Структурная и функциональная организация реплицируемого хроматина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Голышев, Сергей Александрович

• Голышев, Сергей Александрович
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Голышев, Сергей Александрович

Введение.

Обзор литературы.

Организация интерфазного хроматина.

Уровни компактизации хроматина в интерфазе и в митозе.

Компартментализация хромосом в интерфазном ядре.

Подвижность хроматина.

Репликация ДНК - процесс, организованный в пространстве и во времени.

Дискретность репликации.

Локальные изменения структуры хроматина при взаимодействии с репликационным комплексом.

Топология, структура и свойства репликационных сайтов.

Ультраструктура репликационных сайтов.

Преждевременно-конденсированные хромосомы - «моментальный снимок» активных репликационных единиц.

Задачи работы.

Материалы и Методы.

Используемые сокращения.

Культура клеток.

Маркирование сайтов репликации и новореплицированной ДНК.

Индукция преждевременной конденсации хроматина.

Получение хромосомных препаратов.

Стандартная фиксация.

Пермеабилизация клеток.

Получение препаратов стабилизированного ядерного матрикса.

Иммуноцитохимическое выявление БрдУ.

Изучение препаратов и регистрация результатов.

Электронно-микроскопические исследования.

Выявление реплицированной ДНК на ультратонких срезах.

Изучение и обработка электронно-микроскопических данных.

Результаты.

Характеристика клеточных моделей.

Динамика репликационных сайтов в клетках линии СПЭВ, фиксированных т эки.

Импульсное и «отложенное» мечение.

Длительное мечение.

РС в условиях структурной модификации хроматина.

Роль гистонов и негистоновых белков в организации РС.

Репликационные сайты в клетках линии Ь929. Импульсное и «отложенное» мечение. .56 Оптимизация метода выявления репликационных сайтов на ультраструктурном уровне.

Ультраструктурная организация реплицирующегося хроматина (факультативного гетерохроматина и эухроматина) в клетках линии Ь929.

Структурная организация реплицирующегося конститутивного гетерохроматина хромоцентров) в клетках линии Ь929.

Световая микроскопия.

Электронная микроскопия.

Организация реплицирующейся ДНК в дифференциально деконденсированном хроматине.

Упаковка хроматина, закончившего репликацию.

Зоны репликации в преждевременно конденсированных хромосомах.

Обсуждение результатов.

Методические подходы к изучению ультраструктуры реплицируемого хроматина.

Организация тотального хроматина.

Реакция репликационных сайтов и реплицированного хроматина на изменения ионных условий.

Различные конфигурации зон репликации ДНК.

Локализация и конформация хроматина, закончившего репликацию.

Репликация хромоцентров.

Модель организации репликационного сайта и структурной организации реплицируемого хроматина.

Выводы.