Структурно-функциональная вариабельность антигенов Y. pestis и методология конструирования противочумных иммунопрофилактических препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор медицинских наук Гремякова, Татьяна Андреевна

  • Гремякова, Татьяна Андреевна
  • доктор медицинских наукдоктор медицинских наук
  • 2004, Москва
  • Специальность ВАК РФ03.00.07
  • Количество страниц 320
Гремякова, Татьяна Андреевна. Структурно-функциональная вариабельность антигенов Y. pestis и методология конструирования противочумных иммунопрофилактических препаратов: дис. доктор медицинских наук: 03.00.07 - Микробиология. Москва. 2004. 320 с.

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Гремякова, Татьяна Андреевна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.:.

ВВЕДЕНИЕ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.1.

ГЛАВА 1. ОСНОВНЫЕ АНТИГЕНЫ ЧУМНОГО МИКРОБА.

1.1. КАПСУЛЬНЫЙ АНТИГЕН Ш.

1.2. V АНТИГЕН.

1.3. БЕЛКИ ВНЕШНИХ МЕМБРАН.

1.4. рН6 АНТИГЕН.

1.5. МЫШИНЫИ ТОКСИН

1.6. ЛИПООЛИГОСАХАРИДЫ.\.

1.7. ОСНОВНОЙ СОМАТИЧЕСКИЙ АНТИГЕН.

1.8. Б АНТИГЕН.1.

1.9. АКТИВАТОР ПЛАЗМИНОГЕНА.

ГЛАВА 2. ИММУНОПРОФИЛАКТИКА ЧУМЫ: ИТОГИ И СОВРЕМЕННОЕ

СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ.

2.1. ИСТОРИЯ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ.

2.2. ХАРАКТЕРИСТИКА СУЩЕСТВУЮЩИХ ПРОТИВОЧУМНЫХ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ. 2.3. ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ КОНСТРУИРОВАНИЯ

ПРОТИВОЧУМНЫХ ИММУНОПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ.:.

2.3.1. ЖИВЫЕ АТТЕНУИРОВАННЫЕ ПРОТИВОЧУМНЫЕ ВАКЦИНЫ

2.3.2. ПРОТИВОЧУМНЫЕ ВАКЦИННЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРЕПАРАТЫ, БАЗИРУЮЩИЕСЯ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВЕКТОРОВ.

2.3.3. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ВАКЦИНЫ.

2.3.3.1. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ V АНТИГЕНА.

2.3.3.2. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ И АНТИГЕНА.

2.3.3.3. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ СЛИТНЫХ БЕЛКОВ

2.3.3.4. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ВАКЦИНЫ, ИСПОЛЬЗУЮЩИЕ ДРУГИЕ 82 АНТИГЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ.

ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ПРОТЕКТИВНОГО

ИММУНИТЕТА ПРИ ЧУМЕ.

3.1. РОЛЬ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ЧУМЕ.

3.2. РОЛЬ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ФОРМИРОВАНИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ЧУМЕ.

3.3. ЛАБОРАТОРНЫЕ МОДЕЛИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРОТЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ЧУМЕ.

3.4. ИММУНОГЕННОСТЬ И ПРОТЕКТИВНОСТЬ БАКТЕРИАЛЬНЫХ АНТИГЕНОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ИХ ДОСТАВКИ И

ПРЕЗЕНТАЦИИ.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Микробиология», 03.00.07 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурно-функциональная вариабельность антигенов Y. pestis и методология конструирования противочумных иммунопрофилактических препаратов»

А К Т У А Л Ь Н О С Т Ь П Р О Б Л Е М Ы Правительства многих развитых стран в течение последних лет увеличивают финансирование научных разработок в области разработки эффективных средств диагностики, профилактики и терапии особо опасных бактериальных и вирусных инфекций, мотивируя это возрастанием угрозы биотерроризма [Friedlandler etal, 1995; Inglesby etal, 1999, 2000].Последние события в США осенью 2001 года подтверждают актуальность и правильность решений этой проблемы правительством США Интенсификация данных исследований наблюдается в последние десять лет в Англии (Porton Down), Германии (Munich), Швеции (Umea) [Williamson etal., 1995, Walf-Watz; 1998, Forsberg et al., 1994]. В США ведутся интенсивные разработки вакцинных препаратов нового поколения против чумы, сибирской язвы, сапа, мелиоидоза [Anderson etal.,1996; Forsberg etal, 1998]. После событий 11 сентября 2001 года в Нью-Йорке, составлен список наиболее вероятных и опасных патогенов. В одном ряду с возбудителями оспы, сибирской язвы, вирусами Эбола и Марбурга отмечен чумной микроб. Именно поэтому вопросам защиты от биотеррроризма, в том числе разработке специфических и неспецифических средств защиты и профилактики особо опасных инфекций уделяется столь пристальное внимание.Возбудитель чумы (Y. pestis) - один из наиболее вирулентных для человека микроорганизмов. Восприимчивость человека к чуме чрезвычайно велика В организм человека возбудитель попадает при укусе инфицированной блохи или через поврежденные кожные покровы. В этих случаях развивается бубонная или септическая форма чумы, которые при своевременной антибиотикотерапии и отсутствии осложнений в виде вторичной легочной пневмонии не представляет большой эпидемической опасности. Последняя вспышка бубонной чумы, охватившая, по данным ВОЗ [WHO Medical Bulletin, 1994], жителей 15 деревень индийского штата Махараштра, зарегистрирована в августе-сентябре 1994г. [Butler etal., 1994; Panda etal., 1994; Chakrabarty et al, 1994; Lurie etal., 1994; Carniel., 1995].Усугубляют ситуацию сообщения об антибиотикорезистентных природных штаммах возбудителя чумы [Dennis, Hughes, 1997; Galimand et al, 1997].Эпидемии легочной чумы возникают при передаче возбудителя воздушно-капельным путем от больного чумной пневмонией (первичной или вторичной). Характерными особенностями таких эпидемий являются чрезвычайно высокая контагиозность, скоротечность (одни-пять суток) и летальность (без антибиотикотерапии - 95-100 %). Возникновение эпидемий трудно прогнозировать, но сочетанное влияния климатических, экологических и социальных факторов способно привести к крупным эпидемиям проявления чумы. Примером служит последняя эпидемия легочной чумы, охватившая в сентябре-октябре 1994 г. ряд штатов и городов западной части Индии. По данным ВОЗ [WHO Medical Bulletin, 1994], только за пять дней от момента появления первого больного легочная форма чумы диагностирована у 452 человек, 41 из которых умерли в эти же сроки.Применяемые в настоящее время чумные вакцины были разработаны в 30е годы прошлого столетия. В Англии, США и других западных странах используют преимущественно убитые вакцины, приготовленные на основе высоковирулентного штамма Y. pestis 195/Р [Perry, Fetherston, 1997]. В России для вакцинопрофилактики чумы в течение многих десятилетий применяются живая вакцина, приготовленная на основе аттенуированного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ [Наумов и др., 1992; Бактерийные, сывороточные ..., 1998]. Они вызывают глубокую и разностороннюю иммунную перестройку практически по всем иммуногенам чумного микроба. Обладая умеренной реактогенностью, обе вакцины обеспечивают создание достаточно напряженного иммунитета, в связи с чем используются для проведения вакцинации по эпидемическим показаниям.Следует отметить, что пик иммунной перестройки при вакцинации живой культурой EV приходится на первые три месяца, после чего наступает заметное снижение напряженно-сти иммунитета. В связи с этим возникает необходимость ревакцинации, эффективность которых нередко оказывается сниженной из-за слабого приживления клеток вакцинного штамма и, как следствие, недостаточного синтеза температуроиндуцируемых протективных антигенов Y. pestis. Возникает ситуация, когда уровень поствакцинального иммунитета не способен противостоять инфекции, но в то же время достаточен для ингибирования процесса размножения живых вакцинных бактерий [Дальвадянц, 1991а; Наумов и др., 1992]. В ряде стран (США, Англия, Франция, Индия и др.) живую вакцину не применяют из-за опасения возможной реверсии вирулентности вакцинного штамма, особенно при иммунодефицитных состояниях и при неблагоприятных экологических условиях, а также ее вирулентности для низших приматов [Meyer et al, 1974а]. До сих пор между Российскими учеными и их западными коллегами ведутся споры о том, какая из вакцин более эффективна и менее опасна Обе стороны имеют доводы за и против. Истина, скорее всего, заключается в том, что обе вакцины были приемлемы для своего времени (ЗСТ8 годы XX века). Однако в настоящее время оба препарата морально устарели. Очевидна необходимость разработки вакцинных препаратов нового поколения: молекулярных, состоящих из композиции высокоиммуногенных протективных антигенов, или рекомбинантных, в которых протективный антиген экспрес-сируется в векторной бактериальной клетке, доставляющей антиген иммунокомпетентным клеткам. Такие рекомбинантные штаммы могут дополнительно нести маркеры антибиоти-коустойчивости, позволяющие проводить иммунопрофилактику на фоне экстренной профилактики и терапии химиопрепаратами.Предпринятые в 50-90"6 годы беспрецедентные усилия по изучению молекулярной организации возбудителя чумы привели к открытию основных факторов патогенности и им-муногенности, а также генов, определяющих их синтез. Охарактеризованы их основные физико-химические и иммунобиологические свойства Вирулентность чумного микроба определяется совокупностью его свойств, получивших название "детерминанты вирулентности".К числу "классических" детерминант T.W. Burrows [1963] относил способность клеток сорбировать экзогенные красители и гемин (Pgm), синтез V и W антигенов, "мышиного" токсина (Тох), капсульного антигена FI (Fra), синтез пестицина (Pst) и способность синтезировать экзогенные пурины (Pur). К настоящему времени этот перечень претерпел определенные изменения. W антиген предан забвению, но вместо него в качестве факторов патогенности рассматривается целый ряд белков Yops. Показано, что продукция пестицина не оказывает влияния на вирулентность возбудителя чумы, но синтезируемый вместе с ним активатор плазминогена Р1а обладает целым рядом свойств, необходимых для реализации патогенности Y. pestis. Список детерминант, связанных с вирулентностью чумного микроба постоянно расширяется [Мишанькин, 1996; Sodeinde etal, 1992; Perry, Fetherston, 1997; Cornells, 1998; Cornells et al, 1998; Анисимов, 1999].На наш взгляд, накопленных к настоящему времени знаний по пато- и иммуногенезу чумы явно недостаточно для того, чтобы разработать эффективную противочумную вакцину. Однако можно наметить перспективные направления разработки иммунопрофилактиче-ских препаратов нового поколения. Подытоживая результаты собственных исследований, а также данные отечественных и зарубежных коллег, мы пришли к выводу, что чумные имму-нопрофилактические препараты, предназначенные для защиты угрожаемых контингентов от биотерроризма, не могут базироваться только на капсульном и V антигенах, как это предлагается западными специалистами. В последние годы установлено, что капсула и V антиген обладают значительной антигенной вариабельностью, причем различные варианты не обладают перекрестной протективной активностью [Черепанов и др., 1990; Анисимов, Захарова, 1992; Анисимов и др., 1992, 1994а, 19946, 1999; 1997; Griffin etal, 1998; Roggenkamp etal, 1997; Worsham, Hunter, 1998; Анисимов, 1999; Анисимов, Маркова, 1999]. В случае применения конфликтующими государствами, а также террористами биологического оружия на основе возбудителя чумы следует опасаться, скорее всего, именно таких нетипируемых вы-соковирулентных штаммов Y. pestis. В качестве прототипов таких штаммов могут быть применены не только бескапсульные варианты, но и штаммы чумного микроба, образующие серологически атипичные капсулы.Известно, что многократная иммунизация глубоко диссоциированными бесплазмидными чумными штаммами (например TRV) [Волковой, личное сообщение], или штаммами возбудителя псевдотуберкулеза [Домарадский, I960, 1962, 1962а, 1970; Маракулин, 1991; приводит к формированию у мышей и морских свинок протективного противочумного иммунитета, не уступающего по напряженности иммунитету, формируемому коммерческими вакцинами при использовании общепринятых схем иммунизации. Поэтому при конструировании вакцин нового поколения особое внимание следует уделить композициям кодируемых хромосомой антигенов, которые могут оказывать иммуномодулирующее действие и обусловливать синергидный эффект.Одним из альтернативных путей повышения эффективности противочумных вакцин является использование для доставки чумных протективных антигенов в иммунокомпетент-ные клетки бактериальных векторов. В качестве таких векторов использовались вакцинные штаммы Y. pseudotuberculosis 164/84 [Маракулин и др., 1991], К tularensis 15 [Павлов и др, 1991].Конструирование иммунопрофилактических чумных препаратов представляет собой достаточно сложную задачу. Существует круг взаимосвязанных проблем. В связи с тем, что чума является особо опасным заболеванием, работы по изучению патогенеза и иммуногенеза в значительной степени затруднены. Публикуется большое количество работ, посвященных клонированию тех или иных генов, характеристике кодируемых ими белков, изучению их локализации. Однако, работ посвященных изучению вклада индивидуальных антигенов (кроме FT, V, Ymt и Pla) в пато- и иммуногенез чумы чрезвычайно мало. Все это приводит к сложностям при выборе протективных антигенов, определении способа их доставки и пре-зентации, решении вопроса, какой собственно тип иммунитета нужно стимулировать - гуморальный, секреторный, или клеточный. Еще одной проблемой является то, что до сих пор не подобраны лабораторные животные, на которых было бы можно корректно моделировать пато- и иммуногенез чумы у людей. Приматы дорогостоящи и гетерогенны по чувствительности, их использование оправдано лишь на стадии доклинических испытаний перспективных препаратов. Наиболее доступными моделями являются мыши и морские свинки.Причем, количество антигенов, индуцирующих иммунитет у морских свинок, гораздо больше, чем у мышей [Бывалов и др., 1997]. Препараты, зарекомендовавшие себя положительно на мышах, далеко не всегда протективны для морских свинок. Только в случае положительного протективного эффекта вакцинной композиции для обоих видов грызунов можно рассчитывать на эффективность препарата для людей. Тем не менее, практически все работы американских и английских исследователей выполняются только на мышиной модели и экстраполируются на людей [Anderson et al., 1996, 1997, Nakajima, et al, 1994].ЦЕЛЬ Н А С Т О Я Щ Е Г О И С С Л Е Д О В А Н И Я - получить структурно-функциональные характеристики белковых (FI, рН6) и липоолигосахаридных компонентов 7 pestis, а также выявить особенности формирования протективного иммунитета, создаваемого антигенами при различных способах их доставки и презентации.ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ И С С Л Е Д О В А Н И Я 1. Создать коллекции R специфических фагов, авирулентных и природных штаммов 7. pestis, R вариантов энтеробактерий, R и S штаммов 7. pseudotuberculosis, разработать методические приемы фагового и электрофоретического скрининга и на их основе предложить систему для изучения липоолигосахаридов (ЛОС) возбудителя чумы.2.Установить химическую структуру кора и липида А липоолигосахаридов 7. pestis, определить молекулярную природу их изменчивости.3.Разработать новые и усовершенствовать имеющиеся методы иммунохимического анализа липоолигосахаридов, приемов их химической модификации и презентации, способов истощения и конкурентного торможения с целью изучения антигенной специфичности препаратов, синтезируемых клетками возбудителя чумы при различной температуре.4.Изучить иммунохимические и иммунобиологические свойства липоолигосахаридов Y. pestis, синтезированных в определенных условиях культивирования штаммами, которые выделены из различных природных очагов.5.Создать рекомбинантные штаммы-продуценты капсульного антигена, в том числе и штаммы аттенуированных сальмонелл, стабильно экспрессирующих FI антиген in vitro и in vivo. Сконструировать молекулярные и рекомбинантные вакцинные препараты, обладающие способностью индуцировать защиту от чумы в ранние сроки после иммунизации. б.Изучить иммуногенность и протективность FI и рНб антигенов при использовании различных систем доставки и презентации иммунокомпетентным клеткам.7.Выбрать антигены чумного микроба, перспективные для последующего конструирования иммунопрофилактических препаратов, и определить формы их презентации.Установлена температуроопосредованная варабельность липида А возбудителя чумы, . результатом чего является изменение биологических свойств липоолигосахаридов. Выявлена связь между химической структурой липоолигосахаридов Y. pestis subsp. pestis и subsp. caucasica и иммунобиологической активностью данных препаратов.Сформулирована концепция противодействования возбудителем чумы запуску и функционированию механизмов ранней неспецифической резистентности млекопитающих путем модификации липоолигосахаридов, что позволяет патогену минимизировать развитие защитных реакций.Впервые определена возможность конструирования молекулярных и рекомбинантных вакцинных препаратов, обладающих способностью индуцировать защиту от чумы в ранние сроки после иммунизации.Создана коллекция аттенуированных штаммов сальмонелл, которые экспрессируют капсульный антиген чумного микроба. Установлено, что рекомбинантные клетки аттенуированных сальмонелл, синтезирующих нативный иммуногенный капсульный антиген, при парентеральной и оральной иммунизации способны индуцировать у мышей протективный иммунитет в отношении чумы различной степени напряженности. Получены штаммы, обеспечивающие защиту от высоких заражающих доз с первого дня после иммунизации (Патент №2046145, приоритет от 29.07.1992).Показано, что рНб антиген при выраженной антигенности (авторское свидетельство №1797351, МКИ G01N33/53 приоритет от 5.11.90) и важной роли в патогенезе, не обладает протективностью для лабораторных животных. Путем термической и химической модификации антигена, сопровождавшихся изменением степени агрегации, антигенных и биологических свойств рНб антигена, получен ряд препаратов с различным спектром иммунобиологической активности. Высокомолекулярные агрегированные нативные формы рНб антигена не обладали протективностью, а при совместном введении с капсульным антигеном снижали протективные свойства последнего. Иммунизация деполимеризованными препаратами рНб антигена индуцировала у животных иммуносупрессию.Определена методология конструирования иммунопрофилактических противочумных препаратов, которая учитывает серовариабельность основных протективных антигенов чумного микроба, обладающих способностью защиты от чумы в самые ранние сроки после вакцинации. Полученные результаты способствуют более глубокому пониманию тонких молекулярных механизмов, которые лежат в основе взаимодействия возбудителя чумы с организмом хозяина, что, в свою очередь, открывает перспективы разработки новых стратегий противодействия патогену.ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ Д И С С Е Р Т А Ц И И Создана коллекция препаратов ЛОС, выделенных из различных штаммов Y.pestis, Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica, E. coli, S. minnesota, а также их детоксицированных производных. Полученные препараты были использованы для изучения химической структуры ЛОС возбудителя чумы (Институт органической химии им. Н. Д. Зелинского РАН, Москва), молекулярных механизмов воздействия ЛОС на альвеолярные макрофаги (Институт инженерной иммунологии, п. Любучаны Московской обл.), молекулярной организации ЛОС Y. pestis и их иммунобиологических свойств (ГНЦ прикладной микробиологии, п. Оболенск).Получен набор антисывороток и создана коллекция моноклональных антител к капсульному антигену и ЛОС, используемых в ГНЦПМ для тестирования соответствующих препаратов. Создана коллекция штаммов-продуцентов капсульного антигена чумного микроба. На штамм S. minnesota R595pFSl, депонированный в РосНИПЧИ "Микроб" (Саратов), получен Российский патент на изобретение № 2046145. Этот штамм используется для получения высокоиммуногенных препаратов капсульного антигена. Сконструирован штамм S. typhimurium SL3261pFSl, стабильно наследующий рекомбинантную плазмиду in vitro и in vivo. Штамм используется для определения эффективности различных систем доставки капсульного антигена при формировании протективного противочумного иммунитета.Изучена чувствительность к бактериофагам вирулентных и авирулентных штаммов Y.pestis из коллекций живых культур ГНЦПМ, РосНИПЧИ «Микроб», НИПЧИ Сибири и Дальнего Востока, что выявило их популяционную гетерогенность в отношении ЛОС. На основании данных о варьировании чувствительности штаммов возбудителя чумы, изолированных в различных эндемичных очагах, к бактериофагам, предложены дополнительные методы для внутривидовой дифференциации патогена.Результаты проведенных исследований послужили основой или были учтены при составлении ниже перечисленных документов: 1 .Методика лабораторная способа использования стандартного инокулята для проверки ростовых качеств плотных питательных сред. Утверждена 27.04.1990 зам. директора ВНИИПМ проф. Волковым В.Я. (учрежденческий уровень внедрения).3.Методика лабораторная оценки качества жидких питательных сред с помощью референс-инокулята. Утверждена 21.05. 1990 зам. директора ВНИИПМ проф. Волковым В.Я. Методические приемы, разработанные в ходе работы над диссертацией, штаммыпродуценты, очищенные препараты антигенов, антисыворотки и моноклональные антитела, а также диагностические системы в настоящее время применяются в микробиологических, генетических, молекулярно-биологических, иммунологических и других исследованиях ряда лабораторий ГНЦПМ (Оболенск), РосНИПЧИ "Микроб" (Саратов), НИПЧИ Сибири и Дальнего Востока (Иркутск), ИОХ им. Н. Д. Зелинского РАН (Москва), ИБХ им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН (Москва).ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ 1.Разработанная схема типирования штаммов чумного микроба по их чувствительности к липополисахарид-специфическому фагу FP1 дополняет внутривидовую характеристику и является дифференцирующим критерием изолятов Y. pestis.2.Температуроопосредованные композиционные и структурные различия кора и липида А липоолигосахаридов штаммов чумного микроба, изолируемых в отдельных природных очагах России определяют изменения их иммунобиологических свойств и вирулентности для грызунов и человека.3.Предложена концепция реализации патогенности возбудителем чумы путем уклоне- . ния микроба от неспецифических и специфических механизмов защиты хозяина, в том числе и с помощью модификации коровой и липидной части липоолигосахаридов Y. pestis.4.Разработаны новые принципы методологии и биотехнологии получения нативных и модифицированных белковых и липоолигосахаридных антигенов, плазмид, векторных штаммов аттенуированных сальмонелл, штаммов-продуцентов, а также их презентации, которые учитывают серовариабельность основных протективных антигенов Y. pestis и перспективны для конструирования противочумных иммунопрофилактических препаратов нового поколения.АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертации доложены и представлены на: итоговых научных конференциях ГосНИИПМ (Оболенск, 1986, 1987, 1989, 1990); межведомственной научной конференции "Актуальные вопросы профилактики опасных инфекционных заболеваний" (Киров, 1991); XIV научно-практической конференции ГосНИИПМ "Новые технологии и биосистемы. Достижения и перспективы" (Оболенск, 1991); IV Всероссийском съезде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (Нижний Новгород, 1991); Российской научной конферен-ции "Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций" (Волгоград, 1992); Российской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций" (Саратов, 1993); межгосударственной научной конференции, посвященной 100-летию открытия возбудителя чумы "Профилактика и меры борьбы с чумой" (Алматы, 1994); I съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Саратов, 1994); межгосударственной научно-практической конференции, посвященной 100-летию открытия возбудителя чумы "Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний" (Ставрополь, 1994); международной конференции "Гомеостаз и инфекционный процесс" (Саратов, 1996); 3 r d John Humphrey Advanced Summer School "Cell and molecular biological aspects of immunology" (Пущино, 1996); VII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 1997); научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России (Саратов, 1997); 4"ои конференции по бактериальной защите (Munich), Germany, 1997); совместном Американо-Российском семинаре в USAMRIID (Fort Detrick, USA, 1997); совместном семинаре в Institut for Experimental Medicine und Biologie (Borstel, Germany, 1998); 7th International Congress on Yersinia (Nijmegen, the Netherlands, 1998); 4th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology (Пущино, 1998), Germany, 1998); 8th International Congress on Yersinia (Turku, Finland, 2002); Carbohydrate Workshop (Gustrow-Rostock, Germany, 2003); XIIth European Carbohydrate Symposium (Grenoble, France, 2003); 2-ом Московском международном Конгрессе "Биотехнология: состояние и перспективы развития" (Москва, 2003).Диссертация обсуждена и одобрена на межлабораторной научной конференции ГНЦПМ 5 мая 2003 г. протокол №. 1.П У Б Л И К А Ц И И Основное содержание работы отражено в 55 научных публикациях, в том числе авторском свидетельстве и патенте. Список публикаций приведен в автореферате.СТРУКТУРА И ОБЪЕМ Д И С С Е Р Т А Ц И И Работа состоит из введения; 3 глав обзора литературы; 6 глав собственных исследований, включающих описание материалов и методов исследований, экспериментальную часть, анализ факторов патогенности возбудителя чумы, обеспечивающих его персистенцию в природе, по литературным данным и собственным наблюдениям; заключения; выводов; списка литературы, включающего 501 цитируемых работ. Общий объем диссертации составляет 320 страниц. Текст иллюстрирован 38 таблицами и 77 рисунками.БЛАГОДАРНОСТИ На протяжении многих лет выполнения настоящей работы неоценимую помощь мове-тами и заинтересованным участием в обсуждении результатов мне оказывали многочисленные друзья и коллеги. Прежде всего, я хотела бы поблагодарить сотрудников бывшего отдела генетики, которых теперь разбросала жизнь, с которыми мы вместе начинали эту работу и сделали большую ее часть. Среди них - В.Н. Степаншина, О.В. Коробова, В.М. Красильникова, Е.В. Мицевич, В.В. Амельченко, П.А. Черепанов, Б.А. Григорьев, В.В. Фурсов, Н.К. Фурсова, Т.Б. Кравченко, В.И. Кравченко, Т.Ю. Кудрявцева, А.П. Алимов, Н.М. Захарова и Е.А. Панферцев.Пользуясь случаем, приношу искреннюю признательность всем рецензентам настоящей работы за многочисленные замечания, вопросы и поправки, которые, по возможности, были учтены и, в ряде случаев, помогли уточнить, а иногда и пересмотреть некоторые положения и формулировки. Особая благодарность А.П. Анисимову и Ю.М. Помыткину за поддержку, информационную помощь, рецензирование данной работы.Формированием научных интересов я прежде всего обязана ныне покойному профессору Константину Ивановичу Волковому, моя признательность ему за веру в меня, за постоянное внимание и интерес к проводимой работе, за возможность логического обобщения и завершения проделанного большого этапа работы. Я благодарна А.В. Степанову за его уме-ние решать сложные вопросы и брать на себя ответственность в критические моменты, а также консультационную и организационную помощь.Слова благодарности всем начальникам бывшего отдела микробиологии чумы, лояльно позволявшим не ограничиваться только плановыми работами, но и заниматься инициативными исследованиями, которые были мне наиболее интересны - А.А. Нарыжных, И.М. Нахабину, покойным Г.А. Анисимову и В.Ф. Негрию. Мои слова признательности начальнику отдела особо опасных инфекций А.Н. Носкову и всем сотрудникам отдела, -Л.И. Маринину, Н.А. Старицину, В.М. Павлову, Г.М. Титаревой, И.В. Бахтеевой, Н.А. Шишковой и Г.Н. Андреевой за практическую помощь, дружескую поддержку, доброжелательность. Отдельные слова искренней признательности моим бывшим подчиненным -Л.П. Ремневой, Р.З. Шайхутдиновой, Н.К. Фурсовой и Л.В. Шевченко за кропотливую и добросовестную работу, энтузиазм, терпение, понимание и веру.Считаю своим приятным долгом выразить искреннюю признательность коллегам из ИОХ им. Зелинского, РосНИПЧИ «Микроб», НИПЧИ Сибири и Дальнего Востока, Иркутск, за возможность выполнения совместных исследований.

Похожие диссертационные работы по специальности «Микробиология», 03.00.07 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Гремякова, Татьяна Андреевна

ВЫВОДЫ

1. Создана уникальная коллекция R специфических фагов (FP1, FP3, С21), R и S вариантов энтеробактерий, включающая 4 штамма Е. coli, 7 штаммов S. minnesota, 4 штамма Y. pseudotuberculosis, 105 природных изолятов, лабораторных штаммов и их производных, относящихся к различным подвидам Y. pestis, разработан оригинальный комплекс методических приемов для фагового и электрофоретического скрининга штаммов и липоолигосахаридов, что стало основой детального изучения молекулярной организации липоолигосахаридов возбудителя чумы, разработки методов дополнительной подвидовой и географической дифференциации штаммов, выявления новых молекулярных механизмов адаптационной изменчивости возбудителя чумы.

2.Впервые установлены полные структуры кора и липида А липоолигосахаридов штаммов Y. pestis биоваров antiqua, medievalis и orientalis основного подвида (subsp. pestis), а также штамма, относящегося к подвиду caucasica, и определена природа их гетерогенности, объяснена иммунохимическая вариабельность и отсутствие перекрестного протективного иммунитета при иммунизации липоолигосахаридами или моноклональными антителами к препаратам, синтезированным при температуре 25 °С. Найдены особенности молекулярной организации липоолигосахаридов штаммов У. реяН.? БиЬзр. саисазюа, которые определяют их высокую вирулентность для полевок и лабораторных мышей и низкую - для большинства грызунов и человека.

3.Разработан оригинальный комплекс методических приемов для проведения иммунохимического анализа липоолигосахаридов У. резИз. Методическая схема включает способы тестирования - реакцию диффузионной преципитации, реакцию непрямой гемагглютинации и конкурентого торможения, иммуноферментный анализ, различные приемы презентации липоолигосахаридов, истощение антисывороток, химическую модификацию липоолигосахаридов (дезацилирование, дефосфорилирование).

4.Впервые показано существование опосредованного липоолигосахаридами механизма противодействия возбудителя чумы запуску и функционированию механизмов специфической и неспецифической резистентности млекопитающих. Липоолигосахариды, синтезированные при температуре тела млекопитающих изменяет антигенную специфичность кора, в меньшей степени индуцируют синтез провоспалительных цитокинов и развитие неспецифической резистентности макрорганизма. Этот механизм позволяет патогену минимизировать развитие воспалительных защитных реакций организмом хозяина и избежать опсонизации специфическими антителами.

5.Рекомбинантные штаммы аттенуированных сальмонелл, экспрессирующие иммуногенный нативный капсульный антиген чумного микроба, обеспечивают защиту лабораторных животных от высоких заражающих доз с первых дней после парентеральной иммунизации (штамм & тгппе$о1а 11595 рББ!, патент № 2046145 от

-2625.29.07.1992), протективны при оральных способах иммунизации (штамм S typhimurium SL3261 pFSl).

6.Детоксифицированные производные липидаА грамотрицательных бактерий оказывают выраженное иммуномодулирующее влияние на процесс вакцинации. Образование комплекса монофосфорил липида А с капсульным FI антигеном повышает защитные свойства последнего в ранние сроки иммунизации.

7.рН6 антиген при выраженной антигенности (A.C. 1797351. (СССР) МКИ G01N33/53), митогенности и важной роли в патогенезе чумы не обладает протективностью для лабораторных животных при использованных способах представления. Химическая (формалинизация) и термическая обработка рН6 антигена сопровождается изменениями степени его полимеризации, антигенных и биологических свойств, а также способа презентации, но это не придает ему протективных свойств.

8.Изменение способа презентации секретируемых белковых антигенов чумного микроба, используемых в комбинациях с детоксифицированными производными липополисахаридов, их экспрессия в аттенуированных сальмонеллах, позволяет получать препараты, которые обладают протективностью в ранние и отдаленные сроки после иммунизации. Разработана биотехнология конструирования молекулярных и рекомбинантных иммунопрофилактических препаратов и получены новые экспериментальные препараты для экстренной и плановой профилактики чумы (патент 2046145 от29.07.1992)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С приходом эры антибиотиков в 30-40 годы нашего столетия чума, казалось бы, перестала быть глобальной опасностью для человечества. Однако уже тогда возбудитель чумы использовался военными для разработки нового типа оружия - биологического. С принятием в 1972 году Женевской конвенции о запрещении разработок в области химического, бактериологического и токсинного оружия, объемы работ сократились, но потенциальная возможность разработок биологического оружия сохранилась в некоторых из развивающихся стран, таких как Ирак, Иран, Китай, Северная Корея. Неконтролируемость ситуации и доступность возбудителя чумы вследствие того, что чума является зоонозом, имеющим ареалы обитания на всех материках, кроме Австралии, делает Y. pestis весьма доступным и заманчивым объектом для биотерроризма.

Основную угрозу в настоящее время представляют нетипичные по иммунохимическим и генетическим признакам штаммы Y. pestis. Надо сказать, что на протяжении всей истории исследования чумного микроба, белковая капсула была основным компонентом для иммунодиагностики, идентификации, а также, что наиболее важно - для иммунопрофилактики данного заболевания. Все существующие вакцины -убитая клеточная USP, живая аттенуированная EV, молекулярные, - содержат капсульный FI антиген в качестве непременного компонента. Причем, считается, что количество капсульного антигена в вакцинных препаратах во многом определяет их протективность. Выделение и описание вирулентных природных и генетически измененных штаммов чумного микроба, лишенных капсулы или имеющих иммунохимически атипичную капсулу, в этой ситуации, подобно разорвавшейся бомбе [Абдурахманов с соавт., 1974; Захаров., 1985; Классовский с соавт., 1972; Козлов., 1979; Кудинова, 1968; Пунский, Адаменко, 1982; Сагимбеков с соавт., 1980, 1981; Топорков с соавт., 1987; Phillips et al., 1988; Welkos et al., 1995; Williams etal., 1978, 1983; Williams, Cavanaugh, 1984; Winter tal, 1960]. Существующие методы иммунодиагностики и и!Дмунопрофилактики чумы оказываются полностью неэфффективными. Использование именно иммунохимически атипичных штаммов чумного микроба в качестве основного объекта, наиболее вероятное направление биотерроризма.

Такого поворота событий опасаются в США, где в последние десять лет усиленно финансируются работы в области конструирования чумных молекулярных вакцинных препаратов нового поколения, несмотря на сокращение и свертывание работ по многим другим направлениям. Основной упор при разработке вакцин нового поколения в лабораториях США и Англии делается уже не на капсульный антиген, а на другие антигены чумного микроба - белки внешних мембран. В начале нынешнего года завершился цикл исследований по конструированию и испытанию молекулярных вакцинных композиций на основе двух белков - капсульного FI и V антигена, представленных либо в смеси, либо в виде слитного белка. К сожалению, приходится констатировать, что методические приемы и стратегические подходы к разработке концепции конструирования чумных вакцинных препаратов американскими коллегами слабо проработаны.

Актуальность ревизии и переосмысления подходов к конструированию и разработке чумных иммунопрофилактических препаратов подтверждается и последними данными немецких и американских коллег об обнаружении сероварибельности V антигена чумного микроба, второго базового компонента молекулярных вакцинных препаратов, разрабатываемых на западе. Использование в качестве объекта биотерроризма штаммов, атипичных сразу по FI и V антигенам, сводит на нет многолетние усилия наших зарубежных коллег. В настоящее время в США готовится новая программа по конструированию вакцинных молекулярных чумных препаратов.

В России также существуют программы по разработке профилактических препаратов для защиты населения. Выполнение работ по программам "Защита" и "Поковка" отслеживаются Советом безопасности России, хотя многие направления ввиду отсутствия финансирования заморожены.

Представленные в настоящем исследовании данные имеют общебиологическое значение и посвящены характеристике поверхностно локализованных антигенов чумного микроба, изучению возможностей получения препаратов с высокой иммуногенностью, изучению возможности разработки новых методов диагностики и иммунодиагностики типичных и атипичных штаммов чумного микроба и иммунопрофилактике вызываемой этими штаммами чумной инфекции Отсутствие положительных результатов в разработке противочумной молекулярной вакцины указывает на то, что настоящему времени определены лишь некоторые иммуногенные компоненты чумного микроба. Поскольку возбудитель чумы лишен белковых секретируемых токсинов, пристальное внимание должно быть уделено поверхностно локализованным мембранным структурам, как белковым, так и полисахаридсодержащим. Основное внимание в данной работе было сконцентрировано на изучении молекулярно-биологической организации и иммуногенности капсульного и рН6 антигенов при различных способах их экспрессии и презентации.

Параллельно в данной работе изучали поверхностно-локализованные компоненты клеточной стенки возбудителя чумы, синтез которых кодируется бактериальной хромосомой Это то направление, которое достаточно продуктивно разрабатывается в России - иммунизация бесплазмидными штаммами возбудителя псевдотуберкулеза по эффективности защиты от чумы не уступающая эффективности живой чумной вакцины штаммами возбудителя псевдотуберкулеза [Домарадский, 1970, Дармов, 1997] На молекулярном уровне из изученных в этом плане компонентов известны пока лишь полисахаридсодержащие антигены - ОСА, протективный для морских свинок [Дальвадянц и др., 1970-1985], Б антиген - протективен для морских свинок и приматов, одним из основных компонентов которого является ЛПС [Бывалов и др., 1997]. Проблема состоит в том, чтобы правильным образом модифицировать полисахаридные компоненты, при необходимости, провести детоксикацию, и представить их в наиболее иммуногенной форме, способной индуцировать напряженный системный долгосрочный иммунитет. Неудача наших Саратовских коллег, предложивших двухкомпонентную вакцину, состоящую из капсульного антигена и ОСА, в первую очередь связана с тем, что при верной теоретической предпосылке была выбрана неправильная форма презентации полисахаридных антигенов, не обеспечивающая индукции клеточного иммунитета и формирования иммунологической памяти.

Большая часть исследований, представленых в главе 5, посвящены изучению особенностей структрной организации кора и липида А ЛОС У. pestis. В ходе выполнения данной работы нами были выявлены однотипные электрофоретические различия чумных ЛПС, полученных из клеток У. pestis, выращенных при различных температурах культивирования, установлена температурная зависимость способности клеток чумного микроба лизироваться ЛПС специфическим фагом FP1. Выявлена взаимосвязь между чувствительностью клеток У. pestis к фагу FP1, подвидовой и географической принадлежностью возбудителя чумы. Полученные данные позволили ввести дополнительные критерии типирования выделяемых из различных природных очагов штаммов возбудителя чумы и явились базой для выбора штаммов для последующего изучения молекулярной организации корового и липидного компонента ЛОС У. pestis.

Дополнительный отбор композиционно гетерогенных по ЛПС штаммов осуществляли электрофоретически. ЛОС У. pestis (37 °С), имели большую электрофоретическую подвижность по сравнению с гомологичными препаратами, выделенными из культур У pesiis (25 °С), что свидетельствовало в пользу увеличения степени редуцированности чумного ДОС и наличия дополнительных механизмов температуроопосредованной генетической регуляции и фенотипической изменчивости возбудителя чумы.

Используя совокупность аналитических методов оганической химии был определен состав и последовательность моносахаридов в коре ДОС У. pesiis. Установлено, что в коре JIOC Y. pesiis имеется структурно-консервативный участок, общий для трех изученных ЛОС (Y. pesiis КМ260, КМ218, KEMD1) и вариабельный участок, структура которого меняется и зависит от температуры культивирования биомассы. Повышение температуры культивирования оказалось неблагоприятным для включения в состав кора Gal и Ко кислоты. Были установлены отличия в молекулярной организации кора ЛОС представителя подвида «полевочьих» штаммов У. pestis 1146 от ЛОС из штаммов подвида pestis. Наиболее значимое отличие этого штамма заключалось в отсутствии DDHep и замене ее при температуре 37 °С на Gal. Дополнительная гетерогенность и отличительная черта ЛОС данного штамма связана с наличием глицина в ЛПС У. pestis штамма 1146. Дальнейшего выяснения требует вопрос - является ли это общей закономерностью для «полевочьих» штаммов или это уникальная структура присуща только данному штамму?

Установлено, что с повышением температуры культивирование происходят изменения молекулярной структуры липидного отдела ЛОС возбудителя чумы, выражающиеся в деацилировании жирных кислот и изменении степени гликозилирования, что приводит к изменению биологических свойств препаратов ЛОС.

Впервые показано, что олигосахаридный участок ЛОС возбудителя чумы имеет отчетливо выраженную температуро- и штаммозависимую иммунохимическую изменчивость ЛОС. Для препаратов ЛОС, полученных из штаммов, выращенных при температуре 37 °С, показана более узкая штаммовая иммунохимическая специфичность.

Определена связь между изменением химической структуры ЛОС Y. pestis subsp. pestis КМ218 и subsp. caucasica и иммунобиологической активностью данных препаратов. Показано, что резистентность к действию комплемента, N0 и а-ФНО-индуцирующая активность препаратов ЛОС зависела также и от температуры культивирования штамма-продуцента ЛОС и от природы штамма. ЛОС штаммов subsp. caucasica 1146, отличались от всех остальных достоверно более низкой резистентностью к действию комплемента, индукцией синтеза N0 и а-ФНО. Прослеживается явная связь между разницей в молекулярной организации препаратов ЛОС различных подвидов в обусловливаемой ими резистентности к действию систем комплемента различных хозяев, индукции синтеза воспалительных цитокинов и вирулентностью клеток возбудителя чумы для этих млекопитающих.

Наряду с кодируемыми плазмидами температурозависимыми белками, ЛОС возбудителя чумы оказывается прецизионным инструментом регулирования взаимодействия патогена с постоянно меняющимися факторами внешней среды, существования в организмах различных хозяев и переносчиков, координирующим присущую им разноплановую биологическую активность с белковыми факторами патогенности чумного микроба:

Основные свойства и эффекты ЛОС могут быть сформулированы следующим образом:

1. Взаимодействие с белковыми факторами патогенности чумного микроба. Уменьшение цитокининдуцирующей активности ЛОС, синтезированного при температуре тела теплокровного хозяина согласуется с иммуносупрессорной активностью Yops [Cornelis etal., 1998]. Отсутствие О-полисахаридных цепей в клетках возбудителя чумы усиливает свойства Pia, связанные с вирулентностью микроорганизма [Lang et al., 2002]. В недавней работе Е.П. Соколовой [2002] показано, что in vitro мышиный токсин и ЛОС возбудителя чумы могут взаимодействовать между собой с образованием высокотоксичного комплекса.

2. Угнетение способности индуцировать механизмы врожденного иммунитета хозяина. Отсутствие О-специфических боковых цепей и синтез редуцированных R форм ЛОС возбудителем чумы определяют устойчивость к комплементзависимому лизису бактерий [Porat étal, 1995], что является необходимым условием для выживания и роста в крови и важным в плане трансмиссии патогена между двумя хозяевами - млекопитающими и блохами [Brubaker, 2000; Домарадский, 1993; Perry, Fetherston, 1997; Анисимов, 2002], а также устойчивость к катионным антимикробным пептидам, которые являются ключевыми компонентами врожденного иммунитета [Bengoechea, 1998; Dimopoulos, 2003]. Результаты наших исследований свидетельствуют о наличии температуроопосредованной штаммозависимой модификации кора и липида А ЛОС У. pestis, результатом которой является подавление способности запускать механизмы врожденного иммунитета хозяина.

3. Уход от специфического иммунного ответа. При попадании чумного микроба в организм млекопитающего посредством укуса блохи эпитопы кора ЛОС экспонированы на поверхности и не экранированы секретируемыми и мембранными белками, синтез которых является температурозависимым. Происходит запуск иммунного ответа на консервативные и вариабельные иммунодоминантные антигенные детерминанты кора, специфичные для ЛОС (25 °С), тогда как эпитопы, специфичные для ЛОС (37 °С), по нашему мнению, или экранированы стерически или еще отсутствуют - налицо направление иммунного ответа «по ложному следу». Далее происходит синтез коровых структур, которые не опознаются антителами, индуцированными ЛОС (25 °С), и уход от защитных иммунных механизмов хозяина. Наличие значительной серовариабельности кора объясняет отсутствие протективности в опытах с использованием гетерологичных ЛОС возбудителя чумы или ЛОС-специфических антител.

4. Существование адаптационной пластичности для персистенции микроба в различных природных ареалах, хозяевах и переносчиках, о чем свидетельствуют уникальные результаты, полученные в ходе выполнения данной работы. Биохимические особенности хозяина, такие как низкий уровень комплемента в крови естественного хозяина (полевок), способны вызывать адаптационные изменения структуры кора ЛОС в связи с ненадобностью указанных биологических функций.

Многие компоненты возбудителя чумы, экспрессируемые при температуре организма млекопитающего, обладают ярко выраженными имуносупрессорными свойствами [Schesser etal., 1998; Muller etal., 1998] и препятствуют запуску каскада защитных реакций организма, в том числе и путем предотвращения индукции синтеза таких провоспалительных цитокинов, как IL-8, TNF-a [Schesser etal., 1998]. Эти данные проясняют стратегию вирулентности возбудителя чумы - разноплановое подавление реакций иммунной системы хозяина в ответ на внедрение чужеродного организма на самых ранних стадиях инфекции, смена иммунохимической парадигмы и затем безудержный рост микроба. Один из уникальных механизмов, работающих для реализации этой стратегии, - температуроопосредованная модификация ЛОС в направлении смены иммунохимической специфичности, а также уменьшения их способности индуцировать синтез провоспалительных цитокинов и вызывать повышение неспецифической резистентности макрорганизма.

Обнаруженный феномен изменчивости ЛОС возбудителя чумы по значимости превосходит факт наличия вариабельности капсульного FI и V антигенов в силу его масштабности. Новые данные о ЛОС возбудителя чумы позволяют разработать методы дополнительной внутривидовой дифференциации патогена, понять особенности молекулярной организации и механизмов вирулентности различных подвидов возбудителя чумы, а также ставят новые вопросы о масштабах и формах их изменчивости, роли вариабельности в персистенции патогена в природе, адаптации к смене хозяев и переносчиков.

В главе VIII представлены новые данные о молекулярной организации и иммунобиологических свойствах рН6 антигена. Проанализировано сходство рН6 антигена с субъединицами капсульного антигена Y.pesíis. Охарактеризованы рекомбинантные формы рНб антигена, показана их идентичность рНб белку из чумных штаммов. i.

Выявлены различия в биологической активности внутри- и внеклеточных форм рНб антигена, что также объединяет его с капсульным антигеном.

Схожесть молекулярной организации оперонов, кодирующих оба "капсульных" антигена чумного микроба - рНб и FI, а также биологической организации белков позволяют с достаточно высокой долей вероятности прогнозировать необходимость использования полноценного psa оперона, а не только структурного гена для экспрессии антигенноспецифического, функционально активного полимера рНб антигена. Можно полагать, что экспрессия только гена, кодирующего синтез белковой субъединицы рНб антигена в составе рекомбинантных плазмид, слитных белков и т.д. приведет к получению серологически атипичных, функционально неактивных мономеров, как это показано для капсульного FI антигена. Косвенно в пользу такого предположения свидетельствует факт, что отсутствие psáE и psaF локусов сопровождается изменением фенотипа клетки, что наблюдается и для капсульного антигена при делеции или инактивации caflM гена [Yang et al, 1996].

Путем химической и термической обработки получен и изучен ряд производных рНб антигена различной степени полимеризации с варьирующими биологическими свойствами. В результате изучения протективности полимеризованных и деполимеризованных препаратов рНб антигена на морских свинках и мышах получены данные, свидетельствующие об отсутствии у них выраженных протективных свойств для обеих лабораторных моделей животных. Выявлены различия в раннефазной реакции лабораторных животных на рНб антиген.

В результате анализа собственных экспериментальных и литературных данных, мы считаем, что использование рНб антигена для разработки иммуно профилактических препаратов нового поколения неактуально, так как в высокополимеризованном виде он обладает низкой иммуногенностью, в виде мономеров - иммуносупрессивен, а клонирование его в составе рекомбинантных плазмид, несущих только структурный ген рНб антигена, вероятнее всего будет сопровождаться синтезом антигенноатипичных, биологически неактивных форм, подобно тому, что показано, для капсульного антигена.

В главе IX изучена иммуногенность капсульного антигена, экспрессированного в различных штаммах сальмонелл, охарактеризовано влияние детоксицированного производного липида А грамотрицательных бактерий МФЛА на вакцинный чумной процесс. Во всех наших исследованиях, связанных с конструированием и изучением иммунопрофолактических и диагностических препаратов, мы использовали конструкции только с полным fra опероном, что обеспечивало синтез нативного капсульного антигена в секретируемой высокоиммуногенной форме.

Использование векторных сальмонеллезных штаммов на практике требует решения ряда проблем. Первая - это выбор способа аттенуации. Возможно, Aro мутанты являются не самыми лучшими бактериальными векторами из известных на сегодняшний день. В главе 2.2. обзора литературы приведены основные пути, по которым осуществляется аттенуация сальмонелл. Но именно этот штамм S. typhimurium SL3261 является в настоящее время своего рода референсным штаммом, позволяющим сравнивать результаты исследований, проводимых различными группами ученых.

Необходимо отметить еще одну проблему, связанную с увеличением степени аттенуации клеток сальмонелл после их трансформации рекомбинантными плазмидами, кодирующими синтез гетерологичных протекгивных белков. Плазмидные векторы, стабильно наследующиеся в клетках различных гетерологичных реципиентов, теряют способность к стабильному наследованию при введении в их состав генов, кодирующих синтез гетерологичных антигенов, как это было, в частности, с делеционными вариантами pPst плазмиды У. pestis, которые после встраивания в них fra оперона теряли способность к стабильному наследованию в клетках сальмонелл и Е. coli.

Еще одна сложность связана с трудностями экстраполяции результатов, полученных на одних видах микроорганизмов и животных, на другие виды микроорганизмов и иммунитет, индуцируемый у других видов животных и человека. Тем не менее, использование таких моделей и их изучение являются необходимыми звеньями в конструировании вакцин нового поколения.

Изучена протективность МФЛА в комплексе с капсульным белком. Наибольшее потенциирующее действие МФЛА реализуется в ранние (3-14 сутки) и поздние (3-6 месяцев) сроки иммунизации, когда протективность комплексированного с МФЛА капсульного антигена достоверно выше, чем у других исследованных вакцинных препаратов. Отсутствие его влияния на пике иммунитета можно объяснить тем, что FI сам по себе в высокополимеризованной форме является сильным иммуногеном, и интенсивность формируемого иммунитета в эти сроки находится на пике возможности иммунной системы. МФЛА в составе белковолипидного липосомального комплекса с капсульным антигеном У. pestis способен существенно усиливать его протекгивные свойства в ранние и отдаленные сроки иммунизации путем инициации неспецифической резистентности на ранних сроках после иммунизации, более быстрой и интенсивной индукции синтеза специфических FI антител и формирования напряженного иммунитета в отдаленные сроки после вакцинации.

Аналогичный эффект был получен при иммунизации мышей убитыми клетками штамма S. minnesota R595 pFSl, экспрессирующими капсульный антиген чумного микроба. Такая иммунизация индуцировала развитие ранней резистентности к последующему заражению высокими дозами клеток вирулентных чумных штаммов. Этот факт особенно важен с точки зрения разработки иммунопрофилактических препаратов для экстренной профилактики угрожаемых контингентов.

Вариабельность капсульного FI, V антигенов и ЛОС, установленные как в ходе выполнения данной работы, так и известные по литературным источникам, делает проблему создания иммунопрофилактических препаратов против чумы более сложной, а возможно потребует создания нескольких вариантов вакцин.

Полученные данные о вариабельности структуры JIOC чумного микроба свидетельствуют о необходимости дальнейшего изучения данного явления и в случае экспериментального подтверждения однотипности структуры кора штаммов Y. pestis подвида pestis (вирулентного для человека) дает возможность включения дефосфорилированного МФЛА в составе вакцинного препарата в комплексе с капсульным антигеном или дезацилированного препарата ЛОС (37 °) в виде химического конъюгата с V антигеном. Капсульный FI антиген, являясь полимером, не подходит для химического конъюгирования с полисахаридами, да этого и не требуется при его высокой иммуногенности.

Достижения последних лет позволили наметить рациональные пути получения иммуногенных вакцинных препаратов на основе полисахаридных компонентов. Наиболее перспективно химическое конъюгирование полисахаридных антигенов с белками, что позволяет получать вакцинные препараты, стимулирующие В и Т отделы иммунной системы [Robbins, Schneerson, 1989, 1990]. Преимущества такой формы презентации двух антигенов очевидны - повышается иммуногенность обоих, уменьшается иммуносупрессивное действие V антигена, оба соединения являются охарактеризованными и стандартными. Недавно выявленная антигенная вариабельность V антигена - и отсутствие защиты животных при заражении штаммами Y. pestis другого серовара [Worsham, 1998; Griffin, 1998; Roggenkamp, 1997] предполагает целесообразноть включения в состав вакцинных препаратов, всех антигенных вариантов V антигена, особенно если речь идет о предотвращении последствий биотерроризма.

Полученные результаты способствуют более глубокому пониманию тонких молекулярных механизмов, которые лежат в основе взаимодействия возбудителя чумы с организмом хозяина, что, в свою очередь, открывает перспективы разработки новых стратегий противодействия патогену.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Гремякова, Татьяна Андреевна, 2004 год

1. Абгарян Г.П. Характеристика некоторых штаммов чумного микроба, выделенных на Армянском нагорье от обыкновенных полевок: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Саратов, 1966. - 16 с.

2. Анисимов АП. Молекулярно-генетические механизмы образования и функциональная значимость капсулы Yersinia pestis: Дисс. . докт. мед. наук. Саратов, Обо лен ск, 1999.-326 с.

3. Анисимов АП. Факторы Yersinia pestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы В экосистемах природных очагов. // Молекулярная генетика 2002. -№ 3. - С. 3-23.

4. Анисимов А.П. Факторы Yersinia pestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы В экосистемах природных очагов. // Молекулярная генетика. -2002а. -№ 4. С. 3-11.

5. Анисимов А.П., Ежов И.Н., Захарова Н.М. и др. Изучение функциональной организации /га-оперона pFra возбудителя чумы методом направленного мутагенеза // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций. Волгоград, 1992. - С. 6.

6. Анисимов АП., Захарова Н.М. Серовариация капсульного антигена возбудителя чумы // Молекул, генетика. 1992. - № 9-10. - С. 26-29.

7. Анисимов АП., Малахаева А.Н., Черновская Т.В. и др. Капсулообразование у F1" и Fl± штаммов возбудителя чумы // Эрдем шинжилгээний бггээл (Байгалийн голомтот хал-дварт евчнийг эсэргууцэн судаахтев). Улаанбаатар, 1999. Дугаар 7. - С. 169-171.

8. Анисимов АП., Маркова В.Ю. Изменчивость антигенной специфичности капсулы Yersinia pestis и ее влияние на персистенцию бактерий в организме иммунного хозяина // Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане. Вып. 1, юбилейный. Алматы, 1999. -С. 13-18.

9. Анисимов А.П., Никифоров А.К., Еремин С.А и др. Конструирование штамма Yersiniapestis с повышенной протективностью // БЭБМ. 1995. - № 11. - С. 532-534.

10. Анисимов А.П., Фомченков В.М., Фурсова Н.К. и др. Электрокинетический потенциал клеток Yersinia pestis и Escherichia coli с интактным или дефектным геном усаА (caflM)/га-оперона возбудителя чумы // Генетика. 1994. - Т. 30. - № 9. - С. 1160-1165.

11. Анисимова Т.И. Стандартизация системы методов лабораторной оценки безопасности и иммуногенности чумных вакцин: Дисс. . докг. мед. наук. Саратов, 1985. - 407 с.

12. Апарин Г.П, Голубинский Е.П. Микробиология чумы. Руководство. Иркутск, Иркутский государственный университет, 1989. - 92 с.

13. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Государственное издательство медицинской литературы, 1962. - С. 85-104.

14. Бактерийные, сывороточные и вирусные лечебно-профилактические препараты. Аллергены. Дезинфекционно-стеризизационные режимы поликлиник: Справочник практического врача / Под ред. Н.А. Озерецковского, Г.И. Останина Санкт-Петербург: Фолиант, 1998. 366 с.

15. Бахрах Е.Э., Вейнблат В.И Соматические полисахаридсодержащие антигены чумного микроба//Журн. микробиол. 1972. -№ 3. - С. 12-16.

16. Бахтеева И.В., Титарева ГМ., Гремякова Т.А Митогенная активность нативных и дефосфорилированных препаратов ЛПС Y. pestis И Мат. науч.-практ. конф. поев. 100-летию образования противочумной системы (Том I) 1997 г. Саратов. - 1997. - С. 198.

17. Боровикова Т.А. Характеристика специфических полисахаридсодержащих комплексов субкультур штамма ЕВ чумного микроба: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Саратов, 1972. - 13 с.

18. Бургасов П.Н., Анисимова Т.И., Кузнецова О.Р. и др. Основные критерии отбора вакцинных штаммов чумного микроба (методические указания) / Утверждены зам. министра здравоохранения СССР А.И. Бурназяном 8 марта 1974 г. Саратов, 1976. - 34 с.

19. Бывалов А А, Евстигнеев В.И., Дубровин М.Ю. и др. Зависимость уровня невосприимчивости лабораторных животных к чуме от титра сывороточных антител к протекгив-ным антигенам Yersinia pestis II Там же. С. 193.

20. Бывалов АА, Евстигнеев В.И., Пименов Е.В. и др. Использование комплексного препарата, включающего антигены Ф1 и Б, для иммунизации экспериментальных животных против чумы // Там же. С. 194.

21. Бывалов А А, Паутов В.Н., Чичерин Ю.П и др. Эффективность ревакцинации павианов гамадрилов чумной живой сухой вакциной НИИС и фракцией 1 чумного микроба // Журн. микробиол. 1984. - № 4. - С. 74-76.

22. Васильев AM., Яканкин В.Г., Спирина Г.В. и др. Структурно-функциональные свойства рекомбинантных FI и I антигенов чумного микроба // Актуальные вопросы профилактики опасных инфекционных заболеваний: Тез. докл. Киров, 1991. С. 163-164.

23. Васильева Г.И., Пустовалов B.JL, Киселева АК. и др. Оценка вирулентности штаммов Yersinia pestis по индексу завершенности фагоцитоза // Журн. микробиол. 1987. -№ 6. - С. 117.

24. Вейнблат В.И., Палагин А.Ю., Веренков М.С. и др. Иммунобиологические свойства препаратов фибринолизина чумных микробов // Биотехнология, иммунология и биохимия особо опасных инфекций. Саратов, 1989. - С. 14-19.

25. Водопьянов С. О., Мишанькин Б.Н. Пили адгезии у Yersinia pestis II Журн. микро-биол. 1985. -№ 6. - С. 13-17.

26. Водопьянов С.О., Рыбянец АА, Веркина Л.М. и др. Изучение протективной активности пилей адгезии Yersinia pestis II Журн. микробиол. 1995. - № 5. - С. 26-29.

27. Гинсбург H.H. Живые вакцины. М.: Медицина, 1969. - 336 с.

28. Голубинский Е.П., Рублев Б.Д., Герасюк Л.Г. и др. К характеристике иммуноген-ности конъюгированных антигенов чумного микроба // Совр. аспекты профилакт. зоон. инфекций. Иркутск, 1984. - Ч. 2. - С. 20-21.

29. Гремякова Т. А., Амельченко В. В., Анисимов Г. А. Ранняя защита при экспериментальной чуме животных, иммунизированных экспериментальной рекомбинантной чумной вакциной // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1995. -№. 1. - С. 54-57.

30. Гремякова Т. А., Анисимов А П. Серологическая активность антигена "фракция I" Yersinia pestis определяется его белковым компонентом // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. Международ, науч. конф. 1996 г. Саратов, 1996. - С. 319.

31. Гремякова Т. А, Анисимов А. П., Говорунов И. Г. Секреция капсульного антигена возбудителя чумы в энтеробактериях // Новые технологии и биосистемы. Достижения и перспективы: Тез. докл. XIV науч.-практ. конф. 21-23 мая 1991 г., Оболенск, 1991. - С. 9-11.

32. Гремякова Т. А., Анисимов А П., Захарова Н. М. Взаимосвязь способности к экспрессии различных серовариантов капсульного антигена Yersinia pestis со степенью редуцированности липополисахарида бактериальных клеток//ЖМЭИ. 1995. -№. 1. - С. 3-6.

33. Гремякова Т. А., Степаншина В. Н, Коробова О. В., Анисимов Г. А., Изучение возможности создания молекулярной противочумной вакцины // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей ООИ // Мат. Рос. науч. конф. 1992. Волгоград, 1992 - С. 63.

34. Гремякова Т. А, Степаншина В. Н., Степанов А. В, Коробова О. В., Амельченко

35. B. В., Бахтеева.И. В., Шмелев В. А Модуляция иммунобиологических свойств чумных вакцинных препаратов монофосфорил липидом А //Биотехнология. 1997.-№.11-12. -С.18-32

36. Гремякова Т. А, Фурсова Н. К., Фомченков В. М., Волковой К. И. Сравнительная характеристика физических и биологических свойств ЛПС Yersinia pestis и R-мутантов энтеробактерий // Микробиология. 1996. - Т. 65. -№.6. - С. 763-767.

37. Гремякова Т.А Чумные рекомбинантные вакцины // Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций. Материалы Российской научной конференции (21-23 сентября 1993 г., Саратов). Саратов, 1993. - С. 8-9.

38. Гремякова Т.А., Амельченко В.В. Ранняя защита при экспериментальной чуме животных, иммунизированных экспериментальной рекомбинантной чумной вакциной // Бюлл. экс. биол. и мед. 1993. -№ 1. - С. 10-13.

39. Гремякова Т.А, Анисимов А.П., Захарова Н.М. Взаимосвязь способности к экспрессии различных серовариантов капсульного антигена Yersinia pestis со степенью редуцированности липополисахарида бактериальных клеток // Журн. микробиол. 1995. - № 1.1. C. 3-6.

40. Гремякова Т.А, Волковой К.И., Шайхутдинова Р.З., Степанов AB. Температуро-зависимые изменения иммунохимических свойств липополисахарида // Вестник Рос. Акад. Мед. Наук. 1999. - № 12. - С. 32-34.

41. Гремякова Т.А., Степаншина В.Н., Негрий В.Ф. и др. Сравнительная характеристика препаратов капсульного антигена FI Yersinia pestis, полученных из штаммов-продуцентов с различной структурой ЛПС // Журн. микробиол. 1994,- № 3. - С. 10-14.

42. Грибоедов A.B., Барабаш Г.П. "Основной" соматический антиген или антиген, получаемый по методу Буавена-Месробеану из Yersinia pestis И Журн. микробиол. 1985,- № 3. -С. 108-115.

43. Дальвадянц С.М., Дробышева Т.М. Сравнительное изучение напряженности противочумного иммунитета у белых мышей, привитых "химической", убитой и живыми чумными вакцинами // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1977. - Вып. 6 (58). -С. 31-33.

44. Добрица В.П., Стогов В.И., Гавршпок О.В. и др. Некоторые итоги и перспективы разработки нативных и модифицированных вакцин к Y. pestis // Там же. С. 88-89.

45. Домарадский И.В. Чума: современное состояние, гипотезы, проблемы. Саратов: Саратовский медицинский институт, 1993. 130 с.

46. Домарадский И.В. Чума М.: Медицина, 1998. - 176 с.

47. Домарадский И.В., Калмыкова А.П., Кротова В.А. и др. Некоторые данные по проблеме "химической" вакцины против чумы // Доклады Иркутского противочумного института Вып. 3. - Хабаровск, 1962. - С. 18-25.

48. Домарадский И.В., Колесник Р.С., Клец Э.И. и др. Попытка иммунизации против чумы псевдотуберкулезными микробами в комбинации с чумными // Проблемы особо опасных инфекций, 1970. Вып. 5 (15). - С. 12-16.

49. Дробков В.И, Маракулин И.В., Погорельский И.П. и др. Спектр антител при введении чувствительным животным бактерий Yersinia pestis и Yersinia pseudotuberculosis II Журн. микробиол. 1996. - № 2. - С. 81-85.

50. Дроздов И.Г., Ежов И.Н., Самойлова С.В. и др. Оценка биологических свойств бескапсульных вариантов возбудителя чумы // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1993. - Вып. 1-2 (71-72). - С. 154-159.

51. Дроздов ИГ., Ежов И.Н., Самойлова С.В. и др. Способ получения бескапсульных вариантов возбудителя чумы // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1993. -Вып. 3 (73). - С. 187-195.

52. Дудина С.И. О роли "мышиного" токсина в иммуногенезе при чуме // Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1976. - Вып. 3 (49). - С. 17-20.

53. Евстигнеев В.И., Чичерин Ю.В., Бывалов А.А. и др. Иммуногенная активность "мышиного" токсина чумного микроба в эксперименте на животных // Журн. микробиол. -1981. № 3. - С. 39-42.

54. Жуков-Вережников Н.Н. Иммунология чумы (Основы специфической терапии и профилактики бубонной и легочной чумы). M.-JL: Медгиз, 1940.

55. Ю4.Иванов Н.Р., Исупов И.В., Ленская Г.Н. и др. К характеристике экспериментального противочумного иммунитета после прививок живыми вакцинами // Проблемы особо опасных инфекций. 1968,- Вып. 3. - С. 18-22.

56. Классовский ЛН., Степанов В.М., Мартиневский И.Л. и др. Наставление по изучению свежевыделенных штаммов возбудителя чумы. Алма-Ата, 1972. - 36 с.

57. Книрель Ю.А, Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. I. Общая характеристика липополисахаридов и структура липида А // Биохимия. -1993. Т. 58. - С. 166-201.

58. Ю.Козлов М.П. Чума (природная очаговость, эпизоотология, эпидемиологические проявления). М.: Медицина, 1979. 192 с.

59. Ш.Кокушкин А.М. Социальные и биологические аспекты эпидемиологии чумы: Дисс. докт. мед. наук. Саратов, 1995. - 392 с.

60. Кокушкин А.М. Трансформирующая активность плазмид чумного микроба: Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, 1983. - 183 с.

61. Комитет экспертов ВОЗ по чуме. 4й доклад. Женева, 1971,- С. 19.

62. Коробков Г. Г. Некоторые особенности развития противочумного иммунитета // Доклады Иркутского противочумного института: Материалы научной конфер. посвященной 50-летию Читинской противочумной станции. Вып. 6, Чита, 1963. - С. 94-95.

63. Коробкова Е.И. Вакцинация против чумы в зарубежных странах и в СССР. Эффективность вакцинации против легочной чумы // Проблемы особо опасных инфекций. -1968.-Вып. 3. С. 147-156.

64. Коробкова Е.И Живая противочумная вакцина М.: Медгиз, 1956.

65. Коссе Л.В., Лебедева С.А, Кузнецова Л.С. и др. Новые данные, относящиеся к специфичности и генетическому контролю капсульного антигена (Fl) Yersinia pestis И Журн. микробиол. 1997. - № 2. - С. 29-33.

66. Кудинова Т.П. Свойства штаммов чумного микроба, выделенных осенью 1963 года в Или-Каратальском междуречье: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Алма-Ата, 1968. -18 с.

67. Куклева Л.М., Карасева З.Н., Кондрашин Ю.И. Фагоцитоз штаммов чумного микроба перитонеальными макрофагами интактных и иммунизированных животных // Вопросы генетики, молекулярной биологии и микробиологии чумы и холеры. Саратов, 1985. -С. 42-48.

68. Кутырев В.В. Генетический анализ факторов вирулентности возбудителя чумы: Дисс. д-ра. мед. наук. Саратов, 1992. 332 с.

69. Кутырев В.В., Попов Ю.А, Проценко О.А. Плазмиды патогенности чумного микроба (Yersinia pestis) // Молекул, генетика. 1992. - № 6. - С. 3-11.

70. Кутырев В.В., Филиппов АА., Шавина Н.Ю. и др. Генетический анализ и моделирование вирулентности Yersinia pestis II Молекул, генетика. 1989. - № 8. - С. 42-47.

71. Лобанов В.Н. Патологическая анатомия и патогенез чумы у человека. М.: Государственное издательство медицинской литературы, 1956. 175 с.

72. Мартиневский ИЛ. Гладкие формы возбудителя чумы // Карантинные и зооноз-ные инфекции в Казахстане. Вып. 1, юбилейный. Алматы, 1999. - С. 211-212.

73. Медуницин Н.В. Вакцинология. М.: Триада-Х, 1999. - 272 с.

74. Метлин В.Н. Роль мышиного токсина в вирулентности и иммуногенности чумного микроба: Дисс. канд. мед. наук. Саратов, 1968. - 265 с.

75. Мишанькин Б.Н., Лопатина Н.В. Противочумная вакцина: прошлое, настоящее и будущее // Биотехнология. 1996. - № 4. - С. 3-9.

76. Назарова Л.С., Тараненко Т.М., Исупов ИВ. Стимуляция клеточного иммунитета ЛПС Yersinia pestis // Журн. микробиол. 1994. - № 5. - С. 85-86.

77. Наумов А.В., Ледванов М.Ю., Дроздов ИГ. Иммунология чумы. Саратов, 1992.172 с.137.'Никифоров АК. Конструирование штаммов-суперпродуцентов капсульного антигена Yersinia pestis'. Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, 1995. - 143 с.

78. Николаев II.К Чума (клиника, диагностика, лечение и профилактика). М.: Медицина, 1968.-240 с.

79. Николаев Н.И., Пономарев Н.Г., Филиппов А.Ф. и др. Вакцинопрофилактика чумы // Профилактика чумы в природных очагах: Материалы конференции (Март 1973 г., Саратов). Саратов: Издательство Саратовского университета, 1991. - С. 129-139.

80. Оводов Ю.С., Горшкова Р.П. Липополисахариды псевдотуберкулезного микроба // Химия природных соединений. 1988. -№ 2. - С. 163-171.143.0стерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.

81. Павлова Л.П., Тихомирова Е.И., Горькова АВ., и др. Миграция из костного мозга полипотентных стволовых кроветворных клеток у иммунизированных против чумы мышей// Иммунол. и специф. профилакг. особо опасныхинф. Саратов. - 1986. - С. 3-9.

82. Петрова Б.Ю., Шалаева А.Ф. Роль капсулы в иммуногенности живой противочумной вакцины // Специфич. профилакг. особо опасных инфекций. Саратов, 1964. -С. 133-138.

83. Проценко О.А., Анисимов П.И., Можаров О.Т. и др. Выявление и характеристика плазмид чумного микроба, детерминирующих синтез пестицина 1, антигена фракция 1 и экзотоксина "мышиного" токсина// Генетика. 1983. - Т. 19. - № 7. - С. 1081-1090.

84. Проценко О.А., Кузьмиченко И.А., Кутырев В.В. и др. Генетический контроль синтеза фосфолипазы D Yersinia pestis // Генетика. 1994. - Т. 30. - Приложение. - С. 128.

85. Пунский Е.Е., Адаменко Н.И. Эпизотологическое значение атипичных по синтезу фракции 1 штаммов возбудителя чумы // Медико-географические проблемы аридной зоны. -Ашхабад, 1982. С. 36-38.

86. Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Киселева А.К. Определение антифагоцитарной активности антигенов чумного микроба // Патологическая физиология, иммунол. и аллер-гол. ООН. Саратов, 1984. - С. 8-12.

87. Руководство по профилактике чумы / Под ред. АВ. Наумова, Л.В. Самойловой. -Саратов, 1992.-278 с.

88. Руководство по профилактике чумы // Под ред. Н.И. Николаева Саратов, 1972. - С. 134-153.

89. Сагимбеков У.А, Пошевина Г. О. К вопросу о механизме саморегуляции эпизоотии чумы в Муюнкумах // Проблема изучения механизма энзоотии чумы: Тез. докл. на Всесоюзной конференции / Под ред. П.И. Анисимова. Саратов, 1980. - С. 39-44.

90. Самойлова Л.В., Белобородов Р.А, Тараненко Т.М. Действие некоторых факторов на патогенные свойства штамма EV в организме животных // Проблемы особо опасных инфекций. 1968. - Вып. 3. - С. 23-27.

91. Самойлович Д. Избранные произведения. М., 1949.

92. Сердобинцев Л.Н. Полиморфизм капсульного антигена чумного микроба: Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, 1984. - 165 с.

93. Соколова Е.П. Механизмы активации токсических субстанций чумного микроба: : Автореф. дисс. канд. мед. наук. Ростов-на-Дону, 2002. - 18 с.

94. Степаншина В. Н., Гремякова Т. А., Анисимов А. П. Биологическая активность нативного и модифицированного рН6 антигена чумного микроба // Новые технологии и биосистемы. Тез. докл. XIV науч.-практ. конф. 21-23 мая 1991 г.- Оболенск, 1991. С. 11-13.

95. Степаншина В. Н., Гремякова Т. А., Анисимов А. П., Потапов В. Д. Выделение и свойства рН6 антигена чумного микроба // Новые технологии и биосистемы. Тез. докл. XIV науч.-пракг. конф. 21-23 мая 1991 г. Оболенск, 1991. - С. 78-80.

96. Степаншина В. Н., Гремякова Т. А., Анисимов. А. П, Поталов В. Д. Физико-химическая и биологическая характеристика рНб-антигена Yersinia pestis, выделенного им-муносорбционным методом // ЖМЭИ. 1993. - № 3. - С. 12-17.

97. Степаншина В.Н., Гремякова Т.А, Коробова О.В., Анисимов Г.А. Взаимосвязь между составом капсульного антигена Yersinia pestis и его протективной активностью // ЖМЭИ. ЖМЭИ 1995. - №2. - С. 124.

98. Степаншина В.Н., Гремякова Т.А., Коробова О.В. и др. Изучение взаимосвязи между химическим составом капсульного антигена чумного микроба и его протективной активностью // Журн. микробиол. 1995. - № 6 - С. 47.

99. Тараненко Т.М., Вейнблат В.И. Современные представления о структуре О-соматического антигена чумного микроба // Иммунохимия и лабораторная диагностика особо опасных инфекций Саратов, 1985. - С. 10-17.

100. Тараненко Т.М., Ермакова Г.В., Андреева И.П. и др. Структурно-функциональное изучение гликолипидного токсина чумных и псевдотуберкулезных иерсиний // Микробиология, биохимия и специфическая профилактика карантинных инфекций. Саратов, 1990. -С. 49-51.

101. Топорков В.П., Подсвиров АВ., Яшкулов К.Б. Эколого-эпидемиологический мониторинг за предикторами экстремальных эпидемических ситуаций в природно-очаговом по чуме регионе Северо-западного Прикаспия. Элиста, 1999. - 126 с.

102. Фурсова Н. К. Алимов А П., Гремякова Т. А. Особенности экспрессии и наследования плазмид, кодирующих синтез протективных атнигенов Yersinia pestis в клетках ге-терологичных реципиентов // Генетика. 1994. - Т.ЗО (Приложение) - С. 168.

103. Ценева Г.Я., Бондаренко В.М., Воскресенская Е.А и др. Протекгивная активность антигенов Yersinia pseudotuberculosis II Журн. микробиол. 1994. - № 4. - С. 45-48.

104. Черепанов П.А, Михайлова Т.Г., Каримова Г.А и др. Клонирование и детальное картирование /га->та/-области плазм иды pFra Yersinia pestis II Молекул, генетика. 1990. -№ 12. - С. 19-26.

105. Шанина JI.H. Характеристика вариантов чумного микроба, не продуцирующих капсульного антигена и "мышиного" токсина: Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, 1967. -199 с.

106. Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Мир, 1987. - 566 с.

107. Шмелев В.А, Носова Л.Ю., Галеев В.-С. К, Ставицкий С.Б., Лупщков С.Б., Попов С.Г., Герасимов В.Н. Гетерогенность музейных штаммов Yersinia pseudotuberculosis и их молекулярно-биологические свойства// Микробиология. 1991. - № 5 - С. 4-8.

108. Achtman M., Zurth KL, Morelli G. et al. Yersinia pestis, the cause of plague, is a recently emerged clone of Yersinia pseudotuberculosis // Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1999. - V. 96. - P. 14043-14048.

109. Ada G.L. What to expect of good vaccine and how to achieve it // Vaccine. 1988. -V. 6 - P. 77-79.

110. Alving C.R Liposomal Vaccines: Clinical Status and Immunological presentation for humoral and cellular immunity // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1995. - V. 754. - P. 143-152.

111. Alving C.R, Richards R.L. Liposomes containing lipid A* a potent nontoxic adjuvant for a human malaria sporozoite vaccine // Immunol. Lett. 1990. - V. 25. - P. 275-280.

112. Angerman C., Eisenstain T. Comparative efficacy and toxicity of a ribosomal vaccine, acetone-killed cells, lipopolysaccharide and a live cell vaccine prepared from Salmonella typhi-murium//Infec. Immunity. 1978. -V. 19. - P. 575-582.

113. Anisimov A P., Dyatlov I. A. A novel mechanism of antibiotic resistance in plague? // J. Med. Microbiol. 1997. - V. 46. - P. 887-889.

114. Aussei L., Therisod H., Karibian D., etal., Novel variations of lipid A structures in strains of different Yersinia species // FEBS Lett. 2000. - V. 465. - P. 87-92.

115. Bacon G.A., Burrows T.W., Yates M. The effect of biochemical mutation on the virulence of Bacterium typhosurrv. the virulence of mutants // Brit. J. Exp. Path 1950. - V. 32. - P. 714724.

116. Baker E.E., Sommer H., Foster L.E. etal. Studies on immunization against plague. I. The isolation and characterization of the soluble antigen of the Pasteurella pestis // J. Immunol. -1952. -V. 68. P. 131-145.

117. Ben-Efraim S., Aronson M., Bichowsky-Slomnicki L. New antigenic component of Pasteurella pestis formed under specific conditions of pH and temperature // J. Bacterid. 1961. -V. 81. - P. 704-714.

118. Bennet L.G., Tomabene T.G. Characterization of the antigenic subunits of the envelope protein of Yersinia pestis // J. Bacteriol. 1974. - V. 117. - P. 48-55.

119. Bergman T., Hakansson S., Forsberg A et al. Analysis of the V antigen IcrGVH-yopBJD operon of Yersinia pseudotuberculosis: evidence for a regulatory role of LcrH and LcrV // J. Bacterid. 1991. - V. 173. - P. 1607-1616.

120. Beuscher H.U., Rodel F., Forsberg A. et al. II Bacterial evasion of host immune defense: Yersinia enterocolitica encodes a suppressor for tumor necrosis factor alpha expression // Infec. Immunity. 1995. - Y. 63. - P. 1270-1277.

121. Bi Z., and C. S. Reiss. Inhibition of vesicular stomatitis virus infection by nitric oxide // J. Virol. 1995. V. 69. - P. 2208-2213.

122. Bichowsky-Slonimsky L., Ben-Efraim S. Biological activities in extracts of Pasteurella ■pestis and their relation to the "pH6 antigen" // J. Bacteriol. 1963. - V. 86. - P. 101-111.

123. Birnboim H.C., Doly I. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA // Nucl. Acids Res. 1979. - V. 7. - P. 1515-1523.

124. Bliska J.B., Black D.S. Inhibition of the Fc receptor-mediated oxidative burst in macrophages by the Yersinia pseudotuberculosis tyrosine phosphatase // Infec. Immunity. 1995. - V. 63. -P. 681-685.

125. Bordet C., Bruneteau M., Michel G. Lipopolysaccharides d'une souche a virulence <xt~ tenuee de Yersinia pestis II Eur. J. Biochem. 1977. - V. 79. - P. 443-449.

126. Borrelli S, Altmann K, Jansson P. E, Lindberg A A // Binding specificity for four monoclonal antibodies recognizing terminal Gal alpha l~>4Gal residues in Haemophilus influenzae lipopolysaccharide. Microb Pathog. 1995. - Vol. 19. -N. 3. - P. 139-157.

127. Bowe F., O'Gara P., Maskell D. et al. Virulence, persistence and immunogenicity of Yersinia enterocolitica 0:8 aroA mutants // Infec. Immunity. 1989. - V. 57. - P. 3234-3236.

128. Brade H., Rietschel E.T., a-2->4-Interlinked 3-deoxy-D-ma««o-octulosonic acid disaccharide. A common constituent of enterobacterial lipopolysaccharides // Eur. J. Biochem -1984.-V. 145.-231-236.

129. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for quantification of microgramm quantities of protein. Utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem 1976. - V. 72. -P. 248-254.

130. Bretscher P.A., Wei G., Menon J. et al. Establishment of stable, cell-mediated immunity that makes "susceptible" mice resistant to leushmania major // Science. 1992. - V. 257. - P. 539542.

131. Brubaker R.R. Factors promoting acute and chronic diseases caused by Yersiniae // Clin. Microbiol. Rev. -1991. V. 4. - P. 309-324.

132. Brubaker R.R. Growth of Pasteurella pseudotuberculosis in simulated intracellular and extracellular environment // J. Infec. Dis. 1968. - V. 117. - P. 293-302.

133. Brubaker R.R. Interleukin-10 and inhibition of innate imunity to Yersinia: roles ofYops and Lcr (V antigen) // Infect. Immun. 2003. - V. 71. - N. 7. - P. 3673-3681.

134. Brubaker R.R. Mutation rate to nonpigmentation in Pasteur ella pestis II J. Bacteriol. -1969. -V. 98. P. 1404-1406.

135. Brubaker R.R The Genus Yersinia: Biochemistry and Genetics of virulence // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1972. - V. 57. - P. 111-158.

136. Brubaker R.R. The V antigen of yersiniae: an overview // Contrib.Microbiol.ImmunoL -1991. -V. 12. P. 127-133.

137. Brubaker RR The Vwa virulence factor of yersinia: molecular basis of the attendant nutritional requirement for Ca2+ // Rev. Infec. Dis. 1983. - V. 5 (Suppl.). - P. S748-S758.

138. Brubaker R.R., Beesley E.D, Surgalla M.J. Pasteurella pestis: role of pesticin I and iron in experimental plague // Science. 1965. - V. 149. - P. 422-424.

139. Brubaker RR, Sample A.K., Yu D.Z. et al. Proteolysis of V antigen from Yersinia pestis II Microb. Pathog. 1987. - V. 2. - P. 49-62.

140. Burrows T.W. Virulence of Pasteurella pestis // Nature. 1957. - V. 179. - P. 12461247.

141. Burrows T.W. Virulence of Pasteurella pestis and immunogenicity to plaque // Ergeb. Mikrobiol. Immun Exp. Ther. 1963. - V. 37. - P. 59-113.

142. Burrows T.W., Bacon G.A. The effects of loss of different virulence determinants on the virulence and immunogenisity of strains of Pasteurella pestis // Brit. J. Exp. Pathol. 1958. - V. 39. -P. 278-291.

143. Burrows T.W., Bacon G.A V and W antigens in strains of Pasteurella pseudotuberculosis II Br. J. Exp. Pathol. 1960. - V. 41. - P. 38-44.

144. Burrows T.W., Bacon G.A., The basis of virulence in Pasteurella pestis: an antigen determining vitulence // Br. J. Exp. Pathol. 1956. - V. 37. - P. 481-493.

145. Butler G., de Graof P., Vandewijk J. Plague in Madagascar // Lancet. 1994. - V. 343.- P. 536.

146. Carniel E. Evolution of Pathogenic Yersinia, some dark in the light // Proc. 8th Int. Symp. On Yersinia. Sept. 4-8. 2002. - P. 15.

147. Camiel E. World situation of Yersinia pestis infections I I Medicine et Maladies-Infectieuses. 1995. V. 25. P. 675-679.

148. Caron E., Peyrard T., Kohler S. et al. Live Brucella spp. fail to induce tumor necrosis factor alpha excretion upon infection of U937-derived phagocytes // Infect.Immun. 1994. - V. 62.- P. 5367-5274.

149. Carter P.B., Zachorchak R.J., Brubaker R.R. Plague virulence antigens from Yersinia enterocolitica II Infec. Immunity. 1980. - V. 28. - P. 638-640.

150. Carty S.M., Sreekumar K.R., Raetz RH. Effect of cold shock on lipid A biosynthesis in Escherichia coli. Induction at 12 °C of an acyltransferase specific for palmitoleoyl-acyl carrier protein// J. Biol. Chem 1999. V. 274. - P. 9677-9685.

151. Cavanaugh DC., Randall R The role of multiplication of Pasteurella pestis in mononuclear phagocytes in the pathogenesis of fleaborne plague // J. Immunol. 1959. - V. 83. - P. 348-371.

152. Chakrabarty T.A, Chandra H.S., Seshu-Kumar G. et al., Human plague India // Weekly Epidemiological Record. 1994. - V. 43. - P. 722-723.

153. Chapman D., Chernovskaya Т., Zav'alov V. et al. Structural and functional analyses of the periplasmic chaperone involved in assembly of the Yersinia pestis Fl capsule // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - Sil. - P. S68.

154. Charles I., Doug an G. Gene expression and development of live enteric vaccines // Trends Biotechn. -1990. -V. 8. P. 117-121.

155. Charnetzky W.T., Shuford W.W. Survival and growth of Yersinia pestis within macrophages and on effect of the loss of the 47-megadalton plasmid on growth in macrophages // J. Infect. Immun. 1985. - V. 47. - P. 234-241.

156. Chatfield S.N., Strugnell RA, Dougan G. Live Salmonella as vaccines and carriers of foreign antigenic determinants // Vaccine. 1989. - V. 7. - P. 495-498.

157. Chen C.H., Johnson C., Kasai N. et al. Heterogeneity and biological activity of en-dotoxic glycolipid from Salmonella minnesota R 595 // J. Infec. Dis. 1973. - V. 128S. - P. 43-51.

158. Cherepanov P.A, Rosqvist R., Forsberg A Regulation of pH6 expression in Yersinia pestis И Ibid. P. S8. - (O-IO).

159. Cohen S.N., Chang AC.Y. Recircularization and autonomous replication of a sheared R-factor DNA segment in Escherichia coli transformants // Proc. Natl. Acad. Sei 1973. - V. 70. -P. 1293-1295.

160. Cooper NR., Morrison D.C. Binding and activation of the first component of human complement by the lipid A region of lipopolisaccharide // 1980. -V. 120. P 1892-1868.

161. Cornelis G.R. Molecular and cell biology aspects of plague // Proc. Natl. Acad. Sei. 2000. -V. 97. P. 8778-8783.

162. Cornelis G.R The Yersinia deadly kiss // J. Bacterid. 1998. - V. 180. - P. 5495-5504.

163. Cornelis G.R. Yersinia pathogenicity factors // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1994. -V. 192. - P. 245-263.

164. Cornelis G.R, Boland A, Boyd AP. etal. The virulence plasmid of Yersinia, an antihost genome // Microbiol. Mol. Biol. Rev. -1998. V. 62. - P. 1315-1352.

165. Cornelis G.R, Wolf-Watz H. The Yersinia Yop virulon: a bacterial system for subverting eukaryotic cells // Mol. Microbiol. 1997. - V. 23. - P. 861-867.

166. Cryz S.J. Jr. Live attenuated bacterial vaccine vector systems // Vaccine. 1996. - V. 14. - P. 676-680.

167. Curtiss R, Kelly S.M. Salmonella typhimurium deletion mutants lacking adenylate cyclase and cyclase receptor protein are avirulent and immunogenic // Infect. Immun. 1987. -V. 55. -P. 3035-3043.

168. Cuitiss R, Kelly S.M., Gulig P.A etal. Selective delivery of antigens by recombinant bacteria// Curr. Top. Microbiol. Immunol.- 1989. V. 146. - P. 35-54.

169. Dalla VeneziaN., Minka S., Bruneteau M. etal. Lipopolysaccharides from Yersinia pes-tis. Studies on lipid A of lipopolysaccharides I and II // Eur. J. Biochem 1985. - V. 151. - P. 399404.

170. Davies K.J.D., Fritz D.L., Pitt M.L. etal. Pathology of experimental pneumonic plague produced by FI-positive and FI-negative Yersinia pestis in African green monkeys (Cercopithecus aethiops) II Arch. Pathol. Lab. Med. 1996. - V. 120. - P. 156- 163.

171. Demerec M., Adelberg E.A, Clark A J. et al. A proposal for a uniform nomenclature in bacterial genetics // Genetics. 1966. - V. 54. - P. 61-79.

172. Demuth A, Goebil W., Beuscher H.U., Kuhn M. Differential regulation of cytokine and cytokine receptor mRNA expression upon infection of bone marrow-derived macrophages with Listeria monocytogenes II Infect.Immun. 1996. - V. 64. - P. 3475-3483.

173. Dennis D.T., Hughes J.M. Multidrug resistance in plague // N. Engl. J. Med. 1997. -V. 337. - P. 702-704.

174. Descoteaux A, Matlashewski G. c-fos and tumor necrosis factor gene expression in Leishmania donovani-mfected macrophages //Moll Cell. Biol. 1989. - V. 9. - P. 5223-5227.

175. Devignat R. Variétés de l'espèce Pasteurella pestis. Nouvelle hyphothèse II Bull. OMS. -1951.-V. 4. P. 247-263.

176. Dimopoulos G. // Insect immunity and its implication in mosquito-malaria interactions. Cell Microbiol. 2003. - Vol. 5. -N. 1. - P. 3-14.

177. Dorman C. J., Chatfield S.M., Higgins C.H., Hayward C., Dougan G. Characterization of porin and ompR mutants of avirulent strain of Salmonella typhimurium-. omp mutants are attenuated in vivo II Infect. Immun. 1989. - V. 57. - P. 2136-2140.

178. Dougan G. The molecular basis for the virulence of bacterial pathogens: implications for oral vaccine development // Microbiology. 1994. - V. 140. - P. 215-224.

179. Dougan G., Maskell D., O'Callaghan D. et al. Oral vaccination // Anton. Leeuwenhoek Int. J. Gen. M. 1988. - V. 54. - P. 447-451.

180. Drozdov I.G., Anisimov AP., Samoilova S.V. et al. Virulent non-capsulated Yersinia pestis variants constructed by insertion mutagenesis // J. Med. Microbiol. 1995. - V. 42. - P. 264268.

181. Du Y., Cherepanov P., Forsberg A Murine toxin of Yersinia pestis shows phospholipase D activity. Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - Sil. - P. S.9. - (O-15).

182. Ehrenkranz N.J., Meyer K.F. Studies on immunization against plague. VIII. Study of three immunizing preparations in protecting primates against pneumonic plague // J. Infec. Dis. -1955.-V. 96.-P. 138-144.

183. Evans, T.J. Bioassay for tumor necrosis factors-a and -b II Mol. BiotechnoL 2000 -V. 15. P. 243-248.

184. Feodorova V.A, Devdariani Z.L. Characterization of Yersinia pestis lipopolisacharide using monoclonal antibodies // //8th International Symposium on Yersinia (September 4-8, 2002, Turku, Finland). Turku. - 2002. - P. 67.

185. Feodorova V.A., Devdariani Z.L. Exresion of acid-stable proteins and modified lipopo-lisaccharide of Yersinia pestis in acidic growth medium // J. Med. Microbiol. 2001. Vol. 50. -P. 979-985.

186. Fields A.K., Straley S.C. Intracellular delivery of Yersinia pestis V antigen // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SIL - P. S6. - (0-5).

187. Fine R.M. Complement system activation by contrast media. // Int J Dermatol. 1977. -Vol. 10.-P. 830.

188. Forsberg A., Rosquist R., Wolf-Watz H. Regulation and polarized transfer of the Yersinia outer membrane proteins (Yops) involved in antiphagocytosis // Trends Microbiol. 1994. -V. 2-P. 14-19.

189. Friedlander AM., Welkos S.L., WorshamP.L. et al. Relationship between virulence and immunity as revealed in recent studies of the Fl capsule of Yersinia pestis II Clin. Infec. Dis. 1995. - V. 21 (Suppl. 2). - P. S178-S181.

190. Galanos C., Luderitz O., Westphal O. A new method for the extraction of the R-lipopolysaccharide // J. Biochem 1971. -V. 19. - P. 143-152.

191. Galanos C., Rietschel E.T., Luderitz O. et al. Biological activity of lipid A complexed with bovin-serum albumin // Eur. J. Biochem 1972. - V. 31. - P. 230-233.

192. Galimand M., Guiyoule A, Gerbaud G. et al. Multiple antibiotic resistance in Yersinia pestis mediated by a self-transferable plasmid // N. Engl. J. Med. 1997. - V. 337. - P. 677-680.

193. Galyov E.E., Hakannson S., Wolf-Watz H. Characterization of the operon encoding the Ypk Ser/Thr protein kinase and the YopJ protein of Yersinia pseudotuberculosis II J. Bacterid. -1994. . y. 176. P. 4543-4548.

194. Galyov E.E., Smirnov O.Yu., Karlishev AV. et al. Nucleotide sequence of the Yersinia pestis gene encoding Fl antigen and the primary structure of the protein. Putative T and B cell epitopes // FEBS Lett. 1990. - V. 227. - P.230-232.

195. Garcia E. Investigation of the evolutionary relationship between Yersinia-pseudotuberculosis and Yersinia pestis through whole-genome comparative sequencing // Proc. 8th Int. Symp. On Yersinia Sept. 4-8. 2002. - P. 16.

196. Gieni RS., Yang X., Hayglass T. Allergen-specific modulation of cytokine synthesis patterns and IgE responses in vivo with chemically modified allergen // J. Immunol. 1993. - V. 150. -P. 302-310.

197. Girard G. L'immunité dans l'infection pesteuse // Biologie Medicale. 1963. - V. 52. -P. 403-703.

198. Golding B., Scott D.E. Vaccine strategies: targeting helper T cell responses // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1995,-V. 754. - P. 126-137.

199. Greisman S.E., Young E.J., Du Buy B. Mechanisms of endotoxic tolerance // J. Immunol. 1973. - V. 111. - P. 1349-1360.

200. Gremyakova T. A, Modulation of the protective properties of plague vaccine preparations by monophosphoryl lipid A // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. -1998.-V. 6. SIL - S. 36.

201. Gremyakova T. A, Shaihutdinova R. A Antigenic shift of Yersiniapestis lipopolysaccharides expressed at various cell growth temperature // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SIL - S. 17.

202. Gremyakova T. A, Stepanshina V. N., Anisimov A P., Potapov V. N. Characterization of native and modified pH6 antigen of Yersinia pestis // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SIL - S. 19.

203. Griffin K.F., Hill J., Murray K. etal. Protective efficacies of the V antigen variants in Yersinia //Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SII. - P. S35.

204. Gustafson G.L., Rhodes M.J. A rationale for the prophylactic use of monophosphoryl lipid A in septic schock // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. - V. 182. - P. 269-275.

205. Hanski C., Naumann M., Grutzkau A et al. Humoral and cellular defense against intestinal murine infection with Yersinia enterocolitica II Infec. Immunity. 1991. - V. 59. - P. 11061111.

206. Harding C.V., Collins D., Unanue E.R. Processing of liposome-encapsulated antigens targeted to specific subcellular compartments // Res. Immunol. 1992. - V. 143. - P. 188-191.

207. Hartley J.L., Adams G.A., Tornabene T.G. Chemical and physical properties of lipopoly-saccharide of Yersinia pestis //J. Bacterid. 1974. -V. 118. -N. 3. - P. 848-854.

208. Heath D.G., Anderson G.W. Jr., Mauro J.M et al Protection against experimental bubonic and pneumonic plague by a recombinant capsular Fl-V antigen fusion protein vaccine // Vaccine. 1998. V. 16. - P. 1131-1137.

209. Hein J., Bohn E., Kempf V. et al. Crucial role of Thl cytokines for protection against Yersinia enter ocolitica II Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SII. -P. S10. - (0-21).

210. Hill J., Leary S.E.C., Griffin K.F., Williamson E.D., Titball R.W. Immunogenicity of V-antigen fragments of Yersinia pestis II Abstracts of the 96th General Meeting of the American Society of Microbiology. New Orlean, LA ASM, 1996. P. 195. - (B-222).

211. Hitchcock P.J., Brown T.M. Morphological heterogeneity among Salmonella lipopolysaccharide chemotypes in silver-stained polyacrylamide gels // J Bacterid. 1983. - V. 154. - P. 269-277.

212. Hoiseth S.K., Stocker B.AD. Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are nonvirulent and effective as live vaccines // Nature. 1981. - V. 291. - P. 238-239.

213. Holmgren A, Branden C.-I. Crystal structure of chaperone protein PapD reveals an immunoglobulin fold//Nature.- 1989. V. 342. - P. 248-251.

214. Holmstrom A, Petterson J., Hill J. et al. LcrV of Yersinia pseudotuberculosis is required for Yop expression and cytotoxicity of infected eucariotic cells // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SII. - P. S6. - (0-4).

215. Homma J.Y., Matsuura M., Kumazawa Y. Studies on lipid A the active center of endotoxin structure-activity relationship // Drugs Future. 1989. - V. 14. - P. 645-665.

216. Janeway C.A., Bottomley K Signals and signs for lymphocyte responses // Cell. 1994. - V. 76. - P. 275-285.

217. Janssen W.A., Lawton W.D., Fukui G.M. etal. The pathogenesis of plague. I. A study of the correlation between virulence and relative phagocytosis resistance of some strains of Pas-teurella pestis II J. Infect. Dis. 1963. - V. 113. - P. 139-143.

218. Johns M.A, Bruins S.C., McCabe W.R. Immunization with R mutants of Salmonella minnesota. II. Serological response to lipid A and thr lipopolysacchrides of Re-mutants // Inf. Immun. 1977.-V. 17. -P 9-15.

219. Johnson AG., Tomai M., Solem L. etal. Characterization of a nontoxic monophos-phoiyl lipid A // Rev. Infec. Dis. 1987. V. 9S.- P. S512-S516.

220. Johnson K.J., Charles I.G., Miller I.A., Pickard D., O'Goara P., Costa G., All T., Hor-maeche C.E. The role of a stress-response protein in Salmonella typhimurium virulence // Mol. Microbiol. 1991. - V. 5. - P. 401-407.

221. Kaca W, Literacka E, Sjoholm AG, Weintraub A Complement activation by Proteus mirabilis negatively charged lipopolysaccharides // J Endotoxin Res. 2000;6(3):223-34.

222. Kagan B.L., Selsted M.E., Ganz T. etal. Antimicrobial defensin peptides form voltage-dependent ion-permeable channels in planar lipid bilayer membranes // Proc. Nat. Acad. Sei. USA -1990. -V. 87. P. 210-214.

223. Karamian N.A, Waters P.F. Novel colorimetric method for determination of lipopolysaccharides // J. Pharm Sei. 1977. - V. 66. - P. 723-724.

224. Karlyshev A., Galyov E., Smirnov O. et al. Structure and regulation of a gene cluster involved in capsule formation of Y. pestis II Biological membranes: structure, biogenesis and dynamics.

225. NATO ASI Series. Series H: Cell Biology, V. 82 / Jos A.F. Op den Kamp (ed.). Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1994. - P. 321-330.

226. Karlyshev A.V., Galyov E.E., Abramov V.M. et al. CaflR gene and its role in the regulation of capsule formation of Yersinia pestis // FEBS Lett. 1992. - V. 305. - P. 37-40.

227. Karlyshev AV., Galyov E.E., Smirnov O.Yu. et al. A new gene of the fl operon of Yersinia pestis involved in the capsule biogenesis // FEBS Lett. 1992. - V. 297. - P. 77-80.

228. Kawahara K., Tsukano H., Watanabe H., Lindler B., et al. Modification of the structure and activity of Lipid A in Yersinia pestis lipopolysaccharide by growth temperature // Infect. Immun.- 2002. V. 70. - N. 8. - P. 4092-4098.

229. Kienle Z., Emody L., Svanborg C. et al. Adhesive properties conferred by the plasminogen activator of Yersinia pestis // J. Gea MicrobioL 1992. - V. 138. - P. 1679-1687.

230. Kopp E., Medzhitov R A plague on host defense // J. Exp. Med. http://www.iem.org/cgi/doi/1084/iem.20021311.

231. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. - V. 227. - P. 680-685.

232. Lahteenmaki K., Virkola R., Saren A et al. Expression of plasminogen activator Pia of Yersinia pestis enhances bacterial attachment to the mammalian extracellular matrix // Infect. Immun.- 1998. -V. 66. P. 5755-5762.

233. Lawton W.D., Erdman RL., Surgalla M. J. Biosynthesis and purification of V and W antigen in Pasteurella pestis II J. Immunol. 1963. -V. 91. - P. 179-184.

234. Lawton W.D., Fukui G.M., Surgalla M.J. Studies on the antigens of Pasteurella pestis and Pasteurella pseudotuberculosis H J. Immunol. 1960. - V. 84,- P. 475-479.

235. Leary S.E.C., Williamson E.D., Griffin K.F. et al. Active immunization with recombinant V antigen from Yersinia pestis protects mice against plague // Infect. Immun. 1995. - V. 63. -P. 2854-2858.

236. Leung K.Y., Straley S.C. The YopM gene of Yersinia pestis encodes a released protein having homology with the human platelet surface protein GBPIba// J. Bacterid. 1989. - V. 174. -P. 4623-4632.

237. Lian C.J., Hwang W.S., Pai C.H. Plasmid-mediated resistance to phagocytosis in Yersinia enterocolitica // Infec. Immunity. 1987. - V. 55. - P. 1176-1183.

238. Lindler L.E., Klempner M.S., Straley S.C. Yersinia pestis pH 6 antigen: genetic, biochemical, and virulence characterization of a protein involved in the pathogenesis of bubonic plague // Infec. Immunity. 1990. - V. 58. - P. 2569-2577.

239. Lindler L.E., Tall B.D. Yersinia pestis pH 6 antigen forms fimbriae and is induced by intracellular association with macrophages// Mol. Microbiol. 1993. -V. 8. - P. 311-324.

240. Liu Y, Yao X. Ensemble learning via negative correlation // Neural Netw. 1999. -Vol. 12. -N. 10. P. 1399-1404.

241. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem 1951. - V. 193. - P. 265-270.

242. Luderitz O., Galanos C., Rieschel E.T., et al. Lipid A: relationship of chemical structure and biological activity // In: Friedman H., Szentivanyi A, Nowotny A. eds. Immunobiology of endotoxins. NY: plenum Publishing. 1986. - P. 65-74.

243. Lundberg S., Cherepanov P., Forsberg A et al. Characterisation of membrane receptors for Yersinia pestis pH6 antigen // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. -V. 6. - SIL - P. S20. - (P-20).

244. Lurie R La peste Humaine en 1992 // Weekly Epidemiological Record. 1994. - V. 69. -N. 2. - P. 8-9.

245. Mackett M., Yilma T., Rose J.K. et al. Vaccinia virus recombinants: expression of VSV genes and protective immunization of mice and cattle // Science. 1985. - V. 227. - P. 433-435.

246. Makoveichuk E., Cherepanov P., Forsberg A, et al. Lipid-mediated interaction of Y.pestis pH6 antigen with plasma lipoprotein and macrophages in vitro II Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SII. - P. S22. - (P-22).

247. Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. N.Y., Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982.

248. Mannel D.N., Northoff H., Bauss F. etal. Tumor necrosis factor: a cytokine involved in toxic effects of endotoxin // Rev. Infec. Dis. 1987. - V. 7. - P. S603-S606.

249. Marshall J.D., Bartelloni P.J., Cavanaugh D.C. et al. Plague immunization. II. Relation of adverse clinical reactions to multiply immunizations with killed vaccines // J. Infec. Dis. 1974. -V. 129 (SuppL). - P. S19-S25.

250. Menigh RJ., Brubaker RR. Major stable peptides of Yersinia pestis synthesized during the low-calcium response// Infec. Immunol. 1993. -V. 61. - P. 13-22.

251. Meyer K.F. Effectiveness of live or killed plague vaccines in man // Bull. WHO. 1970. -V. 42. - P. 653-666.

252. Meyer K.F. Newer aspects on the pathology of plague observed in susceptible nonhuman primates // Abstracts of the VIII Int. Congress on tropical medicine and malaria. Teheran. Iran. 1968. - P. 523-524.

253. Meyer K.F., Cavanaugh D.C., Bartelloni P.J. et al. Plague immunization. I. Past and present trends // J. Infect. Dis. 1974. - V. 129. - P. S13-S17.

254. Meyer K.F., Foster L.E. Measurement of protective serum antibodies in human volunteers inoculated with plague prophylactics // Stanford. Med. Bull. 1948. - V. 6. - P. 75-79.

255. Meyer K.F., Hightower J.A, McCrumb F.R, Plague immunization. VI. Vaccination with the fraction I antigen of Yersinia pestis // J. Infect. Dis. 1974. - V. 129. - P. S41-S45.

256. Meyer K.F., Smith G., Foster L., Brookman M., Sung M. Live attenuated Yersinia pestis vaccine: virulent in nonhuman primates, harmless to guinea pigs // J. Infect. Dis. 1974a. - V. 129. -P. S85-S120.

257. Miller S.I., Kukral A. M., Mekalanos J. J. A two-component regulatory system (phoP phoQ) controls Salmonella typhimurium virulence // Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1989. - V. 86. -P. 5054-5058.

258. Miller S.I., Loomis W.P., Alpuehe-Aranda C. et al. The phoP virulence regulon and live oral Salmonella vaccines II Vaccine. 1993. - V. 11. - P. 122-125.

259. Minka S, Bruneteau M. Isolation and chemical characterization of type R lipopolysaccharides of a hypovirulent strain of Yersinia pestisH Can J. Microbiol. 1998. Vol. 44. -N. 5. - P. 477-481.

260. Mishankin M., Vasileva G., Kozlowsky V. et al. The computer analyses of amino acid sequence of Yersinia pestis "murine" toxin // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. -1998. V. 6. - SII. - P. S19. - (P-15).

261. Mishell B.B., Shiigi S.M. Selected methods in cellular immunology. W.H.Freeman and Company. - San Francisco. - 1980.

262. Montie. T.C. Properties and pharmacological action of plague murine toxin // Pharmacol. Ther. 1981. -V. 12. - P. 491-499.

263. Morrison D.C., Betz S.J., Jacobs D.M. Isolation of a lipid A-bound polypeptide responsible for "LPS-initiated" mitogenesis of C3H/HeJ spleen cells // J. Exp. Med. 1976. - V. 144. -P. 840-846.

264. Morrison D.C., Kline L.F. Activation of the classical and properdin pathways of complement by bacterial LPS//J. Immunol. 1977. -V 118. P 362-368.

265. Motin V.L., Nakajama R, Smirnov G.B. et al. Passive immunity to yersinia mediated by anti-recombinant V antigen and protein A-V fusion peptide // Infec. Immunity. 1994. - V. 62. -P. 4192-4201.

266. Motin V.L., Nedialkov Y.A., Brubaker RR V antigen-polyhistidine fusion peptide: binding to LcrH and active immunity against plague // Infect. Immun 1996. - V. 64. - P. 43134318.

267. Mulder B.T., Michiels T., Simonet M. etal. Identification of additional virulence determinants on the pYV plasmid of Yersinia enterocolitica W227 // Infec. Immunity. 1989. - V. 57. -P. 2534-2541.

268. Müller K, Burdack S., Rollinghoff M., Beuscher H.U. Recombinant YopB blocks TNF-a production through binding to murine macrophages // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SIL - P. S25.

269. Nakajima R, Brubaker RR Association between virulence of Yersinia pestis and suppression of gamma interferon and tumor necrosis factor alpha // Infec. Immunity. 1993. - V. 61. -P. 23-31.

270. Nakajima R., Motin V.L., Brubaker RR Suppression of cytokines by protein A-V antigen fusion peptide and restoration of synthesis by active immunization // Infec. Immunity. 1995. -V. 63. - P. 3021-3029.

271. Nakajima R, Motin V.L., Brubaker RR. Active immunity to Yersiniae and inhibition of cytokine synthesis in vivo mediated by a protein A-V antigen fusion peptide // 6th International symposium on Yersinia. September 26-28. Rome. Italy. 1994. P. 39.

272. Nedyalkov Y.A., V.L., Brubaker R.R. Resistance to LPS mediated by the Yersinia pestis V antigen-polyhystidine fusion peptide:mplification of interleukine-10 // Infec. Immunity. 1997. -V. 65.-P. 1196-1203.

273. Noll A., Bucheler N., Autenrieth I.B. Immunity against Yersinia enterocolitica by vaccination with Yersinia-HSP-60 // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. -V. 6.-SII.-P. Sil.-(0-23).

274. Novik R, Clowes R, Cohen S. etal. Uniform nomenclature for bacterial plasmids: a proposal// Bacteriol. Rev. 1976. - V. 40. - P. 168-189.

275. Ong G. L, Baker A E, Mattes M. J. Analysis of high complement levels in Mus hortulanus and BUB mice// J. Immunol Methods. 1992. - V. 154. - P. 37-45.

276. Panda S.K., Nanda S.K., Ghosh A. et al. Human plague-India // Weekly Epidemiological Record. 1994. V. 43. - N. 1. - P. 689-691.

277. Paul W.E., Seder R.A Lymphocyte response and cytokines // Cell. 1994. - V. 76. -P. 241-251.

278. Perry M.B., Vinogradov E., Conlan J.W. LPS in conjugate vaccines // IV International on Tularemia. (September 15-18, 2003, Bath. UK). Bath. - 2003.

279. Perry R.D., Fetherston J.D. Yersinia pestis etiologic agent of plague // Clin. Microbiol. Rev. - 1997. - V. 10. - P. 35-66.

280. Perry KD., Haddix P., Atkins E.B. etal. Regulation of expression of V antigen and outer membrane proteins in Yersinia pestis II Contrib. Microbiol. Immunol. 1987. - V. 9. - P. 173178.

281. Perry R.D., Harmon P.A, Bowmer W.S. et al. A low-Ca2+ response operon encodes the V antigen of Yersinia pestis II Infec. Immunity. 1986. - V. 54. - P. 428-434.

282. Phillips A.P., Morris B.C., Hall D. etal. Identification of encapsulated and non-encapsulated Yersinia pestis by immunofluorescence tests using polyclonal and monoclonal antibodies // Epidemiol. Infect. 1988. - V. 101. - P. 59-73.

283. Pierson V., Worsham P., Strachan S.D. FI-negative variants of Y.pestis C092 II Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SIL - P. S9. (0-17).

284. Pitt M.L., Estep J.E., Welkos S.L. et al. Efficacy of killed whole-cell vaccine against a lethal aerosol challenge of plague in rodents I I Abstracts of the 94 th General Meeting of the American

285. Society for Microbiology 1994. Washington, D.C.: ASM, 1994. P. 151. (E-45).1 1

286. Playfair J.H., DeSouza I.B. Recombinant gamma interferon is a potent adjuvant for a malaria vaccine in mice // Clin. Exp. Immunol. 1987. - V. 67. - P. 5-10.

287. Porat R, McCabe W.R., Brubaker R.R. Lipopolysaccharide-associated resistance to killing of Yersinia by complement I I J. Endotoxin. Res. 1995. - V. 2. - P. 91-97.I

288. Portnoy D.A, Falkow S. Virulence-associated plasmids from Yersinia enterocolitica and

289. Yersinia pestis II J. BacterioL 1981. - V. 148. - P. 877-8931

290. Portnoy D.A, Martiner R.J. Role of a plasmid in the pathogenicity of Yersinia species //

291. Curr. Top. Microbiol Immunol. 1985. -V. 118. P. 29-51.i

292. Price S.B., Cowan C., Perry R.D. etal. The V antigen is a regulator protein necessary for the Ca2+-dependent growth and the maximal expression of low Ca2+- response virulence genes in

293. Yersinia pestis II J. Bacterid. 1991. - V. 173. - P. 2649-2657. /i 1

294. Price S.B., Leung K.Y., Barve S.S. etal. Molecular analysis of IcrGVH, the V antigen operon of Yersinia pestis II J. Bacterid. 1989. - V. 171. - P. 5646-5653.

295. Prior J.L, Parkhill J, Hitchen P.G, Mungall K.L, Stevens K, Morris H.R, Reason A.J,l i

296. Prior J.L, Titball R.W. Monoclonal antibodies against Yersinia pestis lipopolyaccharide detect bacteria cultured at 28 °C or 37 °C// Molecular and Cellular Probes. 2002. - V. 16. -P. 251-256.

297. Pullen J.K., Anderson G.W. Jr., Welkos S.L. et al. Analysis of Yersinia pestis V protein for the presence of linear antibody epitopes // Infec. Immunity. 1998. - V. 66. - P. 521-527.

298. Ravindranaugh M.H., Brazeau S.M., Morton D.L. Efficacy of tumor cell vaccine after incorporating monophosphoryl lipid A (MPL) in tumor cell membranes containing tumor-associated gangliosides // Experientia. 1994. - V. 50. - P. 648-653.

299. Reisner B.S., Straley S.C. Yersinia pestis YopM: thrombin binding and overexpression// Infec. Immunity. -1992. V. 60. - P. 5242-5252.

300. Rietschel E.T., Brade L., Branderburg K. etal., Chemical structure and biological activity of bacterial and synthetic lipid A// Rev. Infect Dis. 1987. V. 9 (Suppl.5). - P. 527-536.

301. Robbins J.B., Schneerson R Polysacharide-Protein Conjugates: A new Generation of Vaccines // J. Infec. Dis. 1990. - V. 161. - P. 821-832.

302. Rodrigues C.G., Carneiro C.M., Barbosa C.T. etal. Antigen FI from Yersinia pestis forms aqueous channels in lipid bilayer membranes // Braz. J. Med. Biol. Res. 1992. - V. 25. -P. 75-79.

303. Roggenkamp A, Geiger AM., Leitrritz L. etal. Passive immunity to infection with Yersinia spp. mediated by anti-recombinant V antigen is dependent on polymorphism of V antigen // Infec. Immunity. 1997. - V. 65. - P. 446-451.

304. Roggenkamp A, Leitritz L., Sing A etal. Anti-recombinant V antigen serum promotes uptake of Yersinia enterocolitica serotype 08 by macrophages // Med. Microbiol. Immunol. (Berl). 1999-V. 188.-P. 151-159.

305. Rosquist R, Magnusson K.-E. Wolf-Watz H. Target cell contact triggers expression and polarized transfer of Yersinia YopE cytotoxin into mammalian cells // EMBO. J. 1994. - V. 13. -P. 964-972.

306. Rosqvist R, Forsberg A, Wolf-Watz H. The cytotoxic protein YopE of Yersinia obstructs the primary host defence // Mol. Microbiol. 1990. - V. 4. - P. 657-667.

307. Rudolph AE., Stuckey J.A, Zhoa Yi etal. Expression, characterization, and mutagenesis of the Yersinia pestis murine toxin, a phospholipase D superfamily member // J. Biol. Chem. -1999. -V. 274. P. 11824-11831.

308. Samoilova S.V., Samoilova L.V., Yezhov I.N. etal. Virulence of pPst+ and pPstf strains of Yersinia pestis for guinea-pigs // J. Med. MicrobioL 1996. - V. 45. - P. 440-444.

309. Sarmento A.M., Appelberg R Relatioship between virulence of Mycobacterium avium strains and induction of tumor necrosis factor alpha production in infected mice and in vtro cultured mouse macrophages // Infect. Immun. 1995. -V. 63. - P. 3759-3764.

310. Sato K., Nakajama R, Hara F. et al. Preparation of monoclonal antibody to V antigen from Yersinia pestis II Contrib. MicrobioL Immunol. 1991. - V. 12. - P. 225-229.

311. Schmidt G., Jann B., Jann K. Immunochemistry of Rlipopolysaccharides of Escherichia coli. Studies on R mutants with an incomplete core, derived from£ coli 08:K27 // Eur. J. Biochem 1970.-V. 16.-P. 382-392.

312. Schutze H. Studies in Bacterium pestis antigens. I. The antigens and immunity reactions of B. pestis II Br. J. Exp. Pathol. 1932. - V. 13. - P. 284-288.

313. Schutze H. Studies on Bacterium pestis antigens. III. The prophylactic value of the envelope and somatic antigens of B. pestis II Br. J. Exp. Pathol. 1939. - V. 19. - P. 293-298.

314. Selkirk M.E. Ability of delivery systems to influence TH-l/TH-2 type responses and MHC class 1/class II antigen presentation // Vaccine. 1996. - V. 14. - N. 7. - P. 668-671.

315. Shaikhutdinova RZ., Gremyakova T.A, Zhilenkov E.L., Dentovskaya S.V., Anisimov A.P. Phage-susceptibility testing and LPS-electrophoretic mobility analysis of different

316. Yersinia pestis "subspecies"/^* International Symposium on Yersinia (September 4-8, 2002, Turku, Finland). Turku. - 2002. - P. 71.

317. Simonet M., Richard S., Berche P. Electron microscopic evidence for in vivo extracellular localization of Yersinia pseudotuberculosis harboring the pYV plasmid // Infect. Immun. 1990. - V. 58. - P. 841-845.

318. Simpson W.J., Thomas R.E., Schwan T.G. Recombinant capsular antigen (fractionl) from Yersinia pestis induces a protective antibody response in BALB/C mice // Am J. Trop. Med. Hyg. 1990. - V. 43. - P. 380-396.

319. Sing A., Rost D., Tvardovskaya N., et al., Yersinia V-antigen exploits toll-like receptor-2 and CD14 for interleukin 10-mediated imunosuppression// J. Exp. Med. 2002. - V. 196. -P. 1017-1024.

320. Skrzypek E., Straley S.C. Differential effects of deletions in lcrV on secretion of V antigen, regulation of the low-Ca2+ response, and virulence of Yersinia pestis II J. Bacteriol. 1995. -V. 177. - P. 2530-2542.

321. Skurnik M., Bolin I., Heikkenen H. et al. Virulence plasmid associated autoagglutination in Yersinia species // J. BacterioL 1984. - V. 158. - P. 1033-1036.

322. Smith H., Packam L.P. A filtered non-toxic plague vaccine which protects guinea pigs and mice// Brit. J. Exp. Pathol. 1966. - V. 47. - P. 25-34.

323. Smith P.N. Pneumonic plague in mice: modification of the infection by antibody against specific components of Pasteurella pestis H J. Infec. Dis. -1959. V. 104. - P. 85-91.

324. Snider D.P., Segal D.M. Targeted antigen presentation using crosslinked antibody heteroaggregates // J. Immunol. 1987. - V. 139. - P. 1609-1616.

325. Sodeinde O.A, Subrahmanyam Y.V., Stark K. et al. A surface protease and the invasive character of plague// Science. 1992. - V. 258. - P. 1004-1007.

326. Straley S.C. Adhesins in Yersinia pestis II Trends. Microbiol. 1993. - V. 1. - P. 285286.

327. Straley S.C., Bowmer W.S. Virulence genes regulated at the transcriptional level of Ca2+ in Yersinia pestis include structural genes for outer membrane proteins // Infec. Immunity. 1986. -V. 51. - P. 445-454.

328. Straley S.C., Cibill M.L. Differential clearance and host-pathogen interaction of YopE-and YopKTYopLf Yersinia pestis in DALB/c mice // Infec. Immunity. 1989. - V. 57. - P. 12001210.

329. Straley S.C., Skrzypek E., Piano G.V. etal. Yops of Yersinia spp. pathogenic for humans //Infec. Immunity. 1993. - V. 61. - P. 3105-3110.

330. Surgalla M.J. Properties of virulent and avirulent strains of Pasteurella pestis II Ann. N.Y. Acad. Sei. 1960. - V. 88. - P. 1136-1145.

331. Surgalla M.J., Beesley E.D. Congo red agar plating medium for detecting pigmentation in Pasteurella pestis H App. MicrobioL 1969. -V. 18. - P. 834-837.

332. Swierzko A, Brade L., Paulsen H., et al. Specificity of rabbit antisera against the rough lipopolisaccharide of Salmonella minnesota R4 (Chemotype Rd2P") I I Infect. Immun. 1993 - V. 61. -N. 8.-P. 3216-3221.

333. Takada H., Kotani S. Structure-function relationships of lipid A // In: Morrison D.C., Ryan J.L.,(ed). Bacterial endotoxic Iipopolysaccharides. Molecular biochemistry and cellular biology. CRC Press, Boca Raton, Fla. - 1992. -V. 1. - P. 107-134.

334. Tang D.C., Devit M., Johnston S.A. Genetic immunization in a simple method for eliciting an immune response//Nature. 1992. - V. 139. - P. 1609-1616.

335. Tihomirova E.I., Tihomirova L.A., Gerasimova K.I. Antiplague vaccination: effect on functional state of human immune system // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. -1998. V. 6. - Sil. - P. S 4. - (P-85).

336. Tsai C.M., Frash C.F. A sensitive silver stain for detecting lipopolysaccharides in Polyacrylamide gels // Anal. Biochem 1982 472.Une T„ Brubaker RR. Ro,-V. 119. P. 115-119,1es of V antigen in promoting virulence and immunity in

337. Yersinia II J. Immunol. 1984. - V. 133J-P. 2226-2230.

338. Une T., Nakajima R., Brubaker R.R. Roles of V antigen in promoting virulence in Yersinia II Contrib. Microbiol. Immunol. 1986. - V. 9. - P. 179-185.I

339. VidyaevaN.A., Gaeva AY., Protsenko O.A., Kutirev V.V. Comparative electrophoretic analysis of the lipopolysaccharide of Yersinia pestis five subspecies and Yersinia pseudotuberculosis II Proc. 8th Int. Symp. On Yersinia Sept. 4-8. 2002. - P. 72.

340. Vinogradov E.V., Knirel Y.A, Thomas-Oates J.E. et al. The structure of the cyclic enterobacterial common antigen (ECA) from Yersinia pestis // Carbohydr. Res. 1994. - V. 20. -P. 223-232. |

341. Vodopyanov S.O., Oleinikov I.P., Romanova L.V., Mishankin B.N. Yersinia pestis Gro EL-protein immunization does not protect mice against experimental plague // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SIL - P. S85. - (P-85).

342. Vogel F.R. Immunologic adjuvants for modern vaccine formulations // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1995. - V. 754. - P. 153-161.

343. Vorontsov E.D., Dubichev AG., Serdobintsev L.N. et al. Association-dissociation processes and supermolecular organization of the capsule antigen (protein 1) of Yersinia pestis 11 Bio-med. Sei. 1990. -V. 1. - P. 391-396.

344. Walf-Watz H. Interaction between Yersinia and its target cell // Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SII. - P. S4 - (K-l).

345. Warren H.S., Chedid L.A Strategies for treatment of endotoxemia: significance of the acute-phase response // Rev. Infec. Dis. 1987. -V.l.- P. S630-S637.

346. Weiler R, Kewitz B. The marker for nitric oxide synthase, NADPH-diaphorase, co-localizes with GABA in horizontal cells and cells of the inner retina in the carp retina // Neurosci. Lett. 1993. - Vol. 20. -N. 158(2). -. P. 151-154.

347. Welkos S.L., Davis K.M., Pitt L.M. et al. Studies on the contribution of the Fl capsule-associated plasmid pFrato the virulence of Yersinia pestis // Contrib. Microbiol. Immunol. 1995. -V. 13.- P. 299-305.

348. Welkos S.L., Friedlander AM., Davis KJ. Studies on the role of plasminogen activator in systemic infection by virulent Y. pestis strain C092 // Microb. Pathog. 1997. - V. 23. - P. 211223.

349. Westphal O., Jann K Bacterial lipopolysaccharides: extraction with phenol-water and further application of the procedure // Methods in carbohydrate chemistry / Roy L. Whistler (ed.). New York: Academic Press. Inc., 1965. V. 5. - P. 83-91.

350. Williams J., Cavanaugh D. Cryptic infection of rats with nonencapsulated variants of Yersinia pestis II Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1974. - V. 69. - P. 171-172.

351. Williams J.E., Cavanaugh D.C. Chronic infections in laboratory rodents from inoculation of nonencapsulated plague bacilli (Yersinia pestis) // Experientia. 1983. - V. 39. - P. 408-409.

352. Williams J.E., Cavanaugh D.C. Potential for rat plague from nonencapsulated variants of the plague bacillus (Yersinia pestis) II Experientia 1984. - V. 40. - P. 739-740.

353. Williams J.E., Harrison D.N., Quan Th J. et al. Atypical plague bacilli isolated from rodents, fleas and man// Amer. J. Public Health. 1978. - V. 68. - P. 262-264.

354. Wilhams J.E., Hudson B.W., Turner R.W. et al. Plague in Central Java, Indonesia // Bull. WHO. 1980. - V. 58. - P. 459-468.

355. Williams R.C., Gewürz H., Quie P.G. Effects of fraction 1 from Yersinia pestis on phagocytosis in vitro II J. Infec. Dis. 1972. - V. 126. - P. 235-241.

356. Williamson E.D., Eley S.M., Griffin KF. et al. A new improved sub-unit vaccine for plague: the basis of protection// FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1995. - V. 12. - P. 223.

357. Winter C., Cherry W., Moody M. An unusual strain of Pasteurellapestis isolated from a fatal human case of plague II Bull. WHO. 1960. - V. 23. - P. 408-409.

358. Worsham P.L., Hunter M. Characterization of pestoides F, an atypical strain of Yersinia pestis II Nederlands Tijdschrift Voor Medische Microbiology. 1998. - V. 6. - SII. -P. S34-35.

359. WorshamP.L., Stein M.-P., Welkos S.L. Construction of defined Fl negative mutants of virulent Yersinia pestis // Contrib. Microbiol. Immunol. 1995. - V. 13. - P. 299-305.

360. Wren B.W., Olsen AL., Stabler R. et al. A PCR-based strategy for the construction of a defined Yersinia enterocolitica 08 htr mutant // Abstracts of 6th International Symposium on Yersinia (September 26-28,1994, Rome, Italy). Rome, 1994a - P. 25.

361. Yang X., Gieni RS., Mosmann T.R. et al. Chemically modified antigen preferentially elicits induction of THl-like cytokine synthesis pattern in vivo // J. Exp. Med. 1993. - V. 178. -P. 349-353.

362. Yang Y,, Isberg R.R. PsaEF regulate the expression of the thermoinducible binding op-eron in Y. pseudotuberculosis II Abstracts of the 96th General Meeting of the American Society of Microbiology. New Orlean, LA: ASM, 1996. P. 35 - (B-231).

363. Yersin A Bacille de la peste // Ann. Inst. Pasteur. 1894. - V. 8. - P. 666.

364. Yersin A. La peste bubonicque ä Hong-Kong // Ann. Inst. Pasteur. 1894. - V. 8. -P. 662-667.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.