Выделение и характеристика цитокинин-связывающих и АБК-связывающих белков Synechocystis sp. PCC 6803 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.05, кандидат биологических наук Шевченко, Галина Васильевна

• Шевченко, Галина Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шевченко, Галина Васильевна

ВСТУПЛЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Роль цитокининов и АБК в жизни растений.

1.1.1. Цитокинины.

Цитокинин-связывающие белки.

Цитокинин-связывающий белок 67.

1.1.2. Абсцизовая кислота.

Механизм восприятия и передачи сигнала АБК.

Рецепторы АБК.

АБК-связывающие белки.

1.2. Регуляция биогенеза хлоропластов цитокинином и АБК.

Цитокинин.

Абсцизовая кислота.

1.3. Гормоны цианобактерий.

2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Объект исследований.

2.2. Синтез аффинных матриц.

2.2.1. Синтез зеатин-сефарозы.

2.2.2. Синтез АБК-сефарозы.

2.2.3. Синтез аффинной матрицы АТцСБ70-сефарозы.

2.2.4. Синтез аффинных матриц с иммобилизованными АТ к зеатину и АТ к АБК для выделения АТаи.

2.2.5. Синтез глютатион-сефарозы.

2.3. Синтез конъюгатов гормонов с белком.

2.3.1. Синтез конъюгатов зеатинрибозида с БСА или овальбумином.

2.3.2. Синтез конъюгатов АБК с БСА или овальбумином.

2.4. Получение АТаи.

2.4.1. Получение иммунной сыворотки против гормонов.

2.4.2. Определение специфичности антисывороток против зеатина и АБК.

2.4.3. Выделение АТ к зеатину и АТ к АБК.

2.4.4. Получение АТа.и.

2.4.5. Выделение АТаи с помощью хроматографии на сефарозе с иммобилизованными АТ к гормону.

2.5. Выделение гормон-связывающих белков БупесЬосузИу Бр. РСС 6803.

2.5.1. Выделение водорастворимой фракции белков из лизата клеток

БупесЬосузШ.

2.5.2. Гидрофобная хроматография на фенил-сефарозе.

2.5.3. Аффинная хроматография гормон-связывающих белков на сефарозе с иммобилизованным гормоном.

2.5.4. Фракционирование ГСБ с помощью глютатион-сефарозы.

2.5.5. Идентификация ГСБ методом твердофазного ИФА.

2.5.6. Определение специфичности связывания ГСБ с гормонами в конкурентной системе вытеснения.

2.6. Электрофорез белков в ДДС-Ка-ПААГ.

2.7. Электроперенос белков.

2.8. Иммуноблотинг.

2.9. Реакция транскрипции in vitro.

2.10. Изоэлектрическое фокусирование препарата ЦСБ в нативных условиях.

2.11. Подготовка препаратов для масс спектрометрии.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Выделение и определение биохимических и функциональных характеристик цитокинин-связывающих белков Synechocystis.

3.1.1 .Гидрофобная хроматография.•.

3.1.2. Аффинная хроматография на зеатин-сефарозе.

3.1.3. Иммуноаффинная хроматография на мкАТцсб 7<гсеФаРозе.

3.1.4. Очистка и концентрирование препарата цитокинин-связывающих белков с помощью изоэлектрического фокусирования в растворе в нативных условиях.

3.1.5. Определение специфичности связывания цитокинин-связывающего белка с гормонами в системе вытеснения цитокинин-связывающего белка из комплекса с

АТаи к зеатину.

3.1.6.Транскрипционная активность цитокинин-связывающего белка БупескосузШ.

3.1.7. Глютатион-связывающие свойства цитокинин-связывающего белка вупесНосувИз.

3.1.8. Идентификация белков в препаратах цитокинин-связывающего белка.

3.2. Выделение и определение биохимических и функциональных характеристик АБК-связывающих белков ЗупескосузИз.

3.2.1.Гидрофобная хроматография на фенил-сефарозе.

3.2.2. Аффинная хроматография на АБК-сефарозе.

3.2.3. Определение специфичности связывания АБК-связывающих белков с гормонами в системе вытеснения АБК-связывающих белков из комплекса с АТа., к АБК.

3.2.4.Транскрипционная активность АБК-связывающих белков 8упескосу&й5.

3.2.5. Глютатион-связывающие свойства АБК-связывающих белков ЗупесУюсуяНя

ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Выделение и характеристика цитокинин-связывающих и АБК-связывающих белков Synechocystis sp. PCC 6803»

Актуальность темы. Все важнейшие процессы жизненного цикла растительного организма протекают под контролем фитогормонов. Кроме того, фитогормоны играют важную роль в реакции растения на внешние воздействия, позволяя, координировать свой рост и развитие в соответствии с изменениями условий внешней ^ среды, участвуют в формировании устойчивости растения к стрессам. Поэтому, со времени открытия фитогормонов, изучение гормональной системы вызывает неослабевающий интерес исследователей физиологии, биохимии и молекулярной биологии растений. Изучение гормональной системы регуляции проводится по нескольким направлениям, таким как исследование биосинтеза, метаболизма, транспорта, восприятия, передачи и ответа на гормональный сигнал. К настоящему моменту получено большое количество информации о механизме действия гормонов, некоторые процессы изучены достаточно хорошо, о других имеется лишь примерное представление. Совершенно не изученным вопросом является появление и эволюция гормональной системы.

Хлоропласты являются одной из главных мишеней действия фитогормонов в клетке растения. Хорошо изучена активация цитокинином биогенеза хлоропластов, включая их структурную и биохимическую дифференциацию (Хохлова, 1977; Кулаева, 1973; Кизпе1зоу et а1., 1994; Саегс, Уепёг^, 2006), и ингибирование этих процессов абсцизовой кислотой (АБК) (Кравяж и др., 1977; Хохлова и др., 1978). В хлоропластах присутствует полный спектр физиологически активных цитокининов (Вепкоуа е/ а/., 1999). Кроме того, показана активация цитокинином синтеза РНК в хлоропластах (Кошзаих еГ а\., 1976; Микулович и др., 1988; Зубо и др., 2005), получены данные в пользу посттранскрипционного влияния цитокининов на экспрессию хлоропластных генов (Кивп^БОУ е1 а!., 1994). Показано, что цитокинин и АБК могут активировать транскрипцию ряда хлоропластных генов (Зубо и др. 2005). Обнаружены хлоропластные цитокинин-связывающие белки, участвующие в гормон-зависимой регуляции транскрипции (Romanko et al., 1986; Kulaeva et al., 2000; Люкевич и др., 2002) и АБК-связывающие белки (Shen et al., 2006).

В литературе господствует представление о том, что хлоропласты произошли в результате эндоцитоза древних фотосинтезирующих цианобактерий в-эукариогическую клетку (Margulis, 1970; Douglas, Turner, 1991; Кулаев, 1998). В связи с этим, большой интерес представляет вопрос о том, могли ли в процессе эволюции цианобактерии привнести цитокинины и АБК в клетку и определить их участие в регуляторной системе хлоропластов.

Способность цианобактерий выделять активирующие рост растений вещества была отмечена давно (Metting et al., 1988), позднее была показана цитокининовая активность их лизата на семядолях огурца и сои (Stirk, van Staden, 1997). В цианобактериях идентифицированы эндогенные изопентиниладенин, транс-зеатин, а затем и другие цитокинины (Stirk et al., 1999; Hussain et al., 2010; Hussain, Hasnain, 2011). Кроме того, показано участие транс-зеатина на синтез РНК-полимеразы в транскрипционной системе цианобактерий in vitro. При этом добавление транс-зеатина в среду для определения транскрипционной активности, представляющей из себя лизат клеток Synechocystis sp. РСС 6803 и содержащей о

ДНК и РНК-полимеразу, специфично и при биологических концентрациях (10" М) повышало активность синтеза РНК. Кроме того, выделенный ранее из хлоропластов листьев ячменя цитокинин-связывающий белок, участвующий в цитокинин-зависимой регуляции транскрипции в хлоропластах растений и не участвующий в гормон-зависимой активации транскрипции в ядрах, существенно усиливал реакцию на транс-зеатин в транскрипционной системе цианобактерий (Селиванкина и др., 2006). Эти данные говорят о том, что у цианобактерий существует регуляторная система с участием цитокининов, которую они могли привнести в растительную клетку. Однако очевидно, что элементы этой системы могли притерпеть значительные изменения.

До настоящего времени не было работ, посвященных поиску цитокинин-связывающих (ЦСБ) и АБК-связывающих (АСБ) белков цианобактерий, которые могли бы быть молекулярными мишенями этих фитогормонов и участвовать в их влиянии на метаболизм клеток, хотя актуальность такой постановки вопроса очевидна с точки зрения анализа роли цианобактерий в эволюции гормональной системы растений.

Цели и задачи исследования. Целью данной работы являлось обнаружение и изучение цитокинин-связывающих (ЦСБ) и АБК-связывающих (АСБ) белков цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803 для. выяснения возможной роли цианобактерий в эволюции гормональной системы растений. В соответствии с поставленной целью задачами работы было:

1) Выделить цитокинин- и АБК-связывающие белки из Synechocystis;

2) Изучить свойства выделенных белков;

3) Изучить возможность участия выделенных белков в регуляции транскрипции in vitro в лизате цианобактерий.

Научная новизна работы. Впервые показано присутствие цитокинин-связывающего белка (ЦСБ 67) в клетках цианобактерий Synechocystis sp. РСС 6803. Охарактеризовано его взаимодействие с природным цитокинином транс-зеатином. Установлена активация в присутствии га/>а«озеатина и ЦСБ 67 тотальной транскрипции in vitro в лизате цианобактерий.

Впервые установлено присутствие в клетках цианобактерий Synechocystis sp. РСС 6803 АБК-связывающих белков (23, 50, 60 и 67 кДа) и гомолога АБК-связывающего белка растений Cip2.1, который кодируется АБК-регулируемым геном. Установлена активация в присутствии АБК-связывающего белка транскрипции in vitro в лизате цианобактерий.

Полученные результаты указывают на возможность присутствия у цианобактерий молекулярных мишеней действия гормонов растений цитокининов и АБК. Это представляет интерес с точки зрения фундаментальной проблемы' -эволюции становления гормональной системы растений. Полученные результаты указывают на возможность привнесения в растительную клетку регуляторных систем цитокинина и АБК с древними цианобактериями - предшественниками, хлоропластов.

Полученная информация вносит вклад в фундаментальную проблему физиологии и биохимии растений - происхождение гормональной системы растений в процессе эволюции. Полученные результаты могут быть использованы при подготовке лекционного материала по физиологии, биохимии и эволюции растений.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на конференции «Физиология растений - фундаментальная основа современной фито биотехнологии» (Ростов-на-Дону. 2006), Международной конференции «Современная физиология растений: от молекул до экосистем» (Сыктывкар, 2007), III Всероссийской конференции-школе «Высокоактивные интермедиаты химических реакций и биологических процессов» (Астрахань-Москва, 2007), Международной конференции «Физико-химические основы структурно-функцональной организации растений» (Екатеринбург, 2008), Международной конференции «Физико-химические механизмы адаптации растений к антропогенному загрязнению в условиях Крайнего Севера» (Апатиты, 2009), XVI Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов - 2009» (Москва, 2009), XVII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов - 2010» (Москва, 2010) и на Всероссийской (с международным участием) конференции молодых ученых, посвященной 90-летию Уральского государственного университета им. A.M. Горького «Биология будущего: традиции и инновации» (Екатеринбург, 2010).

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Шевченко, Галина Васильевна

выводы

1. Из цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803 выделен двумя независимыми методами (аффинная хроматография на зеатин-сефарозе и иммуноаффинная хроматография с использованием моноклональных AT к ЦСБ 70 кукурузы) цитокинин-связывающий белок 67 кДа (ЦСБ 67).

2. Транс-зеашн конкурировал с антиидиотипическими антителами к транс-зеатину за связывание с ЦСБ 67 что указывает на присутствие в белке сайта связывания транс-зеатина. Другие гормоны растений не конкурировали с антиидиотипическими антителами к транс-зеатину за связывание с белком. Это указывает на высокое сродство ЦСБ к транс-зсптииу и отсутствие связывания с другими фитогормонами.

3. ЦСБ и транс-зеатин активировали тотальную транскрипцию in vitro в лизате Synechocystis sp. РСС 6803, что указывает на возможное участие ЦСБ и транс-зеатина в регуляторных системах цианобактерий.

4. При всех использованных методах выделения и очистки ЦСБ 67 в, полученных препаратах присутствовал шаперонин 60, который не обладает цитокинин-связывающими свойствами.

5. Показано присутствие в Synechocystis sp. РСС 6803 АБК-связывающих белков 23, 50, 60 и 67 кДа и гомолога АБК-связыващего белка растений Cip2.1, участвующего в антистрессовых реакциях растений.

6. Установлена активация АБК-связывающими белками и АБК тотальной транскрипции in vitro в лизате Synechocystis sp. РСС 6803.

7. Совокупность полученных результатов указывает на возможность присутствия у цианобактерий молекулярных мишеней действия цитокининов и АБК, что представляет интерес с эволюционной точки зрения.

Автор выражает благодарность научному руководителю к.б.н. Каравайко Наталье Николаевне за чуткое руководство, всестороннюю поддержку, и непосредственное участие в работе.

Автор благодарит д.б.н. профессора Кулаеву Ольгу Николаевну за внимательный анализ работы, помощь и поддержку в процессе ее подготовки.

Автор выражает благодарность д.б.н. профессору Кузнецову Виктору Васильевичу за помощь и поддержку на всех этапах работы.

Автор благодарит д.б.н. Новикову Галину Викторовну и д.б.н. Мошкова Игоря Евгеньевича за ценные советы и поддержку в процессе подготовки работы.

Автор благодарит д.б.н. профессора Лося Дмитрия Анатольевича за помощь в процессе работы.

Автор выражает благодарность к.б.н. Селиванкиной Светлане Юрьевне, к.б.н. Пожидаевой Елене Станиславовне, к.б.н. Кудряковой Наталье Васильевне, Зубковой Наталье Константиновне, к.б.н. Куприяновой Елене Владимировне за постоянную помощь, важные советы и участие в работе.

Автор благодарит к.б.н. Бровко Федора Александровича и коллег из Института биоорганической химии РАН, сотрудников лаборатории протеомики ИФХМ РАМН за участие в работе.

Большое спасибо Демиденко Артему и Белозеровой Наталье за советы и поддержку, всем сотрудникам лаборатории экспрессии генома растений ИФР РАН за помощь в работе, идеи, обсуждение, советы и хорошее отношеие, остальным сотрудникам ИФР за всегда доброе отношение.

Отдельная благодарность родным и близким за веру, помощь и поддержку во всех отошениях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе впервые выделены и охарактеризованы цитокинин-связывающие и АБК-связывающие белки из цианобактерии Synechocystis sp. РСС 6803, древние предки которой, как предполагают, обеспечили появление хлоропластов в растительной клетке. Для выделения гормон-связывающих белков из цианобактерий были использованы методы, применяемые ранее для растений.

Идентификация наличия и характеристики ЦСБ и АСБ проводились с помощью АТаи, которые, как известно, являются AT против лиганд-связывающих сайтов белков и широко используются для изучения взаимодействия гормонов с их рецепторами.

В работе проводили выделение ЦСБ с использованием аффинных матриксов двух типов. Один матрикс был получен путем иммобилизации зеатина на сефарозу 4В. Второй матрикс был получен путем иммобилизации на сефарозу 4В моноклональных AT, полученных к ЦСБ кукурузы. Полученные результаты показывают, что с помощью аффинной и иммуноаффинной хроматографии, то есть двуми принципиально различными способами, был выделен ЦСБ 67 Synechocystis. Было показано, что цитокинин-связывающий белок не способен образовывать комплекс с другими фитогормонами и неактивным предшественником цитокининов - аденином. Это указывает на высокую специфичность взаимодействия его специфического сайта связывания с транс-зеатином. Как показали дальнейшие исследования, этот белок активировал тотальную транскрипцию in vitro в лизате Synechocystis sp. РСС 6803 и хлоропластов листьев ячменя, и у него было показано наличие глютатион-связывающих сайтов, что может быть важным для проявления его функциональных свойств. Выделенные ранее ЦСБ хлоропластов ряда растений (ячмень, рис, кукуруза, арабидопсис) имели сходные свойства. Молекулярная масса их варьирует в диапазоне 57-70 кДа, выделены они были из растворимой фракции и активировали транскрипцию in vitro, а ЦСБ хлоропластов ячменя участвовал в цитокинин-зависимой транскрипции в лизате клеток Synechocystis. Кроме того, ЦСБ 67 Synechocystis взаимодействовал с мкАТ к ЦСБ 70, которые выявляют ЦСБ хлоропластов кукурузы. Это позволяет думать, что ЦСБ 67 Synechocystis и ЦСБ хлоропластов растений принадлежат к древнему консервативному семейству белков, участвующих в регуляторных системах и способных узнавать гормон для проявления активации транскрипции.

При всех использованных методах выделения и очистки, наряду с ЦСБ 67 в полученных препаратах присутствовал шаперонин 60, который, как было показано, не обладает цитокинин-связывающими свойствами. Его возможное влияние на функции ЦСБ 67 должно быть исследовано в дальнейшем.

С помощью метода аффинной хроматографии на АБК-сефарозе нами был выделен ряд АБК-связывающих белков. Фракция этих АСБ была специфична к абсцизовой кислоте и не взаимодействовала с другими фитогормонами и, как и ЦСБ Synechocystis sp. РСС 6803, активировала тотальную транскрипцию in vitro в лизате Synechocystis sp. РСС 6803. Белки АБК-связывающей фракции имели сайты связывания с глютатионом. В этой фракции с помощью АТаи к АБК были выявлены несколько полипептидов, а с помощью AT к растительному АБК-связывающему белку CIP2.1 детектированыны два полипептида. Изучение этих полипептидов требует дальнейших исследований.

Суммируя полученные результаты, можно сказать, что в цианобактериях имеются гормон-связывающие белки. Это важно для понимания эволюции гормональной системы хлоропластов растений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шевченко, Галина Васильевна, 2011 год

1. Аберкромби Д., Алленмарк С., Араме С. Аффинная хроматография //М. Издательство «Мир», 1988. С. 278.

2. Алехина Н.Д., Балнокин Ю.В., Гавриленко В.Ф., Жигалова Т.В., Мейчик Н.Р.,

3. Носов A.M., Полесская О.Г., Харитоношвили Е.В., Чуб В.В. // Физиологиярастений: Учебник для студентов вузов. М. Издательский центр «Академия», 2005. С. 422.

4. Арендарчук В.В. Влияние /*-ИУК на некоторые синезеленые водоросли // Гидробиол. журн. 1974. Т. 10. С. 64-69.

5. Гладун A.A., Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В. Выделение и исследование функций цитокинин-связывающих белков из культуры ткани табака // Физиология и биохимия культурных растений. 1986. Т. 18 С. 333-337.

6. Гладун A.A., Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В. Выделение и исследование функций цитокинин-связывающих белков из культуры ткани табака // Физиология и биохимия культурных растений. 1986. Т. 18 С. 333-337.

7. Зубо Я. О., Селиванкина С.Ю., Ямбуренко М.Б., Зубкова Н.К., Кулаева О.Н., Кузнецов В.В. Цитокинины активируют транскрипцию хлоропластных генов // Доклады Академии Наук. 2005. Т. 400. С. 396-399.

8. Каравайко H. Н., Мошков И. Е., Селиванкина С. Ю., Новикова Г. В., Кулаева О. Н. Выделение при помощи антиидиотипических антител белка со свойствами рецептора цитокининов // Докл. АН СССР. 1990. Т. 310. С. 765767.

9. Кравяж К., Караеайко H.H., Коф Э.М., Кулаева О.Н. Взаимодействие абсцизовой кислоты и цитокинина в регуляции роста и позеленения семядолей тыквы // Физиология растений. 1977. - Т. 24. - Вып. 1. С. 160166.

10. Кузнецов Вл. В., Дмитриева Г.А. Физиология растений // Москва, «Высшая школа», 2005. С. 736.

11. Кукина И.М., Микулович Т.П., Кулаева О.Н. Взаимодействие абсцизовой кислоты и цитокинина в регуляции синтеза пластидных и цитоплазматических рибосомальных РНК в изолированных семядолях тыквы//Физиология растений. 1985. Т. 32. Вып. 2. С. 298-307.

12. Кунаев И. С. Происхождение эукариотических клеток // Соросовский Образовательный Журнал, 1998, № 5, с. 17-22.

13. Кулаева О.Н. Цитокинины: их структура и функция. М.: Наука, 1973. С. 264.

14. Кулаева О.Н., Прокопцева О.С. Новейшие достижения в изучении механизма действия фитогормонов // Биохимия. 2004. Т. 69. С. 293-310.

15. Курсанов А.Л., Кулаева О.Н., Свешникова H.H., Попова Э.А., Болякина Ю.П., Клячко Н.Л., Воробьева И.П. Восстановление клеточных структур и обмена веществ в желтых листьях под действием 6-бензиламинопурина // Физиология растений. 1964. Т. 11. С. 838. '

16. Люкевич Т.В., Каравайко H.H., Кулаева О.Н., Кузнецов В.В., Селиванкина С.Ю. Поиск белков, участвующих в цитокинин-зависимой регуляции транскрипции хлоропластного генома // Вестник Башкирского Университета, № 2 (I), (2001)/ С.144-147.

17. Микулович Т. П., Кукина И. М. О влиянии цитокинина, фузикокцина и калия на накопление хлорофилла и каротиноидов в изолированных семядолях тыквы // Физиология растений. 1988. - Т. 32. - С. 143.

18. Микулович Т.П., Хохлова В.А., Кулаева О.Н., Свешникова И.Н. Влияние 6-бензиламинопурина на изолированные семядоли тыквы // Физиология растений. 1971. Т. 18. С. 98.

19. Романко Е.Г., Селиванкина С.Ю., Овчаров А.К., Кулаева О.Н. Активация цитокинин-рецепторным комплексом из листьев ячменя синтеза РНК in vitro

20. Докл. АН СССР, 1980, Т. 255, С. 1009-1011.

21. CipeHKO Л. А. , Богданова Т. Л. Стимулящя розвитку Anabaena Variabilis в культур! за помогаю ф1зюлдопчно активнних речовин // Bien. Кщв. Ун-ту. 1962. Вип. 2. № 5. С.7-9.

22. Селиванкина С. Ю., Каравайко H. И., Черепнева Г. H., Прищепова А. Е., Кузнецов В. В., Кулаева О. Н. Биологически активный зеатин-связывающий белок из хлоропластов листьев ячменя // Докл. АН. 1997. Т. 36. С.830-832.

23. Селиванкина С.Ю., Зубкова Н.К., Куприянова Е.В., Люкевич Т.В., Кузнег\ов В.В., Лось Д.А., Кулаева О.Н. Реакция на цитокинин у цианобактерий // Физиология растений. 2006. Т. 53. С. 851-856.

24. Селиванкина С.Ю., Каравайко H.H., Земляченко Я.В., Маслова Г.Г., Кулаева О.Н. Регуляция транскрипции рецептором цитокинина в системах in vitro // Физиология растений. 2001. Т. 48. С. 434-440.

25. Ситник K.M., Мусатенко Л.1., Васюк В.А., Ведетчева H.H., Генералова В.М., Мартин Г.Г., Нестерова А.Н. Гормональний комплекс рослин i гриб1в. Кшв: Академперюдика, 2003. С. 186.

26. Федина Ф. Б., Бурханова Э. А., Харченко В. И. Функциональная активность цитокинин-связывающих ядерных белков из листьев ячменя с помощью аффинной хроматографии // Физиология растений, 1987, Т. 34, №2, С. 324327.

27. Херрман Р. Г. Биогенез и Динамика Структуры Фотосинтетических: Мембран: Результат Сложной Эволюционной Загадки // XIII Гродневские Чтения. Минск. 2007.

28. Хохлова В. А. Действие цитокинина на формирование пластид на свету и в темноте в изолированных семядолях тыквы // Физиология растений. 1977. Т. 24. С. 1186.

29. Ъв. Хохлова В. А. Действие цитокинина на формирование пластид на свету и н темноте в изолированных семядолях тыквы // Физиология растений. 1977. Т. 24. С. 1186.

30. Хохлова В. А., Свешникова И. Н., Кулаева О. Н. Влияние фитогормонов на. формирование структуры хлоропластов в изолированных семядолях тыквы // Цитология. 1971. Т. 13. С. 1074.

31. Хохлова В.А., Каравайко H.H., Подергина Т.А., Кулаева О.Н. Антагонизм в действии абсцизовой кислоты и цитокинина на структурную и биохимическую дифференциацию хлоропластов в изолированных семядолях тыквы II Цитология. 1978. Т. XX. Вып.9. С. 1033-1038.

32. Хохлова В.А., Каравайко H.H., Подергина Т.А., Кулаева О.Н. Антагонизм в действии абсцизовой кислоты и цитокинина на структурную и биохимическую дифференциацию хлоропластов в изолированных семядолях тыквы//Цитология. 1978. Т. XX. Вып.9. С. 1033-1038.

33. Шепеляковская А.О., Теплова И.Р., Веселое Д.С., Бурханова Э.А., Бозиее Х.М., Ламан А.Г., Васильева B.C. Кудоярова Г.Р., Холл М.А., Бровко Ф.А.,

34. Кулаева О.Н. Цитокинин-связывающий белок 70 кД преимущественно локализован в меристеме корня // Физиология растений. 2002. Т. 49. С. 113120.41 .Шпаков А. О. Пептидные аутоиндукторы бактерий // Микробиология, том 78, № 3, май-июнь 2009, С. 291-303.

35. Adachi R., Fakayo Y. The thecal structure of a marine toxic dinoflagellate Gambierdicus toxicus gen. et sp. nov. Collected in a ciguatera endemic area // Bull. Jap. Soc. Sci. Fish. 1979. V. 45. № 1. P. 67-71.

36. AA.Anantharaman V., Aravind L. The CHASE domain: a predicted ligand-binding module in plant cytokinin receptors and other eukaryotic and bacterial receptors // Trends Biochem. Sci. 2001. V. 26 P. 579-582.

37. Auger H. Les hormones des algues. Etat actuel des connaissances // Botanica Marina. 1976. V. 19. № 4. P. 245-254.

38. Bartholomew D.M., Bartley G.E. and Scolnik P.A. Abscisic Acid Control of rbcS and cab Transcription in Tomato Leaves // Plant Physiol. 1991. V. 96. P. 291296.

39. Benkova E., Witters E., Van Dongen W., Kolar J., Motyka V., Brzobohaty В., Van Onckelen H.A., Machackova I. Cytokinins in tobacco and wheat chloroplasts: Occurrence and changes due to light/dark treatment // Plant Physiol. 1999. V. 121. P. 245-251.

40. Brault M., Caiveau O., Pedron J., Maldiney R., Sotta B., Miginiac E. Detection of membrane-bound cytokinin-binding proteins in Arabidopsis cells // Eur. J. Biochem. 1999. V. 260. P. 512-519.

41. Buchanan-Wollaston V. The molecular biology of leaf senescence // J. Exp. Bot. 1997. V.48.P. 181-199.

42. Caers M. and Vendrig J. C. Benzyladenine effects on the development of the photosynthetic apparatus in Zea mays: Studies on photosynthetic activity, enzymes and (etio)chloroplast ultrastructure // Physiologia Plantarum. 2006. -V. 66(4). P. 685-691.

43. Cato A.T., Nestl A., MinkS. Rapid actions of steroid receptors in cellular signaling pathways // Sci. STKE. 2002. V. 138. P. 9.

44. Chen C., Melitz D., Petschow B., Eckert R.L. Isolation of cytokinin-binding protein from plant tissues by affinity chromatiography // Eur. J. Biochem. 1980. V. 108. P. 379-387.

45. Evans L.V., Trewavas A.J. Is Algal Development Controlled by Plant Growth Substances // J. Phycol. 1991. V. 27. P. 322-326.

46. Fan L., Zheng S. and WangX. Antisense suppression of phospholipase Da retards abscisic acid- and ethylene-promoted senescence of postharvest Arabidopsis leaves // Plant Cel. 1997. V. 9. P.2183-2196.

47. Farinneau N., Roussaux M. J. Influence de la 6-benzylaminopurine sur la différenciation plastidiela dans les cotyledons de concombre // Physiol. Plantarum. 1975. V. 33. P. 194.

48. Hare P., Staden J. The molecular basis of cytokinin action // Plant Growth Regul. 1997. V. 23. P. 41-78.

49. Hetherington A. Guard cell signaling // Cell. 2001. V. 107. P. 711-714.

50. Hoffmann P., Rathsack R. Zur cytokinin-wirkung dei blauagen // Biochem. und Physiol. Piianz. 1970. V.6. № 1. S. 95-96.

51. Inoue T., Higuchi M., Hashimoto Y., Seki M., Kobayashi M., Kato T., Tabata S., Shinozaki K., Kakimoto T. Identification of CRE1 as a cytokinin receptor from Arabidopsis // Nature. 2001. V. 409. P. 1060-1063.

52. Inoue T., Higuchi M., Hashimoto Y., Sekl M., Kobayashi M., Kato T., Tabata S., Shinozaki K., Kakimoto T. Identification of CRE1 as a Cytokinin Receptor from ' Arabidopsis //Nature. 2001. V. 409. P. 1060-1063.

53. M.Isabel B., Dean C. The timing of development transitions in plants // Cell. 2006. V. 125. P. 655-664.

54. Jayabaskaran C. Isolation and characterization of a cytokinin-binding protein from cucumber cotyledons // Plant Growth Regulation. 1990. V. 9. P. 9-17.

55. Jayabaskaran C. Isolation of a cytokinin-binding protein from Cucumis sativus cotyledons //Proc. Indian Acad. Sci. 1988. V. 98. P. 269-276.

56. Kakimoto T. CKI1, a histidin kinase homolog implicated in cytokinin signal transduction// Science. 1996. V. 274. P. 982-985.

57. Kulaeva O.N., Karavaiko N.N., Selivankina S.Yu., Moshkov I.E., Novikova G.V., Zemlyachenko Y. V., Shipilova S. V., Orudgev E.M. Cytokinin signaling systems // Plant Growth Regul. 1996 V. 18. P. 29-37.

58. Kulaeva O.N., Prokoptseva O.S. Recent advances in the study of mechanisms of action of phytohormones // Biochemistry. 2004. V. 69. P. 233-247.

59. Kulaeva O.N., Zagranichnaya T.K., Brovko F.A., Karavaiko N.N., Selivankina S.Yu., Zemlyachenko Y.V., Hall M., Lipkin V.M., Boziev KM. A new family of cytokinin receptors from Cereales II FEBS Lett. 1998. V. 423. pp. 239-242.

60. Kusnetsov V., Landsberger M., Meurer J., Oelmuller R. The assembly of the CAAT-box binding complex at a photosynthesis gene promoter is regulated by light, cytokinin, and the stage of the plastids // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274(50).-P. 36009-36014.

61. Kusnetsov V.V., Oelmuller R., Sarwat./., Porfirova S.A., Cherepneva G.N., Herrmann R.G., Kulaeva O.N. Cytokinins, abscisic acid in Lupinus luteus cotyledons without notable effect on stady-state mRNA levels // Planta. 1994. V. 194. P. 318-327.

62. Lange M.J.P., Lange T. Gibberellin biosynthesis and the regulation of plant development // Plant Biol. 2006. V. 3. P. 281-290.

63. Li L., Kim B.G., Cheong Y.H., Pandey G.K. and Luan S.A. Ca2+ signaling pathway regulates a K+ channel for low-K response in Arabidopsis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V. 103. P. 13625-12630.

64. Longo G. P. M., Bracale M., Rossi G., Longo C. P.Benziladenin Induced the Apperance of LHCP-mRNA and the Relevant Protein in Dark-grown Excised Watermelon Cotyledons If Plant Mol. Biol. 1990. V. 14. P. 569-573.

65. Longo G. P., Olginati M, Rossi G., Valente M., Longo C. P. Effect of brief treatments with benzyladenine on growth and development of watermelon cotyledons // Plant Cell and Environment. 1978. V. 1. P. 39-43.

66. Macknight R., Bancroft L., Page T. et al. FCA, a gene controlling flowering time in Arabidopsis, encodes a protein containing RNA-binding domains // Cell. 1997. V. 99. P. 737-745.

67. Metting, D. Micro-algae in agriculture // Micro-Algal Biotechnology. 1988. Cambridge University Press, Cambridge, pp. 288-304.

68. Metting, D., Ray burn, W. R. & Reynaud, P. A Algae and agriculture. // Algae and Human Affairs. 1988. Cambridge University Press, Cambridge, P. 33570.

69. Mitsui S., Sugiura M. A cDNA encoding the 57 kDa subunit of a cytokinin-binding protein complex from tobacco: the subunit has high homology to S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase // Plant Cell Physiol. 1993b. V. 34. P. 10891096.

70. Momotani E., Tsujl H. Isolation and characterization of cytokinin-binding protein from the water soluble fraction of tobacco leaves I I Plant Cell Physiol. 1992. V. 33. P. 407-412.

71. Moore F.H. A cytokinin binding proteins from wheat germ // Plant Physiol. 1979. V. 64. P. 594-599.

72. Mori I.C. CDPKs CPK6 and CPK3 function in ABA regulation of guard cell S-type anion- and Ca -permeable channels and stomatal closure // PLoS Bio. 2006. V. 4. P. 327.

73. Miiller A.H., Hansson M. The Barley Magnesium Chelatase 150-kDa Subunit Is Not an Abscisic Acid Receptor // Plant Physiol. 2009. V.150. P. 157166

74. Nagata R., Kawachchi E., Hashimoto Y., Shudo K. Cytokinin-specific binding protein in ethyolated mung bean seedlings // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1993. V. 191. P. 543-549.

75. Nogue F., Mornet R., Laloue M. Specific photoaffinity of a thylakoid membrane protein with azido-cytokinin agonist // Plant Growth Regul. 1995. V. 18. P. 51-58.

76. Ohya Y, Anraku Y A galactose-dependent cmdl mutant of Saccharomyces cerevisiae: involvement of yeast calmodulin in nuclear division. // Curr Genet. (1989)V. 15. P.113-120.

77. Ohya Y, Kawasaki H, Suzuki K, Londesborough J, Anraku Y Two yeast genes encoding calmodulin-dependent protein kinases: isolation, sequencing, andbacterial expressions of CMK1 and CMK2.// J Biol Chem (1991). V. 266. P. 12784-12794.

78. Osakabe Y., Maruyama K., Seki M, Satou M., Shinozaki K., Yamaguchi-Shinozaki K. Leucine-Rich Repeat Receptor-Like Kinase 1 Is a Key Membrane-Bound Regulator of Abscisic Acid Early Signaling in Arabidopsis // Plant Cell. 2005. V. 17. P. 1105-1119.

79. Paul A.L., Sehnke P.C., Ferl R.J. (2005) Isoform-specific subcellular localization among 14-3-3 proteins in Arabidopsis seems to be driven by client interactions. //Mol. Biol. Cell. Y. 16. P. 1735-43.

80. Pel Z.-M., Murata Y., Benning G., Thomine S., Klusener B., Allen G.J., Grill E., Schroeder J.I. Calcium channels activated by hydrogen peroxide mediate abscisic acid signalling in guard cells. // Nature. (2000). V. 406. P. 731-734.

81. Pernas M., Garcia-Casado G., Rojo E., Solano R., Sanchez-Serrano J.J. A protein phosphatase 2A catalytic subunit is a negative regulator of abscisic acid signaling. // Plant J. (2007). V. 51. P. 763-778.

82. Phillips I.D.J., Wareing P.F. Studies in dormancy of sycamore I Seasonal changes in the growth-inhibitors in Acer pseudoplatanus. II J Exp.Bot. (1958). V. 9. P. 350-64.

83. Poly a G.M., Davis A.W. Properties of high-affinity cytokinin-binding protein from wheat germ // Planta. 1978. V. 139. P. 139-147.

84. Provasoli L., Carlucci A.F. Vitamins and Growth Regulators //

85. Physiology and Biochemistry / Ed. Stewart W.D.P. Los Angeles: Berkeley, 1 c^-y^1. P. 741-784.

86. Razem F.A., Hill R.D. Hydrogen peroxide affects abscisic acid binding to ABAP1 in barley aleurones // Biochemistry and Cell Biology. 2007. V. 85. P. ^>8 637.

87. Razem F.A., Luo M., Liu J.-H., Abrams Z.R., Hill R.D. Purification and characterization of a barley aleurone abscisic acid-binding protein // Journal of Biological Chemistry. 2004. V. 279. P. 9922-9929.

88. Reski R Physcomitrella and Arabidopsis: the David and Goliath of reverse genetics.// Trends Plant Sci. (1998) V. 3. P 209-210.

89. Reski R., Wehe M., Hadeler B., Marienfeld J. R., and Abel W. O. Cytokinin and light quality interact at the molecular level in the chloroplast-mutant of the moss Physcomitrella. //J Plant Physiol. (1991). V. 138. P. 236-243.

90. Riefler M., Novak O., Strnad M., Schmiilling T. Arabidopsis Cytolonin Receptor Mutants Reveal Functions in Shoot Growth, Leaf Senescence, Seed. Size Germination, Root Development and Cytokinin Metabolism // Plant Cell. 2006 V 18. P. 40-54.

91. Ritchie S. and Gilroy S. Abscisic acid stimulation of phospholipase H> jn barley aleurone is G-protein-mediated and localized to the plasma membrane // Plant Physiol. 2000.V. 124. P. 693-702.

92. Romanko EG, Selivankina SY, Moshkov IE, Novikova GV. Effect of cytokinin-binding proteins isolated from chloroplasts on transcription // Fiziol Rast. 1986; V. 33/ P. 1078-1083.

93. Romanov G.A., Taran V. Ya., Chvojka L., Kulaeva O.N. Receptor-like cytokinin-binding protein(s) from barley leaves // J. Plant Growth Regul. 1988. V. 7. P. 1-17.

94. Saadet S., Fatih D. Effect of 24-epibrassinolide on biomass, growth andtfree proline concentration in Spirulina platensis (Cyanophyta) under NaCl stress // Plant Growth Regul. 2008. V. 56. № 3. P. 219-223.

95. Santner A, Calderon-Villalobos LI, Estelle M Plant hormones are versatile chemical regulators of plant growth. //Nat Chem Biol. (2009). V. 5. 301-307.

96. Schmitt J.M., Piepenbrock M. Regulation of phosphoe-nolpyruvate carboxylase and crassulacean acid me-tabolism induction in Mesembryantheum crystalli-num L. by cytokinins // Plant Physiol. 1992. V. 99. P. 1664-1669.

97. Schmulling T., Schafer S., Romanov G. Cytokinin as regulators of gene expression // Physiologia Plantarum. 1997. V. 100. P. 505-519.

98. Shen Y. Y., WangX. F., WuF. Q. The Mg-chelatase H subunit is an abscisic acid receptor // Nature 2006443, 823-826.

99. Stirk W., Or dor V., van Staden J. Identification of the cytokinin isopentenyladenine in a strain of Arthronemaafricanum (Cyanobacteria). Journal ofPhycology, 1999, vol. 35, no. 1, p. 89-92.

100. Stirk W.A., Novak O., Strnad M„ van Staden J. Cytokinins in Macroalgae // Plant Growth Regul. 2003. V. 41. P. 13-24.

101. Stirk W.A., van Staden J. Comparison of Cytokinin- and Auxin-Like Activity in Some Commercially Used Seaweed Extracts // J. Appl. Phycol. 1997. V. 8. P. 503-508.

102. Stirk, W. A. & van Staden, J. Isolation and identification of cytokinins in a new commercial seaweed product made from Fucus serratus L // J. Appl. Phycol. 1998. V. 9. P. 327-30.

103. Takegami E.T., Yoshida K. Isolation and purification of cytokinin binding protein from tobacco leaves by affynity column chromatiography // Biochem. Biophys. Res. Com. 1975. V. 67. P. 782-789.

104. Takei, K, Sakakibara, H., Sugiyama, T. Identification of genes encoding adenylate isopentenyltransferase, a cytokinin biosynthesis enzyme, in Arabidopsis II Biol.Chem. 2001. V. 276. P. 26405-26410.

105. Tsai M.J., O'Malley B.W. Molecular mechanisms of action of steroid. Thyroid receptor superfamily members // Annu. Rev. Biochem. 1994. V. 63. P. 451-486.

106. Ueguchi C., Koizumi H., Suzuki T., Mizuno T. Novel family of sensor histidine kinase in Arabidopsis II Plant Cell Physiol. 2001. V. 42. P. 231-235.

107. Urao T., Yamaguchi-Shinozaki K., Urao S., Shinozaki K. An Arabidopsis myb homolog is induced by dehydration stress and its gene product binds to the conserved MYB recognition sequence. // Plant Cell. (1993). V. 5/ P. 1529-1539.

108. Van den Wijngaard P.W.J., Sinnige M.P., Boobeek I., Reumer A., Schoonheim P. J., Mol J.N.M., Wang M., De Boer A.H. Abscisic acid and 14-3-3 proteins control K+ channel activity in barley embryonic root. // Plant J.V. (2005). V.41.P. 43-55.

109. Wang P., Song C.-P. Guard-cell signalling for hydrogen peroxide and abscisic acid.// New Phytologist. (2008). V. 178. P. 703-718.

110. Wang X., Zhang D. Abscisic Acid Receptors: Multiple Signal-perception Sites. //Annals of Botany. (2008). V. 101. P. 311-317.

111. Wu Y, Kuzma J., Marechal E., GraeffR., Lee H.C., Foster R., ChuaN.-H. Abscisic acid signaling through cyclic ADP-ribose in plants. // Science. (1997). V. 279. P.2126-2130.

112. Xu J., Li H.D., Chen L.Q., Wang Y, Liu L.L., He L., Wu W.H. A protein kinase, interacting with two calcineurin B-like proteins, regulates K+ transporter AKT1 in Arabidopsis // Cel. /2006. V. 125. P.1347-1360.

113. Yoshida K., Tagami E.T. Isolation of cytokinin binding protein from tobacco leaves by bioaffinity chromatography and its partial characterization // J. Biochem. 1977. V. 1. P.791-799.