Влияние полярных липидов и тритерпеновых гликозидов из морских организмов на конформацию и иммуногенность белковых антигенов тубулярных иммуностимулирующих комплексов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Воробьева, Наталья Сергеевна

• Воробьева, Наталья Сергеевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Воробьева, Наталья Сергеевна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Тубулярные иммуностимулирующие комплексы

1.1.1. Прототипы тубулярных иммуностимулирующих комплексов - 18СОМ и КСОМАТЫХ®

1.1.2. Общая характеристика тубулярного иммуностимулирующего комплекса

1.2. Физико-химические и биологические свойства полярных липидов морских макрофитов

1.2.1. Физико-химические свойства гликолипидов морских макрофитов

1.2.2. Иммунологические свойства полиненасыщенных жирных кислот

1.3. Биологические свойства тритерпеповых гликозидов

1.3.2. Биологическая активность тритерпеновых гликозидов голотурий

1.3.2. Тритерпеновые гликозиды дальневосточной голотурии Сиситапа ]аротса

1.4. Липид-белковые взаимодействия, конформация белков и ее связь с иммуногенностыо

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Биологические объекты

2.2. Экстракция липидов

2.3. Тонкослойная хроматография

2.4. Системы растворителей для ТСХ липидов и кукумариозидов

2.5. Обнаружение липидов и кукумариозидов

2.6. Выделение гликолипидов

2.7. Выделение фосфатидилхолина

2.8. Выделение фосфатидилэтаноламина

2.9. Анализ состава жирных кислот глико- и фосфолипидов

2.10. Определение микровязкости моногалактозилдиацилглицерина

2.11. Выделение кукумариозидов

2.12. ЯМР-спектроскопия

2.13. Получение тубулярных иммуностимулирующих комплексов

2.14. Введение антигенов в тубулярный иммуностимулирующий комплекс

2.15. Электронная микроскопия

2.16. Иммунизация животных

2.17. Получение сывороток крови

2.18. Анализ сывороток крови иммунизированных животных

2.19. Приготовление образцов для калориметрических и спектроскопических исследований

2.20. Дифференциальная сканирующая калориметрия

2.21. Флуоресцентная спектроскопия

2.22. Круговой дихроизм

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Физико-химические свойства моногалактозилдиацил-глицерина из морских макрофитов, используемого для приготовления тубулярных иммуностимулирующих комплексов

3.1.1. Жирнокислотный состав моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов

3.1.2. Микровязкость моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов

3.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию порина в составе тубулярных иммуностимулирующих комплексов

3.2.1. Выбор антигенной формы порина

3.2.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из морских макрофитов на образование антипориновых антител

3.2.3 Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из разных морских макрофитов на цитокиновый профиль

3.2.4. Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из разных видов морских макрофитов на конформацию порина

3.2.4.1. Дифференциальная сканирующая калориметрия

3.2.4. 2. Собственная флуоресценция порина

3.2.4.3. Круговой дихроизм

3.3. Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию гемагглютинина в составе тубулярных иммуностимулирующих комплексов

3.3.1. Характеристика рекомбинантного мономера гемагглютинина вируса гриппа А/НШ1 (А/СаИ/огта/07/2009)

3.3.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из разных морских макрофитов на образование антител против гемагглютинина

3.3.3. Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из разных морских макрофитов на цитокиновый профиль

3.3.4. Влияние моногалактозилдиацилглицерииа из различных морских макрофитов на конформацию гемагглютинина

3.3.4.1. Дифференциальная сканирующая калориметрия

3.3.4.2. Собственная флуоресценция гемагглютинина

3.3.4.3. Круговой дихроизм

3.4. Жирнокислотный состав, комплексообразующие свойства фосфолипидов из иглокожих и их влияние на иммуногенность человеческого сывороточного альбумина в составе ТИ-комплексов

3.4.1. Жирнокислотный состав фосфолипидов из иглокожих

3.4.2. Комплексообразующие свойства фосфолипидов из иглокожих

3.4.3. Влияние фосфолипидов из иглокожих на образование антител против человеческого сывороточного альбумина

3.4.4. Влияние фосфолипидов из морских иглокожих на цитокиновый профиль

3.5. Структура, комплексообразующие свойства кукумариозидов и их влияние на иммуногенность белковых антигенов ТИ-комплексов

3.5.1. Характеристика структуры кукумариозидов из Cucumaria japónica

3.5.2. Комплексообразующие свойства кукумариозидов Cucumaria japónica

3.5.3. Влияние различных кукумариозидов на иммуногенность и конформацию порина

3.5.3.1. Влияние кукумариозидов на иммуногенность порина

3.5.3.2. Влияние различных кукумариозидов на конформацию порина

3.5.4. Влияние различных кукумариозидов на иммуногенность человеческого сывороточного альбумина

3.5.4.1. Влияние различных кукумариозидов на образование антител против человеческого сывороточного альбумина

3.5.4.2. Влияние различных кукумариозидов на цитокиновый профиль

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВЭЖХ-МС - тандемная высокоэффективная жидкостная хроматография-масс-спектрометрия

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

ДГДГ - дигалактозилдиацилглицерин

ДСК - дифференциальная сканирующая калориметрия

ЖК - жирная кислота

ИЛ - интерлейкин

ИН - индекс ненасыщенности

ИФН- интерферон

КД — кукумариозид

МГДГ - моногалактозилдиацил глицерин

МНЖК - мононенасыщенная жирная кислота

МЭЖК - метиловый эфир жирной кислоты

НА - гемагглютинин

НЖК - насыщенная жирная кислота

ПАФ — полный адъювант Фрейнда

ПНЖК - полиненасыщенная жирная кислота

СХДГ - сульфохиновозилдиацилглицерин

ТИ-комплекс - тубулярный иммуностимулирующий комплекс

ТСХ — тонкослойная хроматография

ФВК - фосфорновольфрамовокислый калий

ФГ - фосфатидилглицерин

ФЛ - фосфолипид

ФНО - фактор некроза опухоли

ФХ — фосфатидилхолин

ФЭ — фосфатидилэтаноламин

Хол — холестерин

ЧСА - человеческий сывороточный альбумин

EFTEM - Energy Filtering Transmission Electron Microskopy (просвечивающая электронная микроскопия с энергетической фильтрацией) ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (твердофазный иммуноферментный анализ)

НАО - рекомбинантный нерасщепленный мономер гемагглютинина вируса гриппа A/H1N1 (A/California/04/2009)

ISCOM - иммуностимулирующий комплекс с встроенным антигеном ISCOMATRIX® - иммуностимулирующий комплекс без антигена NMID - non-methylene interrupted dienoic (жирная кислота с нерегулярным расположением двойных связей)

Quil А - сумма тритерпеновых гликозидов из Quillaja saponaria

YOmpF - OmpF-подобный порин из грамотрицательной бактерии Yersinia pseudotuberculosis

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние полярных липидов и тритерпеновых гликозидов из морских организмов на конформацию и иммуногенность белковых антигенов тубулярных иммуностимулирующих комплексов»

ВВЕДЕНИЕ

В 1981 году Корана Х.Г. с сотр. (Huang et al., 1981) впервые показали, что ренатурация денатурированного бактериородопсина в фосфолипидном окружении приводит к восстанавленшо функциональных свойств белка. С тех пор проблема липид-белковых взаимодействий и их связи с конформационными и функциональными изменениями белков остается ключевой для современной биохимии и биологии в целом. Однако эта проблема актуальна не только в теоретическом аспекте: в результате ее решения может появиться мощный инструмент для работы в таких практических областях как медицина, биотехнология, биоинженерия и дизайн белков (Stanley, Fleming, 2008; Popot, 2014). В частности, использование липидных частиц (липосом, ISCOMATRIX , тубулярных иммуностимулирующих комплексов (ТИ-комплексов)) в качестве адъювантных носителей антигенов вакцин нового поколения позволяет предположить, что варьирование липидного окружения белковых антигенов может способствовать повышению их иммуногенности. Напочастицы ТИ-комплексов, состоящие из моногалактозилдиацилглицерина (МГДГ) из морских макрофитов, тритерпенового гликозида кукумариозида (КД) А2-2 из голотурии Caciimaria japónica и холестерина (Хол), представляются наиболее перспективными адыовантными конструкциями для современных субъединичных вакцин, так как стимулируют более высокий иммунный ответ по сравнению с самыми сильными адъювантами - ISCOMATRIX и полным адъювантом Фрейнда (Kostetsky et al., 20И). Липидный матрикс для антигена ТИ-комплекса формирует МГДГ, физико-химические свойства которого, а также других полярных липидов из морских пойкилотермных организмов изменяются в зависимости от таксономического положения вида и сезона (Sanina et al., 2002, 2004, 2008). Это может быть использовано для модуляции структурно-функциональных свойств белков не только in vivo, но

и in vitro, в частности для повышения иммуногенности белковых антигенов в составе искусственных липид-содержащих систем таких, как ТИ-комплексы.

Однако, несмотря на более тридцатилетнюю историю исследований влияния липидов на структурно-функциональные свойства белков и увеличивающийся поток публикаций по этой теме, информация о полной цепи взаимосвязи от физико-химических свойств липидов к липид-индуцированной конформации белков и их функциям, особенно такой функции как иммуногенность, очень ограничена, вероятно, из-за повышенной сложности и трудоемкости сопряженного с этим анализа. Еще менее ясно, как влияет на конформацию и иммуногенность антигена структура сапонинового компонента ТИ-комплексов, хотя свойство сапонинов солюбилизировать белки привело к открытию иммуностимулирующих комплексов (ISCOM) - прототипа ТИ-комплексов (Санина, Попов, 2004).

Целью настоящей работы было исследование влияния полярных липидов и тритерпеновьтх гликозидов из морских организмов на конформацию и иммуногенность белковых антигенов ТИ-комплексов.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

1. Выделить и определить физико-химические свойства полярных липидов из разных видов морских макрофитов и беспозвоночных, предназначенных для приготовления ТИ-комплексов.

2. Выделить и идентифицировать индивидуальные кукумариозиды из С. japónica, предназначенных для использования в качестве сапониновой составляющей ТИ-комплексов.

3. Исследовать влияние МГДГ из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию белковых антигенов ТИ-комплексов.

4. Исследовать влияние фосфолипидов - фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидилэтаноламина (ФЭ) из разных видов морских беспозвоночных на иммуногенность белковых антигенов ТИ-комплексов.

5. Исследовать влияние индивидуальных кукумариозидов и их фракций из Cucumaria japónica на иммуногенность и конформацию белковых антигенов ТИ-комплексов.

В качестве модельных антигенов ТИ-комплексов были выбраны мембранные белки (OmpF-подобный порин из грамотрицательной бактерии Yersinia pseudotuberculosis (YOmpF), рекомбинантный нерасщепленный мономер гемагглютинина вируса гриппа A/H1N1 (A/California/04/2009)) (НАО)) и водорастворимый белок - человеческий сывороточный альбумин (ЧСА).

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ (госзадания 4.2007.2011, 4.583.2011 и 172.2014, госконтракт П340, проект АВЦП 2.2.2/603), Правительства РФ (контракт 11.G34.31.0010), Президента РФ (грант СП-3367.2013.4), ФЦП (госконтракт 02.740.11.5088),) и CRDF (грант RUXO-003-VL-06-BP4M03).

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Тубулярные иммуностимулирующие комплексы

1.1.1. Прототипы тубулярных иммуностимулирующих комплексов - ISCOM и ISCOMATRIX®

Применение субъединичных антигенов в вакцинопрофилактике является одним из самых эффективных способов повышения безопасности и протективности современных вакцин. В отличие от классических вакцин, содержащих убитые или живые (чаще всего аттенуированные) патогены или их инактивированные токсины (токсоиды), субъединичные вакцины содержат лишь один или несколько соответствующих микробиальных антигенов, определяющих выработку протективного иммунного ответа макроорганизма. Поэтому применение субъединичных вакцин устраняет многие нежелательные побочные эффекты, связанные с недостаточной инактивацией патогена, способностью аттенуированных патогенов реверсировать к дикому вирулентному штамму или же вызывать родственное заболевание у людей с иммунодефицитом или ослабленным здоровьем. При инактивации патогенов могут разрушаться эпитопы, важные для протективного ответа. Более того, микроорганизмы могут содержать антигены, способные вызывать такой нежелательный ответ как образование блокирующих антител, которые предотвращают связывание функциональных, бактерицидных антител (Санина, Попов, 2004).

Однако высокоочищенные субъединичные антигены обладают низкой иммуногенностью. В связи с этим значительные усилия прилагаются для поиска безопасных и эффективных адъювантов и новых методов презентации антигена иммунокомпетентным клеткам. Несмотря на наличие широкого арсенала адъювантов, лишь немногие из них могут применяться в медицинских и ветеринарных вакцинах из-за побочных эффектов и/или низкой эффективности (Sanders et al., 2005; Sun et al., 2009; Lôvgren-Bengtsson et al., 2011). Наиболее перспективными среди них являются

наночастицы, такие как матрикс иммуностимулирующих комплексов (ISCOMATRIX®), которые исполняют роль не только адъювантов, но и носителей антигенов. Преимущества адыовантных наночастиц обусловлены многомерной формой представления антигенов, имитирующей

(к)

микроорганизмы. Высокоэффективные наночастицы ISCOMATRIX индуцируют не только высокие уровни антител, но и сбалансированный Thl/Th2 ответ (Lóvgren-Bengtsson et al.,2011), что важно для нейтрализации

(К)

внутриклеточных патогенов. Адъювант ISCOMATRIX - те же частицы более известных иммуностимулирующих комплексов (ISCOM), впервые описанных Мореин Б. с соавторами (Morein et al., 1984) в 1984 г., но без инкорпорированного антигена (Pears, Drane, 2005). В связи с этим, сфера применения ISCOMATRIX® существенно шире, чем у ISCOM, так как она не

ограничена использованием только гидрофобными мембранными белками.

00

Для получения ISCOMATRIX и классических ISCOM используются фосфолипиды (ФЛ), как правило, из яичного желтка, холестерин и сумма тритерпеновых гликозидов квиляйи мыльной (Quillaja saponaria) - Quil А, образующие вирусоподобные сферические наночастицы диаметром 40-100 нм (Kersten, Crommelin, 1995; Wikman et al., 2006).

Для приготовления ISCOM/ ISCOMATRIX® наиболее часто используется сапонин Quil А или его очищенные компоненты. Quil А представляет собой гетерогенную смесь, вероятно, более ста близко родственных сапонинов. Quil А подходит для применения в ветеринарии, но не для человека (Barr et al., 1998). Механизм иммуноадъювантной активности сапонинов Quil А связан с их способностью образовывать комплексы с холестерином мембран, вызывая локальную воспалительную реакцию в месте введения. Это, в свою очередь, приводит к миграции лимфоцитов и макрофагов в очаг воспаления, что обеспечивает более эффективную презентацию антигена и активацию иммунокомпетентных клеток, мигрирующих в очаг воспаления. Таким образом, сапонины Q. saponaria

усиливают адыоваитный эффект, обеспечивая необходимые сигналы для стимулирования клеток врожденной иммунной системы (таких как дендритные клетки) и, следовательно, инициирования антиген-специфического приобретенного иммунитета. Также было показано, что адъювантный эффект сапонинов Q. saponaria зависит от альдегидных функциональных групп, присутствующих в индивидуальных молекулах и алифатических боковых цепях (Marciani et al., 2000). Вместе с тем сапонины ответственны также за побочные эффекты, которые связаны с их литическими свойствами, болевыми эффектами и молекулярной нестабильностью, приводящей к деградации при физиологических рН (Lóvgren Bengtsson et al., 2011; Pedebos et al., 2014).

Эффективность ISCOM значительно выше по сравнению с липосомами и ослабленными вирусными вакцинами. Но несмотря на это, ISCOM не применяются при вакцинации людей из-за гемолитической активности Quil А. Поэтому поиск путей модификации ISCOM с целыо улучшения их иммунобиологических свойств является актуальной проблемой не только иммунологии, но и биохимии и физико-химической биологии.

1.1.2. Общая характеристика тубулярного иммуностимулирующего комплекса

Как известно, ISCOM представляет собой гибкую конструкцию, в которой возможна замена основных структурообразующих компонентов на аналогичные соединения (Санина, Попов, 2004). Для модификации ISCOM было предложено использовать принципиально новые биологически активные и хорошо охарактеризованные компоненты - гликоглицеролипиды и сапонины из морских гидробионтов (Lee et al., 2004; Костецкий и др., 2007; Попов и др., 2008; Санина и др., 2008; Kostetsky et al., 2011).

На первом этапе модификации ISCOM вместо иммунологически инертных фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидилэтаноламина (ФЭ) были

использованы гликолипиды из морских макрофитов, обладающие широким спектром биологических активностей (Sanina et al., 2004). Кроме того, гликолипиды из морских макрофитов обогащены полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК), которые могут проявлять самостоятельную биологическую активность, являясь предшественниками для синтеза различных оксилипинов (Tilley et al. 2001; Calder, 2009, 2014).

Однако среди трех использованных для модификации гликоглицеролипидов из морского макрофита Laminaria japónica (МГДГ, дигалактозилдиацилглицерин (ДГДГ), сульфохиновозилдиацилглицерин (СХДГ)) только МГДГ проявил ISCOM-формирующую способность (Lee et al., 2004). Частицы полученного комплекса имели классическую везикулярную морфологию, характерную для ISCOM, но были примерно вдвое меньше, чем ФХ-содержащие ISCOM. Следует отметить, что МГДГ из морских макрофитов, обогащенный ПНЖК, самоорганизовывается в гексагональную инвертированную суперструктуру Нп. В то время как СХДГ формирует ламеллярную, а ДГДГ - изотропную суперструктуры (Sanina et al., 2008). Следовательно, особенность суперструктуры, а также сравнительно малый гидрофильно-липофильный баланс липида определяют его способность к образованию ISCOM-подобных структур (Lee et al., 2004). Важно также отметить, что температура фазового перехода МГДГ из L. japónica была значительно ниже по сравнению с таковыми ДГДГ и особенно СХДГ. Это в свою очередь коррелировало с индексом ненасыщенности (ИН) исследованных гликолипидов (Sanina et al., 2008). В живых системах замена бислойного фосфолипида на чужеродный небислойный гликолипид сопровождается улучшением некоторых функциональных свойств как мембраносвязанных белков, так и клетки в целом (Wikstrom et al., 2004).

Исследование иммуностимулирующей активности ФХ-ISCOM и МГДГ-ISCOM в отношении OmpF-подобного порина из человеческого

патогена Y. pseudotuberculosis (YOmpF) показало низкую адъювантную активность обоих вариантов комплекса (Lee et al., 2004).

Но главную адъювантную функцию в ISCOM выполняет Quil А. Поэтому на следующей стадии модификации был использован структурный аналог сапонинов Quil А - тритерпеновый гликозид из голотурии С. japónica кукумариозид Аг-2, обладающий высокой адъювантной и другими видами биологической активности (Aminin et al., 2006, 2011; Menchinskaya et al., 2013).

Супернизкие дозы КД действуют как на клеточный, так и на гуморальный иммунный ответ (Санина, Попов, 2004). Аналогично Quil А тритерпеновые гликозиды голотурий способны образовывать гликозид-стериновые комплексы с высоким аффинитетом к холестерину (Попов, 2003). В результате они становятся менее токсичными, чем в свободном виде (Ли и др., 2008). Способность того или иного сапонина образовывать межмолекулярные комплексы с холестерином является необходимым условием для формирования на его основе надмолекулярных липид-сапонпновых комплексов (Kersten, Crommelin, 1995).

Замена в составе ISCOM не только фосфолипидов на МГДГ, но и Quil А на кукумариозид А2-2 привела к образованию нового носителя для субъединичных антигенов — ТИ-комплекса, который принципиально отличается от прототипа как по составу, так и по морфологии. Причем использование МГДГ из разных видов морских макрофитов не влияло на формирование ТИ-комплекса. Первоначально было предложено весовое соотношение 3:2:6 между компонентами комплекса - кукумариозидом, холестерином и МГДГ (Санина и др., 2008). ТИ-комплексы представляли собой трубчатые частицы с наружным диаметром около 13 нм, внутренним диаметром около 4 нм и длиной порядка 300 нм (Мазейка и др., 2013). Использование нового метода получения ТИ-комплекса (Мазейка и др., 2008), основанного на методе гидратации липидных пленок (Copland et al.,

2000), позволило получать гомогенные тубулярные частицы, что важно для воспроизводимости результатов иммунизации. Было установлено, что оптимальным для формирования гомогенного препарата ТИ-комплекса является весовое соотношение между КД Аг-2, холестерином и МГДГ 6:2:4, при котором исключается возможность формирования иных частиц, кроме ТИ-комплексов (рис. 1).

Рис. 1. Электронная микрофотография ТИ-комплекса. Масштабная линия соответствует 100 нм (Мазейка, 2012).

Частицы ТИ-комплекса сходны по морфологии с описанными ранее комплексами гликоалкалоидов растений семейства пасленовых (Кеикеш е/ а1., 1995), что позволяет предполагать сходство строения обоих типов частиц. Использование позитивного окрашивания частиц кислым гидрозолем железа, который электростатически взаимодействует с сульфатными группами углеводных цепей, позволяет визуализировать гликозиды в виде электронно-плотного вещества на электронных микрофотографиях. Частицы ТИ-комплекса были окрашены гидрозолем железа снаружи, тогда как внутренний канал практически не окрашивался. Это позволяет утверждать, что углеводные цепи молекул кукумариозидов экспонированы преимущественно на внешней стороне трубчатых частиц. Такое расположение молекул сапонинов хорошо согласуется с предложенной

моделью строения надмолекулярных комплексов гликоалкалоидов растений семейства пасленовых (рис. 2) и позволяет полагать, что данная модель в общих чертах справедлива и для ТИ-комплекса (Мазейка и др., 2013).

Рис. 2. Модель строения тубулярной наночастицы. 1 - внутренний канал; 2 -слой мембранных фосфолипидов; 3 - слой холестерол-агликоновых комплексов; 4 - слой углеводных цепей гликоалкалоидов.

На примере YOmpF было показано, что в полученный комплекс можно эффективно встраивать белковый антиген. Структура полученного антиген-содержащего ТИ-комплекса не отличалась от структуры исходного носителя (Костецкий и др., 2007; Санина и др., 2008). При эксперементальной иммунизации мышей YOmpF в составе ТИ-комплексов обнаруживался сильный гуморальный иммунный ответ на антиген. Этот ответ был заметно выше, чем при использовании классических ISCOM, липосом и полного адъюванта Фрейнда (Ли и др., 2008; Kostetsky et al., 2011).

При эксперементальной иммунизации мышей YOmpF в составе ТИ-комплексов обнаруживалось примерно 4-х кратное увеличение уровня антипориновых антител по сравнению с эффектом индивидуального антигена. Полученный ТИ-комплекс проявлял значительно меньшую токсичность по сравнению с ISCOM (Kostetsky et al., 2011).

/

1.2. Физико-химические и биологические свойства полярных липидов морских макрофитов

1.2.1. Физико-химические свойства гликолипидов морских макрофитов

Морские макрофиты - это филогенетически разнообразная группа растений, включающая такие эволюционно отдаленные линии как макроводоросли, принадлежащие к трем главным таксономическим группам (зеленые, бурые и красные водоросли (СМогорЪ.у1а, РИаеорку1а и Шюс1орку(а соответственно)), а также морские травы (ЕтЪгуоркуШ). Большой интерес, который привлекают к себе морские макрофиты, вызван их биологической активностью (антимикробной, антивирусной, противовоспалительной и иммунотропной). Эти свойства могут быть, прежде всего, связаны с высоким содержанием гликолипидов (МГДГ, ДГДГ, и СХДГ), которые наряду с фосфолипидами (ФХ, ФЭ и фосфатидилглицерином (ФГ)) являются главными полярными липидами морских макрофитов независимо от сезона (Гончарова и др., 2004), а их состав отражает таксономическое положение этих растений (Хотимченко, 2003). Так, гликолипиды из морских макрофитов обладают бактерицидной, антивирусной,

противовоспалительной, противоопухолевой (МоптоК) е1 а1., 1995; Ои5(аГзоп ег а1., 1998; 01^а е/ а/., 1998; Еквика е/ а1., 2004) и другими видами биологической активности (Ма1зиШ]1 <?/ а1., 2000; \Уи е/ а1., 2005). Однако информация об адыовантных свойствах гликолипидов морских макрофитов очень ограниченна. Так, показано, что МГДГ, используемый в ТИ-комплексах в качестве липидного компонента, обладает самостоятельной адъювантной активностью (Костецкий и др., 2007), превосходящей эффект полного адъюванта Фрейнда (ПАФ). Особенно высокий эффект наблюдался при внутрибрюшинном введении МГДГ в дозе 0.5 мкг/мышь, когда уровень антител против использованных корпускулярных Т-зависимых антигенов -эритроцитов барана был в 1.5 и 1.7 раза выше на 14 и 21 день после

иммунизации соответственно, чем при использовании ПАФ. Кроме того, МГДГ в 2.5 раза снижал индекс воспаления у мышей, иммунизированных эритроцитами барана (Костецкий и др., 2007).

Биологическая активность гликолипидов морских макрофитов связана не только со структурой углеводной составляющей, но и с присутствием в их составе большого количества ПНЖК. Исследование состава жирных кислот индивидуальных полярных липидов морских макрофитов выявило важные хемотаксономические особенности (Sanina et al., 2004), которые были также найдены и в общих липидах этих растений (Хотимченко, 2003). В частности, распределение С18 и С20 ПНЖК в главных полярных липидах зависит от таксономического положения морских макрофитов. Так, ПНЖК глико- и фосфолипидов красной водоросли Ahnfeltia tobuchiensis главным образом принадлежат к С20 серии. Наоборот, те же липиды морской травы Zostera marina в основном включают С18 ПНЖК, а полярные липиды бурой водоросли L. japónica характеризуются высокими уровнями ПНЖК обеих серий. Но, несмотря на существенные хемотаксономические различия, полярные липиды исследованных видов имели общие особенности их ЖК состава, которые могут выполнять важную роль при адаптации растений. Например, соотношение между п-6 и п-3 ПНЖК было намного выше для ФЛ нефотосинтетических мембран (ФХ и ФЭ) по сравнению с гликолипидами и ФГ, образующими липидный матрикс фотосинтетических мембран. Замена п-6 на п-3 ПНЖК сопровождалась частичным замещением С20 на С18 ПНЖК в гликолипидах и ФГ в отличие от ФХ и ФЭ L. japónica, где присутствуют ПНЖК обеих серий. Обнаружено, что ЖК состав ФГ и гликолипидов сходен, что согласуется с наличием общих биосинтетических путей главных полярных липидов тилакоидных мембран.

Многие характерные для Ulva fenestrata ПНЖК (16:4п-3, 16:3п-3, 18:3п-6 и 18:4п-3, 20:3п-6) оказались аккумулированными в МГДГ. Этот липид

(рис. 3) наряду с ДГДГ является доминирующим гликолипидом морских макрофитов (Sanina et al., 2004).

on

Рис. 3. Химическая структура моногалактозилдиацилглицерина. Ri, R2 — остатки жирных кислот.

Насыщенность полярных липидов повышалась в рядах МГДГ-»ДГДГ-»СХДГ и ФХ—>ФЭ—>ФГ; а основной пик и даже вся термограмма фазового перехода самого ненасыщенного гликолипида - МГДГ была, как правило, смещена в область особенно низких температур по сравнению с другими гликолипидами. Наиболее низкой Ттах отличался МГДГ из Sargassum pallidum и U. fenestrata.

При смене сезона от лета к зиме наблюдалось повышение соотношения п-З/п-6 ПНЖК во всех полярных липидах, особенно в гликолипидах морских макрофитов (Sanina et al., 2004). Но соответствующее повышение ненасыщенности ЖК не приводило к понижению температуры калориметрического фазового перехода фотосинтетических липидов (гликолипиды и ФГ) в отличие от нефотосинтетических (ФХ и ФЭ) (Sanina et al., 2008).

Установленная зависимость физико-химических свойств МГДГ из морских макрофитов от таксономического положения этих растений и сезона может быть использована для модулирования конформации инкорпорированного в адъювантный носитель белкового антигена с целью повышения его иммуногенности.

h2co-cor'

R CO-OCH

Важно отметить, что биологические и, в частности, иммунологические свойства галактолипидов связывают с полиненасыщенными жирными кислотами, которыми особенно обогащен МГДГ из морских мкрофитов (Sanina et al., 2004).

1.2.2. Иммунологические свойства иолинснасыщснных жирных кислот

ПНЖК могут проявлять иммуномодупирующие свойсва in vitro и in vivo, влияя на продукцию цитокинов, пролиферацию лимфоцитов, экспрессию поверхностных молекул, фагоцитоз, апоптоз, а также ингибируя активность натуральных киллеров. Действие ПНЖК на врожденный и адаптивный иммунитет связывают с разными молекулярными механизмами, которые не исключают друг друга. Главные функции ПНЖК связаны с их участием в метаболизме эйкозаноидов, экспрессии генов, передаче сигналов в клетке и организации мембран. Наибольшее понимание достигнуто относительно эффекта ПНЖК на продукцию эйкозаноидов. ПНЖК п-6 и п-3 являются конкурирующими субстратами для циклооксигеназы и липооксигеназы, метаболизирующих оба типа ПНЖК в эйкозаноиды с противоположными эффектами. Так, наиболее распространенная п-6 ПНЖК -арахидоновая кислота превращается в простагландины, лейкотриены и другие продукты липоксигеназы или циклооксигеназы. Эти вещества являются важными регуляторами клеточных функций с воспалительными эффектами. Наоборот, типичные п-3 ПНЖК докозагексаеновая и эйкозапентаеновая кислоты проявляют противовоспалительные свойства, являясь конкурентными субстратами для ферментов и продуктов метаболизма арахидоновой кислоты и тем самым предотвращая продукцию провоспалительных эйкозаноидов иммунными клетками (Shaikh, Edidin, 2006). Однако противовоспалительные свойства п-3 ПНЖК зависят от их химической структуры, что было показано в результате исследования

влияния 18:4п-3 и 16:4п-3, выделенных из морских макроводорослей ипйаг'ш ртпа1'фйа и 1Лха регЫтз соответственно, на продукцию ЬТВ4, ЬТС4, 5-1-1ЕТЕ, которые синтезируются из 20:4п-6, в МС/9 тучных клетках мыши в сравнении с эффектом 18:3п-3, 20:5п-3 и 22:6п-3, которыми обогащены морепродукты. Оказалось, что эффекты 22:6п-3, 18:4п-3 и 18:3п-3 на продукцию ЬТВ4 и ЬТС4 были максимальными. 18:3п-3 подавлял синтез 5-НЕТЕ в меньшей степени, чем 22:6п-3 и 18:4п-3, ингибирующие эффекты которых были и в этом случае максимальными. В наименьшей степени синтез всех трех эйкозаноидов тормозился 20:5п-3 и 16:4п-3, эффекты которых были равными, за исключением эффекта на синтез ЬТС4, который не изменялся под действием 20:5п-3 (^ЫИага е1 а1., 1998).

Относительно модулирования воспаления интересно отметить двоякий эффект синтезируемого из арахидоновой кислоты РОЕ2, который может проявлять и про-, и противовоспалительное действие. РОЕ2 индуцирует СОХ-2 и тем самым усиливает свой собственный синтез и продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-6 в макрофагах. С другой стороны, РОЕ2 ингибирует 5-липоксигеназу и тем самым понижает продукцию провоспалительных лейкотриенов 4-й серии. РОЕ2 также индуцирует 15-липоксигеназу, способствуя образованию антивоспалительных липоксинов (ОопггЦег-Рёпг, С1апа, 2010).

Существует предположение о том, что п-6 и п-3 ПНЖК по-разному действуют на продукцию цитокинов. Так, путем угнетения синтеза из арахидоновой кислоты лейкотриенов 4-ой серии п-3 ПНЖК снижают также выработку мононуклеарными клетками провоспалительных цитокинов -фактора некроза опухоли, интерлейкинов (ИЛ) 1, 2 и 6 (Яременко, 2001). Антивоспалительные свойства п-3 ПНЖК частично связаны с их действием на макрофаги, что сопровождается у крыс понижением продукции ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО-а. У людей добавки рыбьего жира снижали способность моноцитов периферической крови производить ФНО-а, ИЛ-1а и ИЛ-1Ь. К тому же,

диета, обогащенная эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислотами, приводила к снижению в мышиных Т-клетках и секреции ИЛ-2, и экспрессии мРНК ИЛ-2 (Kim et al., 2010).

ГТНЖК оказывает иммуномодулирующие эффекты, в частности, путем вмешательства в активацию Т-клеток. п-3 ПНЖК могут конвертировать провоспалительный Tbl фенотип в Th2 фенотип, который рассматривается как антивоспалительный. Предполагается, что противовоспалительные эффекты п-3 ПНЖК, объясняемые сдвигом в балансе Thl/Th2, могут быть связаны с прямым подавлением развития Thl, а не усилением поляризации Т-клеток в сторону Th2 фенотипа, по крайней мере, ex vivo (Zhang et al., 2005). Кроме того, возможно, что п-3 ПНЖК могут устранять Thl клетки путем индуцированного активацией апоптоза (AICD). ПНЖК п-3 могут модулировать дифференцировку Т-лимфоцитов через PPARa, хотя точный механизм действия п-3 ПНЖК по отношению к дифференцировке Т-клеток остается неясным (Kim et al., 2010).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Воробьева, Наталья Сергеевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авилов С. А., Стоник В. А., Калиновский А. И. Строение четырех новых тритериеновых гликозидов из голотурии Ciiciimaria japónica II Химия природных соединений. 1990. № 6. С. 787-792.

2. Авилов С.А. Тритерпеновые гликозиды голотурий отряда Dendrochirotida: дис. д-ра. хим. наук / ТИБОХ ДВО РАН. - Владивосток. 2000. 313 с.

3. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. М.: Мир. 1997. 314 с.

4. Гончарова С. Н., Костецкий Э. Я., Санина Н. М. Влияние сезонных изменений температуры на липидный состав морских макрофитов // Физиология растений. 2004. Том. 51. № 2. С. 190-196.

5. Дроздова O.A., Авилов С.А., Калиновский А.И., Стоник В.А. Минорный гликозид из голотурии Cucumaria japónica II Химия природных соединений. 1992а. №5. С.593.

6. Дроздова O.A., Авилов С.А., Калиновский А.И., Стоник В.А. Новый ацетилированный гликозид из голотурии Cucumaria japónica II Химия природных соединений. 19926. №5. С.590-591.

7. Дроздова O.A., Авилов С.А., Калиновский А.И., Стоник В.А., Мильгром Ю.М., Рашкес Я.В. Новые гликозиды из голотурии Cucumaria japónica II Химия природных соединений. 1993а. №2. С.242-248.

8. Дроздова O.A., Авилов С.А., Калиновский А.И., Стоник В.А., Мильгром Ю.М., Рашкес Я.В. Трисульфатированные гликозиды из голотурии Cucumaria japónica II Химия природных соединений. 19936. №3. С. 369-374.

9. Калинин В.И., Левин B.C., Стоник В.А. Химическая морфология: тритерпеновые гликозиды голотурий (Holothurioidea, Echinodermata). Владивосток: Дальнаука. 1994. 284с.

10. Ковалевская A.M., Столик В.А. Средство для лечения лучевой болезни // Патент Российской Федерации № 2141833. 27.11.1999.

11. Ковалевская A.M., Стоник В. А., Гришин Ю.И. Средство, обладающее противовирусной активностью // Патент Российской Федерации №2184556. 10.07.2002.

12. Костецкий Э.Я., Попов A.M., Санина Н.М., Ли И.А., Цыбульский A.B., Шныров В.Л. Носитель и адъювант для антигенов // Патент Российской Федерации №2311926. 10.12.2007.

13. Костецкий Э.Я., Санина Н.М., Мазейка А.Н., Цыбульский A.B., Воробьёва Н.С., Новикова О.Д., Портнягина О.Ю., Шныров В.Л. Иммуностимулирующий комплекс, способ его получения и применение // Патент Российской Федерации № 2010115549. 10.04.2012.

14. Ли И.А., Попов A.M., Костецкий Э.Я., Санина Н.М., Мазейка А.Н., Богуславский В.М. Особенности мембранотропного действия некоторых тритерпеновых гликозидов голотурий, обладающих иммуномодулирующей активностью // Биофизика. 2008. Т. 53. № 3. С. 462469.

15. Лихацкая Г.Н. Механизмы взаимодействия тритерпеновых и стероидных гликозидов с липидными мембранами: дис. канд. физ.-матем. наук / ТИБОХ ДВО РАН. Владивосток. 2006. 120с.

16. Мазейка А.Н., Попов A.M., Калинин В.И., Авилов С.А., Костецкий Э.Я. Комплексообразование тритерпеновых гликозидов голотурии как основа липид-сапониновых носителей субъединичных антигенов // Биофизика. 2008. Т. 53. № 5. С. 826-835.

17. Мазейка А.Н. Разработка иммуностимулирующих комплексов на основе гликолипидов и тритерпеновых гликозидов из морских гидробионтов: дис. канд. биол. наук. / ДВФУ МОН РФ. Владивосток. 2012. 154 с.

18. Мазейка А.Н, Костецкий Э.Я., Санина Н.М., Попов A.M., Калинин В.И., Ли И.А. Разработка иммуностимулирующего липид-

сапонинового носителя субъединичных антигенов на основе гликолипида моногалактозилдиацилглицерола из морских макрофитов и тритерпеновых гликозидов из Cucumaria japónica II Биофизика. 2013. Т. 58. № 5. С. 786-795.

19. Методы общей бактериологии в Зх тт., Т.1. // Под ред. Ф Герхардта и др., пер. с англ. М.: МИР 1983. 536с.

20. Новикова О.Д. Бактерии рода Yersinia. Структура и свойства: дис. д-ра. хим. наук / ТИБОХ ДВО РАН. Владивосток. 2007. 216 с.

21. Новикова О.Д., Ким Н.Ю., Глазунов В.П., Вакорина Т.И., Набережных Г.А., Лихацкая Г.Н., Хоменко В.А., Соловьева Т.Ф. Влияние липополисахарида на конформационное состояние и функциональную активность порина из Yersinia pseudotuberculosis II Биоорг. химия 1999. Т. 25. №2. С. 97-106.

22. Новикова О.Д., Вакорина Т.И., Хоменко В.А., Лихацкая Г.Н., Ким Н.Ю., Емельяненко В.И., Кузнецова С.М., Соловьева Т.Ф. Влияние условий культивирования на пространственную структуру и функциональную активность OmpF-подобного порина из наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis. II Биохимия. 2008. Т. 73. № 2. С. 173184.

23. Пальцев М. А. Цитокины. От теории к практике. Вестник российской академии наук. 1996. Т. 66. № 12. С. 1079-1084.

24. Перестенко Л.П. Водоросли залива Петра Великого. Л.: Наука, 1980. 232 с.

25. Пермяков Е.А. Метод собственной люминисценции белка. М.: Наука, 2003. 189 с.

26. Попов A.M. Биологическая активность и механизмы действия вторичных метаболитов из наземных растений и морских беспозвоночных: Автореф. дис. докт. биол. наук. Владивосток. 2003. 52 с.

27. Попов A.M., Ли И.А., Костецкий Э.Я., Санина Н.М., Цыбульский

A.B., Шныров В.Л., Мазейка А.Н. Носитель антигенов // Патент Российской Федерации № 2322259. 20.04.2008.

28. Портнягина О.Ю., Новикова О.Д., Вострикова О.П., Соловьева Т.Ф. Динамика иммунного ответа к порину из наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. Т. 128. № 10. С. 437-440.

29. Портнягина О.ТО, Новикова О.Д., Вострикова О.П., Хоменко

B.А., Соловьева Т.Ф. Бактериальные порины как перспективные антигены для диагностики и вакцинопрофилактики инфекционных заболеваний // Вестник ДВО РАН. 2004. № 3. С. 36-44.

30. Растения и животные залива Петра Великого // под. ред. A.B. Жирмунского. Л.: Наука, 1976. 363 с.

31. Санина Н.М., Попов A.M. Перспективы использования гликолипидов и сапонинов для оптимизации состава иммуностимулирующих комплексов (ISCOM) // Материалы международного съезда Фитофарм 2004. Актуальные проблемы создания лекарственных препаратов природного происхождения. Миккели (Финляндия). СПб: ВВМ,2004. С. 698-705 .

32. Санина Н.М., Попов A.M., Ли И.А., Костецкий Э.Я., Цыбульский A.M., Шиыров В.Л. Способ получения носителя антигенов на основе липидов из морских макрофитов и тритерпенового гликозида кукумариозида // Патент Российской Федерации № 2319506. 20.03.2008.

33. Сильченко A.C. Новые тритерпеиовые гликозиды из 8 видов голотурий семейств Holothuriidae, Stichopodidae, Synallactidae и Cucumariidae: дис. канд. хим. наук / ТИБОХ ДВО РАН. Владивосток. 2005. 171с.

34. Стоник В.А., Авилов С.А., Федоров С.Н., Богуславский В.М. Способ получения суммы тритерпеновых гликозидов // Патент Российской Федерации №2110522. 10.05.1998.

35. Стоник В.А., Аминин Д.Л., Богуславский В.М., Авилов С.А., Агафонова И.Г., Сильченко А.С., Пономаренко Л.П., Прокофьева Н.Г., Чайкина Е.Л. Иммуномодулирующее средство "кумазид" и фармацевтическая композиция на его основе // Патент Российской Федерации № 2271820. 20.03.2006.

36. Федоров С.Н., Шубина Л.К., Капустина И.И., Авилов С.А., Стоник В.А., Шастина В.В., Квак Я.Й., Парк Д.И., Джин Д.О., Квон Я.Х. Средство, стимулирующее апоптоз клеток лейкемии человека // Патент РФ №2360692. 19.07.2009.

37. Хотимченко С. В. Липиды морских водорослей-макрофитов и трав: Структура, распределение, анализ. Владивосток: Дальнаука. 2003. 234 с.

38. Химическая энциклопедия в 5 т. Т.4. / под ред. Н.С. Зефирова. М.: «Большая Российская Энциклопедия». 1995. 762с.

39. Яременко О.Б. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты в ревматологии: I. Теоретические основы // Укр. ревматол. жури. 2001. № 2. С. 23-30.

40. Afonin S., Glaser R.W., Sachse С., Salgado J., Wadhwani P., Ulrich A.S. (19)F NMR screening of unrelated antimicrobial peptides shows that membrane interactions are largely governed by lipids // Biochim. Biophys. Acta. 2014. Vol. 1838. Issue 9. P. 2260-2268.

41. Agha-Jaffar D., Lillycrop K. A., Shearmen C. P., Calder P. C., Burdge G. C. Polyunsaturated fatty acid metabolism in monocyte differentiation // Proceedings of the Nutrition Society. 2013. Vol. 72. Issue OCE2. P. E93.

42. Allen S.J., Curran A.R., Templer R.H., Meijberg W., Booth P.J. Controlling the folding efficiency of an integral membrane protein // J. Mol. Biol. 2004. Vol. 342. Issue 4. P. 1293-1304.

43. Aminin D.L., Pinegin B.V., Pichugina L.V., Zaporozhets T.S., Agafonova I.G., Boguslavski V.M., Silchenko A.S., Avilov S.A., Stonik V.A.

Immunomodulatory properties of Cumaside // International Immunopharmacology. Vol. 6. Issue 7. 2006. P. 1070-1082.

44. Aminin D.L., Agafonova I.G., Kalinin V.I., Silchenko A.S., Avilov S.A., Stonik V.A., Collin P.D., Woodward C. Immunomodulatory Properties of frondoside A, a major triterpene Glycoside from the North Atlantic Commercially Harvested Sea Cucumber Cucumaria frondosa II J. Med Food. 2008. Vol. 11. No. 3. P. 443-453.

45. Aminin D.L., Koy C., Dmitrenok P.S., Muller-Hilke B., Koczan D., Arbogast B., Silchenko A.A., Kalinin V.I., Avilov S.A., Stonik V.A., Collin P.D., Thiesen H.J., Deinzer M.L., Glocker M.O. Immunomodulatory effects of holothurian triterpene glycosides on mammalian splenocytes determined by mass spectrometric proteome analysis // J. Proteomics. 2009. Vol. 72. No. 5. P. 886-906.

46. Aminin D.L., Silchenko A.S., Avilov S.A., Stepanov V.G., Kalinin V.I. Immunomodulatory action of mono sulphated triterpene glycosides from the sea cucumber Cucumaria okhotensis: stimulation of activity of mouse peritoneal macrophages //Nat. Prod. Commun. 2010. Vol. 5. No. 12. P. 1877-1880.

47. Aminin D.L., Zaporozhets T.S., Adryjashchenko P.V., Avilov S.A., Kalinin V.I., Stonik V.A. Radiprotective properties of cumaside, a complex of triterpene glycosides from the sea cucumber Cucumaria japonica and Cholesterol //Nat. Prod. Commun. 2011. Vol. 6. No. 5. P. 587-592.

48. Andersen O.S., Koeppe R.E. Bilayer thickness and membrane protein function: an energetic perspective // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 2007. Vol. 36. P.107-130.

49. Badiee A., Jaafari M.R., Khamesipour A., Samiei A., Soroush D., Kheiri M.T., Barkhordari F., McMaster W.R., Mahboudi F. Enhancement of immune response and protection in BALB/c mice immunized with liposomal recombinant major surface glycoprotein of Leishmania (rgp63): The role of bilayer composition // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2009. Vol. 74. Issue 1. P. 37-44.

50. Bakholdina S.I., Sanina N.M., Krasikova I.N., Popova O.B., Solov'eva T.F. The impact of abiotic factors (temperature and glucose) on physicochemical properties of lipids from Yersinia pseudotuberculosis II Biochimie. 2004. Vol. 86. Issue 12. P. 876-881.

51. Barr I.G., Sjolander A., Cox J.C. ISCOMs and other saponin based adjuvants // Adv Drug Del Rev. 1998. Vol. 32. No. 3. P. 247-71.

52. Bentz J., Mittal A. Architecture of the influenza hemagglutinin membrane fusion site // Biochim. Biophys. Acta. 2003. Vol. 1614. Issue 1. P. 2435.

53. Biedermann T., Rocken M., Carballido J.M. Thl and Th2 lymphocyte development and regulation of Th cell-mediated immune responses of the skin // J. Invest. Dermatol. Symp. Proc. 2004. Vol. 9. No. 1. P. 5-14.

54. Bligh E.G., Dyer W.I. A rapid method of total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. Physiol. 1959. Vol. 37. No. 8. P. 911-918.

55. Bogdanov M., Sun J., Kaback H.R., Dowhan W. A phospholipid acts as chaperone in assembly of a membrane transport protein. J Biol Chem. 1996. Vol. 271. No. 20. P. 11615-11618.

56. Booth P.J. Sane in the membrane: designing systems to modulate membrane proteins // Curr. Opin. Struct. Biol. 2005. Vol. 15. Issue 4. P.435-440.

57. Booth P.J., Curnow P. Folding scene investigation: membrane proteins // Current Opinion in Structural Biology. 2009. Vol. 19. Issue 1. P. 8-13.

58. Bourassa P., Bekale L., Tajmir-Riahi H.A. Association of lipids with milk a- and p-caseins // International Journal of Biological Macromolecuies. 2014. Vol. 70. P. 156-166.

59. Burstein E.A., Vedenkina N.S., Ivkova M.N., Fluorescence and the localization of tryptophan residues in protein molecules // Photochem. Photobiol. 1973. Vol. 18. Issue 4. P. 263-279.

60. Calder P.C. Polyunsaturated fatty acids and inflammatory processes: new twists in an old tale // Biochimie. 2009. Vol. 91. Issue 6. P. 791-795.

61. Calder P.C. Mechanisms of action of (n-3) fatty acids // J. Nutr. 2012. Vol. 142. No. 3.P. 592S-599S.

62. Calder P.C. Marine omega-3 fatty acids and inflammatory processes: Effects, mechanisms and clinical relevance // Biochim. Biophys. Acta. 2014. doi: 10.1016/j.bbalip.2014.08.010

63. Carreau J.P., Dubacq J.P., Adaptation of macro-scale method to the microscale for faty acid methyl transesterifícation of biologicall lipid extracts // J. Chromatogr. Sci. 1985. Vol. 23. No. 2. P. 54-56.

64. Chiang C.Y., Hsieh C.H., Chen M.Y., Tsai J.P., Liu H.H., Liu S.J., Chong P., Leng C.H. Recombinant lipidated dengue-4 envelope protein domain III elicits protective immunity// Vaccine. 2014. Vol. 32. Issue 12. P. 1346-1353.

65. Christie W.W. Equivalent chain length of methyl ester derivatives of fatty acid on gas chromatography// J. Cromatogr. 1988. V. 447. No. 2. P. 305-314.

66. Colorado J., Muñoz D., Márquez D., Márquez M.E., Lopez J., Thomas O.P., Martinez A. Ulososides and urabosides—triterpenoid saponins from the Caribbean marine sponge Ectyoplasia ferox// Molecules. 2013. Vol. 18. No. 3. P. 2598-2610.

67. Copland M.J., Rades T., Davies N.M. Hydration of lipid films an aqueosus solution of Quil A: a simple method for the preparation of immune-stimulating complexes //Int. J. Pharmaceutics. 2000. Vol. 196. Issue 2. P. 135-139.

68. Delcour A.H. Outer Membrane Permeability and Antibiotic Resistance//Biochim. Biophys. Acta. 2009. Vol. 1794. Issue 5. P. 808-816.

69. Dowhan W., Bogdanov M. Molecular genetic and biochemical approaches for defining lipid-dependent membrane protein folding // Biochim. Biophys. Acta. 2012. Vol. 1818. Issue 4. P. 1097-1107.

70. Eagleburger M.K., Cooley J.W., JiJi R.D. Effects of fluidity on the ensemble structure of a membrane embedded a-helical peptide // Biopolymers. 2014. Vol. 1018. Issue 8. P. 895-902.

71. Eitsuka T., Nakagawa K., Igarashi M., Miyazawa T. Telomerase inhibition by sulfoquinovosyldiacylglycerol from edible purple laver (Porphyra yezoensis) // Cancer Letters. 2004. Vol. 212. Issue 1. P. 15-20.

72. Ekiert D.C., Friesen R.H.E., Bhabha G., Kwaks T., Jongeneelen M., Yu W.L., Ophorst C., Cox F., Korse Hjwm., Brandenburg B., Vogels R., Brakenhoff J.P.J., Kompier R., Koldijk M.H., Cornelissen Lahm., Poon L.L.M., Peiris M., Koudstaal W., Wilson L.A., Goudsmit J. A highly conserved neutralizing epitope on group 2 influenza A viruses // Science. 2011. Vol. 333. No. 6044. P. 843-850.

73. Freire E. Statistical thermodynamic analysis of the heat capacity function associated with protein folding-unfolding transitions // Comments Mol. Cell Biophys. 1989. Vol. 6. P. 123-140.

74. Fribourg P.F. Chami M, Sorzano C.O., Gubellini F., Marabini R., Marco S., Jault J.M., Levy D. 3D cryo-electron reconstruction of BmrA, a bacterial multidrug ABC transporter in an inward-facing conformation and in a lipidic environment // J. Mol. Biol. 2014. Vol. 426. Issue 10. P. 2059-69.

75. Fritsche K. Fatty acids as modulators of the immune response // Annu. Rev. Nutr. 2006. Vol. 26. P. 45-73.

76. Galla H.J., Sackmann E. Lateral diffusion in the hydrophobic region of membrane: use of pyrene excimers as optical probes // Biochim. Biophys. Acta 1974. Vol. 339. Issue 1. P. 103-115.

77. Gamblin S.J., Haire L.F., Russell R.J., Stevens D.J., Xiao B., Ha Y., Vasisht N., Steinhauer D.A., Daniels R.S., Elliot A., Wiley D.C., Skehel J.J. The structure and receptor binding properties of the 1918 influenza hemagglutinin // Science. 2004. Vol. 303. No. 5665. P. 1838-1842.

78. Gamblin S.J., Skehel J.J. Influenza hemagglutinin and neuraminidase membrane glycoproteins // J Biol Chem. 2010. Vol. 285. No. 37. P. 28403-28409.

79. Georgiadi A., Kersten S. Mechanisms of gene regulation by fatty acids // Adv. Nutr. 2012. Vol. 3. Issue 2. P.127-134.

80. Geyeregger R., Zeyda M., Zlabinger G.J., Waldhausl W., Stulnig T.M. Polyunsaturated fatty acids interfere with formation of the immunological synapse //J. Leukoc. Biol. 2005. Vol. 77. No. 5. P. 680-688.

81. Giblin W., Skinner M.E., Lombard D.B. Sirtuins: guardians of mammalian healthspan// Trends in Genetics. 2014. Vol. 30. Issue 7. P. 271-286.

82. Gil A. Polyunsaturated fatty acids and inflammatory diseases // Biomed. Pharmacother. 2002. Vol. 56. Issue 8. P. 388-396.

83. Goni F. M., Monies L.-R., Alonso A. Phospholipases C and sphingomyelinases: Lipids as substrates and modulators of enzyme activity // Progress in Lipid Research. 2012. Vol. 51. Issue 3. P. 238-266.

84. Gonzalez-Periz A., Claria J. Resolution of adipose tissue inflammation //The Scientific World Journal. 2010. Vol. 10. P. 832-856.

85. Greiner V.J., Manin C., Larquet E., Ikhelef N., Greco F., Naville S., Milhiet P.-E., Ronzon F., Klymchenko A., Mely Y. Characterization of the structural modifications accompanying theloss of HBsAg particle immunogenicity // Vaccine. 2014. Vol. 32. Issue 9. P. 1049-1054.

86. Gu9lU-Ustiindag O., Mazza G. Saponins: properties, applications and processing// Crit. Rev. Food. Sci. Nutr. 2007. Vol. 47. No. 3. P. 231-58.

87. Gustafson K.R., Cardellina J.H., Fuller R.W., Weislow O.S.; Kiser R.F.; Snader K.M., Patterson G.M., Boyd M.R. AIDS-antiviral sulfolipids from cyanobacteria blue-green algae // J. Natl. Cancer Inst. 1989. Vol. 81. Issue 16. P. 1254-1258.

88. ITagembe J. Effect of antigenetic site mutationson the binding specificity of an anti-hemagglutinin antibody to H3N2 influinza virus isolates: MS Thesis / Northern Michigan University. Michigan, 2009. 86 p.

89. Hamborg M., Rose F., Jorgensen L., Bjorklund K., Pedersen H.B., Christensen D., Foged C. Elucidating the mechanisms of protein antigen adsorption to the CAF/NAF liposomal vaccine adjuvant systems: effect of charge,

fluidity and antigen-to-lipid ratio // Biochim. Biophys. Acta. 2014. Vol. 1838. Issue 8. P. 2001-2010.

90. Harbige L.S. Fatty acids, the immune response, and autoimmunity: a question of n-6 essentiality and the balance between n-6 and n-3 // Lipids. 2003. Vol. 38. Issue 4. P. 323-341.

91. Heyen J.R., Ye S., Finck B.N., Johnson R.W. Interleukin (IL)-10 inhibits IL-6 production in microglia by preventing activation of NF-kB // Mol. Brain Res. 2000. Vol. 77. Issue 1. P. 138-147.

92. Huang K.S., Bayley H., Liao M.J., London E., Khorana G.H. Refolding of an integral membrane protein. Denaturation, renaturation, and reconstitution of intact bacteriorhodopsin and two proteolytic fragments. // J. Biol. Chem. 1981. Vol. 256. No. 8. P. 3802-3809.

93. Igarashi M., Ito K., Yoshida R., Tomabechi D., Kida H., Takada A. Predicting the antigenic structure of the pandemic (H1N1) 2009 influenza virus hemagglutinin // PLoS One. 2010. Vol.5. Issue 1. e8553.

94. Ishihara K., Murata M., Kaneniwa M., Saito H., Shinohara K., Maeda-Yamamoto M. Inhibition of eicosanoid production in MC/9 mouse mast cells by n-3 plyunsaturated fatty acids isolated from edible marine algae. Biosci. Biotechnol. Biochem. 1998. Vol. 62. Issue 7. P. 1412-1415.

95. Israelachvili J. N. Intermolecular and Surface Forces. London: Academic Press. 1992. 450 p.

96. Jackson D.C., Russell R.J., Ward C.W., Dopheide T.A. Antigenic determinants of influenza virus hemagglutinin I. Cyanogen bromide peptides derived from A/MEMPFHS/72 hemagglutinin possess antigenic activity // Virology. 1978. Vol. 89. Issue 1. P. 199-205.

97. Jin J.O., Shastina V.V., Shing S.W., Xu Q., Park J.I., Rasskazov V.A., Avilov S.A., Fedorov S.N., Stonik V.A., Kwak J.Y. Differential effects of triterpene glycosides, frondoside A and cucumarioside A2-2 isolated from sea

cucumbers on caspase activation and apoptosis of human leukemia cells // FEBS Lett. 2009. Vol. 583. Issue 4. P. 697-702.

98. Kalinin V.I., Aminin D.L., Avilov S.A., Silchenko A.S., Stonik V.A. Triterpene glycosides from sea cucucmbers (Holothurioidae, Echinodermata), biological activities and functions // In: Studies in Natural Product Chemistry (Bioactive Natural Products), ed. Atta-ur-Rahman. Amsterdam: Elsevier Science Publisher, 2008. P. 135-196.

99. Kaufman H.L., Ruby C.E., Hughes T., Slingluff C.L.Jr. Current status of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in the immunotherapy of melanoma // J. Immunother. Cancer. 2014. 2:11.

100. Kern R., Joseleau-Petit D., Chattopadhyay K., Richarme G. Chaperone-like properties of lysophospholipids // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. Vol. 289. Issue 5. P. 1268-1274.

101. Kersten G.F., Crommelin D.J. Liposomes and ISCOMs as vaccine formulations // Biochim. Biophys. Acta. 1995. Vol. 1241. Issue 2. P. 117-138.

102. Keukens E.A.J., Vrije T., Boom C., Waard P., Plasman H.H., Thiel F., Chupin V., Jongen W.M.F., Kruijff B. Molecular basis of glycoalkaloid induced membrane disruption // Biochim. Biophys. Acta. 1995. Vol. 1240. Issue 2. P. 216228.

103. Kezwon A., Wojciechowski K. Interaction of Quillaja bark saponins with food-relevant proteins // Advances in Colloid and Interface Science. 2014. Vol. 209. P. 185-195.

104. Kim W., Fan Y.Y., Barhoumi R., Smith R., McMurray D.N., Chapkin

R.S.

n-3 Polyunsaturated fatty acids suppress the localization and activation of signaling proteins at immunological synapse in murine CD4+ T Cells by affecting lipid raft formation // J. Immunol. 2008. Vol. 181. No. 9. P. 6236-6243.

105. Kim W., McMurray D.N., Chapkin R.S. Chemotherapeutic properties of n-3 polyunsaturated fatty acids - old concepts and new insights // Immunol. Endocr. Metab. Agents Med. Chem. 2009 Vol. 9. Issue 1. P. 38-44.

106. Kim W., Khan N.A., McMurray D.N., Prior I.A., Wang N., Chapkin R.S. Regulatory activity of polyunsaturated fatty acids in T-cell signaling // Prog. Lipid Res. 2010. Vol. 49. Issue 3. P. 250-261.

107. Kostetsky E.Y., Sanina N.M., Mazeika A.N., Tsybulsky A.V., Vorobyeva N.S., Shnyrov V.L. Tubular immunostimulating complex based on cucumarioside A2-2 and monogalactosyldiacylglycerol from marine macrophytes // J. Nanobiotechnology. 2011. 9:35.

108. Kramer J.K.G., Fouchard R.C., Jenkins K.J. Differences in chromatographic properties of fused silica capillary columns, coated, crosslnked, bonded, or crosslincked and bonded with polyethylene glycols (Carbowax 20M) using complex fatty acid methyl ester mixtures // J. Chromatogr. Sci. 1985. Vol. 23. Issue 2. P. 54-56.

109. Kurganov B.I., Lyubarev A.E., Sanchez-Ruiz J.M., Shnyrov V.L. Analysis of differential scanning calorimetry data for proteins. Criteria of validity of onestep mechanism of irreversible protein denaturation // Biophys. Chem. 1997. Vol. 69. Issue 2-3. P. 125-135.

110. Lakomek N.A., Kaufman J.D., Stahl S.J., Wingfield P.T. HIV-1 envelope protein gp41: an NMR study of dodecyl phosphocholine embedded gp41 reveals a dynamic prefusion intermediate conformation. Structure. 2014. Vol. 22. Issue 9. P. 1311-1321.

111. Lee A.G. Lipid-protein interactions in biological membranes: a structural perspective//Biochim. Biophys. Acta. 2003. Vol. 1612. Issue 1. P. 1-40.

112. Lee A.G. Lipid-protein interactions // Biochem. Soc. Trans. 2011. Vol. 39.No. 3. P. 761-766.

113. Lee A.G., East J.M. The (CA2+-Mg2+)-ATPase and other membrane proteins: what reconstitution tells us about the biological membrane // In: Protein-

Lipid Interactions, ed. A. Watts. Amsterdam: Elsevier Science Publishers. 1993. P. 259-299.

114. Lee LA., Popov A.M., Sanina, N.M., Kostetsky E.Y., Novikova O.D., Reunov A.V., Nagorskaya V.P., Shnyrov V.L. Morphological and immunological characterization of immunostimulating complexes (ISCOMs) based on glycoglycerolipids from Laminaria japónica II Acta Biochim. Pol. 2004. Vol. 51. No. 1. P. 263-272.

115. Leong S.W., Lim T.S., Tye G.J., Ismail A., Aziah I., Choong Y.S. Assembly and stability of Salmonella enterica ser. Typhi TolC protein in POPE and DMPE // J. Biol. Phys. 2014. Vol. 40. Issue 4. P. 387-400.

116. Li X., Roginsky A.B., Ding X.Z., Woodward C., Collin P., Newman R.A., Bell R.H. Jr., Adrian T.E. Review of the apoptosis pathways in pancreatic cancer and the apoptotic affects of the novel sea cucumber compound, frondoside A // Ann. NY Acad. Sci. 2008. Vol. 1138. P. 181-98.

117. Lo C.J., Chiu K.C., Fu M., Chu A., Helton S. Fish oil modulates macrophage P44/P42 mitogen-activated protein kinase activity induced by lipopolysaccharide // JPEN J. Parenter Enteral Nutr. 2000. Vol. 24. No. 3. P. 15963.

118. Lovgren-Bengtsson K., Morein B., Osterhaus A.D. ISCOM technology-based Matrix M™ adjuvant: success in future vaccines relies on formulation// Expert. Rev. Vaccines. 2011. Vol. 10. No. 4. P. 401-403.

119. Mahalka A.K., Kirkegaard T., Jukola L.T.I., Jaáttela M., Kinnunen P.K.J. Human heat shock protein 70 (Hsp70) as a peripheral membrane protein // Biochim. Biophys. Acta. 2014. Vol. 1838. Issue 5. P. 1344-1361.

120. Manly S.P., Matthews K.S., Sturtevant J.M. Thermal denaturation of the core protein of lac repressor// Biochemistry. 1985. Vol. 24. Issue 15. P. 38423846.

121. Marciani D.J., Press J.B., Reynolds R.C., Pathak A.K., Pathak V., Gundy L.E., Farmer J.T., Koratich M.S., May R.D. Development of semisynthetic

triterpenoid saponin derivatives with immune stimulating activity // Vaccine. 2000. Vol. 18. Issue 27. P. 3141-3151.

122. Marsh D. Energetics of hydrophobic matching in lipid-protein interactions // Biophys. J. 2008. Vol. 94. Issue 10. P. 3996-4013.

123. Marsh D., Horvath L.I. Structure, dynamics and composition of the lipid-protein interface. Perspectives from spin-labelling // Biochim. Biophys. Acta. 1998. Vol. 1376. Issue 3. P. 267-296.

124. Marshall J.S., Leal-Berumen I., Nielsen L., Glibetic M., Jordana M. Interleukin (IL)-10 inhibits long-term IL-6 production but not preformed mediator release from rat peritoneal mast cells // J. Clin. Invest. 1996. Vol. 97. Issue 4. P. 1122-1128.

125. Matsufuji M., Nagamatsu Y., Yoshimoto A. Protective Effects of Bacterial Glyceroglycolipid M874B against Cell Death Caused by Exposure to Heat and Hydrogen Peroxide // J. Biosci. Bioeng. 2000. Vol. 89. Issue 4. P. 345349.

126. Menchinskaya E.S., Pislyagin E.A., Kovalchyk S.N., Davydova V.N., Silchenko A.S., Avilov S.A., Kalinin V.I., Aminin D.L. Antitumor activity of cucumarioside A2-2 // Chemotherapy. Vol. 59. Issue 3. 2013. P. 181-191.

127. Morein B., Sundquist B., Hoglund S., Dalsgaard K., Osterhaus A. Iscom, a novel structure for antigenic presentation of membrane proteins from enveloped viruses //Nature. 1984. Vol. 308. No. 5958. P. 457-460.

128. Morimoto T., Nagatsu A., Murakami N., Sakakibara J., Tokuda H., Nishino II., Iwashima A. Anti-tumour-promoting glyceroglycolipids from the green alga Chlorella vulgaris II Phytochemistry. 1995. Vol. 40. Issue 5. P. 14331437.

129. Newport M. The genetics of nontuberculous mycobacterial infection // Expert reviews in molecular medicine. 2003. Vol. 5. Issue 6. P. 1-13.

130. Ohta K., Mizushina Y., Hirata N., Takemura M., Sugawara F., Matsukage A., Yoshida S., Sakaguchi K. Sulfoquinovosyldiacylglycerol, KM043,

a new potent inhibitor of eukaryotie DNA polymerases and HIV-reverse transcriptase type 1 from a marine red alga, Gigartina tenella // Chem. Pharm. Bull. (Tokio). 1998. Vol. 46. No. 4. P. 684-686.

131. Pearse M.J., Drane D. ISCOMATRIX® adjuvant for antigen delivery // Adv. Drug Deliv. Rev. 2005. Vol. 57. Issue 3. P. 465-474.

132. Pedebos C., Pol-Fachin L., Pons R., Teixeira C.V., Verli H. Atomic model and micelle dynamics of QS-21 saponin // Molecules. 2014. Vol. 19. Issue 3. P. 3744-3760.

133. Popot J.-L. Folding membrane proteins in vitro: A table and some comments //Arch. Biochem. Biophys. 2014. doi:10.1016/j.abb.2014.06.029.

134. Powl A.M., East J.M., Lee, A.G. Different effects of lipid chain length on the two sides of a membrane and the lipid annulus of MscL // Biophys. J. 2007. Vol. 93. Issue 1. P.l 13-122.

135. Prabakaran M., He F., Meng T., Madhan S., Yunrui T., Jia Q., Kwang J. Neutralizing epitopes of influenza virus hemagglutinin: target for the development of a universal vaccine against H5N1 lineages // J. Virol. 2010. Vol. 84. No. 22. P. 11822-11830.

136. Provencher S.W., Glockner J. Estimation of globular protein secondary structure from circular dichroism // Biochemistry. 1981. Vol. 20. Issue 1. 1981. P. 33-37.

137. Ramakers J.D., Mensink R.P., Schaart G., Plat J., Arachidonic acid but not eicosapentaenoic acid (EPA) and oleic acid activates NF-jB and elevates ICAM-1 expression in Caco-2 cells // Lipids. 2007. Issue 8. Vol. 42. P. 687-698.

138. Ramon S., Bancos S., Serhan C.N., Phipps R.P. Lipoxin A4 modulates adaptive immunity by decreasing memory B-cell responses via an ALX/FPR2-dependent mechanism //Eur. J. Immunol. 2014. Vol. 44. Issue 2. P. 357-369.

139. Sanchez-Ruiz J.M. Theoretical analysis of Lumry-Eyring models in differential scanning calorimetry // Biophys. J. 1992. Vol. 61. P. 921-935.

140. Sanders M.T., Brown L.E., Deliyannis G., Pearse M.J. ISCOM-based vaccines: the second decade // Immunol. Cell Biol. 2005. Vol. 83. No. 2. P. 119128.

141. Sanina N.M., Goncharova S.N., Kostetsky E.Y. Fatty acid composition of individual polar lipid classes from marine macrophytes // Phytochemistry. 2004. Vol. 65. Issue 6. P. 721-730.

142. Sanina N.M., Goncharova S.N., Kostetsky E.Y. Seasonal change of fatty acid composition and thermotropic behavior of polar lipids marine macrophytes // Phytochemistry. 2008. Vol. 69. Issue 7. P. 1517-1527.

143. Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Thermotropic behavior of major phospholipids from marine invertebrates: changes with warm-acclimation and seasonal acclimatization// Comp. Biochem. Physiol. B. 2002. Vol. 133. Issue 2. P. 143-153.

144. Schmitz G., Ecker J. The opposing effects of n-3 and n-6 fatty acids // Progress in Lipid Research. 2008. Vol. 47. No. 2. P. 147-155.

145. Sedova E.S., Shcherbinin D.N., Migunov A.I., Smirnov Iu.A., Logunov D.Iu., Shmarov M.M., Tsybalova L.M., Naroditskii B.S., Kiselev O.I., Gintsburg A.L. Recombinant Influenza vaccines // Acta Naturae. 2012. Vol. 4. No. 4. P. 17-27.

146. Serhan C.N. Novel lipid mediators and resolution mechanisms in acute inflammation: to resolve or not? // Am. J. Pathol. 2010. Vol. 177. Issue 4. P. 1576-1591.

147. Shaikh S.R, Edidin M. Polyunsaturated fatty acids, membrane organization, T cells, and antigen presentation // Am. J. Clin. Nutr. 2006. Vol. 84. No. 6. P. 1277-1289.

148. Shi Y., Liu C.H., Roberts A.I., Das J., Xu G., Ren G., Zhang Y., Zhang L., Yuan Z.R., Tan H.S.W., Das G., Devadas S. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and T-cell responses: what we do and don't know//Cell Research. 2006. Vol. 16. Issue 2. P.126-133.

149. Sidorova O.V., Khomenko V.A., Portnyagina O. Yu., Likhatskaya G.N., Vakorina T.I., Kim N. Yu, Chistyulin D.K., Solov'eva T.F., Novikova O.D. Mutant OmpF porins of Yersinia pseudotuberculosis with deletions of external loops: Structure-functional and immunochemical properties // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2014. Vol. 445. Issue 2. P. 428-432.

150. Silchenko A.S., Avilov S.A., Antonov A.S., Kalinovsky A.I., Dmitrenok P.S., Kalinin V.I., Stonik V.A., Woodward C., Collin P.D. Glycosides from the sea cucumbers Cucumaria frondosa. III. Structure of frondosides A2-1, A2-2, A2-3 and A2-6, four new minor monosulphated triterpene glycosides // Can. J. Chem. 2005a. Vol. 83. No. 1. P. 21-27.

151. Silchenko A.S., Avilov S.A., Antonov A.S., Kalinovsky A.I., Dmitrenok P.S., Kalinin V.I., Woodward C., Collin P.D. Glycosides from the sea cucumbers Cucumaria frondosa. IV. Structure of frondosides A2-4, A2-7, A2-8, three new minor monosulphated triterpene glycosides // Can. J. Chem. 2005b. Vol. 83. No. 12. P. 2120-2126.

152. Sjolander A., Cox J.C., Barr I.G. ISCOMs: an adjuvant with multiple functions // J. Leukoc. Biol. 1998. Vol. 64. No. 6. P. 713-723.

153. Sjolander A., Drane D., Maraskovsky E., Scheerlinck J.P., Suhrbier A., Tennent J., Pearse M. Immune responses to ISCOM formulations in animal and primate models//Vaccine. 2001. Vol. 19. Issues 17-19. P. 2661-2665.

154. Skene C.D., P. Sutton P. Saponin-adjuvanted particulate vaccines for clinical use // Methods. 2006. Vol. 40. Issue 1. P. 53-59.

155. Song M.K., Roufogalis B.D., Huang T.FI.W. Modulation of diabetic retinopathy pathophysiology by natural medicines through PPAR-y-related pharmacology // Br. J. Pharmacol. 2012. Vol. 165. Issue 1. P. 4-19.

156. Sreerama N., Venyaminov S.Y., Woody R.W. Estimation of protein secondary structure from CD spectra: inclusion of denatured proteins with native protein in the analysis // Anal. Biochem. 2000. Vol. Issue 2. 287. P. 243-251.

157. Stanley A.M., Fleming K.G. The process of folding proteins into membranes: Challenges and progress // Archives of Biochemistry and Biophysics. 2008. Vol. 469. Issue 1. P. 46-66.

158. Steinhauer D.A. Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus //Virology. 1999. Vol. 258. Issue 1. P. 1-20.

159. Sun H.-X., Xie Y., Ye Y.-P. ISCOMs and ISCOMATRIX™ // Vaccine. 2009. Vol. 27. Issue 33. P. 4388-4401.

160. Svetashev V. I., Vaskovsky V.E. A simplified technique for thin-layer microchromatography of lipids // J. Chromatogr. 1972. Vol. 67. No. 2. P. 376-378.

161. Switzer K.C., Fan Y.Y., Wang N., McMurray D. N., Chapkin R.S. Dietary n-3 polyunsaturated fatty acids promote activation-induced cell death in Thl-polarized murine CD4+ T-cells // J. Lipid Res. 2004. Vol. 45. P. 1482-1492.

162. Szanto A., Nagy L. The many faces of PPARgamma: antiinflammatory by any means? // Immunobiology. 2008. Vol. 213. Issue 9-10. P. 789-803.

163. Taki S., Sato T., Ogasawara K., Fukuda T., Sato M., Hida S., Suzuki G., Mitsuyama M., Shin E.H., Kojima S., Taniguchi T., Asano Y. Multistage regulation of Thl-type immune responses by the transcription factor IRF-1 // Immunity. 1997. Vol. 6. Issue 6. P. 673-679.

164. Tilley S.L., Coffman T.M., Koller B. H. Mixed messages modulation of inflammation and immune responses by prostaglandins and tromboxanes // J. Clin Invest. 2001. Vol. 108. Issue 1. P. 15-23.

165. Tillman T.S., Cascio M. Effects of membrane lipids on ion channel structure and function // Cell Biochem. Biophys. 2003. Vol. 38. Issue 2. P. 161-190.

166. Vanden Berghe W., Vermeulen L., Delerive P., De Bosscher K., Staels B., Haegeman G. A paradigm for gene regulation: inflammation, NF-kappaB and PPAR//Adv. Exp. Med. Biol. 2003. Vol. 544. P. 181-196.

167. Van Gent C.M., Roseleur O.J., Van Der Bijl P. The detection of cerebrosides on thin-layer chromatograms with an anthrone spray reagent // J. Chromatogr. 1973. Vol. 85. No. 1. P. 174-176.

168. Vaskovsky V.E., Kostetsku E.Y., Vasendin J.M. Universal reagent for determination of phosphorus in lipids // J. Chromatogr. 1975. Vol. 114. P. 129-141.

169. Vincken J.P., Heng L., de Groot A., Gruppen H. Saponins, classification and occurrence in the plant kingdom // Phytochemistry. 2007. Vol.68. Issue 3. P. 275-297.

170. Wagner H., Horhammer L., Wolf P. Dunnschicht chromatogrraphie von phosphatiden and glicolypyden // Biochem Z. 1961. Vol. 334. No. 1. P. 175184.

171. Wang X., Bogdanov M., Dowhan W. Topology of polytopic membrane protein subdomains is dictated by membrane phospholipid composition // EMBO J. 2002. Vol. 21. No. 21. P. 5673-5681.

172. Wang X., Lin H., Gu Y. Multiple roles of dihomo-y-linolenic acid against proliferation diseases // Lipids in Health and Disease. 2012. 11:25.

173. Wiese A., Reiners J.O., Brandenburg K., Kawahara K., Zahringer U., Seydel U. Planar asymmetric lipid bilayers of glycosphingolipid or lipopolysaccharide on one side and phospholipids on the other: membrane potential, porin function, and complement activation // Biophys. J. 1996. Vol. 70. P. 321-329.

174. Wikman M., Friedman M., Pinitkiatisakul S., Andersson C., Lovgren-Bengtsson K., Lunden A., Stahl S. Achieving directed immunostimulating complexes incorporation//Expert Rev. Vaccines. 2006. Vol. 5. No. 3. P. 395-403.

175. Wikstrom M., Xie J., Bogdanov M. Monoglucosyldiacylglycerol, a foreign lipid, can substitute for phosphatidylethanolamine in essential membrane-associated functions in Escherichia coli II J. Biol. Chem. 2004. Vol. 279. No. 11. P. 10484-10493.

176. Wu E.L., Fleming P.J., Yeom M.S., Widmalm G., Klauda J.B., Fleming K.G., Im W. E. Coli Outer Membrane and Interactions with OmpLA // Biophys. J. 2014. Vol. 106. Issue 11. P. 2493-2502.

177. Wu J., Long L., Song Y., Zhang Z., Li Q., Huang J., Xiao Z. A new unsaturated glycoglycerolipid from a cultured marine dinoflagellate Amphidinium carterae // Chem. Pharm. Bull. 2005. Vol. 53. No. 3. P. 330-332.

178. Yaqoob P. Fatty acids as gatekeepers of immune cell regulation // Trends in immunology. 2003. Vol. 24. Issue 12. P. 639-645.

179. Yates C.M., Calder P.C., Rainger G.E. Pharmacology and therapeutics of omega-3 polyunsaturated fatty acids in chronic inflammatory disease // Pharmacol. Ther. 2014. Vol. 141. Issue 3. P. 272-282.

180. Zhang P., Smith R., Chapkin R.S., McMurray D.N. Dietary (n-3) polyunsaturated fatty acids modulate murine Thl/Th2 balance toward the Th2 pole by suppression of Thl development // J. Nutr. 2005. Vol. 135. No. 7. P. 17451751.