Влияние партеногенетических активаторов на преобразования хроматина и цитоплазматические изменения в ооцитах коров и свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Федосков, Евгений Дмитриевич

• Федосков, Евгений Дмитриевич
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Федосков, Евгений Дмитриевич

Активация ооцитов крупного рогатого скота электрическим

2+

3.1.2.1. Влияние ионов Са на активацию ооцитов крупного рогатого скота электрическим током

3.1.2.2. Влияние числа электрических импульсов на активацию ооцитов крупного рогатого скота

3.1.3. Влияние этилового спирта и электрического тока на ооциты коров

3.2. Партеногенетическое развитие ооцитов свиней

3.2.1. Активация ооцитов свиней этиловым спиртом

3.2.2. Влияние кондиционированных сред, полученных с монослоев клеток гранулезы или кумулюса коров, на созревание и партеногенетическое развитие ооцитов свиней

3.3. Динамика накопления кальция во внутриклеточных депо ооцитов

коров после их активации или осеменения in vitro

3.4. Интенсивность флуоресценции родамина 123 в митохондриях ооцитов крупного рогатого скота после их стимуляции к партеногенети-

ческому развитию и в интактных ооцитах

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИФ - интенсивность флуоресценции

ИФр123 - Интенсивность флуоресценции родамина

КГ - клетки гранулезы

ЛГ - лютеинизирующий гормон

ОКК - ооцит - кумулюсные комплексы

PBS - фосфатно - солевой буфер

р123 - родамин

СА - среда активации

Са2+пх - кальций внутриклеточных хранилищ ТС-199 - среда для культивирования ФСГ - фолликуло-стимулирующий гормон ФСМ - функциональное состояние митохондрий

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние партеногенетических активаторов на преобразования хроматина и цитоплазматические изменения в ооцитах коров и свиней»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Современные методы биотехнологии, позволяющие получать эмбрионы сельскохозяйственных животных для трансплантации, а также для целей клеточной и генетической инженерии из in vitro созревших ооцитов, были разработаны благодаря научным достижениям в области исследования механизмов регуляции мейоза и раннего развития млекопитающих. Новые достижения в технологиях репродукции будут продолжаться или даже ускоряться, основываясь на дальнейшем углублении фундаментальных исследований в области биологии развития, биохимической эмбриогенетики, необходимость в расширении которых не перестает быть актуальной.

Несомненно, что впечатляющие эксперименты по клонированию сельскохозяйственных животных, об успешном завершении которых сообщили в последние два года исследователи (Wilmut, 1997), вызвали новый интерес к разработке отдельных технологических приемов клонирования, эффективность которых в настоящее время остается на уровне 0,3 %. Известно также, что одним из методов создания генетически идентичных особей является их партеногенетическое развитие. Существенным моментом обеих технологий является активация яйцеклетки к дальнейшему развитию. В связи с этим выявление эффективного стимулятора активации ооцита к партеногенезу может оказаться полезным и для биотехнологии животноводства. Кроме того партеногенетические зародыши млекопитающих служат удобной биологической моделью для решения ряда актуальных задач экспериментальной эмбриологии и генетики развития. В 70-е годы нашего века были разработаны надежные методы искусственной активации яйцеклеток мышей (Tarkowski et al., 1971) и кроликов. Путем активации яйцеклеток коров холодовым шоком были получены зародыши коров (Эрнст и др., 1983, Кузнецов, 1985). Обнаружены случаи спонтанного партеногенетического развития ооцитов коров при их

экстракорпоральном созревании (Кузьмина, 1990). Несмотря на то, что в

|

отдельных случаях, полученные зародыши достигали стадии морулы или даже бластоцисты их жизнеспособность была низкой. Понятно, что исследования начальных стадий развития партеногенетических зародышей позволит подойти к пониманию причин их гибели и выбрать оптимальные режимы воздействия активирующих агентов.

Цели и задачи исследований. Целью исследования явилось изучение морфо - функциональных особенностей ооцитов коров и свиней, активированных к партеногенетическому развитию.

Для выполнения поставленной цели решались следующие задачи:

1 .Исследовать способность экстракорпорально созревших ооцитов коров и свиней вступать в партеногенетическое развитие при воздействии электрического тока или этанола;

2. Изучить факторы, влияющие на эффективность активации яйцеклеток коров и свиней электрическим током или этанолом;

3. Изучить динамику преобразования хроматина в активированных и интактных ооцитах, зиготах коров и свиней;

4. Исследовать динамику содержания ионов кальция во внутриклеточных депо интактных и активированных ооцитов коров;

5. Оценить функциональное состояние митохондрий в ооцитах коров до и после воздействия этанолом;

6. Выявить влияние кондиционированных сред, полученных с монослоев клеток гранулезы из фолликулов коров, на способность ооцитов свиней вступать в партеногенетическое развитие.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые в сравнительном аспекте изучены некоторые функциональные особенности интактных и активированных ооцитов коров. Показано, что интенсивность флуоресценции родамина 123 в митохондриях активированных яйцеклеток коров изменялась параллельно с преобразованиями хроматина. Изучена

динамика содержания ионов кальция во внутриклеточных хранилищах ооцитов коров, созревших in vitro, после контакта со спермой и в яйцеклетках, активированных этанолом. Сравнительный анализ содержания кальция во внутриклеточных депо в ооцитах после их осеменения или активации к партеногенезу показал достоверные различия в динамике его накопления в первые 1, 2, 6 часов культивирования, что, вероятно, объясняется различными механизмами воздействия этанола и сперматозоидов на ооциты. Впервые показано, что кондиционированные среды, полученные с монослоев гетерологичных клеток кумулюса или гранулезы коров, индуцируют к партеногенетическому развитию ооциты свиней при созревании in vitro.

Определены режимы обработки ооцитов коров электрическим током, позволяющие получать партеногенетические зародыши. Предложен метод получения партеногенетических зародышей свиней на основе использования кондиционированных сред монослоев клеток кумулюса или гранулезы коров.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Федосков, Евгений Дмитриевич

выводы

1. Проведена сравнительная морфо - функциональная оценка начальных стадий развития активированных ооцитов, зигот и эмбрионов коров. Преобразованиям хроматина (формирование пронуклеусов или синкарионов) сопутствуют изменения содержания депонированного кальция и функционального состояния митохондрий.

2. Активирующее действие 1,6%, 3,6 и 8,0% этилового спирта зависит от продолжительности воздействия на ооцит и температуры среды.

3. Не обнаружено достоверных различий в эффекте электрического тока или 1,6%, 3,6 и 8,0%) этанола (при использования оптимальных параметров обработки) на выход полноценных партеногенетических эмбрионов коров.

4. При активации яйцеклеток 3,6 и 8,0% этанолом к партеногенезу, ооциты свиней имеют более высокие потенции, чем ооциты коров.

5. В качестве активатора партеногенетического развития яйцеклеток свиней могут быть использованы кондиционированные среды с монослоев гетерологичных клеток гранулезы или кумулюса из антральных фолликулов (диаметр - 3 - 6 мм) коров.

6. Обнаружены изменения содержания кальция во внутриклеточных хранилищах ооцитов коров, как оплодотворенных (с 6,04±0,49 усл.ед. до 3,49±0,31 усл.ед), так и активированных этанолом (с 6,04±0,49 усл.ед. до 3,55±0,56 усл.ед) в процессе их развития.

7. Низкий уровень депонированного кальция (3,51±0,42 усл.ед.), наблюдали во время пенетрации ооцитов сперматозоидами и формирования пронуклеусов, что свидетельствует об усилении метаболической активности оплодотворенных и активировавшихся ооцитов. У партеногенетических зародышей, в промежутке от 8 до 14 часов с момента активаций формирование пронуклеусов) содержание депонированного кальция составило 3,55±0,56 - 3,66±0,41 усл.ед.

8. В активированных этанолом ооцитах коров интенсивность флуоресценции родамина 123 изменялась параллельно с изменениями состояния хроматина. Активировавшиеся ооциты, хроматин которых находился на стадии пронуклеусов, характеризовались повышенным уровнем флуоресценции по сравнению с интактными ооцитами.

9. В партеногенетических зародышах коров снижение уровня содержания депонированного кальция сопровождалось повышением интенсивности флуоресценции родамина! 23 в митохондриях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В технологиях получения партеногенетических зародышей коров или клонирования, использовать следующие параметры активации электрическим током: длительность импульса - 20 мкс; напряженность электромагнитного поля 2,4 кВ/см; в 0,32М маннитоле с 0,1 мМ СаС12.

2. Для получения партеногенетических зародышей свиней, применять кондиционированную среду, полученную после культивирования клеток .гранулезы коров в ТС-199 с 15% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 40 мкг/мл гентамицин сульфата, 10 мкг/мл ФСГ, 5 мкг/мл ЛГ и 1 мкг/мл эстрадиола.

3. Материалы диссертации могут быть использованы в учебных курсах по генетике и биотехнологии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Федосков, Евгений Дмитриевич, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Авдонин П.В. Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. М., Наука. 1994. 288с,

2.Алиева И.Б., Воробьев И.А. Влияние повышения концентрации кальция, вызванного действием ионофора А23187, на митоз культивируемых клеток СПЭВ. //Цитология, 19966 Том 38, №12, 1261-1268.

3.Астауров А.П., Демин, Е.С. Партеногенез у птиц. //Онтогенез, 1972, Т.З, N.2, сс.123-143.

4.Дыбан А.П. Баранов B.C. Циогенетика развития млекопитающих. Изд. «Наука», М, 1978.

5.Дыбан А.П., Нониашвили Е.М. Раннее развитие млекопитающих. Л., 1988. 228с.

6.Дыбан А.П., Нониашвили Е.М. Партеногенетическое развитие в ответ на обработку яйцеклеток мыши слабой щелочью. Опыты с метиламином. // Онтогенез, 1990, Т.21, №.3, с.280-285.

7.Дыбан А.П., Хожай Л.И. Партеногенетическое развитие овулировавших ооцитов мышей под влиянием этилового спирта.//Бюлл.эксперим.биол.и медицины. 1980 T.139,N 8,сс.487-489.

8.Дыбан А.П., Нониашвили Е.М. Партеногенез млекопита-ющих. /Онтогенез. 1986. T.N4. С.280-296.

9.Дыбан А.П., Нониашвили Е.М. Партеногенетическое развитие яйцеклеток мышей, активированных тепловым шоком. //Онтогенез. 1986., Т. 17, N6, С. 587-591.

Ю.Кольцов Н.К. Искусственный партеногенез у шелковичного червя. //Проблемы животноводства, 1932, N 4, с.55-64.

11.Крутецкая 3. И., Лебедев О. Е., Крутецкая Н. И. Влияние ингибиторов окислительного метаболизма митохондрий на Са-ответы,

индуцированные пуринергическими агонистами и тапсигаргином в перитонеальных макрофагах крысы. //Цитология, 1998, Том 40, №1, с. 93-99.

12.Крутецкая 3. И., Лебедев О. Е., Тюшев В. Е., Крутецкая Н. И., Рощина Н. Г. Влияние ингибиторов тирозинкиназ и тирозинфосфатаз на выход Са2+, индуцируемый АТФ и тапсигаргином в перитонеальных макрофагах крысы. //Цитология, 1997, Том 39, №2/3, с. 164-175.

13.Кузнецов В.Е. Получение ин витро партеногенетических зародышей и их цитогенетический анализ. Автореф. дисс. канд. биол. наук. Ленинград-Пушкин, 1985. 17 с.

14.Кузнецов Е., Елизарова И.В. Партеногенетическая активация ооцитов коров, созревших in vitro. //Онтогенез. 1992. т.23. N6.с.650-653.

15.Кузьмина Т.И., Джаббур З.И., Шапиев И.Ш. Спонтанное партеногенетическое развитие ооцитов крупного рогатого скота при их внефолликулярном культивировании. //Бюлл. ВНИИРГЖ. - 1990. - №119. - с. 29-31.

16.Лакин Г.Ф. Биоиетрия. - М, Высшая школа. 1990.

17.Меркурьева Е.К. Биометрия в животноводстве. - М, Колос»,1964.

312 с

17а. Мирзаянц Г.Г. Нарушения в системе половых хромосом В кн.: Лекции о медицинской генетике., М., Медицина, 1974, с. 336-359.

18.Нониашвили Е.М., Дыбан А.П. Партеногенетическое развитие яйцеклеток мышей, индуцированное этиловым спиртом и тепловым шоком in vitro и in situ. //Общие закономерности и контролирующие механизмы раннего эмбриогенеза млекопитающих в норме и патологии. Л., 1985, С. 2230.

19.Плохинский H.A. Алгоритмы биометрии. -М.: Изд-во МГУ, 1980. -

150 с.

20.Прокофьев М.И., Захарченко В.И., Лагутина И.С., Эрнст Л.К. Трансплантация ядер в созревшие ооциты крупного рогатого скота.//Вестник PACXH.1993.N4.

21.Рокицкий П. Ф. Биологическая статистика., изд. "Вышэйшая школа", Минск, 1973.

22.Струнников В.А. Искусственный партеногенез у тутового шелкопряда, итоги 100 летнего исследования. //Онтогенез. 1986., Т. 17, N 6, С. 343-367.

23.Тихомиров А.А. Основы практического шелководства. //Изд. "Знание", М. 1914.

24.Хожай Л.И. Изучение кариологии начального эмбриогенеза при оплодотворении и партеногенетической активации у мышей. //Автореф. дисс... канд. биол. наук. НИИЭМ АМН СССР.1981.

25.Эпель Д. Инициирование развития в период оплодотворения. //Онтогенез 1992.Т.23 N 6.с213-227.

26. Эрнст Л.К., Голубев А.К., Кудрявцев И.В., Кузьмина Т.И. и др. Способ получения партекогенетических зародышей. - Авторское свидетельство. - 1983. - №1086808.

27.Austin C.R. The formation growth and conjugation of the pronuclei in the rat eggs. //Roy. Microscop. Soc., 1951, Vol. 71, P. 295-306.

28.Austin C.R. The development of pronuclei in the rat eggs with particular references to quantitative relations. //Austr. J. Sci. Res., 1952,Vol. 5, P. 354-365.

29.Austin C.M. and Braden A.W.H. Observations on nuclear size and form in living rat and mouse eggs. //Exp. Cell Res., 1955, Vol. 8, P. 163-172.

30.Austin C.R., Walton A. Fertilization.- Marshall's Physiology of reproduction. Vol. 1, part 2, 1960, P. 310-396.

31.Ansell J.D., Snow M.H.L. The development of trophoblast in vitro from blastocysts containing varying amounts of inner cell mass. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1975, Vol. 33, P. 175-185.

32.Araki K, Naito K, Haraguchi S, Suzuki R, Yokoyama M,Inoue M, Aizawa, Toyoda Y. and Soto E.Meiotic Abnormalites of c-mos knockout Mouse oocytes; Activation after Ferst Meiosis or Entrance into Third Meiotie Metophase //Biology of Reproduction, 1996,V.55, p 1315-1324.

33.Babcock D. F, Herrington J, Goodwin P. C, Park Y. B, Hille B. Mitochondrial participation in the intracellular Ca2+ network. //J. Cell Biol, 1997. Vol. 136, P. 833-844.

34.Balakier H, Tarkowski A.K. Diploid parthenogenetic mouse embryos produced by heat shock -and cytochalasin B. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1978, Vol. 35, P. 25-39.

35.Barboni B and Mattioli M. Oocyte maturation involves important changes reguired or activation competence. //Reprod. Dom. Anim, 1996, Vol. 31, P. 589-594.

36.Barra J, Renard J.P. Diploid mouse embryos constructed of the lotl 2-cell stage from haploid partenotes and androgenotes can develop to term. //Developm, 1988, Vol. 102, N 4, P. 773-779.

37.Beatty R.A.Parthenogenesis and polyploydyin mammalian development. London. Cambridge Univ.Press. 1957, 210 p.

38.Bergstrom S. Experimentally delayed implantation. //Methods in mammalian reproduction. /Ed. J.C. Daniel N.Y. 1978, P. 419-435.

39.Bondioli K. R.-Proc. Int.Symposium Anim.Biotech. Oktober 1991. Kyoto, Gopon.

40.Braden A.W.H, Austin C.R. Reactios on unfertilized mouse eggs to some experimental stimuli. //Exp. Cell Res./ 1954, Vol. 7, P. 277-280.

41.Carafoli E. and Penniston J. T. The calcium signal. //Sci. Amer, 1985, Vol. 253, P. 50-59.

42.Chang M.C. Fertilizability of rabbit ova and the effects of temperature in vitro on their subsequent fertilization and activation. //J. Exp. Zool, 1952, Vol.121, N. 2, P. 351-382.

43.Chang M.C. Development of parthenogenetic rabbit blastocysts induced by low temperature storage on unfertilized ova. // J. Exp. Zool., 1954, Vol.125, P. 127-149.

44.Collas P., Balise J.J., Hofmann G.A., and Robl J.M. Electrical activation of mouse oocytes. //Theriog., 1989, Vol. 32, P. 835-845.

45.Cottanach B.M., Kirk M. Differential activity of maternally and paternally ved chromosome regions in mice. //Nature, 1985, Vol. 315, P. 496-498.

46.Cuthbertson K.S.R., Whittingham D.C., Cobbold P.H. Free Ca 2+ Increases in exponential phases during mouse oocyte activation. // Nature, 1981, Vol. 294, P. 754-757.

47.Cuthbertson K.S.R. Parthenogenetic acbivation of mouse oocytes in vitro with ethanol on benrye alcochol. // J. Exp. Zool. 1983 Vol. 226, P.311-314.

48.De Felici M., Dolci S., Siracusa G. An increase of intracellular free Ca2+ is essential for spontaneous meiotic resumption by mouse oocyte. //J. Exp. Zool., 1991,V. 260, P. 401-405.

49.Didion B.A., Martin M.J., Makert C.L. Parthenogenetic activation of mouse and pig oocytes matured in vitro. //Theriog., 1990, Vol. 33, P. 1165-1175.

49a Donphy W.G., Newport J.W. Uoroweling of mitotic control mechanisms. //Cell., 1988. V/ 55, p. 925-928.

50.Ducibella T., Kurasava S. And Rangarajan S. Oocyte meiotic maturation and correlation with an egg-induced modification of the zone Pellucida. //Dev. Biol., 1990, V. 137, p. 46-55.

51.Ebensperger C. and Barros C. Changes at the hamster oocyte surface from the germinal vesicle stage to ovulation. //Gamete Res., 1984, V. 9, p. 387397.

52.Epel, D. The program of fertilization. 1977, Sci. Am.237(5), pp. 128-138.

53.Evsikov S.V. and Evsikov A.V. Preimplantation development of manipulated mouse zygotes fused with the sacond polar bodies:a cytogenetic study. //Int.J.Dev.Biol., 1994, Vol. 38 P. 725-730.

54.Fleming W.N., Saacke R.G. Fine structure of the bovine oocyte from the mature greafian follicle. //J. Reprod. Fertil., 1972, V. 29, P. 203-213.

55.Fukasawa K., Murakami M.S., Blair D.G., Kuriyama R., Hunt T., Fischinger P., Vande Woude G.F., Similarities between somatic cells overexpressing the mos oncogene and oocytes during meiotic interphase. //Cell Growth Differ., 1994, Vol. 5, P. 1093-1103.

56.Fukasawa K., Vande Woude G.F. Mos overexpressing in Swiss 3T3 cell induces meiotic - like alterations of the mitotic spindle. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, Vol. 192, P. 3430-3434.

57.Fulka J. Jr., Liebfried-Rutledge M. L., First N.L. Effect of 6-dimethylaminopurine on germinal vesicle breakdown of bovine oocytes. //Mol. Reprod. Dev., 1991, Vol. 29, P. 379-384.

58.Fulton B.P., Whittingham D.C. Activation of mammalian oocytes by intracellular injection of calcium. //Nature, 1978, Vol. 273, P. 149-151.

59.Funahashi H., Cantley T.C., Stumpf T.T., Terlouw S.L., Dsay B.N. In vitro development of in vitro - matured porcine oocytes following chemical activation or in vitro fertilization. //Biol. Reprod., 1994, Vol. 50, P. 1072-1077.

60.Funahashi H., Stumpf T.T., Terlouw S.L. and Day B.N. Effect of electrical stimulation before or after in vitro fertilization on sperm penetration and pronuclear formation of pig oocytes. //Molecular Reproduction and Development, 1993, 36, p. 361-367.

60a.Fuyimoto S. Chromosome abnormalities in rabbit preimplantation blastocysts induced by superovulation. //J. Reprod. Fertil., 1974, V. 40, N.l, P. 117-121.

61.Graham C.F. Parthenogenetic mouse blastocysts. // Nature, 1970, Vol. 226, P. 165-167.

62.Graham C.F. Experimental early parthenogenesis in mammals. //Adv. Biol. Sci. 1971, Vol. 6, P. 87-97.

63.Graham C.F. The production of parthenogenetic mammalian embryos and their use biological research. //Biol. Rev., 1974a, Vol. 49 P. 399-422.

64.Graham C.F. The necessary conditions for gene expression during early mammalian development. //31st Sympos. Soc. Develop. Biol. 1974b, P. 208-217.

65.Graham C.F., Burney M.W., Illes S.A. Teratomas From haploid and diploid parthenogenetic mouse embryos. //Teratomas and differentiation. /Eds. M.I. Sherman, D. Solter, 1975, N.Y. Acad. Press. P. 33-50.

66.Graham C.F., Deussen Z.A. In vitro activation of mouse eggs. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1974, Vol. 31, P. 497-512.

67.Grasso R.J., Heller R., Cooloy J.C., and Hello E.M. Electrofusion of individual animal cells directly to intact corneal epithelial tissue. //Biochem. Biophys. Acto., 1989, Vol. 980 P. 9 -14.

68.Gukovskaya A. S., Zinchenko V. P. Mechanisms of receptor-mediated generation of ionic signals in rat thymocytes and Ehrlich ascites tumor cells. //Sov. Sci. Rev. D. Physicochem. Biol. 1990, Vol. 10, P. 1-98.

69.Gunter T. E., Gunter K. K., Sheu S. -S., Gavin C. E. Mitochondrial calcium transport: physiological relevance. //Amer. J. Physiol., 1994, Vol. 267, P. C313-C339.

70.Hashimoto N., Kishimoto T. Regulation of meiotic metaphase by a cytoplasmic maturation - promoting factor during mouse oocyte maturation. //Dev. Biol., 1988, Vol. 126, P. 542-252.

71.Hehl S., Golard A., Hille B. Involvement of mitochondria in intracellular calcium sequestration by rat gonadotropes. //Cell Calcium., 1996, Vol. 20, P. 515524.

72.Hedrrington J., Park Y. B., Babcock D. F., Hille B. Dominant role of mitochondria in clearance of large CA loads from rat adrenal chromaffin cells. //Neuron., 1996, Vol. 16, P. 219-228.

73.Hellbrunn L.V. An outline of general physiology. W.B. Saunders (ed.). Philadelphia., 1952. 818 pp.

74.Homa S.T., Carroll J., Swann K. The role of calcium in mammalian oocyte maturation and egg activation. Hum Reprod 1993, V.8, P. 1274-1281.

75.1sant J.G. The role of calcium ions during mitosis. //Chromosoma, 1983, Vol. 88, P. 1-10.

76.Jaffe L.F. The role of calcium explosions, waves and activating eggs. In: Metz C.B. Monroy A (eds.), Biology of fertilization. New York: Academic Press; 1985. P. 127-165.

77.Jaffe L.A., Gould M. Polyspermy - preventing mechanisms. /C.B. Metz, A.Monroy (eds). N.Y.:Acad Press,1985. V.3.P. 223-251.

78.Jolliff W. J., and Prather R.S. Parthenogenic development of in vitro -matured, in vivi - cultured porcine oocytes beyond blastocyst. //Biol. Reprod., 1997, Vol. 56, P. 544-548.

79Jouaville L. S., Ichas F., Holmuhamedov E. L., Camacho P., Lechleiter J. F. Synchronization of calcium waves by mytochondrial substrates in Xenopus laevis oocytes. //Nature, 1995, Vol. 377, P. 438-441.

80.Kao J.P.Y., Alderton J.M., Tsien R.Y., Steinhardt R.A. Active involvement of Ca in mitotic progression of Swiss 3T3 fibroblasts. //J. Cell Biol., 1990, Vol. Ill, P. 183-196.

81.Kaplan G., Albern S.L. and Bachvalova R. rRNA accumulation and protein synthetic patterns in growing mouse oocyte. //J Exp. Zool., 1982, V. 220, p. 361-370.

82.Kaufman M.N. Cytogenetic analysis of the first cleavage mitosis in parthenogenetic and fertilized eggs the mouse. P.H. D. Dissertation of Cambridge. 1973a.

83.Kaufman M.N. Parthenogenesis in the mouse. //Nature, 1973b, Vol. 242, P. 475-476.

84.Kaufman M.N. Parthenogenetic activation of mouse oocytes following avertin anesthesia. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1975, Vol. 33, P. 941-946.

85.Kaufman M.N. Effect of anesthetic agents on eggs and embryos. //Development in mammals. /Ed.M.H. Johnson. Amsterdam. 1977. P. 137-163.

86.Kaufman M.N. The experimental production of mammalian parthenogenes. //Methods in mammalian reproduction. /Ed. J.C. Daniel. 1978, Son-Francisko. P. 21-47.

87.Kaufman M.N. Chromosome analysis of early postimplantation presumptive haploid parthenogenetic mouse embryos. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1978, Vol. 45, P. 85-91.

88.Kaufman M.N. Parthenogenesis a system facilitating understanding of factors that influence early mammalian development. //Progress in Anatomy. /Eds. R.J. Harrison, R.L. Holmes. 1981, Vol. 1, P.l-34.

89.Kaufman M.N. The chromosome complement of single - pronuclear haploid mouse embryos folioving activation by ethanol-treatment. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1982, Vol. 71, P. 139-154.

90.Kaufman M.N. Early mammalian development. Parthenogenetic studies. Cambridge; L., 1983a, 283 p.

91.Kaufman M.N. Ethanol - induced chromosomal abnormalities at conception. //Nature, 1983b, Vol. 382, P. 258-260.

92.Kaufman M.N., Barton S.C., Surani M.A.H. normal postimplantation development of mouse parthenogenetic embryos to the lovelimb bug stoye. // Nature, 1977, Vol. 265, P. 53-55.

93 .Kaufman M.N. Gardner R.L. Diploid and haploid mouse parthenogenetic development following in vitro activation and embryo transfer. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1974, Vol. 31, P. 635-642.

94.Kaufman M.N., Evans M.J., Robertson E.J., Bradley A. Influence of injected pluropotential (EK) cells on haploid and diploid parthenogenetic development. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1984, Vol. 80, P. 75-86.

95.Kaufman M.N., Surani M.A.H. The effect of osmolarity of mouse parthenogenetic. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1974, Vol. 31, P. 513-526.

96.Kaufman M.N, Sachs L. Complete preimplantation development in culture of parthenogenetic mouse embryos. // J. Embryol. Exp. Morphol. 1976, Vol. 35, P. 179-190.

97.Komar A. Parthenogenetic development of mouse eggs activated by heat - shock. //J. Reprod. Fert. 1973, Vol. 35, P. 433-443.

98.Kremer I. Des holten der vorkerne im befruchteten ei der ratte und der Mous mit besonderer Berücksichtig ung ihrer Nucleolen. //Ztschr. Mikrosk.- Anat. Forsch, 1924, Vol.1, P. 353-390.

99.Krishan R. and Bavister B. Responses of oocytes and embryos to the culture environment. //Theriog, 1998, Vol. 49, P. 103-114.

100.Kruip T.A.M, Cran D.G, Van Beneden T.H. and Dieleman S.J. Structural Changes in bovine oocytes during Final maturation in vivo. //Gamete Res, 1983, V. 8, p. 29-48.

101.Kubiak J, Paleli A, Weber M. and Moro B. Genetically indenticat parthenogenetic mouse embryos produced by in hibition of the first meiotic cleavage with cytochalasin D. // Development. 1991.VI11. N 3.

102.Lams W.K, Doorme J. Nouvelles rechorches sur la maturation et la fecondation de l'oeuf des mammferes. //Anat. Biol, 1908, Vol. 23, P. 259-366.

103.Lawrie A. M, Rizzuto R, Pozzan T, Simpson A. W. M. A role for calcium influx in the regulation of mitochondrial calcium in endothelial cells. //J. Biol. Chem, 1996, Vol. 271, P. 10753-10759.

104.Li C.J. and Fan B.Q. Changes in the 3-dimentional distribution of mitochondria during meioticdivisions of mouse oocytes. //Theriogenology, 1997, V48: p. 33-41.

105.Long C, Levanduski M. Nyclear transfer in the bovine embryo; the effect of De voltage and pulse duration on electrofusion and cell lysis. // Teriog. 1991 vol. 35Nlp.232.

106.Machaty Z., Mayes M.A. and PratherR.S. Parthenogenetic activation of porcine oocytes with guanosine-5'-0-(3'-thiotriphosphate). //Biol. Reprod. 1995 ,V52, p. 753-758.

107.Machaty Z., Funachashi H., Mayes M.A., Day B.N., and Prather R.S. Effects of injecting calcium chloride into in vitro - matured porcine oocytes. // Biol. Reprod., 1996, Vol. 54, P. 316-322.

108.Machaty Z., Funachashi H., Day B.N., and Prather R.S. Developmental changes in the intracellular Ca2+ release mechanisms in porcine oocytes. //Biol. Reprod., 1997, Vol. 56, P. 921-930.

109.Mayes,M.A., Stogsdill,P.L., and Prather,R.S. Parthenogenetic activation of pig oocytes by protein kinase inhibition. //Biol.Reprod., 1995, V.53, p.270-275.

110.Maro B., Johnson M.N., Pickering S.G. Changes in actine distribution during fertilization of mouse eggs. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1984, Vol. 81, P. 211-237.

111.Maro B., Johnson M.N., Webb N. Mechanisms of polar body formation in the mouse oocytes an interaction between the chromosome, the cytoskeleton and the plasma membrane. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1986, Vol. 92, P. 11-32.

112.Masui Y. The role of «Cytostatic Factor (CSF)» in the control of oocyte cell cycles: A summary of 20 years of study. //Dev. Growth Differ., 1991, Vol. 33 P. 543-551.

113.Masui Y., Meyerhof P., Miller M.A. Cytostatic factor and chromosome behaviour in early developmental processes. /Eds.S. Subter, N. Wessels. N.Y. 1980. P. 128-141.

114.McGrath J., Hilman N. The effect of experimentally induced triploidy

19

on the letal expression of the T mutation m mutation in mouse embryos. //Develop. Biol., 1982, Vol. 89, P. 254-260.

115.McGrath J. and Solter D. Nuclear transplantation in the mouse embryo by microsurgery and cell fusion.Z/Seience 1983.220:1300.

116.McLoughin K.J., Pugh A.P., logon K. and Territ H.R. Assessment of oocyte source for ovine nuclear transfer.// Teriog.1991. vol 35. N1. p.240.

117.Merry N.E., Johnson M.H., Gehring C.A. and Selwood L. Cytoskeletal organization in the oocyte, zygote, and early cleaving embryo of stripe-faced dunnart (Sminthopsis macroura). //Mol. Reprod. Dev., 1995, V. 41, p. 212-224.

118.Mizuno J., Nakada K., Endo K., Kobayashi K., Nishikata Y. and Miyazaky S. Changes of intracellular calcium concentration at in vitro fertilization of bovine oocytes. //Theriogenology 1994, Vol. 41, P. 259.

119.Modlinsky J.A. Haploid mouse embryos obtined by microsurgical removal of one pronucleus. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1975, Vol. 33, P. 897-905.

120.Nagai T. Parthenogenetic activation of cattle follicular oocytes in vitro with ethanol. // Gamete Res., 1987, Vol. 16, P. 243-249.

121.Nakada K. and Mizuno J. Intracellular calcium responses in bovine oocytes inductd by spermatozoa and by reagents. //Theriogenology, 1998, v. 50, p. 269-282.

122.0kada A., Yanagimachi R. and Yanagimachi H. Development of a cortical granule-free area of cortex and the perivitelline space in the hamster oocyte during maturation and following ovulation. //J. Submicrosc. Cytol., 1986, V. 18, p. 233-247.

123.01sen M.H.,Marks H.L. and Wisen S.P. Parthenogenetic chick //Heredity, 1972,V.59,p.67.

124.0nodera M., and Tsunoda Y. Parthenogenetic activation of mouse and rabbit eggs by electric stimulation in vitro. //Gamete Research., 1989, Vol. 22, P. 277 -283.

125.0tonni H., Yocoyoma M., Norawa-Kimura S., Tenoko O., Katsuki M. Pluripotency of homozygous - diploid embryos in chimeras. //Devel. Grow. Differ., 1987, Vol. 29, P. 373-380.

126.Park Y. B., Herrington J., Babcoch D. F., Hille B. Ca2+ clearance mechanisms in isolated rat adrenal chromaffin cells. //J. Physiol., 1996, Vol. 492, P. 329-346.

127.Petr J., Grocholova R., Rozinek J., and Jilek F. Activation of in vitro matured pig oocytes by combined treatment of ethanol and cycloheximide. //Theriog., 1996, Vol. 45, P. 1473-1478.

128.Pertrold Ulrich. Brouchen soyetier babies einen vator. //Biol. Unserer. Sci., 1988, Vol.18, P. 97-104.

129.Pincus C., Snemann E.V. The comparative behavior of mammalian eggs in vivo and in vitro I. The activation of ovarian eggs. //J.Expll.Med., 1985, Vol. 62, N5, p. 665-675.

130.Pincus G. The comparative behavior of the mammalian eggs in vivo and in vitro. The development of fertilized and artificially activated rabbit eggs. //J. Exp. Zool., 1939a, Vol. 73, P. 195-208.

131.Pincus G. The broading of some rabbits produced by recipients of artificially activated ova. //Proc. Noth. Acad. Sci., 1939b, Vol. 25. P. 557-559.

132.Pincus G., Enzmann E.V. The comparative behavior of mammalian eggs in vivo and in vitro. The activation of the tubal eggs of the rabbit. //J. Exp. Zool., 1938, Vol. 73, P. 195-208.

133.Pincus G., Shapiro H. Further studies on parthenogenetic activation of rabbit eggs. /Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1940a, Vol. 29, P. 163-164.

134.Pincus H, Shapiro H. The comparative behavior of mammalian eggs in vivo and in vitro. Futher studies on the activation of rabbit eggs. //Proc. Amer. Phil. Soc., 1940b, Vol. 81, P. 631-647.

135.Plancha C.E. Cytokeratin dinamics during oocyte maturation in the hamster requires reaching of metafase I. //Differentiation, 1996, V. 60, p. 87-98.

136.Plancha C.E. and Albertini D.F. Protein synthesis requirement during resumption of meiosis in the hamster oocyte: early nuclear and microtubule configuration. //Mol. Rewprod. Dev., 1992, V. 33, p. 324-334.

137.Poenie M.J. Alteration of intrreacellular Fura-2 Fluorescence by viscosity: a simple correction. //Cell Calcium, 1990, V. 11, P. 85-91.

138.Poenie M.J., Alberton J.M., Tsien R.Y., Steinhardt R.A. Changes of free calcium levels with stages of the cell division cycle. //Nature., 1985, V. 315, P. 147-149.

139.Prather R.S., Eichen P.A., Nicks D.K., Peters M.S. Artifical activation of porcine oocytes matured in vitro. //Mol. Reprod. Dev., 1991, Vol. 28, P. 405409.

140.Presicce G.A., Yang X. Parthenogenetic development of bovine oocytes matured in vitro for 24 hr and activated by ethanol and cycloheximide. //Mol. Reprod Dev., 1994a, Vol. 38, P. 380-385.

141.Presicce G.A., Yang X. Nuclear dinamic parthenogenesis of bovine oocytes matured in vitro for 20 and 40 hours and activated with combyned ethanol and cycloheximide treatment. //Mol. Reprod Dev., 1994b, Vol. 37, P. 61-68.

142.Prochazka R., Kanka J., Sytovsky P., Fulka J., Motlik J. Development of pronuclei in pig oocytes activated by a single electric pulse. //J. Reprod Fertil., 1992, Vol. 96, P. 725-734.

143.Pugh P.A., Tervit H.R. and Thompson J.G.E. Parthenogenetic activation of sheep oocytes by electrieciment. //Teriog., 1991, Vol. 35, N1, p.260.

144.Rexroad C. F. and Powell F.V. Cj-culture of ovine ova with oviductal cells in medium 199. /J/ Anim. Sci,/ 1988, v/ 66, h. 947-953.

145.Rizzuto R., Bastianutto C., Brini M., Murgia M., Pozzan T. Mitochondrial Ca22+ homeostasis in intact cells. //J. Cell Biol., 1994, Vol. 126, P. 1183-1194.

146.Rizzuto R., Brini M., Murgia M., Pozzan T. Microdomains with high Ca2+ close to IP3 -sensitive channels that are sensed by neighbouring mitochondria. //Sciene. 1993. Vol. 262, P. 744-747.

147.Rutter G. A., Theler J.-M., Wolheim C. B., Pozzan T., Rizzuto R. Increased Ca2+ influx raises mitochondrial free Ca2+ to micromolecular levels in a pancreatic beta-cell line. //J. Biol. Chem., 1993, Vol. 268, P. 22385-22390.

148.Shen S.S., Burgart L.J. 1,2- Diacilglicerols mimic phorbol 12-myristate 13-acetate activation of the sea urchin eggs. //J. Cell Physiol., 1986, Vol. 127, P. 330-340.

149.Sims M.M., Rosen Krons C.F., and First N.K. Development in vitro of ovine embryos derived from nuclear transfer.// Teriog. 1991. vol 35 .N 1. p.272.

150.Stice S.L. Seidol G.E. Pracedirge. Symposium on Cloning Motmols by Nuclear Transplantation. Gonury. 15.1992.

151.Stice S.L., Keefer K.L., Matthews L. Bovine nuclear transfer embryos: oocyte activation prior blastomere fusion. //Mol. Reprod. Dev., 1994, V. 38, P. 6168.

152.Siracusa G., De Felici E., Coletta N., Vivarelli E. The inhibitors of protein synthesis increase the agglutibability mediated by concanavalin A of the unfertilized mouse oocytes. //Develop. Biol., 1978, Vol. 62, P. 530-533.

153.Siracusa G., Whittingham D.C., Molinoma M., Vivarelli E. Parthenogenetic activation of mouse induced by inhibitors of protein sinthesis. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1978, Vol. 43, P. 157-166.

154.Smith R., McLaren A., Factors affecting the time of formation of mouse blastocoele. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1977, Vol. 41, P. 79-92.

155.Snow M.H.L., Aitken J., Ansell J.D. Role of the inner cell mass in controlling implantation in the mouse. //J. Reprod. Fertil., 1976, Vol. 48, P. 403404.

156.Speksniider J.A., Corson D.W., Sardet C., Jaffe L.F. Free calcium pulses following fertilization in the ascidian eggs. //Develop.Biol., 1989, Vol. 135, P. 182-190.

157.Stevens L.C., Varnum D.S., Fichere E.M. Viable chimeras produced from normal and parthenogenetic mouse embryos. //Nature, 1977, Vol. 269, P. 515-517.

158.Surani M.A.H., Barton S.C. Development of cytogenetic eggs in the mouse: Implification for parthenogenetic embryos. //Science, 1983, Vol. 222, P. 1034-1036.

159.Surani M.A.H., Barton S.C., Kaufman M.H. Developmental to term of chimeras between diploid parthenogenetic and fertilized embryos. //Nature. 1977, Vol. 270, P. 601-603.

160.Surani M.A.H., Barton S.C., Horris M.Z. Development of reconstituted mouse eggs suggests imprinting of genome during gametogenesis. //Nature. 1989, Vol. 308, P. 548-550.

161.Surani M.A.H., Barton S.C., Horris M.L. Influence of parental chromosomes on spatial specificity in androgenetic - parthenogenetic chimeras in the mouse. //Nature. 1987, Vol. 326, P. 395-397.

162.Surani M.A.H., Kaufman M.H. Influence of extracellular Ca2+and Mg2+ ions on the meiotic division of mouse oocytes: relevance to obtaining haploid and diploid parthenogenetic embryous. //Develop. Biol., 1977, Vol. 59, P. 86-96.

163.Seollosi D. The spingle structure in mammalian eggs: the effect of aging. //Chromosomal errors in reelation to reproductive failure. /Epds. A. Bone, Ch. Thibault, 1973, P. 241-250.

164.Surani M. A. H.,Barton S.C., Horris M., Norris M.L. Influence of parental chromosomes on spatial specificity in androgenetic-parthenogenetic chimaeras in the mouse//Nature,1984.V.326. N26. P.395 - 397.

165.Swann K, Whitaker M., The part played by inositol trisphosphate and calcium in the propagation of the fertilization wave in Sea Urchin eggs. // J. Cell Biol., 1986, Vol. 103, P. 2333-2342.

166.Tarkowski A.K. An air - drying method for chromatin preparation for mouse eggs/ //Cytogenetics, 1966, v. 5, p. 394-400.

167.Tarkowski A.K. Germ cell in natural and experimental chimeras in mammals. -Philos. Trans. Roy. Soc. London, 1970, Vol. 259, p. 107 - 111.

168.Tarkowski A.K. Resent studies on parthenogenetic in the mouse. //J. Reprod. Fert. Suppl., 1971, Vol. 14, P. 31-39.

169.Tarkowski A.K. Induced parthenogenesis in the mouse. C.L. Markert (Ed.)-33rd Sympos. Soc. Developm. Biol.: Developmental biology of reproduction. New York: Acad. Press, 1975,p. 107 - 129.

170.Tarkowski A.K. In vitro development of mouse embryos produced by bisection of one - cell fertilised eggs. //J. Embryol. Exp. Morphol. 1977, Vol. 38, P. 187-202.

171.Thibault C. L'oeuf des mammiferesi son development parthenogenetique biology. //Annis Sci. Nat. (Zool), 1941, Vol. 11, P. 136-219.

172.Van Blerkom J. and Motta P.M. The cellular basis of mammalian reproduction. Baltimore: Urban and Schwarzenberg, 1979.

173.Van Blerkom J. and Runner M.N. Mitechondrial reorganization during resumption of arrested meiosis in mouse oocyte.// Am J Anat. 1984, V. 171, p. 335-355.

174.Verlhac M.-H., Kubiak J.Z., Weber M., Geraund G., Colledge W.H., Evans M.J., Maro B. Mos is required for MAP kinase activation and is involved in microtubule organisation during meiotic maturation in the mouse. //Development, 1996, Vol. 122, P. 815-822.

175.Whittingham D.G. Parthenogenesis in mam, V. mals. //Oxford Reviews of .reproductive biology. /Ed. C.A. Fimn. Oxford, 1980, P. 205-231.

176.Whittingham D.G., Siracusa G. The involvement of calcium in the -activation of mammalian oocytes. //Exp. Cell Res., 1978, Vol. 113, P. 311-317.

177.Whittingham D.G., Siracusa G., Fulton B.P. Ionic activation of the mammalian egg. //Biol. Cellulaire, 1978, Vol. 32, P. 149-154.

178.Willadsen S.M. Nuclear transplantation in sheep embryos. //Nature, 1986, №320, P. 63-65.

179. Willis P, Caudle A.B. and Fayrer-Hosken R.A. Fine structure of equine oocyte maqtured in vitro for 24 hours. //Mol. Reprod. Dev., 1984, V. 37, p. 87-92.

179a. Wilmut I, Schnieke a.t, McWhir J., Kind A.J, and Campbell K.H.S. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells. //Nature, V. 385, p. 810-813.

180.Witkowska A. Parthenogenetic development of mouse embryos in vivo. I.Preimplantation development. //J. Embryol. and Exp. Morphol, 1973a, Vol. 30, P. 519 -545.

181.Witkowska A. Parthenogenetic development of mouse embryos in vivo. I.Postimplantation development. //J. Embryol. and Exp. Morphol, 1973b, Vol. 30, P. 547-566.

182.Wolniak S.M, Bart K.M. The buffering of calcium with quin2 reversibly forestalls anaphase onset in stamen hair cells of Tradescantia. //Eur. J. Cell Biol, 1985, Vol. 39, P. 33-40.

183.Xu T, Naraghi M, Kang H, Neber E. Kinetic studies of Ca2+ binding and Ca2+ clearance in the cytosol of adrenal chromaffin cells. //Biophys. J, 1997, Vol. 73, P. 532-547.

184.Yanagimachi R. Mammalian fertilization. In: Knobil and J.D. Neill (eds), The Phisiology of reproduction Second Edition. Raven Press, New York, 1994, P. 189-317.

185.Yang X, Presicce G.A, Moragham L, Jiang S, Foote R.H. Sinergistic effect of ethanol and cycloheximide on activation of freshly matured bovine oocytes. //Theriog, 1994, Vol. 41, P. 395-403.

186.Yoshida M, Ishizaki Y. and Kawagishi H.Blastocyst formation by pig embryos resulting from in-vitro fertilization of oocytes matured in vitro.//J.Reprod.Fert,1990,V.88,pp.l-8.

187.Zhao X, Singh B, Batten B.E. The role of c-mos proto - oncoprotein in mammalian meiotic maturation. //Oncogene, 1991, Vol. 6, P. 43-49.

188.Ziegler M.L., Sisken J.E., Vedbrat S. The alteration of mitotic events by ionophore A23187 and carbonnyl cyanide n-chlorophenylhydrazone. //J. Cell Sci., 1985, Vol. 75, P. 347-355.

189.Zimmermann U., Vienken J. Electric field - induced cell-to-cell fusion. //J. Membr. Biol., 1982, Vol. 67, P. 165-172.

190.Zuccotti M., Piccinelli A., Rossi P.G., Garagna S. And Redi C.A. Chromatin organization during mouse oocyte growth. //Mol. Reprod. Dev., 1995, V. 41, p. 479-485.