Фармакогностическое исследование и стандартизация перспективного лекарственного растительного сырья – «Цветки с листьями» видов рода Боярышник (Crataegus L.) флоры Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Сагарадзе Валентина Андреевна

• Сагарадзе Валентина Андреевна
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Сагарадзе Валентина Андреевна

Список сокращений

Введение

Глава 1. Современное состояние исследований рода Crataegus L

1.1. Боярышник в медицине и фармации в РФ и за рубежом. Фармакопейные виды боярышника, виды ЛРС боярышника

1.2. Лекарственные препараты и БАДы к пище на основе ЛРС боярышника (состав, показания к применению), отечественные препараты

1.3. Род Crataegus

1.3.1. Систематическое положение, биологические и ботанические особенности видов, произрастающих в РФ

1.3.2. Ареалы и ресурсы боярышников на территории РФ

1.3.3. Биологические и ботанические особенности боярышников

1.4. Фитохимический состав и методы анализа ЛРС боярышника

1.4.1. Химический состав БАВ растений рода Crataegus

1.4.2. Биологическая активность и фармакологические свойства активных веществ сырья боярышника

1.4.3. Методы экстракции, очистки, выделения и анализа флавоноидов в растительных объектах (препаратах)

1.4.4.1. Пробоподготовка

1.4.4.2. Методы анализа действующих веществ в сырье боярышника и препаратах

1.4.4. Фармакопейные требования, стандартизация сырья боярышника

Заключение к главе

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Материалы исследования

2.1.1. Партии сырья боярышника

2.1.2. Партии вероятных органических примесей в сырье «Боярышника цветки с листьями»

2.1.3. Стандартные образцы БАВ

2.1.4. Реактивы

2.2. Методы исследования

2.2.1. Критерии подлинности растительного сырья «Боярышника цветки с листьями»

2.2.1.1. Микроскопический анализ

2.2.1.2. Палиноморфологический анализ

2.2.1.3. Методика качественного определения флавоноидов

2.2.2. Методы изучения основных числовых показателей растительного сырья «Боярышника цветки с листьями»

2.2.2.1. Методика определения фракционного состава сырья и коэффициента усушки

2.2.2.2. Методика общих числовых показателей и технологических параметров сырья

2.2.2.3. Методика количественного определения суммы флавоноидов в сырье «Боярышника цветки с листьями»

2.2.2.4. Методика качественного и количественного ВЭЖХ-определения флавоноидов (гиперозида, витексина, рутина и кверцетина) в сырье «Боярышника цветки с листьями»

2.2.2.5. Методика твердофазной экстракции (концентрирования) флавоноидов (гиперозида, витексина, рутина и кверцетина) из настойки боярышника

2.3. Методы статистической обработки результатов исследования

Глава 3. Изучение флавоноидов сырья «Боярышника цветки с листьями»

3.1. Спектрофотометрическое изучение сырья «Боярышника цветки с листьями»

3.1.1. Выбор условий спектрофотометрического определения

3.1.2. Влияние фракционного состава сырья на результат спектрофотометрического определения

3.1.3. Сравнительное спектрофотометрическое изучения сырья «Боярышника цветки с листьями» различных видов рода

3.2. Разработка методики ВЭЖХ - определения витексина, кверцетина, гиперозида и рутина

3.2.1. Подбор режима элюирования

3.2.2. Выбор длины волны для детектирования

3.2.3. Валидация хроматографической методики определения

3.3. Количественный анализ витексина, рутина, гиперозида и кверцетина в сырье «Боярышника цветки с листьями»

3.4. Сопоставление результатов ВЭЖХ-УФ и СФМ

3.5. Количественный анализ витексина, рутина, гиперозида и кверцетина в лекарственных препаратах и БАДах из ЛРС Боярышника

73

3.5.1. Подбор условий концентрирования флавоноидов из спиртовых извлечений боярышника (настойки) на обращенно-фазовом сорбенте (ТФЭ)

Выводы к главе

Глава 4. Сравнительное морфолого-анатомическое изучение сырья «Боярышника цветки с листьями» разных видов рода

4.1. Внешние (макроскопические) признаки листьев боярышника

4.2. Микроскопические признаки ЛРС «Боярышника цветки с листьями» боярышника и возможных органических примесей

4.3. Микроскопические признаки пыльцы боярышника и вероятных примесей

4.4. Некоторые количественные характеристики анатомических признаков листовой пластинки боярышников

Выводы к главе

Глава 5. Стандартизация сырья «Боярышника цветки с листьями»

5.1. Разработка критериев подлинности сырья «Боярышника цветки с листьями

5.1.1. Внешние (макроскопические) признаки цельного сырья

5.1.2. Внешние (макроскопические) признаки измельченного сырья

115

5.1.3. Внешние (макроскопические) признаки порошка сырья

5.1.4. Обнаружение групп БАВ цветков с листьями боярышника

5.1.4.1. Качественные реакции на присутствие флавоноидов

5.1.4.2. Обнаружение флавоноидов хроматографическими методами

5.1.5. Качественные реакции на другие группы БАВ

5.2. Определение числовых показателей сырья «Боярышника цветки с листьями»

5.2.1. Определение коэффициентов усушки различных видов сырья боярышника

5.2.2. Изучение состава сырья «Боярышника цветки с листьями

5.2.3. Определение показателей влажности и зольности растительного сырья «Боярышника цветки с листьями»

5.2.4. Фармакопейные показатели для включения в проекты НД на сырье «Боярышника цветки с листьями»

5.2.5. Изучение технологических параметров сырья «Боярышника цветки с листьями»

Выводы к главе

Общие выводы

Список литературы

ПРИЛОЖЕНИЯ

Благодарности

Список сокращений

АПФ - ангиотензин-превращающий фермент

API - active pharmaceutical ingredient (активная фармацевтическая субстанция) БАВ - биологически активные вещества БАД - биологически активная добавка

ВЭЖХ-УФ - Высокоэффективная жидкостная хроматография со

спектрофотометрическим детектированием

ВЭТСХ - Высокоэффективная тонкослойная хроматография

ГБС РАН - Главный ботанический сад имени Н. Н. Цицина Российской

академии наук

ГРЛС - Государственный реестр лекарственных средств ГСО - государственный стандартный образец ГФ - Государственная Фармакопея

ГФ РБ - Государственная Фармакопея Республики Беларусь ГФ КР - Государственная Фармакопея Республики Казахстан ДФУ- Державна фармакопеея Укра('ни (Государственная Фармакопея Украины)

ЖЖЭ - Жидкость-жидкостная экстракция

КузБС ИЭЧ ФИЦ УУХ СО РАН - Кузбасский ботанический сад Института

экологии человека Федерального исследовательского центра угля и

углехимии Сибирского отделения Российской академии наук

ЛП - листовая пластинка

ЛРС - лекарственное растительное сырьё

ЛС - лекарственное средство

НД - нормативная документация

ПФ - подвижная фаза

ПЭГ- полиэтиленгликоль

РФ - Российская Федерация

СО - стандартный образец

ТУ - технические условия ТСХ - тонкослойная хроматография ТФЭ - твердофазная экстракция УК - устьичный комплекс

СФМ - спектрофотометрия ультрафиолетовой области

УЭЖХ - ультраэффективная жидкостная хроматография

ФС - фармакопейная статья

AHP - American Herbal Pharmacopoeia

BP - British Pharmacopoeia

ChP- Chinese Pharmacopoeia

EP - European Pharmacopoeia

GBIF - Global Biodiversity Information Facility

JP - Japanese Pharmacopoeia

USP - United States' Pharmacopoeia

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое исследование и стандартизация перспективного лекарственного растительного сырья – «Цветки с листьями» видов рода Боярышник (Crataegus L.) флоры Российской Федерации»

Введение

Актуальность темы. На современном этапе развития мировой и российской медицины наблюдается тенденция к расширению ассортимента фитопрепаратов. Повышение спроса на лекарственные препараты растительного происхождения объясняется их способностью оказывать мягкое комплексное воздействие на организм при низкой вероятности возникновения побочных эффектов, что позволяет применять их при хронических заболеваниях.

Разработка новых отечественных конкурентоспособных импортозамещающих лекарственных средств не только синтетического, но и растительного происхождения является одним из приоритетных направлений в фармацевтической практике. В этой связи актуальными задачами стали поиск новых видов ЛРС, совершенствование технологии их получения, а также комплексное использование органов и частей официнальных производящих растений, широко произрастающих во флоре России.

ЛРС, заготавливаемое от некоторых представителей рода боярышник, занимает существенное место среди природных источников препаратов комплексного кардиотонического, антиаритмического и гипотензивного действия. Многолетний опыт изучения и использования препаратов на основе ЛРС боярышника, а также положительные результаты клинических исследований способствовали их широкому применению в мировой медицинской практике [1-3]. Основными видами ЛРС боярышника, согласно зарубежным фармакопеям являются: «Цветки с листьями», «Плоды», «Листья» и «Цветки». В РФ фармакопейный статус из них имеют только два вида ЛРС: «Боярышника плоды» [4,5] и «Боярышника цветки» [4,6]. Такой вид сырья как «Боярышника цветки с листьями» не является официнальным ЛРС. Вместе с этим, по нашим данным, фактически имеется на российском фармацевтическом рынке под названием «Боярышника цветки», как за счет импорта, так и за счет выпуска некоторыми отечественными производителями.

Кроме того, несмотря на большое видовое разнообразие рода, в зарубежные Фармакопеи включено небольшое количество видов боярышника, относящихся к секции Crataegus, ареал которой занимает территорию Европы, Юго-западной и Центральной Азии. В РФ ареалы этих видов, по сравнению с ареалами видов секции Sanguineae, представители которой распространены в азиатской части нашей страны, невелики. В нашей стране нормативная база для стандартизации отечественного сырья «Боярышника цветки с листьями» в данный момент отсутствует, поэтому очевидна необходимость всестороннего изучения такого перспективного вида сырья и разработка соответствующей НД, актуализированной в соответствии с высокими требованиями фармакопейных стандартов к качеству и с принципами современной стандартизации продукции растительного происхождения.

Степень разработанности темы. Основные результаты фармакогностического исследования ЛРС дикорастущих и культивируемых видов боярышника (цветки, плоды) за последние 50 лет изложены в работах Самылиной И.А, Киселевой Т.Л., Евдокимовой О.В., Куркина В.А. Анализ литературы показал растущий интерес к изучению таких видов сырья как: «Боярышника листья» и «Боярышника цветки с листьями», как в России [713], так и за рубежом [14-21]. За рубежом данные виды сырья имеют фармакопейный статус, а содержание в них БАВ, обеспечивающих фармакологические эффекты, является объектом постоянного внимания исследователей.

Вместе с тем, в РФ публикаций по сравнительному фармакогностическому изучению цветков и листьев боярышника с учетом видового разнообразия и вариабельности индивидуальных флавоноидов в настоящее время немного [10,11,22-24]. Сведений о сравнительном фармакогностическом изучении цветков и листьев боярышника нами в литературе не обнаружено. Согласно данным литературы, экстракты из цветков и листьев боярышника имеют сходную фармакологическую активность, что позволяет рекомендовать их использование как по отдельности, так и в виде комплексного сырья в РФ.

Цель исследования - фармакогностическое изучение перспективного лекарственного растительного сырья «Боярышника цветки с листьями» различных видов рода Crataegus флоры РФ и его стандартизация.

Задачи исследования.

1. Разработать технологию получения нового отечественного вида сырья «Боярышника цветки с листьями», представляющего собой цветущие неодревесневшие побеги дикорастущих растений рода Боярышник флоры РФ;

2. Разработать и валидировать методики количественного определения флавоноидов в сырье «Боярышника цветки с листьями»;

3. Провести сравнительное исследование флавоноидов в цветках с листьями растений рода Crataegus, широко произрастающих во флоре РФ;

4. Провести сравнительное морфолого-анатомическое изучение сырья «Боярышника цветки с листьями» исследуемых видов и возможных органических примесей в нем с целью установления диагностических признаков;

5. Разработать методики установления подлинности и показатели качества сырья для включения в проект НД «Боярышника цветки с листьями».

Научная новизна. Разработана технология получения нового вида растительного сырья в виде проекта «Инструкция по сбору и сушке ЛРС «Боярышника цветки с листьями». Получены новые данные об уровнях содержания флавоноидов (витексин, рутин, гиперозид, кверцетин) в сырье «Боярышника цветки с листьями» для 15 видов и одного гибрида рода Crataegus флоры России с применением современных физико-химических методов: ВЭЖХ-УФ, ТСХ и спектрофотометрия. Разработана и валидирована методика анализа витексина, рутина, гиперозида, кверцетина с использованием ВЭЖХ-УФ.

Разработаны новые критерии для установления подлинности нового вида ЛРС «Боярышника цветки с листьями» с использованием палиноморфологического и сравнительного морфолого-анатомического методов. Разработаны методики для выявления вероятных органических примесей в перспективном сырье «Боярышника цветки с листьями».

Выполнены исследования, необходимые для обоснования методов

установления подлинности, контроля чистоты и качества сырья в проекте НД на новую для РФ продукцию медицинского применения «Боярышника цветки с листьями».

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результатов обоснованы стадии технологии получения, выработаны подходы к стандартизации сырья и разработаны разделы проекта НД на новый экономически перспективный вид ЛРС «Боярышника цветки с листьями». Представленная в работе методология исследования флавоноидов в ЛРС включена в курс лекций и практических занятий по и фармакогнозии ФГБОУ ВО «Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова».

Методология и методы исследования. Методология исследования основывается на анализе данных литературы, оценке степени изученности данной темы, постановке цели и задач исследования по фармакогностическому изучению нового вида сырья «Боярышника цветки с листьями» различных видов рода Боярышник, произрастающих в России. В ходе исследования были применены следующие методы анализа: ТСХ, ВЭЖХ, спектрофотометрия, микроскопия, гравиметрия, математические и информатические методы обработки результатов. Положения, выносимые на защиту

1. Теоретическое обоснование и экспериментальное подтверждение возможности расширения ресурсной базы видов боярышника для получения ЛРС.

2. Результаты исследования содержания витексина, рутина, гиперозида и кверцетина в сырье 15 видов и одного гибрида боярышника.

3. Результаты сравнительного морфолого-анатомического изучения цветков с листьями боярышников и возможных органических примесей.

4. Валидированная методика ВЭЖХ-анализа для контроля содержания гиперозида, рутина, кверцетина и витексина в ЛРС «Боярышника цветки с листьями».

5. Нормы показателей чистоты и качества нового перспективного вида отечественного сырья «Боярышника цветки с листьями».

Степень достоверности. Определение видов рода Crataegus, от которых были получены опытные партии сырья для последующего фармакогностического изучения, проведено монографом рода - Уфимовым Р. А. и соответствует «Международному кодексу ботанической номенклатуры» [25,26].

Для оценки степени достоверности измерений, показателей точности и характеристик погрешности руководствовались рекомендациями ГФ XIV. Количество измерений для расчета аналитических характеристик соответствовало рекомендациям ГФ XIV, «Руководству по валидации методик анализа лекарственных средств (Методические рекомендации)» [6,27]. Статистическая обработка результатов измерений проводилась согласно требованиям ГФ с использованием программ МС Excel и Rstudio.

Апробация результатов. Результаты работы представлены на Международной' научно-практической конференции: «От растения к препарату: традиции и современность» (к 95-летию со дня рождения проф. А. И. Шретера), ФГБНУ ВИЛАР, Москва, 2014 г.; на научно-практической конференции с международным участием «Молодые ученые и Фармация XXI века», ФГБНУ ВИЛАР, Москва, 2014, 2015 г.г. Москва; на Международной' научной' конференции «SCIENCE4HEALTH», РУДН, Москва, 2013, 2015 г.г., (на английском языке); на Международном молодежном научном форуме «Ломоносов-2015», МГУ имени М.В. Ломоносова, Москва, 2015 г.; на IX Международном симпозиуме «Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты», Институт физиологии растений РАН, Москва, 2015 г.; на Международной конференции аспирантов «PhD Scientific Days 2016 Conference», Будапешт, Венгрия, 2016 г.; на Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», СПФХА, Санкт-Петербург, 2017 г.; на Международной научной конференции «Роль ботанических садов и дендрариев в сохранении, изучении и устойчивом использовании разнообразия растительного мира», посвященной 85-летию Центрального ботанического сада Национальной академии наук Беларуси, Минск, 2017 г.

Внедрение результатов исследования. Разработанная методика ВЭЖХ-УФ определения флавоноидов используется для контроля качества сырья и препаратов боярышника в ИЛ ГБУЗ «ЦЛОДЗМ» и ФГБНУ ВИЛАР. Результаты фитохимических и морфо-анатомических исследований используются в учебном процессе кафедры фармацевтической химии, фармакогнозии и организации фармацевтического дела ФГБОУ ВО «Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова».

Публикации материалов исследования. Основное содержание диссертационной работы опубликовано в 16 печатных работах, включая 4 статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией при Минобрнауки России, из них 2 статьи в журналах, входящих в международную реферативную базу данных и систем цитирования (Scopus, Web of Science).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертационной работы соответствуют формуле специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия, пунктам 2, 3, 5, 6 и 7 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Объем и структура диссертации. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 194 страницах машинописного текста, содержит 26 таблиц, 64 рисунка, состоит из оглавления, списка сокращений, введения, 5-ти глав, общих выводов, 31 приложения и списка литературы, включающего 176 источников, в т. ч. 106 на иностранных языках.

Личный вклад автора. Вклад автора является определяющим на всех этапах фармакогностического исследования. В работах, проведенных с соавторами, автор принимала непосредственное участие в выполнении экспериментальной части, в научном аргументировании и резюмировании полученных результатов.

Глава 1. Современное состояние исследований рода Crataegus L.

1.1. Боярышник в медицине и фармации в РФ и за рубежом. Фармакопейные виды боярышника, виды ЛРС боярышника

ЛРС боярышника на протяжении многих лет разрешено к медицинскому использованию по всему миру. Цветки, листья, плоды, цветки с листьями («Folium cum flore») включены в Европейскую, Американскую, Канадскую, Бразильскую Фармакопеи, а также в Фармакопеи некоторых стран СНГ (Украина, Беларусь, Казахстан) [28-33] (Таблица 1).

Таблица 1. Виды сырья боярышника в Фармакопеях разных стран мира

Страна Фармакопея Вид ЛРС

Россия ГФ РФ XI, XIV Цветки, плоды

Украина ДФУ 2.0 Цветки с листьями, плоды,

Беларусь ГФ РБ Цветки с листьями, плоды, листья, цветки

Казахстан ГФ КР Цветки с листьями, плоды

Евросоюз EP Цветки с листьями, плоды

Бразилия Farmacopeia Brasileira ed. 5. V.2 Цветки с листьями, плоды

США Американская фармакопея трав USP32-NF27 Цветки с листьями, плоды

Китай ChP, 2005 Листья, плоды

Япония JP XVI Плоды

Как видно из таблицы, в большинстве стран официнальными видами сырья являются «Боярышника плоды» и «Боярышника цветки с листьями». Некоторые Фармакопеи разрешают использовать сырье «Боярышника листья», которое применяют для получения лекарственных препаратов во Франции, Бельгии, Польше, Германии, Болгарии, Израиле и Китае [8,34].

В России фармакопейный статус имеют цветки и плоды боярышника [4], однако в ГФ XIII статьи на сырье боярышника не вошли. Был предложен проект статьи на «Боярышника плоды», но не реализован в итоговом тексте.

Статьи на цветки и плоды боярышника были вновь включены в ГФ уже XIV издания [6].

1.2. Лекарственные препараты и БАДы к пище на основе ЛРС боярышника (состав, показания к применению), отечественные

препараты

ЛРС боярышника входит в состав многих ЛС, которые применяются для профилактического лечения или сопутствующей терапии при хронической сердечной недостаточности I-III функционального класса (New York Heart Association (NYHA) Functional Classification), включающей следующие показания: ишемическая болезнь сердца, мерцательная аритмия, пароксизмальная тахикардия, повышенное артериальное давление, а также ангионевроз, бессонница и атеросклероз [1-3,35]. Эффективность применения экстрактов из сырья боярышника, в частности, стандартизованных экстрактов WS 1442 и LI123 из цветков с листьями C. laevigata, содержащих 188 г/кг олигомерных процианидинов и 22 г/кг флавоноидов, была показана в многочисленных клинических плацебо-контролируемых исследованиях [36]. Были отмечены положительные эффекты препаратов из сырья боярышника по сравнению с плацебо: увеличение силы сокращения миокарда и, как следствие, сердечного выброса, уменьшение одышки и потребности миокарда в кислороде [37,38], снижение артериального давления (в долгосрочном периоде). Препараты из сырья боярышника обладают выраженными антиоксидантными [8,39], кардиопротекторными [40,41] свойствами.

За рубежом на сегодняшний день производители предлагают широкий ассортимент препаратов и БАД к пище из различных сырьевых частей растений этого рода (цветки, листья побеги; плоды) [42]. В Европейскую Фармакопею включены следующие экстракционные препараты цветков с листьями боярышника: настой, настойка, сухой экстракт и жидкий экстракт стандартизованный (Таблица 2). Экстракты из сырья боярышника

востребованы и в парафармацевтическом сегменте - в производстве косметических гелей и кремов [43].

Таблица 2. Состав эктрактивных препаратов из цветков с листьями боярышника по данным литературы

^"Условия получения Препарэт/фарм. субстанция Соотношен ие сырье/ экстрагент Экстрагент Норма содержания БАВ по ЕРh 7.0 [30]

Настой 1:100 вода -

Экстракт сухой [31] 4-7:1 вода или 45% (v/v) этанол -водный экстракт: не менее 2,5 % флавоноидов в пересчете на гиперозид -водно-спиртовой: не менее 6,0% флавоноидов в пересчете на гиперозид

Экстракт сухой стандартизованы ый ^ 1442) [3] 4-7:1 45% этанол Не менее 18,8 % олигомерных процианидинов

Экстракт жидкий стандартизованн ый [30,31] 4-7:1 От 30% до 70% (v/v) этанол не менее 0,8 %-3,0% флавоноидов в пересчете на гиперозид

На отечественном фармацевтическом рынке реализуется ЛРС боярышника в виде продукции цельного - плоды, измельченного сырья -порошок цветков, порошок плодов «Ангро» и дозированного в фильтр-пакет для домашнего изготовления настоя [44,45].

Как правило, продукция измельченного сырья «Боярышника цветки» стандартизуется в соответствии с требованиями ТУ, и, таким образом, является БАД к пище. Вместе с тем, эта продукция представляет собой смесь цветков и листьев боярышника. При этом нами установлено, что содержание

листовой фракции превышает норму, установленную в ГФХ1 (не более 6 %)

[4].

В РФ ЛРС боярышника поступает на производство и используется при получении настоек и экстрактов. В Государственном реестре лекарственных средств [46] зарегистрированы: фармацевтическая субстанция (API) - сухой экстракт плодов боярышника; 37 наименований настойки из плодов боярышника; комбинированные препараты, в состав которых входит жидкий экстракт плодов боярышника («Фито Ново-Сед», «Кардиовален») или настойка плодов боярышника («Валедимин», «Броменвал»); а также зарубежные препараты на основе экстракта сухого стандартизованного из ЛРС «цветки с листьями» боярышника - «Крегиум» (Германия) [46]. На российском рынке представлен большой ассортимент БАД к пище с экстрактом плодов, листьев и цветков боярышника в таблетках, капсулах, эликсирах и каплях преимущественно зарубежного производства.

1.3. Род Crataegus

1.3.1. Систематическое положение, биологические и ботанические особенности видов, произрастающих в РФ

Растения рода Боярышник (Crataegus L.) согласно традиционной классификации по строению цветка и плода относятся к семейству Розоцветных (Rosaceae Juss.), подсемейству Яблоневых (Maloideae) [47]. По новой филогенетической классификации на основе данных современных исследований нуклеотидных последовательностей ядерных ДНК и ДНК хлоропластов род Crataegus был отнесен к подтрибе Pyrinae Dumort., трибе Pyreae Burnett, подсемейству Spiraeoideae Arn. [48].

Видовой состав рода Crataegus L. в различных источниках трактуется неоднозначно, ввиду его многочисленности и широкой географии распространения. В литературе встречаются разные подходы к определению

объема вида и системы рода [26,49,50]. Затрудняет определение видового или внутривидового положения и высокая степень полиморфности представителей рода, обусловленная частой гибридизацией, наличием полиплоидов и их способностью к апомиксису [51-53].

В настоящее время продолжается работа по уточнению системы рода Боярышник, в том числе с использованием современных молекулярно-генетических методов (РНК, ДНК-секвенирование, баркодинг) [54,55].

По современным оценкам род Crataegus насчитывает приблизительно 250 видов, большинство из которых (около 200) растут в Северной Америке, а остальные - распространены в Старом Свете [49,56-58] (Рисунок 1.).

Рисунок 1 Распространенность представителей рода Crataegus L. [59] .

Между тем, морфологический подход остается основным в систематике рода. В ряде работ показано, что на основании морфологических признаков листьев и плодов большинство видов рода объединяются в более крупные группы - секции. Кроме того, они совпадают и с географическими зонами [26] (Таблица 3).

Таблица 3. Основные секции рода Crataegus [26,49]

Секция Crataegus Sanguineae Coccineae [60](Americanae

Признак El Gazzar Sect.)*

Географическая Европа, Азия, восточная часть

зона Западная и центральная Северной

Средняя Азия Европа Америки

Основные виды C. monogyna C. sanguinea С. molis

C. lasiocarpa C. maximowiczii C. submolis

C. rhipidophylla C. korolcowii C. macrocantha и

C. ambigua C. chlorocarpa др.

С. pentagyna и C. dahurica

др. C. chlorosarca и др.

*названия по разным источникам

1.3.2. Ареалы и ресурсы боярышников на территории РФ

На территории Российской Федерации произрастает около 40 видов дикорастущих боярышников, встречающихся в восточных районах лесной, лесостепной и степной зон европейской части, а также в Западной и Восточной Сибири, включая Забайкалье [8,26]. В азиатской части страны преобладает секция Sanguineae. Наиболее распространенным ее представителем является боярышник кроваво-красный (C. sanguinea Pall.), растущий в Сибири, на востоке европейской части страны, в Заволжье, на Среднем и Южном Урале, Алтае. Основные запасы этого вида сосредоточены в Алтайском и Красноярском краях, Новосибирской, Кемеровской, Иркутской, Курганской, Омской, Оренбургской и Тюменской областях [51,61]. Растет одиночно или небольшими группами в поймах рек, на лугах и лесных опушках, в разреженных лесах. В эту же секцию входят алтайско-центральноазиатские

виды: б. Королькова (С. korolkowii L. Henry)1 и б. желтоплодный (С. chlorocarpa Lenne et C.Koch.); б. Максимовича (С. maximowiczii C.K. Schneid.), произрастающий в Восточной Сибири, а также в Забайкалье, Приамурье и Приморье. Растет одиночно или группами в долинах рек, на склонах гор и увалов, на лесных опушках [51,62,63]. В центральной Сибири, Приамурье и Приморье распространены виды б. даурский (С. dahurica koechne ex Schneid.) и б. перистонадрезанный (С. pinnatifida Bge.) [64]. В долинах рек, в нижней части горных склонов и подлеске лиственных лесов Дальнего Востока, Камчатки и о. Сахалин произрастает б. зеленомясый (С. chlorosarca Maxim.) [62,63]. В южной части о. Сахалин произрастает б. иозанский (С. jozana C.K. Schneid.)

Различные виды боярышника секции Сrataegus сосредоточены в средней полосе европейской части РФ, на Кавказе, в Краснодарском и Ставропольском крае, в Крыму. Основным представителем этой секции является б. однопестичный (С. monogyna Jacq.). Сюда же относятся б. пятипестичный (С. pentagyna Waldst. et Kit.), отогнуточашелистиковый (С. curvisepala Lindm.) [65,66], б. вееролистный (С. rhipidophylla Gand.) [67], б. восточный (С. orientalis Pall. Ex M. Bieb.), б. сглаженный (С. laevigata Poir.), а также эндемик Поволжья - б. волжский (С. volgensis Pojark.) и другие европейские виды (С. pallasii) и их гибриды.

Боярышники не требуют специального ухода, теневыносливы и морозоустойчивы, а также неприхотливы к почве и условиям рельефа, поэтому широко используются в декоративном садоводстве, в полезащитных полосах и в ландшафтных парках, в том числе и для закрепления склонов оврагов и берегов водоемов. Некоторые крупноплодные виды боярышника, в частности американские, используются как пищевые культуры [68], а также некоторыми исследователями представляются перспективными для заготовки ЛРС [69,70].

1 ^Mae^s wattiana Hemsl.&Lace [175].

Однако, на данный момент сырьевая база этих видов боярышника недостаточна для промышленных нужд: американские виды боярышника, как правило, встречаются в ботанических садах и на городских улицах, где заготовка ЛРС не разрешена, а специализированные плантации отсутствуют.

На сегодняшний день значительная часть сведений о ресурсах боярышника устарела. В связи с сокращением заготовок сырья «Боярышника цветки» [8,65,71] новые ресурсоведческие исследования для данного вида сырья не проводились. По немногочисленным современным данным определены запасы дикорастущего ЛРС боярышника (плоды) в количестве, достаточном для обеспечения нужд местного населения отдельных регионов [8,66,72].

1.3.3. Биологические и ботанические особенности боярышников

Боярышники - крупные многоствольные кустарники или небольшие деревья (5-8 м) с крепкими прямыми или изогнутыми побегами. Стволы и многолетние побеги боярышника имеют гладкую коричневую или серую поверхность и, как правило, покрыты острыми колючками побегового происхождения [51].

Как было упомянуто в пункте 2.1, некоторые морфологические признаки боярышников сильно варьируют от вида к виду, поэтому для удобства ботанические особенности представлены по секциям в Таблице 4.

Таблица 4. Морфологические признаки растений секций рода Боярышник [26]

Секция Признак Crataegus Sanguineae Americanae

лист Глубоко рассеченные Лопастные/ Слаболопастные/Цельные

Жилки в лопастях и в выемках Отсутствуют жилки, направленные в выемки между лопастями

Прилистники Не опадают Не опадают быстро опадают

Цветок 20 тычинок 20 тычинок 10 - 20 тычинок

Колючки Олиственные Безлистные Есть 1-2 см[51] отсутствуют Средней длины Отсутствуют 6-12 см[51]

Листья простые черешковые с прилистниками, располагаются на побегах очередно и в зависимости от вида могут иметь различную форму: от ромбической до широкояйцевидной. Листовая пластинка может быть цельной, трехлопастной или перистораздельной, реже цельной с зубчатым краем [26,51,73]. Форма листьев на крупных ростовых и укороченных генеративных побегах может различаться, поэтому при определении вида имеет значение форма листьев с цветоносных ветвей [26]. Листья и побеги у некоторых видов боярышника имеют опушение, которое может редеть в течение вегетационного периода [26].

Цветки боярышника белые или розовато-белые, обладают специфическим запахом. От 5 до 30 цветков образуют ботрические соцветия (щиток). Строение цветка типичное для представителей семейства Rosaceae: двойной пятичленный актиноморфный околоцветник и вогнутый гипантий, образованный в результате срастания оснований тычинок, лепестков и чашелистиков между собой. Пестик состоит из 1-5 плодолистиков [42,49]. Форма чашелистиков имеет диагностическое значение при определении вида [26,49].

Плоды сочные яблокообразные с деревянистым эндокарпом, сочным мезокарпом (костянковое яблоко). Экзокарп тонкий, кожистый может иметь

желтую, оранжевую, розовую, красную, пурпурную, зеленовато-желтую, коричневую, фиолетовую или черную окраску и иногда опушение. Мезокарп также различается по цвету: желтый, зеленый или красный. По количеству (15) и форме косточек также определяют видовую принадлежность [74]. Размер плодов варьирует по видам от 7 мм до 30 мм [26].

Следует отметить, что размеры листьев, цветков, плодов боярышников секций Crataegus и Sanguineae относительно меньше, чем у большинства представителей секции Americanae.

У европейских и азиатских видов колючки мелкие или совсем отсутствуют, в отличие от североамериканских [49,51]. У многих видов европейских видов (секция Crataegus) встречаются верхушечные олиственные колючки, которые у большинства представителей секции Sanguinea не отмечены [26].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сагарадзе Валентина Андреевна, 2019 год

- 72 с.

52. Летухова В.Ю., Потапенко И.Л. Новые данные о численности Боярышников (Crataegus) в Карадагском природном заповеднике // Экосистемы, их оптимизация и охрана. - 2013. - №. 9. - С. 125-133.

53. Calvo J., Ufimov R., Aedo C. (2347) Proposal to conserve the name Crataegus laciniata (Rosaceae) with a conserved type. //Taxon. - 2015. - Vol. 64.

- № 1. P. 175-176.

54. Zarrei M. et al. DNA barcodes from four loci provide poor resolution of taxonomic groups in the genus Crataegus // AoB Plants. - 2015. -Vol. 7. - P. 1-19.

55. Phipps J.B. Critical taxa in Crataegus series molles (Rosaceae): typifications, new combinations, and taxonomic review // Phytoneuron. - 2012. - Vol. 78. -P. 123.

56. Kumar D. et al. The genus Crataegus: Chemical and pharmacological perspectives // Revista Brasileira de Farmacognosia. - 2012. - Vol. 22. - № 5. - P. 1187-1200.

57. Edwards J.E. et al. A review of the chemistry of the genus Crataegus // Phytochemistry. - 2012. - Vol. 79. - P. 5-26.

58. Уфимов Р. А. Заметки о роде Crataegus L. (Rosaceae) //Новости систематики высших растений. - 2013. - Т. 44. - C. 113-125.

59. Crataegus. GBIF Crataegus L. [Electronic resource]. - URL: https://www.gbif.org/species/3013395 (accessed: 20.01.2018).

60 Lund J.A. Methods for differentiation and phytochemical investigation of Crataegus by Nuclear Magnetic Spectroscopy. Master of Science Thesis: Biochemistry and Molecular Biology / Jensen Allan Lund. - Okanagan, 2016. - 156 p.

61. Атлас лекарственных растений России / под общ. ред. Быкова В.А. - М.: Щербинская типография, 2006. - 352 с.

62. Мухаметова С.В. Виды Боярышника азиатской флоры в Среднем Поволжье // XII Международная научно-практическая конференция Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии». - 2013. - P. 129-132.

63. Лобанов А.И., Кириенко М.А. Особенности сезонного развития растений рода Crataegus L. в условиях Красноярской лесостепи // Вестник КрасГАУ. - 2015. - № 2. - C. 118-123.

64. Zyryanova O.A. et al. Problems in the maintenance and sustainable use of forest resources in Priamurye in the Russian Far East // Eurasian Journal of Forest Research. - 2005. - Vol. 8. - № 1. - P. 53-64.

65. Киселева Т.Л. Изучение химического состава нефармакопейных видов боярышника и разработка показателей качества сырья: дис. ... канд. фарм.наук: 14.04.02/ Киселева Татьяна Леонидовна. - М., 1988. - 225 c.

66. Омариева Л.В. Накопление биологически активных веществ в плодах представителей семейства Rosaceae (на примере рода Crataegus) республики Дагестан в зависимости от экологических факторов: автореф. дисс. ... канд. биол. наук: 03.02.14 / Омариева Луиза Ванатиевна. - Владикавказ, 2016. - 24 с.

67. Christensen K.I., Zielinski J. Notes on the genus Crataegus (Rosaceae-Pyreae) in Southern Europe, the Crimea and Western Asia // Nordic Journal of Botany. - 2008. - Vol. 26. - № 5-6. - P. 344-360.

68. Кривова Л.П., Горелова Е.Ю. Использование нетрадиционного сырья для производства маффинов // Современное хлебопекарное производство: Перспективы развития. Сборник научных трудов XVI Всероссийской заочной научно-практической конференции, Екатеринбург, 29 апреля 2015 г. - C. 7883.

69. Чукуриди С.С. Практическая ценность интродуцентов семейства Rosaceae // Научный журнал КубГАУ. - 2004. - Т. 4. - С. 1-19.

70. Бакшутов С.А., Сорокопудов В.Н., Навальнева И.А. Биологически

активные вещества плодов видов рода Crataegus в условиях Белогорья // Научные ведомости. Серия Естественные науки. 2011. - Т. 9(104). - № 15/2. -С. 266-270.

71. Гончаров Н.Ф., Михайлов И.В., Гончаров Н.Н. Гидроксикоричные кислоты цветков и листьев нефармакопейных видов рода Боярышник // Фундаментальные исследования. - 2011. - Т. 9. - С. 146-148.

72. Немерешина О.Н., Гусев Н.Ф. К вопросу о ресурсных запасах и возможностях интродукции лекарственных растений в условиях степного Предуралья // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2006. - Т. 1. - № 9-1. - С. 26-29.

73. Муравьева Д.А., Самылина И.А. Яковлев Г.П. Фармакогнозия. М.: "Медицина," 2002. - 654 с.

74. Phipps J.B. A Review of Hybridization in North American Hawthorns. Another Look "The Crataegus Problem" // Annals of the Missouri Botanical Garden. - 2005. - Vol. 92. - P. 113-126.

75. Сидора Н.В., Ковалева А.М., Авидзба Ю.Н. Алифатические, фенолкарбоновые и гидроксикоричные кислоты цветков видов рода боярышник секции Oxyacantha L. // Сборник материалов IX Международного симпозиума Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты. - 2015. - P. 652-657.

76. Weon J.B., Jung Y.S., Ma C.J. Quality Analysis of Chlorogenic Acid and Hyperoside in Crataegi fructus // Pharmacognosy magazine. - 2016. - Vol. 12. - № 46. - P. 98-103.

77. Kuczkowiak U., Petereit F., Nahrstedt A. Hydroxycinnamic acid derivatives obtained from a commercial Crataegus extract and from authentic Crataegus spp. // Scientia pharmaceutica. - 2014. - Vol. 82. - № 4. - P. 835-846.

78. Liu P. Composition of Hawthorn (Crataegus spp .) fruits and leaves and Emblic leafflower (Phyllanthus emblica) fruits. PhD Thesis. - Turku, 2012. - 96 p.

79. Lin Y., Vermeer M.A., Trautwein E.A. Triterpenic acids present in Hawthorn lower plasma cholesterol by inhibiting intestinal ACAT activity in hamsters //

Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - 2011. - P. 1-9.

80. Barros L., Carvalho A.M., Ferreira I.C.F.R. Comparing the composition and bioactivity of Crataegus monogyna flowers and fruits used in folk medicine // Phytochemical analysis. - 2011. - Vol. 22. - № 2. - P. 181-188.

81. Kovaleva A.M. et al. GC/MS study of essential oil components from flowers of Crataegus jackii, C. robesoniana, and C. flabellata // Chemistry of natural compounds. - 2009. - Vol. 45.- № 4. - P. 582-584.

82. Сидора Н.В. Хромато-МАС-спектрометричне дослщження летких сполук квггок Crataegus cuneata S. et Z. та Crataegus rotundifolia R Moench. // Украшський медичний альманах. 2013. - Vol. 16. - № 1. - с. 9-11.

83. Трофимова С.В. и др. Изучение компонентного состава эфирных масел листьев Crataegus sanguinea Pall. и травы Conium maculatum L. // Башкирский химический журнал. - 2013. - Т. 20. - № 2. - С. 103-105.

84. Самылина И.А., Киселева Т.Л. Изучение химического состава нефармакопейных видов боярышника и оценка их фармакологической активности // Фармация. - 1990. - № 1. - С. 12-17.

85. Киселева, Т.Л.; Самылина, И.А.; Баратова Л.А. Аминокислотный состав цветков фармако- пейных и нефармакопейных видов Crataegus L. // Растительные ресурсы. - 1989. - Т. 25. - № 1. - С. 145-154.

86. World Health Organization. WHO Monographs on Selected Medicinal Plants, Volume 2. - 2002. - P. 357.

87. Sticher O., Meier B. Hawthorn (Crataegus: Biological activity and new strategies for quality control // Phytomedicines of Europe: chemistry and biological activity. - 1998. - P. 241-262.

88. Katsarova M. et al. Determination of phenolic acids, flavonoids, terpenes and ecdysteroids in medicinal plant extracts and food supplements // Comptes rendus l'Académie Bulgare des Sciences. - 2017. - Vol. 70. - № 7. - P. 947-956.

89. Кашникова М.В. Флавоноиды цветков Crataegus sanguinea // Химия природных соединений. - 1984. - № 1. - C. 107.

90. Agati G. et al. Flavonoids as antioxidants in plants: Location and functional

significance // Plant science. - 2012. - Vol. 196. - P. 67-76.

91. Petrussa E. et al. Plant Flavonoids—Biosynthesis, Transport and Involvement in Stress Responses // International journal of molecular sciences. - 2013. Vol. 14. - № 7. - P. 14950-14973.

92. Chang Q. et al. Hawthorn // The Journal of Clinical Pharmacology. - 2002.-№ 42. - P. 605-612.

93. Jurikova T. et al. Polyphenolic profile and biological activity of chinese hawthorn (Crataegus pinnatifida Bunge.) fruits // Molecules. - 2012. - Vol. 17. -№ 12. - P. 14490-14509.

94. Liu P., Yang B., Kallio H. Characterization of phenolic compounds in Chinese hawthorn (Crataeguspinnatifida Bge. var. major) fruit by high performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry // Food Chemistry. -2010. - Vol. 121. - № 4. - P. 1188-1197.

95. Markham K.R., Gould K.S., Ryan K.G. Cytoplasmic accumulation of flavonoids in flower petals and its relevance to yellow flower colouration // Phytochemistry. - 2001. - Vol. 58. - № 3. - P. 403-413.

96. Nabavi S. et al. Polyphenolic composition of Crataegus monogyna Jacq.: from chemistry to medical applications // Nutrients. - 2015. - Vol. 7. - № 9. P. 7708-7728.

97. Rehwald A. Analytical investigation of Crataegus species and Passiflora incarnata L. by high performance liquid chromatography: Doctoral dissertation

: Doctor of Natural Sciences/ Anne Rehwald. Zurich, 1995.

98. Wen L. et al. An efficient method for the preparative isolation and purification of flavonoids from leaves of Crataegus pinnatifida by HSCCC and Pre-HPLC // Molecules. - 2017. - Vol. 22. - № 5. - P. 767.

99. Shatoor A.S. Cardio-tonic effect of the aqueous extract of whole plant of Crataegus aronia syn: azarolus (L) on isolated Rabbit's heart // African Journal of Pharmacy and Pharmacology. - 2012. - Vol. 6. - № 26. - P. 1901-1909.

100. Салахов И.А., Гармонов С.Ю. Определение флавоноидов боярышника в лекарственных формах методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии // Вестник Казанского технологического университета. Прикладная химия и химическая технология. - 2007. - Т. 6. - С. 22-27.

101. Bahorun T. et al. Antioxidant activities of Crataegus monogyna extracts // Planta Medica. - 1994.- Vol. 60. - № 04.- P. 323-328.

102. Svedstrom U. et al. Fractionation of polyphenols in hawthorn into polymeric procyanidins, phenolic acids and flavonoids prior to high-performance liquid chromatographic analysis // Journal of Chromatography A. - 2006. - Vol. 1112. -№ 1-2. - P. 103-111.

103. Hellenbrand N. et al. Isolation and quantification of oligomeric and polymeric procyanidins in leaves and flowers of Hawthorn (Crataegus spp.) // Fitoterapia. -2015. - Vol. 104. - P. 14-22.

104. Peschel W., Bohr C., Plescher A. Variability of total flavonoids in Crataegus-factor evaluation for the monitored production of industrial starting material. // Fitoterapia. - 2008. - Vol. 79. - № 1.- P. 6-20.

105. Хасанова С.Р., Трофимова С.В., Кудашкина Н.В. Динамика накопления флавоноидов в боярышника кроваво-красного листьях // "Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции" Сборник научных трудов. - 2010. - № 65. - С. 138-139.

106. Wen L. et al. Phenolic contents and cellular antioxidant activity of Chinese hawthorn "Crataegus pinnatifida" // Food Chemistry. - 2015.- Vol. 186. - P. 54-62.

107. Макарова М.Н. Патогенетические основы механизмов действия флавоноидов и их фармакологическая активность: дис. ... докт. мед. наук : 14.03.06 / Макарова Марина Николаевна; СПб., 2011. - 420 с.

108. Kim S.W. et al. Quantitative determination of bioactive compounds in some Artemisia capillaris by High-Performance Liquid Chromatography // Natural Product Sciences. - 2010. - Vol. 16. - № 4.- P. 233-238.

109. Xue F. et al. quercetin inhibits LPS-induced inflammation and ox-LDL-induced lipid deposition // Frontiers in pharmacology. - 2017. - Vol. 8. - P. 40.

110. He M. et al. A review on the pharmacological effects of vitexin and isovitexin // Fitoterapia. - 2016. - Vol. 115. - P. 74-85.

111. Kostic D. et al. Phenolic content, and antioxidant and antimicrobial activities of Crataegus oxyacantha L. (Rosaceae) fruit extract from Southeast Serbia // Tropical Journal of Pharmaceutical Research. - 2012. - Vol. 11. - № 1. - P. 117— 124.

112. Tadic V.M. et al. Anti-inflammatory, gastroprotective, free-radical-scavenging, and antimicrobial activities of hawthorn berries ethanol extract // Journal of agricultural and food chemistry. - 2008. - Vol. 56. - № 17. - P. 77007709.

113. Raza A. et al. Pharmacological activities and pharmacokinetic study of hyperoside : A short review // Tropical Journal of Pharmaceutical Research. - 2017. Vol. 16. - № 2. - P. 483-489.

114. Rezaei-Golmisheh A. et al. Hawthorn ethanolic extracts with triterpenoids and flavonoids exert hepatoprotective effects and suppress the hypercholesterolemia-induced oxidative stress in rats. // Iranian journal of basic medical sciences. - 2015.

- Vol. 18. - № 7. - P. 691-699.

115. Qiao A. et al. Novel triterpenoids isolated from hawthorn berries functioned as antioxidant and antiproliferative activities // Journal of Functional foods. - 2015.

- Vol. 13. - P. 308-313.

116. Bahri-Sahloul R. et al. Polyphenol contents and antioxidant activities of extracts from flowers of two Crataegus azarolus L. varieties // Pakistan Journal of Biological Sciences. - 2009. - Vol. 12. - № 9. - P. 660-668.

117. Ding X.-P. et al. Quality and antioxidant activity detection of Crataegus leaves using on-line high-performance liquid chromatography with diode array detector coupled to chemiluminescence detection // Food chemistry. - 2010. - Vol. 120. - № 3. - P. 929-933.

118. Prinz S. et al. 4'''-Acetylvitexin-2"-O-rhamnoside, Isoorientin, Orientin, and 8-Methoxykaempferol-3-O-glucoside as markers for the differentiation of Crataegus monogyna and Crataegus pentagyna from Crataegus laevigata (Rosaceae) // Chemistry & biodiversity. - 2007. - Vol. 4. - № 12. - P. 2920-2931.

119. Wagner H. et al. Chromatographic fingerprint analysis of Herbal Medicines. Thin-layer and High Performance Liquid Chromatography of Chinese Drugs. Vol. 3. - Springer International Publishing Switzerland, 2015. -267 p.

120. Michodjehoun-Mestres L. et al. Monomeric phenols of cashew apple (Anacardium occidentale L.) // Food Chemistry. - 2009. - Vol. 112. - № 4. - P. 851-857.

121. Тараховский Ю.С. и др. Флавоноиды: биохимия, биофизика, медицина / отв. ред. Е.И. Маевский. - Пущино: Sуnchrobook, 2013. - 310 c.

122. Куркина А.В. Определение содержания суммы флавоноидов в плодах боярышника // Химико-фармацевтический журнал. 2014. - Т. 48, - № 12. - С. 27-30.

123. Облучинская Е.Д. и др. Влияние ультразвуковой обработки на химический состав и антикоагулянтные свойства сухого экстракта фукуса // Химико-фармацевтический журнал. - 2015. - Т. 49. - № 3. - С. 35-38.

124. Шингисов А.У., Кобжасарова З.И. Исследование экстрактов плодов боярышника и листев шалфея, культивируемых на юге Казахстана // Успехи современного естествознания. - 2014.- № 11. - С. 78-81.

125. Pan H. et al. A simple and sensitive method for the simultaneous determination of six constituents in hawthorn leaves // Analytical Methods.. The -2014. - Vol. 6. - № 18. - P. 7475-7483.

126. Liu R.H. Potential synergy of phytochemicals in cancer prevention: mechanism of action. // The Journal of nutrition. - 2004. - Vol. 134. - № 12 - P. 3479S-3485S.

127. Корулькин Д.Ю. и др. Природные флавоноиды. - Новосибирск: Академическое издательство "Гео" -2007. - 232 с.

128. Azmir J. et al. Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials: A review // Journal of Food Engineering. - 2013. - Vol. 117. - № 4. - P. 426-436.

129. Сычев К.С., Даванков В.А. Материалы и методы пробоподготовки в хроматографии: твердофазное концентрирование и адсорбционная очистка //

Сорбционные и хроматографические процессы. - 2004. -Т. 4. - № 1. - С.5-28.

130. Dmitrienko S.G., Kudrinskaya V.A., Apyari V. V. Methods of extraction, preconcentration, and determination of quercetin // Journal of Analytical Chemistry. - 2012. - Vol. 67. - № 4. - P. 299-311.

131. Темердашев З.А. и др. Сорбционно-хроматографическое определение галловой, кофейной кислот, рутина и эпикатехина в лекарственных растнениях // Аналитика и контроль. - 2013. - Т. 17. - № 2. - С. 211-218.

132. Irakli M.N. et al. Simultaneous determination of phenolic acids and flavonoids in rice using solid-phase extraction and RP-HPLC with photodiode array detection // Journal of separation science. - 2012. - Vol. 35.- № 13. - P. 1603-1611.

133. Kovacova J. et al. Determination of Selected Flavonoids in Hop Extract By HPLC // Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies. - 2011. - Vol. 34. - № 5. - 2013. - P. 329-340.

134. Дейнека В.И., Григорьев А.М., Староверов В.М. ВЭЖХ в исследовании флавоноидов. Определение рутина // Химико-фармацевтический журнал. -2004. - Т. 38. - № 9. - P. 23-25.

135. Oztürk N., Tunfel M. Assessment of phenolic acid content and in vitro antiradical characteristics of hawthorn. // Journal of medicinal food. - 2011. - Vol. 14. - № 6. - P. 664-669.

136. Gonfalves A.F.K. et al. Anti-oxidant capacity, total phenolic contents and HPLC determination of rutin in Viola tricolor (L.) flowers // Free Radicals and Antioxidants. - 2012. - Vol. 2. - № 4. - P. 32-37.

137. Хишова О.М., Родионова Т.В. Сравнительная количественная оценка содержания флавоноидов в растительном сырье Боярышника кроваво-красного // Вестник Фармации. - 2008. - Т. 1(39). - С. 15-17.

138. Куркина А.В. Новые подходы к стандартизации цветков боярышника Crataegus sanguínea Pall. // Химия растительного сырья. - 2013. - № 846. - С. 171-176.

139. Родионова Т.. В., Хишова О.М. Стандартизация листьев боярышника // Вестник фармации. - 2008. - Т. 40. - № 2. - с. 70-79.

140. Waksmundzka-Hajnos M., Sherma J. High performance liquid chromatography in phytochemical analysis. - CRC PRESS, 2011. - 976 p.

141. Hajimehdipoor H. et al. Development of a validated HPLC method for the simultaneous determination of flavonoids in Cuscuta chinensis Lam. by ultra-violet detection // DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2012. - Vol. 20. - № 1. -P. 57.

142. Моисеев Д.В., Бузук Г.Н., Шелюто В.Л. Идентификация флавоноидов в растениях методом ВЭЖХ // Химико-фармацевтический журнал. - 2011. - Т. 45. - № 1. - С. 35-38.

143. United States Pharmacopeia 32, National Formulary 27 (USP NF). - 2009. -P. 733.

144. Sadek P.C. The HPLC solvent guide. - Wiley-Interscience, 2002. - 643 p.

145. Assessment report on Crataegus spp., folium cum flore. / European Medicines Agency. Committee on Herbal Medicinal Products (HMPC), 2016. - 61 p.

146. AOAC International. Appendix K: Guidelines for Single-Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals // AOAC official Methods of Analysis. - Maryland, 2013. - 32 p.

147. ICH harmonised tripartite guideline validation of analytical procedures: text and method methodology Q2(R1) // International conference on harmonisanisation of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use. -2005. -13 p.

148. Lund J.A., Brown P.N., Shipley P.R. Differentiation of Crataegus spp. guided by nuclear magnetic resonance spectrometry with chemometric analyses // Phytochemistry. - 2017. - Vol. 141. - P. 11-19.

149. Bubueanu C., Grigore A., Pirvu L. HPTLC fingerprint use, an important step in plant-derived products quality control // Scientific Papers-Series B, Horticulture. - 2015. - Vol. LIX. - P. 437-442.

150. Сумина Е. Г. и др. Тонкослойная хроматография флавоноидов на силикагеле в модифицированных мицеллярных подвижных фазах на основе додецилсульфата натрия //Сорбционные и хроматографические процессы. -

2014. - Т. 14. - №. 1. - С. 52-64.

151. Amanzadeh Y., Khanavi M., Khatamsaz M. High performance thin-layer chromatographic fingerprints of flavonoids and phenol carboxylic acids for standardization of Iranian species of the genus Crataegus L. // Iranian Journal of Pharmaceutical Sciences. ran. - 2007. - Vol. 3. - № 3. - P. 143-152.

152. Liu W., Chen G., Cui T. Determination of flavones in Crataegus pinnatifida by capillary zone electrophoresis. // Journal of chromatographic science. - 2003. -Vol. 41. - № 2. - P. 87-91.

153. Japanese Pharmacopoeia Sixteenth Edition XVI // Powder Diffr. 2011. -2319 p.

154. ФС Боярышника плоды | Фармакопея.рф [Электронный ресурс]. - М. -Режим доступа: https://pharmacopoeia.ru/fs-boyaryshnika-plody/ (accessed: 16.01.2018).

155. Покровская И.М. Пыльцевой анализ. М.: 1-я тип. Госгеолиздата, 1950. -572 с.

156. Куприянова Л.А., Алешина Л.А. Пыльца и споры растений Флоры Европейской части СССР. - Л.: "Наука," 1978. - с. 256.

157. Барыкина Р.П. и др. Основы микротехнических исследований в ботанике. Справочное руководство. - Москва: Изд. каф. высш. растений биол. ф-та Моск. гос. ун-та. - 2000. - 127 с.

158. Правила сбора и сушки лекарственного растительного сырья: сборник инструкций / под ред. Шретера А.И. - М.: Медицина. - 1985. - с. 328.

159. Муравьев И.А., Пшуков Ю.Г. Теоретические основы производства жидких экстрактов методом перкроляции с законченным циклом. -Пятигорск: Пятигорская типография им. Анджиевского. - 1985. - 47 с.

160. Латыпова Г.М. и др. Технология густого экстракта из травы первоцвета весеннего // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. - 2011. - Т. 16 (111). - № 51. - С. 226-230.

161. Vierling W. et al. Investigation of the pharmaceutical and pharmacological

equivalence of different Hawthorn extracts // Phytomedicine. - 2003. - Vol. 10. -№ 1. - P. 8-16.

162. Kumar D., Kumar P., Sharma U. UPLC-DAD-MS Based quality control and discrimination analysis of different aerial parts of Crataegus rhipidophylla Gand. found in Indian Western Himalaya. - 2018. - Vol. 8. - № 2. - P. 177-187.

163. Pogany J. ICH pharmaceutical quality system Q10 // WHO Drug Information. - 2008. - Vol. 22. - №. 3. - p.177-181.

164. Самылина И.А., Потанина О.Г. Фармакогнозия. Атлас. Том 2. Лекарственное растительное сырье. Анатомо-диагностические признаки фармакопейного и нефармакопейного лекарственного растительного сырья. Учебное пособие. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - Т.2. - 384 С.].

165. Самылина И.А., Северцев В.А. Лекарственные растения Государственной фармакопеи. - М.: АНМИ. - 2003. -534 с.

166. Мирославов Е.А. Структура и функция Лекарственное растительное сырье. Анатомо-диагностические признаки фармакопейного и эпидермиса листа покрытосеменных растений. - Л.: Наука, 1974. - 184 с.

167. Васильев Б.Р. Строение листа древесных растений различных климатических зон / под ред. Шмидта В.М. Л.: ЛГУ. - 1988. -205 с.

168. Резанова Т. А., Бакшутов С. А. Адаптивные особенности поверхности листа у видов рода Crataegus L. (Rosaceae Juss.) // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. -2011. - Т. 9 (104). - № 15/2. - С. 21-29.

169. Lakache Z. et al. Phytochemical screening and antioxidant properties of methanolic extract and different fractions of Crataegus azarolus leaves and flowers from Algeria // International Food Research Journal. - 2016. - Vol. 23. - № 4. - P. 1576-1583.

170. Ahamd Ameen B., Majeed S.N., Abdul D.A. HPLC Analysis of Fatty Acids and Triterpenoids in Fruit of Hawthorn (Crataegus azarolus) in Iraqi Kurdistan Region // Asian Journal of Chemistry. - 2013. - Vol. 25. - № 5. - P. 2750-2754.

171. Qiao A. et al. Novel triterpenoids isolated from hawthorn berries functioned

as antioxidant and antiproliferative activities // Journal of Functional foods. - 2015. - Vol. 13. - P. 308-313.

172. Саньков А.Н., Шмыгарева А. А. «Ресурсоведение, экология и охрана дикорастущих лекарственных растений». Учебное пособие для подготовки к практическим занятиям по фармакогнозии для студентов 4 курса фармацевтического факультета. - Оренбург. - 2013. - 91 с.

173. Цицилин А.Н. Необходимость и важность применения GASP в России при получении лекарственного сырья // Фармация. - 2018. - Т. 4. - с. 13-17.

174. United Satates Pharmacopoeia. USP 38-NF 33 | USP-NF [Electronic resource]. URL: http://www.uspnf.com/official-text/proposal-statuscommentary/usp-38-nf-33 (accessed: 04.02.2018).

175. The Plant List [Electronic resource]. URL: http://www.theplantlist.org/tpl1.1/search?q=crataegus (accessed: 29.10.2018).

176. Brummitt R.K. Report of the Committee for Spermatophyta: 30 // Taxon. International Association for Plant Taxonomy (IAPT). - 1986. - Vol. 35. - № 3. -P. 556.

ПРИЛОЖЕНИЯ

(Обязательное)

(Обязательное)

(Обязательное)

(Обязательное)

Москва)

(Обязательное)

(Обязательное)

Кемерово)

(Обязательное)

Кемерово)

(Обязательное)

ВИЛАР, Москва)

(Обязательное)

(Обязательное)

(Обязательное)

Приложение 5. Сводная таблица результатов спектрофотометрического и хроматографического определения флавоноидов.

(Обязательное)

№ № ваучерного образца Вид Содержание листьев, % Содержание стеблей, % Сумма флавоноидов в пересчете на гиперозид, мг/г Витексин, мг/г Рутин, мг/г Гиперози д, мг/г Кверцетин, мг/г

1 LE01020969 C. sanguínea Pall. 47,0 6,9 15,10±0,18 3,52±0,11 1,34±0,06 5,81±0,11 0,20±0,01

2 LE01020943 C. sanguinea Pall. 50,2 4,9 16,13±0,07 2,59±0,15 3,96±0,14 3,35±0,14 0,15±0,02

3 LE01020947 C. sanguinea Pall. 50,7 7,2 17,99±0,05 2,07±0,03 4,57±0,31 4,25±0,09 0,15±0,009

4 LE01020944 LE01020945 C. sanguinea Pall. 54,1 5,0 15,58±0,08 2,51±0,20 4,02±0,20 3,09±0,05 0,14±0,01

5 LE01020946 C. sanguinea Pall. 53,5 4,9 19,03±0,08 2,37±0,12 5,37±0,35 4,47±0,24 0,19±0,09

6 LE01020783 C. sanguinea Pall. 19,3 4,7 19,26±0,20 1,89±0,11 4,93 ±0,20 4,80±0,10 0,15±0,01

7 LE01020981 С. dahurica C.K. Schneid. 44,3 6,4 16,46±0,12 1,91±0,09 0,96±0,04 5,90±0,09 0,19±0,004

8 LE01020939 С. dahurica C.K. Schneid. 50,7 7,1 15,82±0,11 1,56±0,29 0,46±0,07 6,36±0,28 0,07±0,01

9 LE01020942 C. chlorocarpa Lenné et C. Koch 52,0 5,7 14,01±0,05 0,80±0,05 0,22±0,04 4,50±0,09 0,13±0,004

10 LE01020938 C. chlorocarpa Lenné et C. Koch. 35,0 8,3 15,29±0,06 0,51±0,07 0,38±0,03 4,49±0,05 0,11±0,01

11 LE01020970 C. maximowiczii C.K. Schneid. 43,8 8,2 14,05±0,15 1,74±0,07 1,74±0,04 3,24±0,15 0,11±0,01

12 LE01020948 C. maximowiczii C.K. Schneid. 51,2 7,6 12,09±0,11 3,39±0,06 1,25±0,16 2,43±0,06 0,09±0,01

13 LE01020941 C. maximowiczii C.K. Schneid. 37,2 3,0 17,65±0,06 1,14±0,21 0,58±0,12 5,27±0,06 0,142±0,005

14 LE01020940 C. maximowiczii C.K. Schneid. 38,4 3,7 13,92±0,09 1,15±0,23 0,35±0,06 6,55±0,09 0,124±0,001

15 LE01020971 LE 01021005 LE 01021006 C. jozana C. K. Schneid. 47,1 5,7 18,06±0,08 2,13±0,20 2,31±0,16 3,81±0,07 0,14±0,01

16 LE01020980 C. chlorosarca Maxim. 44,9 8,4 18,73±0,08 0,95±0,08 1,78±0,04 4,24±0,06 0,18±0,02

17 LE 01023999 C. jozana C. K. Schneid. 22,7 2,6 19,96±0,22 2,27±0,06 0,72±0,06 3,34±0,03 3,23±0,06

18 LE 01023989 C. wattiana Hemsl. et Lace 21,8 6,1 18,89±0,14 1,84±0,14 0,70±0,04 5,18±0,16 0,37±0,002

19 LE 01020781 C. wattiana Hemsl. et Lace 63,3 6,9 12,51±0,56 1,30±0,06 0,20±0,02 1,38±0,04 0,57±0,01

20 LE01020984 C. nigra Waldst. et Kit. 37,2 7,4 19,52±0,11 3,90±0,11 1,49±0,02 1,55±0,08 0,74±0,001

21 LE01020972 C. monogyna Jacq. 35,3 6,9 22,04±0,11 2,06±0,29 0,91±0,07 12,58±1,2 8 0,15±0,03

22 LE01020973 C. X subsphaerica 32,4 5,5 19,43±0,02 0,52±0,04 1,09±0,06 5,22±0,13 0,19±0,01

23 LE01020974 C. rhipidophylla Gand. 36,7 8,6 19,25±0,04 1,09±0,12 1,61±0,08 5,78±0,22 0,11±0,01

24 LE01020975 C. rhipidophylla Gand. 43,3 7,8 14,30±0,09 1,08±0,07 0,63±0,06 4,52±0,13 0,95±0,02

25 LE01020976 C. rhipidophylla Gand. 53,4 9,2 19,11±0,12 0,91±0,08 1,92±0,26 3,13±0,12 0,09±0,01

26 LE01020937 C. ambigua C.A. Mey. ex A.K. Becker 41,9 9,5 15,87±0,13 3,65±0,14 2,04±0,13 5,46±0,14 0,09±0,09

27 LE01020977 C. ambigua C.A. Mey. ex A.K. Becker 43,3 8,3 22,12±0,09 1,63±0,12 1,36±0,25 5,33±0,32 0,15±0,03

28 LE01020978 С. pentagyna Waldst. et Kit. ex Willd. 26,8 5,0 18,14±0,01 3,15±0,06 1,09±0,17 4,41±0,02 0,20±0,01

29 LE01020979 С. laciniata Ucria 49,0 4,8 12,60±0,15 1,36±0,11 0,61±0,02 3,42±0,09 0,28±0,002

30 LE01020983 C. volgensis Pojark. 44,8 7,6 13,95±0,20 0,56±0,04 1,02±0,02 3,22±0,09 0,07±0,01

31 LE01020982 C. pallasii Griseb. 28,7 8,5 13,94±0,15 0,54±0,02 0,45±0,01 3,43±0,10 0,21±0,01

Приложение 6. Проект инструкции по сбору и сушке ЛРС «Боярышника цветки с листьями». (Обязательное)

Инструкция по сбору и сушке сырья «Боярышника цветки с листьями»

(проект)

Заготовка ЛРС «Боярышника цветки с листьями» возможна от видов растений рода

Боярышник - Crataegus L., представленных в Таблице 1, и их гибридов.

Таблица 1. Дикорастущие виды боярышника, произрастающие в РФ [26,49].

Секция Crataegus Sanguineae

Виды C. monogyna Jacq. C. rhipidophylla Gand. С. pentagyna Waldst. et Kit. ex Willd. C. ambigua C.A. Mey. ex A.K. Becker С. laciniata Ucria C. volgensis Pojark. C. pallasii Griseb. C. sanguinea Pall C dahurica C.K. Schneid C. chlorocarpa Lenné et C. Koch C. maximowiczii C.K. Schneid. C. wattiana Hemsl. et Lace C. chlorosarca Maxim. C. jozana C. K. Schneid C. nigra Waldst. et Kit.

Дикорастущие боярышники, встречаются в восточных районах лесной, лесостепной и степной зон европейской части, а также в Западной и Восточной Сибири, включая Забайкалье [1,3]. В азиатской части страны преобладает секция Sanguineae. Наиболее распространенным ее представителем является боярышник кроваво-красный (C. sanguinea Pall.), растущий в Сибири, на востоке европейской части страны (Мордовия, Нижегородская, Пензенская и Тамбовская области) [4] в Заволжье, на Среднем и Южном Урале. Основные запасы этого вида сосредоточены в Алтайском и Красноярском краях, Новосибирской, Кемеровской, Иркутской, Курганской, Омской, Оренбургской и Тюменской областях [4,5].

В эту же секцию входят алтайско-центральноазиатские виды: б. Королькова (C. korolkowii L. Henry)6 и б. желтоплодный (C. chlorocarpa Lenne et C.Koch.); б. Максимовича (C. maximowiczii C.K. Schneid.), произрастающий в Восточной Сибири, а также в Забайкалье, Приамурье и Приморье. Боярышник желтоплодный распространен на Южном Урале и в Западной Сибири [4,7].

В центральной Сибири, Приамурье и Приморье распространены виды б. даурский

6 неутвержденное название вида. Вероятный синоним - C. wattiana Hemsl. et Lace [6].

(С. dahurica koechne ex Schneid.) и б. перистонадрезанный (С. pinnatifida Bge.) [8,9][64][64][64][64][63]. В долинах рек, в нижней части горных склонов и подлеске лиственных лесов Дальнего Востока, Камчатки и о. Сахалин произрастает б. зеленомясый (С. chlorosarca Maxim.) [9]. В южной части о. Сахалин встречается б. иозанский (С. jozana C. K. Schneid) [10].

Различные виды боярышника секции Crataegus сосредоточены в средней полосе европейской части РФ, на Кавказе, в Краснодарском и Ставропольском крае, в Крыму [4,5,11,12]. Основным представителем этой секции является б. однопестичный (C. monogyna Jacq.). Сюда же относятся б. пятипестичный (C. pentagyna Waldst. et Kit.), отогнуточашелистиковый (C. curvisepala Lindm.) [13,14], б. вееролистный (C. rhipidophylla Gand.) [14], б. восточный (С. orientalis Pall. Ex M. Bieb.), б. сглаженный (C. laevigata Poir.), а также эндемик Поволжья - б. волжский (C. volgensis Pojark.) и другие европейские виды и их гибриды [15].

Боярышник - небольшое дерево или кустарнник высотой до 5 м. Ствол до 10 см и более в диаметре ст емно-серой трещиноватой корой. Молодые побеги голые или с редкими волосками; в период роста зеленоватые; годичные - пурпурно-коричневые, блестящие, многолетние - сероватые. Колючки обычно немногочисленные, длиной до 5 см. листья на укороченных генеративных побегах длиной до 6 см, шириной до 5 см; на вегетативных - длиной до 9 см. Обычно они с обеих сторон (реже только с на нижней стороне) волосистые, сверху темно-зеленые, снизу более светлые. Пластинка листа

' и и u u XJ

обратнояйцевидная или яйцевидная, с острой верхушкой и клиновидным цельнокрайним основанием, с 2-3 короткими, крупными, по краю пильчатыми парами лопастей.

Цветки желтовато-белые, с неприятным запахом, до 1,5 см в диаметре, собраны в щитковидные соцветия. Чашелистиков 5, лепестков 5, тычинок с пурпурными пыльниками 20. Пестик с нижней завязью и 3-4 (реже пятью) столбиками. Плоды при созревании могут иметь желтую, оранжевую, розовую, красную, пурпурную, зеленовато-желтую, коричневую, фиолетовую или черную окраску и иногда опушение, почти округлые, длиной в среднем 2-3 см. Цвет мезокарпа желтый, зеленый или красный [16].

Боярышники не требуют специального ухода, теневыносливы и морозоустойчивы, а также неприхотливы к почве и условиям рельефа.

Цветение у большинства видов боярышника наступает во 2 декаде мая или 1 декаде июня, в зависимости от региона произрастания. Продолжительность цветения одного соцветия 5-14 дней, куста (дерева) от 6 до 17 дней. В прохладной погоде период цветения удлиняется, при сухой и солнечной - сокращается [6,7].

Проводить сбор сырья следует проводить в начале цветения, когда часть цветков в соцветии еще не открылась - в период максимального накопления флавоноидов (основной группы БАВ) [3,17,18]. Сбор осуществляют в сухую солнечную погоду, после того как высохнет роса. Сырье, собранное во влажную погоду или в фазу бутонизации, при сушке темнеет. Срезают секаторами облиственные неодревесневшие верхушки побегов, не длиннее 10 см, с соцветиями (побеги текущего года). Сырье собирают в корзины и отвозят на сушку не позднее, чем через 1-2- часа после сбора.

Сбор цветков с листьями, поврежденных насекомыми, грибами и другими патогенами, а также одревесневших побегов не допускается.

Сушат цветки с листьями боярышника тонким слоем на решетках в сухих проветриваемых помещениях. В процессе сушки сырье необходимо перемешивать ежедневно. Выход сухого сырья составляет около 18-25% от массы свежесобранного.

Следует заметить, что морфологические признаки листа у некоторых видов боярышника очень схожи (Таблица 2). Усложняет идентификацию производящего растения и необходимость заготовки гербария побегов с одревесневшей частью, а также плодов, которые невозможно получить в фазу цветения. Учитывая то, что заготовка ЛРС боярышника ведется от доступных сборщику дикорастущих растений, которые растут одиночно или образуют заросли из нескольких видов, любая партия может включать ЛРС от нескольких видов. Поэтому определение вида можно считать условным [7].

Таблица 2. Признаки листа некоторых видов боярышника секций Sanguineae и Crataegus

Листовая пластинка Черешок Прилистник

Вид Форма и цвет ЛП Разме ры ЛП Лопаст и Опушение Край ЛП Размеры Опушение Форма Край

секция Sanguineae

C. sanguinea яйцевидные, 3,0- 5-7 Негусто Пильчато- 0,5- 2,1 Волосисто серповидно Зубчато

обратнояйцевидны 6,0* волосисты железисты см е, изогнутые -

е или 2,5-4,8 е й имеются железис

широкоромбически см сидячие тый

е с острой железки

вершиной и

клиновидным

основанием,

неглубоколопастны

е сверху тёмно-

зелёные, снизу

светлые.

С. dahurica продолговато-ромбическая или продолговато-яйцевидная с клиновидным основанием; неглубоколопастны е сверху тёмно-зелёного цвета, снизу светлые 1,8-4,5 * 1,2-3 см 5-9 Голые или короткопу шенные Зубчатый 0,5-1,5 Отсутству ет или одиночны е волоски ланцетные Зубчато железис тый

с. maximowiczii Светло-зеленые, яйцевидные до яйцевидно-ромбических, с острой вершиной и клиновидным, основанием 3,5-9,0 *2,5-6 см 9-13 Очень густое (войлочное ) опушение на нижней стороне ЛП, На верхней стороне ЛП - рассеянное неравнопил ьчатый 1,2-2,8 см волосисто е серповидно изогнутые Зубчато железис тый

C. jozanna широкояйцевидные или треугольные с коротко заостренной или остроконечной верхушкой, с ширококлиновидн ым основанием, неглубоколопастны е светло- зеленые 5-10 см Очень густое (войлочное ) опушение мелкопиль чатый волосисты е серповидно-изогнутые зубчаты е

С. chlorosarca широкояйцевидные или треугольные с коротко заостренной или остроконечной верхушкой, с ширококлиновидн ым основанием, 5-9 см 7-9 (11), мелкие Голые или рассеянно-волосисты е мелкопиль чатый 1-2,5 см голые серповидно-изогнутые зубчаты е

неглубоколопастны е светло- зеленые

C. nigra Яйцевидные или треугольно- яйцевидные, слаболопастные темно-зеленые или серовато-зеленые 5-9 (10) см*4-7 7-11 Густое опушение снизу пильчатый 1-3 Густое опушение серповидно изогнутые Гребен чато-зубчаты й железис тый

секция Sanguineae

C. monogyna От продолговато-яйцевидной до обратнояйцевидной глубоколопастные, или клиновидные; сверху лоснящиеся, тёмно-зелёные сверху, снизу светло-зелёные. побегах 1,54,5* 1,0-3,2 2-4 Редкие волоски по жилкам Цельнокра йний или зубчатый 1-2 Отсутству ет серповидно изогнутые, полусердце видные, железис то- пильчат ый

C. rhipidophylla Яйцевидные, глубоколопастные или клиновидные; оливково-зеленые сверху, светло-зеленые снизу 2,06,5*1, 2-6,9 3-5 Редкое, волоски сосредоточ ены по жилкам и у Зубчатый, железисты й 0,5-2,2 см Редкое узкотреугол ьный Пильча тый или пильчат о- зубчаты й

основания ЛП

С. ¡астМа. Яйцевидные, глубоколопастные, или клиновидные;темн о-зеленые свержу, серо-зеленые снизу 1,43,6*0, 9-4,2 3-5 Густое опушение по всей ЛП зубчатый 0,4-1,7 см Густое опушение узкотреугол ьный Густое опушен ие

С. ambigua Яйцевидные, глубоколопастные, или клиновидные; темно-зеленые свержу, серо-зеленые снизу 3,05,7*2, 9-6,6 2-4 Отсутствуе т или одиночные волоски по жилкам зубчатый 0,4-1,1 см Отсутству ет или одиночны е волоски узкотреугол ьный Отсутст вует или одиноч ные волоски

С. раИа^и Яйцевидные, глубоколопастные, зеленые 1,8-3,3 * 2,03,4 3-5-7 Волоски у основания листа Зубчатый, железисты й 0,7-1,4 см Отсутству ет узкотреугол ьный зубчаты й

С. pentagyna верху тёмно-зелёные, лоснящиеся, снизу более светлые, тусклые 2,0-5,6 * 1,55,1 3-5-7 Очень густое (войлочное ) опушение зубчатый 1,5- 2,8 Редкое опушение Серповидно -изогнутые цельнок райние

Вместе с тем, форма и рассеченность ЛП позволяют дифференцировать надвидовые таксоны - секции [1], что является более удобным критерием идентификации боярышника сборщиком при заготовке и контролером при приемочном контроле ЛРС (Таблица 3).

Таблица 3. Отличительные признаки боярышников по секциям [1].

Секция Признак Crataegus Sanguineae

Географическая зона Европа, Западная и Средняя Азия Азия, центральная Европа

Виды виды C. monogyna C. lasiocarpa C. rhipidophylla C. ambigua С. pentagyna и др. C. sanguínea C. maximowiczii C. wattiana C. chlorocarpa C. dahurica C. chlorosarca и др.

лист Глубоко рассеченные Жилки в лопастях и в выемках Лопастные

Прилистники Не опадают Не опадают

Цветок 20 тычинок 20 тычинок

Колючки Олиственные Безлистные Есть 1-2 см отсутствуют Средней длины

Сырье «Боярышника цветки с листьями» представляет собой смесь высушенных цветущих неодревесневших побегов текущего года, отдельных листьев, стеблей, бутонов цветков и их частей (листовых пластинок, черешков, лепестков, цветоножек, чашелистиков, пыльников). Запах специфический.

Цветки 5-ти членные, с двойным околоцветником; собраны в ботриоидный щиток. Окраска венчика от белого до желтовато-коричневого; чашечка коричневато-зеленая, голая или имеет опушение [1]. У большинства видов заметны коричневые железки по краю чашелистиков. Стебли длиной до 40 мм светло-зеленые или коричневатые.

Листья боярышника очередные, черешковые от 1,5 до 10 см. Морфология листьев в связи с обширностью рода Боярышник полиморфна: форма ЛП от треугольной до широкояйцевидной, степень рассеченности: от неглубокорассченной до глубоколопастной; окраска листовой пластинки от светло-зеленой до коричневато-зеленой; характер опушения - от единичных волосков в области крупных жилок и основания листа до войлочного густого опушения или

опушение отсутствует; край ЛП пильчатый или зубчатый. Морфология листа вегетативных побегов варьирует в большей степени, чем у генеративных [1]. Прилистники серповидные, ланцетные или треугольные; железисто-пильчатые. Опушение черешков и стеблей сходно с опушением ЛП. По ребрам на некоторых видов боярышника наблюдались шарообразные или продолговато-вытянутые коричневые железки.

Примеси: боярышника цветки с листьями следует отличать от вероятных примесей, сходных по макроскопическим признакам (Таблица 4).

Таблица 4. Основные отличительные признаки вероятных примесей к сырью

боярышника.

Листья Соцветия

Растения рода Боярышник яйцевидные, обратнояйцевидные или широкоромбические Край зубчато-железистый (коричневые шарообразные железки на ЛП, чарешках, прилистиниках) Ботриоидный щиток. Венчик от белого до желтовато-коричневого; чашечка коричневато-зеленая, голая или имеет опушение [1]. Венчик не опушен. У большинства видов заметны коричневые железки по краю чашелистиков.

Примеси семейства Розоцветные Цельные, обратнояйцевидные или эллиптические, заостренные, плотные Городчато-зубчатые или межелезистые Опушение отсутствует (вишня), сильно выражена кутикула Опушены обильно (яблоня, слива) Край пильчатый или городчатый, железистый; По краю листа располагаются железки на многоклеточных ножках, конусовидные, шарообразные или продолговатые Зонтиковидные (вишня), щитковидные (яблоня, груша), Густые щитковидные соцветия (рябина) Чашелистики продолговато-эллиптические. Край чашелистиков железистый, железки сидячие или на многоклеточных ножках продолговато-вытянутые или эллиптические Чашечка может быть опушена, в т.ч. коричневатыми волосками (груша)

Phi¡ade¡phus coronarius Ь. (Чубушник обыкновенный) Яйцевидные или продолговато-яйцевидные, на вершине заострённые, с ширококлиновидным или закруглённым основанием Опушены Кистевидные, несут пять— девять цветков Венчик кремово-белый, не опушен, Чашечка опушена умеренно. Край чашелистика ровный, нежелезистый

Край отдалённо зубчатый, нежелезистый

Viburnum opulus L. (Калина обыкновенная) Широко-яйцевидные или округлые, трех- пятилопастные, по жилкам слабоопушенные, с округлым, усеченным или клиновидным, лопасти неравно- крупнозубчатые Край ровный, нежелезистый Плоские, зонтиковидные, Цветки белые или розовато-белые, краевые—крупные, бесплодные, с недоразвитыми тычинками и пестиками, с плоским цветоложем

Числовые показатели: Влажность - Не более 10%; зола общая не более 7%; зола нерастворимая в 10% HCl - не более 0,5%; содержание стеблей - не более 10%; содержание листьев - не более 55 %; содержание побуревших частей - отсутствуют; содержание одревесневших частей - отсутствуют; органическая примесь - не более 1,5%; минеральная примесь - не более 1,0%; сумма флавоноидов в пересчете на гиперозид - не менее 1,0% (СФ-УФ); сумма витексина, гиперозида и рутина (ВЭЖХ-УФ), Не менее - 4 мг/г. Срок годности 3 года.

Хранение: в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте. Применение: Препараты используют как сердечно-сосудистые средства. Литература

1. Уфимов Р.А. Род Боярышник (Crataegus L., Rosaceae) во флоре Восточной Европы и Кавказа: автореферат кандидата биологических наук: 03.02.01. - СПб, 2013.- 22 с.

2. Christensen K.I. Revision of Crataegus Sect. Crataegus and Nothosect. Crataeguineae (Rosaceae-Maloideae) in the Old World // Syst. Bot. Monogr. - 1992. -Vol. 35. - P. 1-199

3. Трофимова С.В. Фармакогностическое изучение листьев Боярышника кроваво-красногоо Crataegus Sanguinea Pall. из флоры Башкортостана: дисс. кандидата фармацевтических наук: 14.04.02.- Пермь, 2014. - 161 с.

4. Атлас лекарственных растиений России / под общ. ред. Быкова В.А. М.: ФГБНУ ВИЛАР, 2006. - 352 с.

5. Соловьева Н.М., Котелова Н.В. Боярышник. М.: Агропромиздат, 1986. - 72 с.

6. The Plant List [Electronic resource]. URL: http://www.theplantlist.org/tpl1.1/search?q=crataegus (accessed: 29.10.2018).

7. Дикорастущие лекарственные растения России: сбор, сушка, подготовка сырья (сборник инструкций). - М.: ФГБНУ ВИЛАР. - 2015. - 344 с.

8. Zyryanova O.A. et al. Problems in the maintenance and sustainable use of forest resources in Priamurye in the Russian Far East // Eurasian J. For. Res. - 2016. - Vol. 8, № 1. - P. 53-64.

9. Лобанов А.И., Кириенко М.А. Особенности сезонного развития растений рода Crataegus L. в условиях Красноярской лесостепи // Вестник КрасГАУ. 2015. № 2. P. 118-123.

10. Нечаев А. А. Боярышники российского Дальнего Востока: видовой состав, распространение, ресурсы //Плодоводство, семеноводство, интродукция древесных растений. - 2016. - Т. 19. - №. XIX. - С. 65-68.

11. Летухова В.Ю., Потапенко И.Л. Новые данные о численности Боярышников (Crataegus) в Карадагском природном заповеднике // Экосистемы, их оптимизация и охрана. - 2013. - Т 9. - с. 125-133.

12. Christensen K.I., Zielinski J. Notes on the genus Crataegus (Rosaceae-Pyreae) in Southern Europe, the Crimea and Western Asia // Nord. J. Bot. - 2008. Vol. 26, № 5-6. P. 344-360.

13. Киселева Т.Л. Изучение химического состава нефармакопейных видов боярышника и разработка показателей качества сырья. : дисс. кандидата фармацевтических наук: 14.04.02.- М., 1988. - 225 с.

14. Мухаметова С.В. Виды Боярышника азиатской флоры в Среднем Поволжье // XII Международная научно-практическая конференция Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии» -. 2013. - с. 129-132.

15. Омариева Л.В. Накопление биологически активных веществ в плодах представителей семейства Rosaceae (на примере рода Crataegus ) республики Дагестан в зависимости от экологических факторов. Автореферат дисс. канд. биол. наук : 03.02.14. - Махачкала, 2016. - 24 с.

16. В.Д. Стрелец, А.А. Терехин, А.Н. Цицилин Древесно-кустарниковые лекарственные и эфиромасличные растения М.:изд-во ФГОУ-ВПО РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева - 2008 - 190 с.

17. Хасанова С.Р., Трофимова С.В., Кудашкина Н.В. Динамика накопления флавоноидов в боярышника кроваво-красного листьях // Сборник научных трудов "Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции". -2010. - Вып. 65. - с. 138-139.

18. Куркин В. А., Морозова Т. В., Правдивцева О. Е. Исследования по разработке методики стандартизации листьев боярышника кроваво-красного //Химия растительного сырья. - 2017. - №. 3 - с.169-173.

Авторы:

аспирант кафедры фармацевтической химии, фармакогнозии и организации фармацевтического дела

МГУ имени М.В. Ломоносова Сагарадзе В. А.

доцент агробиотехнологического департамента

Аграрно-технологического института РУДН, к.б.н., доцент Бабаева Е.Ю.

п v-/ 1 и 1 и

Заведующий кафедрой фармацевтической химии, фармакогнозии и организации фармацевтического дела

МГУ имени М.В. Ломоносова, д.фарм.н., доцент Каленикова Е.И.

Благодарности

Выражаю искреннюю благодарность за всестороннее содействие при сборе материала в полевых условиях и компетентную и доброжелательную помощь в проведении исследования:

^ Баяндиной Ирине Ивановне к. биол. н., доценту Новосибирского аграрного университета

^ Вандышеву Виктору Васильевичу, к. фарм.н., доценту Агробиотехнологического департамента Аграрно-технологического института РУДН

^ Загурской Юлии Васильевне - к. биол. н., научному сотруднику Института экологии человека СО РАН

^ Комже Александру Львовичу - к. биол. н., ведущему научному сотруднику Северо-Осетинского государственного природного заповедника ^ Коротких Ирине Николаевне - канд. с/х наук, ведущему научному сотруднику ФГБНУ «ВИЛАР»

^ Маркину Вадиму Ивановичу - к. хим. н., доценту кафедры органической химии Алтайского государтвенного университета ^ Можаевой Галине Федоровне - биологу Ботанического сада имени И. И. Спрыгина Пензенского Государственного университета ^ Пещанской Екатерине Владимировне - к. биол. н., старшему научному сотруднику Ставропольского Ботанического сада имени В. В. Скрипчинского

^ Сагарадзе Георгию Дмитриевичу - аспиранту кафедры биохимии факультета фундаментальной медицины МГУ имени М. В. Ломоносова

^ Сайбель Ольге Леонидовне - к. фарм. н, руководителю Центра химии и фармацевтической технологии ФГБНУ «ВИЛАР» ^ Северовой Елене Эрастовне - к. биол. н., ведущему научному сотруднику лаборатории систематики и морфологии высших растений Биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова

S Трусову Николаю Александровичу - к. биол. н., старшему научному сотруднику Главного ботанического сада имени Н.В. Цицина РАН S Уфимову Роману Александровичу - к. биол. н., младшему научному сотруднику отдела Гербарий высших растений Ботанического института имени В. Л. Комарова РАН

S Farkasdi Sandor - Researcher of the department of oral hygiene Semmelweis University, Budapest.