spin resonance study of phosphatidyl choline vesicles using 5-doxyl stearic acid// Colloids and Surfaces B: Biointer-face, 2002, 25,225-232.

43. Dong A., Huang P., Cayghey W.S. Protein secondary structures in water from second — derivative amide I infrared spectra. // Biochemistry, 1990, 29, p. 3303-3308.

44. Eastoe J., Hetherington J., Sharpe D., Dong J., Heenan R.K., Steytler D. Mixing of alkanes with surfactant monolayers in microemulsions// Langmuir, 1996,12 3876-3880.

45. Eicke H.-F., Meier W. Nonmonotonic pattern of the critical percolation temperature due to the variations of additive chain length in water-in-oil microemulsions// ColloidPolym. Sci., 2001, 279, 301-304.

46. El Seoud O.A. Acidities and basicities in reversed micellar systems// in Reverse Micelles, Luisi P.L., Straub B.E. eds., Plenum Press, New York, 1984, 81-93.

47. Fadnavis N.W., Babu R.L., Deshpande A. Reactivity of trypsin in reverse micelles: pH-effects on the W0 versus enzyme activity profiles// Biochimie, 1998, 80, 1025-1030.

48. Feldman Y., Kozlovich N., Alexandrov Y., Nigmatullin R., Ryabov Y. Mechanism of the cooperative relaxation in microemulsions near the percolation threshold// Phys. Rev. E, 1996, 54, 5420-5427.

49. Feldman Y., Kozlovich N., Nir I., Garti N. Dielectric relaxation in sodium bis(2-ethylhexyl)sulfosuccinate-water-decane microemulsions near the percolation temperature threshold// Phys. Rev. E, 1995, 51, 478-491.

50. Feng K.I., Schelly Z.A. Equilibrium properties of crystallites and reverse micelles of sodium bis(2-ethylhexyl) phosphate in benzene// J. Phys. Chem., 1995,99, 17207-17211.

51. Freed J.H. Theory of slow tumbling ESR spectra for nitroxides// in Spin labeling. Theory and application., Berliner ed., Acad. Press., New York, 1976, 53-132.

52. Garcia-Rio L., Herves P., Leis J.R., Mejuto J.C. Influence of crown ethers and macrocyclic kryptands upon the percolation phenomena in AOT/isooctane/H20 microemulsions// Langmuir, 1997,13, 6083-6088.

53. Garcia-Rio L., Leis J.R., Mejuto J.C., Репа M.E. Iglesias E. Effects of additives on the internal dynamics and properties of water/AOT/isooctane microemulsions// Langmuir, 1994,10, 1676-1683.

54. Garcia-Rio L., Leis J.R., Mejuto J.C., Perez-Juste J. Investigation of micellar media containing /?-cyclodextrins by means of reaction kinetics: basic hydrolysis of N-methyl-N-nitroso-p-toluenesulfonamide// J. Phys. Chem., 1997, 101,7383-7389.

55. Garti N. Microemulsions as microreactors for food applications// Curr. Opp. Coll. Interface Sci., 2003,8, 197-211.щ

56. Giustini М., Palazzo G., Ceglie A., Eastoe J., Bumujdad A., Heenan R.K. Studies of cationic and nonionic surfactant mixed microemulsions by small-angle neutron scattering and pulsed field gradient NMR// Prog. Colloid Po-lym. Sci., 2000,115, 25-30.

57. Grand D. Photoionization in cationic micelles: effect of alcohol or salt addition//У. Phys. Chem, 1990, 94, 7585-7588.

58. Grest G, Webman I., Safran S., Bug A. Dynamic percolation in microemulsions// Phys. Rev. A, 1986, 33, 2842-2845.

59. Haering G., Luigi P.L., Hausser H. Characterization by electron spin resonance of reversed micelles consisting of the ternary system AOT-isooctane-water// J. Phys. Chem., 1988, 92, 3574-3581.

60. Hanahan D.J. The enzymatic degradation of phosphatidylcholine in diethyl ether// J. Biol. Chem., 1952,195, 199-206.

61. Hao J. Effect of the structure of microemulsions on chemical reactions// Co/-loid Polym. Sci., 2000, 278, 150-154.

62. Hasegawa M., Yamasaki Y., Sonta N., Shindo Y., Sugimura Т., Kitahara A. Clustering of Aerosol ОТ reversed micelles as studied by nonradiative energy transfer'of solubilized probes// J. Phys. Chem., 1996,100, 15575-15580.

63. Hobson R.A., Grieser F., Healy T.W. Surface potential measurements in mixed micelle systems// J. Phys. Chem., 1994, 98, 274-278.

64. Holmberg K. Organic reactions in microemulsions// Curr. Opp. Coll. Interface Sci., 2003, 8, 187-196.

65. Holmberg К., Jonsson В., Kronberg В., Lindman В. Surfactants and Polymers in Aqueous Solutions. Wiley, Chichester UK, 2003, 545 p.

66. Ikeda S., in Surfactants in solutions, K.L. Mittal ed., Plenum Press, New York-London, 1984, p. 825.

67. Jain Т.К., Varshney M., Maitra A. Structural studies of Aerosol ОТ reverse micellar aggregates by FT-IR spectroscopy// J. Phys. Chem., 1989, 93, 74097416.

68. Jonsson В., Wennerstrom H., Nilsson P.G., Linse P. Self-diffusion of small molecules in colloidal systems// ColloidPolym. Sci., 1986, 264, 77-88.

69. Karukstis K.K., Frazier А.А., Martula D.S., Whiles J.A. Characterization of the microenvironments in AOT reverse micelles using multidimensional spectral analysis// J. Phys. Chem., 1996,100, 11133-11138.

70. Kibblewhite J., Drummond C.J., Greiser F., Healy T.W. Effect of pentanol on the mean interfacial solvent and electrostatic characteristics of cationic micelles// J. Phys. Chem., 1987, 91, 4658-4660.

71. Klyachko N.L., Levashov A.V. Bioorganic synthesis in reverse micelles and related systems// Curr. Op. in Coll. and Int. Scien., 2003, 8, 179-186.

72. Krimm S., Bandekar J. Vibrational spectroscopy and conformation of peptides, polypeptides and proteins// Adv. Protein Chemistry, 1986, 38, p.l81-364.

73. Kumar P., Mittal K.L. eds. Handbook of microemulsion science and technology, Marcel Dekker, New York, 1999, 849 p.

74. Kurumada K., Shioi A., Harada M. Dynamical behavior and structure of concentrated water-in-oil microemulsions in the sodium bis(2-ethylhexyl)sulfosuccinate systems///. Phys. Chem., 1996,100, 1020-1026.

75. Kuznetsov A. N., Wasserman A. M., Volkov A. U., Korst N. N. Determination of rotational correlation time of nitric oxyde radicals in a viscous me-dium// Chem. Phys. Lett., 1971,12, 103-106.

76. Lang J., Jada A., Malliaris A. Structure and dynamics of water-in-oil droplets stabilized by sodium bis(2-ethylhexyl)sulfosuccinate// J. Phys. Chem., 1988, 92, 1946-1953.

77. Lang J., Lalem N., Zana R. Quaternary water-in-oil microemulsions. 2. Effect of carboxylic acid chain length on droplet size and exchange of material between droplets// J. Phys. Chem., 1992, 96, 4667-4671.

78. Lekkerkerker H.N.W., Dhont J.K.G. On the calculation of the self-diffusion coefficient of interacting Brownian particlesII J. Chem. Phys., 1984, 80, 57905792. ■ ■ "Л

79. Levashov A.V., Klyachko N.L. Micellar enzymology: methods and tech-niquee// Russ. Chem. Bull. (Engl. Ed.), 2001, 50, 1718-1732.

80. Levashov A.V., Klyachko N.L. Reverse micellar systems. General methodology// in Methods in Biotechnology: Enzymes in nonaqueous solvents, Vulfson E.N., Hailing P.J., Holland H.L. eds., Humana Press Inc., Totowa, NJ, 2001, 15, 575-586.

81. Lindman В., Stilbs P., Moseley M.E. Fourier transform NMR self-diffusion and microemulsion structure// J. Colloid Interface Sci., 1981, 83, 569-582.

82. Luisi P.L., Giomini M., Pileni M.P., Robinson B.H. Reverse micelles as hosts for proteins and small molecules// Biochem. Biophys. Acta, 1988, 947, 209246. ;

83. Martin C.A., Magid L.J. Carbon-13 NMR investigations of Aerosol ОТ water/oil microemulsions// J. Phys. Chem., 1981, 85, 3938-3944.

84. McConnell H.M. Molecular motion in biological membranes// in Spin labeling. Theory and application., Berliner ed., Acad. Press., New York, 1976, 525-561.

85. Meier W. Poly(oxyethylene) adsorption in water/oil microemulsions: a conductivity study// Langmuir, 1996,12, 1188-1192.

86. Menger F.M., Donohue J.A., Williams R.F. Catalysis in water pools// J. Am. Chem. Soc, 1973, 95, 286-288.

87. Menger F.M., Portnoy C.E. Chemistry of reactions proceeding inside molecular aggregatesII J. Am. Chem. Soc., 1967, 89, 4698-4703.

88. Menger F.M., Yamada K. Enzyme catalysis in water pools// J. Am. Chem. Soc., 1979,101,6731-6734.

89. Miguel M.G. Association of surfactants and polymers studied by luminescence techniques// Adv. in Colloid and Interface Science, 2001, 89-90, 1-23.

90. Molinero I., Sierra M.L., Valiente M., Rodenas E. Physical properties of cetylpyridinium chloride micelles and their behavior as reaction media// J. Chem. Soc., Far. Trans., 1996, 92, 59-63.

91. Moulik S.P., Paul B.K. Structure, dynamics and transport properties of mi-croemulsionsII Adv. in Coll. and Int. Sci., 1998, 78,99-195.

92. Parker W. O'N. Multicomponent self-diffusion NMR study of acidic microemulsions and aqueous solutions of dodecylbenzenesulfonic acid// J. Phys. Chem., 1991,95,5329-5335.

93. Репа A.A., Hirasaki G.J. Enhanced characterization of oilfield emulsions via NMR diffusion and transverse relaxation// Adv. in Colloid and Interface Science, 2003,105, 103-150.

94. Pileni M.P., Zemb Т., Petit С. Solubilization by reverse micelles: Solute localization and structure perturbation// Chem. Phys. Lett., 1985,118, 414-420 .

95. Prince L.M., Ed. Microemulsions: theory and practice, Academic Press, New York, 1977,312 р.

96. Qi L., Ma J., Shen J. Synthesis of copper nanoparticles in nonionic water-in-oil microemulsions// J. Colloid Interface Sci., 1997, 186, 498-500.

97. Ranganathan R., Peric M., Medina R., Garcia U., Bales B.L. Size, hydration and shape of SDS/heptane micelles investigated by time-resolved fluorescence quenching and electron spin resonance// Langmuir, 2001, 17, 67656770.

98. Regev O., Ezfahi S., Aserin A., Garti N., Wachtel E., Kaler E.W., Khan A., Talmon Y. A study of the microstructure of a four-component nonionic mi-croemulsion by Cryo-TEM, NMR, SAXS, and SANS// Langmuir, 1996, 12, 668-674.

99. Robb I.D., Ed. Microemulsions, Plenum Press, New York, 1982, 268 p.

100. Ruan K., Zhao Z., Ma J. Effect of bromide salts on cationic micellar catalysis// ColloidPolym. Sci., 2001, 279, 813-818.

101. Schwuger M.J., Stickdom K., Schomacker R. Microemulsions in technical processes// Chem. Rev., 1995, 95, 849-864.

102. Smith R.E., Luisi P.L. Micellar solubilization of biopolymers in hydrocarbon solvents. Ill Empirical definition of an acidity scale in reverse micelles// Helv. chim. acta, 1980, 63, 2302-2308.

103. Soderman O., Nyden M. NMR in microemulsions. NMR translational diffusion studies of a model microemulsion// Colloid Surf. A-Physicochem. Eng. Asp., 1999,158,273-280.

104. Soderman O., Olsson U. Dynamics of amphiphilic systems studied using NMR relaxation and pulsed field gradient experiments// Curr. Opinion in Colloid andInterfaqce Science, 1997, 2, 131-136.

105. Soderman О., Stilbs P. NMR studies of complex surfactant systems// Progr. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc., 1994, 26, 445-482.

106. Stamatis H., Xenakis A., Kolisis F.N. Biorganic reactions in microemulsions: case of lipases// Biotechnol. Adv., 1999,17, 293-318.

107. Stejskal E.O., Tanner J.E. Spin diffusion measurements: spin echoes in the presence of a timedependent field gradient// J. Chem. Phys., 1965, 42, 288292.

108. Stilbs P. Fourier transform pulsed-gradient spin-echo studies of molecular diffusion//Prog. NMR Spectrosc., 19S7,19, 1-45.

109. Stupishina E.A., Faizullin D.A., Zakhartchenko N.L., Fedotov V.D. and Zuev Yu.F. Catalytic activity, structure and stability of trypsin in an AOT-stabilised water-in-decane microemulsion// Mendeleev Commun., 2001, 6, 237-240.

110. Suarez M.-J., Levy H., Lang J. Effect of addition of polymer to water-in-oil microemulsions on droplet size and exchange of material between droplets// J. Phys. Chem., 1993, 97, 9808-9816.

111. Texter J. ed. Reactions and synthesis in surfactant systems, Marcel Dekker, New York, 2001,433 p.

112. Tondre C., Herbrant M., Watarai H. Rate of interfacial reactions compared to bulk reactions in liquid-liquid and micellar processes: an attempt to clarify a confusing situation// J. Colloid Interface Sci., 2001, 243, 1-10.

113. Tougu V., Tiivel Т., Talts P., Siksnis V., Poyarkova S., Keavatera Т., Aavik-saar A. Electrostatic effects in trypsin reactions. Influence of salts// Eur. J. Biochem., 1994, 222, 475-481.

114. Walde P., Peng Q., Fadnavis N.W., Battistel E., Luisi P.L. Structure and activity of trypsin in reverse micelles// Eur. J. Biochem., 1988,173, 401-409.

115. Warren J., Stowriny L., Morales M. The effect of structure disrupting ions on the activing of myosin and other enzymes// J. Biol. Chem., 1966, 241, 309316.

116. Wikander G., Johansson L. B.-A. Micelle size determined by electron spin resonance and fluorescence spectroscopy// Langmuir, 1989, 5, 728-733.

117. Zakharova L.Ya., Kudryavtseva L.A., Konovalov A.I. Mechanism of the inhibiting action of electrolytes on the micellar effect in alkaline hydrolysis of p-nitrophenyl ethyl chlormethylphosphonate// MendeleevCommun., 1998, 3, 163-165.

118. Zakharova L.Ya., Shagidullina R.A., Valeeva F.G., Kudryavtseva L.A. The influence of the structure of ethyl aryl chlormethylphosphonates on the catalytic effect of direct and reverse micellar systems// Mendeleev Commun., 1999, 8, 201-203.

119. Zhou G-W., Li G-Z., Chen W-J. Fourier transform infrared investigation on water states and the conformations of Aerosol-OT in reverse microemulsions// Langmuir, 2002,18, 4566-4571.

120. Zulauf M., Eicke H.-F. Inverted micelles and microemulsions in the ternary system water/Aerosol-OT/isooctane as studied by photon correlation spectroscopy// J. Phys. Chem., 1979, 83, 480-486.