Активность фитобиоремедиации нефтезагрязненных почв бактериальными консорциумами различных климатических зон тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Баутиста Эспиноза Хьюго

• Баутиста Эспиноза Хьюго
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Баутиста Эспиноза Хьюго

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Общая информация

1.1 Взаимосвязь микроорганизмов- растений

1.2 Характеристика нефти

1.3 Проблема загрязнения различных экосистем нефтью, нефтепродуктами и методы их очистки

1.4 Изменения биологических особенностей среды обитания под влиянием нефтяного загрязненияен

2. Углеводородокисляющие бактерии

2.1 Общая характеристика

2.2 Особенности морфологии и физиологии углеводородокисляющих микроорганизмов

2.3 Экология и распространение

2.4 Деградация углеводородов

2.4.1 Окисление алканов

2.4.2 Окисление аренов

2.4.3 Окисление ароматических углеводородов

3. Биологически активные вещества и микробные биосурфактанты

4. Фитобиоремедиация

4.1 Значение растений и углеводородокисляющих микроорганизмов ризосферы и ризопланы в процессах очистки нефтезагрязненных почв

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Объекты исследования

2. Отбор проб образцов почв

3. Культивирование микроорганизмов

4. Идентификация выделенных углеводородокисляющих микроорганизмов

4.1 Определение родовой принадлежности штаммов по морфологическим физиологическим показателям

4.2 Скриниг выделенных штаммов по 16 S рРНК

4.3 Идентификация микроорганизмов с помощью MALDI В^урег

5. Определение способности изолятов к росту и деструкции нефти и углеводородов разного строения

6. Оценка продукции сурфактантов углеводородокисляющими бактериями

6.1 Определение эмульгирующей активности культуральной жидкости

6.2 Определение разжижающей активности культуральной жидкости

6.3 Оценка способности углеводородокисляющих микроорганизмов к производству биосурфактантов по зонам гемолиза

6.4 Определение изменений поверхностного натяжения нефти

7.Фитобиоремедиаци я

7.1 Оценка устойчивости растений к нефтяному загрязнению

7.2 Определение способности бактериальных консорциумов к колонизации растений

8. Определение содержания нефти

8.1 Определение содержания нефти в образцах, гравиметрическим методом

8.2 Исследование остаточной нефти газожидкостной хроматографией

9. Статистическая обработка данных

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Выделение и характеристика углеводородокисляющих микроорганизмов, выделенных из образцов нефтезагрязненных почв тропической, умеренно-континентальной и континентальной зон

2 Анализ активности штаммов, различных климатических зон, к росту и деструкции нефти и углеводородов разного строения

3. Оценка продукции экстрацеллюляных сурфактантов штаммами микроорганизмов, различных климатических зон

4 Фитобиоремедиация

4.1 Влияние нефтезагрязнения почв на всхожесть и вегетативный рост сосудистых растений

4.2 Способность микроорганизмов к колонизации корней растения и фитобиоремедиация

4.3Определение микроорганизмов эффективных колонизаторов растений

4.4Влияние комплекса растение-микроорганизм на деградацию нефти в почве

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Активность фитобиоремедиации нефтезагрязненных почв бактериальными консорциумами различных климатических зон»

ВВЕДЕНИЕ

По прогнозам ОПЭК, мировой спрос на нефть увеличится к 2030 году на 37% по сравнению с 2016 годом. Рост добычи нефти и ее переработка ведет к значительному загрязнению окружающей среды. В природе наблюдаются катастрофические последствия действия данных поллюантов на биотические компоненты экосистемы. Для восстановления загрязненных нефтью земель разрабатываются различные методы, включая физико-химические и биологические методы [Adeniji et а1., 2017]. Однако, применение физико-химических методов, не дают полной очистки окружающей среды от нефтяных загрязнений [ОпШа et а!., 2003]. Более перспективными являются биологические методы, которые дают значительно больший эффект, но и они требуют дальнейшего совершенства. Одно из направлений в этих исследованиях дальнейший поиск лучших консорциум или отдельных штаммов, которые могут жить и очищать природу от нефтезагрязнений, путем эмульгирующих веществ, ферментов и биосурфактантов.

Среди биологических методов, в настоящее время, наиболее перспективным методом является Фитобиоремедиация. Данный процесс представляет собой сложный тип технологии экологически чистого очищения объектов окружающей среды, который включает как растения, так и связанные с его ризосферой микроорганизмы. Успех стратегии фитобиоремедиации во многом зависит от толерантности растений к загрязнителю, а также от взаимодействия растения с микроорганизмами. Среди последних, особый интерес вызывают микроорганизмы, которые не просто присутствуют в ризосфере растения, но и способные к колонизации корней, которые могут активно размножаться под действием секретируемых растениями корневых экссудатов и распространяться по мере их роста.

В литературе присутствует незначительное количество работ посвященных вопросу колонизации растительных объектов, микроорганизмами ризосферы, и полностью отсутствуют работы по исследованию колонизирующей возможности консорциумов углеводородокисляющих бактерий различных климатических зон.

Целью настоящей работы было получить и проанализировать углеводородокисляющие бактерии различных климатических зон, активных колонизаторов растений, для создания системы «растение-консорциум бактерий», способной к эффективной фитобиоремедиации.

В связи с поставленной целью решались следующие задачи:

1) Выделить, идентифицировать и определить родство УОБ различных климатических зон;

2) Определить активность штаммов к деструкции нефти и углеводородов разного строения (алканы, арены, полиароматические углеводороды), а также способность к синтезу сурфактантов;

3) Провести анализ растений, способных расти и развиваться на загрязненных почвах Татарстана;

4) Выявить закономерности колонизации корней растений активными штаммами-деструкторами углеводородов;

5) Охарактеризовать фитобиоремедиационный потенциал созданной и оптимизированной системы «растение-консорциум бактерий», различных климатических зон.

Научная новизна. Создана новая эффективная коллекция углеводородокисляющих микроорганизмов, содержащая представителей континентальной, умеренно-континентальной и тропических зон. Впервые проведено молекулярно-генетическое исследование данных микроорганизмов и установлена принадлежность микроорганизмов к

различным кластерам. Впервые исследованы свойства данных микроорганизмов к деградации нефти и ее производных, а также способность к синтезу сурфактантов. Установлена определенная зависимость синтеза сурфактантов от роста микроорганизмов и условий их существования.

Впервые исследована колонизирующая способность

углеводородокисляющих микроорганизмов, континентальной, умеренно-континентальной и тропических зон и установлено, что это свойство характерно для видов: Pesudomonas putida, Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, Bacillus subtilis, Cellulosimicrobium cellulan и Cellulosimicrobium funkei.

Впервые созданы ассоциации, «растение-углеводородокисляющие бактерии», на основе люцерны (лат. Medicago, сем. Fabaceae) и консорциумов бактерий, представителей континентальной, умеренно-континентальной и тропических зон, способных к колонизации корней растения и эффективных нефтедеструкторов. Доказан эффективный фиторемедиационный потенциал созданной и оптимизированной системы. Научно-практическая значимость работы. Получено 20 штаммов углеводородокисляющих микроорганизмов, представителей

континентальной, умеренно-континентальной и тропических зон, способных к деградации нефти и ее производных. Доказана эффективность отдельных штаммов к деструкции алканов, аренов и полиароматических углеводородов.

Большинство штаммов микроорганизмов континентального климата и некоторые представители умеренно-континентальной и тропических зон были способны к синтезу сурфактантов, и поэтому могут быть рекомендованы в качестве их продуцентов. Наиболее перспективными в этом отношении - штаммы Bacillus subtilis (Сургутское месторождение), Pseudomonas aeruginosa (Эквадор) и Aeromonas hydrophila (Татарстан).

Доказано, что для процесса деградации нефтяного загрязнения почв и восстановления почвенного покрова можно использовать растения. Среди последних, можно рекомендовать травянистое растение - Люцерну (лат. Medicago sativa сем. Fabaceae), среди зерновых культур - Ячмень (Hordeum vulgare).

Установлено, что наиболее эффективная деградация вязкой нефти происходит при использовании ассоциации растения с углеводородокисляющими микроорганизмами, которые не только деградируют углеводороды, но и способны к колонизации корней растения, что позволяет расширять зону очистки почв. Созданная ассоциация на основе Люцерны и консорциума штаммов Татарстана, снижала содержание нефтяных углеводородов в почве до 65% в течение 30 суток, поэтому может быть рекомендована для эффективного процесса фитобиоремедиации.

Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе в рамках дисциплины «Экологическая биотехнология», «Методы исследования в биологии и медицине» «Биотехнология нефтяных производств».

Положения, выносимые на защиту:

1. Выделено 20 штаммов углеводородокисляющих микроорганизмов, представителей консорциумов континентальной, умеренно-континентальной и тропических зон, способных к деградации нефти. Консорциумы ранжированы по способности к деструкции алканов, аренов и полиароматических углеводородов; активность увеличивается в ряду: сообщество почв Сургута < Эквадора < Татарстана

2. Наиболее эффективными штаммами по способности к биосинтезу сурфактантов были Bacillus subtilis и Klebsiella oxytoca (Сургутское

месторождение), Bacillus subtilis и Pseudomonas aeruginosa (Эквадор) и Aeromonas hydrophila и Pseudomonas aeruginosa (Татарстан).

3. В процессе фиторемедиации нефтезагрязненных почв среди исследованных растений максимальную устойчивость и способность к удерживанию бактериального консорциума проявило травянистое растение - люцерна (Medicago sativa) .

4. Созданная ассоциация на основе люцерны и консорциума бактерий нефтезагрязненных почв Татарстана снижала содержание углеводородов в почве на 65% в течение 30 суток и может быть рекомендована для эффективного процесса фитобиоремедиации.

Степень достоверности результатов исследований подтверждается многократными экспериментами, проведенными с соблюдением методик, имеющих мировые стандарты; анализ результатов проводили на современном высокоточном оборудовании и с использованием методов статистической обработки данных; результаты обсуждались на многочисленных научных конференциях с ведущими специалистами в данной области; результаты опубликованы в зарубежных научных изданиях, рецензируемых ведущими учеными в данной области.

Апробация работы Основные положения диссертации были представлены на Международных, всероссийских и региональных конференциях: на Фундаментальные и прикладные научные исследования:материалы II-ой Международной научной-практической конференции 2018 (Оренбург, 2018 ), на"1-ый Российский Микробиологический Конгресс. 2017.- c.113 " (Пущино, 2017), на Всероссийской выставке научно-технического Симбиоз-Россия(Казань, 2017), на Всероссийской молодежной научно-практической конференции -с международным участием- (Тюмень, 2016), на Международной научной

конференции студентов, аспирантов и молодых учёных "Ломоносов-2016"(Москва, 2016).

Связь работы с научными программами.Исследования выполнены в соответствии с тематическим планом НИР Казанского (Приволжского) федерального университета «Микробные ферменты и метаболиты как основа новых биотехнологий в сельском хозяйстве» (Проект 14-83 от 2014 г.). Работа поддержанная грантом немецкой служба академических обменов (DAAD) в рамках партнерство договоры КФУ-ЮЛУ (Гисенский университет имени Юстуса Либиха,г.Гиссен, Германия,2017г.), индивидуальным грантом KIGAM (Корейский институт гео-науки и минеральных ресурсов)на стажировку и интенсивный курс обучения по исследованиям нефти, развитию и производство(Южная Корея, 2017г.)

Личный вклад автора заключается в разработке, планировании, организации и реализации экспериментального решения поставленной проблемы, а также в интерпретации результатов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 научых работ, включая 2 статьи рекомендуемых ВАК и 4 статьи введущих рецензируемых научных журналах и изданиях, входящих в перечень SCOPUS/WoS.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение результатов, заключение и список литературы. Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц и 28 рисунка. Библиография содержит 52 наименования российских и 50 наименования зарубежных авторов.

Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность научномуруководителю д.б.н., профессору ИФМиБ КФУ Т.В. Багаевой за всестороннюю поддержку при подготовке диссертации. Автор выражает благодарность заведующей кафедры микробиологей, д.б.н., профессору ИФМиБ О.Н. Ильинской за советы, поддержку и помощь. Автор искренне благодарен д.б.н. Ш.З. Валидову, д.б.н. профессору Ф.Г. Куприяновой-Ашиной, д.б.н, профессору Н.В. Морозову, д.б.н., профессору Ф.К. Алимовой, д.б.н. , профессору З.И. Абрамовой , к.б.н. А.А. Тойменцевой, к.г.н. А. В. Вахину, к.б.н. А.В. Часову , к.б.н. Р.И. Тухбатовой, д.б.н. Р.Г. Киямовой, к.б.н. О.Н. Козловой и С.Ю. Сергиевой за помощь в работе.

Автор выражает глубокую признательность всем сотрудникам кафедры биохимии и биотехнологии КФУ за всестороннюю помощь и доброжелательную рабочую атмосферу.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Общая информация 1.1 Взаимосвязь микроорганизмов растений

В естественных условиях высшие растения и микроорганизмы очень сильно взаимосвязаны, между ними происходят различные взаимоотношения и формы взаимного влияния [Mayerhofer et al., 2013; Gkorezis et al., 2016]. Различают взаимоотношения: симбиоз, паразитизм, метабиоз и антагонизм. Здесь, конечно, в первую очередь необходимо отметить тесный симбиоз бобовых растений и клубеньковых бактерий, который начинается с синтеза клетками иризобий и Nod-факторов ив иответ инадействия ифлавоноидов ирастений [Gkorezis et al., 2016]. Важно отметить, что Nod-факторы в значительной степени определяют специфичность всего симбиотического взаимодействия. Они инициируют ранние стадии симбиоза, скручивание корневых волосков, закладку клубеньковой меристемы, а у некоторых бобовых (люцерна) даже начальные стадии гистогенеза клубенька. Это наиболее яркий пример позитивного взаимоотношения микроорганизмов с растениями, при котором растения получают значительную часть необходимых питательных веществ от микроорганизмов.

Симбиотические отношения растений и микроорганизмов складываются и в отношении других бактерий. Описанные выше отношения, включают процессы жизнедеятельности корней растений т.е. выделяют такие органические соединения (сахара, кислоты, и редко аминокислоты) все эти вещества влияют на ризосферу и ризоплан [Gkorezis et al., 2016].ииМикробы успешно развиваются на самой поверхности корне и почвы, у самых корней, так как там содержится много питательных веществ и одновременно микроорганизмы выделяют вещества , которые нужно для растений. [Germaine et al., 2015]. В земле, близко к корням находится

ризосфера, именно здесь мы можем говорить о 3 частях ; 1) поверхность корней, наиболее богатую микробами; 2) непосредственно прилегающий к поверхности корней тончайший слой почвы; 3) зону собственно ризосферы, расположенную на расстоянии 0,5-1 мм от поверхности корня [Hennion et al., 2018]. Фиторемедиация может быть усилена путем инокуляции корней растений углеводородокисляющими бактериями и одновременно стимулирующими рост растений (PGPB). Углеводородокисляющие бактерии улучшают устойчивость растений к загрязняющим веществам углеводородов [Khan et al., 2013]. Они способны продуцировать различные ферменты для деградации органических соединений и снижения фитотоксичности и эвапотранспирации летучих углеводородов [ Tara et al., 2014 ]. PGPB также демонстрируют благотворное влияние на растения путем индукции роста растений или борьбы с биологическим заболеванием [Khan et al., 2013]. Существуют различные исследования, оценивающие влияние видов растений и бактериальных активностей на эффективность фиторемедиации. Потенциал фиторемедиации многолетнего райграса (L. perenne), инокулированного бактериями, разрушающими углеводород, был исследован на загрязненной дизельным маслом почве (50 г / кг) Исходя из результатов, эффективность удаления усиленной фиторемедиации достиг 57,3%, что на 7,3% выше, чем фиторемедиация [Chuluun et al.,2014]. Кроме того, введение и инокулации углеводородокисляющие Pseudomonas штаммы, на растений Тика (Tectona grandis), гмелина (G. arbórea), ним (Azadirachta indica), и шампак (Michelia champaca) увеличили фиторемедиацию эффективности растений [Yenn et al., 2014].

Ризосферная и эпифитная микрофлора живет и развивается на поверхности растительных покровов за счет выделений клеток

растений. В отличие от них паразитарные микроорганизмынарушают целостность покровов, внедряются в организм и вызывают его заболевание.

Роль микроорганизмов связана не только с подготовкой питательных веществ для растений, но многие из них вырабатывают особые физиологически активные вещества. Сюда относятся различные факторы роста, витамины, ферменты, ауксины, антибиотики, гиббереллины, некоторые аминокислоты [(Germaine et al., 2015 ]. Растения сами могут образовывать такие соединения, но не всегда в достаточном количестве. Например, ауксины синтезируются самими растениями, но дополнительное образование микроорганизмами различных стимуляторов оказывает значительное влияние на рост и развитие растений[Hennion et al., 2018].

Активно образуют витамины большинство почвенных бактерий: азотобактер, клубеньковые бактерии, псевдомонады и др. Избыток витаминов они выделяют в почву. Считается, что в одном гектаре плодородной почвы накапливается за год 400 г витамина B1, 300 г витамина В6, 1 кг никотиновой кислоты, причем физиологически активные вещества могут находиться в адсорбированном состоянии длительное время (до пятидесяти -до шестидсяти дней) не теряя своей активности. Корни растений часто испытывают недостаток витаминов, поставщиками витаминов в данном случае выступает микрофлора ризосферы и эндотрофная микориза.

Среди почвенных микроорганизмов особенно много представителей, образующих антибиотические вещества. В растениеводстве установлено, что под влиянием различных антибиотиков лучше прорастают семена, усиливается рост корней. Они очень перспективны для лечения некоторых бактериальных и грибных болезней растений [Kotoky et al., 2018]. Данные вещества не ядовиты для человека и животных и могут оказывать не только

антибиотическое, но и стимулирующее действие. Однако эффективность их действия в растениеводстве еще слабо изучена.

Гиббереллины, найдены у микробов, актиномицетов и дрожжей. Они увеличивают во много раз вегетативную массу растений [Leyval et al., 1997]. В минимальных и количествах, и измеряемых микрограммами, гиббереллиновая кислота увеличивает высоту капусты, кукурузы, размеры плодов томатов, картофеля, гороха и др. в несколько раз [Germaine et al., 2015; Kotoky et al., 2018].

Необходимо отметить, что физиологически активные вещества влияют положительно только при определенном оптимальном количестве. Как при недостатке, так и при их избытке растения повреждаются, а в больших концентрациях они губят растения.

Среди почвенных микроорганизмов найдены также сильные антагонисты насекомых - вредителей сельскохозяйственных культур и лесов.

В земле растения дают не только благоприятные условия бактерий и других живущих микроорганизмов, но также фиксируют физико химические условия на ризоплане. Вторичные метаболиты, кислоты, органические аминокислоты, и т.д. являются важным источником питания для микроорганизмов, количество которое действительно больше, чем в почве без растений. Закировым было сказано, что «в ризосфере, где накапливаются корневые выделения и разлагаются корневые волоски, влажность примерно на l—2% выше, а реакция среды нейтральная даже в кислой почве, в ней содержится больше продуктов метаболизма и выше концентрация ферментов, ауксинов, витаминов, аминокислот и других биологически активных веществ [Закиров, 2009]; т.е. чем больше микроорганизмы тем более активны процессы микробиологической деградации [(Rajkumari et al., 2018), Балыкин, 1990]. Еще важным моментом, считается растворимость

микроэлементов и доступная форма элементов например трикальцийфосфат, железо и магний. когда микроэлементы и вторичные метаболиты находятся в нужной форме для растений и с большей вероятностью процесс интенсификации рост надземных и подземных растений.

Система и отношения растений микроорганизмов зависит от нескольких факторов, вида растения (одноплодные, многоплодные или однолетние и многолетние) характеристика почвы и конечно сезон года. К примеру растения с азотобактерами (фиксируют аммония и нитратов) чаще всего определяются видом растений и меньше всего видом почвы. Бобовые, крупы, табаки другие культуры стимулируют развитие микроорганизмов, а хлопчатник — наоборот [ Ко1:оку е! а1., 2018; Я^кишап е! а1., 2018 ].

Растения используют разные продукты или происходит Ассимиляция бактериальных продуктов корнями растений, это стимулирует рост растений и даже защищают от патогенов и болезней. Если предыдущее условие выполняется, то мы можем говорить об бактериальном удобрении почвы (минерализация биомассы). В природе также часто встречается сожительство растений с грибами. Микоризо-образующие грибы снабжают растения питательными веществами, полученными при разложении растительных остатков и почвенного гумуса.

Паразитизм между микроорганизмами и растениями, в естественной среде встречается в севообороте агрокультурами. т.е. биомасса которая осталась от предыдущей культуры на земле попадает на новые растения, это приводит к утомлению земли, не желательные органические вещества ухудшают жизнеспособность растений и урожай в целом. [Я^кишап е! а1., 2018].

Не смотря на то, что многие ученые считают, что земля вокруг корней заселена в большинстве непатогенными микроорганизмами, при вспышке

заболевания патогенные микроорганизмы усиливаются в ризосфере заболевшего растения, таким образом между бактериями (патогенные и непатогенные) происходит процесс конкуренции и как результат снижается популяция желательных микроорганизмов, и также отрицательное влияние на почву, а также на растения. Численность и состав микрофлоры в этом случае в значительной степени зависит от характера заболевания растения. Тем не менее, следует отметить, что ризосфера является микробиологической буферной зоной, в которой микрофлора не только улучшает питание растений, но и предохраняет их от патогенных микроорганизмов.

Микроорганизмы ризосферы играют защитную роль, используя продукты метаболизма, выделяемые растениями в период вегетации, и освобождают от них почву корневой зоны.

Известно, что в отсутствие микрофлоры растения могут расти и питаться, однако процессы развития и воспроизводства их резко заторможены. Ризосферная микрофлора, по-видимому, принимает участие не только в поставке, но и в усвоении питательных веществ растениями. Считается, что численность и видовой состав ризосферной микрофлоры определяется растением. Однако в ряде экспериментов было показано, что корневые выделения влияют на ризосферную микрофлору, но не являются основным фактором, определяющим ее численность и состав. Например, изменения численности и состава ризосферной микрофлоры наблюдались значительно сильнее под действием внесенных удобрений. Следовательно, на численность и состав ризосферной микрофлоры влияют и почвенно-климатические условия. Наиболее часто регистрируемые изменения микрофлоры ризосферы связаны с изменением соотношения между отдельными группами или видами микроорганизмов. Изменение

почвенных условий под влиянием различных климатических условий и агротехнических приемов также отражается на жизнедеятельности ризосферной микрофлоры.

Тип почвы значительно меньше влияет на ризосферную микрофлору, в отличие от растений [ Лао е! а1., 2017 ]. Установлено, что растения влияют и на соотношение бактерий, использующих органический или минеральный азот. Изменение этого соотношения под влиянием определенного вида растений свидетельствует об их специфическом воздействии на микроорганизмы ризосферы. Следовательно, в зависимости от потребности в азоте, растения в определенной степени могут регулировать численность и состав ризосферной микрофлоры, которая играет важную роль в снабжении их усвояемым азотом.

Растения влияют также на численность бактерий ризосферы, которые переводят в усвояемые формы труднорастворимые органические и неорганические фосфорные соединения [ Окоге71Б е! а1., 2016]. Численность этих бактерий в ризосфере вегетирующих растений меняется независимо от типа почвы. В одной и той же ризосферной зоне может наблюдаться тенденция к одновременному увеличению бактерий, связанных как с минеральными формами азота, так и с трудноусвояемыми фосфатами, или бактерий, использующих органические формы азота и минеральные формы фосфора [Ко1:оку е! а1., 2018 ]. Вполне вероятно, что благодаря ризосферной микрофлоре растения приобретают способность активно развиваться при наличии в почве различных форм азота и фосфора, причем достаточное количество доступного азота позволяет им использовать больше органических форм фосфора, и наоборот.

Микрофлора в ризосфере представлена в основном бактериями (до 99%), тогда как актиномицеты и грибы встречаются довольно редко. Среди

бактерий преобладают виды, участвующие в процессах минерализации. Нитрифицирующие, целлюлозоразлагающие, азотобактер и другие бактерии встречаются реже в ризосфере растений. Установлено, что численность нитрифицирующих бактерий существенно меняется в зависимости от типа почвы и незначительно - под влиянием растений [(1ее1аш е! а1., 2017 ]. Следовательно, в определенных условиях развития растений проявляется их избирательность к ризосферной микрофлоре, которая выражается в увеличении некоторых групп бактерий в почве непосредственно на корнях или на расстоянии 3—5 мм от них [ 1ее1аш е! а1., 2017; Лас е! а1., 2017 ].

Численность ризосферной микрофлоры и накопление полезных микроорганизмов зависят от условий питания растений. Большое значение имеет активность микроорганизмов, а не их количество. В зоне ризосферы растений создаются особые условия, отличающиеся от окружающих, что сказывается на физиологических особенностях микроорганизмов. Активность аммонифицирующих бактерий довольно низкая в ризосфере, особенно в корневой зоне. Для увеличения их количества необходимо внесения дополнительного источникам питания, ит. ^^органических Ии иоргано-минеральныхжудобрений [Лао е! а1., 2017].

Под влиянием агротехнических приемов в ризосфере растений меняется численность фосфорных бактерий. Фосфатазная активность бактерий, изолированных из почвы без растений и ризосферы, существенно не различается. Следовательно, в фосфорном питании растений главную роль играет количество находящихся в ризосфере микроорганизмов.

Исследованияиризосфернойимикрофлоры [Непшоп е! а1., 2018], а также факторов и приемов, оказывающих на нее влияние, позволяют выяснить основные закономерности регуляции жизнедеятельности микрофлоры с

целью повышения ее значения в питании растений и в развитии взаимоотношений между растением и микроорганизмами.

1.2 Характеристика нефти

Нефть представляет собой многокомпонентную систему, состоящую более чем из 500 индивидуальных химических соединений. Главные нефтеобразующие элементы: углерод (83-87%), водород (12-14%), азот, сера, кислород (1 -2%), многие, из которых входят в состав соединений, обладающих поверхностно-активными свойствами, стабилизирующими нефтяные эмульсии [Макаревич , 2010]. Благодаря этому любая смесь нефти и воды, при перемешивании, быстро превращается в довольно стойкие эмульсии, в которых вода эмульгирована внутри нефти, а сама нефть является внешней фазой эмульсионной среды. С изменением соотношения нефти и воды стойкость нефтяных эмульсий понижается.

Десятые и сотые доли процента нефти составляют многочисленные микроэлементы, в том числе и тяжелые металлы: цинк, хром, ванадий, никель, свинец, медь [ЛЬгашоу е! а1., 2015].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Баутиста Эспиноза Хьюго, 2018 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андреева И.С. Психротолерантные штаммы-нефтедеструкторы для биоремидиации почв и водной среды /И. С. Андреева, Е. К. Емельянова., С. Н. Загребельный, С. Е. Олькин, И. К. Резникова//Биотехнология.- 2006. -№1.- С.43-52.

2. Балыкин А.В. Микроорганизмы в загрязненной среде / А. В. Балыкин.-М.: Ильм, 1990. - С.128.

3. Банников А.Г. Охрана природы: учебное пособие /А. Г. Банников, А.К. Рустамов. -М.: Колос, 1977. - С.207 .

4. Барышникова Л.М.Биодеградация нефтепродуктов штаммами-деструкторами и их ассоциациями в жидкой среде / Л. М. Барышникова, В. Г. Грищенков, М. У. Аринбасаров, А. Н. Шкидченко// Прикладная биохимия и микробиология. -2001.- Т.37.- №5.- С. 543-548.

5. Боковикова Т.Н. Использование нефтешламов при строительстве дорог / Т. Н. Боковикова, Д. Р. Шпербер, Е. Р. Шпербер//Экология и промышленность России. -2010.- №4.- С. 34-35.

6. Бондаренко А.П.Восстановление экосистем нарушенных нефтепродуктами: учебное пособие / А. П. Бондаренко, К. У. Базарбеков.-Павлодар, 2006. - С. 195.

7. Борзенкова И.А. Свойства углеводородокисляющих бактерий изолированных из нефтяных месторождений Татарстана, Западной Сибири и Вьетнама / И. А. Борзенкова, Е. И. Милехина, М. Т. Готоева, Е. П. Розанова //Микробиология.- 2006. -Т.75.- №1. -С.82-89.

8. Бирштехер Э. Нефтяная микробиология / Э. Бирштехер.-Л.:Гостоптехиздат, 1957. - С. 314.

9. Вельков В.В. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы / В. В. Вельков // Биотехнология. - 1995. - С. 3-4.

10.Гольдберг В.М. Взаимосвязь загрязнения подземных вод и природной среды / В. М. Гольдберг.-Ленинград:Гидрометеоиздат, 1987. - С. 245

11.Громов Б. В. Экология бактерий / Б. В. Громов, Г. В. Павленко.-Л.: Ленинградский университет, 1989. - С. 95 .

12.Гэрэлмаа Т. Исследование процессов биодеградации вязких нефтей Монголии для создания методов увеличения нефтеотдачи и рекультивации нефтезагрязненныхпочв: Автореферат на соискание к.х.н. / Т. Гэрэлмаа.- Томск, 2010. - С. 26с.

13.Жуков А.И. Методы очистки производственных сточных вод / А. И. Жуков, И. Л. Монгайт, И. Д. Родзиллер.-М.:Стройиздат, 1977. - С208

14.Жуков Д.В. Кинетические закономерности биодеградации алифатических углеводородов бактериями RhodococcusmbberRhodococcuserythropoHs / Д. В. Жуков, В. П. Мурыгина, С. В. Калюжный // Прикладная биохимия и микробиология. -2007.- Т. 43.- №6.-С.657-663.

15.Ивчатов А.Л. Химия воды и микробиология / А. Л. Ивчатов, В. И. Малов.-М.: ИНФРА-М, 2006. - С. 218с.

16.Иларионов С. А. Экологические аспекты восстановления нефтезагрязненных почв / С. А. Иларионов.- Екатеринбург: Уро РАН, 2004. - С. 194.

17.Ишемницкий А. А. Успехи микробиологии / Под редакцией А. А. Имшеницкого. - М. : Наука, 1968. - Т. 5. - С. 165 .

18.Калюжин В. А. Биодеградация нефти / В. А. Калюжин. - М.: Недра, 1997. - С.167-172.

19.Карпенко Е.В.Перспективы использования бактерий рода Rodococcus и микробных поверхностно-активных веществ для деградации нефтяных загрязнений / Е. В. Карпенко, Р. И. Вильданова-Марцишин, Н. С. Щеглова, Т. П. Пиров // Прикладная биохимия и микробиология. - 2006.

- Т.42. - №2. -С.175-179.

20.Квасников Е.И.Микроорганизмы деструкторы нефти в водных бассейнах / Е. И. Квасников, Т. М. Клюшникова.- Киев: Наукова думка, 1981. - С. 132.

21.Кесельман Г.С. Защита ОС при добыче, транспорте и хранении нефти и газа / Г. С. Кесельман, Э. А. Махмудбеков.- М.: Недра, 1981. - С. 256.

22.Киреева Н.А. Биологическая активность нефтезагрязненных почв /Н. А. Киреева, В. В. Водопьянов, А. М. Мифтахова.-Уфа: Изд-во Гилем, 2001.

- С. 376с.

23.Коронелли Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде// Прикладная биохимия и микробиология / Т. В. Коронелли.- 1996. - Т.32. - №6. - С.579-585.

24.Коронелли Т.В. Взаимодействие бактерий в культуре, содержащей Pseudomonas и Mycobacterium, в связи с окислением углеводородов /Т. В. Коронелли, Т. И. Комарова, А. В. Игнатченко //Микробиология.- 1984.-Т.53.- №2.- С. 213-217.

25.Кременецкая Е.Р. Оценка скорости потребления кислорода в толще воды Можайского и Иваньковского водохранилищ / Е. Р. Кременецкая // Водные ресурсы. - 2007. - Т.34. - №3. - С.310-317.

26. Кучук С. Влияние органического загрязнения на ручей кумир и рекиСакарья в Турции / С. Кучук, А. Альпбаз// Водные ресурсы. - 2008.-Т.35.- №5.- С.617-624.

27.Кушелев В.П. Охрана природы от загрязнений промышленными выбросами /В. П. Кушелев /-М.: Изд-во «Химия», 1979. - 240 с.

28.Логинов О. Н. Биотехнологические методы очистки окружающей среды от техногенных загрязнений / О. Н. Логинов, Н. Н. Силищев, Т. Ф. Бойко//.-Уфа: Изд-во Реактив, 2000. - С. 75с.

29.Мазмадини Н.Д. Исследование действия растворенных нефтепродуктов на некоторые гидробионты Черного моря / Н. Д. Мазмадини// Рыбное хозяйство. - 1973. - №2. - С.7.

30.Макаревич В.Н.Ресурсный потенциал тяжелых нефтей Российской Федерации: перспективы освоения / В. Н. Макаревич, Н. И. Искрицкая, С. А. Богословский // Нефтегазовая геология. Теория и практика. - 2010. - Т.5. - №2. - С.5-8.

31.Максутов Р. Технологии ТЭК, ИД/ Р. Максутов// Нефть и Капитал.-2005.- № 12.- С. 14-19.

32. Микробиология загрязненных вод / Под редакцией Р. Митчелла. -М.: Медицина, 1976. - С. 320.

33. Мокрый Е.Н. Охрана окружающей среды в нефтеперерабатывающей и химической промышленности / Е.Н. Мокрый, Х.З. Котович, В.В. Гуменецкий, О.И. Гринив. - Львов.: // Изд-во при Львовском гос.ун-те, 1989. - С. 159 .

34.Морозов Н.В. Экологическая биотехнология: очистка природных и сточных вод макрофитами / Н. В. Морозов. //-Казань: изд-во КГПУ, 2001. - 396 с.

35.Назина Т.Н.Филогенетическое разнообразие аэробных сапротрофных бактерий из нефтяного месторождения Дацин / Т. Н. Назина, А. А. Григорьян, Сюэ Ян-Фен, Д. Ш. Соколова // Микробиология. - 2002. -Т.71. - №1. - С.103-110.

36.Немировская И.А. Происхождение углеводородов в донных осадках Иваньковского водохранилища / И. А. Немировская, В. Ф. Бреховских, Т. Н. Казмирук// Водные ресурсы. - 2009. - Т. 36. - №3.- С. 354-362.

37. Орлов Д.Г. Химическое загрязнение почв и их охрана \ Д. Г. Орлов, М. С. Малинина, Г. В. Мотузова. //Агропромиздат, 1991. - С. 303 .

38.Пашаян А. А. Проблемы очистки загрязненных нефтью вод и пути их решения / А. А. Пашаян, А. В. Нестеров// Экология и промышленность.-2008. - № 5. - С. 32-35.

39.Петрикевич С. Б. Оценка углеводородокисляющей активности микроорганизмов / С. Б. Петрикевич, Е. Н. Кобзев, А. Н. Шкидченко //

Прикладная биохимия и микробиология. - 2003.- Т. 39.- № 1.- С. 25-30.

40.Плешакова Е. В. Сравнение эффективности интродукции нефтеокисляющего штамма Dietziamaris и стимуляции естественных микробных сообществ для ремедиации загрязненной почвы / Е. В. Плешакова, Е. В. Дубровская, О. В. Турковская// Прикладная биохимия и микробиология. - 2008. - Т. 44. - № 4. - С. 430-437.

41.Подольский Ю.В. Возможное развитие нефтегазового комплекса России до 2030 года / Ю. В. Подольский // Нефтегазовая геология. Теория и практика. - 2008. - Т.3. -№3 С.99.

42. Прищепа О.М. Подготовка сырьевой базы нефти и газов в современных условиях / О. М. Прищепа // Нефтегазовая геология. Теория и практика.-2008. -Т.3. - №3 С.87-90.

43.Прутенская Е.А. Основы биотехнологии / Е. А. Прутенская.-Тверь:ТГТУ, 2009. - С. 115.

44. Середина В. П. Нефтезагрязненныепочвы: свойства и рекультивация / В. П. Середина, Т. И. Бурмистрова, Н. Н. Терещенко//Томск: Изд-во ТПУ, 2006. - С. 270.

45. Сидорова А. В.Биодеградация углеводородов нефти и нефтепродуктов отселектированными углеводородокисляющими микроорганизмами / А.

B. Сидорова, Н. В. Морозов // Экология промышленных регионов России.- 2006 С88-99..

46.Соромотин А.В. Нефтяное загрязнение земель в зоне средней тайги Западной сибири / А. В. Соромотин // Экология и промышленность России. - 2004.- №8. - С.8-13.

47.Степановских А. С. Охрана окружающей среды: Учебник для вузов / А.

C. Степановских. - М.: ЮНИТИ-ДАНА, 2000. - С. 559

48.Тюленева В. А. Биоремедиация - альтернативная технология восстановления нефтезагрязненных почв / В. А. Тюленева, И. В. Соляник// Межрегиональные проблемы экологической безопасности «МПЭБ-2003» : Сборник тезисов трудов симпозиума. - Сумы :Довкшля, 2003. - С. 114с.

49. Хантургаев Ф.А. Фильтрующий материал для очистки сточных вод от нефтепродуктов / Ф. А. Хантургаев // Бюл. изобретений.- 1979.- № 27.-С. 45-47.

50.Харисова К.Р. Проблема загрязнения водных объектов нефтепродуктами при чрезвычайных ситуациях на железнодорожном транспорте / К. Р. Харисова. - Материалы IV научн. техн. конф.- Екатеринбург.- 2003.- С. 328 -333.

51.Хисамов Р.С. Особенности освоения тяжелых высоковязких нефтей и природных битумов Восточно-Европейской платформы / Р.С. Хисамов, Н. С. Гатиятуллин, В. Н. Макаревич, Н. И. Искрицкая, С. А. Богословский. - Спб.: ВНИГРИ, 2009. - С. 192 .

52.Ягафарова Г.Г. Влияние продуктов окисления керогена сланцев на биодеструкцию нефти и нефтепродуктов в почве и воде / Г. Г. Ягафаров,

А. Х. Сафаров, Е. Г. Ильина Е. Г., И. Р. Ягафаров И. Р. //Прикладная биохимия и микробиология.- 2002.- Т. 38.- №5.- С.518-522.

53.Abalos, A. Enhanced biodégradation of Casablanca crude oil by a microbial consortium in presence of a rhamnolipid produced by Pseudomonas aeruginosa AT10 / A. Abalos, M. Vinas, J. Sabate, M. Manresa, A. Solanas// Biodegradation .-2004.-V15(4) . - P. 249-260.

54.Abramov, V.O. Sonochemical approaches to enhanced oil recovery/Abramov, V.O., Abramova, A. V., Bayazitov, V.M., Altunina, L.K., Gerasin, A.S., Pashin, D.M., Mason, T.J. //Ultrason. Sonochem.-2015. https://doi.org/10.1016/i.ultsonch.2014.08.014

55.Alves W.S. Phytoremediation of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) by cv. Crioula: A Brazilian alfalfa cultivar / Alves W.S. Alves, Wilber S., Manoel, Evelin A. Santos, Noemi S. Nunes, Rosane O. Domiciano, Giselli C. Soares, Marcia R. // International Journal of Phytoremediation. .-2018.-V8 (20) . - P. 747-755.

56.Bamforth, S. M., Bioremediation of polycyclic aromatic hydrocarbons: current knowledge and future directions/S. M., Bamforth, &I. Singleton, //Journal of Chemical Technology and Biotechnology.--2005.--V80(7) . - P. 723-736.

57.Bayona, J. M . Selective aerobic degradation of linear alkylbenzenes by pure microbial cultures/J. M., Bayona, J. S. Albaigés, A. M., Solanas, &M. Grifoll, (1986) //Chemosphere.-1986.-V 15(5) . - P. 595-598.

58.Cecotti, M. Efficiency of surfactant-enhanced bioremediation of aged polycyclic aromatic hydrocarbon-contaminated soil: Link with bioavailability and the dynamics of the bacterial community/M., Cecotti, B. M., Coppotelli, V. C., Mora, M. Viera, &I. S.Morelli, //Sci. Total Environ.-2018.-V6(34) . -P. 224-234 .

59.Coulon, F., When is a soil remediated? Comparison of biopiled and windrowed soils contaminated with bunker-fuel inafull-scaletrial/F., Coulon, M., Al Awadi, W., Cowie, D.,Mardlin, S., Pollard, C., Cunningham,... &G. I.Paton, //EnvironmentalPollution.-2010.--V158(10) . - P. 3032-3040

60.Chemlal, R. Microbiological aspects study of bioremediation of diesel-contaminated soils by biopile technique/R., Chemlal, A., Tassist, M., Drouiche, H., Lounici, N., Drouiche, &N. Mameri, //International Biodeterioration & Biodegradation.-2012.-V75. - P. 201-206.

61.Chhatre, S. Bacterial consortia for crude oil spill remediation/S., Chhatre, H., Purohit, R. Shanker, &P.Khanna, //in Water Science and Technology.--1996.-V34. - P. 187-193 .

62.Davidson E.A. The potential ecological costs and co-benefitsoft REDD :acriticalreviewandcasestudyfromtheAmazonregion / E. A. Davidson // Global Change Biol. - 2009. - V 12. - P. 2803-2824.

63.De Pasquale C. Degradation of long-chain n-alkanes in soil microcosms by two actinobacteria/C., De Pasquale, E., Palazzolo, L. L., Piccolo, &P.Quatrini, //Journal of Environmental Science and Health.--2012.-47(3). - P. 374-381.

64.Dutta, T. K. Oxidation of Methyl-Substituted Naphthalenes: Pathways in a Versatile Sphingomonas paucimobilis strain/T. K., Dutta, S. A., Selifonov, &I. C. Gunsalus, //Applied and environmental microbiology.--1998. -V64(5) . - P. 1884-1889.

65.Fedorov Y.A. The investigation of oil degradation processes in accidental pollution of the environment / Y. A. Fedorov, E. D. Pavlik // Proc.of the III International congress on environmental geotechnics.-1998Lisboa: ELSEVIER,.- P. 407-410.

66.Germaine, K. J.Ecopiling: a combined phytoremediation and passive biopiling system for remediating hydrocarbon impacted soils at field scale/K.J.,

Germaine , JKieran.; Byrne, John; Liu, Xuemei; Keohane, Jer; Culhane, John; Lally, Richard D.;Kiwanuka, Samuel;Ryan, Dowling, David N. IIFront. Plant Sci. .-2015 . - V5. - P. 756

67.Gkorezis, P. et al. The interaction between plants and bacteria in the remediation of petroleum hydrocarbons: An environmental perspectivelP. Gkorezis, M. Daghio, A. Franzetti, J. Van Hamme, S. Sillen, W. Vangronsveld, Jacoll Frontiers in Microbiology.-2016 . - V1. - P. 77-80

68.Goettems E.M.Sitel: a successful petrochemical wastewater treatment system lE.M.Goettems, Z. Simon, M. L. Baldasso,E. S. Ferreirall Wat. Sci. Tech.-2000. -V. 20.- P.141-162.

69.Goldman R. Smoking increases carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons in human lung tissuelR., Goldman, L., Enewold, E., Pellizzari, J. B., Beach, E. D., Bowman, S. S., Krishnan, &P. G. Shields, (2001) ll Cancer research.--2001. - 61(17) . - P. 6367-6371.

70.Hara A. Alcanivorax which prevails in oil-contaminated seawater exhibits broad substrate specificity for alkane degradationlA., Hara, K., Syutsubo, &S. Harayama, ll Environmental microbiology.-2003. - V5(9) . - P. 746-753.

71.Hennion, N. Sugars en route to the roots. Transport, metabolism and storage within plant roots and towards microorganisms of the rhizospherelN. Hennion, Nils, M. Durand, V. Cécile, J. Doidy, L. Maurousset, R. Lemoine, N. PourtaullPhysiol. Plant..-2018. - doi: 10.1111lppl. 12751

72.Hilyard E. Enrichment, isolation, and phylogenetic identification of polycyclic aromatic hydrocarbon-degrading bacteria from Elizabeth River sedimentsl Hilyard E. J., Jones-Meehan, J. M., Spargo, B. J., & Hill, R. T. llApplied and environmental microbiology.- 2008 .-V 74(4) . - P. 1176-1182.

73. In Situ Bioremediation. When does it work?llCommittee on In Situ Bioremediation. - NATIONAL ACADEMY PRESS, Washington, D.C., 1993.

74.Jacques R. Microbial consortium bioaugmentation of a polycyclic aromatic hydrocarbons contaminated soil/ Jacques, R. J., Okeke, B. C., Bento, F. M., Teixeira, A. S., Peralba, M. C., & Camargo, F. A. //Bioresource Technology.- 2008 .-V 99(7) . - P. 2637-2643.

75.Jeelani N. Individual and combined effects of cadmium and polycyclic aromatic hydrocarbons on the phytoremediation potential of Xanthium sibiricum in co-contaminated soil/ Jeelani, N., Yang, W., Qiao, Y., Li, J., An, S., Leng, X. // Int. J. Phytoremediation.-2018 .-V 20. - P. 773-779.

76.Jiao S. Biogeography and ecological diversity patterns of rare and abundant bacteria in oil-contaminated soils/ Jiao, S., Chen, W., Wei, G. // Mol. Ecol. .-2017.-V 26. - P. 5305-5317

77.Koukkou A. Hydrocarbon-degrading Soil Bacteria: Current Research/Koukkou, A. I., & Vandera, E. /Microbial Bioremediation of Non-metals: Current Research.--2011. - V1. - P. 93.

78.Kweon O. A new classification system for bacterial Rieske non-heme iron aromatic ring-hydroxylating oxygenases/O., Kweon, S. J., Kim, S., Baek, J. C., Chae, M. D., Adjei, D. H., Baek,... C. E. & Cerniglia, //.BMC biochemistry--2008. - 9(1) . - P. 11.

79.Lamberts R. Isomer-specific biodegradation of methylphenanthrenes by soil bacteria/ R. F., Lamberts, J. H., Christensen, P., Mayer, O., Andersen, &A. R. Johnsen, Environmental science & technology.--2008, . - 42(13) . - P. 47904796.

80.Larkin Rhodococcus: Genetics and Functional Genomics/M. J.,Larkin, L. A., Kulakov, &C. C. R. Allen, //(2010). In Handbook of Hydrocarbon and Lipid Microbiology Springer Berlin Heidelberg..-2010 . - P. 1345-1353

81.Lee K. Toluene and ethylbenzene oxidation by purified naphthalene dioxygenase from Pseudomonas sp. strain NCIB 9816-4/K., Lee, &D.

T.Gibson, // (1996)Applied and environmental microbiology.--1996, . -V62(9) . - P. 3101-3106

82.Li, X. Biodegradation of the low concentration of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil by microbial consortium during incubation/X., Li, X., Lin, P., Li, W., Liu, L., Wang, F.,Ma, &K. S.Chukwuka, //Journal of hazardous materials.-2009, . - V 172(2) . - P. 601-605.

83.Lors, C Evolution of bacterial community during bioremediation of PAHs in a coal tar contaminated soil/C., Lors, A., Ryngaert, F., Périé, L., Diels, &D. Damidot, //. Chemosphere.--2010, . - V81(10) . - P. 1263-1271.

84.Lladó S. Comparative assessment of bioremediation approaches to highly recalcitrant PAH degradation in a real industrial polluted soil/S., Lladó, S.,Covino, A. M., Solanas, M., Viñas, M., Petruccioli, &A. D'annibale, //.Journal of hazardous materials .-2013. - 248. - P. 407-414.

85.Marguez-Rocha F.J. Biodegradation of diesel oil in soil by a microbial consortium / F.J. Marguez-Rocha, V. Hernandez-Rodriguez, M.T. Lamela//Wat. Air Soil Polut.- 2001.- V.128.- P. 313-320.

86.Marin J. A. Bioremediation of oil refinery sludge by land farming in semiarid conditions: Influence on soil microbial activity / J.A. Marin, T. Hernandez, C. Garcia // Environ. Res. - 2005.- V.98.- №2.- P.185- 195.

87.MortazaviB. Intrinsic rates of petroleum hydrocarbon biodegradation in Gulf of Mexico intertidal sandy sediments and its enhancement by organic substrates / B. Mortazavi, A. Horel, M. J. Beazley &P. A. Sobecky // Journal of hazardous materials.- 2000. -V1. - P.234-241.

88.Nopcharoenkul W. Diesel oil removal by immobilized Pseudoxanthomonas sp. RN402. / W., Nopcharoenkul, P., Netsakulnee, &O. Pinyakong, //Biodegradation,-2012. -V1. - P. 9-11.

89.Pérez-de-Mora, A Abundance and diversity of n-alkane-degrading bacteria in a forest soil co-contaminated with hydrocarbons and metals: a molecular study on alkB homologous genes/A., Pérez-de-Mora, M., Engel, &M. Schloter, IIMicrobial ecology--2011. - V62(4) . - P. 959-972.

90.Quatrini, P Isolation of Gram-positive n-alkane degraders from a hydrocarbon-contaminated Mediterranean shorelinelP., Quatrini, G., Scaglione, C., De Pasquale, S., Riela, &A. M.Puglia, I Journal of Applied Microbiology.--2008. - V 104(1) . - P. 251-259.

91.Roy, M. meta-Cleavage of hydroxynaphthoic acids in the degradation of phenanthrene by Sphingobium sp. strain PNBIM., Roy, P., Khara, &T. K.Dutta, 11Microbiology.--2012. - V158(Pt 3) . - P. 685-695.

92.Ron, E. Z., Biosurfactants and oil bioremediationlE. Z., Ron, &E. Rosenberg, ICurrent opinion in biotechnology.--2002. - V13(3) . - P. 249-252.

93.Saul, D. J. Hydrocarbon contamination changes the bacterial diversity of soil from around Scott Base, AntarcticaID. J., Saul, J. M., Aislabie, C. E., Brown, L., Harris, &J. MFoght,. IIFEMS Microbiology Ecology.-2005. -V53(1) . - P. 141-155.

94.Shen Molecular detection and phylogenetic characterization of< i> Gordonia<Ii> species in heavily oil-contaminated soilsI Shen, F. T., Ho, M. J., Huang, H. R., Arun, A. B., Rekha, P. D., & Young, C. C. IIResearch in microbiology.-2008 .-V 159(7) . - P. 522-529.

95.Van Beilen, J. B Diversity, function, and biocatalytic applications of alkane oxygenasesIJ. B., Van Beilen, &B. Witholt, IIPetroleum microbiology ASM Press, Washington, DC USA.-2003. - V1, 317-336.

96. Vázquez, S Bacterial community dynamics during bioremediation of diesel oil-contaminated Antarctic soil/S., Vázquez, B., Nogales, L., Ruberto, E.,

Hernández, J., Christie-Oleza, Balbo, W.Mac Cormack, // (2009). Microbial Ecology.--2009.--V57(4) . - P. 598-610.

97.Widdel, F Anaerobic biodegradation of saturated and aromatic hydrocarbons/F., Widdel, &R. Rabus, //CurrentOpinioninBiotechnology.-V2001,12(3) . - P. 259-276..

Электронные ресурсы

98.Калюжин В. А. Биодеградация нефти [Электронный ресурс] :/ В. А. Калюжин /-Режим доступа: http ://www.ecoportal .ru, свободный. -Проверено: 20.04.2018.

99. Камынин Н. [Электронный ресурс] Н.Камынин/ -Режим доступа:http://www.kamynin.ru/archives/3871. свободный. - Проверено: 20.04.2018.

100. Татнефть. Нурлатское месторождение.[Электронный ресурс] : /Татнефть -Режим доступа: http://www.neftyaniki.ru/publ/russian oilfields/tatarstan respublika/n urlatskoe/26-1-0-804. свободный. - Проверено: 20.04.2018.

101. ChhatreS. Bacterialconsortisforcrudeoilspillremediation[Электронный ресурс] :/S. Chhatre, H. Purohit, R. Shanker, P. Khanna- Режим доступа: https: //doi. org/ 10.1016/S0273-1223(96)00713-5. свободный. -Проверено: 20.04.2018.

102. Rudyk S.Relationships Between SARA Fractions Of Conventional Oil, Heavy Oil, Natural Bitumen And Residues[Электронныйресурс] :/ S.Rudyk -Режимдоступа:https://doi.org/10.1016/j.fuel.2017.12.001.свободный. -.Проверено: 20.04.2018.