Влияние комплекса фитогеников на процессы пищеварения и образование метана в организме овец тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Колесник Никита Сергеевич

• Колесник Никита Сергеевич
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Колесник Никита Сергеевич

2. Основная часть

2.1. Обзор литературы

2.1.1. Физиологические аспекты метаногенеза

2.1.1.1. Механизм метаногенеза

2.1.1.2. Типы метаногенов

2.1.2. Стратегии, направленные на снижение выделения метана

2.1.2.1. Отбор животных с низким уровнем выделения метана

2.1.2.2. Влияние качества, состава основных кормов, структуры рационов на выделение метана в организме жвачных

2.1.2.3. Кормовые добавки, способствующие снижению метанообразования в рубце

2.2. Собственные исследования

2.2.1. Материалы и методы исследований

2.2.2. Результаты собственных исследований

2.2.2.1. Исследования in vitro

2.2.2.2. Исследования in vivo

2.2.2.2.1. Анализ рационов кормления животных при проведении эксперимента in vivo

2.2.2.2.2. Состав и питательность рациона

2.2.2.2.3. Показатели рубцового пищеварения

2.2.2.2.4. Микробиологические исследования содержимого желудочно-кишечного тракта

2.2.2.2.5. Исследования переваримости и использования питательных веществ кормов рационов

2.2.2.2.6. Выделение парниковых газов

2.2.2.2.7. Изучение биохимического статуса животных

2.2.2.2.8. Изучение антиоксидантного статуса

2.2.2.2.9. Изучение иммунного статуса

2.2.2.2.10. Изучение интенсивности роста овец

2.2.2.2.11. Экономическая эффективность использования фитогенных кормовых добавок

2.3. Обсуждение результатов исследований

3. Заключение

3.1. Выводы

3.2. Рекомендации производству

3.3. Перспективы дальнейшей разработки темы

Список сокращений

4. Список литературы

Приложение А - заявка на патент Российской Федерации

Приложение Б - акт о проведении физиологического опыта

Приложение В - динамика изменения уровня углекислого газа в респирационной камере

Приложение Г - динамика изменения температуры и влажности в респирационной камере

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние комплекса фитогеников на процессы пищеварения и образование метана в организме овец»

1. Введение

Актуальность темы. Около 14-18 % парниковых газов (ПГ), образовавшихся в результате антропогенного влияния в мире, приходится на долю животноводства. К таким газам относят прежде всего углекислый газ и метан (порядка 40% от общего количества парниковых газов, приходящихся на животноводческую отрасль) [3,92,179,186]. На долю жвачных животных приходится около 80 % парниковых газов, выделяемых домашними животными. На сегодняшний день углекислый газ является основным парниковым газом, обладающим глобальным потенциалом потепления (ГПП), равным 1. Метан, в свою очередь, имеет ГПП по различным оценкам в диапазоне 21-28, что подчеркивает его значимость как парникового газа в контексте антропогенного изменения климата. «Период полураспада метана составляет 11 лет, а его присутствие в атмосфере Земли может сохраняться более 100 лет [3,94,170]. Жвачные животные в процессе ферментации в сложном желудке выделяют метан в атмосферу. Например, корова может выделить за сутки от 200 до 500 л метана» [3,24]. Кроме экологического аспекта, образование метана является энергозатратным механизмом для организма животного. С образованием этого газа теряется до 12 % валовой энергии рациона, которая может использоваться на образование продукции [47,67,88].

Согласно Указу Президента Российской Федерации №2 145 от 28 февраля 2024 года в ближайшее десятилетие одним из приоритетов научно-технологического развития следует считать направления, позволяющие получить значимые и научно-технические результаты, обеспечивающие «объективную оценку выбросов и поглощения климатически активных веществ, снижение их негативного воздействия на окружающую среду и климат, повышение возможности качественной адаптации экосистем...»

В связи с этим становятся актуальными исследования, которые были бы направлены на развитие агротехнологий, способствующих снижению выделения ПГ жвачными животными без потери их продуктивных качеств и эффективному использованию кормов рационов.

Основными факторами, оказывающими влияние на выделение метана жвачными животными, являются:

• уровень потребления кормов;

• тип углеводов в рационе;

• методы подготовки кормов к скармливанию;

• применение различных кормовых добавок, выступающих в роли регуляторов микробиальных процессов [3,41].

За последние десятилетия было изучено большое количество кормовых добавок, применение большинства из которых негативно отражается на процессах пищеварения и усвоение питательных веществ кормов и дороги по стоимости [34,43,80,160].

Альтернативными алиментарными факторами могут служить натуральные растительные продукты, которые часто имеют невысокую стоимость и безопасны для окружающей среды. Эти соединения способны не только подавлять образование метана, но и обладают широким спектром благоприятного воздействия на пищеварительные и обменные процессы, здоровье животных [32,33].

Среди фитогенных кормовых добавок, способствующих снижению газообразования, важное значение приобрели танины, которые, как известно, ингибируют рост метаногенов, образуют комплексы с микробными ферментами или клеточными стенками, тем самым снижая доступность питательных веществ для микроорганизмов рубца [13,45,168]. Среди вторичных метаболитов растений важное значение приобрели также флавоноиды, проявляющие противовоспалительные, антиоксидантные и антимикробные свойства. Эффекты этих соединений (в частности кверцетина и дигидрокверцетина) в отношении микробов рубца желательны, и их следует рассматривать как альтернативные соединения для манипулирования микробиомом рубца с целью поддержания целлюлозолитических бактерий с более низкой популяцией простейших и метаногенов [19,30,84,141]. Особый интерес приобретают комплексное

использование продуктов фитобиоценозов с целью усиления их синергетического действия для снижения газообразования в рубце.

Степень разработанности темы исследований. На сегодняшний день проведена большая исследовательская работа учёными по всему миру по влиянию различных продуктов фитобиоценозов, в том числе танинов, сапонинов, флавоноидов на эмиссию метана в организме жвачных in vitro [52,147,175]. Показано положительное влияние совместного использования фитогенных кормовых добавок на газообразование в организме жвачных [14]. Согласно результатам мета-анализа [140] антиметаногенный эффект достигался даже при использовании относительно невысоких дозировок танинов у овец (<20 г/кг сухого вещества). В работе Фомичева Ю.П. и соавт. (2019) демонстрируется положительное влияние на организм овец дигидрокверцетина в количестве 0,1 г/гол [25]. Однако большинство исследований проведено in vitro и полученные результаты противоречивы. Актуальным является проведение исследований in vivo для достоверной оценки влияния совместного использования фитогеников на процессы пищеварения и метанообразование в рубце.

Целью диссертационного исследования является определение влияния фитогеников в рационе овец на переваримость питательных веществ, процессы пищеварения, биохимический статус, образование метана в организме и продуктивность.

Были сформированы следующие задачи:

1. Установить дозу скармливания и антиметаногенный эффект танинов лиственницы даурской (Lárix dahúrica) и их комплекса с дигидрокверцетином в исследованиях in vitro.

2. Установить влияние танинов и их комплекса с ДКВ на процессы рубцового пищеварения у овец.

3. Оценить влияние фитогенных добавок на переваримость питательных веществ корма.

4. Установить влияние танина и комплекса с ДКВ на микрофлору желудочно-кишечного тракта овец.

5. Установить совместное влияние изучаемых фитогенных алиментарных факторов на обменные процессы, антиоксидантный статус и показатели неспецифического иммунитета у овец.

6. Установить влияние танинов и их комлекса с ДКВ на уровень выделения метана в организме овец методами in vitro и in vivo.

7. Изучить динамику массы тела баранов при скармливании фитогеников.

8. Оценить экономическую эффективность скармливания изучаемых добавок в рационах овец.

Научная новизна диссертационного исследования. Впервые представлены результаты исследования комплексного воздействия фитогенной добавки, содержащей в своей основе конденсированные танины Lárix dahúrica и дигидрокверцетин, на обменные процессы, показатели клинического, биохимического, иммунного и антиоксидантного статуса организма, рубцового пищеварения, а также видовой состав микробиоты желудочно-кишечного тракта и процессы газообразования в рубце овец.

Теоретическая и практическая значимость диссертационного исследования. На основе данных, полученных методами in vitro и in vivo, установлено, что введение фитогенных добавок на основе конденсированных танинов Lárix dahúrica и дигидрокверцетина в основной рацион овец оказывает значительный антиметаногенный эффект. Эти добавки также благоприятно влияют на процессы рубцового пищеварения, переваримость питательных веществ и баланс азота, а также на показатели биохимического, иммунного и антиоксидантного статуса животных. Кроме того, они способствуют интенсификации минерального обмена, улучшают состояние полезной микрофлоры рубца и повышают продуктивность овец.

Методология и методы исследований. Основные методологические подходы данного диссертационного исследования базируются на методах и работах как зарубежных, так и отечественных ученых в области кормления, физиологии жвачных животных и применения биологически активных веществ растительного происхождения в качестве алиментарных факторов в животноводстве. В основе

формирования цели, задач и схемы исследования лежат результаты анализа достижений и результатов современной науки по изучению влияния фитогенных кормовых добавок, выступающих в роли модуляторов ферментации рубца, на обменные процессы в организме животных, метаногенез, продуктивные качества, а также по практическому применению в условиях интенсификации животноводства. В исследовании были задействованы фистульные бараны романовской породы, в ходе экспериментов над которыми применялись, физиологические, зоотехнические, биохимические, микробиологические и математические методы. Положения, выносимые на защиту.

1. Кормовые добавки фитогеников на основе конденсированных танинов лиственницы даурской (Ьат\х dahйrica) и дигидрокверцетина снижают выделение метана у овец.

2. Скармливание конденсированных танинов лиственницы даурской (Ьапх dahйrica) и дигидрокверцетина повышают переваримость питательных веществ кормов рациона.

3. Использование фитогеников в кормлении овец улучшает показатели белкового и минерального обмена, неспецифического иммунитета и антиоксидантного статуса организма, оказывает положительное влияние на полезную микрофлору ЖКТ.

4. Фитогенная кормовая добавка на основе конденсированных танинов Ьапх dahйrica и дигидрокверцетина повышает прирост живой массы у овец. Научные исследования выполнены в рамках тематического плана научно-

исследовательских работ лаборатории фундаментальных основ питания с.-х животных и рыб, а также отдела физиологии и биохимии с.-х животных ФГБНУ ФИЦ ВИЖ им. Л.К. Эрнста в 2023-2024 г.г. по теме Государственного задания ФГБНУ ФИЦ ВИЖ им. Л.К. Эрнста «Изучение фундаментальных основ питания животных и рыб в части оптимизации процессов пищеварения с целью снижения выбросов парниковых газов в окружающую среду при интенсивной технологии ведения животноводства, создание и апробация новых перспективных технологий и альтернативных источников кормовых компонентов различного происхождения,

биологически активных веществ при обеспечении высокой продуктивности и здоровья сельскохозяйственных животных и рыб» (FGGN-2022-0009).

Степень достоверности и апробация результатов диссертационного исследования. Исследования, направленные на изучение физиологического действия фитогеников на метанообразование в организме овец in vitro и in vivo проводились на базе лабораторий, а также физиологического двора ФГБНУ ФИЦ ВИЖ им. Л.К. Эрнста. В процессе исследований использовалось современное оборудование и реагенты для широкого спектра физико-химических методов анализа. Полученные результаты обрабатывались статистически, проверялась нормальность распределения и выполнялась процедура попарных сравнений между изучаемыми группами животных параметрическими и непараметрическими методами. При уровне значимости p<0,05 данные считали достоверными.

Основные положения работы, методические подходы и полученные результаты диссертационного исследования были представлены и одобрены на заседаниях лаборатории фундаментальных основ питания с.-х животных и рыб, отдела физиологии и биохимии с.-х животных, Ученого совета ФГБНУ ФИЦ ВИЖ им. Л.К. Эрнста (2023-2025 гг.) и на научных и научно-практических конференциях всероссийского и международного уровня (Всероссийская конференция молодых исследователей «АГРАРНАЯ НАУКА - 2022»; XXII Национальная научная конференция с международным участием «Инновации в науке, образовании и предпринимательстве-2024» в секции «Современные проблемы сельскохозяйственных наук» в рамках «XII международного Балтийского морского Форума»; Международный научный форум «Современные достижения и проблемы физиологии и кормления животных» - 2024 г.; Международная научно-практическая конференция-школа «Генетические технологии в животноводстве -современные траектории в развитии науки и образования» - 2023 г.; Молодежная научная конференция «Исследования молодых учёных в реализации приоритетов научно-технологического развития в области животноводства» - 2025 г.).

Личный вклад автора. Автором было проанализировано текущее состояние вопроса управления процессами ферментации в рубце для снижения

интенсивности метаногенеза у жвачных животных. Исходя из этого были определены цели и задачи, разработана поэтапная схема исследования и выбраны основные методологические подходы. Автор был задействован в каждом этапе эксперимента in vitro и in vivo, принимал непосредственное участие в проведении лабораторных исследований и обработке полученных данных. Результаты проделанной работы были представлены автором на научно-практических конференциях и в публикациях, написанных как в соавторстве, так и самостоятельно.

Публикация результатов исследований. По результатам диссертационного исследования было опубликовано 7 научных трудов, в том числе 5 статей опубликованы в рецензируемых периодических научных изданиях, рекомендованных ВАК при Министерстве науки и высшего образования Российской Федерации (2 статьи входят в международную базу данных - Scopus, 2 статьи входят в RSCI, 1 статья входит в РИНЦ), 2 статьи - в трудах конференций. Подана заявка на получение патента РФ № 2024134944 «Способ снижения выделения газов в организме мелких жвачных» (заявка успешно прошла процедуру формальной экспертизы, проходит процедуру экспертизы по существу).

Объем и структура работы. Диссертация представлена на 136 страницах компьютерного текста, содержит 27 таблиц, 13 рисунков. В диссертации представлены следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, выводы, предложения производству, перспективы дальнейшей разработки темы, список литературы, включающий 203 источника, 4 приложения.

2. Основная часть 2.1. Обзор литературы 2.1.1. Физиологические аспекты метаногенеза 2.1.1.1. Механизм метаногенеза

Метаногенез — это процесс синтеза метана (СН4) в рубце в качестве побочного продукта метаногенных архей [55]. За счёт микробной ферментации в рубце полисахариды, такие как крахмал, целлюлоза или гемицеллюлоза, расщепляются на гексозы (например, глюкоза) и пентозы. Затем образующиеся в результате гидролиза моносахариды метаболизируются в летучие жирные кислоты (ЛЖК) и углекислый газ (С02). Этот процесс сопровождается выделением молекулярного водорода (Н2), который восстанавливает внутриклеточные кофакторы. Дальнейшая ферментация корма в рубце невозможна без повторного окисления кофакторов. Данный процесс, в свою очередь, в значительной степени зависит от активности гидрогеназ и степени образования молекулярного Н2. Полученный водород не накапливается в рубце, а используется метаногенными археями для восстановления С02 и других одноуглеродных соединений до СН4 [3,41]. За счёт синтеза метана снижается парциальное давление водорода в рубце, что способствует продолжению процессов брожения. Если молекулярный водород не удаляется, его накопление будет ингибировать повторное окисление восстановленных кофакторов, что, в свою очередь, приведёт к снижению выработки ЛЖК [174].

Метаногенез в рубце происходит тремя основными путями:

1. Путь С02-Н2 или гидрогенотрофный путь, в котором Н2 (реже формиат) используется для восстановления С02 до СН4;

2. Метилотрофный путь, в котором метанол, метиламины или метилированные сульфиды служат донорами метильной группы для образования метилкофермента М, который затем присоединяется к пути СО2-Н2;

3. Ацетокластический путь, в котором ацетат используется в качестве субстрата для образования ацетил-КоА, который затем метилирует

тетрагидрометаноптерин и присоединяется к центральному пути [12,181].

На рисунке 1 показаны основные пути и субстраты для метаногенеза в рубце в контексте пищеварения и ферментации.

Рисунок 1. Основные пути метаногенеза Считается, что гидрогенотрофный метаногенез из Н2 и в меньшей степени из формиата является преобладающим в рубце [167,172], хотя более поздние результаты показывают, что метилотрофный путь метаногенеза также вносит вклад в образование данного газа [173]. При низких концентрациях растворенного водорода, но с более высокой доступностью метиламинов и субстратов метанола в рубце, метилотрофный метаногенез может доминировать над гидрогенотрофным метаногенезом [153]. Ацетокластический метаногенез происходит в средах с низкой скоростью оборота, таких как анаэробные ферментеры и морские и пресноводные отложения, и, по-видимому, не происходит или имеет минимальное значение в рубце [74,86,124].

Независимо от различных субстратов, используемых в метаногенезе, все метаногенные пути имеют общий последний шаг, на котором метилкофермент М-редуктаза объединяет метилкофермент М и донор электронов кофермент В,

образуя гетеродисульфид кофермента М (CoM) и кофермента В, и CH4. После образования метана CoM и кофермент B регенерируются посредством восстановления гетеродисульфида в экзергонической реакции, связанной с сохранением энергии, катализируемой гетеродисульфидредуктазой [181]. Метилкофермент М-редуктаза имеет два изофермента: MCRI, кодируемый генами mcr, и MCRII, кодируемый генами mrt [156]. Наличие и преобладание любого изофермента метилкофермент М-редуктазы в геномах различных метаногенов, а также экспрессия генов, кодирующих каждый изофермент, зависят от концентрации H2. Например, геном Methanobrevibacter spp. имеет как гены mcr, так и гены mrt, в то время как Methanosphaera и Methanomassiliicoccales имеют только гены mrt, кодирующие MCRII [153,181].

Пути метаногенеза и метаногены различаются по необходимому количеству H2. Гидрогенотрофный метаногенез из H2 и формиата использует четыре и три моля H2 для получения одного моля CH4 соответственно, в то время как восстановительный метилотрофный метаногенез использует только один. Так, метилотрофные археи Methanosphaera имеют более низкий порог H2, чем гидрогенотрофные Methanobrevibacter. Methanosarcina может ферментировать метильные группы непосредственно до CH4 без водорода. С другой стороны, жизнедеятельность метилотрофных метаногенов зависит от обилия метильных групп [72]. Таким образом, доступность субстратов для метаногенеза значительно влияет на преобладание тех или иных метаногенов и пути метаногенеза, которые могут варьироваться в зависимости от рациона, управления кормлением и времени суток [153].

Одним из возможных вариантов использования водорода в организме жвачных - это синтез пропионата, как основного предшественника глюкозы для жвачных животных и соединения, играющего ключевую роль в обеспечении организма энергией [56]. Другим немало важным путём использования водорода служит восстановительный ацетогенез -образование ацетата из диоксида углерода и какого-либо донора электронов, в частности H2, так как ацетат является основным строительным элементом для синтеза длинноцепочечных жирных кислот и

источником энергии. Однако стоит отметить, что данный процесс термодинамически менее выгоден по сравнению с метаногенезом в нормальных условиях рубца, хотя может стать полезным способом удаления водорода, способствуя ферментации в рубце, подавляемой метаногенезом. Таким образом, можно предположить, что перераспределение водорода между метаногенезом и синтезом конечных продуктов ферментации (ацетат, пропионат), которые могут быть усвоены организмом и необходимы ему, не только помогает снизить выделение CH4, но потенциально может повысить продуктивность животных. Тем не менее, этот потенциал до сих пор не был реализован на практике [3,182].

2.1.1.2. Типы метаногенов

Известно, что в природе существует до 28 родов и 113 видов метаногенов, и 5 из этих видов принадлежат к родам Methanobrevibacter и Methanosarcina [129]. Ряд метаногенов свободно живёт в рубце или прилипает к частицам корма, другие же присутствуют как эндосимбионты или эктосимбионты с простейшими рубца [143].

Janssen P. H. и Kirs M. (2008) в своём исследовании сообщают о культивировании восьми видов метаногенов: Methanobrevibacter olleyae, Methanobrevibacter ruminantium, Methanobacterium bryantii, Methanobacterium formicicum, Methanoculleus olentangyi, Methanomirobium mobile, Methanosarcina barkeri и Methanobrevibacter millerae [96]. Позднее из рубца были выделены пять новых видов метаногенов, включая Methanobacterium beijingense (обнаружены у коз), Methanobrevibacter boviskoreani (корейский местный крупный рогатый скот), Methanoculleus marisnigri (индийский помесный крупный рогатый скот), Methanosarcina mazei (корейский крупный рогатый скот ханву) и Methanoculleus bourgensis (голштинский крупный рогатый скот) [143].Также были идентифицированы в рубце ранее культивируемые Methanobrevibacter smithii, Methanosphaera stadtmanae [154], Methanobrevibacter gottschalkii [53], Methanobrevibacter wolinii [120] и Methanobrevibacter thaueri [112,145]. Последовательности архей из рубца были классифицированы на 10 родов (по

сравнению с 28 общими родами архей), и Ме^апоЬгеу1Ьас1ег (63,2%) был наиболее доминирующим, затем Methanosphaera (9,8%), Ме^апот1стоЬтт (7,7%) и Ме^апоЬа^епит (1,2%) в рубце [143]. Стоит отметить, что относительное содержание метаногенов в разных таксонах варьируется в зависимости от рациона и возраста животных. Так, у молодых телят (до трёх недель) доминирующими в нисходящем порядке были Methanobacteriales, Methanosarcinales, Methanomicrobiales и Methanoplasmatales (переименованные в MethanomassШicoccales), но Methanobacteriales и Methanoplasmatales присутствовали у телят в возрасте 6 месяцев и старше, а разнообразие архей на уровне рода также изменилось [74].

Говоря о путях метаногенеза, Methanobacteriales, Methanomicrobiales и Methanococcales являются гидрогенотрофами, Methanoplasmatales, Methanosphaera, Methanosarcina - метилотрофами, а Methanosarcinales универсальны (используют Н2, ацетат, оксид углерода и метанол) для использования субстрата [121,145]. Methanosarcina Ьа^ел является наиболее метаболически универсальным метаногеном и растет либо унитрофно на всех этих субстратах (Н2-С02, оксид углерода, ацетат, метанол и метиламины), либо миксотрофно на комбинациях субстратов [21,145]. Ацетокластические метаногены (например, Methanosarcina и Methanosaeta) используют ацетат, производя СН и С02 [51,61]. Однако эти метаногены представлены в рубце крайне малым количеством, а потому их вклад в метаногенез является незначительным [166].

Разнообразие популяций метаногенов рубца значительно меньше, чем бактерий рубца, что, вероятно, отражает узкий диапазон используемых ими субстратов. Это ограниченное разнообразие дает возможность разрабатывать стратегии по снижению выделения метана жвачными животными, нацеленные на описанные выше доминирующие метаногены. Недавнее исследование по полногеномное секвенированию генома метаногенного сообщества рубца дало представление о протекающих в этой среде метаболических процессах [166], что открывает возможность точечного воздействия на метаногены путём алиментарных факторов, а также иных стратегий по снижению выделения СН4.

2.1.2. Стратегии, направленные на снижение выделения метана

2.1.2.1. Отбор животных с низким уровнем выделения метана.

Согласно литературным данным, обусловленная уровнем выделения метана наследуемость на основе абсолютных выбросов (г СН4/сутки) достаточно умеренная и оценивается в 0,29 и 0,40 у овец и крупного рогатого скота соответственно [150]. Кроме того, разработка косвенных показателей, которые тесно коррелируют с выделением CH4, будет полезна для выявления животных с низким уровнем выделения в программе генетической селекции [136]. Однако важно подчеркнуть, что включение данного показателя в программу генетического отбора является серьёзной проблемой в силу сложности измерения CH4 таким образом, чтобы отражать фенотип животного в долгосрочной перспективе [119].

Взаимосвязь между выработкой метана и экономически важными характеристиками животных на сегодняшний день изучена недостаточно [40]. В своём исследовании I. S. Breider и соавт. (2019) продемонстрировали генетические корреляции от 0,49 до 0,54 между выделением метана и надоями молока, что указывает на то, что генетический отбор по уровню выделения CH4 может отрицательно сказаться на продуктивности животных [50]. Таким образом, неясно, обеспечит ли генетический отбор по этому признаку какие-либо дополнительные преимущества по сравнению с отбором по продуктивным признакам, таким как рост и производство молока [111]. Учитывая низкую экономическую ценность мер по снижению выделения CH4, этот признак будет иметь незначительный вес в мульти-признаковом индексе.

Таким образом, отбор и разведение животных с низким уровнем выделения метана является противоречивой и трудно реализуемой стратегией по снижению выделения парниковых газов жвачными животными. Гораздо больший интерес представляют стратегии, направленные на снижение выделения парниковых газов путём воздействия алиментарными факторами.

2.1.2.2. Влияние качества, состава основных кормов, структуры рационов на выделение метана в организме жвачных

Пастбища и кормовые культуры составляют около 70% сельскохозяйственных угодий во всем мире и являются основным компонентом рациона жвачных животных. Однако потребление грубых кормов, которые содержат больше клетчатки по сравнению с концентратами, увеличивает выделение СН4 в различной степени в зависимости от источника корма, химического состава, усвояемости, организации выпаса и других факторов. Эти различия позволяют снизить уровень выделения СН4 за счет рационального использования кормов [42]

Качество кормов (переваримость). Вероятно, одним из основных методов снижения выделения парниковых газов, в том числе метана, рекомендованных во всем мире, является повышение потребления усвояемости корма [89]. Увеличение переваримости корма обычно увеличивает ПСВ (потребление сухого вещества). Как следствие, улучшаются продуктивные качества животных и интенсивность метаногенеза снижается. Как для крупного, так и мелкого рогатого скота в данном контексте были изучались различные корма (от свежей травы или силоса до бобовых культур и кукурузы) [70,148].

В этом аспекте были изучены корма различной природы (например, свежая трава и силос) и типов (трава, бобовые или кукуруза) для крупного рогатого скота (КРС) и овец [70,148]. Повышение усвояемости корма привело к увеличению потребления сухого вещества (ПСВ, кг/день) и, следовательно, к увеличению выбросов СН4 (г/день) в организме молочного и мясного скота, в отличие от овец. Когда рассматривается потребление или продуктивность, количество СН4 (г/кг ПСВ) и интенсивность выделения СН4 (г/кг молока) снижаются с повышением усвояемости для молочного скота, но никакой разницы по количеству СН4 (г/кг ПСВ) не наблюдалось для мясного скота. У овец выделение СН4 снижалось с повышением усвояемости корма [183].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Колесник Никита Сергеевич, 2025 год

Использовано, в %:

- от принятого 35,18±2,97 37,95±2,13 41,95±1,74

Примечания: * - р<0,05; ** - р<0,01.

Наряду с улучшением поедаемости кормов и увеличением переваримости белка наблюдается увеличение как количества принятого с кормом азота, так и переваренного, причём для 2-ой опытной группы увеличение достоверно (на 20,4%, р<0,05). Количество отложенного в теле азота также достоверно (р<0,01)

увеличилось в группе животных, получавших комплексную добавку, на 32,6% относительно контроля, что говорит о положительном влиянии скармливаемых фитогенных добавок на показатели азотистого обмена.

2.2.2.2.6. Выделение парниковых газов Для оценки влияния добавок на основе конденсированных танинов и их комплекса с ДКВ на метанообразование у овец нами были проведены исследования in vivo в респирационных камерах открытого типа. Каждое животное помещалось в камеру на двое смежных суток в конце каждого периода исследования. При нахождении животных в респираторной камере (рис.7), производили учет заданных кормов и их остатков. Данные по количественному и качественному составу выходящего воздуха регистрировались датчиками 4 раза в 1 минуту и усредненные за 1 минуту значения были сохранены в память персонального компьютера. Кроме этого, в ходе эксперимента осуществлялся также мониторинг таких параметров, как количество углекислого газа, температура, влажность и давление внутри камеры (приложения В, Г) для проведения последующих расчетов выделения газов. Полученные за сутки значения обрабатывались, вычислялось среднее значение выделенных газов от каждого животного за 1 минуту, а затем осуществляли пересчет на суточное выделение. Полученные результаты представлены в таблице 18.

Таблица 18 - Выделение парниковых газов in vivo (M±m, n=6)

Показатель Группа p-Значение

Контроль Танин Танин+ДКВ

СН4, л/сутки 21,98C 18,72 16,08a 0,0574

СО2, л/сутки 318,89 266,36 255 0,1465

Наблюдается выраженное снижение выделяющегося метана у животных опытных групп относительно контроля. Так, в контрольной группе количество выделившегося СН4 составило 21,98 л/сутки, при скармливании только танинов этот показатель был ниже на 14,8% (18,72 л/сутки), а при получении животными комплексной добавки танина с ДКВ - достоверно (р=0,05) ниже на 26,8% (16,08 л/сутки) (рисунок 11).

25 20

я

g 15

H

^

^ 10

n

5 0

СН4, л/сутки

Контроль; 21,98

Танин+ДКВ; 16,084

Контроль Танин Танин+ДКВ

■ СН4, л/сутки

Рисунок 11. Среднесуточное выделение метана у подопытных баранов Полученные данные свидетельствуют не только о снижении выделения метана за счёт использования фитогенных кормовых добавок на основе танинов, но и об эффекте синергизма в отношении действия танинов Lárix dahúrica и дигидрокверцетина на метаногенез in vivo, что соотносится с нашими предыдущими исследованиями in vitro [14]. Схожие данные были получены и другими авторами, изучавшими влияние танинов и растительных экстрактов, богатых различными фитогениками, на метаногенез [71,116,128,178]. Визуализации динамики выделения метана в течение суток представлена на рисунке 12.

Рисунок 12. Динамика выделения метана у подопытных баранов

2.2.2.2.7. Изучение биохимического статуса животных

Для объективной оценки влияния скармливаемых фитогенных кормовых добавок на биохимический, клинический, аминокислотный, антиоксидантный и иммунный профиль подопытных баранов нами были проведены комплексные исследования индикаторов белкового, углеводного, липидного и минерального обмена в крови. Данные представлены в таблицах 19-21.

Таблица 19 - Основные показатели белкового, углеводного и липидного

обмена в сыворотке крови баранов (М±т, п=6)

Показатель Группа р- Значение

контроль танин танин+ДКВ

Общ белок, г/л 65,50±1,77 67,66±0,75 69,22±1,55 0,1634

Альбумин, г/л 26,35±0,98С 27,68±0,29 28,60±0,30а 0,0382

Глобулин, г/л 39,15±1,31 39,98±0,73 40,62±1,62 0,6764

А/Г 0,67±0,03 0,69±0,02 0,70±0,03 0,6192

Мочевина, мМ/л 4,06±0,44 4,14±0,33 3,98±0,25 0,9379

Креатинин, мкМ/л 86,87±4,88 87,95±4,24 85,78±5,36 0,9421

Глюкоза, мМ/л 4,24±0,33 4,43±0,37 4,33±0,22 0,1086

Билирубин общ, мкМ/л 0,76±0,03 0,74±0,10 0,73±0,14 0,2959

Триглицериды, мМ/л 0,32±0,02 0,33±0,02 0,35±0,05 0,7836

Холестерин, мМ/л 1,52±0,17 1,60±0,21 1,55±0,19 0,9514

АЛТ, МЕ/л 18,92±2,05 20,33±2,32 18,50±1,82 0,7761

АСТ, МЕ/л 75,10±6,56 79,28±6,55 70,87±2,18 0,5108

Коэф де Ритиса АСТ/АЛТ 3,97±0,34 3,90±0,45 3,83±0,34 0,9759

Щ фосфотаза, МЕ/л 221,50±26,16 253,33±35,54 230,83±18,41 0,6635

Скармливание подопытным овцам фитогенных добавок на основе конденсированных танинов лиственницы даурской (Ьат\х dahйrica) и ДКВ не оказали негативного влияния на состояние белкового обмена. Количество общего белка линейно увеличивалось в опытных группах на 3,3% и 5,7% соответственно.

Увеличение доли альбуминовой фракции в группе комплексной добавки было достоверным (p=0,0382) и составило 8,5%. Уровень глобулинов находился в диапазоне от 39,15 г/л в контрольной группе до 40,62 г/л во 2-ой опытной. Соотношение альбуминовой и глобулиновой фракций в сыворотке крови является важным показателем состояния белкового обмена.

Креатинин же был максимальным у животных, получавших добавку только танина (87,95мкМ/л) и минимальным во второй опытной группе. Аналогичные зависимости прослеживаются и для ферментов переаминирования. Так, количество АЛТ в контроле и группе с комплексной добавкой было практически одинаковым (18,50-18,92МЕ/л), но в группе танина несколько выше - 20,33 МЕ/л. Для АСТ наблюдается более чёткий максимум в 1-ой опытной группе (на 5,6% выше, чем в контроле) и минимум во 2-ой - на 5,6% ниже контроля. Аналогично, уровень мочевины в третьей группе животных был наименьшим (3,98 мМ/л), в контроле -4,06 мМ/л, а во второй группе - 4,14 мМ/л. Некоторое снижение количества мочевины может свидетельствовать о меньшем распаде белков в организме и более полном использовании пула аминокислот. Стоит отметить, что данные показатели находятся в пределах референтных значений [5,104] у всех исследуемых животных, а сравнительный анализ групп не выявил достоверных различий, что также подчёркивает отсутствие негативного эффекта от скармливания конденсированных танинов (5 г/гол в сутки) и ДКВ (0,1 г/гол в сутки) на белковые показатели крови.

У животных опытных групп наблюдается увеличение показателей углеводного и липидного обменов относительно контроля. Так, уровень глюкозы в 1-ой опытной группе был выше на 5%, а во 2-ой - на 3,1% относительно контроля. Триглицериды находились в диапазоне от 0,32 мМ/л в контроле до 0,35 мМ/л во 2-ой опытной группе, холестерин - от 1,52 мМ/л в контроле до 1,60 мМ/л в 1-ой опытной группе. Ввиду отсутствия статистически значимых отличий между группами исследуемых животных и нахождения данных показателей в пределах физиологической нормы [5,104] можно сделать вывод об отсутствии отрицательного воздействия танинов лиственницы даурской (Larix dahurica) как в

чистом виде, так и в комплексе с дигидрокверцетином на углеводный и липидный обмен.

Таблица 20 - Показатели минерального обмена в сыворотке крови баранов

(M±m, n=6)

Показатель Группа Р- Значение

контроль танин танин+ДКВ

Ca, мМ/л 2,63±0,09 2,65±0,07 2,67±0,05 0,9080

Р,мМ/л 2,01±0,15 2,02±0,17 2,02±0,15 0,9969

Са/Р 1,34±0,10 1,34±0,09 1,34±0,08 0,9995

Mg, мМ/л 1,08±0,08 1,02±0,12 1,01±0,10 0,8538

Fe, мкМ/л 30,26±3,69 32,74±5,69 28,02±3,24 0,7061

Хлориды, мМ/л 108,82±2,27 108,30±1,63 109,58±1,78 0,8736

У животных опытных групп наблюдается тенденция к увеличению количества ионов кальция (2,63 мМ/л - контроль, 2,65 мМ/л - танин, 2,67 мМ/л -танин+ДКВ) и фосфора, что соотносится с увеличением активности щелочной фосфатазы (таблицы 19-20). Кальций является важным фактором свёртывания крови и играет большую роль в функционировании ядерного аппарата клетки и костной ткани. Фосфор, в свою очередь, участвует как в углеводном и липидном обмене, так и обмене нуклеиновых кислот, а также наряду с кальцием способствует улучшению состояния костной ткани [16]. Уровень хлоридов в крови всех групп животных находился в пределах от 108,30 мМ/л до 109,58 мМ/л. Максимальное содержание железа в сыворотке крови наблюдается для 1-ой опытной группы (32,7к мкМ/л против 30,26 мкМ/л и 28,02 мкМ/л в контрольной и 2-ой опытной группе соответственно). Однако при исследовании микроэлементного состава цельной крови методом атомно-абсорбционной спектроскопии (ААС) (таблица 21) количество железа было наибольшим во 2-ой опытной группе (12794 мкг/л). Железо является элементом, тесно связанным с важнейшими функциями организма. Это незаменимая часть гемоглобина и миоглобина. Железо входит в состав цитохромов, участвующих в переносе электронов по дыхательной цепи

митохондрий, а также окислительно-восстановительных ферментов катала-ферментов каталазы и пероксидазы [9].

Таблица 21 - Показатели минерального обмена в цельной крови баранов

(мкг/л, M±m, n=6)

Показатель Группа P- Значение

контроль танин танин+ДКВ

Cu 112,28±6,67BC 151,05±12,04A 160,87±9,34a 0,0033

Zn 1097,17±51,18C 1119,83±77,49C 1400,50±139,3ab 0,0502

Co 4,13±0,80 4,27±0,92 4,58±0,50 0,8965

Cr 191,92±31,64 188,33±23,89 214,68±44,35 0,6221

Fe 12499±800,61 12309±914,28 12794±724,80 0,8989

Se 80,87±7,38 94,42±9,10 86,27±2,50 0,3377

Ni 14,78±1,77C 16,37±2,12 21,72±1,89A 0,0344

По результатам, полученным методом ААС наблюдается линейное и достоверное (р<0,05) увеличение содержания ряда микроэлементов в цельной крови баранов опытных групп по отношению к контролю. Так, количество меди при скармливании только танинов выросло на 34,5% (151,05 мкг/л против 112,28 мкг/л, р=0,0033), а для комплексной добавки - на 43% (160,87 мкг/л против 112,28 мкг/л, р=0,0033). Медь играет очень важную роль в биохимии всех живых организмов и влияет на активность порядка 30 ферментов как кофактор или как фундаментальная структура многих металлоферментов, таких как супероксиддисмутаза, церулоплазмин, лизилоксидаза, цитохромоксидаза и тирозиназа. Поэтому медь необходима для клеточного дыхания, антиоксидантной защиты, функции нейротрансмиттера и биосинтеза тканей [87]. Содержание 7п было выше в 3 группе относительно контроля (1400,50 мкг/л против 1097,17 мкг/л, р=0,05) и относительно второй группы (1400,50 мкг/л против 1119,83 мкг/л, р=0,05). По своей биологической роли цинк занимает второе место после железа [169]. Он содержится в более чем трёхста белках и ферментах, выполняя в них структурную функцию и обеспечивая их активность, участвует в нуклеиновом и белковом обменах репликации и транскрипции ДНК, а также играет важную роль в иммунной системе [16,87]. Цинк также является антагонистом меди и

способствует предотвращению излишеного накопления Cu в организме овец, которые крайне чувствительны к её токсическому воздействию при чрезмерном потреблении [131]. Линейно увеличивалось количество Ni в опытных группах, причём у животных, получавших комплексную добавку фитогеников, разница была достоверной (21,72 мкг/л против 14,78 мкг/л, p=0,034). Аналогичные, но слабо выраженные тенденции наблюдаются и для кобальта (4,13 мкг/л - контроль, 4,27 мкг/л - танин, 4,58 мкг/л - танин+ДКВ). Содержание селена в крови баранов 1-ой опытной группы было выше на 16,7%, а 2-ой - на 6,7% относительно контроля. Селен участвует в антиоксидантной защите организма, а также играет важную роль в синтезе тироидных гормонов Недостаток селена может препятствовать их образованию, снижать уровень усвоения йода, а также способствовать развитию ряда заболеваний, таких как беломышечная болезнь [4,9].

При анализе клинического статуса крови подопытных животных нами не было обнаружено значимых отличий в изучаемых показателях (таблица 22). Содержание гемоглобина росло в опытных группах относительно контроля (113,17 г/л против 108,10 г/л). Гематокрит изменялся незначительно в пределах от 20,07 до 20,45%. Аналогично, количество лейкоцитов находилось в диапазоне от 12,05*10А9/л в группе танина до 12,60*10А9/л при скармливании комплексной добавки, эритроцитов - от 5,31*10А12/л в контроле до 5,42*10А12/л в 1-ой опытной группе.

Таблица 22 - Основные клинические показатели крови баранов (M±m, n=6)

Показатель Группа Р- Значение

контроль танин танин+ДКВ

лейкоциты *10А9/л 12,42±3,22 12,05±3,48 12,60±3,91 0,9926

эритроциты, *10А12/л 5,31±0,27 5,42±0,11 5,38±0,17 0,9120

гемоглобин, г/л 108,10±4,56 113,17±5,24 113,00±3,42 0,6366

гематокрит, % 20,07±1,08 20,45±0,48 20,23±0,64 0,9294

Таким образом, основные гематологические клинические показатели крови всех исследуемых животных находились примерно на одном уровне, что позволяет

нам исключить влияние фитогенных добавок на основе танинов и ДКВ на гематологический профиль организма овец.

Согласно результатам общего аминокислотного анализа (таблица 23) в группе, получавшей комплексную добавку, наблюдается значимое увеличение некоторых незаменимых аминокислот (АК). Так, содержание треонина возросло на 5,5% по отношению к контролю (р=0,0675), а для изолейцина увеличение было достоверным (р=0,0016) на 8,7% по отношению к контрольной и 1-ой опытной группе. Также наблюдается тенденция к линейному увеличению количества фенилаланина и лейцина в опытных группах. Рост содержания отдельных незаменимых АК закономерно привёл к увеличению суммы незаменимых АК, что соотносится с увеличением общего белка и альбуминов в опытных группах. Можно предположить, что увеличение содержания незаменимых аминокислот в крови животных опытных групп, а также улучшение белковых показателей крови связано с большей относительно контроля сохранностью белковых компонентов корма от микробной ферментации. Как известно, танины способны образовывать комплексы с макромолекулами, делая их недоступными для микроорганизмов рубца, однако при попадании в истинный желудок они разрушаются под действием сычужных ферментов.

Таблица 23 - Общий аминокислотный профиль сыворотки крови баранов,

г/100мл (M±m, n=6)

Показатель Группа P- Значение

контроль танин танин+ДКВ

Незаменимые аминокислоты

Треонин (THR) 0,307±0,007C 0,316±0,004 0,324±0,004A 0,0675

Валин (VAL) 0,437±0,012 0,424±0,008 0,431±0,005 0,4819

Метионин (MET) 0,053±0,002 0,055±0,005 0,052±0,001 0,8634

Изолейцин (ILE) 0,183±0,003C 0,184±0,003C 0,199±0,004AB 0,0016

Лейцин (LEU) 0,635±0,007 0,643±0,006 0,647±0,003 0,2216

Фенилаланин (PHE) 0,364±0,005 0,367±0,006 0,376±0,003 0,1996

Гистидин (HIS) 0,197±0,008 0,188±0,004 0,193±0,003 0,4177

Лизин (LYS) G,635iG,G27 G,61G±G,G11 G,629±G,GG4 G,4993

сумма незаменимых 2,811±G,G45 2,789iG,G38 2,85G±G,GG9 G,38GG

Заменимые аминокислоты

Aргинин (ARG) G,381iG,G13 G,365iG,G13 G,364iG,GG5 G,2896

Серин (SER) G,375iG,G11 G,368iG,GG9 G,361iG,GG7 G,4819

Глутаминовая к-та (GLU) G,82G±G,G17 G,818±G,G12 G,82G±G,GG8 G,994G

Глицин (GLY) G,151±G,GG4 G,147±G,GG4 G,147±G,GG2 G,6668

Aспарагиновая к-та (ASP) G,6G3iG,G1G G,6G5±G,GG6 G,6G5±G,GG6 G,9714

Aланин (ALA) G,39G±G,GG7 G,388iG,GG8 G,394iG,GG3 G,7744

Цистеин (CYS) G,193iG,GG5 G,2GG±G,GG4 G,2G3iG,GG4 G,2596

Тирозин (TYR) G,322iG,GG8 G,3G7iG,GG5 G,316iG,GG6 G,2G77

Пролин (PRO) G,228±G,GG7 G,224±G,GG5 G,228±G,GG6 G,8233

Сумма заменимых 3,464iG,G65 3,423iG,G52 3,438iG,G31 G,8213

Примечания: His отнесён к незаменимым ЛК

2.2.2.2.8. Изучение антиоксидантного статуса

В силу особенностей химической структуры и дигидрокверцетин, и танины обладают выраженной антиоксидантной активностью, поэтому одной из задач данной работы была оценка влияния фитогеников на показатели антиоксидантного статуса подопытных баранов в сыворотке крови (таблица 24).

Таблица 24 - Показатели антиоксидантного статуса организма баранов

(M±m, n=6)

Показатель Группа p- Значение

контроль танин танин+ДКВ

СКВА, мг/л 15,52±0,22BC 16,7S±0,39a 16,67±0,37A 0,0193

ЦП, мг/л 180,67±5,04C 196,GG±5,77 209,50±6,15A 0,0048

ТБК-АП, мкМ/л 2,19±0,11C 2,G1±G,G9 1,S2±0,11A 0,0415

Активность Супероксид-дисмутазы, Ед/мл 9,59±0,32BC 11,96±0,6Sa 12,30±0,54A 0,0026

Активность каталазы, Ед/мл 14,2S±1,32C 16,35i1,53 20,00±1,93A 0,0432

Восст. Глутатион, мкмоль/л 32,25i2,53 32,78i4,87 33,66i2,45 G,95G9

Активность

глутатион 329^18,45^ 362,65±29,50л 485,97±24,70л 0,0004

пероксидазы,

Ед.

Примечания: СКВА - суммарное количество водорастворимых антиоксидантов, ЦП -церулоплазмин, ТБК-АП - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой.

Были получены статистически значимые отличия по большинству изучаемых показателей в опытных группах относительно контроля. Так, СКВА в группе танина было достоверно (р=0,0193) выше на 8,1%, а в группе с комплексной добавкой - на 7,4%. Линейно возрастало количество церулоплазмина в опытных группах, причём для третьей (танин+ДКВ) увеличение было достоверным (180,67 мг/л в контроле против 209,50 мг/л в третьей группе, р=0,0048). Рост содержания ЦП коррелирует с ростом содержания меди в крови животных опытных групп (таблица 21). ЦП является медь-содержащим белком, в котором содержится до 95% общего количества меди сыворотки крови. Его роль в организме заключается в переносе и регуляции оборота меди, а также регуляции транспорта и метаболизма железа. Будучи ферроксидазой, ЦП окисляет железо с Fe2+ до Fe3+ которое затем встраивается в молекулу апотрансферина. За счёт своих электроакцепторных свойств ЦП предотвращает неферментативные реакции, провоцирующие образование свободных радикалов с последующими процессами перекисного окисления липидов, чем и обусловлена его антиоксидантная активность [5].

Аналогично, линейно и достоверно для третьей группы (р=0,0432) увеличивается активность каталазы относительно контроля. Полученные данные соотносятся с данными метаанализа [140]. Основная функция данного фермента -нейтрализация Н202.

Также в опытных группах наблюдается достоверное (р<0,01) увеличение активности других ферментов антиоксидантной защиты, а именно глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы, которая является ключевым внутриклеточным антиоксидантом. Схожие тенденции описываются в работе [117]. Эти ферменты преобразовывают свободные радикалы в менее опасные формы. Так, супероксид под действием супероксиддисмутазы расщепляется до Н202, а затем преобразовывается в воду серией ферментов, включая

глутатионпероксидазу. В исследовании Wang S. и соавт. (2019) сообщается об увеличении общей антиоксидантной активности (АОС) в плазме крови овец (p=0,006) и увеличению активности глутатионредуктазы (p=0,047) при скармливании листьев орешника (Corylus avellana), богатых танинами [188]. Стоит отметить, что полифенольные соединения, которыми являются и танины, и дигидрокверцетин, в силу особенностей химической структуры способны подавлять свободные радикалы напрямую. Они могут повышать антиоксидантную способность тканей животных, снижая концентрацию кислорода и поглощая кислород, тем самым предотвращая образование перекиси и активируя антиоксидантные ферменты, или выступать в качестве доноров протонов и электронов [149]. Более того, сообщается, что растительные полифенолы способны также улучшать экспрессию антиоксидантных ферментов через сигнальный путь Nrf2/ARE [149,190].

Липидные молекулы, а именно полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) за счёт наличия двойных углерод-углеродных связей наиболее восприимчивы к воздействию свободных радикалов, в частности активных форм кислорода (АФК). Реакция АФК и липидов клеточных мембран приводит к образованию липидных радикалов, которые в совокупности называются пероксидами липидов или продуктами окисления липидов (ПОЛ), которые, в свою очередь, вступают в реакцию с другими окислителями, что приводит к цепной реакции, которая вызывает окислительный стресс и повреждение клеток. Количество ПОЛ является одним из основных маркеров состояния системы антиоксидантной защиты организма. В наших исследованиях наблюдается достоверное снижение ТБК-АП в сыворотке крови животных опытных групп (2,19мкМ/л - контроль, 2,01 мкМ/л - танин, 1,82 мкМ/л - танин+ДКВ, p=0,0415), что свидетельствует о затухании процессов перекисного окисления липидов и улучшении антиоксидантного статуса организма под действием фитогеников.

Таким образом, изучаемые фитогенные добавки оказывают выраженное полезное действие на организм животных за счёт увеличения активности

ферментов антиоксидантной защиты, содержания водорастворимых антиоксидантов и замедления процессов перекисного окисления липидов.

2.2.2.2.9. Изучение иммунного статуса С целью изучения показателей иммунной системы и объективной оценки возможного влияния фитогеников на белковый обмен в организме овец, нами был произведён анализ фракций белков сыворотки крови методом электрофореза (таблица 25).

Таблица 25 - Процентное соотношение белковых фракций сыворотки крови

подопытных баранов, % (М±т, п=6)

Показатель Группа Р- Значение

контроль танин танин+ДКВ

альбумины 43,50±2,41 44,75±1,81 45,05±0,87 0,8400

а1-глобулины 11,33±1,45 11,28±1,24 11,03±1,29 0,9994

а2-глобулины 14,70±1,14 14,85±0,87 14,80±0,93 0,7686

Р-глобулины 14,53±0,68 14,42±0,95 14,48±0,47 0,7981

у-глобулины 15,83±1,55 14,70±1,28 14,63±2,05 0,8226

В целом, данные по соотношению альбуминов и глобулинов, полученные методом электрофореза, коррелируют с общим биохимическим статусом крови (таблица 19). Доля альбуминовой фракции была несколько выше в опытных группах относительно контроля. Наблюдается небольшое снижение фракций а1-и у-глобулинов в опытных группах по отношению к контролю - у-глобулинов было меньше на 7% и 7,5% соответственно. Количество а2-глобулинов и Р-глобулинов изменялось незначительно.

Роль сывороточных в иммунном статусе заключается в поддержании гуморального иммунитета. Альбумины обеспечивают онкотическое давление и являются основными транспортными белками, которые участвуют в переносе ионов Са2+, большого числа липофильных соединений, а также наряду с а1-глобулинами - тироксина. Помимо этого, альбуминовая фракция - один из основных резервов аминокислот [1]. а1-глобулины - острофазные белки, концентрация которых быстро нарастает в ранней фазе ответа на инфекцию,

воспаление или повреждение тканей. а2-глобулины участвуют в транспорте ионов цинка, меди (церулоплазмин), выступают в роли ингибиторов протеаз широкой специфичности (а2-макроглобулины), связывают свободный гемоглобин, выделяющийся при распаде эритроцитов, препятствуя тем самым потере железа организмом (гаптоглобин) [5]. Р-глобулины являются белками комплимента, переносят железо (трансферрин), выполняют гормонсвязывающую функцию, участвуют в процессе свёртывания крови (фибриноген), а также переносят некоторые липиды и витамин В-12. В свою очередь, у-глобулины в основном представлены иммуноглобулинами и являются показателями специфического иммунитета [5].

Для более детального изучения влияния фитогеников на показатели иммунной системы у баранов были изучены показатели неспецифического иммунитета в крови (таблица 26).

Таблица 26 - Показатели гуморального и клеточного иммунитета у баранов

(М±т, п=6)

Показатель Группа Р- Значение

контроль танин танин+ДКВ

% лизиса 30,96±4,82вс 50,64±6,59А 53,95±6,84А 0,0231

лизоцим, мкг/мл сыворотки 2,26±0,29с 3,07±0,39 3,41±0,24А 0,0508

уд.ед.а, ед.а/мг. Белка 3,30±0,32 3,59±0,71 3,86±0,34 0,6728

БАСК, % 17,64±1,00с 18,78±0,98 21,21±0,61А 0,0195

ФА, % 41,67±0,92 44,00±2,10 46,50±1,74 0,1120

ФИ, ф.м.к. 2,38±0,04 2,41±0,06 2,43±0,07 0,8028

ФЧ, ф.м.к. 1,04±0,02 1,06±0,04 1,06±0,02 0,7923

Примечания: ФА - фагоцитарная активность, ФИ - фагоцитарный индекс, ФЧ -фагоцитарное число, БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови.

В опытных группах животных наблюдается значительное достоверное (р=0,0231) увеличение относительно контроля % лизиса при скармливании только танинов на 63,6% и на 74,3% при использовании комплексной добавки. Линейно

возрастало количество лизоцима сыворотки крови: 2,26 мкг/мл - контроль, 3,07 мкг/мл - танин, 3,41 мкг/мл - танин+ДКВ. Однако достоверной по данному показателю была разница между контрольной и 2-ой опытной группой (р=0,0508). Удельная активность лизоцима в опытных группах также возрастала, но достоверность этих изменений невелика. Catap Е^. и соавт. (2018) в своем исследовании отмечают положительное действие фитогеников на показатели иммунитета у мышей, проявляющееся в увеличении как лизоцимной, так и фагоцитарной активности [58].

Бактерицидная активность в группе танина увеличилась на 6,5%, а у животных, получавших комплексную добавку, увеличение на 20,2% по отношению к контролю было достоверным (р=0,0195).

Прослеживается выраженная тенденция к увеличению фагоцитарной активности крови у животных опытных групп - 44,00% и 46,50% против 41,67% в контроле. Аналогично, наблюдается некоторое увеличение фагоцитарного индекса, однако фагоцитарное число изменялось незначительно. Об улучшении клеточного иммунитета у овец под действием фитогеников сообщается и в ряде исследований зарубежных авторов [49,142].

Можно сделать вывод, что использование в качестве кормовой добавки конденсированных танинов лиственницы даурской (Ьат\х dahйrica) и ДКВ оказывает положительное влияние на показатели неспецифического иммунитета у баранов, о чём свидетельствует достоверное увеличение БАСК и лизоцима в опытных группах.

2.2.2.2.10. Изучение интенсивности роста овец

Оценка прироста живой массы животных при скармливании биологически активных добавок является важным показателем, характеризующим экономическую целесообразность их использования (рисунок 13).

Валовый прирост, кг

Среднесуточный прирост, г

4,8 4,6 4,4 4,2 4 3,8 3,6

170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120

Контроль Танин Танин+ДКВ

Контроль р<0,05

Танин Танин+ДКВ*

Рисунок 13. Показатели валового и среднесуточного прироста живой массы у

подопытных баранов (п=6) На момент начала опыта живая масса животных была примерно на одном уровне от 48,8 до 50,6 кг. В конце эксперимента была отмечена разница в живой массе между группами животных. Так, в контрольной группе это значение составило 53,9 кг, в группе баранов, получавших танин - 53,4 кг, а в группе, получавшей комплексную добавку - 55,5 кг. Наблюдался линейных рост валового прироста в опытных группах относительно контроля - на 12,9% при скармливании только танинов и на 19,5% при использовании комплексной добавки фитогеников. Аналогично, возрастал и среднесуточный прирост живой массы, причём для животных, получавших добавку танинов в комплексе с дигидрокверцетином, был наибольшим и достоверным (19,5%, р<0,05).

А

2.2.2.2.11. Экономическая эффективность использования фитогенных

кормовых добавок

В таблице 27 представлены результаты расчета экономической эффективности применения в рационах овец комплекса фитогеников на основе конденсированных танинов лиственницы даурской (Ьапх dahйrica) и дигидрокверцетина.

Таблица 27 - Экономическая эффективность применения фитогеников при выращивании овец (в расчете на 1 голову)

Показатель Группа

Контрольная Танин Танин+ДКВ

Валовой прирост за 30 дней опыта, кг 4,1 4,6 4,9

«Условная» цена 1 кг прироста, руб., 600,0 600,0 600,0

Сумма «условной» реализации прироста, руб. 2460 2760 2940

Дополнительный прирост, к контролю, кг - 0,50 0,8

Стоимость дополнительно прироста, руб. - 300,0 480,0

Стоимость дополнительно скормленной добавки за период опыта, руб. - 150,0* 200,0*

Превышение стоимости прироста живой

массы над разницей в стоимости - 150,0 280,0

кормовой добавки, руб.

Примечания: * - из расчёта стоимости кг танинов 1000 рублей, а 1 кг ДКВ 13000 рублей.

Экономические расчёты свидетельствуют о том, что животные опытных групп при более высоких приростах живой массы имели большую по сравнению с контролем затратную стоимость рационов, включающую затраты на добавку танинов Lаrix dahйrica в дозировке 5 г/гол в сутки и ДКВ в дозировке 0,1 г/гол в сутки, при условной цене реализации 1 кг прироста в размере 600,0рублей, имели и большую сумму условной реализации прироста. Так для группы танинов она составила 150,0 рублей, а для животных, получавших комплекс фитогеников -280,0 рублей. Стоимость добавки включала в себя затраты на закупку танинов Lаrix dahйrica и дигидрокверцетина.

2.3. Обсуждение результатов исследований

С целью снижения выделения парниковых газов, в частности метана, жвачными животными без потери продуктивности и вреда для здоровья, а также для улучшения их физиологического состояния и реализации генетического потенциала широкое распространение получило применение фитогенных кормовых добавок. Они не токсичны, обладают широким спектром полезных свойств и не дороги по стоимости. Интерес представляют вторичные метаболиты растений с антиметаногенным эффектом, а также выраженной антиоксидантной и антимикробной активностью, такие как танины и дигидрокверцетин.

Для определения влияния комплекса фитогеников на основе конденсированных танинов на основе конденсированных танинов лиственницы даурской (Lárix dahúrica) и дигидрокверцетина на метаногенез, показатели рубцового пищеварения и состояние обменных процессов в организме баранов на базе лаборатории фундаментальных основ питания сельскохозяйственных животных и рыб, отдела физиологии и биохимии сельскохозяйственных животных и физиологического двора ФГБНУ ФИЦ ВИЖ им. Л.К. Эрнста был проведён опыт на баранах романовской породы возрасте 2-х лет с живой массой 50±2 кг с хроническими фистулами рубца по Басову (n=6). Исследования были разделены на два блока: in vitro и in vivo.

Результаты предварительных исследований in vitro, направленных на установление антиметаногенного эффекта изучаемых добавок, демонстрируют снижение общего газообразования в рубцовом содержимом на 42 % и на 29 % при добавлении 0,02 г и 0,04 г танина соответственно. Комплексная добавка демонстрировала более выраженный эффект (71% и 42% соответственно).

Аналогичные зависимости были получены на следующем этапе in vitro при использовании ферментативной установки ИРГ-4. При добавлении 0,05 г танинов (при пересчёте 5 г/гол в сутки) в рубцовое содержимое количество метана снижалось на 21,2%, а при использовании совместно с 0,001 г ДКВ (при пересчёте 0,1 г/гол в сутки) - на 30,4% ниже. Однако с увеличением дозировки танина как отдельно, так и в комплексе с ДКВ, выделение метана начало расти, что

демонстрирует наличие дозазависимого эффекта фитогеников на газообразование в рубце. Схожие тенденции отмечают и другие исследователи [78,130,139,194]. Полученная оптимальная дозировка добавки составила 5 г/гол в сутки танинов и 0,1 г/гол в сутки ДКВ.

При скармливании изучаемых фитогеников подопытным баранам наблюдали выраженное снижение газообразования в рубце как in vitro в динамике, так и in vivo. Общее газообразование in vitro снизилось на 21% и на 45% (p<0,0001) в 1-ой и 2-ой опытных группах соответственно. В условиях in vivo среднесуточное выделение метана у животных, получавших добавку только танина, снижалось на 14,8%, а в группе комплексной добавки - на 26,8% (p=0,05). Также прослеживалась тенденция к снижению выделения CO2 на 16,4% и 20% соответственно. Схожие данные были получены в других работах [69,116,139].

Использование фитогеников приводит к изменениям показателей рубцового пищеварения. Так, увеличилось общее количество ЛЖК в группе танин+ДКВ до кормления (p=0,0035) на 23,9%, так и после на 9% (p<0,0001). Количество ацетата линейно снижалось в опытных группах и было минимальным (на 3,5% ниже, p=0,0575) в третьей группе, в то время как количество пропионата достоверно (p<0,0001) росло для всех опытных групп (18,912% - контроль, 20,539% - танин, 21,929% - танин +ДКВ). Соотношение ацетата к пропионату также достоверно (p<0,0001) снижалось на 16,8% в группе с комплексной добавкой, что соотносится со снижением выделения метана, уменьшением количества метаногенов и незначительным падением pH рубца после кормления.

Также наблюдается линейный рост амилолитической активности в рубце у животных опытных групп и снижение концентрации аммиака на 17,7% (p=0,0161) и 12,5% соответственно, что может быть обусловлено как снижением распада белков, с которыми танины образуют комплексы, так и на подавление протеолитических микроорганизмов [114,138]. Увеличение общего количества бактерий на 41,4% (p=0,0129) заметно в группе, получавшей танин+ДКВ, но при скармливании только танинов симбионтной микрофлоры меньше, чем в контроле.

Можно предположить, что это обусловлено антибактериальной активностью танинов в отношении микрофлоры рубца и поддерживающем действии ДКВ [25].

Вместе с этим, результаты микробиологических исследований содержимого рубца методом посева на питательных средах свидетельствуют об увеличении количества лактобактерий на 9% для танинов и на 7,3% для комплекса с ДКВ. Схожая зависимость наблюдается также для целлюлозолитических бактерий, наиболее важных представителей микрофлоры жвачных животных. В содержимом прямой кишки наблюдали рост бифидобактерий на 18,3% и 38% в группах танина и комплекса с ДКВ соответственно. Количество лактобактерий в 1-ой опытной группе снизилось на 15,8%, а во 2-ой - увеличилось на 10,7%.

При анализе микробиальных процессов в рубце баранов методом ПЦР-РВ установили рост популяции Lactobacillus spp. в опытных группах, что соотносится с результатами посевов на питательных средах, а также отсутствие негативного влияния на целюлозолитические Bacteroides spp. и Escherichia coli. Кишечные палочки с полноценными ферментативными свойствами являются основной флорой кишечника здоровых животных и обладают выраженными антагонистическими свойствами в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Также фитогеники не повлияли на протеолитические Prevotella spp. в рубце, что является важным положительным результатом.

Изучаемые добавки демонстрируют выраженный антибактериальный эффект в отношении патогенной микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Так, наблюдается выраженное снижение количества плесеней, Salmonella spp. и Shigella spp., Proteus vulgaris/mirabilis (на 9,4% - танин, 15,9% - танин+ДКВ) и Acinetobacter spp (на 2,5 и 10,2% соответственно).

Фитогеники демонстрируют выраженный антибактериальный эффект в отношении основных метаногенов. Так, в рубцовом содержимом баранов количество Methanosphaera stadmanae в 1-ой опытной группе снизилось на 9,8%, а во 2-ой - на 36,6%. Наличие же Methanobrevibacter smithii фиксировалось только в контрольной группе. Схожие тенденции наблюдаются и для содержимого прямой кишки.

Линейное увеличение количества общего белка (в большей мере за счёт альбуминовой фракции) в опытных группах на 3,3% и 5,7% соответственно связано, вероятно, с увеличением переваримости протеина и его большей сохранностью от разрушения в рубце протеолитическими микроорганизмами за счёт комплексообразовательной способности танинов. Увеличение доли альбуминовой фракции в группе комплексной добавки было достоверным (p=0,0382) и составило 8,5%. Будучи транспортными белками, альбумины активно участвуют в переносе гормонов, ионов Ca2+, большого числа липофильных соединений и являются важным донором резервных аминокислот [1]. Полученные тенденции соотносятся с увеличением количества ряда незаменимых аминокислот в опытных группах - треонина на 5,5% (p=0,0675), изолейцина на 8,7% (p=0,0016). Уровень глюкозы в 1-ой опытной группе был выше на 5%, а во 2-ой - на 3,1%.

Количество меди в крови при скармливании только танинов выросло на 34,5% (p=0,0033), а для комплексной добавки - на 43% (p=0,0033). Медь является фундаментальной структурой многих металлоферментов, таких как супероксиддисмутаза или церулоплазмин, необходима для клеточного дыхания, антиоксидантной защиты, функции нейротрансмиттера и биосинтеза тканей [87]. Содержание цинка было выше в группе с комплексной добавкой относительно контрольной на 27,6% и группы танинов на 25,1% (p=0,05). Цинк также содержится ряде металопротеинов и ферментов и играет важную роль в иммунной системе [16,87].

Изучаемые фитогеники оказали значительное влияние на антиоксидантный статус организма подопытных баранов. В крови увеличивалась (p<0,05) активность ферментов антиоксидантной защиты - каталазы (на 14,5% для второй и на 40% для третьей групп), супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы (на 28,3% и 47,6% для группы 3), а также металлопротеинов, таких как церулоплазмин (на 16% для 3 группы). СКВА в группе танина было достоверно (p=0,0193) выше на 8,1%, а в группе с комплексной добавкой - на 7,4%. Эти тенденции соотносятся с ростом концентрации ионов меди и цинка в нашем исследовании. Полученные данные соотносятся с работами других авторов [117,140]. Так, Wang S. и соавт. (2019)

сообщают об увеличении активности глутатионредуктазы (p=0,047) и общей антиоксидантной активности (АОС) в плазме крови овец (p=0,006) при скармливании листьев орешника (Corylus avellana), богатых танинами [188].

Под действием фитогеников у подопытных баранов улучшились показатели неспецифического иммунитета, о чём свидетельствует увеличение бактерицидной активности в группе танинов на 6,5% и в группе танин+ДКВ достоверно (p=0,0195) на 20,2%. Доля лизиса выросла при скармливании только танинов на 63,6% и на 74,3% при использовании комплексной добавки (p=0,0231). Достоверно выросло и количество лизоцима в сыворотке крови животных, получавших комплекс фитогеников, на 50,9% (p=0,05). Также прослеживается тенденция к увеличению фагоцитарной активности в опытных группах: 41,67% - контроль, 44,00% - танин, 46,50% - танин+ДКВ. О положительном влиянии фитогеников на иммунный статус животных сообщается в ряде исследований [49,142].

Использование фитогеников положительно повлияло на потребление и переваримость кормов, а также на баланс азота в организме подопытных баранов. Так, в группе комплексной добавки количество потреблённого сухого вещества было больше на 11,9%, ОВ - на 9,1%, протеина - на 12,1%, жира - на 9,3%, клетчатки - на 11,5%, БЭВ - на 6,8% относительно контроля. Количество переваренных питательных веществ в этой группе также увеличилось: СВ на 19,3% (p<0,05), ОВ - на 15,8%, протеина - на 20,6% (p<0,01), жира - на 26,5% (p<0,05), клетчатки - на 17,6%, БЭВ - на 13,6%. Количество переваренного азота увеличилось на 20,4% (p<0,05), отложенного в теле - на 32,6% (p<0,01).

С улучшением показателей переваримости увеличилась интенсивность роста животных. Валовый прирост в опытных группах был выше относительно контроля - на 12,9% при скармливании только танинов и на 19,5% при использовании комплексной добавки фитогеников. Среднесуточный прирост живой массы, у животных, получавших добавку танинов в комплексе с ДКВ, был на 19,5% выше, чем в контроле (p<0,05). Fonseca N. V. B. и соавт. (2023) сообщают о положительном влиянии конденсированных танинов на ферментацию в рубце, которое обусловлено снижением распада белка, выделения метана на единицу

сухого вещества, а также уменьшению выведения азота с мочой [73]. В свою очередь, лучшее использование белка в рационе способствует набору массы тела, что полностью соотносится с нашими исследованиями.

Положительные эффекты, наблюдаемые в отношении приростов живой массы и переваримости у баранов, позволяют также выдвинуть предположение, что изучаемые фитогеники снижают количество свободных радикалов и активных форм кислорода, защищая мембраны клеток желудочно-кишечного тракта от повреждений. Эта гипотеза подтверждается наблюдаемым повышением уровня ферментов антиоксидантной защиты у баранов. Хотя в некоторых обзорных статьях высказывалось предположение, что наличие танинов в рационе может негативно влиять на потребление кормов жвачными животными, в метаанализе Огеипа-Огеипа J. F. и соавт. (2021) не было выявлено изменений в потреблении сухого вещества в ответ на добавление танинов в рацион, что вероятно, связано с дозазависимым эффектом этих биологически активных веществ [113,140].

Можно выдвинуть гипотезу о наличии эффекта синергизма для танинов лиственницы даурской (ЬаПх dahйrica) и дигидрокверцетина в отношении влияния на полезную и патогенную микрофлору желудочно-кишечного тракта, и как следствие, улучшение показателей рубцового пищеварения, метанообразование за счёт угнетения метаногенных архей, показатели антиоксидантного и иммунного статуса, минерального обмена на сновании более выраженных желательных изменений изучаемых показателей у животных, получавших комплексную добавку, по сравнению с животными контрольной и первой опытной группы.

3. Заключение 3.1. Выводы

По результатам исследований in vitro и in vivo на овцах с целью определения влияния физиологического воздействия комплекса фитогеников на основе конденсированных танинов лиственницы даурской (Lárix dahúrica) и дигидрокверцетина на процессы пищеварения и образование метана в организме жвачных животных можно сделать следующие выводы:

1. По результатам исследований метаногенеза in vitro оптимальная дозировка танинов Lárix dahúrica для баранов составила 5 г/гол в сутки и ДКВ 0,1 г/гол в сутки.

2. Использование фитогеников приводит к увеличению у баранов общего количества ЛЖК в группе танин+ДКВ до кормления (p=0,0035) на 23,9%, так и после на 9% (p<0,0001); снижению концентрации аммиака в опытных группах на 17,7% (p=0,0161) и 12,5% соответственно; линейному росту амилолитической активности; увеличению общего количества бактерий на 41,4% (p=0,0129) в группе, получавшей танин+ДКВ.

3. У баранов, получавших комплекс фитогеников, увеличилось количество переваренного СВ на 19,3% (p<0,05), ОВ - на 15,8%, протеина - на 20,6% (p<0,01), жира - на 26,5% (p<0,05), клетчатки - на 17,6%, БЭВ - на 13,6%. Количество переваренного азота было выше на 20,4%, (p<0,05), а отложенного в теле - на 32,6% (p<0,01).

4. Изученные фитогеники оказывают выраженную антимикробную активность в отношении патогенной микрофлоры рубца: плесеней, Salmonella spp. и Shigella spp., Proteus vulgaris/mirabilis (8,45 lgKOE/мл - танин, 7,85 lgKOE/мл -танин+ДКВ, 9,33 lgKOE/мл - контроль) и Acinetobacter spp. при более выраженном эффекте при использовании комплекса. В рубцовом содержимом баранов количество Methanosphaera stadmanae в 1-ой опытной группе снизилось на 9,8%, а во 2-ой - на 36,6%. Наличие же Methanobrevibacter smithii фиксировалось только в контрольной группе.

5. Применение фитогеников увеличило количество меди в крови баранов при скармливании только танинов на 34,5%, а комплексной добавки - на 43% (p=0,0033); содержание цинка было выше в группе с комплексной добавкой относительно контрольной на 27,6% и группы танинов на 25,1% (p=0,05).

6. Скармливание фитогенных добавок баранам значительно (p<0,05) увеличивало активность ферментов антиоксидантной защиты - церулоплазмина (на 16% для 3 группы), каталазы (на 14,5% для второй и на 40% для третьей групп), супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы (на 28,3% и 47,6% для группы 3).

7. Использование кормовой добавки конденсированных танинов лиственницы даурской (Lârix dahùrica) и ДКВ привело к увеличению у баранов БАСК на 20,2% (p=0,0195) и лизоцима (p=0,05).

8. В условиях in vitro установлено, что при дозировке танинов 5 г/гол в сутки и ДКВ 0,1 г/гол в сутки у баранов снизилось количество выделяющегося метана на 21,2% при использовании только танина и на 30,4% при использовании комплекса с ДКВ. Наблюдается снижение (p<0,0001) общего газообразования в рубце при скармливании фитогеников.

9. В исследованиях in vivo при скармливании фитогеников среднесуточное выделение метана у баранов снижалось на 14,8% в группе танина и на 26,8% (p=0,05) в группе танин+ДКВ.

10. Среднесуточный прирост живой массы баранов, получавших добавку танинов в комплексе с дигидрокверцетином, был выше на 19,5% (p<0,05).

3.2. Рекомендации производству

Исходя из результатов диссертационного исследования по влиянию фитогеников на метаногенез у овец рекомендуем:

Для снижения уровня метанообразования в рубце, улучшения антиоксидантного статуса и показателей неспецифического иммунитета, интенсификации обменных процессов, снижения количества патогенной микрофлоры и улучшения переваримости питательных веществ скармливать овцам добавку на основе конденсированных танинов лиственницы даурской (Lârix

dahùrica) в дозировке 5 г/гол в сутки и дигидрокверцетина в дозировке 0,1 г/гол в сутки.

3.3. Перспективы дальнейшей разработки темы

Использование кормовых добавок растительного происхождения, которые могут выступать в роли модуляторов процессов ферментации в рубце, ингибировать метаногенез и способствовать более эффективному использованию животными питательных веществ кормов рациона - это перспективное и востребованное направление исследований, результаты которых будут способствовать устойчивому развитию сельскохозяйственной отрасли. Интерес представляют дальнейшие комплексные исследования по влиянию фитогеников на метаногенез и продуктивность разных поло-возрастных групп животных (овцематки, бараны-производители), других видов жвачных (коровы, козы), а также по изучению механизмов их физиологического действия.

Список сокращений

А/Г Альбумин-глобулиновый коэффициент

АК Аминокислота

АЛТ Аланинаминотрансфераза

АСТ Аспартатаминотрансфераза

АТФ Аденазинтрифосфорная кислота

БАВ Биологически активные вещества

БАСК Бактерицидная активность

БЭВ Безазотистые экстрактивные вещества

ВУ Водорастворимые углеводы

ГТ Гидролизуемые танины

ДКВ Дигидрокверцетин

ЖКТ Желудочно-кишечный тракт

ЗАК Заменимые аминокислоты

КМАФАнМ Количество мезофильных аэробных и факультативноанаэробных микроорганизмов

КОЕ Колониеобразующие единицы

КРС Крупный рогатый скот

КТ Конденсированные танины

ЛЖК Летучие жирные кислоты

МРС Мелкий рогатый скот

НАК Незаменимые аминокислоты

ОВ Органическое вещество

ОР Основной рацион

ОЭ Обменная энергия

ПБЭВ Переваримые безазотистые экстрактивные вещества

ПЖ Переваримый жир

ПК Переваримая клетчатка

ПОЛ Перекисное окисление липидов

ПП Переваримый протеин

ПСВ Потреблённое сухое вещество

СВ Сухое вещество

СЖ Сырой жир

СК Сырая клетчатка

СКВА Суммарное количество водорастворимых антиоксидантов

СП Сырой протеин

ТБК-АП ТБК-активные продукты

ФА Фагоцитарная активность

ФИ Фагоцитарный индекс

ФЧ Фагоцитарное число

ЦП Церулоплазмин

ЩФ Щелочная фосфатаза

ЭКЕ Энергетическая кормовая единица

ЛЬА Аланин

ARG Аргинин

ASN Аспарагин

ASP Аспарагиновая кислота

Са Кальций

Со Кобальт

Сг Хром

Си Медь

CYS Цистеин

Fe Железо

GLN Глутамин

GLU Глутаминовая кислота

GLY Глицин

HIS Гистидин

ILE Изолейцин

LEU Лейцин

LYS Лизин

МЕТ Метионин

Mg Магний

Ni Никель

Р Фосфор

РНЕ Фенилаланин

РЯО Пролин

S Сера

Se Селен

SER Серин

ТНК Треонин

ТИР Триптофан

ТТИ Тирозин

УАЬ Валин

7п Цинк

4. Список литературы

1. Балабаев, Б.К. Возрастные особенности тиреоидного статуса и белкового обмена в организме животных казахской белоголовой породы / Б.К. Балабаев, М.А. Дерхо // АПК России. - 2016. - Т. 23. - №. 3. - С. 640-645.

2. Богданов, Г.О. Биохимические и физиологические предпосылки уменьшения эмиссии метана жвачными животными / Г.О. Багданов, Л.И. Сологуб, В.В. Влизло и др. // Сельскохозяйственная биология. - 2010. - Т. 45. - №. 4. - С. 13-24.

3. Боголюбова, Н.В. Метанообразование в рубце и методы его снижения с использованием алиментарных факторов (обзор) / Н.В. Боголюбова, А.А. Зеленченкова, Н.С. Колесник, П.Д. Лахонин // Сельскохозяйственная биология. - 2022. - Т. 57. - №. 6. - С. 1025-1054 (doi: 10.15389/agrobiology.2022.6.1025rus).

4. Гиреев, Г.И. Метаболизм у овец при геохимическом селенодефиците / Г.И. Гиреев, Ш.К. Салихов, С.Г. Луганова // Вестник Дагестанского государственного университета. Серия 1: Естественные науки. - 2014. - №. 6. - С. 107-112.

5. Д. Мейер, Дж. Харви. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпретация и диагностика. Пер. с англ. - М: Софион. 2007, 456 с.

6. Драганов И.Ф., Двалишвили В.Г., Калашников В.В. Кормление овец и коз: учебник. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 208 с.

7. Дускаев, Г.К. Использование пробиотиков и растительных экстрактов для улучшения продуктивности жвачных животных (обзор) / Г.К. Дускаев, Г.И. Левахин, В.Л. Королёв и др. // Животноводство и кормопроизводство. - 2019. - Т. 102. - №. 1. - С. 136-148. (doi: 10.33284/2658-3135-102-1-136).

8. Енгашев, С.В. Эффективность препарата Протостоп при диареях смешанной паразитарно-бактериальной этиологии у молодняка крупного рогатого скота / С.В. Енгашев, Л.М. Белова, Н.А. Гаврилова и др. // Сельскохозяйственная

биология. - 2024. - Т. 59. - №. 2. - С. 355-365. (doi: 10.15389/agrobiology.2024.2.355rus).

9. Забелина, М.В. К вопросу об основных биохимических показателях, их роли в организме овец и коз / М.Б. Забелина, А.С. Новичков, Е.И. Григорашкина // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2014. - №. 3. - С. 12-14.

10.Зайцев, В.В. Влияние хвойной энергетической добавки на метаногенез у лактирующих коров / В.В. Зайцев, Н.В. Боголюбова, В.П. Короткий и др. // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2023. - №. 2 (100). - С. 250-253.

11.Ильина, Л.А. Содержание микроорганизмов в рубце телят разного возраста / Ильина Л.А. // Животноводство и кормопроизводство. - 2017. - №. 3 (99). -С. 128-133.

12.Каллистова, А.Ю. Образование и окисление метана прокариотами / А.Ю. Каллистова, А.Ю. Меркель, И.Ю. Тарновецкий и др. // Микробиология. -2017. - Т. 86. - №. 6. - С. 661-683. (doi: 10.7868/S002636561706009X).

13.Колесник, Н.С. Микробиологические показатели в рубце овец при скармливании разного уровня концентратов / Н.С. Колесник, А.А. Зеленченкова, П.С. Вьючная и др. // Аграрная наука. - 2024. - №. 7. - С. 8590 (doi: 10.32634/0869-8155-2024-384-7-85-90).

14.Колесник, Н.С. Изучение влияния фитогеников на метанообразование в организме овец методами in vitro / Н.С. Колесник, Н.В. Боголюбова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2024. - №. 2. - С. 18-20. (doi: 10.26897/2074-08402024-2-18-20).

15.Колесник, Н.С. Влияние различных классов танинов на метаногенез у жвачных животных / Н.С. Колесник, Н.В. Боголюбова, А.А. Зеленченкова // Сельскохозяйственная биология. - 2024. - Т.59. - №2. - С. 221-236. (doi: 10.15389/agrobiology.2024.2.221rus).

16. Коновалова, Т.В. Углеводный и минеральный обмены у овец романовской породы в условиях Западной Сибири / Т.В. Коновалова, Е.А. Климанова, Е.И. Тарасенко и др. // Вестник НГАУ (Новосибирский государственный

аграрный университет). - 2025. - №. 4. - С. 207-214. (doi: 10.31677/2072-67242024-73-4-207-214).

17. Короткий, В.П. Влияние хвойной энергетической добавки на снижение метаногенеза у крупного рогатого скота / В.П. Короткий, В.В. Зайцев, А.В. Кучин и др. // Тезисы докладов XII Всероссийской научной конференции с международным участием и школой молодых ученых «Химия и технология растительных веществ», Киров. - 2022. - С. 94.

18.Курилов, Н.В. Изучение пищеварения у жвачных / Н.В. Курилов, Н.А. Севостьянова, В.Н. Коршунов // Боровск, - 1985. - С.104.

19.Мишуров, А.В. Влияние биологически активных веществ на рубцовый метаболизм овец / А.В. Мишуров // Вестник Рязанского государственного агротехнологического университета им. ПА Костычева. - 2021. - Т. 13. - №. 2. - С. 35-41. (doi: 10.36508/RSATU.2021.50.2.005).

20.Морев, С.Ю. Пути решения проблемы сокращения антропогенных выбросов парниковых газов / С.Ю. Морев // Труды IV Международной научной конференции «Проблемы экологического образования в XXI веке», Владимир. - 2020. - С. 127-132.

21. Ножевникова, А.Н. Синтрофия и межвидовой перенос электронов в метаногенных микробных сообществах / А.Н. Ножевникова, Ю.И. Русскова, Ю.В. Литти и др. // Микробиология. - 2020. - Т. 89. - №. 2. - С. 131-151. (doi: 10.31857/S0026365620020111).

22.Попова, О.С. Пути решения проблем дисфункции рубца / О.С. Попова // Нормативно-правовое регулирование в ветеринарии. - 2022. - №. 1. - С. 8587. (doi: 10.52419/issn2782-6252.2022.1.85).

23.Тараканов, Б.В. Методы исследования микрофлоры пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных иптицы / Б.В.Тараканов. — М.: Научный мир, 2006. — 188 с.

24.Федяева, С.В. Снижение выделения метана коровами за счет кормовых добавок / С.В. Федяева, К.С. Шумицкая, А.С. Заикина // Сборник научных трудов по результатам работы VII Всероссийской научно-практической

конференции с международным участием «Молодые исследователи агропромышленного и лесного комплексов-регионам», Вологда- Молочное: ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА. - 2022. - Т.3. - №3. - С. 197-200.

25.Фомичев, Ю.П. Биокоррекция ферментативных и микробиологических процессов в рубце, межуточный обмен у овец путем применения в питании антиоксиданта и органического йода / Ю.П. Фомичев, Н.В. Боголюбова, А.В. Мишуров и др. // Российская сельскохозяйственная наука. - 2019. - №. 4. -С. 43-47. ^ог 10.31857^2500-26272019443-47).

26.Фомичев, Ю.П. Направленность и интенсивность ферментативных и микробиологических процессов в рубце овец при включении в рацион природных кормовых добавок с различными биологическими свойствами / Ю.П. Фомичев, Н.В. Боголюбова // Актуальная биотехнология. - 2020. - №. 3. - С. 234-238.

27. Фомичев, Ю.П. Экстракт коры лиственницы даурской (танины) в рационе молочных коров / Ю.П. Фомичев, В.А. Кузнецова // Эффективное животноводство. - 2023. - № 3(185). - С. 64-66. ^ог 10.24412/с1-33489-2023-3-64-66).

28.Фомичев, Ю.П. Дигидрокверцетин и арабиногалактан - природные биорегуляторы в жизнедеятельности человека и животных, применение в сельском хозяйстве и пищевой промышленности / Ю. П. Фомичев, Л. А. Никанова, В. И. Дорожкин [и др.]. - Москва : Издательский дом "Научная библиотека", 2017. - 702 с. - EDN YUNXZA.

29. Харитонов, Е.Л. Становление рубцового пищеварения у бычков в послемолочный период при скармливании комбикормов-стартеров разного состава / Е.Л. Харитонов, В.П. Галочкина // Проблемы биологии продуктивных животных. - 2020. - №. 2. - С. 99-109. ^ог 25687/1996-6733.ргоааттЫо12020.2: 99-109).

30.Шарвадзе, Р.Л. Использование дигидрокверцетина в рационе коров в период раздоя / Р.Л. Шарвадзе, Е.М. Гайдукова, О.А. Зеленко и др. // Проблемы

зоотехнии, ветеринарии и биологии животных на Дальнем Востоке. - 2018. -С. 108-115.

31.Шейда, Е.В. Влияние дополнительного введения льняного масла на изменение микробиома рубца крупного рогатого скота / Е.В. Шейда, С.В. Лебедев, С.А. Мирошников и др. // Животноводство и кормопроизводство. -2021. - Т.104. - №2. - С. 84-95. (doi: 10.33284/2658-3135-104-2-84).

32. Шейда, Е.В. Влияние Artemisiae absinthil herba и Inulae rhizomata et radices на процессы ферментации и метаногенез в рубце молодняка крупного рогатого скота / Е.В. Шейда, В.А. Рязанов, Г.К. Дускаев и др. // Аграрная наука. - 2023. - №3. - С. 46-51. (doi: 10.32634/0869-8155-2023-368-3-46-51).

33.Akanmu, A.M. Gas production, digestibility and efficacy of stored or fresh plant extracts to reduce methane production on different substrates / A.M. Akanmu, A. Hassen, F.A. Adejoro //Animals. - 2020. - Vol. 10. - №. 1. - P. 146. (doi: 10.3390/ani10010146).

34.Almeida, A.K. Meta-analysis quantifying the potential of dietary additives and rumen modifiers for methane mitigation in ruminant production systems / A.K. Almeida, R.S. Hegarty, A. Cowie // Animal Nutrition. - 2021. - Vol. 7. - № 4. -P. 1219-1230. (doi: 10.1016/j.aninu.2021.09.005).

35.Alves, T.P. The effects of supplementing acacia mearnsii tannin extract on dairy cow dry matter intake, milk production, and methane emission in a tropical pasture / T.P. Alves, A.C. Dall-Orsoletta, H.M.N. Ribeiro-Filho // Tropical Animal Health and Production. - 2017. - Vol. 49. - № 8. - P. 1663-1668. (doi: 10.1007/s11250-017-1374-9).

36. Amanzougarene, Z. Fitting of the in vitro gas production technique to the study of high concentrate diets / Z. Amanzougarene, M. Fondevila // Animals. - 2020. -Vol. 10. - №. 10. - P. 1935. (doi: 10.3390/ani10101935).

37.Animut, G. Methane emission by goats consuming diets with different levels of condensed tannins from Lespedeza / G. Animut, R. Puchala, A.L. Goetsch et al. // Animal Feed Science and Technology. - 2008. - Vol. 144. - P. 212-227. (doi: 10.1016/j.anifeedsci.2007.10.014)

38. Appuhamy, J.R. Anti-methanogenic effects of monensin in dairy and beef cattle: a meta-analysis / J.R. Appuhamy, A.B. Strathe, S. Jayasundara et al. // Journal of Dairy Science. - 2013. - Vol 96. - № 8. - P. 5161-5173. (doi: 10.3168/jds.2012-5923)

39.Arndt, C. Full adoption of the most effective strategies to mitigate methane emissions by ruminants can help meet the 1.5 C target by 2030 but not 2050 / C. Arndt, A.N. Hristov, W.J. Price et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2022. - Vol. 119. - №. 20. - P. e2111294119. (doi: 10.1073/pnas.2111294119).

40.Basarab, J.A. Reducing GHG emissions through genetic improvement for feed efficiency: effects on economically important traits and enteric methane production / J.A. Basarab, K.A. Beauchemin, V.S. Baron et al. // Animal. - 2013. - Vol. 7. -№. s2. - P. 303-315. (doi: 10.1017/S1751731113000888).

41.Beauchemin, K.A. Fifty years of research on rumen methanogenesis: Lessons learned and future challenges for mitigation / K.A. Beauchemin, E.M. Ungerfeld, R.J. Eckard, M. Wang // Animal. - 2020. - Vol. 14. - №. S1. - P. s2-s16. (doi: 10.1017/S1751731119003100).

42. Beauchemin, K.A. Invited review: Current enteric methane mitigation options / K.A. Beauchemin, E.M. Ungerfeld, A.L. Abdalla et al. // Journal of Dairy Science. - 2022. - Vol. 105. - №. 12. - P. 9297-9326. (doi:10.3168/jds.2022-22091).

43.Benchaar, C. Diet supplementation with cinnamon oil, cinnamaldehyde, or monensin does not reduce enteric methane production of dairy cows / C Benchaar // Animal. - 2016. - Vol. 10. - № 3. - P. 418-425. (doi: 10.1017/S175173111500230X).

44.Benchaar, C. Essential oils and opportunities to mitigate enteric methane emissions from ruminants / C. Benchaar, H. Greathead // Animal Feed Science and Technology. - 2011. - Vol. 166. - P. 338-355. (doi: 10.1016/j.anifeedsci.2011.04.024).

45. Berça, A.S. Meta-analysis of the relationship between dietary condensed tannins and methane emissions by cattle / A.S. Berca, L.O. Tedeschi, A. da Silva Cardoso,

R.A. Reis // Animal Feed Science and Technology. - 2023. - Vol. 298. - P. 115564. (doi: 10.1016/j.anifeedsci.2022.115564).

46.Bhatt, R.S. Comparing the efficacy of forage combinations with different hydrolysable and condensed tannin levels to improve production and lower methane emission in finisher lambs / R.S. Bhatt, S. Sarkar, P. Sharma et al. // Small Ruminant Research. - 2023. - Vol. 218. - P. 106876. (doi: 10.1016/j.smallrumres.2022.106876).

47.Bhatta, R. Effects of graded levels of tannin-containing tropical tree leaves on in vitro rumen fermentation, total protozoa and methane production / R. Bhatta, M. Saravanan, L. Baruah, C.S. Prasad // Journal of Applied Microbiology. - 2015. -Vol. 118. - № 3. - P. 557-564. (doi: 10.1111/jam.12723).

48. Bhatta, R. Difference in the nature of tannins on in vitro ruminal methane and volatile fatty acid production and on methanogenic archaea and protozoal populations / R. Bhatta, Y. Uyeno, K. Tajima et al. // Journal of Dairy Science. -2009. - Vol. 92. - № 11. - P. 5512-5522. (doi: 10.3168/jds.2008-1441).

49.Biz, J.F.F. Effect of commercial tannins on parasitic infection and immunity of lambs naturally infected with Haemonchus contortus / J.F.F. Biz, S.K. Dos Santos, J.A. Salgado et al. // Veterinary Parasitology: Regional Studies and Reports. -2023. - Vol. 38. - P. 100833. (doi:10.1016/j.vprsr.2023.100833).

50.Breider, I.S. Heritability of methane production and genetic correlations with milk yield and body weight in Holstein-Friesian dairy cows / I.S. Breider, E. Wall, P.C. Garnsworthy // Journal of Dairy Science. - 2019. - Vol. 102. - №. 8. - P. 72777281. (doi:10.3168/jds.2018-15909).

51.Buan, N.R. Methanogens: pushing the boundaries of biology / N.R. Buan // Emerging Topics in Life Sciences. - 2018. - Vol. 2. - №. 4. - P. 629-646. (doi: 10.1042/ETL S20180031).

52.Bueno, I.C.S. In vitro methane production and tolerance to condensed tannins in five ruminant species / I.C.S. Bueno, R.A. Brandi, R. Franzolin et al. // Animal Feed Science and Technology. - 2015. - Vol. 205. - P. 1-9. (doi:10.1016/j.anifeedsci.2015.03.008).

53. Burdick, M. Effects of medium-chain fatty acid supplementation on performance and rumen fermentation of lactating Holstein dairy cows / M. Burdick, M. Zhou, L.L. Guan, M. Oba // Animal. - 2022. - Vol. 16. - №. 4. - P. 100491. (doi:10.1016/j.animal.2022.100491).

54.Caetano, M. Effect of ensiled crimped grape marc on energy intake, performance and gas emissions of beef cattle / M. Caetano, M.J. Wilkes, W.S. Pitchford et al. // Animal Feed Science and Technology. - 2019. - Vol. 247. - P. 166-172. (doi:10.1016/j.anifeedsci.2018.10.007).

55.Cammack, K.M. Tiny but mighty: the role of the rumen microbes in livestock production / K.M. Cammack, K.J. Austin, W.R. Lamberson et al. // Journal of Animal Science. - 2018. - Vol. 96. - P. 752-770. (doi: 10.1093/jas/skx053).

56.Cantalapiedra-Hijar, G. Biological determinants of between-animal variation in feed efficiency of growing beef cattle: Review / G. Cantalapiedra-Hijar, M. AboIsmail, G.E. Carstens et al. // Animal. - 2018. - Vol. 12. - P. 1-15. (doi: 10.1017/S1751731118001489).

57.Cappucci, A. Diets supplemented with condensed and hydrolysable tannins affected rumen fatty acid profile and plasmalogen lipids, ammonia and methane production in an in vitro study / A. Cappucci, A. Mantino, A. Buccioni et al. // Italian Journal of Animal Science. - 2021. - Vol. 20. - № 1. - P. 935-946. (doi: 10.1080/1828051X.2021.1915189).

58.Catap, E.S. In vivo nonspecific immunomodulatory and antispasmodic effects of common purslane (Portulaca oleracea Linn.) leaf extracts in ICR mice / E.S. Catap, M.J.L. Kho, M.R.R. Jimenez et al. // Journal of ethnopharmacology. - 2018. - Vol. 215. - P. 191-198. (doi:10.1016/j .jep.2018.01.009).

59. Chen, D. Effects of mulberry leaf flavonoid and resveratrol on methane emission and nutrient digestion in sheep / D. Chen, X. Chen, Y. Tu et al. // Animal Nutrition. - 2015. - Vol. 1. - № 4. - P. 362-367. (doi: 10.1016/j.aninu.2015.12.008).

60.Cobellis, G. Critical evaluation of essential oils as rumen modifiers in ruminant nutrition: A review / G. Cobellis, M. Trabalza-Marinucci, Z. Yu // Science of the

Total Environment. - 2016. - Vol. 545. - P. 556-568. (doi: 10.1016/j.scitotenv.2015.12.103).

61. Conrad, R. Importance of hydrogenotrophic, aceticlastic and methylotrophic methanogenesis for methane production in terrestrial, aquatic and other anoxic environments: a mini review / R. Conrad // Pedosphere. - 2020. - Vol. 30. - №. 1. - P. 25-39. (doi: 10.1016/S1002-0160( 18)60052-9).

62. Costa, M. Effects of condensed and hydrolyzable tannins on rumen metabolism with emphasis on the biohydrogenation of unsaturated fatty acids / M. Costa, S.P. Alves, A. Cappucci et al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. - 2018. -Vol. 66. - №. 13. - P. 3367-3377. (doi:10.1021/acs.jafc.7b04770).

63.Denninger, T.M. Immediate effect of Acacia mearnsii tannins on methane emissions and milk fatty acid profiles of dairy cows / T.M. Denninger, A. Schwarm, A. Birkinshaw et al. // Animal Feed Science and Technology. - 2020. -Vol. 261. - P. 114388. (doi: 10.1016/j.anifeedsci.2019.114388).

64.Diaz Carrasco, J.M. Impact of chestnut and quebracho tannins on rumen microbiota of bovines / J.M. Diaz Carrasco, C. Cabral, L.M. Redondo et al. // BioMed Research International. - 2017. - Vol. 2017. - № 3. - P. 9610810. (doi: 10.1155/2017/9610810).

65.Dijkstra, J. Antimethanogenic effects of 3-nitrooxypropanol depend on supplementation dose, dietary fiber content, and cattle type / J. Dijkstra, A. Bannink, J. France et al. // Journal of dairy science. - 2018. - Vol. 101. - №. 10. -P. 9041-9047. (doi:10.3168/jds.2018-14456).

66.Dok-Go, H. Neuroprotective effects of antioxidative flavonoids, quercetin,(+)-dihydroquercetin and quercetin 3-methyl ether, isolated from Opuntia ficus-indica var. saboten / H. Dok-Go, K.H. Lee, H.J. Kim et al. // Brain research. - 2003. -Vol. 965. - №. 1-2. - P. 130-136. (doi:10.1016/S0006-8993(02)04150-1).

67.Dong, L.F. Effects of diet forage proportion on maintenance energy requirement and the efficiency of metabolizable energy use for lactation by lactating dairy cows / L.F. Dong, C.P. Ferris, D.A. McDowell, T. Yan // Journal of Dairy Science. -2015. - Vol. 98. - № 12. - P. 8846-8855. (doi: 10.3168/jds.2015-9465).

68.Duin, E.C. Mode of action uncovered for the specific reduction of methane emissions from ruminants by the small molecule 3-nitrooxypropanol / E.C. Duin, T. Wagner, S. Shima et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences. -2016. - Vol. 113. - №. 22. - P. 6172-6177. (doi:10.1073/pnas.1600298113).

69.El-Zaiat, H.M. The ability of tanniniferous legumes to reduce methane production and enhance feed utilization in Barki rams: in vitro and in vivo evaluation / H.M. El-Zaiat, A.E. Kholif, M.S. Moharam et al. // Small Ruminant Research. - 2020. -Vol. 193. - P. 106259. (doi: 10.1016/j.smallrumres.2020.106259).

70.Eugène, M. Methane mitigating options with forages fed to ruminants / M. Eugène, K. Klumpp, D. Sauvant // Grass and Forage Science. - 2021. - Vol. 76. - №. 2. -P. 196-204. (doi: 10.1111/gfs. 12540).

71.Febres, F.E.F. Effects of chestnut bark (Castanea spp.) tannin extracts on selectivity, dry matter intake, weight gain, and enteric methane emission from llamas (Lama glama) under grazing conditions in the high Andean grasslands / F.E.F. Febres, L.A. Terrazas, J.N. Vasquez et al. // Small Ruminant Research. -2021. - Vol. 205. - P. 106559. (doi: 10.1016/j.smallrumres.2021.106559).

72.Feldewert, C. The hydrogen threshold of obligately methyl-reducing methanogens / C. Feldewert, K. Lang, A. Brune // FEMS Microbiology Letters. - 2020. - Vol. 367. - №. 17. - P. fnaa137. (doi:10.1093/femsle/fnaa137).

73.Fonseca, N.V.B. Additive tannins in ruminant nutrition: An alternative to achieve sustainability in animal production / N.V.B. Fonseca, A.S. Cardoso, A.S.R.S. Bahia et al. // Sustainability. - 2023. - Vol. 15. - №. 5. - P. 4162. (doi: 10.3390/su15054162).

74.Friedman, N. Compositional and functional dynamics of the bovine rumen methanogenic community across different developmental stages / N. Friedman, E. Jami, I. Mizrahi // Environmental microbiology. - 2017. - Vol. 19. - №. 8. - P. 3365-3373. (doi: 10.1111/1462-2920.13846).

75.Fu, Y. Dihydroquercetin regulates HIF-1a/AKT/NR2B signalling to improve impaired brain function in rats with metabolic syndrome / Y. Fu, P.P. Yuan, M.

Zeng et al. // Heliyon. - 2024. - Vol. 10. - №. 9. - P. e29807. (doi: 10.1016/j.heliyon.2024.e29807).

76.Garcia-Chavez, I. Corn Silage, Meta-Analysis of The Quality and Yield of Different Regions in the World / I. Garcia-Chavez, E. Meraz-Romero, O. Castelan-Ortega et al. // Preprints. - 2020. - 2020100094. (doi: 10.20944/preprints202010.0094.v1).

77.Garcia-Diez, J. Salmonella spp. in Domestic Ruminants, Evaluation of Antimicrobial Resistance Based on the One Health Approach—A Systematic Review and Meta-Analysis / J. Garcia-Diez, D. Moura, L. Grispoldi et al. // Veterinary Sciences. - 2024. - Vol. 11. - №. 7. - P. 315. (doi: 10.3390/vetsci11070315).

78.Gemeda B.S. Effect of tannin and species variation on in vitro digestibility, gas, and methane production of tropical browse plants / B.S. Gemeda, A. Hassen // Asian-Australasian journal of animal sciences. - 2015. - Vol. 28. - №. 2. - P. 188. (doi: 10.5713/ajas.14.0325).

79.Getachew, G. In vitro gas production provides effective method for assessing ruminant feeds / G. Getachew, E.J. DePeters, P. Robinson // California agriculture.