Усовершенствование системы иммуногенетического исследования свиней на основе полуавтоматического анализа групп крови с применением мультисканирования тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Филимонов, Алексей Юрьевич

• Филимонов, Алексей Юрьевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Филимонов, Алексей Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Механизм протекания реакции агглютинации.

1.2. Группы крови свиней.

1.3. Иммуноспецифические сыворотки групп крови.

1.4. Техника генетического маркирования свиней по эритроцитарным антигенам.

1.5. История совершенствования техники генетического маркирования.

1.6. Связь групп крови с продуктивными признаками свиней.

1.7. Иммунологическая несовместимость.

1.8. Концентрация аллелей и генотипов.

1.9. иммуногенетическая идентификация и подтверждение происхождения животных.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование системы иммуногенетического исследования свиней на основе полуавтоматического анализа групп крови с применением мультисканирования»

Актуальность темы. Национальный проект «Развитие агропромышленного комплекса» и ведомственная целевая программа «Развитие свиноводства в Российской Федерации на период 2006-2010 годов и до 2015 года» наряду с использованием передовых энергосберегающих, ресурсосберегающих и экологически безопасных технологий предусматривает внедрение эффективных селекционно-генетических и биологических методов совершенствования лучших отечественных и зарубежных пород и линий свиней. Признавая ведущую роль традиционных методов разведения, следует отметить, что использование только классической селекции уже не может обеспечить должного уровня эффективности селекционно-племенной работы [Эрнст JI.K., 2005]. Маркирование признаков на уровне генотипа в дополнение к традиционным классическим методам селекции позволяет значительно повысить эффективность селекционно-племенной работы и достигнуть желаемого результата уже в течение нескольких генераций [Глазко В.И. и др., 2001; Зиновьева Н.А. и др., 2005].

Генетическая экспертиза происхождения племенных животных в РФ является обязательным условием для ведения селекционной работы (Федеральный закон от 3 августа 1995 г. № 123-ФЭ "О племенном животноводстве"). В настоящее время одним из методов генетического контроля происхождения животных, и в частности свиней, является иммуногенетическое тестирование [Амерханов Х.А. и др., 2006]. Однако применяемые сегодня в большинстве лабораторий методики тестирования по эритроцитарным антигенам характеризуются большой трудоемкостью, относительно низкой производительностью и визуальной оценкой результатов реакций. Таим образом, для повышения производительности, точности и достоверности иммуногенетической экспертизы происхождения животных актуальным является усовершенствование методических приемов определения групп крови свиней на основе использования современных полуавтоматических инструментальных методов анализа.

Цель и задачи работы. Целью исследований явилась разработка высокопроизводительной системы генетического контроля происхождения свиней, основанной на выполнении полуавтоматического анализа групп крови с применением мультисканирования.

Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи:

•разработать усовершенствованный режим подготовки суспензии эритроцитов "МИКРО", основанный на использовании микропробирок и настольной микроцентрифуги;

•разработать методику раскапывания и автоматического смешивания диагностикумов (реагентов, иммуноспецифических сывороток) и суспензии эритроцитов в 96-ти луночном формате;

•создать режим "МУЛЬТИСКАНИРОВАНИЕ" для автоматической визуализации результатов с применением планшетного фотометра;

•определить критерии для автоматической обработки результатов анализа;

•провести экспериментальную апробацию системы для тестирования свиней различных пород;

•провести патентные исследования и изучить патентоспособность разработки.

Научная новизна. Впервые разработана система определения групп крови свиней, основанная на полуавтоматическом инструментальном определении групп крови в 96-луночном формате. Предложены способы подготовки суспензии эритроцитов, раскапывания и постановки реакций. Разработан алгоритм анализа результатов реакций агглютинации и гемолиза с применением планшетного фотометра и персонального компьютера. Получено положительное решение о выдаче патента РФ.

Практическая значимость. Предложенная усовершенствованная система позволяет повысить производительность и точность метода, снизить трудоемкость и добиться существенной экономии реагентов и, как следствие, снизить материальные и временные затраты.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Новый режим подготовки суспензии эритроцитов «МИКРО», позволяющий вне зависимости от исходных образцов крови свиней инструментально получать рабочую суспензию эритроцитов.

• Усовершенствованная методика постановки реакций в 96-луночном планшетном формате, позволяющая сократить временные и материальные затраты.

• Новый режим «МУЛЬТИСКАНИРОВАНИЕ», позволяющий осуществлять автоматическое «чтение» реакций агглютинации и гемолиза.

• Алгоритм для автоматической идентификации результатов иммуногенетического тестирования.

• Положительное решение о выдаче патента РФ.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на III международной научно-практической конференции «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России», ВИЖ, 2005 г.; на международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения акад. М.Н. Лущихина «Биотехнология в мире животных и растений», 2005, Бишкек, Киргизия; в рамках проведения школ-практикумов «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2004, 2005 гг.; на научных конференциях Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ, 2005,2006.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных статей, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК, Свиноводство, 2007, № 2. Получено положительное решение о выдаче патента РФ.

Структура и объем работы. Диссертационная работа написана на 108 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты и обсуждение исследований, заключение, приложение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 40 таблиц и 8 рисунков. Список литературы включает 124 источника, в том числе 30 источников на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Филимонов, Алексей Юрьевич

ВЫВОДЫ

1. Разработан новый способ подготовки суспензии эритроцитов свиней для иммуногенетического тестирования, позволяющий получать наиболее равномерный по плотности осадок. Если при использовании традиционной методики плотность осадка эритроцитов в разных пробах варьировала в пределах 43,5%, то при применении усовершенствованной нами системы - в пределах 23,1%. Разработанный способ позволяет инструментально получать концентрацию суспензии эритроцитов 2%, полностью исключив визуальную оценку.

2. Усовершенствована методика постановки реакций агглютинации, позволяющая сократить расход иммуноспецифических сывороток по сравнению с традиционной методикой в 2 раза, с 0,1 мл до 0,05 мл на 1 тестодозу и снизить временные затраты почти в 3-5 раз.

3. Разработан новый автоматический режим «чтения» реакций агглютинации и гемолиза «Мультисканирование», основанный на использовании планшетных фотометров. Предложенный способ позволяет исключить субъективный фактор в интерпретации результатов реакций и сократить временные затраты на «чтение» реакций в 3-5 раз.

4. Разработан алгоритм для автоматической интерпретации результатов иммуногенетического тестирования групп крови свиней, позволяющий переводить значения, полученные при спектрофотомерии, в баллы серологического теста. Проведенное сравнительное тестирование образцов крови 172 голов свиней 3 пород показало 100% совпадение результатов, полученных с использованием разработанного и традиционного методов.

5. Выполнена производственная проверка разработанной методики для иммуногенетического тестирования свиней трех пород: ливенская (112 голов), ландрас (30 голов) и йоркшир (30 голов). Выполнен детальный анализ иммуногенетических профилей свиней ливенской породы. Уровень гомозиготности по маточному поголовью составил 0,77, а по хрякам уровень гомозиготности равен 0,87, что является для свиней ливенской породы достаточно высоким показателем.

6. Выполнены патентные исследования способов определения групп крови свиней. Получено положительное решение о выдаче патента РФ «Способ определения групп крови у свиней».

ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ

Иммуногенетическим лабораториям, занимающимся определением групп крови свиней, с целью сокращения материальных и временных затрат на тестирование рекомендуем использовать разработанную нами систему.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Маркерная селекция (селекция с использованием иммуногенетических, цитогенетических и ДНК-маркеров) в дополнение к традиционным методам селекции имеет ряд преимуществ. Она не учитывает изменчивость хозяйственно-полезных признаков, обусловленную внешней средой, делает возможным селекцию в раннем возрасте независимо от пола животных и, в конечном итоге, повышает эффективность селекции. Селекция по генотипу способствует идентификации и быстрому введению предпочтительных аллелей их ресурсных популяций в популяцию реципиентов с целью повышения продуктивности и устойчивости к заболеваниям улучшаемых пород животных [Зиновьева Н.А. и др., 2002].

Определение и знание генотипа свиней по иммуногенетическим критериям позволяет использовать их при контроле достоверности происхождения, при заказных спариваниях, для получения более жизнеспособного продуктивного потомства, для реализации отдельных селекционных программ, в том числе, для создания отцовских и материнских пар [Безенко С.П.и др., 1974, 1981, 1999г].

Использование иммуногенетических маркеров в селекции на сегодняшний день остается наиболее дешевым и широкораспространенным методом в России. Несмотря на стремительное развитие ДНК-диагностики для племенных хозяйств, уже имеющих лаборатории иммуногенетической экспертизы, экономически целесообразной является по-прежнему диагностика происхождения животных по группам крови.

Группы крови позволяют следить за направленностью селекционных процессов в популяциях, с успехом используются для решения многих вопросов изучения генетических особенностей пород, типов, линий, установления их сходства и различий, прогнозирования уровня гетерозиготности в популяциях, а также позволяют проводить специальный подбор пар для лучшего их сочетания [Данилов С.Г., 1993].

В связи с тем, что производство реагентов для определения групп крови достаточно дорого, само проведение анализа достаточно трудоемко, а идентификация результатов реакций зависит от лаборанта (то есть субъективна), и возникла необходимость в разработке усовершенствованной методики определения групп крови свиней, характеризующейся снижением материальных и временных затрат на проведение реакций, и отличающейся более объективной интерпретацией результатов реакций.

В результате проведенной работы нами была разработана и предложена методика по определению групп крови свиней полуавтоматическим способом, которая позволила сократить расход реагентов в 2 раза с 0,1 мл до 0,05 мл на 1 тестодозу.

Подготовка суспензии эритроцитов полностью переведена в пластиковую посуду, что дает возможность сократить трудозатраты на мойку пробирок после проведения реакций и на подготовку посуды перед анализами.

В опыте использованы современные электронные пипетки, которые дали возможность значительно ускорить время раскапывания и смешивания компонентов в 3-5 раз.

Наиболее сложная и ответственная часть опыта - а именно: «чтение» результатов реакций, - теперь не зависит от человека. Вся работа проводится на спектрофотометре DYNEX MRX Revelation, который регистрирует оптическую плотность среды и определяет результаты реакций. Эта процедура позволила полностью исключить субъективный «человеческий фактор» и сократить затраты времени на интерпретацию результатов в 3-5 раз.

Разработанный нами алгоритм идентификации результатов реакции сделал возможным перевод значений, полученных при спектрофотометрии, в баллы серологического теста. Для этих целей нами были созданы соответствующие функции в программе Microsoft Excel.

Выполнена производственная проверка разработанной методики для иммуногенетического тестирования свиней трех пород: ливенская (112 голов), ландрас (30 голов) и йоркшир (30 голов). Выполнен детальный анализ иммуногенетических профилей свиней ливенской породы. Уровень гомозиготности по маточному поголовью составил 0,77, а по хрякам - 0,87, что является для свиней ливенской породы достаточно высоким показателем.

Проведенная оценка экономической эффективности показала, что затраты на приобретение иммунологических сывороток при использовании усовершенствованной методики составляют 4,5 руб. на одну тестодозу на голову, по сравнению с 9 руб. при использовании традиционной методики. За счет использования в системе современных электронных пипеток и спектрофотометра трудозатраты сократились почти в 3-5 раз.

По разработанной методике проведены патентные исследования и получено положительное решение о выдаче патента РФ на изобретение №2005133270/13 «Способ определения групп крови у свиней» (см. Приложение).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Филимонов, Алексей Юрьевич, 2007 год

1. Амерханов, Х.А. Правила определения видов организаций по племенному животноводству / Х.А. Амерханов и др.. М., 2006, - 3 с.

2. Ананин, В.Н. Технология и методы разведения свиней на малых фермах с использованием генетических маркеров: автореф. дисс. канд. с.-х. наук. 1999. - ВНИИплем, Лесные поляны,- 18с.

3. Безенко, С.П. Методические рекомендации по опрдеделению происхождения свиней на основе анализа наследования антигенов эритроцитов / С.П. Безенко. Дубровицы, ВИЖ, 1974. - 47 с.

4. Безенко, С.П. Генетико-популяционные характеристики свиней по группам крови / С.П. Безенко // Породы свиней. М: Колос, 1981.- С. 133148.

5. Безенко, С.П. О направлениях иммуногенетики в селекции свиней / С.П. Безенко //Свиноводство. 1982. - №5. - С.25-26.

6. Безенко, С.П. 5 съезд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова. «О приспособленности свиней различных генотипов по группам крови 10 генов в условиях промышленных хозяйств» / С.П. Безенко. М, 1987. - Т.З. - С.21.

7. Безенко, С.П. Свиньи Заволжский / С.П. Безенко, Н.В. Булычев, В.И. Бычкова// Авторское свидетельство № 30924,16.04.99г.

8. Безенко, С.П., Методическое пособие по определению генетических и иммунологических характеристик свиней для использования в селекции / С.П Безенко, Р.И. Мильчевская, Т.В. Аль-Кейси. Дубровицы, 2006.- 36-40с.

9. Бекенев, В.А. Селекция свиней. / Бекенев В.А. Новосибирск, 1997.- 183с.

10. Бекенев, В.А. Теория и практика определения племенной ценности и прогнозирования эффективности селекции свиней: сб. науч. тр. / В.А. Бекенев, А.Ф. Четкова, В.Н. Дементьев и др.. Новосибирск, 1999. - С. 18-19.

11. Березовский, Н.Д. Итоги перспективной селекции крупной белой породы свиней / Березовский Н.Д. // Свиноводство. 1997. - №6. - С.20-22.

12. Букаров, Н.Г. Генетика гарантия успеха племенной работы / Н.Г. Букаров, Е.Ю. Лебедев и др.. // Актуальные задачи генетических исследований в племенном скотоводстве. - М., 2004. - 11с.

13. Воробьев, А.А., Медицина. Адъюванты. / А.А. Воробьев, Н.Н. Васильев.- М., 1969. 206 с.

14. Гарай, В.В. Количественная оценка показателей продуктивности племенных стад / В.В Гарай, В.А Епишин, И.В. Николаева. //Современные проблемы развития свиноводства. Жодино, 2000. - С.40-42.

15. Герасименко, В.В Сочетаемость по иммуногенетическим показателям свиней украинской степной белой и украинской степной рябой пород при чистопородном разведении: автореф. дис. . канд. с.-х. наук: 06.02.01. / Герасименко В.В. Харьков, 1984.-.25с.

16. Глазко, В.И. Генетически детерминированный полиморфизм белков у сельскохозяйственных животных / Доклады ВАСХНИЛ. 1991. -№6.-С.31-36.

17. Глазко, В.И. Ведение в ДНК-технологии / В.И. Глазко, И.М. Дунин, Г.В. Глазко, Л.А. Калашникова. М., 2001. - 435с.

18. Горелов, И.Г. Дальнейшее изучение иммуногенетической системы О групп крови свиней / И.Г. Горелов, М.А. Савина // Генетика. -1997. Т.ЗЗ. -№10.-С.1441-1443.

19. Горелов, И.Г. Иммуногенетика и биоразнообразие домашних и диких свиней / И.Г. Горелов, М.А.Савина, А.А. Новиков // Аграрная Россия. -2002. №5. -С.33-38.

20. Гусев, И.В. Прошлое и настоящее ливенской породы свиней / И.В. Гусев, К.М. Шавырина // Свиноводство. 2005. - №4. - С.6-8.

21. Данилов, С.Г. Иммуногенетика и эффективность племенной работы / С.Г. Данилов, // Свиноводство. 1993. - №6. - С.9-12.

22. Дунин, И.М. ДНК технологии оценки сельскохозяйственных животных / ИМ. Дунин, JI.A. Калашникова, В.И. Глазко, Е.П. Голубика, Н.В. Рыжова // Изд. ВНИИПлем, 1999. - 147с.

23. Епишин, В.А. Сравнительное изучение иммуногенетических параметров и продуктивных качеств свиней мясных типов / В.А. Епишин, П.П. Кошель // Использование высокоценных племенных животных. 1988. -С. 140-146.

24. Епишин, В.А. Использование маркеров групп крови свиней в селекции свиней мясных типов / В.А. Епишин, И.Т. Тихонов // Пути повышения эффективности селекционно-племенной работы в свиноводстве. -М., 1988. С.50-55.

25. Епишко, Т.И. Иммуногенетическая характеристика чистопородных хряков, используемых на промышленных комплексах / Т.И. Епишко // Современные проблемы развития свиноводства. Жодино, 2000. -С.50-52.

26. Зиновьева, Н.А. ДНК-маркеры как рычаг повышения многоплодия свиней. / Н.А. Зиновьева, Е.А. Гладырь, О.В. Костюнина, К.М. Шавырина, Е.К. Кунаева // Промышленное и племенное свиноводство. М., 2005, №5, с. 18-21.

27. Йегер, JI. Клиническая иммунология и аллергология. / JI. Йегер; пер. с нем. С.С. Кирзон. -М.: Медицина, 1990, т. 1, с.295.

28. Казанцева, И.П. Скрещивание свиноматок крупной белой породы с хряками дюрок с учетом иммуногенетических показателей / И.П. Казанцева // автореф. дис. канд. биол. наук. Дубровицы, ВИЖ, 1993. - 21с.

29. Капанадзе, Г. Д. Продуктивные качества свиней крупной белой породы различных генотипов с разной стрессоустойчивостью: дис.канд. с.-х. наук: 06.02.04 / Г. Д. Капанадзе. М., 2003. - 104 с.

30. Кемзура, Р.К. Породная и популяционная генетическая структура литовских белых свиней по полиморфным белкам крови / Р.К. Кемзура // Тез. докл.: «Пути повышения эффективности животных и качества продукции». -Минск, 1980.-С.12.

31. Клемин, В.А., Использование в селекции свиней оценки по собственной продуктивности / В.А. Клемин, А.А. Кузьмина // Селекционно-биологические методы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных. СПб., 1996.-с. 115-126.

32. Кленовицкий, П.М. Генные карты сельскохозяйственных животных. / П.М. Кленовицкий, В.А, Багиров, Н.С. Марзанов, Н.А. Зиновьева // Дубровицы, ВИЖ 2003. - 12 с.

33. Князев, С.П. Свидетельствует ли повышенная частота гетерозигот по генам групп крови свиней о гетерозисе жизнеспособности / С.П. Князев, С.В. Никитин, И.Г. Горелов, Н.В. Данильченко // Сельскохозяйственная биология. -2004. №2. - С.38-42.

34. Козин, И.Е. Изучение внутрипородной дифференциации крупной белой породы свиней по группам крови / И.Е. Козин //Сб. науч. тр. / ВНИИплем., 2000. вып. 10. - С.84-87.

35. Козин, И.Е. Совершенствование способов селекции и разведения свиней в условиях Чувашии с использованием генетических маркеров: автореф. дис. канд. с.-х. наук. / И.Е. Козин. 2001,- Лесные поляны. - 21с.

36. Козин, И.Е. Изучение генетической структуры популяций свиней крупной белой и цивильской пород / И.Е. Козин, А.А. Новиков, Н.И. Романенко, М.С. Семак // Сб. науч. тр. / ВНИИплем.,- вып. 10. 2000. - с. 80 -84.

37. Корешков, В.А. Использование полиморфных систем групп крови для повышения жизнеспособности поросят в племенных хозяйствах / В.А. Корешков, Воробьева Э.Г. // Тез. докл. Кишенев, 1983. - ч.2. - с.216.

38. Кошель, П.П. Связь откормочных качеств свиней с группами крови / П.П. Кошель // Влияние методов селекции и использование биологически активных веществ на производство продуктов животноводства. -М., 1985. С.48-51.

39. Максимов, Г.В. Качество мясной продукции и стрессустойчивости в связи с селекцией на мясность / Г.В. Максимов // Сельскохозяйственная биология. 1995. - №2. - с. 13-36.

40. Марзанов, Н.С. Иммунология и иммуногенетика овец и коз / Н.С. Марзанов. Кишинев: Штиинца, 1991.-е. 4-6.

41. Машуров, A.M. Генетические маркеры в селекции животных: Автореф. дис. д-ра биол. наук / ВНИИ разведения и генетики с.-х. животных / A.M. Машуров- Л. 1985. - 44с.

42. Материал междунар. научно-практической конф.: «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», 7-10 сент. 2004 г.: в 2 т. -Дубровицы: ВИЖ, 2004. 2 т. - (Науч. тр. ВИЖа; вып.62, т. 1,2,3).

43. Меркурьева, Е.К. Генетика. / Е.К. Меркурьева, З.В. Абрамова, А.В. Бакай, И.И. Кочиш. М.: Агропромиздат, 1991. - 247с.

44. Методика определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений. ВАСХНИЛ. - М.: Колос, 1980. - 112с.

45. Митичашвили, Р.С., Иммуногенетическая изменчивость при селекции заводских и аборигенных пород свиней / Р.С. Митичашвили, В.Н. Тихонов // Цитология и генетика. 1990. - №1. - Т. 24. - С.34-39.

46. Новиков, А.А. Генетические аспекты повышения эффективности селекции в свиноводстве: автореф. дисс.докт. биол. наук. / А.А. Новиков. -ВНИИплем, Лесные поляны. 1996. - 44с.

47. Новиков, А.А. Использование данных иммуногенетического анализа при определении племенной и пользовательной ценности хряков-производителей / А.А. Новиков // Итоги селек. плем. работы в свиноводстве. - Лесные поляны, 1992.-С.63-71.

48. Новиков, А.А., Генетико-популяционные характеристики свиней по группам крови / А.А. Новиков, С.П. Безенко // Породы свиней. М.: Колос, 1981. -с.133-148.

49. Новиков, А.А., Дифференциация крупной белой породы свиней по генетической структуре групп крови в связи с хозяйственно-полезными признаками / А.А. Новиков, И.Е. Козин, Н.И. Романенко // Сб. науч. тр. / ВНИИплем. вып. 10. - 2000. -с. 87-91.

50. Новиков, А.А. Создание новой линии свиней с использованием генетических маркеров / А.А. Новиков, Н.И. Романенко // Селекция, кормление, содержание с.-х. животных и технология производства продуктов животноводства. 1999. - вып. 7. - с. 56-60.

51. Новиков А.А. Иммуногенетические маркеры и их использование в селекции / А.А. Новиков, М.С. Семак, Н.И. Романенко //Сб. науч. тр. / ВНИИПлем, 1997. -с.165-178.

52. Павличенко, В.П. Использование иммуногенетических тестов в селекции на повышение хозяйственно-полезных признаков у свиней / В.П. Павличенко, З.П. Любимова, Н.Н. Смирнова // Тезисы докладов. М., 1984. -с. 52-54.

53. Панченко, А.И. Влияние иммуногенетических показателей и условий содержания на воспроизводительные качества свиноматок / А.И. Панченко // автореф. дис. канд. биол. наук. 1985. - ВИЖ. - 22с.

54. Панченко, А.И. Генетические особенности свиней уржумской породы / А.И. Панченко, Ю.И. Шмаков, А.А. Мглинец // Зоотехния. 1999. -№7. - С.6-7.

55. Панченко, А.И. Иммуногенетический анализ по группам крови свиней уржумской породы / А.И. Панченко, Ю.И. Шмаков, А.А. Мглинец //Доклады РАСХН. 1999. - №1. - с.29-30.

56. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1987.415с.

57. Пол, У. Иммунология / У. Пол; пер. с англ. Т.Н. Власик. М.: Мир, 1989. -т.З. - С. 5.

58. Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт; пер. с англ. Т.В. Великодворской.-М.: Мир, 1991.-С. 90-91.

59. Северин, В.И. О повышении иммуногенетических оценок свиней племенных стад в Днепропетровской области / В.И. Северин, В.Т. Сметании, В.И. Сокрут, С.П. Безенко // Генетические аспекты селекции. Киев, 1992. -с.77-81.

60. Сердюк, Г.Н. Иммуногенетика свиней: теория и практика / Г.Н. Сердюк . СПб.: Лекс-Стар, 2002. - 390с.

61. Сердюк, Г.Н. Иммуногенетический контроль в селекционной практике / Г.Н. Сердюк, Ю.В. Силин, Н.Н. Берникова, Н.Н. Куценко // Зоотехния. 2000. -№10. - с.7-9.

62. Смирнова, Н.А. Воспроизводительные способности свиноматок при иммуногенетически совместимых и несовместимых подборах / Н.А. Смирнова // Молекулярно-генетические маркеры животных. Киев: Аграрная наука, 1994.-е. 103.

63. Соколов, Н.В. Теория и практика селекции и использования свиней мясного типа продуктивности: автореф. дис. . докт. с.-х. наук. / Н.В. Соколов Краснодар, 2001. - 44с.

64. Солдатенков, Н.К. Использование иммуногенетических тестов для повышения эффективности селекционно-племенной работы в промышленных комплексах: автореф. дисс. канд. с.-х наук / Н.К. Солдатенков. СПб., 1992,- 28с.

65. Солдатенков, Н.К. Устойчивость спермы хряков с разными группами крови к криоконсервации / Н.К. Солдатенков, // Тез. докл. 44 науч. конф. / Самар. гос. с.-х. академия. Самара, 1997. - 4.1. - с.239-240.

66. Сташ, В. Л. Анализ связи локусов групп крови и селекционируемых признаков свиней: автореф. дисс. канд. с.-х. наук. / В.Л. Сташ, -Л., 1988.- 17с.

67. Сухова, Н.О. Связь групп крови с откормочными и мясными качествами свиней / Н.О. Сухова, В. Бекенев, В.И. Коломников и др. // Докл. ВАСХНИЛ. 1989. - №2. - с.24-25.

68. Сухова, Н.О. Продуктивные показатели свиноматок крупной белой породы и ландрас с учетом их генотипа и сочетаемости с хряками по группам крови / Н.О. Сухова, И.И. Тонышев, Н.М. Набродова, В.А. Коломников // Докл. ВАСХНИЛ. 1990. - №1. - с.42-45.

69. Сухова, Н.О. Оценка иммуногенетических различий между линиями и семействами свиней разных пород при замкнутом разведении / Н.О. Сухова, A.M. Машуров, В.А. Бекенев, B.C. Деева, Н.М. Набродова // Вестн. РАСХН. 1997. 14. С. 51-54.

70. Тихонов, В.Н. Иммуногенетика и биохимический полиморфизм домашних и диких свиней / В.Н. Тихонов. Новосибирск: Наука, 1991. -304с.

71. Тихонов, В.Н. Внутрихромосомное картирование нового гена многоплодия домашних и диких свиней / В.Н. Тихонов, В.Е. Бобович, // Докл. РАСХН. -1995.-№5.-с.34-35.

72. Тихонов, В.Н. Иммуногенетические особенности некоторых форм диких свиней Европы, Азии, Африки и Америки / В.Н. Тихонов, И.Г. Горелов, В.Е. Бобович // Морфология и генетика кабана. М.: Наука, 1985. -279с.

73. Тихонов, В.Н. Связь системы В групп крови с многоплодием и жизнеспособностью свиней / В.Н. Тихонов, С.В. Никитин // Сб. науч. тр. Новосибирского СХИ, 1984.-е. 110.

74. Тихонов, В.Н. Хромосомное картирование локуса системы Е групп крови свиней / В.Н. Тихонов, К.И. Солодуха, В.Е. Бобович // Матер, межд. симпозиума. СПб., 1994. - с. 103-105.

75. Толпеко, Г.А. Формирование иммуногенетической структуры популяции свиней в связи с методами разведения и отбором по продуктивности: автореф. дисс. докт. с.-х. наук / Г.А. Толпеко.- 1985. 25с.

76. Филатов, А.И. Генетический потенциал племенных свиней и его использование / А.И. Филатов //Свиноводство. 2002. - №1. - с.2-4.

77. Филенко, В.Ф. Иммуногенетическая характеристика популяции свиней СМ-1 степного типа и крупной белой породы / В.Ф. Филенко // Зоотехния. 1993. -№9. - с.6-7.

78. Фомичев, Ю.П. Сыворотки иммуноспецифические для определения групп крови свиней. / Ю.П. Фомичев и др. // Технические условия, наставление и инструкция по изготовлению, контролю и применению. Дубровицы, ВИЖ, 2001. - 24с.

79. Фомичев, Ю.П. Инструкция по изготовлению сывороток иммуноспецифических для определения групп крови у свиней / Ю.П. Фомичев, Ю.И. Шмаков, К.М. Шавырина, В.И. Горбунов, С.В. Советкин. -ВИЖ, Дубровицы, 2001. - с. 43 - 56.

80. Харченко, П.Г. Воспроизводительные качества хряков в зависимости от генетической характеристики по группам крови / П.Г. Харченко. Новосибирск, 2000. - с. 135-136.

81. Хуан Jly Шеен. Биохимические и иммуногенетические маркеры крови и перспективы их использования в разведении свиней Китая: дис. . докт. с.-х. наук / Хуан Лу Шеен. 1992. - ВИЖ, Дубровицы. - 21с.

82. Чемоданов, B.C. Иммуногенетическая характеристика свиней породы дюрок / B.C. Чемоданов // Тр. Кубан. аграр. ун.-та, 1992. В. 324. -с.76-80.

83. Шмаков, Ю.И. Эффективность применения разных методов селекции на повышение продуктивных качеств свиней: дисс. докт. . с.-х. наук / Ю.И. Шмаков. Дубровицы, ВИЖ, 1999.- 271с.

84. Шмаков, Ю.И. Эффективность преимущественной селекции при чистопородном разведении / Ю.И. Шмаков, А.А. Мглинец // Современные проблемы развития свиноводства. Жодино, 2000. - с. 12-14.

85. Andresen, Е. Association between susceptibility to the Malignant Hyperthermia Syndromo (MHS) and H blood types in Danish Landrace pigs explained by linkage disequilibrium / E. Andresen // Livest. Prod. Sci. 1980. -V.7.-P. 155-162.

86. Andresen, E. Evidence indicating the sequence Phi, Hal, H of the three closely linked loci in pigs / E. Andresen //Nord. Vet. Med. 1979. - V.31. - P.443-444.

87. Bazala, E. Historic overovani realizace plemenarskych program rydanana za soucasnon skutecnost / E. Bazala, L. Vitek, J. Doupal // Nas. Chov. -2000. -N24. S.24-26.

88. Baltzer, J. Untersuchungen uber das Bestehen von Beziehungen zwischen Blutgruppenfactoren und Daten des Schlachtkorperwertes und der Mastleistung des Schweines / J. Baltzer // Zuchtungskunde. 1964. - Bd.36. - N7. -S.317-326.

89. Chen, P. Selection for lean growth rate and correlated responses in litter traits in a synthetic line of Yorkshine-Meishan pigs / P. Chen, T. Baas, J. Dekkers L. Christian // Canad. J. Anim. Sci. 2001. - V.81. - JVs2. - P.205-214.

90. Dziangys, V. Selection of Swedish Yorkshiret pigs for productivity in Lithuania / V. Dziangys, A. Stikliunas // Biologiy. 2000. - №3. - p.30-33.

91. Fries, H.K. Maping of the Gene for G blood group antigens to chromosome 15 in swine / H.K. Fries, B.A. Rasmusen, V.L. Jarnell, R.R. Maurer // Anim. Blood. Groups. Biochem. Genet. 1984. - V.15. - №4. - P.251-258.

92. Fries, H.K. Chromosomal mutations in pigs derived from x-irradiated semen / H.K. Fries, G. Stranzinger // Cytogenet. Cell Genet. 1982. - V.34. - №1. -P.55-66.

93. Hojny, J. New blood groups factors Es, Et and a new allel Ebdgimt (E16) in the pig E blood group system / J. Hojny, J. Hradecky, S. Cwik //Animal Genetics. 1991. -V.22.-P.251-258.

94. Hojny, J. Allel Ebdsimr (E17) in the pig E blood group system / J. Hojny, Nielsen P.B. //Anim. Genetics. -1992. V.23. - P.523-524.

95. Hojny, J. A contribution to the complex M blood groups system in pigs / J. Hojny, A. Van Zeveren // Animal Blood Groups and Biochem. Genet. -1985.-V.I6. -Suppl.l.-P.24.

96. Hradesky, I. Map arrangement of the SLA chromosomal region and the J and С blood groups loci in the pig /1. Hradesky, V. Hruban, J. Pazdera // Anim. Blood. Grps. Biochem. Genet. 1982. - V.I. - P.223-224.

97. Jensen, E. Testing methods for PSE syndrome: current research in Denmark / E. Jensen, E. Andresen // Livestock Prod. Sci. 1980. - V.I3. - P.245-262.

98. Jensen, E.L. Quantitative studies on blood group and serum protein systems in pigs / E.L. Jensen, C. Smith, L.N. Baker, D.F. Cox // J. Anim. Sci. -1968. V.27. - №4. - P.856-862.

99. Johansen, S. Evaluation of selection for increased lean tissue growth rate in pigs on low ore high dietary protein levels / S. Johansen // Diss. Uppsala. -1993.-76 P.

100. Kuryt, J. The comparative analysis of RYR1 and Hal genotypes defined on the basis of PCR/RFLP test and Hal-GPI-AlBG-Pgd haplotyping, respectively / J. Kuryt, A. Kossakowska // Anim. Genet. 1994. - V.25. - p.2.

101. Nagy, J. Kulonbozo szintu teljesitmenyrizsgalatokva alapozott szelekcio hatekonysaganak elemzese / J. Nagy, L. Csato, J. Farkas, L. Radnoczi // Allat. Takarmanyozas. 2001. - V.50. - №4. - P.311-315.

102. Nikitin, S. Aging viability and inheritance of allotypes of IgG-system of pigs / S. Nikitin, M. Savina, O. Yudina // Sixts International Veterinary Immunology Symposium, Uppsala, Sweden. 2001. - P.216.

103. Phong Ky Thuat Chan Nuoi. Results and prospect of reaning exstic pig with high leanness in Thai Binh province / Phong Ky Thuat Chan Nuoi // Nong. Ngeiep. Cong. 1996. - №9. -P.371-372.

104. Rasmusen, B.A. H blood types in pigs as predictors of stress susceptibility / B.A. Rasmusen, L.L. Christian // Science. 1977. - V.l91. - P.947-948.

105. Skiba, E. New immunoglobulin epitopes in pigs immunogenetics and linkae / E. Skiba, J. Wegrzym, P. Krzyscin // Roczn. Nank. Zootechn. 1998. -V.25(l). - P.7-17.

106. Vogeli, P. Genetiche marker und Fruchtberkeit / P. Vogeli // Schweiserische Landwirtschaftliche Monstshefte. 1984. - B.62. - №8-9. - P.253-259.

107. Wiatroszak, J. Study on correlation blood groups and some productive characteristics in pig / J. Wiatroszak // Genetic polonica. 1974. - V.l5. - №1-2. -P.101-106.92