Усовершенствование методов выделения и идентификации Listeria monocytogenes тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Пискунов, Антон Валерьевич

• Пискунов, Антон Валерьевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Пискунов, Антон Валерьевич

Оглавление

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Экология л истерий

1.2. Распространение в природе

1.3. Листериоз как пищевая токсикоинфекция

1.4. Таксономия листерий

1.5. Культурально-морфологические свойства L. monocytogenes

1.6. Биохимические свойства листерий

1.7. Антигенная структура листерий

1.8. Патогенность листерий

1.9. Факторы патогенности листерий

1.10. Усовершенствованные и «быстрые» методы выделения и идентификации листерий

1.11. Использование ПЦР в диагностике листериоза27

1.12. Масс-спектрометрия как метод идентификации микроорганизмов

1.13. Заключение по обзору литературы

2. Собственные исследования

2.1. Материалы

2.1.1. Культуры (штаммы и изоляты) микроорганизмов

2.1.2. Питательные среды

2.1.3. Растворы и химреактивы

2.1.4. Краски для микроскопических исследований

2.1.5. Оборудование

2.1.6. Животные

2.2. Методы

2.2.1. Получение бактериальной массы

2.2.2. Методы определения культурально-морфологических свойств

2.2.3. Методы определения биохимических свойств

2.2.4. Определение концентрации живых микробных клеток

2.2.5. Методы определения чувствительности к антимикробным препаратам

2.2.6. Определение гемолитической и фосфолипазной активности

2.2.7. Определение патогенности штаммов и изолятов

2.2.8. Идентификация листерий в ПЦР-РВ

2.2.9. Идентификация листерий на масс-спектрометре MALDI

3. Результаты собственных исследований

3.1. Получение штаммов и изолятов листерий

3.2. Определение биологических свойств культур (штаммов и изолятов)

L. monocytogenes ylL. innocua

3.2.1. Тинкториальные свойства

3.2.2. Морфология колоний

3.2.3. Культуральные свойства листерий и определение подвижности

3.2.4. Биохимические свойства

3.2.5. Гемолитическая активность

3.2.6. Фосфолипазная активность

3.2.7. Патогенные свойства

3.2.8. Изучение чувствительности к антибактериальным препаратам

3.3. Оптимизация ПЦР-РВ для идентификации L. monocytogenes

3.4. Усовершенствование идентификации L. monocytogenes масс-спектрометрическим методом

4. Обсуждение результатов

5. Выводы

6. Практические предложения

7. Список литературы

8. Список сокращений

9. Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование методов выделения и идентификации Listeria monocytogenes»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы.

Listeria monocytogenes является причиной возникновения листериоза у животных и человека. В настоящее время данное заболевание все чаще регистрируется в виде пищевой токсикоинфекции. Это обусловлено повсеместным распространением листерий в природе, полиморфизмом клинических признаков болезни, высоким уровнем летальности при генерализированных формах инфекции, возрастающими объемами оборота кормов и пищевых продуктов (в частности продуктов быстрого питания). Учитывая способность листерий размножаться в готовых к употреблению пищевых продуктах, хранящихся в холодильниках при низких температурах (при +4°С), перерабатывающая и пищевая промышленность вынуждена расходовать огромные средства для предотвращения выпуска контаминированной продукции [19, 64].

Роль эпидемических вспышек возрастает в связи с потреблением пищевых продуктов, так 28 сентября 2011 г. произошла крупная вспышка пищевого листериоза в США, при которой было госпитализировано 90 человек, 13 человек погибло, источником заражения были дыни. 22 ноября 2012 года в 13 штатах и в округе Колумбия при вспышке пищевого листериоза заболело 20 человек, 4 из которых скончались. Источником заражения явился сыр «Рикотта», поступивший из Италии [110]. Снижение резистентности макроорганизма увеличивает риск возникновения пищевого листериоза [ 117, 163, 167].

Листериоз протекает наиболее тяжело у людей с первичными и вторичными иммунодефицитами, т.е. у беременных и новорожденных, пожилых людей, лиц, получающих стероидные препараты, иммунодепрессанты, злоупотребляющих алкоголем и наркотиками, ВИЧ-инфицированных [170, 217].

Работы по изучению листерий показывают, что L. monocytogenes адаптируется к факторам окружающей среды, особенно под воздействием

антропогенных факторов (применение антибиотиков, консервантов, дезинфицирующих средств и т.п.). Адаптация листерий выражается в изменении их биологических свойств. В основном адаптивные изменения проявляются невосприимчивостью к антибактериальным препаратам определенных групп, способностью образовывать биопленки, появлением авирулентных и слабовирулентных форм бактерий [35, 92, 93, 94, 183].

В РФ испытания пищевого сырья и пищевых продуктов на контаминацию L. monocytogenes проводят в соответствии с ГОСТ Р 519212002 бактериологическими методами, которые включают в себя выделение, идентификацию чистой культуры и постановку биопробы [5, 24]. За рубежом для идентификации бактерий вида L. monocytogenes, помимо классических методов, используют инструментальные методы идентификации [109, 202, 218,219].

Учитывая вышеизложенное, усовершенствование методов выделения и идентификации изолятов и штаммов L. monocytogenes, выделенных на территории РФ и за рубежом, имеет научное и практическое значение. Наша работа позволит дать качественную оценку циркуляции возбудителя пищевого листериоза, а усовершенствование методов выделения и идентификации листерий даст возможность выявлять возбудителя в пищевых продуктах и продуктах животного происхождения в кратчайшие сроки.

Цель и задачи исследований.

Основной целью данной работы являлось усовершенствование методов выделения и идентификации бактерий рода Listeria, в частности вида L. monocytogenes, полученных из различных пищевых продуктов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить культурально-морфологические и биохимические свойства референтных штаммов и изолятов L. monocytogenes и L. innocua при помощи традиционных бактериологических методов.

2. Охарактеризовать штаммы и изоляты по патогенности и

вирулентности на белых мышах.

3. Усовершенствовать схему выделения и идентификации L. monocytogenes из патологического материала и пищевых продуктов.

4. Оптимизировать метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для идентификации L. monocytogenes.

5. Создать базу данных для идентификации бактерий рода Listeria методом MALDI-TOF.

Научная новизна работы.

В результате проведенных исследований получено: 3 изолята L. monocytogenes и 5 изолятов L. innocua. Данные изоляты заложены в коллекцию бактериальных культур ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» референтной лаборатории болезней КРС, после изучения биологических свойств.

Изучены биологические свойства 14 референтных штаммов и 27 изолятов L. monocytogenes.

Усовершенствована схема выделения L. monocytogenes из патологического материала и пищевых продуктов.

Оптимизирована полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для идентификации L. monocytogenes.

Создана база данных для идентификации L. monocytogenes масс-спектрометрическим методом (MALDI Autoflex).

Практическая значимость работы.

В результате проведенных исследований разработаны «Методические рекомендации по выявлению генома L. monocytogenes в пищевых продуктах методом ПЦР-РВ», одобренные ученым советом и утвержденные директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» (протокол № 6, 28.06.13), и «Методические рекомендации по идентификации L. monocytogenes с применением масс-спектрометра Autoflex MALDI biotyper», одобренные ученым советом и утвержденные директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» (протокол № 6, 28.06.13).

В коллекцию бактериальных культур ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», референтной лаборатории болезней КРС, после изучения биологических свойств заложены следующие изоляты: L. monocytogenes «Ь-1», «Ь-2», «№608» и L. innocua «1-1», «1228» «1229», «1231», «1232».

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения биологических свойств 27 штаммов и изолятов L. monocytogenes, 14 референтных штаммов L. monocytogenes и 5 изолятов L. innocua;

- определение патогенности и вирулентности изолятов и референтных штаммов L. monocytogenes на белых мышах;

- оптимизация ПЦР-РВ для идентификации бактерий рода Listeria;

база данных для идентификации L. monocytogenes масс-спектрометр ическим методом.

Апробация результатов работы.

Основные материалы доложены и опубликованы в материалах научных конференций: «Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику», посвященной 30-летию создания СМУ ФГБУ «ВНИИЗЖ» (г. Владимир, 2010 г.), «Трансмиссивные заболевания животных: актуальные аспекты биобезопасности и контроля» (г. Алушта, Украина, 2012 г.), «Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику» (г. Владимир, 2012 г.), а также на заседаниях ученого совета ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 20092012 гг.

Публикации результатов научных исследований.

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ в журналах и материалах научных конференций, 3 из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Личный вклад аспиранта.

Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с Шадровой Н.Б., Спрыгиным А.В.,

Третьяковым А.В., Егоровой И.Ю., за что автор выражает им сердечную благодарность.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 134 страницах компьютерного текста и содержит разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения. Список литературы включает 226 источников: 86 отечественных и 140 зарубежных. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 20 таблицами. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную новизну и практическую значимость.

Благодарность.

Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории, химического анализа, референтной лаборатории болезней КРС, лаборатории микробиологии ФГБУ «ВНИИЗЖ» а также лаборатории бактериологии (ГНУ «ВНИИВВиМ», г. Покров) за оказание консультационно-методической помощи.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Экология листерий

Листерии - микроорганизмы, широко распространенные в природе. Их присутствие в почве, водных источниках и растениях доказано научными исследователями. По данным В.И. Гершуна способность листерий размножаться в почве зависит от сезона года (температуры), фитомассы (гумуса), влажности и показаний рН. В почве с влажностью 15 - 26 % листерии не размножаются и их концентрация со временем снижается. При 40%-ной влажности почвы концентрация листерий увеличивается в 7 - 11 раз, а при влажности 55 - 70 % их количество увеличивается в 100 - 400 раз по отношению к первоначальному показателю [7, 12, 19, 20].

Наличие листерий в фекалиях животных и человека вызывает загрязнение сточных и поверхностных вод, что способствует возникновению вспышек листериоза [45, 136]. Так одним из главных факторов передачи возбудителя является водный фактор N. Stamatin с соавторами (1957) выделяли культуру листерий из поймы реки, причем источником заражения являлось мясоперерабатывающее предприятие, расположенное выше по ее течению [9, 63, 72]. По данным американской группы исследователей, изучавших распространение листерий в эстуарных водах Калифорнии, листерии были обнаружены в 81% случаев в пресной и слабосоленой воде. Причем вид Listeria monocytogenes доминировал в пресной воде, к которой имели доступ домашние и с/х животные [164, 210].

Высокая метоболическая пластичность листерий обуславливает их способность переходить из окружающей среды, где они ведут сапрофитический образ жизни, в организм теплокровных, в котором они проявляют свои паразитарные свойства, и снова реверсировать к сапрофитизму при возврате в окружающую среду [73, 131].

Из городских сточных вод Н. Geuenich, U. Miiller (1984) изолировали 697 штаммов листерий, 84% из которых составляли L. monocytogenes. Наиболее зараженной оказались малорастворимая и нерастворимая части

сточных вод. Эти авторы установили, что при биологической очистке не происходит снижения количества листерий в них, а даже наоборот, отмечали их размножение. Авторы предполагали, что листерии при биологической очистке размножаются внутриклеточно в организмах простейших [45].

В воде при оптимальных условиях листерии сохраняют свою жизнеспособность до 730 дней. В искусственно «инфицированной» воде, в летний период при колебании температуры воды от 7 до 23 °С, листерии сохраняли жизнеспособность до 70 дней. В зимний период, при колебании температур от +2 до состояния «лёд» - более 5 месяцев [80].

Устойчивость листерий к физико-химическим факторам очень высока, так например, при умеренных и низких температурах в почве листерии сохраняются и размножаются в течение 3 месяцев. Летом, при температуре 26 - 32°С, листерии сохраняются в почве до 30 дней, в навозе - 20 и в навозной жиже - 27 дней. Листерии способны к размножению в широком диапазоне температур (от +4 до +45°С), рН (4,9 - 8,0) и влажности (40-70%), в присутствии неорганических солей, например, №С1 (до 20%), и углекислого газа (до 15%) [12, 55, 78].

1.2. Распространение в природе По данным И.И. Гуславского (1980) листерии выделены от 103 видов животного мира. Это свидетельствует о повсеместном распространении листерий на земном шаре [26].

Резервуаром возбудителя в природе являются многие виды диких и синантропных грызунов, дикие травоядные и птицы, домашние и сельскохозяйственные животные (свиньи, мелкий и крупный рогатый скот, лошади, кролики), а также домашняя и декоративная птица (гуси, куры, утки, индюшки, голуби, попугаи и канарейки). Листерии также обнаружены у зайцев, леммингов, бобров, белок, лисиц, норок, енотов, песцов, диких копытных и птиц, а также в рыбе и морепродуктах [55, 57]. Основными переносчиками листериоза в дикой природе являются иксодовые и гамазовые клещи, вши, блохи, а также личинки оводов. Резервуаром листерий также

могут служить земноводные и пресмыкающиеся. Случаи заболевания листериозом наблюдали у собак и обезьян [45].

Чаще всего листериозом болеет мелкий рогатый скот, в частности овцы. Например, в Германии из 497 выделенных патогенных штаммов листерий 462 (93%) были выделены от овец [45].

Широкое распространение возбудителя инфекции во внешней среде обусловлено разнообразием механизмов и факторов передачи возбудителя листериоза. В естественных условиях листерии проникают в организм человека и животных через желудочно-кишечный тракт, органы дыхания, глаза, слизистые оболочки, поврежденную кожу, а также плаценту [78].

1.3. Листериоз как пищевая токсикоинфекция Пищевой листериоз - это инфекционное заболевание животных и человека. Несмотря на относительно невысокую заболеваемость человека, случаи смертельных исходов у заболевших регистрируются часто, особенно у людей с пониженным иммунитетом - это беременные женщины, новорожденные и люди пожилого возраста. Летальность составляет до 80% [47]. Листериоз у людей проявляется в следующих клинических формах: аборты и мертворождения у беременных женщин, септицемия и менингоэнцефалиты у новорождённых детей, глазожелезистая и ангинозно-железистая формы у подростков, листериозный сепсис у новорождённых, ангины, менингоэнцефалиты, урогенитальная патология у взрослых. Доминирующим проявлением инфекционного состояния при пищевом листериозе является здоровое носительство [5, 40].

До 1960 г. пищевой листериоз человека был редкостью. В 1960—1982 гг. сообщалось уже о более чем 10 тыс. случаев у человека. Теперь ежегодно регистрируются тысячи заболевших. В 80—90-х годах прошлого века были описаны крупные вспышки у людей в странах Западной Европы (Франция, Великобритания, Швейцария, Финляндия) с числом заболевших от нескольких десятков до 300 человек [110, 146, 152, 155, 180, 182, 189, 218, 222]. Вспышки инфекции были связаны с употреблением продуктов

животного происхождения (мягкие сыры, мясные полуфабрикаты, колбасные изделия в вакуумной упаковке, сосиски, сливочное масло и др.), продукты быстрого питания (гамбургеры, «хот-доги»), растительного происхождения (овощные салаты, капуста), а также морепродуктов (моллюски, креветки). Основной причиной заражения является несоблюдения норм и правил тепловой обработки [120, 137, 138, 153].

Крупнейшей и наиболее известной является вспышка листериоза в 1985 г. в Лос-Анджелесе (США), связанная с употреблением в пищу сычужного мексиканского сыра, контаминированного Ь.топосу^епеБ серотипа 4Ь. Всего было выявлено 142 больных листериозом, из них 48 - со смертельным исходом, а 130 - с перинатальной и неонатальной патологией. Эта и другие вспышки, менее значительные по своим масштабам, но также с высокой летальностью исходов (20-44%), показали, что в самой технологии приготовления ряда продуктов содержится опасность контаминации листериями и их размножения до высоких концентраций [89, 210].

Р.К. Шарма (1999) обнаружил листерии в 42,4% образцах рыбы и морепродуктов на рынке в Южной Индии. Е.Ю. Дмитриева с соавт. (2001) при исследовании 75 проб рыбной продукции в торговой сети Санкт-Петербурга обнаружили содержание листерий в 39% случаев [85].

Значение пищевого пути передачи листериоза хорошо иллюстрируют данные Центров по контролю и профилактике заболеваний [108, 111, 137, 138] показавшие, что 11% всех продуктов, хранящихся в домашних холодильниках, контаминированы листериями. У 64% больных листериозом в холодильнике был найден, по меньшей мере, один продукт, контиминированный листериями. В 33% случаев выделенные от больных штаммы L.monocytogenes, а также из продуктов, хранившихся в холодильнике, имели идентичный молекулярно-генетический профиль при рестрикционном анализе пульс-электрофорезом. Наконец, более 30% спорадических случаев листериоза в США были связаны с хранившимися в

холодильнике мягкими сырами или полуфабрикатами мясных продуктов [198].

Группа исследователей под руководством М. Doyle (1987) изучала воздействие температурного фактора на устойчивость листерий в молоке. Исследователи выявили, что листерии обладают относительной терморезистентностью. При нагревании в диапазоне 71,7 - 73,9°С в течение 15 секунд листерии оставались жизнеспособны. Авторы пришли к выводу, что режим пастеризации не инактивирует листерии [129].

Значительная контаминация молочных и мясных продуктов листериями объясняет бактерионосительство, их относительно высокой устойчивостью к различным физическим и химическим факторам, применяющихся для консервации. В частности, С. Hart с соавт. (1991), исследуя влияние температуры хранения, аэробных и анаэробных условий на сохранность листерий в искусственно контаминированных куриных грудках, показали, что при температуре 1°С листерии не размножались в аэробных, так и в анаэробных условиях. При 6°С в аэробных условиях обнаружено 10-кратное, увеличение числа микроорганизмов. В атмосфере С02 при 6°С рост L. monocytogenes подавлялся, а при 15°С число микроорганизмов увеличилось в 100 раз. J. Caserlo с соавт. (1990) продемонстрировали выраженную устойчивость L. monocytogenes на поверхности и внутри многих образцов колбасных изделий. Этот микроорганизм находился в мясной эмульсии и не инактивировался в процессе тепловой обработки продукта [179].

Листерию часто обнаруживали в мягких сырах с красной слизью [103, 104, 145]. Механизм выживания листерий в этих продуктах объясняли тем, что в свежих рассольных сырах, в которых содержание NaCl ингибирует полезную антагонистическую микрофлору, создается благоприятная среда для накопления и роста листерий.

Ежегодно пищевой листериоз регистрируют в 40 странах мира, причём в Европе в среднем в 20-ти стран, в Азии в 6-ти, Австралии и Океании в 3-х,

Северной Америке в 6-ти, Южной Америке в 3-х, в Африке в 4-х странах [37, 85,91,97, 109, 117, 153, 155, 189].

1.4. Таксономия л истерий

По научной классификации листерии относятся к домену (царству) Bacteria, филуму (типу) Firmicutes, классу Bacilli (II класс -грамположительные эубактерии), порядку Bacillales, группе 19 необразующих спор грамположительных палочек правильной формы, семейству Listeriaceae, роду Listeria [60].

На сегодняшний день род Listeria включает в себя 6 различных видов листерий: L. monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L. welshimeri, L. innocua, L. grayi. L. grayi подразделяются в свою очередь на 2 подвида - L. grayi subs, grayi и L. grayi subs. Murray. L. ivanovii на 2 подвида L. ivanovii subs, ivanovii (рибоза-положительный) и L. ivanovi subs. londoniensis (рибоза-отрицательный) [6, 223].

L. monocytogenes является патогенной для животных и человека, L. ivanovii патогенна только для животных, в частности для мелкого рогатого скота.

Остальные четыре вида (L. seeligeri, L. welshimeri, L. innocua, L. grayi) являются апатогенными для животных и человека и широко распространены в природе [12, 143].

1.5. Культурально-морфологические свойства L. monocytogenes

L. monocytogenes представляет собой подвижную (наличие жгутиков от 1 до 5), неспорообразующую, полиморфную, грамположительную палочку с закругленными концами. Размеры ее колеблются по ширине от 0,3 до 0,5 мкм, по длине 0,5 - 2 мкм. И.А. [12].

Грамположительная окраска свойственна, как правило, молодым культурам листерий. В старых культурах (от 2 дней и старше) часть клеток теряет способность к сохранению красителя, легко обесцвечивается спиртом и окрашивается грамотрицательно. Начиная с 14 дня почти все клетки

окрашиваются грамотрицательно. Все листерии являются некислотоустойчивыми [12].

Листериям свойственна полиморфность: в зависимости от условий культивирования (температурного режима и состава среды) они способны принимать различную форму и величину. В культурах, выращенных при комнатной температуре, преобладают палочковидные формы, но при ограниченных условиях размножения (при температуре 4°С), в старых культурах, в патологическом материале обнаруживаются мелкие кокковидные и овоидные формы листерий.

Листерии обладают подвижностью при комнатной температуре (20-25°С), что является одним из дифференцирующих признаков последних от бактерий других родов. На подвижность влияет характер среды и значение рН.

Данные о капсулообразющей способности листерий разноречивы. Одни авторы считают, что L. monocytogenes не образует капсул, другими же авторами описывается феномен капсулообразования клетками листерий. С. В. Смит и Дж. Ф. Метцгер с использованием иммуноцитологических и электронно-микроскопических методов выявили капсульную структуру у листерий. Мукополисахаридная капсула листерий выглядела в виде непрерывного слоя вокруг клетки, размер и форма которой были постоянными [45, 206].

В мазках клетки обычно располагаются поодиночке, парами или в виде цепочек (3-5 клеток), могут образовывать V- образные структуры. В более зрелых и необработанных культурах могут встречаться формы в виде волокон длиной от 20 до 600 мкм [45].

Листерии относятся к числу микроорганизмов, культивирование которых не представляет особых трудностей. Для этих целей можно использовать широкий спектр питательных сред: мясопептонный агар и бульон, агар и бульон Хоттингера, кровяной агар, Колумбийский агар, селективную среду Агости-Оттавиани [24, 51, 105, 154, 186].

Морфология колоний у листерий не имеет каких-либо особенностей, позволяющих выделить их среди массы колоний других бактерий, патогенных и сапрофитных. В частности они имеют большое сходство с колониями энтерококков.

Культуры листерий растут в интервале температур от +3 до +38°С (особенно в присутствии небольших количеств глюкозы). Температурный оптимум 30-37°С, физиологическое развитие происходит при 18-20°С. При температуре +4°С (в условиях домашнего холодильника) L. monocytogenes растет, устраняя конкуренцию бактерий других видов, накапливаясь в огромных концентрациях, тем самым увеличивая риск заражения листериозом [8, 122, 179].

На твердых питательных средах при посеве листерии образуют сплошной тонкий голубоватый налет, иногда с трудом обнаруживаемый. Культуры имеют характерный запах молочной сыворотки, обусловленный накоплением продуктов углеводного обмена [24, 45].

На простых питательных средах при посеве штрихом после 24 - 48 -часового инкубирования образуются изолированные колонии диаметром 0,20,8 мм, ровные, точечные, полупрозрачные, голубовато-серые или бесцветные. В падающем свете серовато-молочные, слегка приподнятые, с мелкой текстурой поверхности и ровной кромкой. Больших размеров колонии достигают на средах с глюкозой. Через 5-10 суток четко очерченные колонии могут иметь диаметр 5 мм и больше. Также могут образоваться выпуклые колонии. Края которых круто поднимаются, верхушка колонии несколько заостренная или округлая (при 2-3-х дневном росте), поверхность шероховатая с белым, искрящимся и голубоватым оттенком, иногда имеющая вид граней или снежинок, цвет массы колоний серый или нежно-зеленоватый [56].

При культивировании на искусственных питательных средах происходит диссоциация листерий и превращение их из вирулентной S-формы в слабовирулентную R-форму, сопровождаясь снижением

гемолитической активности. Процесс преобразования S-формы в R-форму необратим [33, 39].

S-колонии гладкие, резко очерченные, выпуклые (позднее происходит их уплотнение с центральным возвышением), прозрачные. Со временем колонии несколько увеличиваются в размере, становятся более плоскими и приобретают сероватый оттенок. Колонии S-типа легко снимаются с агара. На кровяном агаре окружены зоной |3-гемолиза [49].

R-колонии шероховатые, грубые, с утолщенными зазубренными краями и возвышающейся грубозернистой массой, достигают 1,5-3 мм в диаметре, трудно снимаются с агара, микробные клетки из таких колоний чаще имеют вид нитей [49].

На мясопептонном бульоне рост листерий вызывает легкую опалесценцию или помутнение среды. При встряхивании наблюдают появление «муаровых волн». Через некоторое время (10-15дней) бульон в пробирке просветляется, а на дне образуется слизистый осадок, который при встряхивании поднимается косичкой. Эта косичка с трудом разбивается в равномерную муть.

При пересеве в МПБ клеток колоний R-форм в первые сутки роста наблюдают легкое помутнение бульона, а на поверхности бульона тонкую пленку. В дальнейшем на дне пробирки образуется крошковидный осадок.

На селективной среде Агости-Оттавиани листерии формируют блестящие, гладкие, ровные светло-зеленые колонии, диаметром 0,2 - 0,5 мм, с прокрашиванием среды и голубой зоной просветления вокруг колоний [186].

1.6. Биохимические свойства листерий

Бактерия L. monocytogenes является аэробным, микроаэрофильным, факультативно-анаэробным микроорганизмом. Все штаммы этого вида являются гомоферментативными. L. monocytogenes растет на средах, содержащих глюкозу, в аэробных условиях с образованием лактата, ацетата и ацетонина в качестве конечных продуктов. В виду отсутствия у листерий

протеолитических ферментов (в частности гиалуронидазы, плазмокоагулазы и фибринолизина), листерии используют для синтеза белков бактериальной клетки низкомолекулярные азотистые соединения - аминокислоты. Подтверждением отсутствия протеолитической активности служит неспособность листериями разжижать питательную желатину и гидролизовать казеин молока [33]. Катаболизм глюкозы происходит по метаболическому пути Эмбдена-Мейерхофа, как в аэробных, так и в анаэробных условиях [45]. У всех видов органическая кислота вырабатывается из амигдалина, целлобиозы, фруктозы, маннозы, салицина, мальтозы, декстрина и глицерина. У L. monocytogenes утилизация таких Сахаров как: галактоза, лактоза, сорбитол, крахмал, сахароза и трегалоза может происходить как с образованием органических кислот, так и без. Кислота не вырабатывается при разложения листериями адонитола, арабинозы, дульцитола, гликогена, инозитола, инулина, мелибиозы и сорбозы [33]. В процессе метаболизма листерий сероводород и индол не образуется, мочевину они гидролизируют в слабой степени. Тест восстановления нитратов до нитритов входит в общую схему идентификации листерий. Однако данные литературы о редукции нитратов листериями разноречивы. Некоторые авторы придерживаются мнения, что характерной эта реакция является только для представителей вида L. gray подвида тиггау [100, 128, 196].

Характерными для представителей вида L. monocytogenes являются следующие биохимические реакции: отсутствие гидролиза мочевины, отсутствие способности вырабатывать индол и оксидазу; наличие каталазной активности, способности гидролизовать гиппурит, редуцировать метиленовый синий, образовывать ацетоин из глюкозы [45, 79, 203]. L. monocytogenes ферментирует глюкозу, фруктозу, маннозу, левулезу, эскулин, трегалозу и салицин с образованием кислоты без газа через 24-48 ч инкубирования посевов [31, 33, 45].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Пискунов, Антон Валерьевич, 2013 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алимов A.M., Фаизов Т.Х. Биотехнологические аспекты повышения эффективности диагностики и профилактики инфекционных болезней животных // Материалы Международной научной конференции, посвящ. 125-летию КГАВМ. - Казань, 1998. - С. 11-12.

2. Анализ деятельности ЦГСЭН РФ по лабораторной диагностике листериоза / Э.Ф. Опочинский, Ю.В. Мохов, З.А. Лукина, A.A. Ясинский // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВиМ. - Покров. - 1999. - С. 61-64.

3. Анишулина A.B. Медицинская микробиология, учебное пособие. -Ростов-на-Дону: Феникс, 2003. -480 с.

4. Ашмарин И.П., Воробьёв A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180с.

5. Бакулов И. А. Бактериологический контроль пищевых продуктов на наличие листерий. - Ульяновск, 1999. - 22 с.

6. Бакулов И.А. К вопросу таксономии бактерий рода Listeria // Ветеринария. - 1983. - №7. - Р. 31-34.

7. Бакулов И.А. Л истерии в биологической системе почва-растение-животное-человек // Научное наследие Докучаева и современное земледелие М.,1992. - Т.2. - С. 245-250.

8. Бакулов И.А. Листерии обживают холодильник // Ветеринарная газета. - 1992.-№9.-С. 4.

9. Бакулов И.А. Основные вехи истории изучения листериоза животных и людей //Листериоз на рубеже тысячилетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВВиМ. - Покров, 1999. - С. 43^-7.

10. Бакулов И. А. Эпизоотология с микробиологией. - М.: Агропромиздат, 1987. -415 с.

11. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Биологический контроль пищевых продуктов на наличие листерий: методическое пособие.- Ульяновск, 1999.-36с.

12. Бакулов И. А., Васильев Д.А. Листериоз как пищевая токсикоинфекция: монография. - Ульяновск, 1991. - 78 с.

13. Бухарин О. В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1994. - №8. -Приложение. - С. 4-13.

14. Бухарин О. В. Персистенция патогенных бактерий: теория и практика // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 2000. - № 4. - Приложение. - С. 4-7.

15. Бухарин О. В., Усвецов Б. Я. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов // Теоретическая и прикладная иммунология: тез. докладов 1 Всесоюз. конф. - М., 1982. - С. 58-64.

16. Бэйнон Дж. Масс-спектрометрия и ее применение в органической химии. -М.: Мир, 1964. -701 с.

17. Васильев Д.А. Роль пищевых продуктов в распространении листериоза // Ветеринария. - 1992. - № 4. - С. 46 - 48.

18. Видоспецифическое выявление Listeria monocytogenes методом направленной амплификации ДНК / С.А. Ермолаева, Н.А. Зигангерова, Б.И. Маракуша [и др.] // Молекулярная генетика, микробиология, вирусология.-1994. -№1.- С. 26-30.

19. Гершун В. И. Распространение и жизнеспособность л истерии в объектах внешней среды и влияние температурного фактора на их

морфологические свойства // Вопросы природной очаговости болезней.-Алма-Ата, 1981. - Вып. 12. - С. 78-89.

20. Гершун В. И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге // Экология возбудителей сапронозов. - М., 1988. - С. 8085.

21. Гершун В.И. Листериоз сельскохозяйственных животных. - Алма-Ата: Кайнар, 1981.-96 с.

22. Гланц С. Медико-биологическая статистика. - М.: Практика, 1999. -

351 с.

23. ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия. - М., 1975.

24. ГОСТ Р 51921-2002. Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes. - М.: Госстандарт России, 2002,- 18 с.

25. ГОСТ Р 52833-2007. Метод полимеразной цепной реакции для определения патогенных микроорганизмов. Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. - М.: Стандартинформ, 2007. - 12 с.

26. Гуславский И.И. Эпизоотология листериоза в Алтайском крае // Нейроинфекции, М., 1980. 496 с.

27. Домарадский И.В. Некоторые проблемы адаптации патогенных бактерий в окружающей среде // Журн. микробиологии. - 1997. - № 4. - С. 31-35.

28. Ермолаева, С. А., Белый Ю. Ф., Тартаковский И. С. Изменение уровня экспрессии факторов вирулентности Listeria monocytogenes под влиянием внешних условий // Молекулярная генетика микробиология и вирусология. - 2000. -№1. - С. 17-19.

29. Ефимочкина Н.Р. Методы определения эмерджентных патогенных бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах // Молочная промышленность. - 2007. - № 3. - С. 38^2.

30. Ефимочкина Н.Р., Карликанова С.Н. Выделение L. monocytogenes из молока и молочных продуктов // Молочная промышленность. - 2004. - №5, -С. 36-38.

31. Зайцева Е. А., Ермолаева С. А., Сомов Г. П. Распространение Listeria monocytogenes среди мышевидных грызунов на территории приморского края // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2008. - № 2. - С. 65-69.

32. Итоги пятилетнего изучения листериоза на Украине / В.В. Красовский, Н.В. Васильев, Н.А. Деркач, С.И. Похил // Журн. микробиологии. - 2000. - №3. - С. 80-85.

33. Калишин Н. М. Листериоз крупного рогатого скота. - Л.: Колос., Ленингр. отд-ние, 1981. - С. 12.

34. Калмыкова М.С., Калмыков М.В., Белоусова Р.В. Основы полимеразной цепной реакции с разными форматами детекции: учебное пособие для ВУЗов. - СПб.: Лань, 2009. - 80 с.

35. Карпова Т.И., Ермолаева С.А., Лопырев И.В. Новые методы идентификации Listeria monocytogenes II Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2001. - № 3. - С. 266-273.

36. Клонирование и экспрессия фосфатидилиназитол - специфичной фосфолипазы С. L.monocytogenes / С.А. Ермолаева, Ю.Ф. Белый, И.С. Тартаковский [и др.] // Молекулярная генетика микробиология и вирусология. - 1995. - №1. - С. 3-10.

37. Книзе A.B., Бузун А.И. Эпизоотическая ситуация в странах мира и России // Листериоз на рубеже тысячилетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВВиМ. - Покров, 1999. - С. 118-123.

38. Колбасов, Д. В., Калабеков И. М., Цыбанова В. А. Генотипирование патогенных листерий, выделенных из рыбной продукции, методом RAPD-FINGERPRINT // Профилактика, диагностика, и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: материалы Международной научной конференции. - Ульяновск, 2006. - С. 102-104.

39. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.- СПб: Спец. Литература, 1998. - 592 с.

40. Котляров В.М. Проблема листериоза на рубеже тысячелетий // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВиМ. - Покров, 1999. - С. 48-52.

41. Котлярова Г. А. Биологические свойства L-форм Listeria monocytogenes: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.096 / Котлярова Галина Александровна. - Покров, 1970. - 20 с.

42. Краткий справочник ветеринарного врача / Н.Н.Алтухов [и др.]. -М.: Агропромиздат, 1990. - 574 с.

43. Лебедев А.Т. Масс-спектрометрия в органической химии. - М.: БИНОМ, Лаборатория знаний, 2003. - 493 с.

44. Леман Т.А., Берси М.М.. Спектрометрия ионного-циклотронного резонанса. - М.: Мир, 1980. - 215 с.

45. Листерии и листериоз: монография / А.В. Бакулов, Д.А. Васильев, Т.И. Кольпикова, [и др.]. Ульяновск: УГСХА, 2008. - 168 с.

46. Маккреди Б.Дж., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами // Молекулярная клиническая диагностика. Методы. - М., 1999. - С. 496-506.

47. Малеев В. В. Опасные инфекции: листериоз // Сестринское дело, 2000.-№4.-235 с.

48. Маненкова Г.М., Родина Л.В., Цвиль Л.А. Эпидемическая ситуация по листериозу в г. Москве // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных. - Покров, 2000. - С. 258-264.

49. Меньшикова 3. Н., Тищенко Е.В. Актуальные вопросы ветеринарной медицины: электронно - микроскопическая идентификация листерий - возбудителей пищевого листериоза, ФГОУ ВПО Уральская ГАВМ, 2005.

50. Методические рекомендации «Идентификация микроорганизмов с применением масс-спектрометра «microflex MALDI Biotyper» при исследовании продовольственного сырья и пищевых продуктов» / ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория, Россельхознадзор, 2011 г.

51. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах. МУК 4.2.1122-02.

52. Методы общей микробиологии в 3 т. Т. 1 / Ф. Герхард, Р.Г. Мюррей, Р.Н. Костилов [и др.] - М.: Мир, 1983. - 536 с.

53. Методы общей микробиологии в 3 т. Т. 3 / Ф. Герхард, Р.Г. Мюррей, Р.Н. Костилов [и др.]. - М.: Мир, 1983. - 264 с.

54. Микробиологические и вирусологические методы в ветеринарной медицине: справоч. пособие / А.Н. Головко, В.А. Ушкалов, В.Г. Скрыпник [и др.] - Харьков: ХТМТ, 2007. - 512 с.

55. Минаева, Н. Э., Ладный В. И. Микробиологические аспекты эпидемиологии листериоза // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВиМ. - Покров, 1999. - С. 137.

56. Москаленко В. Ф. Биологические свойства и патогенный потенциал листерий, циркулирующих в Украине // Провизор. -1998. - № 14. - С. 8-10.

57. Мухина Л.Б., Дмитриева Е.Ю., Аль Асбахин Н. Листерионосительство рыб в водоемах Северо-западного региона России // Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных: материалы международной конференции / ВНИИВВиМ. - Покров, 2002. -256 с.

58. Новые методы идентификации Listeria monocytogenes / Т. И. Карпова, С. А. Ермолаева, И. В. Лопырев [и др.] // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2001. - Т. 3, № 3. - С. 266273.

59. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: методические указания МУК 4.2.1890-04 // Клиническая микробиология, антимикробная химиотерапия. - 2004. - Т.6, № 4. - С. 306-359.

60. Определитель бактерий Берджи: в 2-х т. Т. 2: пер. с англ. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита [et al.]. - М.: Мир, 1997. - С. 573-577.

61. Пискунов А.В. Шадрова Н.Б. Прунтова О.В. Методические указания по «Идентификации Listeria monocytogenes с применением масс-спектрометра Autoflex III MALDI biytyper» / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2013.-26 с.

62. Покровский В.И., Годованный Б.А. Листериоз // Инфекционные болезни / под ред. В.Н. Покровского - М:, 1996. - С. 291-296.

63. Поманская Л.А. О размножении листерий в почве // Журнал микробиологии, .эпидемиологии и иммунологии. 1963. -№ 6. - С. 99-101.

64. Постовит В.А., Львов Д.К. Пищевые токсикоинфекции. - М.: Сокол, 1993.-68 с.

65. Прямое белковое профилирование для идентификации и типирования бактерий / В.А. Верещагин, Е.Н. Ильина, Т.В. Припутневич [и др.] // Тезисы научных работ IX Всерос. съезда дерматовенерологов. - М., 2005. - Т.2. - С. 40.

66. ПЦР с универсальными праймерами для изучения геномов / С.А. Булат, O.K. Кабоев, Н.В. Мироненко [и др.] // Генетика. - 1992. - №5. - С. 19-28.

67. Разработка и апробация метода полимеразной цепной реакции для детекции возбудителя листериозной инфекции / В.В. Красовский, С.И. Похил, А.П. Лиманский [и др.] // Клиническая лаб. диагностика. -2000. -№6. -С. 37-41.

68. Родина Л. В., Маненкова Г.М., Тимошков В.В. Факторы и пути заражения листериозом населения Москвы // Эпидемиология и инфекционные болезни, - 2002. - №4. - С. 48-50.

69. Родина Л.В., Маненкова Г.М., Цвиль Л.А. Эпидемическая ситуация по листериозу в Москве // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2000. - №6. - С. 15-18.

70. Сапенко Т.П. Механизмы и роль освобождения поверхностного белкаАс1А вовзаимодействии Listeria monocytogenes с эпителиальными клетками. - М.: НИИЭМим. Н.Ф. Гамалеи, 2006. - 102 с.

71. Современные подходы к идентификации листерий при производственном контроле ферментированных мясных продуктов/ Н.Р. Ефимочкина, С.А. Шевелева, И.М. Нитяга [и др.] // Вопросы питания. - 2005.

- № 2. - С. 39-45.

72. Сомов Г.П. Особенности экологии внеорганизменных популяций патогенных бактерий и их отражение в эпидемиологии инфекции/ Г.П.Сомов// Журнал микробиологии, .эпидемиологии и иммунологии. - 1997.

- № 5. - С. 12-15.

73. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных. Экологические аспекты бактерий. - Новосибирск: Наука, 1988. - С. 10, 2426,31.

74. Справочник ветеринарного врача / А.Ф Кузнецов [и др.]. - Москва: Лань, 2002. - 896 с.

75. Страчунский Л.С., Козлов С.Н. Антибиотики: клиническая фармакология. - Смоленск: АМИПРЕСС, 1994. - 208 с.

76. Суняйкин А.И. Методические рекомендации по комплексной оценке культур Listeria monocytogenes на основе изучения фенотипических и генетических характеристик» / ГНУ «ВВНИИВиМ». - Покров, 2010.

77. Тартаковский И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика // Клиническая микробиология, антимикробная химиотерапия. - 2000. - Т.2, №2. - С. 20-30.

78. Тартаковский И. С., Малеев В. В., Ермолаева С. А. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. - М.: Медицина для всех, 2002. - 200 с.

79. Триполитова А. А., Борисова Г. В. Листериоз. - Томск: Изд-во ТГУ, 1965.-260 с.

80. Фаги листерий и их практическое применение: учебное пособие / И.А. Бакулов, Т.И. Кольпикова, Д.А. Васильев [и др.] - Ульяновск, 1998. - 63 с.

81. Физические основы масс-спектрометрии (методы ионизации) / Башкирский филиал АН СССР. - Уфа, 1986.

82. Черкасский Б.Л. Инфекционные и паразитарные болезни человека. - М.: Медицинская газета, 1994. - 320 с.

83. Черкасский Б.Л. Пищевые зоонозы людей в России // Международный симпозиум «Пищевые зоонозы». - М., 1995. - С. 37—41.

84. Черкасский Б.Л. Теоретические аспекты проблемы надзора за пищевыми зоонозами // Международный симпозиум «Пищевые зоонозы». -М., 1995.-С. 30-36.

85. Шарма Р.К. Обнаружение листерии в продуктах морей и океанов // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВВиМ. - Покров, 1999. - С. 97-99.

86. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий / В. Ю. Литвин, А. Л. Гинцбург, В. И. Пушкарёва [и др.]. - М.: Фармарус-принт, 1998.

87. A new technique for isolating Listerellae from bovine brain / M.L. Gray, H.J. Stafseth, F. Thorp [et al.] //J. Bacteriol. - 1948. - Vol. 55. - P. 471-476.

88. A simple and Fast PCR protocol to detect Listeria monocytogenes from meat / M. Manzano, L. Cocolin, P. Ferroni [et al.] // J. Sci. Food and Agric. -1997.-Vol. 74.-P. 25-30.

89. Aguado V., Vitas A.I., Garcia-Jalon. I. Random amplified polymorphic DNA typing applied to the study of cross-contamination by Listeria monocytogenes in processed food products // J. Food Prot. - 2001. - Vol. 64. - P. 716-720.

90. Allerberger F. Listeria: growth, phenotypic differentiation and molecular microbiology // FEMS Immunol. Med. Microbiol. - 2003. - Vol. 35. - P. 183-189.

91. An outbreak of food-borne listeriosis due to cheese in Japan, during 2001 / S. Makino, K. Kawamoto, K. Takeshi [et al.] // Int. J. Food Microbiol. -2005.-Vol. 104.-P. 189-196.

92. Antimicrobal resistance of Listeria monocytogenes human strains isolated since 1926 in France / C. Morvan, A. Moubareck, M. Leclercq [et al.] // Lirvo de actas do congresso: ISOPOL XVII. - Porto, 2010. - P. 108.

93. Antimicrobal susceptibilities of Listeria monocytogenes isolated in Japan / S. Monden, A. Okutani, H. Suzuki [et al.] // Lirvo de actas do congresso: ISOPOL XVII. - Porto, 2010. - P. 73.

94. Antimicrobal susceptibility among Listeria monocytogenes isolates from non-human sources in France over a ten year period / S. A. Granier, C. Moubarek, C. Colaneri [et al.] // Lirvo de actas do congresso: ISOPOL XVII. - Porto, 2010. -P. 63.

95. Application of 5-nuclease PCR for quantitative detection of Listeria monocytogenes in pure cultures, water, skim milk, and unpasteurized whole milk / H.K. Nogva, K. Rudi, K. Materstad [et al.] // Appl. Envir. Microbiol. - 2000. -Vol. 66.-P. 4266^271.

96. Audurier A., Martin C. Phage typing of L. monocytogenes II Int. J. of Food Microbiology. - 1989. - Vol. 8. - P. 251-257.

97. Bacterial pathogens in fresh, smoked and salted Iranian fish / A.A. Basti, A. Misaghi, T.Z. Salehi [et al.]. - Food Control. - 2006. - Vol. 17. - P. 183-188.

98. Belyi Y.E. Intracellular parasitism of microorganisms. - Springer: Verlag Gmbh and Co. KG, 1996.

99. Belyi Y.F., Tartakovskii I.S., Mesheryakova I.S. Live tularemia vaccine confer protection against lethal Legionella and Listeria infection in experimental animals // FEMS Immunol. Med. Microbiol. - 1996. - Vol. 13.-P. 211-213.

100. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. - 9th ed. - Vol. 2./ P. H. A. Sneath, N. S. Mair, M. E. Holt J. G. Sharpe. - Baltimore: Williams & Wilkins, Co., 1986.-P. 1235-1245.

101. Bobo L.D. PCR Detection Chlamydia trachomatis II Diagnostic molecular microbiology. Principles and applications. - Washington, 1993. - P. 235-241.

102. Bokman R., Dicknete C., Bohne J. PrfA mediates specific binding of RNA polymerase of Listeria monocytogenes to PrfA-dependent virulence gene promoters resulting in a transcriptionally active complex // Molecular Microbiology. - 2000. - Vol. 36, №2. - P. 487^97.

103. Breer C., Schopfer K. Listeria and food // Lancet. - 1988. - P. 1022.

104. Breer C., Schopfer K. Listerien in Nahrungsmitteln // Schweiz. Med. Wochenschr. - 1989. - Bd. - 119. - S. 306-311.

105. Bremer P.J., Osborne C.M. Thermal-death times of Listeria monocytogenes in green shell mussels prepared for hot smoking // J. Food Prot. -1995.-Vol. 58.-P. 604-608.

106. Bustin S.A. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT-PCR): trends and problems // J. Molecular Endocrinology. - 2002. - Vol. 29. - P. 23-39.

107. Capacity of ivanolysin O to replace listerilysin O in phagosomal escape and in vivo survival of Listeria monocytogenes / C. Frehel, M. A. Lety, N. Autret [et al.] // Microbiology. - 2003. - Vol. 149, №3. - P. 611-620.

108. Center for Disease Control. Update: multistate outbreak of listeriosis -United States // Morb. Mortal. Wkly. Rep. - 1998. - Vol. 47. - P. 1085-1086.

109. Centers for Disease Control and Prevention. National enteric disease surveillance: Listeria annual summary, 2009 [cited 2012 Feb 13].

110. Centers for Disease Control and Prevention. National Outbreak Reporting System (NORS, Food), Washington, D.C. [cited 2012 Jan 20].

111. Centers for Disease Control. Update: multistate outbreak of listeriosis United States, 1998-1999 // Morb. Mortal. Wkly. Rep. - 1999. - Vol.47. - P. 1117-1118.

112. Characterization by DNA restriction endonuclease analysis of Listeria monocytogenes strains related to the Swiss epidemic of listeriosis / D. Nocera, E. Bannerman, J. Rocourt [et al.] // J Clin Microbiol. - 1990. - Vol. 28, №10. - P. 2259-2263.

113. Characterization of microorganisms and biomarker development from global ESI-MS/MS analyses of cell lysates / F. Xiang, G.A. Anderson, T.D. Veenstra [et al.] // Anal. Chem. - 2000. - Vol. 72. - P. 2475-2481.

114. Clinical presentation and outcame in cases of listeriosis / C. Pigrau, B. Almirante, A. Panissa [et al.] // Clin. Infec.Diseases. - 1993. - Vol. 17, No. 1. - P. 143-144.

115. Contre J.E. Manual of Antibiotics and Infectious Diseases. / J. 8th ed Includes bibliographical raferences and index. - NY: Williams and Wilkins, USA, 1995.-500 p.

116. Cooper R. F., Dennis, S. M., McMahon, K. J. Characterization of Listeria monocytogenes serotype 5 // Am. J. Vet. Res. - 1973. - Vol. 34. - P. 1093-1099.

117. Cordano A.M., Rocourt J. Occurrence of Listeria monocytogenes in food in Chile // Int. J. Food Microbiol. - 2001. - Vol. 70. - P. 175-178.

118. Cossart P. The listeriolysin O gene: a chromosomal locus crucial for the virulence of Listeria monocytogenes II Infection. - 1988. - Vol. 16. -. P. 157-159.

119. Cossart P., Kocks C. The actin-based motility of the facultative intracellular pathogen Listeria monocytogenes II Molecular Microbiol. - 1994. -Vol. 13.-P. 395-402.

120. Council Directive 92/46/EC of 16 June laying down the health rules for the production and placing on the market of raw-milk, heat-treated milk and milk-based products (OJ N L 268), 14.09.1992. - P. 1-31

121. Detection and differentiation of Listeria spp.be asingle reaction based on multiplex PCR / A. Bubert, I. Hein, M. Rauch [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 1999. - Vol. 65. - P. 4688 - 4692.

122. Detection of Escherichia coli 0157:H7 and Listeria monocytogenes in Beef Products by Real-Time Polymerase Chain Reaction / L.T. Nguyen, B.E. Gillespie, H.M. Nam, [et al.] // Foodborne Pathogenic and Disease. - 2004. - Vol. 1, №4. - P. 231-240.

123. Development of a multilocus sequence typing method for analysis of Listeria monocytogenes clones / C. Salcedo, L. Arreaza, B. Alcalá [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41. - P. 757-762.

124. Difference in virulence and in expression of PrfA and PrfA-regulated virulence genes of Listeria monocytogenes strains belonging to serogroup 4 / Z. Sokolovic, S. Schuller, J. Bohne [et al.] // Infection and Immunity. - 1996. - Vol. 64, №10.-P. 4008^019.

125. Differential interaction of the transcription factor PrfA and PrfA-activating factor (Paf) of Listeria monocytogenes in target sequences / C.

Dickneite, Bokman R, A. Spory [et al.] // Molecular Microbiology. - 1998. - Vol. 27, №5.-P. 915-928.

126. Differential roles of multiple signal peptidases in the virulence of Listeria monocytogenes / C. Bonnemain, C. Raynaud, H. Reglier-Poupet [et al.] // Mol. Microbiol. - 2004. - Vol. 51, №5.-P. 1251-1266.

127. Dirita V., Mekalanos J.J. Genetic regulation of bacterial virulence // Annu. Rev. Genet. - 1989. - Vol. 23. - P. 455-482.

128. DNA relatedness among serovars of Listeria monocytogenes sense lato / J. Rocourt, F. Grimont, P. A. D. Grimont [et al.] // Curr. Microbiol. - 1982. -Vol. 7.-P. 383 -388.

129. Doyle M.P., Schoeni J.L. Comparison of procedures for isolating Listeria monocytogenes in soft surfaceripened cheese // J. Food. Prot. - 1987. -Vol. 50. - P. 4-6.

130. Doyle M.P., Schoeni J.L. Selective-enrichment procedure for isolation of Listeria monocytogenes from fecal and biologic specimens // Appl. Environ. Microbiol. - 1986. - Vol. 51. - P. 1127-1129.

131. Ecology and transmission of Listeria monocytogenes infecting ruminants and in the farm environment / K.K. Nightingale, Y.H. Schukken, C.R. Nightingale [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2004. - Vol. 70. - P. 44584467.

132. Ermolaeva S., Belyi Y., Tartakovskii I. / Change of level of an expression of factors of a virulentnost of Listeria monocytogenes under the influence of external conditions // FEMS Microbiol. Lett. - 1999. - Vol. 174. - P. 137-141.

133. Evidence that PrfA, the pleiotropic activator of virulence genes Listeria monocytogenes, can be present but inactive / A. Renzoni, A. Klarsfeld, S. Dramsi, P. Cossart // Infection Immunology. - 1997. - Vol. 65, №4. - P. 1515-1518.

134. Extending ribosomal protein identifications to unsequenced bacterial strains using matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry / M. J. Suh, D. M. Hamburg, S. T. Gregory [et al.] // Proteomics. - 2005. - Vol. 5. - P. 4818-4831.

135. Farber J.M., Peterkin P.I. Listeria monocytogenes, a food borne parasite // Microbiol Rev. - 1991. - Vol. 55. - P. 476-511.

136. Febrile gastroenteritidis after eating on-farm manufactured fresh cheese - an outbreak of listeriosis / J. J. Carrique-Mass, I. Hokeberg, V. Andersson [et al.] // Epidemiol. Infect. - 2003. - Vol. 130, №1. - P. 79-86.

137. Final Assesment Report Proposal P239 Listeria - Risk Assesment and Risk Managment Strategy, Food Standart, 2002. - P. 1-131.

138. Food Safety and Inspection Service (FSIS), 2001. Controlling Listeria monocytogenes in Small and Very Small Meat and Poultry Plants. United States Department of Agriculture, Washington, DC. 20250-3700.

139. Food-related illness and death in the United States / P.S. Mead, L. Slutsfeer, V. Dietz [et al] // Emerging Infect. Dis. - 1999. - №. 5. - P. 607-626.

140. Freitag N. E., Rong L., Portnoy D. Regulation of prfA transcriptional activator of Listeria monocyogenes: multiple promoter elemens contribute to intracellular growth and cell-to-cell spead // Infect. Immun. — 1993. - Vol. 61. - P. 2537-2544.

141. Functional similarities between the Listeria monocytogenes virulence regulator PrfA and cyclic AMP receptor protein: the PrfA (Gly 145 Ser) mutation increases binding affinity for target DNA / Y. Vega, C. Dickneite, M-T Ripio [et al.] // J. of Bacteriology. - 1998. - Vol. 180, №24. - P. 6655-6660.

142. Gasanov U., Hughes D., Hansbro P.M. Methods for the isolation and identification of Listeria spp. and Listeria monocytogenes: a review // FEMS Microbiol. Rev. - 2005. - Vol. 29. - P. 851-875.

143. Gellin B.G., Broome C.V. Listeriosis // JAMA. - 1989. - Vol. 261. - P. 1313-1320.

144. Gierowska-Bogusz B., Nowicka K., Drejewicz H. Clinical and laboratory diagnosis of Listeria monocytogenes on the basis of own investigations // Med. Wieku Rozwoj. - 2000. - Vol. 4, №2. Suppl. 3. - P. 89-96.

145. Greenwood M.H., Roberts D., Burden P. The occurrence of Listeria species in milk and dairy products: a national survey in England and Wales // Int. J. Food Microbiol. - 1991. -№12. - P. 197-206.

146. Health Protection Agency. The changing epidemiology of listeriosis in England and Wales. Commun Dis Rep CDR Wkly, 2005. - Vol. 15. - P. 1-38.

147. High definition differential ion mobility spectrometry with resolving power up to 500 / A.A. Shvartsburg, G.A. Anderson; W.F. Danielson [et al.] // J. of the American Society for Mass Spectrometry. - 2013. - Vol. 24, №1. - P. 109114.

148. High sensitivity analyte capture with desorption/ionization mass spectrometry on silylated porous silicon / S.A. Trauger, E.P. Go, Z. Shen [et al.] // J. Anal. Chem. - 2004. - Vol. 76. - P. 4484-4489.

149. High temperature short-time pasteurization inactivates Listeria monocytogenes / Y. Lovett, J.V. Wesley, M.Y. Vandermaaten [et al.] // J.Food. Prot. - 1990. - Vol. 53. - P. 734-738.

150. High-resolution genotyping of Listeria monocytogenes by fluorescent amplified fragment length polymorphism analysis compared to pulsed-filed gel electrophoresis, random amplified polymorphic DNA analysis, ribotyping and PCR-restriction fragment length polymorphism analysis / B. Fonnesbech Vogel, V. Fussing, B. Ojeniyi [et al.] // J. Food Prot. - 2004. - Vol. 67. - P. 1656-1665.

151. Hitchins A.D. FDA Bacteriological Analytical Manual, Listeria monocytogenes. - 8 th ed. AOAC International. - Gaithersburg, MD, 1995.

152. Incidence of Listeria monocytogenes in different food products commercialized in Portugal / C. Mena, G. Almeida, L. Carneiro [et al.] // Food Microbiol. - 2004. - Vol. 21. - P. 213-216.

153. Incidence of Listeria monocytogenes in raw seafood products in Japanese retail stores / S. Handa, B. Kimura, H. Takahashi [et al.] // J. Food Prot. -2005.-Vol. 68.-P. 411-415.

154. Irradiation inactivation of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus in low and high fat, frozen refrigerated ground beef / J.D. Monk, R.S. Clavero, L.R. Beuchat [et al.] // J. Food Prot. - 1994. - Vol. 57. - P. 969-974.

155. Jemmi T., Pak S., Salman M.S. Prevalence and risk factors for contamination with Listeria monocytogenes of imported and exported meat and fish products in Switzerland, 1992-2000 // Prev. Vet. Med. - 2002. - Vol. 54. - P. 25-36.

156. Karas M., Bachmann D., Hillencamp F. Metastable decay of laser-desorbed ions from aromatic organic compounds // Anal. Chem. - 1985. - Vol. 57. -P. 2935.

157. Karas M., Gluckmann M., Schafer J. Ionization in matrix-assisted laser desorption/ionization: singly charged molecular ions are the lucky survivors // J. Mass. Spectrom., 2000. - Vol. 35. - P. 1-12.

158. Karas M., Hillencamp F. 2,5-Dihydroxybenzoic acid: a new matrix for laser desorption—ionization mass spectrometry // Anal. Chem. - 1991. - Vol. 111. -P. 89-102.

159. Kathariou S. Listeria monocytogenes virulence and pathogenicity, a food safety perspective //J. Food Prot. - 2002. - Vol. 65. - P. 1811-1829.

160. Kaufmann R., Kirsch D., Spengler B. Sequenching of peptides in a time-of-flight mass spectrometer: evaluation of post source decay following matrix-assisted laser desorption ionisation (MALDI) // International Journal of

Mass Spectrometry and Ion Processes. - 1994. - Volume 131. - №24. - P. 355385.

161. Laser microprobe mass spectrometry: applications to structural analysis / D.M. Hercules, R.J. Day, K. Balasanmugam [et al.] // Anal. Chem. - 1982. - Vol. 54. - P. 280A.

162. Lee W.H, McClain D. Improved Listeria monocytogenes selective agar // Appl. Environ. Microbiol. - 1986. - Vol. 52, №5. - P. 1215-1217.

163. Listeria monocytogenes and listeriosis: a review of hazard characterization for use in microbiological risk assessment of foods / J. McLauchlin, R.T. Mitchell, W.J. Smerdon [et al.] // Int. J. Food Microbiol. - 2004. -Vol. 92.-P. 15-33.

164. Listeria monocytogenes and severe newborn respiratory failure supported with extracorporeal membrane oxygenation / R.B. Hirsch, M. Batler, C.E. Coburn [et al.] // Arch Pediatr Adolesc Med. - 1994. - Vol.148, №5. - P. 513-517.

165. Listeria monocytogenes CAMP reaction / Y.A. Vazguez-Boland, L. Dominguez, Y.F. Fernandez-Garayzabal, G. Suarez // Clin Microbiol. Rev. - 1992. -Vol. 5.-P. 343.

166. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants / J.A. Vazquez-Boland, M. Kuhn, P. Berche [et al.] // Clin. Microbiol. Rev. - 2001. -Vol.14.-P. 584-640.

167. Listeria species in a California coast estuarine environment / K.G. Colburn, C.A. Kaysner, C. Jr.Abeyta [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 1990. -Vol. 56.-P. 2007-2011.

i

168. Listeria species in domestic environments / R.R. Beumer, M.E. Tegiffel, E. Spoorenberg and F.M. Rombouts // Epidemiology and Infection. -1996.-Vol. 117, №3. - P. 437-442.

169. Listeriolysin O is essential for virulence of Listeria monocytogenes: direct evidence obtained by gene complementation / P. Cossart, M.F. Vicente, J. Mengaud, [et al.] // J. Infect Immun. - 1989. - Vol. 57, № 11. - P. 3629-3636.

170. Liver abscess due to Listeria monocytogenes: case report and review / T.I. Braun, D. Travis, R.R. Dee [et al.] // Clin. Infect. Dis. - 1993. - Vol. 17. - P. 267-269.

171. Lovett Y. Isolation and identification of Listeria monocytogenes in dairy products // J.Assoc. Off.Anal.Chem. - 1988. - Vol. 71. - P. 658-660.

172. Lovett Y., Francis D.W., Hunt Y.M. Listeria monocytogenes in raw milk: detection, incidence, and patogenicity // J.Food Prot. - 1987. - Vol. 50. - P. 188-192.

173. Low-virulence field Listeria monocytogenes strains belong to four phenotypic groups / S. M. Roche, P. Gracieux, I. Albert, P. Velge // XV International Symposium on Problems of Listeriosis. - Uppsala, Sweden, 2004. -P. 12-15.

174. MALDI MS. A practical guide to instrumentation, methods and applications / F. Hillencamp, J. P. Katalinic (Eds) // Wiley, 2007. - 346 p.

175. Matrix-assisted ultraviolet laser desorption of non-volatile compounds / M. Karas, D. Bachmann, U. Bahr, F. Hillencamp // Int. J. Mass Spectrometry and Ion Processes - 1987. Vol. 78. - P. 53.

176. Maturation of lipoproteins by type II signal peptidase is required for phagosomal escape of Listeria monocytogenes / H. Reglier-Poupet, C. Frehel, I. Dubail [et al.] // J. Biol Chem. - 2003. - Vol. 278, № 49. - P. 49469-49477.

177. McDonough M., Kew O., Heirholzer J. PCR detection of human adenoviruses // Diagnostic Molecular Microbiology. Principles and Applications. -Washington, 1993. - P. 389-393.

178. Mekalanos J.J. Environmental signals controlling expression of virulence determinants in bacteria // J. Bacteriol. - 1992. - Vol. 174. - P. 1-7.

179. Miller A.J., Bayles D.O., Eblen B.S. Cold shock induction of thermal sensitivity in Listeria monocytogenes II Appl. Environ. Microbiol. - 2000. - Vol. 66.-P. 4345^350.

180. Multistate outbreak of Listeria monocytogenes infection linked to delicatessen turkey meat / S.J. Olsen, M. Patrick, S.B.Hunter [et al.] // Clin. Infect. Dis. - 2005. - Vol. 40, №7. - P. 962-967.

181. Mylonakis E., Hohmann E.L., Calderwood S.B. Central nervous system infection with Listeria monocytogenes. 33 years experience at a general hospital and review of 776 episodes from the literature // Medicine (Baltimore). - 1998. -Vol. 77, №5.-P. 313-336.

182. Nationwide outbreak of listeriosis due to contaminated meat / P.S. Mead, E.F. Dunne, L.M. Graves [et al.] // Epidemiol Infect. - 2006. - Vol.134. - P. 744-751.

183. Non-hemolytic and hypovirulent Listeria monocytogenes became haemolytic and virulent after passage through mice /1. Secic, T. Lindback, L. M. Rorvik // Lirvo de actas do congresso: ISOPOL XVII. - Porto, 2010. - P. 102.

184. On-line dual microdialysis with ESI-MS for direct analysis of complex biological samples and microorganism lysates / E.C. Lui, S.A. Hofstadler, J.A. Bresson [et al.] //Anal. Chem.. - 1998. - Vol. 70. - P. 1797 - 1801.

185. Optical detection and charge-state analysis of MALDI-generated particles with molecular masses larger than 5 Mda / Y. Cai, W.P. Peng, S.J. Cuo [et al.] // J. Anal. Chem. - 2002. - Vol. 74. - P. 4434^441.

186. Ottaviani F., Ottaviani M., Agosti M. Differential agar medium for Listeria monocytogenes II Quinper Froid Symposium Proceedings. - Quinper, June, A.D.R.I.A. -1997. - P. 16-18.

187. Partnoy D.A. Innate immunity to a facultative intracellular bacterial pathogen // Curr. Opn. Immunol. - 1992. - №4. - P. 20-24.

188. Patogenicity island and virulence evolution in Listeria / Y.A. Vazguez-Boland, G. Dominguez-Bernal, B. Gonzalez-Zorn [et al.] // Microb. Int. - 2001. -№3. - P. 571-584.

189. Prevalence and typing of Listeria monocytogenes in ready-to-eat food products on the Belgian market / E. van Coillie, H. Werbrouck, M. Heyndrickx [et al.] // J. Food Prot. - 2004. - Vol. 67. - P. 2480-2487.

190. Proteome analysis of serovars Typhimurium and Pullorum of Salmonella enteric subspecies I. / V. Encheva, R. Wait, S.E. Gharbia [et al.] // Microbiology. - 2005. - Vol. 5. - P. 42.

191. Quantification of gene expression of Listeria monocytogenes by realtime reverse transcription PCR: optimization, evaluation and pitfalls / H. Werbrouck, N. Botteldoom, M. Uyttendaele [et al.] // J. of Microbiological Methods. - 2007. - Vol. 69. - P. 306-314.

192. Rainis T., Potasman I. Listeria monocytogenes infections— ten years'expirience // Harefiiah - 1999. - Vol. 137, №10. - P. 436-440.

193. Random amplification of polymorphic bacterial DNA: evaluation of 11 oligonucleotides and application to food contaminated with Listeria monocytogenes / C. Niederhauser, C. Hofelein, M. Allman [et al.] // J. Appl. Bacteriol. - 1994. - Vol. 77. - P. 574-582.

194. Rapid quantitative detection of Listeria monocytogenes in salmon products: evaluation of pre-real-time PCR strategies / D. Rodríguez-Lázaro, A. Jofré, T. Aymerich [et al.] // J. Food Prot. - 2005. - Vol. 68. - P. 1467-1471.

195. Repetitive element sequence-based PCR for species and strain discrimination in the genus Listeria / B. Jersek, E. Tcherneva, N. Rijpens, L. Herman // Lett. Appl. Microbiol. - 1996. - Vol. 23. - P 55-60.

196. Rocourt J. The genus Listeria and Listeria monocytogenes: phylogenetic position, taxonomy, and identification // Listeria, Listeriosis and Food Safety / J. Rocourt, E. T. Ryser, E. H. Marth (Eds). - 2nd ed. - NY, 1999. -P. 1-20.

197. Rocourt J., Jacguet C., Reilly A. Epidemiology of human listeriosis and seafoods // Int. J. Food Microbiol. - 2000. - Vol. 62, №3. - P. 197-209.

198. Role of food in sporadic listeriosis. Case-controle study of dietry risk factors / A. Schuchat, K.A. Dearez, I. Wonger [et al.] // JAMA. - 1992. - Vol. 267. -P. 2041-2045.

199. Rouquette C., Berche P. The pathogenesis of infection by Listeria monocytogenes II Microbiology. - 1996. - Vol. 12, No.2. - P. 245-258.

200. Ryzhov V., Fenselau C. Characterization of the protein subset desorbed by MALDI from whole bacterial cells // Anal. Chem. - 2001. - Vol. 73. - P. 746750.

201. Safdar A., Armstrong D. Antimicrobial activities against 84 Listeria monocytogenes isolates from patients with systemic Listeriosis at a Comprehensive Cancer Center (1955-1997) // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41. - P. 483^485.

202. Scientific committee on veterinary measures relating to public health on Listeria monocytogenes European Commission. Health & Consumer Protection Directorate-General, Directorate B - Scientific Health Opinions Unit B3 -Management of scientific committees II, 23 September 1999.

203. Seeliger H. P. R. Listeriosis. - NY: Karger, 1961.

204. Seeliger H.P.R. Listeriosis - History and actual development // Infection. - 1988. - Vol. 16. - P. 80-84.

205. Serotyping of 80 strains from the WHO multicentre international typing study of Listeria monocytogenes / A. Schonberg, E. Bannerman, A. L. Courtieu [et al.] // Int. J. Food Microbiol. - 1996. - Vol. 32. - P. 279-287.

206. Smith C.W., Metzger G. F. Demonstration of a capsular structure on Listeria monocytogenes II Pathol. Microbiol. - 1962. - Vol. 25. - P. 499-506.

207. Srivastava K. K., Nadeem S., Reedy P. G. Rapid detection of Listeria monocytogenes in ground turkey meats by immunomagnetic separation (IMS) and real-time - polymerase chain reaction (RT-PCR) // J. of Food Safety. - 2009. -Vol. 11.-P. 50-54.

208. Studies on the Pathogenicity of L. monocytogenes / W. Goebel, T. Chakrabory, E. Domann [et al.] // Infection. - 1991. - Vol. 19, №4. - P. 195-197.

209. Suh, M. J., Limbach P. A. Investigation of methods suitable for the matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometric analysis of proteins from ribonucleoprotein complexes // Eur. J. Mass Spectrom. - 2004. - Vol. 10. -P. 89-99.

210. The epidemiology of listeriosis in the United States - 1986 / B. G. Gellin, C. V. Broome, W. F. Bibb, [et al.] II Am. J. Epidemiol.- 1991. - Vol .133, №4.-P. 392-401.

211. The gene coding for protein p60 of Listeria monocytogenes / S. Kholer, M. Leimeister-Wachter, T. Chakraborty [et al.] // Infect. Immun. - 1990. - Vol. 57. -P. 55-61.

212. Toarmina P.J., Dorsa W.J. Short-term bactericidal efficacy of lauric arginate against Listeria monocytogenes present on the surface of frankfurters // J. Food Prot. - 2009. - Vol. 72, №6. - P. 1216-1224.

213. Transcriptional activation of virulence genes in wildtype strains of Listeria monocytogenes in response to a change in the extracellular medium composition / M.T. Ripio, G. Dominguez-Bernal, M. Suarez [et al.] // Res. Microbiol. - 1996. - Vol. 147. - P. 371-384.

214. Transcriptional mapping and nucleotide sequence of the Listeria monocytogenes hlyA region reveal structural features that may be involved in

regulation / J. Mengaud, M. F. Vicente, P. Cossart // Infect Immun. - 1989. - Vol. 57. -№12. -P. 3695-3701.

215. Two-dimensional electrophoresis database of Listeria monocytogenes EGDe proteome and proteomic analysis of mid-log and stationary growth phase cells / P. Folio, P. Chavant, I. Chafsey [et al.] // Proteomics. - 2004. - Vol. 4. - P. 3187-3201.

216. Typing of Listeria monocytogenes strains by repetitive element sequence-based PCR / B. Jersek, P. Gilot, M. Gubina [et al.] // J. Clin. Microbiol. -1999.-Vol. 37.- P 103-109.

217. United States Food and Drug Administration. Relative Risk to Public Health from Foodborne Listeria monocytogenes among selected categories of ready-to-eat foods, Draft risk assessment, Federal Register. - 2001. - Vol. 66, №13.218. US Department of Agriculture, Food Safety and Inspection Service.

Control of Listeria monocytogenes in ready-to-eat meat and poultry products, Washington, D.C, [2011 Jun 13].

219. US Department of Agriculture, Food Safety and Inspection Service. The FSIS microbiological testing program for ready-to-eat (RTE) meat and poultry products, Washington, D.C, 1990-2010 [cited 2012 Mar 20.

220. Vazques-Salinas C., Rodas-Suarez O., Quinones-Ramires E.I. Occurence of Listeria species in raw milk in farms on the outskirts of Mexico city // Food Microbiol. - 2001. - Vol. 18, No. 2. - P. 177-181.

221. Veld P.H., de Boer E. Selective agar for differential diagnosis, for the isolation and detection of Listeria monocytogenes from fecal and biological material // Int. J. Food. Microbiol. - 1991. - Vol. 13. - P. 295-300.

222. Vitas A.I., Aguado V., Garcia-Jalon I. Occurrence of Listeria monocytogenes in fresh and processed foods in Navarra (Spain) // Int. J. Food Microbiol. - 2004. - Vol. 90. - P. 349-356.

223. Welshimer H.J., Meredith A.L. Listeria murrayi sp. n.: a nitrate-reducing mannitol-fermenting Listeria II Int. J. Syst. Bacteriol. 1971. - Vol. 21. -P. 3-7.

224. Xu Y., Breuning M.L., Watson J.T. Non-specific, on-probe cleanup methods for MALDI-MS samples // Mass Spectrom., Rev. - 2003. - Vol. 22. - P. 429-440.

225. Zenobi R., Knochenmass R. Secondary ion-molecule reactions in matrix-assisted laser desorption/ionization // Mass Spectrom., Rev., 1999. - Vol. 17.-P. 337-366.

226. Zrishnamurthy T., Ross P.L., Rajamani U. Detection of pathogenic and non-pathogenic bacteria by matrix assisted laser desorption/ionizationtime-of-flight mass spectrometry // Rapid Commun. Mass Spectrometry. - 1996. - Vol. 10. -P. 883-888.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АТСС - американская коллекция типовых культур;

ВНИИВиМ - Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Вирусологии и Микробиологии;

ВНИИЗЖ - Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Защиты Животных;

ГНУ - Государственное Научное Учреждение; Да - Дальтон;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

КА - кровяной агар;

КОЕ - колониеобразующая единица;

МПА - мясопептонный агар;

МПБ - мясопептонный бульон;

МУК - методические указания;

ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в режиме реального времени;

РФ - Российская Федерация;

Ст - пороговый цикл;

СЖС - сахарозно-желатиновая среда;

СИБ - системы индикаторные бумажные;

ФГБУ - Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение; ХА - 1,5% агар на основе мясного перевара по Хоттингеру; °С - температура в градусах по Цельсию; С02 - углекислый газ;

СНСА - а-циано-4-гидроксикоричная кислота;

GP - gram-positive identification card - карты для идентификации

ферментирующих и неферментирующих грамположительных бактерий;

L.i (L.in.) - Listeria innocua;

L.m. — Listeria monocytogenes;

LDioo- 100%) летальная доза;

LD50 - 50% летальная доза;

Lg - логарифм;

MALDI - (matrix-assisted laser drsorption/ionization) - матрично-

активированная лазерная десорбция/ионизация;

MSP - mass-spectrum peptide - масс-спектр белка;

NaCl - поваренная соль;

PCR - полимеразная цепная реакция;

RTC - real-time clock - режим «реального времени»;

TOF - (time of fly) - времяпролетный метод идентификации.

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

Зам. по НИР

ра азвитию

В.В. Дрыгин 2013г.

УТВЕРЖДАЮ

йрлсачеству %С.К. Старов

т^Л/^Щ 2013г.

= о i 11 xs Ч ч\ в&е „' т ^ l Н

ч^

Ъщ

-Л.

■П-7.Х

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ВЫЯВЛЕНИЮ ГЕНОМА LISTERIA MONOCYTOGENES В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ С ПОМОЩЬЮ ПЦР-РВ

Авторы: Пискунов А.В.

Прунтова О.В.

Рассмотрено и одобрено методкомиссией Протокол №

от ¿UC&Ut^ 2013г.

Рассмотрено и реком§, утверждению Протокол №_ от "^"¿¿¿й

Владимир 2013 небосова

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

Зам. директора по НИР/if развитию

В.В. Дрыгин 2013г.

^^ГВЕРадАЮ v Зам. ди]

J ^

о^качеству С.К. Старов

- - е ' - -

«Ажйжгм- 2013г.

f> Г. >, '. - -L ■■ ■- .-5=-

Ч*. ~ г ^ о

ЧА ■ о

V*

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИДЕНТИФИКАЦИИ LISTERIA MONOCYTOGENES С ПРИМЕНЕНИЕМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРА AUTOFLEX III MALDIBIOTYPER

Авторы: Пискунов А.В. Шадрова Н.Б. Прунтова О.В.

Рассмотрено и одобрено

методкомиссией

Протокол № & от W" 2013г.

Рассмотрено и рекомендовано к утверждению ученым советом

Протокол

Владимир 2013

га?