Влияние комбинированного применения натрия селенита и токоферола ацетата на показатели церебральной гемодинамики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат фармацевтических наук Буй, Тхи Минь Тху

• Буй, Тхи Минь Тху
• кандидат фармацевтических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Буй, Тхи Минь Тху

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Механизмы регуляции мозгового кровообращения.

1.2. Роль селена и витамина Е в организме. Фармакологическая характеристика селенсодержащих соединений и токоферола ацетата

1.2.1. Селен.

1.2.2. Токоферола ацетат (витамин Е).

ГЛАВА.2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Регистрация мозгового кровотока методом водородного клиренса

2.2. Методика оценки поведения животного в тесте «открытое поле».

2.3. Методы изучения противогипоксической активности.

2.4. Методика воспроизведения постишемических церебро -васкулярных феноменов.

2.5. Условия экспериментальных исследований.

2.6.Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ СЕЛЕНИТА, ТОКОФЕРОЛА АЦЕТАТА И ИХ КОМБИНИРОВАННОГО ВВЕДЕНИЯ НА ЦЕРЕБРАЛЬНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ И СИСТЕМНОЕ АРТЕРИАЛЬНОЕ ДАВЛЕНИЕ УСЛОВИЯХ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ НОРМЫ.

3.1 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на мозговой кровоток.

3.2 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на системное артериальное давление.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ ИССЛЕДУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТИ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЦЕРЕБРОВАСКУЛЯРНЫХ РАССТРОЙСТВ.

4.1 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на устойчивость животных к гипоксической гипоксии.

4.2 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на устойчивость животных к циркуляторной гипоксии мозга, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий.

4.3 Изучение влияния натрия селенита, витамина Е и их совместного введения на устойчивость животных к тотальной ишемии мозга, вызванной критическими гравитационными перегрузками.

4.4 Изучение влияния исследуемых соединений на мозговой кровоток у наркотизированных белых крыс в условиях глобальной ишемии мозга.

4.5 Влияние натрия селенита, витамина Е и их комбинированного введения на артериальное давление и сопротивление мозговых сосудов в условиях экспериментальной патологии.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ СЕЛЕНИТА, ТОКОФЕРОЛА АЦЕТАТА И ИХ КОМБИНАЦИИ НА ПСИХОНЕВРОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС ИНТАКТНЫХ ЖИВОТНЫХ И В УСЛОВИЯХ ТОТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ МОЗГА

5.1 Изучение влияния натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на познавательную, двигательную и эмоциональную активность белых интактных крыс

5.2 Оценка поведения белых крыс, подвергшихся воздействию гравитационных перегрузок, в тесте «открытое поле» при профилактическом введении натрия селенита и токоферола ацетата и их комбинации

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние комбинированного применения натрия селенита и токоферола ацетата на показатели церебральной гемодинамики»

Актуальность темы. Фармакологическая коррекция цереброваскулярных заболеваний до сих пор остается одной из актуальных проблем медицины. Среди всех видов сосудистой патологии мозга преобладают ишемические инсульты (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001; Джибладзе Д.Н., 2002; Верещагин Н.В. и соавт., 2003; Скворцова В.И., Стаховская JI.B., 2004; Суслина З.А., Пирадова М.А., 2008). Многочисленные экспериментальные и клинические исследования показали, что одним из ведущих факторов патогенеза ишемического поражения мозга является оксидантный стресс (Федин А.И., 2001; Поварова О.В. и соавт., 2003; Зайцев В.Г.и соавт., 2003). При длительной ишемии мозга происходит истощение антиоксидантных систем и накопление продуктов перекисного окисления липидов. В связи с этим важным направлением нейропротекции становится антиоксидантная терапия. Арсенал средств, обладающих антиоксидантной активностью, невелик. Наиболее широко используемые в медицине антиоксиданты - доноры протонов, главным представителем которых является токоферола ацетат, - эффективны преимущественно против перекисного окисления липидов, но слабо защищают от окислительного повреждения белки и нуклеиновые кислоты. Кроме того, клинический эффект токоферола ацетата начинает проявляться лишь после длительного лечения (несколько недель). При быстром течении болезни такой подход может оказаться неэффективным. Наибольшие перспективы клинического применения имеют антиоксиданты, способные катализировать элиминацию активных форм кислорода без образования новых свободных радикалов и известные под названием «имитаторы ферментов» (Зайцев В.Г. и соавт., 2003). К последним относится селен, играющий ведущую роль в процессе ингибирования перекисного окисления липидов мембран клеток путем повышения активности фермента глютатионпероксидазы. В литературе накопилось достаточно убедительных данных о высокой антиоксидантной активности натрия селенита (Кузнецов Г.П., Лебедев П.Л., 1995). По данным А.Н.Кудрина (1994) натрия селенит оказывает выраженный терапевтический эффект при инфаркте миокарда. Есть положительные результаты о комбинированном применении натрия селенита и токоферола ацетата в кардиологии (Dawn С. Schwenke, Stephen R. Behr, 1998; Швецов И.М. и соавт., 2004)). Под действием этой комбинации динамика выздоровления больных инфарктом миокарда ускоряется при уменьшенных размерах рубца за счет ограничения поражения миокарда в околоинфарктной зоне. Поскольку в современном обществе наблюдается резкое возрастание ишемических заболеваний мозга, становится все более острым вопрос о новых подходах в поддержании антиоксидантного статуса. Исходя из этого, весьма актуальным как с теоретической, так и с практической точки зрения является изучение влияния комбинированного применения натрия селенита и токоферола ацетата в малых терапевтических дозах на показатели церебральной гемодинамики. Предполагается, что использование комбинации двух антиоксидантов с разными механизмами вследствие потенцирования эффектов обеспечит защиту нейронов от действия повреждающих факторов при ишемии мозга.

Цель работы: изучить влияние натрия селенита и токоферола ацетата на показатели церебральной гемодинамики и оценить целесообразность их совместного применения в качестве нейропротекторов.

Задачи исследований:

1. Изучить влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на мозговой кровоток и системное артериальное давление интактных животных.

2. Исследовать антигипоксическую активность отдельных изучаемых соединений и их комбинации на различных моделях гипоксий.

3. Провести сравнительный анализ эффективности исследуемых соединений и их комбинированного введения в минимальных терапевтических дозах в условиях глобальной ишемии мозга.

4. Оценить поведение белых интактных крыс в тесте «открытое поле» при профилактическом введении натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации.

5. Изучить влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их совместного введения на двигательную активность и эмоциональные реакции крыс в тесте «открытое поле» в условиях тотальной ишемии мозга, вызванной критическими гравитационными перегрузками.

Научная новизна исследований

Впервые проведено исследование церебропротекторного действия натрия селенита и токоферола ацетата при их комбинированном введении на различных моделях ишемии головного мозга. Установлено, что исследуемая комбинация двух известных антиоксидантов в малых терапевтических дозах повышает устойчивость животных к гипоксической и циркуляторной гипоксиям. Доказано, что антигипоксическая активность при совместном применении натрия селенита и токоферола ацетата является значительно более выраженной, чем таковая каждого компонента в отдельности.

Впервые выявлено, что предварительное одновременное введение натрия селенита (50 мкг/кг) и токоферола ацетата (50мг/кг) до ишемии мозга уменьшает степень падения мозгового кровотока в условиях окклюзии общих сонных артерий, сглаживает проявление фазы гиперперфузии и тормозит развитие стадии невосстановления мозгового кровотока.

Впервые изучено влияние натрия селенита в сочетании с токоферола ацетатом на мозговое кровообращение у интактных животных. Установлено, что данная комбинация достоверно уменьшает мозговой кровоток в среднем на 12-15%, кратковременно повышает уровень системного артериального давления на 7-13%.

Научно-практическая значимость работы

Полученные в экспериментальных исследованиях данные представляют теоретический и практический интерес, поскольку раскрывают неизученные эффекты натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на мозговое кровообращение и психоневрологический статус в условиях нормы и при патологических состояниях. Экспериментально доказана выраженная антигипоксическая активность комбинации натрия селенита и токоферола ацетата, а также способность исследуемых соединений уменьшать фазу гиперперфузии и тормозить развитие постишемического цереброваскулярного феномена невосстановления мозгового кровотока. Представленные результаты дают обоснование для разработки рекомендаций по рациональному совместному использованию натрия селенита и токоферола ацетата в комплексном лечении нарушений мозгового кровообращения в качестве нейропротекторов.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования нашли отражение в информационном письме «Обоснование комбинированного применения натрия селенита и токоферола ацетата в комплексном лечении нарушений мозгового кровообращения» и включены в лекционный материал для слушателей и провизоров - интернов факультета последипломного образования, в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедр фармакологии и биологии, физиологии и патологии Пятигорской ГФА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Комбинированное введение исследуемых соединений (натрия селенита 50мкг/кг и токоферола ацетата 50 мг/кг) достоверно уменьшает мозговой кровоток у интактных животных в среднем на 12-15%.

2. Совместное применение малых доз натрия селенита и токоферола ацетата вызывает умеренное повышение артериального давления с 20 по 40 мин наблюдения в среднем на 7-13% с последующей тенденцией к восстановлению.

3. Натрия селенит, токоферола ацетат и их комбинация повышают устойчивость животных к гипоксической и циркуляторной гипоксиям. Антигипоксическая активность при совместном применении исследуемых антиоксидантов является значительно более выраженной, чем таковая каждого компонента в отдельности

4. Предварительное одновременное введение натрия селенита и токоферола ацетата до ишемии мозга уменьшает степень падения мозгового кровотока в условиях окклюзии общих сонных артерий, сглаживает проявление фазы гиперперфузии и тормозит развитие стадии невосстановления мозгового кровотока.

5. В условиях острой сосудистой патологии мозга натрия селенит (50мкг/кг) и токоферола ацетат (50мг/кг) повышают двигательную и ориентировочно-исследовательскую активность животных. Комбинированное введение натрия селенита (50мкг/кг) и токоферола ацетата (50мг/кг) снижают смертность животных в 2 раза по сравнению с контролем, уменьшают уровень эмоционального напряжения.

Апробация работы

Материалы исследования доложены на 2-nd Russian - Chinese international scientific conference on pharmacology Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice 2006; Perm Russia, на 62-й и 64-й межрегиональных конференцияхпо фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007, 2009г.г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 5 в центральной печати.

Объём и структура диссертации

Материал диссертации изложен на 122 страницах машинописного текста, иллюстрирован 26 таблицами и 14 рисунками. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, трех глав собственных результатов исследований, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы содержит 127 источников, из них отечественных 74.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Буй, Тхи Минь Тху

выводы

1. Натрия селенит в дозе 50 мкг/кг достоверно снижает уровень МК у наркотизированных интактных крыс в среднем на 20-40%. Токоферола ацетат в дозе 50 мг/кг существенно не изменяет уровень объемной скорости мозгового кровотока. Комбинированное введение исследуемых соединений (натрия селенита 50мкг/кг в сочетании с токоферола ацетатом 50 мг/кг) достоверно уменьшает мозговой кровоток в среднем на 12-15%. Исследуемые соединения не оказывают существенного влияния на уровень артериального давления у интактных животных.

2. Натрия селенит и токоферола ацетат в дозах 50 мкг/кг и 50 мг/кг, соответственно, а также их комбинация в аналогичных дозах достоверно увеличивают продолжительность жизни животных в условиях нормобарической гипоксии с гиперкапнией, значительно повышают устойчивость белых крыс к циркуляторной гипоксии.

3. Предварительное введение натрия селенита (50мкг/кг) и токоферола ацетата (50мг/кг), а также их комбинации в тех же дозах до ишемии мозга существенно изменяет динамику развития постишемических цереброваскулярных феноменов: уменьшает степень проявления реактивной гиперемии и тормозит развитие фазы невосстановления мозгового кровотока. Наиболее выраженный протекторный эффект наблюдается при комбинированном введении натрия селенита и витамина Е.

4. Превентивное введение исследуемых антиоксидантов и их комбинации не вызывает достоверных изменений психоневрологического статуса интактных животных.

5. В условиях острой сосудистой патологии мозга натрия селенит (50мкг/кг) и токоферола ацетат (50мг/кг) повышают двигательную и ориентировочно-исследовательскую активность животных. Комбинированное введение натрия селенита (50мкг/кг) и витамина Е (50мг/кг) снижает смертность животных в 2 раза по сравнению с контролем, уменьшает уровень эмоционального напряжения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Высокие показатели летальности и инвалидизации больных вызывают большой интерес к проблемам сосудистой патологии на протяжении последних десятков лет. Особенно неблагоприятная ситуация сложилась с цереброваскулярными заболеваниями - большой группой сосудистых поражений головного мозга, различных по этиологии, патогенезу, клиническим проявлениям и последствиям. Проблема фармакологической коррекции кардиологических заболеваний до сих пор остается одной из актуальных проблем медицины.

Инсульт в России занимает 2-е место в структуре общей смертности населения и является основной причиной стойкой утраты трудоспособности. Среди всех видов инсульта преобладают ишемические поражения мозга. В последнее время большое внимание привлекают исследования, посвященные изучению роли свободных радикалов в патогенезе ишемического повреждения мозга. Окислительный стресс в мозге, перекисное окисление липидов (ПОЛ) становятся причиной повреждения клеток. Перспективным направлением вторичной нейропротекции является применение антиоксидантов (токоферолов, эссенциале, эмоксипина, мексидола и др.), вызывающих торможение ПОЛ и активацию антиоксидантной системы, Наиболее широко используемые в медицине антиоксиданты - доноры протонов, главным представителем которых является токоферола ацетат, -эффективны преимущественно против ПОЛ, но слабо защищают от окислительного повреждения белки и нуклеиновые кислоты. Кроме того, клинический эффект витамина Е начинает проявляться лишь после длительного лечения (несколько недель). При быстром течении болезни такой подход может оказаться неэффективным. Наибольшие перспективы клинического применения имеют представители групп катализаторов и ловушек радикалов: в первую очередь за счет наиболее универсального ингибирующего действия на свободнорадикальное окисление. Эти антиоксиданты, способные катализировать элиминацию активных форм

99 кислорода без образования новых свободных радикалов, известны под названием «имитаторы ферментов». Ведущую роль в процессе ингибирования перекисного окисления липидов мембран клеток путем повышения активности фермента глютатионпероксидазы играет селен. S

Глютатионпероксидаза способствует накоплению глютатиона, прекращающего или ограничивающего процессы ПОЛ и его распространение. Селен участвует в стабилизации структуры и функций мембран, создает оптимальные условия для течения биохимических процессов в клетках.

По данным А.Н. Кудрина комбинированное введение натрия селенита и альфа-токоферола ацетата оказывает выраженное торможение перекисного окисления липидов и протекторное действие на мембраны кардиомиоцитов вследствие потенцирования эффектов по сравнению с их отдельным применением. Под влиянием этой комбинации динамика выздоровления ускорялась при уменьшенных размерах рубца за счет ограничения поражения миокарда в околоинфарктной зоне

Ыа сегодняшний день нет сомнений в важности и актуальности поиска новых подходов в поддержании антиоксидантного статуса. Важным при этом предствляется изучение эффективности комбинированного действия антиоксидантов с разными механизмами. В связи с этим представляло интерес изучить действие натрия селенита и токоферола ацетата на показатели церебральной гемодинамики и оценить целесообразность их л совместного применения в качестве нейропротекторов. /

Предметом наших исследований явилось экспериментальное изучение влияния натрия селенита и токоферола ацетата на объёмную скорость МК, артериальное давление, двигательную активность и эмоциональные реакции крыс в тесте «открытое поле» в условиях экспериментальной нормы.

Поскольку исследования, проводимые в нормальных условиях регуляции мозгового кровотока, не всегда отвечают интересам клиники, часть опытов выполнена при экспериментальной патологии. Изучено влияние исследуемых соединений на устойчивость животных к различным видам гипоксии, а также на неврологический статус и кровоснабжение головного мозга в условиях его острой ишемии.

Экспериментальные исследования проведены на 233 крысах массой 200 -250 г обоего пола и 80 белых мышах массой 20-25г обоего пола. Исследовали неорганическое производное селена: натрия селенит в виде водного раствора в дозе 50мкг/кг и токоферола ацетат (витамин Е) -масляный раствор в дозе 50мг/кг. Оба соединения вводили животным внутрибрюшинно.

В качестве наркоза использовали хлоралгидрат в дозе 300 мг/кг.

Объёмную скорость мозгового кровотока регистрировали методом водородного клиренса с помощью платинного электрода, расположенного на поверхности сагиттального синуса в области стока синусов.

Двигательную активность и эмоциональные реакции крыс изучали в тесте «открытое поле»

Для создания патологического фона, на котором изучалась эффективность исследуемых соединений, использовались различные модели цнркуляторных гипоксий. В одной из них циркуляторную гипоксию воспроизводили двухсторонней перевязкой общих сонных артерий. Критерием эффективности антигипоксического действия была выживаемость животных в течение 72 часов.

Вторую модель ишемии мозга создавали критическими гравитационными перегрузками в кранио-каудальном положении животных.

Иормобарическую гипоксию с гиперкапнией вызывали путём помещения мышей в герметически закрытые банки (т.н. «баночная гипоксия»). Во всех случаях регистрировали время выживания животных.

Для оценки действия исследуемых препаратов на динамику развития постишемических цереброваскулярных феноменов воспроизводили ишемию мозга путем двухсторонней окклюзии сонных артерий в течение 10-12 мин. I при снижении САД до 40 мм рт. ст. После ишемии и реинфузии крови в артериальную систему животного осуществляли регистрацию скорости МК методом клиренса водорода. .

Результаты наших исследований показали, что под влиянием натрия селенита кровоток в сосудах мозга заметно снижается. Плавное снижение МК наблюдается с первых минут введения и продолжается до конца наблюдения. Степень снижения кровотока к 60 минуте составила в среднем 41,3%. Токоферола ацетат в дозе 50мг/кг не вызывал достоверного изменения показателей мозгового кровотока, однако отмечалась тенденция к его уменьшению. При совместном введении двух изучаемых соединений в тех же дозах мозговой кровоток достоверно уменьшался с 15 по 45 мин наблюдения в среднем на 12-15%.

Известно, что снижение уровня артериального давления, а следовательно, и перфузионнного давления у больных с ишемнческим инсультом, вызывает дальнейшее ухудшение ишемизированных областей мозга. Поэтому нейропротекторы не должны обладать выраженным гипотензивным эффектом. В связи с этим следующим этапом нашей работы было изучение влияния исследуемых веществ на системное артериальное давление у экспериментальных животных.

Наши исследования показали, что натрия селенит и витамин Е не оказывают существенного влияния на АД. Отмечалась тенденция к снижению АД под влиянием натрия селенита и некоторое увеличение АД при введении токоферола ацетата. Однако изменения были недостоверными. Комбинированное введение натрия селенита и витамина Е в дозах 50 мкг/кг и 50 мг/кг, соответственно, вызывало достоверное повышение АД на 20, 35 и 40 мин эксперимента на 7-13%.

Доя характеристики действия фармакологических средств на кровообращение головного мозга при различных патологических состояниях важное значение имеют данные об их влиянии на устойчивость животных к различным видам гипоксий. Нами было изучено влияние натрия селенита б дозе 50мкг/кг и токоферола ацетата в дозе 50 мг/кг, а также их комбинации в

102 тех же дозах ка выживаемость животных в условиях гипоксической гипоксии. Получены результаты, согласно которым в условиях нормобарической гипоксии с гиперкапнией при однократном профилактическом введении (за 30 минут) до начала эксперимента натрия селенит (50мкг/кг), токоферола ацетат (50 мг/кг) и их комбинация в аналогичных дозах достоверно увеличивают продолжительность жизни животных. Так, при предварительном введении натрия селенита средняя продолжительность жизни мышей увеличилась на 10,5% по отношению к контролю. Более выраженный антигипоксический эффект оказывал токоферола ацетат: продолжительность жизни животных увеличилась на 13,6%. Совместное введение натрия селенита и токоферола ацетата повышало устойчивость белых крыс к данному виду гипоксии в среднем на 17,3% в сравнении с контролем. При длительном превентивном введении натрия селенита (в течение 14 дней) средняя продолжительность жизни мышей увеличилась на 13,2% по отношению к контролю. Менее выраженный антигипоксический эффект оказывал токоферола ацетат: продолжительность жизни животных увеличивалась на 7,8%. Совместное одновременное введение натрия селенита и токоферола ацетата увеличивало продолжительность жизни белых мышей на 43,1%.

В патогенезе органических повреждений головного мозга ведущее значение принадлежит циркуляторным расстройствам. Представляло интерес изучить влияние исследуемых соединений на устойчивость белых крыс к циркуляторной гипоксии, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий. Натрия селенит и витамин Е вводили внутрибрюшинно в дозах 50мкг/кг и 50 мг/кг, соответственно, в течение 14 дней и за 30 мин до ишемии. Результаты контрольной серии опытов показали, что большинство животных погибло в течение первых суток. Через 72 часа после операции в контрольной группе число выживших животных составило 25%. Натрия селенит обладает выраженной антигипоксической активностью. Выживаемость животных на 2-3 сутки составила 62,5%. В опытах с

103 предварительным введением токоферола ацетата через 72 часа наблюдения выжило 4 крысы из 8 и выживаемость составила 50%. Комбинированное введение изучаемых соединений в тех же дозах повышало выживаемость животных до 75%. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что оба соединения обладают выраженной антигипоксической активностью: увеличивают процент выживаемости животных при циркуляторной гипоксии. Особенно эффективным является совместное введение натрия селенита и витамина Е.

Учитывая антигипоксическую активность исследуемых соединений при циркуляторной гипоксии мозга, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий, представляло интерес изучить их действие на устойчивость организма белых крыс к критическим гравитационным перегрузкам, краниокаудальный вектор которых вызывает нарушение кровоснабжения мозга, протекающее по типу ишемичеекой гипоксии. Величину гравитационных перегрузок подбирали так, чтобы летальность животных составляла примерно 50% (18 g в течение 5 мин). Оба вещества и их комбинация вводились внутрибрюшинно в течение 14 дней профилактически и в день эксперимента за 30 минут до перегрузок в дозах: натрия селенит 50 мкг/кг, токоферола ацетат 50 мг/кг. В результате исследований было установлено, что в контрольной группе погибли 7 крыс из 12 (выживаемость 41,7%). При длительном профилактическом введении натрия селенита из 12 крыс погибло 4, выживаемость составила 66,7 %. Токоферола ацетат проявлял менее выраженный защитный эффект в сравнении с таковым у натрия селенита, из 12 выжило 6 крыс, выживаемость составила 50%. При совместном профилактическом введении натрия селенита и токоферола ацетата выжили все 12 крыс (100% выживаемость). Таким образом, в результате проведённых исследований было установлено, что натрия селенит (50мкг/кг) и токоферола ацетат (50мг/кг) при раздельном курсовом введении значительно увеличивают устойчивость животных к гравитационным перегрузкам в кранио-каудальном направлении. Еще более

104 выраженным нейропротекторным действием обладает комбинация исследуемых соединений в тех же дозах. По литературным данным повышение выносливости вызывают лекарственные препараты, оказывающие вазопрессорный эффект. Как показали наши исследования на интактных животных, натрия селенит и токоферола ацетат при совместном введении повышают уровень АД и, по-видимому, способны удерживать системное артериальное давление на исходном уровне при действии на организм гипергравитаций.

Для уточнения механизма антигипоксического действия исследуемых веществ изучено их влияние на кровоснабжение головного мозга в постишемическом периоде. Тотальную ишемию мозга воспроизводили путем двухсторонней окклюзии сонных артерий в течение 10-12 мин при снижении САД до 40 мм рт.ст. После ишемии и реинфузии крови в артериальную систему животного наблюдали фазные изменения мозгового кровотока. В контрольных опытах в течение 15-20 мин после ишемии мозга наблюдалось увеличение МК. На 5 минуте МК достоверно был выше исходного уровня в среднем на. 27,8%. К 20 минуте МК восстанавливался, и в дальнейшем отмечалось его снижение. На 30 минуте степень снижения МК составила 12,7%, а к концу наблюдения (через 60 мин) - 43,7 ± 1,9%.

Следовательно, в условиях глобальной ишемии мозга ярко проявляются постишемические цереброваскулярные феномены: I фаза реактивной гиперперфузии - выраженное повышение МК и П фаза гипоперфузии (отсроченного невосстановления кровотока). Натрия селенит в дозе 50 мкг/кг способствовал сохранению параметров МК в период ишемии, а также сглаживанию выраженности стадий постишемической гипер - и гипоперфузии в реперфузионньш период. Одинаковой по характеру и величине была реакция сосудов мозга на токоферола ацетат в дозе 50мг/кг. Предварительное (за 30 мин до окклюзии сонных артерий) введение комбинации исследуемых соединений в указанных дозах оказывало еще более выраженный защитный эффект в условиях тотальной ишемии мозга.

105

Так, через 5 минут после ишемии на фоне исследуемой комбинации МК был практически на уровне исходного, а в контрольных опытах - выше на 27,8%. Начиная с 15 и по 60 минуту наблюдения степень снижения МК колебалась в пределах 9-11% и к концу экспериментов составила 8,8%, что в 3,5 раза меньше, чем в контроле. Полученные данные свидетельствуют о выраженном церебропротекторном действии комбинации двух известных антиоксидантов.

Общая гипотензия, характерная для постишемического периода, несколько усиливалась при предварительном введении натрия селенита и токоферола ацетата и не изменялась на фоне исследуемой комбинации. При расчёте сопротивления сосудов мозга (ССМ) было установлено, что в постишемическом периоде в контрольных опытах отмечалось двухфазное изменение этого показателя: сначала наблюдалась вазодилататорная реакция, а затем выраженный вазоконстрикторный эффект. Исследуемые соединения и их комбинация значительно уменьшали степень проявления вазоконстрикции: сопротивление сосудов мозга при введении натрия селенита (50мкг/кг) к концу эксперимента было в 2 раза ниже, чем в контрольной серии опытов, а токоферола ацетат (50мг/кг) и комбинация натрия селенита с токоферола ацетатом в аналогичных дозах уменьшали ССМ в 3 раза.

Оценку влияния натрия селенита, токоферола ацетата и их совместного введения на двигательную, ориентировочно-исследовательскую и эмоциональную активность животных проводили в тесте «открытое поле».

Нами установлено, что при профилактическом введении исследуемых антиоксидантов и их комбинации достоверных изменений психоневрологического статуса у интактных животных не отмечалось.

В постишемическом периоде в контрольных опытах отмечалось снижение двигательной активности, о чём свидетельствует уменьшение числа пересечённых секторов, снижение познавательной активности крыс (уменьшение числа вертикальных стоек) и их эмоционального состояния

106 уменьшение актов груминга и числа дефекаций). Эти нарушения наиболее ярко проявлялись в течение первых дней после ишемии, а в последующие сутки несколько ослабевали. Профилактическое введение натрия селенита повышало горизонтальную двигательную активность крыс в постишемическом периоде: достоверно увеличивалось число пересечённых животными секторов. Изучение ориентировочно-исследовательского поведения в условиях методики «открытого поля» показало, что в 1 -е сутки после операции у крыс, перенесших гипергравитацию, оно практически не изменялось под влиянием исследуемых соединений при их самостоятельном введении. Однако на 4-7-й день после нагрузки заметно увеличивалось число вертикальных стоек, а также число стереотипных движений, особенно на фоне токоферола ацетата и не изменялось количество дефекаций по сравнению с контролем, что свидетельствует о некотором повышении исследовательской и эмоциональной активности. Токоферола ацетат повышал количество пройденных центральных секторов.

Совместное введение натрия селенита и токоферола ацетата несколько снижало акты груминга у крыс в постишемическом периоде. Лучшим выражением уменьшения страха у животных является посещение ими центрального сектора, которое в опытах с профилактическим введением комбинации исследуемых соединений постепенно становилось более интенсивным от опыта к опыту.

Таким образом, обобщая полученные результаты можно утверждать, что натрия селенит и токоферола ацетат представляют несомненный интерес в качестве средств для коррекции церебральных ишемий. Однако комбинированное введение двух известных антиоксидантов в минимальных терапевтических дозах оказалось более эффективным в условиях острой ишемии мозга, чем монотерапия каждым компонентом в отдельности. Вероятно, одновременное применение токоферола ацетата потенцирует нейропротекторный эффект селена. Это согласуется с данными Кудрина А.Н. и соавт.(1994), согласно которым комбинированное введение натрия

107 селенита и токоферола ацетата оказывает выраженное торможение перекисного окисления липидов и протекторное действие на мембраны кардиомиоцитов. Значительный церебропротекторный эффект исследуемой комбинации, по-видимому, связан с участием селена в активации антиоксидантной системы посредством энзима глутатионпероксидазы, активным центром которого является этот элемент. Антиоксидантный эффект селена приводит к стабилизации мембран, оказывая тем самым положительное влияние на глубину повреждения клеток мозга в условиях экспериментальной патологии. Одновременное применение токоферола ацетата усиливает это влияние селена и, по-видимому, восстанавливает разбалансированную систему антиоксидантной защиты ишемизированных тканей.

Включение в комплексную терапию натрия селенита в комбинации с токоферола ацетатом является патогенетически обоснованным и позволяет существенно расширить возможности медикаментозной терапии острых нарушений мозгового кровообращения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Буй, Тхи Минь Тху, 2009 год

1. Гусев, Е.И. Ишемия головного мозга / Е.И. Гусев, В.И Скворцова. — М.: Медицина, 2001. 250 с.

2. Профилактика нарушений мозгового кровообращения (Пособие для врачей) / Н.В.Верещагин и др..- М.: НИИ неврологии РАМН, 2003. 28 с.

3. Суслина, З.А. Инсульт: диагностика, лечение, профилактика / З.А. Суслина, М.А. Пирадова. М.: МЕДпресс-информ, 2008.- 288 с.

4. Суслина, З.А. Профилактика повторного инсульта. Практические рекомендации / З.А. Суслина, А.В. Фонякин, Л.А. Гераскина. М: НИИ неврологии РАМН, 2007. - 48 с.

5. Джибладзе, Д.П. Патология сонных артерий и проблема ишемического инсульта / Д.Н. Джибладзе. М.: НИИ неврологии РАМН, 2002. - 207 с.

6. Скворцова, В.И. Лечение и профилактика ишемического инсульта / В.И.Скорцова, Л.В.Стаховская // Диагностика и терапия в клинике внутренних болезней: лекции для практикующих врачей, 10 Рос. нац. конгр. -М., 2004. С. 142-160.

7. Антиоксиданты как нейропротекторы при ишемическом инсульте / О.В. Поварова и др..// Эксперим. и клинич. фармакология. 2003. - Т.66, №3. -С. 69-73.

8. Федин, А.И. Современная концепция патогенеза и лечения острой ишемии мозга / А.И. Федин // Лечение ишемии мозга: материалы науч.-практич. конф. 10 дек. 2001 г . — М., 2001. — С. 6-12.

9. Зайцев, В.Г. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия / В.Г. Зайцев, О.В. Островский В.И. Закревский // Эксперим. и клинич фармакология.-2003Т. 66, №4. С.66-70.

10. Кузнецов, Г.П. Клиническое значение селенодефецита у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями самарского региона и его коррекции препаратом «Селена» / Г.П Кузнецов, П.Л. Лебедев //110

11. Эксперим. и клинич. фармакология. 1995. - Т.58, №5. - С. 26-28.

12. Кудрин, А.Ы Хронофармакология и хронофармация / А.Н.Кудрин // Поиск, исследования, эксперимент. 1994.-№ 10.- С.17-24.

13. Николаев, С.М. Влияние селенита натрия на течение экспериментального инфаркта миокарда / С.М. Николаев // Всерос. съезд фармацевтов (3; 1975; Свердловск): материалы. Свердловск, 1975. - С. 346-347.

14. Савина, М.Д. Перспектива поиска антиаритмических средств с противоишемичееким эффектом, среди селенсодержащих веществ / М.Д. Савина, А.Н. Кудрин // Фармация. 1992. - Т.12, №1. - С 39 - 46.

15. Stryer, L. Biochemistry / L. Stryer 4th ed.- San Francisco: Freeman, 1995. -P. 731.

16. Tarp, U. Selenium in rheumatoid arthritis: a review / U.Tarp // Analist. 1995. -Vol. 120.-P. 877-881.

17. Arthur, J.R. New metabolic roles for selenium / J.R. Arthur // Proc. Nutr. Soc. -1994.-Vol. 53.-P 615-624.

18. Балуева, T.B. К вопросу о центральной норадренергической регуляции мозгового кровообращения / Т.В. Балуева // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1983. - №7. - С. 913-917.

19. Мирзоян, Р.С. Нейрохимический контроль мозгового кровообращения / Р.С. Мирзоян // Фармакология и токсикология. 1983. - №4. - С. 5-15.

20. Москаленко, Ю.Е. Реактивность мозговых сосудов: физиологические основы, критерии оценки, информативная значимость / Ю.Е. Москаленко II Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1986. - Т. 72, №8. - С. 1115-1122.

21. Мчедлишвили, Г.И. Физиологические механизмы регулирования микроциркуляции в коре мозга / Г.И. Мчедлишвили, Д.Г. Бералидзе //

22. Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1984. - Т. 70, №11. - С. 1476-1483.

23. Siesje, В. К. Mechanisms of ischemic damage to neurons, glial cells and vascular tissue / В. K. Siesje, Maj-Lie. Smith // Regul. Mech. Neuron. Vessel Commun. Brain: Prog. NATO Adv. Res. Workshop, Salo, sepr. 3-8, 1988. -Berlin, 1989. P. 209-223.

24. Сравнительная характеристика некоторых гемодинамических и биохимических показателей постишемического периода в зависимости от режимов аутогемоперфузии мозга / М.Д Гаевый и др. // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1991. - №77. - С. 76-80.

25. Burnstoer, X. Comprative studies of purinergic nerves / X. Bumstoer // J. Exp. Zool. 1975. - Vol. 194, № 1. -P. 103-133.

26. Демченко, И.Т. Метаболические факторы регуляции / И.Т. Демченко // Физиология кровообращения. Регуляция кровообращения. JL: Наука, 1986.-С. 167-193.

27. Mechanisms of drug-induced vasodilatation / Gurney Alison M. et al. // J. Pharm. and Pharmacol. 1994. - Vol. 46, № 4. - P. 242-251.

28. Москаленко, Ю.Е. Мозговое кровообращение: физико-химические приемы изучения / Москаленко Ю.Е., Бекетов А.И., Орлов Р.С. Л.: Наука, 1988. - 159 с.

29. Бархатова, В.П. Иейротрансмиттерная организация двигательных систем головного и спинного мозга в норме и патологии / В.П. Бархатова, И.А. Завалишин // Журн. неврологии и психиатрии. 2004. - №8. - С. 77-82.

30. Кулинский, В.И. Предача и трансдукция гормонального сигнала в разные части клетки / В.И. Кулинский // Соросовский образовательный журн. -1997. -№8.-С. 14-19.

31. Ткачук, В.А. Молекулярные механизмы нейроэндокринной регуляции / В.А. Ткачук // Соросовский образовательный журн. 1998. - №6. - С. 1620.

32. Скулачев, В.П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода / В.П. Скулачев //112

33. Соросовский образовательный журн. 2001. - Т. 7, №6. - С. 4-10.

34. Ковалев, Г.В. Поиск веществ, активирующих ГАМК-ергическую систему, новое направление в создании антигипертензивных средств / Г.В. Ковалев, И.Н. Тюренков // Фармакология и токсикология. 1989. -№1. -С. 5-11.

35. Тюренков, И.Н. Роль гамкергической системы мозга в регуляции кровообращения / И.Н. Тюренков, В.И. Перфилова // Эксперим. и клинич. фармакология. 2001. - Т. 664, №6. - С. 68-72.

36. Baranano, D.E. Atipical neural messengers / D.E. Baranano, C.D. Ferris, S.H. Snyder // Treds Neurosci. 2001. - Vol. 24. - P. 99-106.

37. Bunin, M.A. Paracrine neurotransmission in the CNS: involment of 5-HT i M.A. Bunin, R.M. Wightman // Treds Neurosci. 1999. - Vol. 22. - P. 377382.

38. Кулинский, В.И. Нейротрансмиттеры и головной мозг / В.И. Кулинский // Соросовский образовательный журн. 2001. - Т. 7, №6. - С. 11-16.

39. Плотников, М.В. Антиокислительные эффекты антигипоксантов при ишемии мозга / М.В. Плотников, Е.А. Кобзева, Т.М. Плотникова // Бюл. экспирим. биологии и медицины. 1992. - №5. - С. 504-506.

40. Салалыкин, В.И. Гипоксия головного мозга (клиника и лечение) / Салалыкин В.И., Арутюнов В.В. -М.: Медицина, 1978. 196 с.

41. Mellander, S. Myogenic mechanisms in local vascular control / S. Mellander //Int. Congr. Physiol. Sci. "31,1989, Helsinki". Oulu, 1989. - P. 7-8.

42. Березовский, B.A. Гипоксия и индивидуальные особенности организма / В.А. Березовский Киев: Наук, думка, 1978. - 279 с.

43. Динамика развития постишмических цереброваскулярных феноменов в условия перфузии мозговых сосудов стабильным объемом крови / М.Д. Гаевый и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1982. - Вып. 4. -С. 61-64.

44. Сравнительная характеристика некоторых гемодинамических и биохимических показателей постишемического периода в зависимости от113режимов аутогемоперфузии мозга / М.Д. Гаевый и др. // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1991. - №77. - С. 76-80.

45. Иванов, К.П. Успехи и спорные вопросы в изучении микроциркуляции / К.П. Иванов // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1995. - Т. 81, №6. -С. 1-21.

46. Неретин, В.Я. Гормональная регуляция мозгового кровотока / В.Я Неретин, С.В. Котов, Г.С. Молчанова // Журн. невропатол. и психиатрии. 1990. - Т. 90, №7. - С. 41-43.

47. Митагвария, Н.П. Нейрогенный контроль регуляции мозгового кровообращения и сопряженность кровоток-метаболизм-функция / Н.П. Митагвария // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1989. — Т. 75, №11. -С. 1473-1480.

48. Karninski, L.P. Potential role of С1-НСОЗ exchange in regulating vascular tone / L.P. Karninski // Hypertension. 1989. - Vol. 15, № 15 - P. 104-106.

49. Селен в организме человека / В.А. Тутельян и др. М.: РАМН, 2002. -224 с.

50. Сидельникова, В.Д. Геохимия селена в биосфере / В.Д. Сидельникова // Проблемы биогеохимии и геохимической экологии. М.: Наука, 1999. -Т. 23.- С. 81-99.

51. Ермаков, В.В. Геохимическая экология как следствие системного изучения биосферы / В.В. Ермаков // Проблемы биогеохимии и геохимической экологии. -М.: Наука, 1999. Т. 23. - С 152-182.

52. Artbur, J.R. Roles of selenium in type I iodithyronine 5'-deiodinase and in thyroid hormone and iodine metabolism / Artbur J.R. Becrett G.J. // Selenium in biology and human health / Ed. R.F.Burk. New York: Springer-Verlag, 1994.-P. 93-115.

53. Crystal structure of formate dehydrogenase H: Catalysis involving Mo, molybdopterin, selenocysteine and an Fe4S4 cluster / J.C. Boyington et al. // Science 1997. - Vol. 275. - P. 1305-1308.

54. Molecular biology of selenium and its role in human health / В J. Lee et al.114

55. Mol. Cells. 1996. - Vol. 6. - P. 509-520.

56. Testosterone mediates expression of the selenoprotein PHGPx by induction of spermatogenesis and not by direct transcriptional gene activation / M. Maiorino et al. // FASEB J. 1998. - Vol. 12. - P. 1359-1370.

57. The selen-mediated de-ionisation of iodophenenols: A selenium model for the mechanism of 5-thyronine de-iodinase / C. Beck, S.B. Jensen, J. Reglinski // Thyroid. 1994. - Vol. 4. - P. 1353-1356.

58. Gladysbev, V.N. DL-selenoprotein containg proteins in mammals / V.N. Gladysbcv // J. Biomed. Sci. 1999. - Vol. 6, N 3. - P. 151-166.

59. Cloning and expression of the human selenium donorprotein, the homolog of prokaryotic / M.J. Berri. et al. // FASEB J. 1995. - Vol. 9. - P. 286

60. Salbe, A.D. Selenium content of rat hair nails and other tissues is affected by concurrent exposure to toxic elements / A.D. Salbe, V.C. Morris, O.A. Levander // Nutr. Res. 1993. - Vol. 13. - P. 31-36.

61. Human 74Se. selenomethionine metabolism: a kinetic model / C.A. Swanson [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. 1991. - Vol. 54. - P. 917-926.

62. Evidence for intestinal release of absorbed selenium in a form with hepatic extraction / T. Kato et al. // Am. J. Physiol. 1992. -Vol. 262. - P. G.854-G858.

63. Direct measurement of selenium absortion in vivo: triple-lumen gut perfusion in the concious dog / P.G. Reasbeck et al. // Proc. New Zealand Workshop on Trace Elements, Dunedin, 1981. P. 107. 64.

64. Combs, G.F. Selenium in nutrition / G.F. Combs / Encyclopedia of human biology.- 2nd ed.- New York: Acad. Press, 1997. Vol. 7. - P. 743-754.

65. Use of selenium concentration in whole blood, serum, toenails or urine as a surrogate measure of selenium intake / M.P. Lonnecker et al. // Epidmiology. 1996.-Vol. 7.-P. 384-390.

66. Jobnson, R.A. An accidental case of cardiomyopathy and selenium deficiency / R.A. Jobnson, S.A. Bker, J.T. Fallon //N. Engl. J. Med. 1981. -Vol. 304. - P. 1210-1212.

67. Голубкина, И.А. Селен в сыровотки крови и опухоли у больных с доброкачественными и злокачественными новообразованиями / Н.А. Голубкина, М.Д., Алиев, И.Е. Кушлинский // Вопросы мед. химии. 1995. -Т. 41, №4.-С. 50-54.

68. Противоопухолевая активность производных селенабициклонида / Б.М. Бутин и др. // Хим.-фармац. журн. 1995. - Т. 29, №8. - С. 18-19.

69. Синтез и радиозащитный эффект производных тиазиазолов, тиадизолинов и их селеновых аналогов / Л.П. Петров и др. // Хим.-фармац. журн. 1994. - Т. 28. №2 - С. 19-22.

70. Taylor, E.W. Selenium and cellular immunity/ E.W. Taylor // Biol. Trace. Res. 1995. - Vol. 49. - P. 85-89.

71. Кудрин, A.H. Фармакотерапия препаратами селена экспериментального гепатита / Кудрин A.IL, Левшин Б.И., Мехтиев М.А. Баку, 1982. - 221 с.

72. Венцславская, Т.А. Противоаритмическая активность нового селенопроизводного препарата / Т.А. Венцславская, Л.Л. Стажадзе, В.В. Коржова // Фармакология и токсикология. 1984. - №2. - С. 38 - 41.

73. Selenium glutathione peroxidase, and platelet functions / D. Vitoux et al. // Ann. Biol. Clin. 1996.-Vol. 54. - P. 181-187.

74. Гулиева, С.А. О сдвигах в системе гемостаза под действием селенита натрия / С.А.Гулиева, З.М. Кулиева // Селен в биологии: материалы 3 науч. конф.-М., 1981.- С.98-102.

75. The enzyme glutathione peroxidase in arachidonic acid metabolism of human platelets / G. Guidi et al. // J. Lab. Clin. Med. 1984. - Vol. 104. - P. 574577.

76. Vader, C.R. Pulmonary prostaglandin metabolism during normobaric hyperoxia / C.R. Vader, M.M. Matbias, C.L. Scbatte // Prostagland. Med. -1981.-Vol. 6.-P. 101-105.

77. Матершов, C.B, Изучение влияния селенсодержащих соединений на системную гемодинамику и мозговой кровоток: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 14.00.25 / Матершов С. В.- Пятигорск, 2005. 21 с.

78. Левшин, Б.И. Влияние препаратов селена на некоторые показатели белкового жирового и углеводного обмена у животных с токсическим- гепатитом / Б.И. Левшин // Актуальные вопросы фармации: сб. науч. тр. Ставрополь, 1974. - Вып.2. - С. 363 - 364.

79. Djujic, I.S. Redistribution of selenium among tissues effected by.radiation / I.S. Djujic, O. Jozanov-Stankov // Biol. Trace Elem. Res. 1992. - Vol. 33. - P. 197-204.

80. Effect on an aqueous extract of selenium-enriched garlic on in vitro markers and «in vivo, efficacy in cancer prevention / J. Lu et ah. // Carcinogenesis. -1996. Vol. 17. - P. 1903-1907.

81. Романовский, B.E. Витамины и витаминотерапия / В. Е. Романовский, Е. А. Синькова. Феникс. - 2001. - 320с.

82. Оковитый, С.В. Клиническая фармакология антиоксидантов / С.В. Оковитый // ФАРМнндекс-Практик, 2003. вып. 5. - С. 85-111.

83. Иммунофармакология микроэлементов / А.В. Кудрин и др. М.:Изд-во КМК, 2000.-С. 114-119.

84. Mabile, L. Moderate supplementation with natural alpha-tocopherol decreases platelet aggregation and low-density lipoprotein oxidation / L. Mabile, K.R. Bruckdorfer, C. Rice-Evans // Moderate Atherosclerosis. 2000. - Vol.147, № 1. -P.77-85.

85. Devaraj, S. Alpha tocopherol supplementation decreases serum C-reactive117protein and monocyte interleukin-6 levels in normal volunteers and type 2 diabetic patients / S .Devaraj, I. Jialal // Free Radic Biol. Med. 2000. - Vol. 29, № 8. — P.2-790.

86. The suppression of ornithine decarboxylase expression and cell proliferation at the promotion stage of lung tumorigenesis in mice by alpha-tocopheryloxybutyric acid / T. Yano et al. // Biochem Pharmacol. 2001. -Vol. ul, №9.-P.81-1177.

87. Мясоедова, E.E. Применение альфа-токоферола для коррекции нарушений системы красной крови (эритрон) при острой нитритной интоксикации у крыс / Е.Е. Мясоедова, С.Б. Назаров // Экспер и клинич. фармакология . 2003. - Т. 66, №5. - С. 35-39.

88. Иванова А.С. Характеристика защитного действия а-токоферола по показателям эритроцитарной системы при длительной нитритной интоксикации / А.С.Иванова, С.Б. Назаров // Эксперим. и клинич. фармакология. 2004. - Т. 67, №5. - С. 38-40.

89. Vitamin Е status in a group of elderly pople from Madrid. / A. M. Requejo et al. // J. Nutr. Health Aging. 2002. - Vol.6, №1. - P.4-72.

90. Chandra, R.K. Effect of vitamin and trace-element supplementation on cognitive function in elderly subjects / R.K. Chandra // Nutrition. 2001. -Vol.17, №9.-P. 12-709.

91. Practice parameter: management of dementia (an evidence-based review). Report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology / R.S. Doody et al. // Neurology. 2001. - Vol.56, №9. - P.66-1154.

92. Effects of long-term supplementation with moderate pharmacologic doses of vitamin E are saturable and reversible in patients with type 1 diabetes. / W. Engeleman et al. // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - Vol.72. - P. 1142-1149.

93. Gonzalez-Gross, M. Nutrition and cognitive impairment in the elderly. / M. Gonzalez-Gross, A. Marcos, K. Pietrzik. // Br. J. Nutr. 2001. - Vol.86, №3. -P.21-313.

94. A controlled trial of selegiline, alpha-tocopherol, or both as treatment for Alzheimer's disease. The Alzheimer's Disease Cooperative Study. / M. Sano et al. //N. Engl. J. Med. 1997. - Vol.336, №17. -P.22-1216.

95. Prasad, K.N. Multiple antioxidants in the prevention and treatment of Parkinson's disease. / K.N. Prasad, W.C. Cole, B. Kumar // J. Am. Coll. Nutr. 1999. - Vol.l8№5. - P.23-413.

96. Разнонаправленное влияние антиоксидантов на тревожность крыс Вистар и OXYS / Н.Г. Колосова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2006. Т. 141, №5. - С. 685-688.

97. The Heart Outcomes Preventions Evaluation Study Investigators. Vitamin E supplementation and cardiovascular events in high-risk patients // New Engl. J. Med. 2000. - Vol.342. - P. 154-160.

98. Secondary prevention with antioxidants of cardiovascular disease in end-stage renal disease (SPACE): randomized placebo-controlled trial / M. Boaz et al. // Lancet. — 2000. — № 356. — P. 1213-1218.

99. Secondary prevention with antioxidants of cardiovascular disease in endstage renal disease (SPACE): randomised placebo-controlled trial / M. Boaz et al. // Lancet. 2003. - Vol. 56. - P.8-1213

100. Vitamin E supplementation and cardiovascular events in high-risk patients. The Heart Outcomes Prevention Evaluation Study Investigators / S.Yusuf etal. // J. Med. 2000.- Vol.342.- P. 154— 160

101. Alpha-tocopherol supplementation decreases the oxidative susceptibility of LDL in renal failure patients on dialysis therapy. / K.N. Islam et al. // Atherosclerosis. 2000. - Vol.150, №1. - P.24-217.

102. Collaborative Group of the Primary Prevention Project. Low-dose aspirin and vitamin E in people at cardiovascular risk: a randomized trial in general practice // Lancet.- 2001.- Vol.357.- P.89-95.

103. Use of antioxidant vitamins for the prevention of cardiovascular disease: meta-analysis of randomised trials / D.P. Vivekananthan et al. // Lancet.-2003.- Vol.361.- P.23-2017.

104. Stephens, N.G. Randomised controlled trial of vitamin E in patients with coronary disease: Cambridge Heart Antioxidant Study Parsons // N.G. Stephens // Lancet. 1996. - Vol.347. - P.6-781.

105. Влияние альфа токоферола и селенита натрия на изменение содержания АТФ и скорости синтеза РНК в ишемизированном миокарде / Е.И.Красова и др. // Фармакология и токсикология - 1979. - №3. - С. 251-254.

106. Влияние убихинона Qio и витаминов антиоксидантов на свободнорадикальное окисление фосфолипидов биомембран печени крыс / А.К. Тихазе и др. // // Бюл. экспирим. биологии и медицины. - 2005. -Т. 140, №8.-С. 146-149.

107. Экспериментальная и клиническая оценка антиокислительной эффективности многокомпонентного антиоксидантного препарата / В.З. Ланкин и др. // Терапевт, арх. 2004.- №8. - С. 10-15.

108. Влияние комбинации витаминов-антиоксидантов на гемостаз при экспериментальной гипероксидации / А.Ш. Бышевский и др. II Эксперим. и клинич. фармакология. 2005. - Т.68, №3. - С. 34-36.

109. Виноградова, Л.Ф. Антиоксидантная активность убихинона-9 и его комбинаций с витамином Е и селенитом натрия при токсическом поражении печени / Л.Ф. Виноградова, Е.В. Харлицкая, Ж.А. Мирзоян // Фармакология и токсикология. 1989. - T.LII, №1. - С.53-56.

110. Влияние селенита натрия и а-токоферола на микроциркуляцию при массивной кровопотере у собак / И.М. Швецов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология . 2004. - Т. 67, №3. - С. 51-55.

111. Микронутриенты в питании здорового и больного человека II В.А. Тутельян и др.. М.: Колос, 2002. - 423 с.

112. Демченко, И.Т. Измерение органного кровотока с помощью водородного клиренса / ИТ. Демченко II Физиол. журн. -1981. Т.67, №1. -С. 178-183.

113. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П. Фисенко и др. М.: Ремедиум, 2000. - С. 220 - 224.

114. Гаевый, М.Д. Физиология, патофизиология и фармакология мозгового кровообращения / М.Д. Гаевый: Ереван, 1984. - С. 40-41.

115. Многократные измерения параметров системной гемодинамики у бодрствующих крыс / О.С. Медведева и др. // Физиол. журн. СССР. -1986. Т.72, №2. - С. 253-256.

116. Маркель, А.Л. К оценке основных характеристик поведения крыс в тесте "открытое поле" / А.Л. Маркель // Журн. высш. нервн. деятельности. 1981. -Т.31, вып. 2. — С.433-443.

117. Маркель А.Л. Метод комплексной регистрации поведенческих и вегетативных реакций у крыс при проведении теста "открытое поле" / А.Л. Маркель, Р.А. Хусаинов // Журн. высш. нервн. деятельности. 1976. - Т.31, вып. 6. - С.345-353.

118. Маркель, А.Л. Факторный анализ поведения крыс в тесте открытого поля / А.Л. Маркель, Ю.К. Галактионов, В.М. Ефимов // Журн. высш. нервн. деятельности им. Павлова. 1988. - Т.ЗЗ, вып.5. - С. 855-863.

119. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии / Сернов Л.Н., Гацура В.В. М., 2000. - 352 с.

120. Гацура, В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ / В.В. Гацура. М.: Иностр. лит., 1974.142 С.

121. Буреш, Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж. П. М.: Высш. шк., 1991.-398 с.

122. Гаевый, М.Д. Использование гравитационных перегрузок в качестве скрининговой методики исследования новых биологически активных веществ / М.Д. Гаевый // Фармакология и токсикология. 1986. - №3. - С. 101 -102.