Структурно-функциональные исследования пептидомиметика N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамина, поиск молекулярных мишеней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Савинов, Георгий Владимирович

• Савинов, Георгий Владимирович
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Савинов, Георгий Владимирович

Содержание

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2. ВВЕДЕНИЕ

3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ОСНОВНЫЕ СЕНСОРЫ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ И РЕАКЦИЙ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА

3.1 TOLL-ПОДОБНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

3.1.1 Структура

3.1.2 Лиганды TLR

3.1.3 Экспрессия TLR и чувствительность к стимуляции лигандами TLR различных субпопуляций мышиных В-клеток

3.1.4 Клеточные мишени стимуляции TLR в человеческих В-клетках

3.1.5 TLR-индуцированная секреция цитокинов В-лимфоцитами

3.1.5 Влияние на дифференцировку Т-клеток посредством TLR активации в антиген-презентирующих клетках (АРС)

3.1.6 Прямая активация TLR в CD4+ Т-эффекторных клетках индуцирует

констимуляцию

3.1.7Влияние направленной TLR-активации на регуляционные Т-клетки

(Treg)

3.1.8 Адъювантная активность

3.2 БЕЛКИ СЕМЕЙСТВА NLR

3.3 БЕЛОК YB-1

3.3.1 Структура белка YB-1

3.3.2 Участие белка YB-1 в воспалительных заболеваниях

3.3.3 Участие белка YB-1 в онкогенезе

4. МЕТОДИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

4.1 Реактивы и реагенты

4.2 Среды и растворы

4.3 Структура праймеров

4.4 Штаммы Е. coli и клеточные линии

4.5 Методика тестирования адъювантной активности RN-пептида

4.6 Выделение мононуклеарных клеток

4.7 Измерение продукции лимфокинов лимфоцитами периферической крови человека

4.8 Выделение РНП

4.9 Выделение полисом, синтезирующих белки с высоким сродством к RN-пептиду

4.10 Синтез кДНК

4.11 Амплификация ДНК

4.12 Рестрикция кДНК и лигирование с вектором

4.13 Лигирование

4.15 Получение электрокомпетентных клеток Е. coli

4.16 Электропорация

4.17 Первичный анализ библиотеки методом скрининга на чашках

4.18 Выделение плазмиды

4.19 Рестрикция

4.20 Получение одноцепочечных Fv фрагментов антител (scFv) против YB-1

4.21 Определение Kd

4.22 Конкурентный анализ связывания RN-пептида и ГМДП с YB-1

4.23 Western блот

4.24 Выделение РНК с помощью Trizol

4.25 Измерение уровня экспрессии NF-KB2

4.26 Получение поликлональных антител против NOD2

4.27 Получение мышиных моноклональных антител к белку YB-1

4.28 Подготовка дендритных клеток костного мозга

4.29 Определение внутриклеточной локализации YB-1 hNOD2

5. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

5.1 Определение структур RN-пептида, необходимых для проявления биологической активности с помощью укороченных вариантов RN-пептида

5.2 Данные Ala-scan и проверка адъювантной активности

5.3 Анализ адъювантной активности RN-пептида

5.4 Индукция секреции лимфокинов лимфоцитами периферической крови человека RN-пептидом и ГМДП в разных концентрациях

5.5 Поиск белка, взаимодействующего с ГМДП

5.6 Данные анализа первичной структуры

5.7 Определение Kd комплекса RN-пептида с белком YB-1 и проведение конкурентного анализа

5.8 Изменение уровня экспрессии белков NFkBl, NFkB2 и NOD2 в ответ на добавление RN-пептида, ГМДП и YB-1 в культуральную среду

5.9 Анализ внутриклеточной локализации ГМДП, YB-1 и NOD2

6. ВЫВОДЫ:

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

anti-PC - антифосфохолиновый

ASC - апоптоз-ассоциированный крапчато-подобный белок CpG - 2'-дезоксирибоцитидин-фосфат-гуанозин CpG-ODN - CpG-содержащие олигодезоксинуклеотиды С SR — переключение субкласса иммуноглобулинов dsRNA - двухцепочечные РНК

GPI-mucin — гликозилфосфатидилинозитол-связывающий муцин-подобный гликопротеин

HIV - вирус иммунодефицита человека (ВИЧ)

IgM - иммуноглобулин M

INF-y - интерферон-у

LBP - LPS-связывающий белок

LPS - липополисахариды

LRR - лейцин-богатые повторы

LTA — летальный токсин Bacillus anthracis

MD-2 - лимфоцитарный антиген

MDP - мурамилдипептид

meso-DАР - y-D-глутамил-мезо-диаминопимелиновая кислота

MyD88 - белок первичного ответа дифференцировки миелоидных клеток

MZ В-клетки - B-клетки краевой зоны селезенки

NBD - нуклеотид-связывающий домен

NK-клетки - натуральные киллеры

NLR - нуклеотид связывающие домены, содержащие лейцин-богатые повторы

NOD2 - нуклеотид-связывающий домен олигомеризации 2 PGN - пептидогликаны РКВ - протеин киназа В

PRR - образраспознающие рецепторы

PYD - пириновый домен

TIR - То11/интерлейкин-1 рецепторный домен

TLR - То11-подобные рецепторы

TNF - фактор некроза опухоли(ФНО)

VSV - вирус везикулярного стоматита

РАМР - патоген-ассоциированными молекулярными структурами CD 14 - гликозилфосфатидилинозитол-связывающий белок

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурно-функциональные исследования пептидомиметика N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамина, поиск молекулярных мишеней»

2. ВВЕДЕНИЕ

Изучение явления молекулярной мимикрии весьма актуально в последние годы, поскольку помимо своей фундаментальной значимости открывает возможности для решения многих прикладных задач. Так, в частности, получение пептидных миметиков - аналогов важных (с точки зрения выработки протективного иммунного ответа) антигенов возбудителей инфекционных заболеваний, уже сейчас позволяет разрабатывать безопасные пептидные вакцины [1-6]. Вместе с этим актуальной является задача повышения эффективности вакцин нового поколения - генно-инженерных, пептидных. Одним из путей решения этой задачи является использование агентов, обладающих адъювантными свойствами. Уже более полувека для усиления иммунного ответа у лабораторных животных исследователи используют полный адъювант Фрейнда. Тем не менее, в медицинской практике из-за побочных эффектов, вызываемых введением полного адъюванта Фрейнда, для вакцинации людей в качестве адъюванта разрешено использовать лишь гидроокись алюминия. Ранее в лаборатории иммунохимии ИБХ РАН с использованием комбинаторных библиотек пентадекапептидов был обнаружен пептид, воспроизводящий адъювантные свойства природного лиганда (ГМДП), но не обладающий пирогенной активностью. Весьма актуальным представляется создание на его основе фармацевтического препарата. Необходимым этапом на этом пути является изучение и улучшение фармакокинетических характеристик. Для решения подобного рода задач в мировой практике применяются различные подходы. В частности было показано, что замена К- и С-концевых аминокислотных остатков на модифицированные аминокислоты может делать такие видоизмененные пептиды нечувствительными к действию экзопептидаз [7-9]. Существуют примеры, когда значительного увеличения стабильности пептида в кровотоке удавалось достичь благодаря введению в различные участки последовательности Э-аминокислот [10]. Практически полностью

неметаболизируемые варианты биологически активных пептидов удавалось получить путем синтеза энантио и ретроэнантио аналогов [11-13]. Помимо исследований, направленных на увеличение стабильности RN-пептида, нами запланирован поиск его внутриклеточных белковых мишеней. Поскольку RN-пептид является аналогом ГМДП, а тот в свою очередь миниамальным повторяющимся звеном пептидогликана клеточной стенки бактерий, с его помощью удобно осуществить поиск мишеней действия молекулярных структур (мурамоилпептидов), ассоциированных с клетками патогенных микроорганизмов, и индуцирующих возникновение первичной реакции макроорганизма в ответ на атаку патогена. К настоящему времени нет ясности с клеточными мишенями мурамоилдипептидов. Очевидно только, что имеется более одного типа рецепторных молекул и что они есть на клеточной поверхности и внутри клеток. Существует семейство мембраносвязанных рецепторов, названных Toll-like (TLR)[14], а также семейство внутриклеточных белков (Nod, Nalp, Ipaf, Naip, СИТА), распознающих структурные элементы клеточной стенки бактерий и ответственных за возникновение воспалительных реакций в ответ на проникновение патогена, однако только для NOD2 белка показана способность связывать МДП [15-17]. Получены данные о связывании ГМДП с гистонами HI [18]. Использование RN-пептида, который может быть легче модифицирован радиоактивной или флуоресцентной меткой, позволит получить ценные сведения о рецепторных белках мурамилпептидов.

3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ОСНОВНЫЕ СЕНСОРЫ

ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ И РЕАКЦИЙ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА

Основополагающими молекулярными компонентами врожденной

системы неспецифического иммунного ответа являются образ распознающие рецепторы (pattern recognition receptors - PRR). PRR узнают характерные только для микроорганизмов консервативные молекулярные структуры, которые были названы патоген-ассоциированными молекулярными структурами (pathogen-associated molecular patterns — PAMP).

Наиболее известными PAMP являются липополисахариды (LPS), представляющие собой структурные компоненты внешней мембраны грамотрицательных бактерий; тейхоевые и липотейхоевые кислоты, которые являются мембранными компонентами преимущественно

грамположительных бактерий; пептидогликаны (PGN) грамположительных и грамотрицательных бактерий; липоарабиноманноза микобактерий; зимозан грибов; двуспиральные вирусные РНК; бактериальные ДНК.

Каждая патоген-ассоциированная молекулярная структура является маркером достаточно больших групп микроорганизмов, поэтому процесс их распознавания PRR носит неспецифический характер.

По функции PRR можно разделить на две группы: эндоцитозные и сигнальные. Эндоцитозные PRR экспрессированы на поверхности антиген-представляющих клеток (фагоцитов). После распознавания соответствующего РАМР они опосредуют поглощение и доставку к лизосомам патогена, где впоследствии происходит его разрушение с образованием антигенных детерминант, которые в комплексе с молекулами главного комплекса гистосовместимости класса II представляются клеткам адаптивной иммунной системы и запускают адаптивный иммунный ответ. Очевидно, что именно через эндоцитозные PRR преимущественно реализуется ответ на антигены вакцин.

Среди сигнальных рецепторов центральное место занимают так называемые Toll-like (толл-подобные, TLR) и NOD рецепторы.

3.1 TOLL-ПОДОБНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ.

3.1.1 Структура

Семейство человеческих TLR включает в себя около 11 разных видов трансмембранных рецепторов. Все они состоят из трех общих структур [19] (рис.1):

1. дивергентного лиганд-связывающего внеклеточного домена, обладающего лейцин-богатыми повторами (LRR);

2. короткого трансмембранного участка;

3. высокогомологичного цитоплазматического То11/интерлейкин-1 рецепторного (TIR) домена, необходимого для инициации последующих сигнальных каскадов.

TLR4

Узнавание м— LRR

Ш.

Ilk:

D299G

T399I

дд

«Ь A4» » >. i

Активация «я— TIR

Рис. 1. Структура ТоП-подобныхрецепторов на примере TLR4

То11-подобные рецепторы (TLR) играют важную роль в инициации естественного иммунного ответа на действие патогенов. В процессе узнавания молекулярных мотивов, характерных для молекул

микроорганизмов, ТЪК является связующим звеном между секрецией цитокинов и повышением представленности антигена.

В В-клетках ТЪИ. способствуют стимуляции секреции иммуноглобулинов и рекомбинации, связанной с переключением класса. Так как лиганды ТЫ1 проявляют адъювантные свойства, они могут являться составными частями противомикробных вакцин, хотя на данный момент очень мало информации о прямых эффектах воздействия ТЬЯ на функции В-лимфоцитов.

Среди образ распознающих рецепторов Т1Л представляют собой важное семейство рецепторов, которые участвуют в узнавании молекулярных структур, специфичных для микробных патогенов [19-21].

Т1П могут быть разделены на две основные группы:

1) Рецепторы на поверхности клетки;

2) Рецепторы, расположенные внутри клетки.

Поверхностные ТЫ1 рецепторы связываются с такими молекулами, как бактериальные липопептиды (ТЫ12) или липополисахариды (Т1Л4), в то время как эндосомальные ТЬЯ активируются микробными нуклеиновыми кислотами и не так легко доступны. Такое разделение во внутриклеточной локализации приводит к разделению функций в процессе противомикробного иммунного ответа.

3.1.2 Лиганды ТЬИ

Как уже было сказано, разные РАМР избирательно активируют различные ТЬЯ (т.е. каждый ТЫ1 связывает специфичную «молекулярную структуру» различных классов микроорганизмов или индивидуальные структуры, характерные для различных комменсалов или патогенов) [19] (Табл.1).

PRR (структура) Адаптеры (структура) РАМР / Активаторы Виды

TLR TLR1-TLR2 (LRR—TIR) MyDSS (TIR-DD), TIRAP (TIR) Триациллипопетиды Бактерии

TLR2-TLR6 {LRR—TIR) MyDSS TIRAP Диа циллипопептиды Легальный токсин Bacillus anthracis Зимозан Микоплазма Бактерии Грибы

TLR2 (LRR—TIR) MyDSS TIRAP Пептидогликан Липоарабиноманнан Порины tßPI-муцин белок НА Бактерии Микобакгерии Бактерии (Neisseria) Паразиты (Tripanosoma) Вирусы (вирус кори)

TIR3 (LRR—TIR) TRIF (TIR) dsRNA Вирусы

TLR4 (LRR—TIR) MyDSS, TIRAP, TRIF, Липополисахариды Бактерии

TRAM (T!R) Белки оболочки Вирусы

TLR5 (LRR—TIR) MyDSS Флагеллин Бактерии

TLR7 (LRR—TIR) MyDS8 ssRNA РНК-вирусы

hTLRS (LRR—TIR) MyDSS ssRNA РНК-вирусы

TLR 9 (LRR-TIR) MyDS8 CpG DNA DNA малярийный гемозоин Бактерии ДНК-вирусы Паразиты

mTLRll (LRR-TIR) MyDSS неоп редел ены Профилин-подобные молекулы Бактерии (уропатогенныебактерии) Паразиты (Toxoplasma gondii)

Табл. 1 Лиганды TLR

TLR, расположенные на поверхности клеток.

TLR4 необходим для ответов на LPS, главных компонентов наружной мембраны грамотрицательных бактерий. LPS являются сильнодействующими иммуностимулирующими молекулами и вызывают септический шок. TLR4 прочно ассоциирован с MD-2 на поверхности клетки. Такой комплекс необходим для индукции секреции воспалительных цитокинов [22]. В ответ на LPS вовлечен также и LPS-связывающий белок (LBP) и CD 14. LBP представляет собой растворимый белок или белок плазмалеммы, связывающий LPS. CD14 - гликозилфосфатидилинозитол-связывающий белок, содержащий LRR и связывающийся с LBP. Он доставляет комплекс LPS-LBP к TLR4-MD-2 комплексу [22].

TLR2 узнает большое разнообразие РАМР, являющихся составными частями различных патогенов бактерий, грибов, простейших и вирусов [23]. Такими лигандами являются триациллипопептиды бактерий и микобактерий, диациллипопептиды микоплазм, пептидогликаны (PGN) и липотейховая кислота грамоположительных бактерий, порин из Nesseria, липоарабидоманнан микобактерий, зимозан (содержащий ß-глюкан, маннаны, хитин, жиры и белки) грибов, GPI-муцин Trypanosoma (tGPI-mucin) и гемаглютинин вируса кори. TLR2 обычно образует гетеродимер с TLR1, TLR6, либо не относящимися к TLR молекулами, такими как CD36, CD 14 и

дектин-1, для распознавания молекулярных структур лигандов. ТЬЮ-ТЬЯб распознает диацилированные липопептиды, ЬТА и зимозан. Комплекс ТЫ12-ТЬЫ1 узнает бактериальные триацилированные липопептиды.

ТЬЯ5 распознает флагеллин (составляющую часть бактериального жгутика) [24]. Т1Л15 узнает высоко консервативный центральный сайт флагеллина, который необходим для формирования протофиламентов и обеспечения бактериальной подвижности. Было показано, что ИЛ15 экспрессируется на поверхности кишечных эпителиальных клеток, а не на макрофагах и дендритных клетках селезенки. Это доказывает роль ТЫ15 в детекции инвазивных жкутиковых бактерий в пищеварительном тракте.

Т1Л2 и ТЫ14 вовлечены и в распознавание различных эндогенных молекул, таких как белки теплового шока (Н8Р60,ШР70, gp96 и ШР22), фибриноген, жирные кислоты и т.д. Эти эндогенные лиганды запускают продукцию макрофагами ЮТ-а и 1Ь-12.

Таким образом, ТЫ1, находящиеся на поверхности клетки, являются сенсорами сигналов опасности.

Внутриклеточные ТТЛ.

ТЬЯЗ, ТЬЯ7, ТЬЯ8 и ТЫ19 экспонируются внутриклеточными компартментами, такими как эндосома, лизосома или эдноплазматический ретикулум (ЕЯ) [25, 26]. Эти ТЫ1 являются сенсорами чужеродных нуклеиновых кислот и включают противовирусный врожденный иммунный ответ. Они же включают продукцию воспалительных цитокинов и интерферонов I типа (таких как ШЫ-а, №N-(3).

ТЬИЗ распознает и геномные РНК вирусов.

ТЬЯ7 узнает имидазолхинолиновые производные, такие как имихимод и резихимод (11-848), и гуаниновые аналоги, такие как локсорибин, которые обладают противовирусными и противоопухолевыми свойствами [27].

ТЫ18 филогенетически наиболее похож на Т1Л17. Человеческий ТЫ18 распознает Я-848, бактериальные РНК и одноцепочечные РНК, выделенные

из HIV, VSV и вируса гриппа А, хотя TLR-дефектные мыши проявляют нормальный ответ на эти молекулы. Это может указывать на видоспецифичность функций TLR8 [28]. TLR8 экспрессируется в различных тканях. Наиболее высокий уровень экспрессии наблюдается в мононоцитах.

TLR9 способен распознавать неметилированные последовательности ДНК 2-дезоксирибоцитидин-фосфогуанозин (CpG), распространенные в бактрериях, но редкие у позвоночных [29].

В B-клетках TLR отвечает за положительную регуляцию маркеров активации, запуск пролиферации, секрецию цитокинов, дифференцировку и, наконец, секрецию иммуноглобулинов.

На рисунке 2 отмечены какие мышиные и человеческие TLR участвуют в контроле той или иной функции В-клеток [30].

Лроят^чдчи.'.я

• .

Ig переключение _

* - запоминание Представление антигена

Секреция ютсжинов

Рис.2 Роль ТЬЯрецепторов в функционировании В-клеток.

тТЬЯ = мышиные ТЬЯ

ЬТЬЯ = человеческие ТЬЯ

ТЬЯ = и мышиные и человеческие ТЬЯ

Участие TLR приводит к МуБ88-зависимой активации NF-кВ, включению сигнальных путей митоген-активируемой протеинкиназы и сигнальных путей протеинкиназы B(PKB)/Akt [30-32].

3.1.3 Экспрессия TLR и чувствительность к стимуляции лигандами

TLR различных субпопуляций мышиных В-клеток.

Уровень экспрессии TLR и чувствительность к их лигандам варьируют в зависимости от субпопуляции В-клеток. Большинство экспериментальных данных были получены при изучении мышиных субпопуляций В-клеток. Три разных детальных исследования показали, что экспрессия мРНК TLR4 и TLR1 происходит во всех субпопуляциях В-клеток с некоторыми вариациями [33-35]. TLR7 и TLR9 присутствуют также во всех субпопуляциях, хотя уровень экспрессии сильно варьирует в зависимости от субпопуляций В-клеток. В двух других исследованиях было выяснено, что экспрессия мРНК TLR3 наблюдалась только в MZ В-клетках [33, 34]. Наиболее высокий уровень экспрессии TLR2 наблюдается в B-1-клетках. То же самое наблюдается и при исследовании уровня экспрессии мРНК TLR8 [36].

Наблюдается видоспецифичность уровня экспрессии TLR в популяциях В-клеток. Основные отличия лежат в экспрессии TLR4. Мышиные В-клетки постоянно экспрессируют TLR4. Их лиганд, LPS, стимулирует пролиферацию В-клеток, секрецию цитокинов и CSR (Ig переключение) [37]. В отличие от мышиных клеток, человеческие В-клетки менее чувствительны к LPS, об этом свидетельствует низкий уровень экспрессии TLR4 [38]. Мышиные клетки проявляют высокий уровень ответа на стимуляцию с помощью липопептидов, активирующих TLR2 [39]. Но человеческим В-клеткам необходима сенсибилизация TLR2-лигандами с помощью олигомеризации В-клеточных рецепторов (BCR) или с помощью

иммуноглобулинов [40]. Как в мышиной, так и в человеческой иммунной системах TLR2 экспрессируется совместно с его ко-рецепторами TLR1 и TLR6, тогда как совместная экспрессия с CD36 наблюдалась лишь в мышиных В-клетках, а экспрессия предполагаемого ко-рецептора TLR10 ограничена человеческими В-клетками. Как мышиные, так и человеческие В-клетки экспрессируют TLR7 и TLR9 и могут быть активированы специфическими последовательностями ДНК (TLR9) и РНК (TLR7).

Функциональные анализы чувствительности TLR в различных субпопуляциях мышиных В-клеток показали, что пролиферативные ответы в процессе активации TLR2, TLR7 и TLR9 наблюдались в фолликулярных и MZ В-клетках [30]. Высокие уровни пролиферации при ответе на стимуляцию липополисахаридом (LPS) были обнаружены только в MZ В-клетках. Интересно то, что дифференцировка в плазмоциты не связана с пролиферацией. Несмотря на низкие уровни пролиферации, при ответе на все раздражители TLR (тестировалось на В-1 В-клетках) активация TLR2, TLR4, TLR7 и TLR8 приводила к значительному увеличению уровня секреции иммуноглобулина М (IgM) и была связана со скоротечной индукцией транскрипционного фактора Blimp-1, который стимулирует дифференцировку плазмоцитов в некоторых субпопуляциях В-клеток [41].

MZ В-клетки также запускают секрецию IgM и IgG во время активации TLR2, TLR3, TLR4 и TLR9 in vitro [30].

Стимуляция одних и тех же TLR в двух разных субпопуляциях В-клеток совсем не обязательно будет приводить к одинаковым эффектам. Это может быть продемонстрировано на примере активации TLR9. TLR9 стимулирует пролиферативный ответ в отсутствии дифференцировки в фолликулярных В-клетках и прекращает дифференцировку в отсутствии пролиферации в В-1 клетках.

3.1.4 Клеточные мишени стимуляции TLR в человеческих В-клетках.

В организме человека локальное окружение, по всей видимости, влияет на набор TLR: уровень экспрессии TLR2, TLR3 и чувствительности к соответствующим лигандам выше в B-клетках, выделенных из миндальных желез, чем в B-клетках, которых выделяли из периферической крови человека [42].

Человеческие B-клетки более чувствительны к стимуляции TLR, но экспрессируют TLR на более низком уровне. Возможно, человеческие TLR имеют большее сродство к своим лигандам, чем мышиные. Клетки памяти более склонны к пролиферации и дифференцировке в плазмобласты в процессе стимуляции TLR. [38]

3.1.5 TLR-индуцированная секреция цитокинов В-лимфоцитами.

Многие различные типы клеток вносят свой вклад в регуляцию иммунного ответа с помощью секреции тех или иных цитокинов, которые оказывают влияние на клеточные функции в аутокринной и паракринной форме. TLR-стимулированные B-клетки оказывают влияние на регуляторные функции, например, предотвращают гиперстимуляцию иммунного ответа в мышиных аутоиммунных моделях и у новорожденных. Эта толерогенная (то есть вызывающая иммунную толерантность) способность обусловлена продукцией IL-10 в MZ и В-1 В-клетках [32]. Кроме того, секреция IL-10 у мышей была замечена в MZ B-клетках при ответе на раздельную стимуляцию TLR2, TLR4 и TLR9. Аналогичные данные были получены и при комбинированной TLR-стимуляции. С другой стороны, в фолликулярных клетках селезенки такого действия не наблюдалось. В отличие от IL-10, IL-6 был детектирован в обеих субпопуляциях клеток [32].

Среди протестированных мышиных субпопуляций В-клеток только фолликулярные B-клетки продуцировали INF-y при ответе на стимуляцию лигандами TLR9 совместно с TLR2, TLR4 или TLR9 агонистами. Это доказывает, что секреция цитокинов может зависеть от стадии дифференцировки клеток [32]. Согласно некоторым данным мышиные В-клетки продуцируют TNF (фактор некроза опухоли), IL-6, IL-12, IL-23 и IL-27 в ответ на активацию TLR [43].

Человеческие B-клетки являются слабыми продуцентами цитокинов. Стимуляция с помощью лигандов TLR7 и TLR9 приводит к секреции IL-10, IL-6 и IL-8 [38], секреция IL-lß и IL-2 была детектирована лишь при ответе на специфические В-клеточные CpG-содержащие олигодезоксинуклеотиды (CpG-ODN) [44]. Несмотря на схожие механизмы действия В-клеточных активаторных факторов, принадлежащих к семейству TNF (BAFF/BlyS) или к лигандам, индуцирующим пролиферацию (APRIL), для индукции IL-12 необходимо участие CD40. Это говорит о том, что индукция IL-12 в человеческих B-клетках является событием, зависящим от Т-клеток.

Таким образом, TLR вызывают индукцию цитокинов как в мышиных, так и человеческих В-клетках. B-лимфоциты могут осуществлять контроль развивающегося иммунного ответа (было показано для IL-10). Были получены данные о том, что IL-6 и IL-10 блокируют пролиферацию В-клеток памяти и способствуют дифференцировке антителообразующих клеток [45]. TLR- индуцированная секреция этих цитокинов способна приводить к остановке дифференцировки клеток [30].

3.1.5 Влияние на дифференцировку Т-клеток посредством TLR активации в антиген-презентирующих клетках (АРС).

TLR могут быть экспрессированы как в АРС, таких как дендритные клетки (DC) и макрофаги [46], так и в Т-клетках [47, 48], и могут служить в

качестве костимулирующих сигналов в активации Т-клеток [49]. Традиционно, активация TLR в АРС приводит к продуцированию IFN-a, провоспалительных цитокинов, таких как TNF-a, IL-1 и IL-6, а также цитокинов IL-12 и IL-18, которые приводят к дифференцировке Thl. В то же время наблюдается увеличение количества Th2 ответа в MyD8 8-дефицитных мышах с ослабленным TLR-сигналом [50-52]. Секреция IL-12 и IL-23 дендритными клетками, индуцированных активацией TLR, усиливается с помощью хемокина CCL17. Продукция этих цитокинов значительно сокращается в CCL17-дефицитных DC [53]. Было показано, что доза антигена играет важную роль в контролеТЬ1/Т112-дифференциации, которую запускают DC. Более низкое содержание овальбумина (OVA) (1 и 10 нг/мл) вызывает ТЪ2 детерминацию, в то время как при более высокой концентрации (1 мкг/мл и 100 нг/мл) развитие Th2 не выявлено. Стимуляция CD4+ Т-клеток с помощью DC в сочетании с агонистами TLR2 и TLR9 в присутствии 10 нг/мл OVA пептида (оптимальной концентрации антигена для развития Th2) привела к подавлению продуцирования IL-4 и развития Th2. [54]. Активация TLR4 приводит к MyD88 Thl7-зависимому ответу в CD4+ Т-клетках памяти при отсутствии молекулы TRIF (TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-p, адаптер, содержащий TIR-домен, индуцирующий интерферон-p) [54]. Активация DC через TLR2-MyD88-зависимый путь также вызывает Thl и Thl7 дифференциацию клеток [55]. Тем не менее, сигнал TLR2 может ингибировать способность дендритных клеток продуцировать IL-12p70. Этот же сигнал приводит к иммунному ответу, вызываемому синергичным сочетанием TLR4 и TLR7/8 агонистов (оба являются индукторами Thl-ответа) по отношению к 1Ъ2 и Thl7 ответам в наивных Т-клеточных субпопуляциях и субпопуляциях Т-клеток памяти [56]. Мышиные DC, активированные посредством LPC или CpG олигодезоксинуклеотида (ОДН) преодолевают Treg-опосредованное подавления при помощи индуцирования IL-6 сигналов [57]. Таким образом, Т-клеточные субполяции активируются TLR сигналами от АРС, изменяясь в

зависимости от типа и статуса участвующих в процессе АРС, состава цитокинов, а также от количество присутствующего антигена [58].

С другой стороны, недавние исследования показали, что сигналы от Th-клеток могут приводить к образованию и функционированию специализированных субполяций дендритных клеток. Например, Thl и ТЫ 7 клетки вызывают дифференциацию моноцитов в Th 1 -Th 17-стимулирующих субполяциях дендритных клеток в участках кожи, пораженных псориазом, а Th2 клетки вызывают продуцирование ТЬ2-стимулирующих субполяций дендритных клеток при остром атопическом дерматите [59]. Фенотип этих поляризованных субпопуляций дендритных клеток не может быть изменен даже после последующей стимуляцией TLR лигандов. При стимуляции лигандами TLR1-TLR9, изменяется количество цитокинов, секретируемых специализированными субполяциями дендритных клеток, но общий уровень секретируемых цитокинов остается прежними [59]. TLR сигналы в дендритных клетках обратно регулируются при помощи адаптеров, содержащих последовательности иммунорецепторного тирозин-содержащего активирующего мотива (ITAM), подавляющих активацию дендритных клеток [60]. Таким образом, получается, что существующий направленный иммунитет предписывает, что последующий иммунный ответ и заданная направленность не будет изменяться, даже если будет происходить стимуляция с помощью PRR.

3.1.6 Прямая активация TLR в CD4+ Т-эффекторных клетках индуцирует констимуляцию

Уровень экспрессии и активность TLR в Т-клетках связаны с функциональным состоянием Т-клеток, к примеру, эффекторные Т-клетки или клетки памяти, а также с активационным статусом Т-клеток по отношению к сигналам TCR (Т-клеточный рецептор) [61, 62]. Мышиные наивные Т-клетки могут экспрессировать TLR1-TLR9 хотя есть

значительные различия в уровнях экспрессии [63]. TLR1, TLR4 и TLR6 максимально выражены в CD4+ и CD8+ Т-клетках [61]. Хотя наивные человеческие CD4+ Т-клетки экспрессируют значительные количества внутриклеточных белков TLR2 и TLR4, наличие белков TLR2 и TLR4 на клеточной поверхности было обнаружено только в активированных CD4+ Т-клетках [49]. Тем не менее, уровень экспрессии TLR2 в наивных Т-клетках может значительно увеличиться за счет анти-С03-активации TCR. Было обнаружено, что маркер активации, HLA-DR антиген, экспрессируется совместно с TLR2, что подтвержадет тот факт, что экспрессия TLR2 связана с активацией Т-клеток [49]. Аналогичные результаты были получены для CD8+ Т-клеток с содержанием транскриптных копий мРНК TLR2 в цитотоксических Т-лимфоцитах (CTL) в 7-10 раз выше чем в наивных CD8+ Т-клетках [63]. Активированные мышиные CD4+CD25~ эффекторные Т-клетки могут функционально экспрессировать TLR2 [64]. Различия могут быть отчасти связаны с разными условиями, применяемыми для очистки Т-клеток, и разными лигандами, используемыми для активации TLR. Кроме того, было показано, что при использовании липополисахаридов, полученных из Salmonella enteritidis, Salmonella minnesota и Salmonella typhimurium, только LPS из Salmonella typhimurium может вызвать пролиферацию и секрецию IFN-y в мышиных CD4+ Т-клетках [64].

TLR, экспрессированные в Т клетках, могут выступать в качестве дополнительных стимулирующих молекул, участвующих в активации Т-клеток [61]. Применение Pam3CysSK4, лиганда комплекса TLR1/TLR2, в активированных TCR трансгенных мышиных CD8+ Т-клетках приводит к увеличению пролиферации клеток и большему выживанию. Это было связано с устойчивой экспрессией CD25 и повышенной экспрессией Bcl-xL, антиапоптотической молекулы. Включение TLR2 увеличивает производство IFN-y и способствует цитотоксической активности антиген-активированных CD8+ Т-клеток, снижает активационные потребности к костимулирующим

сигналам от APC и уровень сигнала TCR, а также генерирует эффективные Т-клетки памяти в ответ на слабый сигнал Т-клеточного рецептора [65, 66]. TLR2 включение в CD8+ Т клетки памяти также участвует в непосредственном контроле пролиферации клеток памяти и продуцирования IFN-y [67]. Костимуляция наивных CD4+ Т-клеток при помощи поли(1:С) посредством TLR3 в присутствии анти-СОЗ и анти-СБ28 может вызвать синтез IL-17A и IL-21, это зависит от пути активации NF-кВ. IL-17A и IL-21 являются причиной дифференциации наивных CD4+ Т-клеток. Эти клетки не имеют факторов транскрипции T-bet, GATA-3 и ROR-c, которые приводят к ативации Thl-, Th2- и Th 17-субпопуляций соответственно [68]. TLR лиганды не могут вызывать функционального ответа в наивных Т-клетках без одновременной TCR-стимуляции [65]. Таким образом, TLR-индуцированные сигналы в Т-клетках строго костимулирующие [62].

3.1.7 Влияние направленной TLR-активации на регуляционные Т-клетки (Treg).

TLR2, как агонист Pam3Cys, действует непосредственно на очищенные Treg-клетки, приводя к запусканию механизма пролифирации Treg-клеток [64, 68]. Включение TLR2 приводит к росту человеческих CD8+CD25+Foxp3+ Treg-клеток, что непосредственно подавляет пролифирацию CD4+ Т-клеток [69]. Treg-клетки способны восстановиливать свои подавляющие свойства в присутствии IL-2 после удаления TLR2 лиганда [64, 68]. Несмотря на то, что TLR2-cтимyлиpoвaнныe Treg-клетки легко теряют свою способность подавлять пролиферацию эффекторных Т-клеток, продуцирование цитокинов эффекторными Т-клетками оказывается все еще подавлено. Это говорит о том, что активность Treg-клеток не зависит от цитокинов [70]

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Савинов, Георгий Владимирович, 2013 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

[1]. Lesinski G.B., Smithson S.L., Srivastava N., Chen D., Widera G., Westerink

M.A. DNA vaccine encoding a peptide mimic of Streptococcus pneumoniae serotype 4 capsular polysaccharide induces specific anti-carbohydrate antibodies in Balb/c mice.// Гяссше(2001);19(13-14):1717-26.

[2]. Grothaus M.C., Srivastava N., Smithson S.L., Kieber- Emmons Т., Williams

D.B., Carlone G.M., Westerink M.A. Selection of an immunogenic peptide mimic of the capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis serogroup A using a peptide display library.// Vaccine (2000);18(13):1253-63.

[3]. Hutchins W.A., Kieber-Emmons Т., Carlone G.M., Westerink M.A. Human

immune response to a peptide mimic of Neisseria meningitidis serogroup С in hu- PBMC-SCID mice.// Hybridoma (1999);18(2): 121-9.

[4]. Jeon-Soo Shin, Jigui Yu, Jisheng Lin, Linghao Zhong, Kara L. Bren, Moon

H. Nahm2. Peptide mimotopes of pneumococcal capsular polysaccharide of 6B serotype: a peptide mimotope can bind to two unrelated antibodies.// J. Immunol (2002),, 168: 6273- 6278.

[5]. Qiu J., Luo P., Wasmund K., Steplewski Z., Kieber- Emmons T. Towards

the development of peptide mimotopes of carbohydrate antigens as cancer vaccines.// Hybridoma (1999); 18( 1): 103-12.

[6]. Prezzi C., Nuzzo M., Meola A., Delmastro P., Galfre G., Cortese R., Nicosia

A., Monaci P. Selection of antigenic and immunogenic mimics of hepatitis С virus using sera from patients Л J Immunol (1996), 156 (11): 4504-4513.

[7]. Han G., Haskell-Luevano C., Kendall L., Bonner G., Hadley M.E., Cone

R.D., Hruby V.J. De Novo Design, Synthesis, and Pharmacology of alpha-Melanocyte Stimulating Hormone Analogues Derived from Somatostatin by a Hybrid Approach Л J.Med.Chem. (2004); 47(6), 1514-1526.

[8]. Han G., Quillan J.M., Carlson K., Sadee W. and Hruby V.J. Design of novel

chimeric melanotropin- deltorphin analogues. Discovery of the first potent

human melanocortin 1 receptor antagonist.// J.Med.Chem. (2003); 46(5),810-819

[9]. Hruby V.J., Agnes R.S., Cai C.Z. Design of peptide agonists.// Methods

Enzymol. (2002); 343,73-91.

[10]. Grieco P., Balse P.M., Weinberg D., MacNeil T., Hruby V.J. D-amino acid

scan of gamma-melanocyte- stimulating hormone. Importance of Trp8 on human MC3 receptor selectivity.// J.Med.Chem. (2000); 43(26),4998-5002.

[11]. Juwadi P., Vunnam S., Merrifield R.B. Synthetic melittin, its enantio, retro,

and retroenantio isomers, and selected chimeric analogs. Their antibacterial, hemolytic, and lipid bilayer action.// J.Am.Chem.Soc. (1996); 118(38),8989-8997.

[12]. Vunnam S., Juwadi P., Rotondi K.S., Merrifield R.B. Synthesis and study

of normal, enantio, retro, and retroenantio isomers of cecropin A-melittin hybrids, their end group effects and selective enzyme inactivation.// J.Pept.Res. (1998); 51(1),38-44.

[13]. Alminana N., Grau-Oliete M.R., Reig F., Rivera- Fillat M.P. In vitro effects

of SIKVAV retro and retro- enantio analogues on tumor metastatic events J I Peptides (2004); 25(2),251-259.

[14]. Barton G.M., Medzhitov R. Toll-like receptors and their ligands.// Curr Top

Microbiol Immunol (2002); 270, 81-92.

[15]. Philpott D.J., Girardin S.E., Sansonetti, P.S. Innate immune responses of

epithelial cells following infection with bacterial pathogens.// Curr Opin Immunol. (2001); 13,410-416.

[16]. Inohara N., Ogura Y., Nunez, G. Nods:a family of cytosolic proteins that

regulate the host response to pathogens.// Curr Opin Microbiol. (2002); 5, 76-80.

[17]. Tschopp J., Martinon F, Burns K. Nalps: a novel protein family involved in

inflammation.// Nat Rev Mol Cell Biol. (2003); 4, 95-104.

[18]. Golovina T., Fattakhova G., Swiderek K., Makarov E., Bovin N., Shively J.,

Nesmeyanov V. Specific binding of glucosaminylmuramyl peptides to histories.// FEBS Letters. (1999), 454, 152-156.

[19]. Akashi-Takamura S, Miyake K. TLR accessory molecules.// Curr Opin

Immunol (2008); 20:420-5.

[20]. Kawai T., Akira S. TLR signaling.// Semin Immunol (2007); 19:24-32.

[21]. Takeda K., Kaisho T., Akira S. Toll-like receptors.// Annu Rev Immunol

(2003); 21:335-76.

[22]. Miyake K. Innate immune sensing of pathogens and danger signals by cell

surface Toll-like receptors.// Semin. Immunol. (2007) 19:3.

[23]. Akira S., Uematsu S., Takeuchi O. Pathogen recognition and innate

immunity.// Cell (2006); 124:783.

[24]. Hayashi F., Smith K.D., Ozinsky A., Hawn T.R., Yi E.C., Goodlett D.R.,

Eng J.K., Akira S., Underhill D.M., Aderem A. The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5.// Nature (2001); 410:1099-103.

[25]. Latz E., Schoenemeyer A., Visintin A., Fitzgerald K.A., Monks B.G.,

Knetter C.F., Lien E., Nilsen N.J., Espevik T., Golenbock D.T. TLR9 signals after translocating from the ER to CpG DNA in the lysosome.// Nat. Immunol (2004); 5:190-8.

[26]. Nishiya T., Kajita E., Miwa S., Defranco A.L. TLR3 and TLR7 are targeted

to the same intracellular compartments by distinct regulatoiy elements.// J. Biol. Chem. (2005); 280:37107.

[27]. Hemmi H., Kaisho T., Takeuchi O. et al. (2002) Small anti-viral compounds

activate immune cells via the TLR7 MyD88- dependent signaling pathway. Nat. Immunol. 3:196.

[28]. Heil F., Hemmi H., Hochrein H., Ampenberger F., Kirschning C., Akira S.,

Lipford G., Wagner H., Bauer S. Species-specific recognition of single-stranded RNA via toll-like receptor 7 and 8.// Science (2004); 303:1526-9.

[29]. Hemmi H., Takeuchi O., Kawai T., Kaisho T., Sato S., Sanjo H., Matsumoto

M., Hoshino K., Wagner H., Takeda K., Akira S. AToll-like receptor recognizes bacterial DNA.11 Nature (2000); 408:740-5.

[30]. Bekeredjian-Ding I., Doster A., Schiller M., Heyder P., Lorenz H.M.,

Schraven B., Bommhardt U., Heeg K. TLR9-activating DNA up-regulates ZAP70 via sustained PKB induction in IgM+ B cells.// J Immunol (2008); 181:8267-77.

[31]. Gerondakis S., Grumont R.J., Banerjee A. Regulating B-cell activation and

survival in response to TLR signals.// Immunol Cell Biol (2007); 85:471-5.

[32]. Richards S., Watanabe C., Santos L., Craxton A., Clark E.A. Regulation of

B-cell entry into the cell cyclq.H Immunol Rev (2008); 224:183-200.

[33]. Genestier L., Taillardet M., Mondiere P., Gheit H., Bella C., Defrance T.

TLR agonists selectively promote terminal plasma cell differentiation of B cell subsets specialized in thymus-independent responses.// J Immunol (2007); 178:7779-86.

[34]. Gururajan M., Jacob J., Pulendran B. Toll-like receptor expression and

responsiveness of distinct murine splenic and mucosal B-cell subsets.// PLoS ONE (2007); 2:e863.

[35]. Barr T.A., Brown S., Ryan G., Zhao J., Gray D. TLR-mediated stimulation

of APC: distinct cytokine responses of B cells and dendritic cells.// Eur J Immunol (2007); 37:3040-53.

[36]. Casrouge A., Zhang S.Y., Eidenschenk C., Jouanguy E., Puel A., Yang K.,

Alcais A., Picard C., Mahfoufi N., Nicolas N., Lorenzo L., Plancoulaine S., Sénéchal B., Geissmann F., Tabeta K., Hoebe K., Du X., Miller R.L., Héron B., Mignot C., de Villemeur T.B., Lebon P., Dulac O., Rozenberg F., Beutler B., Tardieu M., Abel L., Casanova J.L. Herpes simplex virus encephalitis in human UNC-93B deficiency.// Science (2006); 314:308-12.

[37]. Lutzker S., Rothman P., Pollock R., Coffman R., Alt F.W. Mitogen- and IL-

4-regulated expression of germ-line Ig gamma 2b transcripts: evidence for directed heavy chain class switching.// Cell (1988); 53:177-84.

[38]. Bekeredjian-Ding I.B., Wagner M., Hornung V., Giese T., Schnurr M.,

Endres S., Hartmann G. Plasmacytoid dendritic cells control TLR7 sensitivity of naive B cells via type IIFN.// J Immunol (2005); 174:404350.

[39]. Borsutzky S., Kretschmer K., Becker P.D., Muhlradt P.F., Kirschning C.J.,

Weiss S., Guzman C.A. The mucosal adjuvant macrophageactivating lipopeptide-2 directly stimulates B lymphocytes via the TLR2 without the need of accessory cells J! J Immunol (2005); 174:6308-13.

[40]. Bekeredjian-Ding I., Inamura S., Giese T., Moll H., Endres S., Sing A.,

Zahringer U., Hartmann G. Staphylococcus aureus protein A triggers T cell-independent B cell proliferation by sensitizing B cells for TLR2 ligands J IJ Immunol (2007); 178:2803-12.

[41]. Fairfax K.A., Corcoran L.M., Pridans C., Huntington N.D., Kallies A., Nutt

S.L., Tarlinton D.M. Different kinetics of blimp-1 induction in B cell subsets revealed by reporter gene.// J Immunol (2007); 178:4104-11.

[42]. Xu W., Santini P.A., Matthews A J., Chiu A., Plebani A., He B., Chen K.,

Cerutti A. Viral double-stranded RNA triggers Ig class switching by activating upper respiratory mucosa B cells through an innate TLR3 pathway involving BAFF.// J Immunol (2008); 181:276-87.

[43]. Hasan M., Lopez-Herrera G., Blomberg K.E., Lindvall J.M., Berglof A.,

Smith C.I., Vargas L. Defective Toll-like receptor 9-mediated cytokine production in B cells from Bruton's tyrosine kinasedeficient mice.// Immunology {2008); 123:239^49.

[44]. Hanten J.A., Vasilakos J.P., Riter C.L., Neys L., Lipson K.E., Alkan S.S.,

Birmachu W. Comparison of human B cell activation by TLR7 and TLR9 agonists.// BMC Immunol (2008); 9:39.

[45]. Choe J., Choi Y.S. IL-10 interrupts memory B cell expansion in the

germinal center by inducing differentiation into plasma cells.// Eur J Immunol (1998); 28:508-15.

H i

[46]. Kawai T., Akira S. Toll-like receptors and their crosstalk with other innate

receptors in infection and immunity;// Immunity (2011), vol. 34, no. 5, pp. 637-650.

[47]. Zarember K.A., Godowski P.J., Tissue expression of human Toll-like

receptors and differential regulation of Tolllike receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines.// Journal of Immunology (2002), vol. 168, no. 2, pp. 554-561.

[48]. Applequist S.E., Wallin R.P.A, Ljunggren H. G., Variable expression of

Toll-like receptor in murine innate and adaptive immune cell lines.// International Immunology (2002), vol. 14, no. 9, pp. 1065-1074.

[49]. Komai-Koma M., Jones L., Ogg G.S., Xu D., Liew F.Y., TLR2 is expressed

activated T cells as a costimulatory receptor.// Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (2004), vol. 101, no. 9, pp. 3029-3034.

[50]. Schnare M., Barton G.M., Holt A.C., Takeda K., Akira S., Medzhitov R.,

Toll-like receptors control activation of adaptive immune responses.// Nature Immunology (2001), vol. 2, no. 10, pp. 947-950.

[51]. Bauer S., Hangel D., Yu P., Immunobiology of toll-like receptors in allergic

disease.//Immunobiology (2007), vol. 212, no. 6, pp. 521-533.

[52]. Gaddis D.E., Michalek S.M., Katz J., TLR4 signaling via MyD88 and TRIF

differentially shape the CD4+ T cell response to Porphyromonas gingivalis hemagglutinin B.// Journal of Immunology (2011) vol. 186, no. 10, pp. 5772-5783.

[53]. Heiseke A.F., Faul A.C., Lehr H.A., Förster I., Schmid R.M., Krug A.B.,

Reindl W. CCL17 promotes intestinal inflammation in mice and counteracts regulatory T cellmediated protection fromcolitis.// Gastroenterology (2012), vol. 142, no. 2, pp. 335-345.

[54]. Sun J., Pearce E.J., Suppression of early IL-4 production underlies the

failure of CD4 T cells activated by TLR-stimulated dendritic cells to

differentiate into Th2 cells.// Journal of Immunology (2007), vol. 178, no. 3, pp.1635-1644.

Schmaler M., Jann N.J., Ferracin F., Landmann R., T and B cells are not required for clearing Staphylococcus aureus in systemic infection despite a strong TLR2-MyD88- dependent T cell activation.// Journal of Immunology (2011), vol. 186, no. 1, pp. 443-452.

Wenink M.H., Santegoets K.C., Broen J.C., van Bon L., Abdollahi-Roodsaz S., Popa C., Huijbens R., Remijn T., Lubberts E., van Riel P.L., van den Berg W.B., Radstake T.R. TLR2 promotes Th2/Thl7 responses via TLR4 and TLR7/8 by abrogating the Type IIFN amplification loop.// Journal of Immunology (2009), vol. 183, no. 11, pp. 6960-6970.

Pasare C., Medzhitov R., Toll pathway-dependent blockade of CD4+CD25+ T cell-mediated suppression by dendritic cells.// Science (2003), vol. 299, no. 5609, pp. 1033-1036.

Boonstra A., Asselin-Paturel C., Gilliet M., Crain C., Trinchieri G., Liu Y.J., O'Garra A. Flexibility of mouse classical and plasmacytoid-derived dendritic cells in directing T helper type 1 and 2 cell development: dependency on antigen dose and differential toll-like receptor ligation.// Journal of Experimental Medicine (2003), vol. 197, no. l,pp. 101-109.

Alonso M.N., Wong M.T., Zhang A.L., Winer D., Suhoski M.M., Tolentino L.L., Gaitan J., Davidson M.G., Kung T.H., Galel D.M., Nadeau K.C., Kim J., Utz P.J., Soderstrom K., Engleman E.G. T HI, T H2, and T H17 cells instruct monocytes to differentiate into specialized dendritic cell subsets.// Blood (2011), vol. 118, no. 12, pp. 3311-3320.

Lanier L.L., DAP10- and DAP12-associated receptors in innate immunity.// Immunological Reviews (2009), vol. 227, no. 1, pp. 150-160.

Salem M.L., Triggering of toll-like receptor signaling pathways in T cells contributes to the anti-tumor efficacy of T cell responses.// Immunology Letters (2011), vol. 137, no. 1-2, pp. 9-14.

[62]. Rahman A.H., Taylor D.K., Turka L.A., The contribution of direct TLR

signaling to T cell responses.// Immunologic Research (2009), vol. 45, no. l,pp. 25-36.

[63]. Sobek V., Birkner N., Falk I., Wurch A., Kirschning C.J., Wagner H.,

Wallich R., Lamers M.C., Simon M.M., Direct Toll-like receptor 2 mediated co-stimulation of T cells in the mouse system as a basis for chronic inflammatory joint disease.// Arthritis Research & Therapy (2004), vol. 6, no. 5, pp. R433-446.

[64]. Liu H., Komai-Koma M., Xu D., Liew F.Y., Toll-like receptor 2 signaling

modulates the functions of CD4+CD25+ regulatory T cells.// Proceedings of the National Academy of Sciences of USA (2006), vol. 103, no. 18, pp. 7048-7053.

[65]. Cottalorda A., Verschelde C., Marçais A., Tomkowiak M., Musette P.,

Uematsu S., Akira S., Marvel J., Bonnefoy-Berard N., TLR2 engagement on CD8 T cells lowers the threshold for optimal antigen-induced T cell activation.// European Journal of Immunology (2006), vol. 36, no. 7, pp. 1684-1693.

[66]. Mercier B.C., Cottalorda A., Coupet C.A., Marvel J., Bonnefoy-Bérard N.,

TLR2 engagement on CD8 T cells enables generation of functional memory cells in response to a suboptimal TCR signal.// Journal of Immunology (2009), vol. 182, no. 4, pp. 1860-1867.

[67]. Cottalorda A., Mercier B.C., Mbitikon-Kobo F.M., Arpin C., Teoh D.Y.,

McMichael A., Marvel J., Bonnefoy-Bérard N., TLR2 engagement on memory CD8+ T cells improves their cytokine-mediated proliferation and IFN-y secretion in the absence of Ag.// European Journal of Immunology (2009), vol. 39, no. 10, pp. 2673-2681.

[68]. Sutmuller R.P., den Brok M.H., Kramer M., Bennink E.J., Toonen L.W.,

Kullberg B.J., Joosten L.A., Akira S., Netea M.G., Adema G.J., Toll-like receptor 2 controls expansion and function of regulatory T cells.// Journal of Clinical Investigation (2006), vol. 116, no. 2, pp. 485-494.

[69]. Tsai Y.G., Yang K.D., Niu D.M., Chien J.W., Lin C.Y., TLR2 agonists

enhance CD8+Foxp3+ regulatory T cells and suppress Th2 immune responses during allergen immunotherapy.// Journal of Immunology (2010), vol. 184, no. 12, pp. 7229- 7237.

[70]. van Maren W.C., Nierkens S., Toonen L.W., Bolscher J.M.,. Sutmuller R. P.,

Adema G.J., Multifaceted effects of synthetic TLR2 ligand and Legionella pneumophilia on Treg-mediated suppression of T cell activation.// BMC Immunology (2011), vol. 12, article 23.

[71]. Caramalho I., Lopes-Carvalho T., Ostler D., Zelenay S., Haury M.,

Demengeot J., Regulatory T cells selectively express toll-like receptors and are activated by lipopolysaccharide.// Journal of Experimental Medicine (2003), vol. 197, no. 4, pp. 403-411.

[72]. Lewkowicz P., Lewkowicz N., Sasiak A., Tchorzewski M.,

Lipopolysaccharide-activated CD4+CD25+ T regulatory cells inhibit neutrophil function and promote their apoptosis and death.// Journal of Immunology (2006), vol. 177, no. 10, pp. 7155-7163.

[73]. Crellin N.K., Garcia R.V., Hadisfar O., Allan S.E., Steiner T.S., and Levings

M.K., Human CD4+ T cells express TLR5 and its ligand flagellin enhances the suppressive capacity and expression of FOXP3 in CD4+CD25+ T regulatory cells.// Journal of Immunology (2005), vol. 175, no. 12, pp. 8051-8059.

[74]. Kabelitz D., Expression and function of Toll-like receptors in T

lymphocytes.// Current Opinion in Immunology (2007), vol. 19, no. 1, pp. 39-45.

[75]. Peng G., Guo Z., Kiniwa Y., Voo K.S., Peng W., Fu T., Wang D.Y., Li Y.,

Wang H.Y., Wang R.F., Immunology: Toll-like receptor 8-mediated reversal of CD4+ regulatory T cell function.// Science (2005), vol. 309, no. 5739, pp. 1380-1384.

[76]. LaRosa D.F., Gelman A.E., Rahman A.H., Zhang J., Turka L.A., and Walsh

P.T., CpG DNA inhibits CD4+CD25+ Treg suppression through

directMyD88-dependent costimulation of effector CD4+ T-cells.// Immunology Letters (2007), vol. 108, no. 2, pp. 183-188.

[77]. Brandtzaeg P., Induction of secretory immunity and memory at mucosal

surfaces.// Vaccine (2007); 25:5467-84.

[78]. Guy B., The perfect mix: recent progress in adjuvant research.// Nat Rev

Microbiol (2007); 5:505-17.

[79]. Krieg A.M., Antiinfective applications of toll-like receptor 9 agonists.// Proc

Am Thorac Soc (2007); 4:289-94.

[80]. Pulendran B, Ahmed R. Translating innate immunity into immunological

memory: implications for vaccine development.// Cell(2006); 124:849-63.

[81]. Khan A.Q., Shen Y., Wu Z.Q., Wynn T.A., Snapper C.M. Endogenous pro-

and anti-inflammatory cytokines differentially regulate an in vivo humoral response to Streptococcus pneumoniaq.II Infect Immun ( 2002); 70:749-61.

[82]. Rubtsov A.V., Swanson C.L., Troy S., Strauch P., Pelanda R., Torres R.M.

TLR agonists promote marginal zone B cell activation and facilitate T-dependent IgM responses.// J Immunol (2008); 180:3882-8.

[83]. Inohara N., Ogura Y., Chen F.F., Muto A., Nunez G. Human Nodi confers

responsiveness to bacterial lipopoly saccharides.// J Biol Chem (2001);276:2551-2554.

[84]. Chamaillard M., Hashimoto M., Horie Y., Masumoto J., Qiu S., Saab L.,

Ogura Y., Kawasaki A., Fukase K., Kusumoto S., An essential role for NODI in host recognition of bacterial peptidoglycan containing diaminopimelic acid.// Nat Immunol (2003);4:702-707.

[85]. Girardin S.E., Boneca I.G., Carneiro L.A., Antignac A., Jehanno M., Viala

J., Tedin K., Taha M.K., Labigne A., Zahringer U., Nodi detects a unique muropeptide from gram-negative bacterial peptidoglycan.// Science (2003) ;300:1584—1587.

[86]. Inohara N., Koseki T., Lin J., del Peso L., Lucas P.C., Chen F.F., Ogura Y.,

Nunez G. An induced proximity model for NF-kappa B activation in the

Nodi/RICK and RIP signaling pathways.// J Biol Chem (2000);275:27823-27831.

[87]. Hsu Y.M., Zhang Y, You Y., Wang D., Li H., Duramad O., Qin X.F., Dong

C., Lin X. The adaptor protein CARD9 is required for innate immune responses to intracellular pathogens.// Nat Immunol (2007);8:198-205.

[88]. Kobayashi K.S., Chamaillard M., Ogura Y., Henegariu O., Inohara N.,

Nunez G., Flavell R.A. Nod2- dependent regulation of innate and adaptive immunity in the intestinal tract.// Science (2005);307:731- 734.

[89]. Kanneganti T.D., Lamkanfi M., Kim Y.G., Chen G., Park J.H., Franchi L.,

Vandenabeele P., Nunez G. Pannexin-1-mediated recognition of bacterial molecules activates the cryopyrin inflammasome independent of Toll-like receptor signaling.// Immunity (2007);26:433-443.

[90]. Strober W., Murray P.J., Kitani A., Watanabe T. Signalling pathways and

molecular interactions of NODI and NOD2.// Nat. Rev. Immunol. (2006) 6:9-20.

[91]. Hugot J.P., Chamaillard M., Zouali H., Lesage S., Cezard J.P., Belaiche J.,

Aimer S., Tysk C., O'Morain C.A., Gassull M., Binder V., Finkel Y., Cortot A., Modigliani R., Laurent-Puig P., Gower-Rousseau C., Macry J., Colombel J.F., Sahbatou M., Thomas G. Association of NOD2 leucine-rich repeat variants with susceptibility to Crohn's disease.// Nature (2001). 411:599-603.

[92]. Inohara N., Ogura Y., Fontalba A., Gutierrez O., Pons F., Crespo J., Fukase

K., Inamura S., Kusumoto S., Hashimoto M., Foster S.J., Moran A.P., Fernandez-Luna J.L., Nunez G. Host recognition of bacterial muramyl dipeptide mediated through NOD2. Implications for Crohn's disease.// J. Biol. Chem.{2003) 278:5509-5512.

[93]. Watanabe T., Kitani A., Murray P.J., Strober W. NOD2 is a negative

regulator of Toll-like receptor 2-mediated T helper type 1 responses.// Nat. Immunol. (2004) 5:800-808.

[94]. Bouma G., Strober W. The immunological and genetic basis of

inflammatory bowel disease.// Nat. Rev. Immunol. (2003) 3:521-533.

[95]. Barnich N., Aguirre J.E., Reinecker H.C., Xavier R., Podolsky D.K.

Membrane recruitment of NOD2 in intestinal epithelial cells is essential for nuclear factor-{kappa}B activation in muramyl dipeptide recognition.// J Cell Biol {2005); 170:21-26.

[96]. Lecine P., Esmiol S., Metais J.Y., Nicoletti C., Nourry C., McDonald C.,

Nunez G., Hugot J.P., Borg J.P., Ollendorff V. The NOD2-RICK complex signals from the plasma membrane.// J Biol Chem (2007);282:15197-15207.

[97]. Sabbah A., Chang T.H., Harnack R., Frohlich V., Tominaga K., Dube P.H.,

Xiang Y., Bose S. Activation of innate immune antiviral response by NOD2./1 Nat Immunol. (2009); 10(10): 1073-1080.

[98]. Martinon F., Hofmann K., Tschopp J. The pyrin domain: a possible member

of the death domain-fold family implicated in apoptosis and inflammation.// Curr. Biol. (2001) 11:R118-R120.

[99]. Martinon F., Burns K., Tschopp J. The inflammasome: a molecular platform

triggering activation of inflammatory caspases and processing of proIL-beta.// Mol. Cell. (2002) 10:417-426.

[100].Faustin B., Lartigue L., Bruey J.M., Luciano F., Sergienko E., Bailly-Maitre B., Volkmann N., Hanein D., Rouiller I., Reed J.C. Reconstituted NALP1 inflammasome reveals two-step mechanism of caspase-1 activation.// Mol. Cell.(2007) 25:713-724.

[101].Faustin B., Chen Y., Zhai D., Le Negrate G., Lartigue L., Satterthwait A., Reed J.C. Mechanism of Bcl-2 and Bcl-X(L) inhibition of NLRP1 inflammasome: loop domain-dependent suppression of ATP binding and oligomerization.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA.(2009) 106:3935-3940.

[102].Hsu L.C., Ali S.R., McGillivray S., Tseng P.H., Mariathasan S., Humke E.W., Eckmann L., Powell J.J., Nizet V., Dixit V.M., Karin M. A NOD2-NALP1 complex mediates caspase-1-dependent IL-lbeta secretion in

response to Bacillus anthracis infection and muramyl dipeptide.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2008) 105:7803-7808.

[103].Cario E. Bacterial interactions with cells of the intestinal mucosa: Toll-like receptors and NOD2.// Gut (2005);54:1182-1193.

[104]. Wistow G. Cold shock and DNA binding.// Nature (1990)344, 823-824.

[105].Wolffe A.P., Tafuri S., Ranjan M., Familari M. The Y-box factors: a family of nucleic acid binding proteins conserved from Escherichia coli to man.// New Biol (1992).4, 290-298.

[106].Kloks C.P., Spronk C.A., Lasonder E., Hoffmann A., Vuister G.W., Grzesiek S.,Hilbers C.W. The solution structure and DNA-binding properties of the cold-shock domain of the human Y-box protein YB-1.// J. Mol. Biol. (2002) 316, 317-326.

[107].Kohno K., Izumi H., Uchiumi T., Ashizuka M., Kuwano M. The pleiotropic functions of the Y-box-binding protein, YB-1.// Bioessays (2003) 25, 691698.

[108].Eliseeva I.A., Kim E.R., Guryanov S.G., Ovchinnikov L.P., Lyabin D.N. Y-box-binding protein 1 (YB-1) and its functions J/Biochemistry (Mosc)(20\\) Dec;76(13): 1402-33.

[109].0kamoto T., Izumi H., Imamura T., Takano H., Ise T., Uchiumi T., Kuwano M., Kohno K. Direct interaction of p53 with the Y-box binding protein, YB-1: a mechanism for regulation of human gene expression.// Oncogene (2000)19,6194-6202.

[110].Li W.W., Hsiung Y., Wong V., Galvin K., Zhou Y., Shi Y., Lee A.S. Suppression of grp78 core promoter element-mediated stress induction by the dbpA and dbpB (YB-1) cold shock domain proteins.// Mol. Cell. Biol. (1997) 17, 61-68.

[111].Higashi K., Inagaki Y., Fujimori K., Nakao A., Kaneko H., Nakatsuka I. Interferon-gamma interferes with transforming growth factor-beta signaling through direct interaction of YB-1 with Smad3.// J. Biol. Chem.( 2003a) 278, 43470^13479.

[112].Lasham A., Lindridge E., Rudert F., Onrust R., Watson J. Regulation of the human fas promoter by YB-1, Puralpha and AP-1 transcription factors.// Gene (2000) 252, 1-13.

[113]. Shnyreva M., Schullery D.S., Suzuki H., Higaki Y., Bomsztyk K. Interaction

of two multifunctional proteins. Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K and Y-box-binding protein.// J. Biol. Chem. (2000) 275, 15498-15503.

[114].Raffetseder U., Frye B., Rauen T., Jurchott K., Royer H.D., Jansen P.L., Mertens P.R. Splicing factor SRp30c interaction with Y-box protein-1 confers nuclear YB-1 shuttling and alternative splice site selection.// J. Biol. Chem.(2003) 278, 18241-18248.

[115].Matsumoto K., Wolffe A.P. Gene regulation by Y-box proteins: coupling control of transcription and translation.//7Ve«£/s Cell Biol. (1998) 8, 318— 323.

[116].Lu Z.H., Books J.T., Ley T.J. YB-1 is important for late-stage embryonic development, optimal cellular stress responses, and the prevention of premature senescence.// Mol. Cell. Biol. (2005) 25, 4625-4637.

[117].Schittek B., Psenner K., Sauer B., Meier F., Iftner T., Garbe C. The increased expression of Y box-binding protein 1 in melanoma stimulates proliferation and tumor invasion, antagonizes apoptosis and enhances chemoresistance.// Int. J. Cancer (2007) 120, 2110-2118.

[118].Bargou R.C., Jurchott K., Wagener C., Bergmann S., Metzner S., Bommert K., Mapara M.Y., Winzer K.J., Dietel M., Dorken B., Royer H.D. Nuclear localization and increased levels of transcription factor YB-1 in primary human breast cancers are associated with intrinsic MDR1 gene expression.// Nat. Med. (1997) 3,447-450.

[119].Basaki Y., Hosoi F., Oda Y., Fotovati A., Maruyama Y., Oie S., Ono M., Izumi H., Kohno K., Sakai K., Shimoyama T., Nishio K., Kuwano M. Akt-dependent nuclear localization of Y-box-binding protein 1 in acquisition of malignant characteristics by human ovarian cancer cells.// Oncogene (2007) 26, 2736-2746.

[120].Shibahara K., Sugio K., Osaki T., Uchiumi T., Maehara Y., Kohno K., Yasumoto K., Sugimachi K., Kuwano M. Nuclear expression of the Y-box binding protein, YB-1, as a novel marker of disease progression in non-small cell lung cancer.// Clin. Cancer Res. (2001) 7, 3151-3155.

[121]. Sutherland B.W., Kucab J., Wu J., Lee C., Cheang M.C., Yorida E., Turbin

D., Dedhar S., Nelson C., Pollak M., Leighton G.H., Miller K., Badve S., Huntsman D., Blake-Gilks C., Chen M., Pallen C.J., Dunn S.E. Akt phosphorylates the Y-box binding protein 1 at Serl02 located in the cold shock domain and affects the anchorage-independent growth of breast cancer cells.// Oncogene (2005) 24,4281-^1292.

[122].Raffetseder U., Liehn E.A., Weber C., Mertens P.R. Role of cold shock Y-box protein-1 in inflammation, atherosclerosis and organ transplant rejection.// Eur J Cell Biol. (2012);91(6-7):567-75.

[123].Capowski E.E., Esnault S., Bhattacharya S., Malter J.S. Y box-binding factor promotes eosinophil survival by stabilizing granulocyte-macrophage colonystimulating factor mRNA.// J. Immunol. (2001) 167, 5970-5976.

[124]. Stenina O.I., Poptic E.J., DiCorleto P.E. Thrombin activates a Y box-binding

protein (DNA-binding protein B) in endothelial cells.// J. Clin. Invest. (2000) 106, 579-587.

[125]. van Roeyen C.R., Eitner F., Martinkus S., Thieltges S.R., Ostendorf T.,

Bokemeyer D., Luscher B., Luscher-Firzlaff J.M., Floege J., Mertens P.R. Y-box protein 1 mediates PDGF-B effects in mesangioproliferative glomerular disease.// J. Am. Soc. Nephrol. (2005) 16,2985-2996.

[126].Liverman C.S., Kaftan H.A., Cui L., Hersperger S.G., Taboada E., Klein R.M., Berman N.E. Altered expression of pro-inflammatory and developmental genes in the fetal brain in a mouse model of maternal infection.// Neurosci. Lett. (2006) 399, 220-225.

[127].Frye B.C., Halfter S., Djudjaj S., Muehlenberg P., Weber S., Raffetseder U., En-Nia A., Knott H., Baron J.M., Dooley S., Bernhagen J., Mertens P.R.

Y-box protein-1 is actively secreted through a non-classical pathway and acts as an extracellular mitogen J/EMBO Rep. (2009) 10, 783-789.

[128].Nickel W. The mystery of nonclassical protein secretion. A current view on cargo proteins and potential export routes.// Eur. J. Biochem. (2003) 270, 2109-2119.

[129].Hassoun P.M., Mouthon L., Barbera J.A., Eddahibi S., Flores S.C., Grimminger F., Jones P.L., Maitland M.L., Michelakis E.D., Morrell N.W., Newman J.H., Rabinovitch M., Schermuly R., Stenmark K.R., Voelkel N.F., Yuan J.X., Humbert M. Inflammation, growth factors, and pulmonaiy vascular remodeling.// J. Am. Coll. Cardiol. (2009) 54, S10-S19.

[130].Coles L.S., Lambrusco L., Burrows J., Hunter J., Diamond P., Bert A.G., Vadas M.A., Goodall G.J. Phosphorylation of cold shock domain/Y-box proteins by ERK2 and GSK3beta and repression of the human VEGF promoter.// FEBSLett. (2005) 579, 5372-5378.

[131].MacDonald G.H., Itoh-Lindstrom Y., Ting J.P. The transcriptional regulatory protein, YB-1, promotes single-stranded regions in the DRA promoter.// J. Biol Chem. (1995) 270, 3527-3533.

[132].Ohmori M., Shimura H., Shimura Y., Kohn L.D. A Y-box protein is a suppressor factor that decreases thyrotropin receptor gene expression.// Mol. Endocrinol. (1996) 10, 76-89.

[133].Cavusoglu E., Eng C., Chopra V., Clark L.T., Pinsky D.J., Marmur J.D. Low plasma RANTES levels are an independent predictor of cardiac mortality in patients referred for coronary angiography.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. (2007) 27, 929-935.

[134]. Rothenbacher D., Muller-Scholze S., Herder C., Koenig W., Kolb H.

Differential expression of chemokines, risk of stable coronary heart disease, and correlation with established cardiovascular risk markers.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. (2006)26, 194-199.

[135].Zernecke A., Weber C. Chemokines in the vascular inflammatory response of atherosclerosis.// Cardiovasc. /?es.(2010) 86, 192-201.

[136].Huo Y., Schober A., Forlow S.B., Smith D.F., Hyman M.C., Jung S., Littman D.R., Weber C., Ley K. Circulating activated platelets exacerbate atherosclerosis in mice deficient in apolipoprotein E.// Nat. Med. (2003) 9, 61-67.

[137].von Hundelshausen P., Weber K.S., Huo Y., Proudfoot A.E., Nelson P.J., Ley K., Weber C. RANTES deposition by platelets triggers monocyte arrest on inflamed and atherosclerotic endothelium.// Circulation (2001) 103,1772-1777.

[138].Krohn R., Raffetseder U., Bot I., Zernecke A., Shagdarsuren E., Liehn E.A., van Santbrink P.J., Nelson P.J., Biessen E.A., Mertens P.R., Weber C. Y-box binding protein-1 controls CC chemokine ligand-5 (CCL5) expression in smooth muscle cells and contributes to neointima formation in atherosclerosis-prone mice.// Circulation (2007) 116, 1812-1820.

[139].Raffetseder U., Rauen T., Djudjaj S., Kretzler M., En-Nia A., Tacke F., Zimmermann H.W., Nelson P.J., Fiye B.C., Floege J., Stefanidis I., Weber C., Mertens P.R. Differential regulation of chemokine CCL5 expression in monocytes/macrophages and renal cells by Y-box protein-1.// Kidney Int. (2009) 75, 185-196.

[140].Mertens P.R., Alfonso-Jaume M.A., Steinmann K., Lovett D.H. A synergistic interaction of transcription factors AP2 and YB-1 regulates gelatinase A enhancer-dependent transcription.// J. Biol. Chem. (1998) 273,32957-32965.

[141].Miyamoto N.G., Medbeny P.S., Hesselgesser J., Boehlk S., Nelson P.J., Krensky A.M., Perez H.D. Interleukin-lbeta induction of the chemokine RANTES promoter in the human astrocytoma line CH235 requires both constitutive and inducible transcription factors.// J. Neuroimmunol. (2000) 105, 78-90.

[142].Raj G.V., Safak M., MacDonald G.H., Khalili K. Transcriptional regulation of human polyomavirus JC: evidence for a functional interaction between RelA (p65) and the Y-box-binding protein, YB-1.// J. Virol. (1996) 70, 5944-5953.

[143]. Goldsmith M. E., Madden M. J., Morrow C. S., Cowan K. H. A Y-box

consensus sequence is required for basal expression of the human multidrug resistance (mdrl) gene.// J. Biol. Chem. (1993) 268, 5856-5860

[144].Asakuno K., Kohno K., Uchiumi T., Kubo T., Sato S., Isono M., Kuwano M. Involvement of a DNA binding protein, MDR-NF1/YB-1, in human MDR1 gene expression by actinomycin D.// Biochem. Biophys. Res. Commun. (1994) 199, 1428-1435

[145].Ohga T., Uchiumi T., Makino Y., Koike K., Wada M., Kuwano M., Kohno K. Direct involvement of the Y-box binding protein YB-1 in genotoxic stress-induced activation of the human multidrug resistance 1 gene.// J. Biol. Chem.( 1998) 273, 5997-6000

[146]. Oda Y., Sakamoto A., Shinohara N., Ohga T., Uchiumi T., Kohno K.,

Tsuneyoshi M., Kuwano M., Iwamoto Y. Nuclear expression of YB-1 protein correlates with P-glycoprotein expression in human osteosarcoma.// Clin. Cancer Res. (1998) 4, 2273-2277

[147].Gessner C., Woischwill C.5 Schumacher A., Liebers U., Kuhn H., Stiehl P., Jurchott K., Royer H. D., Witt C., Wolff G. Nuclear YB-1 expression as a negative prognostic marker in nonsmall cell lung cancer.// Eur. Respir. J. (2004)23,14-19

[148]. Oda Y., Ohishi Y., Saito T., Hinoshita E., Uchiumi T., Kinukawa N.,

Iwamoto Y., Kohno K., Kuwano M., Tsuneyoshi M. Nuclear expression of Y-box-binding protein-1 correlates with P-glycoprotein and topoisomerase II a expression, and with poor prognosis in synovial sarcoma.// J. Pathol. (2003) 199, 251-258

[149]. Gimenez-Bonafe P., Fedoruk M.N., Whitmore T.G., Akbari M., Ralph J.L.,

Ettinger S., Gleave M.E., Nelson C.C. YB-1 is upregulated during prostate

cancer tumor progression and increases P-glycoprotein activity.// Prostate

(2004)59,337-349

[150].Chatterjee M., Rancso C., Stuhmer Т., Eckstein N., Andrulis M., Gerecke

C., Lorentz H., Royer H.D., Bargou R.C. The Y-box binding protein YB-1 is associated with progressive disease and mediates survival and drug resistance in multiple myeloma.// Blood (2008) 111, 3714-3722

[151].Lasham A., Moloney S., Hale Т., Homer C., Zhang Y.F., Murison J.G., Braithwaite A.W., Watson J. The Y-box-binding protein, YB1, is a potential negative regulator of the p53 tumor suppressor.// J. Biol. Chem. (2003)278,35516-35523

[152].Bergmann S., Royer-Pokora В., Fietze E., Jurchott K., Hildebrandt В., Trost

D., Leenders F., Claude J. C., Theuring F., Bargou R. YB-1 provokes breast cancer through the induction of chromosomal instability that emerges from mitotic failure and centrosome amplification.// Cancer Res

(2005). 65, 4078-4087

[153].Palmiter R.D. II Biochemistry (Wash.) (1974), 13, 3606

[154].Мареева Т.Ю., Котова O.B., Макаров E.A., Андронова Т.М., Несмеянов В.А. // Биоорганическая Химия. (1993). Т.19. С.555-561

[155]. Mo J., Boyle J.P., Howard С.В., Monie Т.Р., Davis B.K., Duncan J.A. Pathogen sensing by nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2 (NOD2) is mediated by direct binding to muramyl dipeptide and ATP Л J. Biol. Chem.(20\2); 287(27):23057-67.

[156].Laman A.G., Shepelyakovskaya A.O., Berezin I.A., Boziev K.M., Rodionov I.L., Brovko F.A., Chulina I.A., Malakhova G.V., Murashev A.N., Korpela Т.К., Nesmeyanov V.A. Identification of pentadecapeptide mimicking muramyl peptide.// Vaccine(2007) 25,2900-2906.

[157].Monzavi-Karbassi В., Cunto-Amesty G., Luo P., Kieber-Emmons T. Peptide mimotopes as surrogate antigens of carbohydrates in vaccine discovery.// Trends Biotechnol. (2002) May;20(5):207-214.

[158].Meshcheiyakova E., Makarov E., Philpott D., Andronova T., Ivanov V. Evidence for correlation between the intensities of adjuvant effects and NOD2 activation by monomeric, dimeric and lipophylic derivatives of N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl peptides.// Vaccine. (2007) 25(23):4515-4520

[159].Beynon V., Cotofana S., Brand S., Lohse P, Mair A, Wagner S, Mussack T, Ochsenkiihn T., Folwaczny M., Folwaczny C., Glas J., Torok H.P. NOD2/CARD15 genotype influences MDP-induced cytokine release and basal IL-12p40 levels in primary isolated peripheral blood monocytes.// Inflamm Bowel Dis. (2008) Aug; 14(8): 1033-40.

[160].Athie-Morales V., O'Connor G.M., Gardiner C.M. Activation of human NK cells by the bacterial pathogen-associated molecular pattern muramyl dipeptide.// J Immunol. (2008); 180(6):4082-4089.

[161]. Sullivan K.E., Peterlin B.M. Transcriptional enhancers in the HLA-DQ

subregion.// Mol Cell Biol (mi);7(9):3315-3319

[162].Dorn A., Durand B., Marfmg C., Lemeur M., Benoist C., Mathis D. Conserved major histocompatibility complex class II boxes~X and Y~are transcriptional control elements and specifically bind nuclear proteins.// Proc. Nail. Acad. Sci. USA (1987) 84, 6249-6253.

[163]. Boss J.M., Strominger J.L. Regulation of a transfected human class II major

histocompatibility complex gene in human fibroblasts.// Proc. Nail. Acad. Sci. £/£4(1986) 83, 9139-9143.

[164]. Sherman P.A., Basta P.V., Ting J.P. Upstream DNA sequences required for

tissue-specific expression of the HLA-DR alpha gene.// Proc. Nail. Acad. Sci. USA (1987) 84, 4254-4258.

[165].Miwa K., Doyle C., Strominger J.L. Sequence-specific interactions of nuclear factors with conserved sequences of human class II major histocompatibility complex genes J/ Proc. Nail. Acad. Sci. USA (1987) 84, 4939-4943.

[166].M Ladomery, J Sommerville. Binding of Y-box proteins to RNA: involvement of different protein domains.// Nucleic Acids Res. (1994) December 25; 22(25): 5582-5589.

[167]. Chernov K.G., Mechulam A., Popova N.V., Pastre D., Nadezhdina E.S.,

Skabkina O.V., Shanina N.A., Vasiliev V.D., Tarrade A., Melki J., Joshi V., Baconnais S., Toma F., Ovchinnikov L.P., Curmi P.A. YB-1 promotes microtubule assembly in vitro through interaction with tubulin and microtubules.// BMC Biochemistry (2008), 9:23: 1471-2091

[168].Evdokimova V., Ovchinnikov L.P., Sorensen P.H. Y-Box Binding Protein 1 Providing a New Angle on Translational Regulation.// Cell Cycle (2006) 5:11, 1143-1147

[169].Faustino N.A., Cooper T.A. Pre-mRNA splicing and human disease.// Genes Dev. (2003) 17:419-437

[170].Ulitin A.B., Kapralova M.V., Laman A.G., Shepelyakovskaya A.O., Bulgakova E.V., Fursova K.K., Abbasova S.G., Volkov S.K., Brovko F.A., Nesmeyanov V.A. The library of human miniantibodies in the phage display format: designing and testing.// Dokl. Biochem. Biophys (2005) 405, 437-440.

[171]. Ghosh S., Baltimore D. Activation in vitro of NF-kB by phosphorylation of

its inhibitor IkB.// Nature. (1990); 344(6267):678-82.

[172].Basseres D.S., Baldwin A.S. Nuclear factor-KB and inhibitor of kB kinase pathways in oncogenic initiation and progression.// Oncogene. (2006); 25(51):6817-30.

[173].Courtois G., Gilmore T.D. Mutations in the NF-kB signaling pathway: implications for human disease.// Oncogene. (2006); 25(51):6831-43.

[174]. Ghosh S., Karin M. Missing pieces in the NF-kB puzzle.// Cell. (2002);

109(Suppl):S81-96.

[175].Beinke S., Ley S.C. Functions of NF-kappaBl and NF-kappaB2 in immune cell biology.// Biochem. J. 2004. V. 382. P. 393^109.

[176].Hanssen L., Alidousty C., Djudjaj S., Frye B.C., Rauen T., Boor P., Mertens P.R., van Roeyen C.R., Tacke F., Heymann F., Tittel A.P., Koch A., Floege J., Ostendorf T., Raffetseder U. YB-1 is an early and central mediator of bacterial and sterile inflammation in vivo.// J Immunol. (2013) Sep 1;191(5):2604-13.