Изучение механизмов апоптоза Т-лимфоцитов, индуцированного ганглиозидами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Холоденко, Роман Васильевич

• Холоденко, Роман Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Холоденко, Роман Васильевич

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ГАНГЛИОЗИДЫ В ИММУНОЛОГИИ

Локализация ганглиозидов в плазматической мембране клеток и функциональное значение липидных микродоменов

Биосинтез ганглиозидов 13 t

Деградация и внутриклеточный транспорт ганглиозидов

Ганглиозиды, ассоциированные с опухолью 24 Модулирующее действие ганглиозидов на пролиферацию лимфоцитов

Влияние ганглиозидов на IL-2-зависимую пролиферацию

ГЛАВА 2. АПОПТОЗ. РОЛЬ АПОПТОЗА В ИММУННОЙ СИСТЕМЕ

Типы клеточной смерти

Морфологические изменения в клетке в процессе апоптоза

Сигнальные пути, приводящие к запуску апоптоза

Каспазы как ключевые ферменты апоптоза

Роль митохондрий в апоптозе

Внутриклеточные регуляторы апоптоза

Роль апоптоза в иммунной системе

Молекулярные механизмы апоптоза лимфоцитов

Ганглиозиды и апоптоз

Xl , ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ 78 Регистрация апоптоза, индуцированного ганглиозидами, в различных Т-лимфоцитах

Влияние IL-2 на апоптоз, индуцированный ганглиозидами 89 Дозовые и временные зависимости апоптоза, индуцированного ганглиозидами 82 Влияние разных способов представления ганглиозидов на характер процесса апоптоза, индуцированного ганглиозидами 90 Встраивание ганглиозидов в микроокружение рецепторов плазматической мембраны Т-лимфоцитов, ц'; значимых для проведения сигнала на апоптоз

Участие каспаз в апоптозе, индуцированном ганглиозидами

Электрофореграммы ДНК клеток, инкубированных с ганглиозидами 100 Определение разрывов ДНК клеток, инкубированных с ганглиозидами, прямым методом TUNEL

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение механизмов апоптоза Т-лимфоцитов, индуцированного ганглиозидами»

Актуальность

Изучение молекулярных механизмов пролиферации, дифференцировки и гибели клеток иммунной системы является одной из важнейших проблем современной иммунологии, клеточной физиологии и биохимии. В частности, исследование механизмов индукции и проведения сигнала на апоптоз в лимфоцитах является актуальной задачей иммунологии.

Ганглиозиды входят в состав плазматических мембран эукариотических клеток и играют важную роль в процессах их нормальной жизнедеятельности [1, 2]. Однако, при развитии ряда патологических процессов роль ганглиозидов часто оказывается парадоксальной, а то и вредной для организма. Так, известно, что при малигнизации на плазматической мембране экспрессируются ганглиозиды, либо не встречающиеся вообще, либо редкие для мембран нормальных клеток, такие как GM2 и GD3 [1]. Широко известен также факт сброса ганглиозидов при развитии онкологического процесса [3]. Способность сбрасываемых в кровь ганглиозидов влиять на развитие иммунного ответа является предметом изучения ряда современных исследований. Показана способность ганглиозидов подавлять пролиферацию Т-лимфоцитов; один из механизмов такого подавления обуславливается прямым взаимодействием между молекулами ганглиозидов и интерлейкина-2. Такое взаимодействие приводит к значительному подавлению пролиферации клеток IL-2-зависимой цитотоксической линии CTLL-2. Таким образом, ганглиозиды, попавшие в кровоток при развитии онкологического заболевания, способны перехватывать цитокины, уменьшая их действующую концентрацию, и тем самым могут либо развивать, либо усугублять уже имеющуюся иммуносупрессию.

В последнее время особое внимание уделяют функциям гликосфинголипидов (ГСЛ) и их метаболитов как вторичных мессенджеров в клетках [4]. Известна роль таких липидных метаболитов, как церамид (Сег), в проведении в клетке сигнала на апоптоз [5]. Известно также, что церамид образуется при катаболизме ганглиозидов в клетке. Если ганглиозиды способны облегчить вступление иммунокомпетентных клеток в апоптоз или сами являются индукторами программируемой клеточной смерти, это должно привести либо к развитию/усилению иммунодепрессии, либо же вызвать развитие более специфического иммунодефицита в случае элиминации лишь части клеток Т-клеточного репертуара. Более того, этот тип супрессии ганглиозидами пролиферации клеток может тогда частично объяснить механизмы неконкурентного ингибирования, показанного ранее для IL-2- и IL-4-зависимых клеточных линий [6, 7]. Особенно важно проверить, способны ли ганглиозиды индуцировать апоптоз цитотоксических клеток, непосредственно участвующих в элиминации опухолевых клеток. Поэтому была поставлена цель изучить влияние различных ганглиозидов на индукцию и развитие апоптоза в Т-лимфоцитах.

Цель исследования: изучение возможных молекулярных механизмов неконкурентного ингибирования ганглиозидами интерлейкин-2 (IL-2)-зависимой пролиферации Т-лимфицитов. В качестве одного из таких механизмов выбран апоптоз.

Задачи исследования:

• Охарактеризовать влияние разных ганглиозидов на развитие апоптоза в клетках линии CTLL-2, а также в тимоцитах мыши и в мононуклеарах периферической крови человека (МПКЧ).

• Получить зависимости числа клеток линии CTLL-2, вступивших в апоптоз, от концентрации добавленных ганглиозидов и от времени инкубации с ними.

• Проанализировать влияние интерлейкина-2 на индукцию апоптоза ганглиозидами.

• Сравнить пути индукции функциональных ответов в клетках линии CTLL-2 при разных способах презентации ганглиозидов.

• Изучить способность ганглиозидов встраиваться в микроокружение поверхностных рецепторов Т-лимфоцитов, значимых для проведения сигнала на апоптоз.

• Охарактеризовать участие различных каспаз в проведение сигнала на апоптоз, индуцированного ганглиозидами.

Научная новизна

Впервые определена способность ганглиозидов индуцировать апоптоз в различных Т-лимфоцитах, то есть определен новый механизм иммуносупрессии, вызываемой ганглиозидами. Индуцирующая апоптоз способность ганглиозидов убывает в ряду: GM2 > GM3 > GM1 > GDI а > GDlb > GTlb. Способность ганглиозидов индуцировать апоптоз зависит от их структуры: моносиалированные ганглиозиды являются более эффективными индукторами апоптоза, чем ди- и трисиалированные.

Для GM1, GM2 и GM3 кривая концентрационной зависимости числа апоптотических клеток имеет форму параболы, т.е. имеется как область максимальной активности ганглиозидов, так и области с понижением апоптотического эффекта, как при уменьшении, так и при повышении концентрации ГСЛ; для GDI а и GTlb форма кривой приобретает вид плато. По типу временных зависимостей ганглиозиды также делятся на две группы: первая группа характеризуется наличием плато (GM2, GTlb), а вторая группа

- с минимумом на вторые сутки (GM1, GM3, GDI а); такое различие объясняется разным действием ганглиозидов на прохождение клеточного цикла.

Показано, что ганглиозиды, представленные клеткам в составе липосом, являются более эффективными индукторами программируемой клеточной гибели, чем ганглиозиды, представленные в мицеллярной форме.

Показана способность ганглиозидов встраиваться в микроокружение поверхностных рецепторов Т-лимфоцитов, значимых для проведения сигнала на апоптоз. Ганглиозиды уменьшают доступность эпитопов IL-2Ra, CD95, CD3 и CD4 для антител.

Показано, что индуцированный ганглиозидами апоптоз является каспазозависимым. Ганглиозид GM1 запускает каскад каспаз, аналогичный запускаемому классическими индукторами апоптоза. Ассоциированный с опухолями ганглиозид GM2 индуцирует программу гибели клеток, в которой каспаза-3 не принимает участия.

Практическая ценность

Полученные результаты позволяют расширить существующие представления о молекулярных механизмах иммуносупрессиии, вызываемой опухолью; получены новые подходы для разработки (создания) систем противоопухолевой терапии. Различные молекулярные механизмы проведения сигнала на апоптоз, индуцированный разными по структуре ганглиозидами, позволят предсказать состав смесей цитостатиков и иммуномодуляторов, способных вызвать программируемую клеточную гибель разных клеток-мишеней. Возможен подход через структурную модификацию классических цитостатиков ганглиозидами, значимыми для развития апоптоза.

Таким образом, результаты диссертации целесообразно использовать для создания новых подходов к терапии онкологических и аутоиммунных заболеваний.

Апробация работы

Диссертация апробирована на заседании научного коллоквиума отдела иммунологии ИБХ РАН 18 апреля 2002 г и рекомендована к защите. Материалы диссертации доложены: на четвертом национальном конгрессе РААКИ "Современные проблемы аллергологии и клинической иммунофармакологии" (Москва, 2000), на 11 международном иммунологическом конгрессе (Стокгольм, 2001), на XIII и XIV зимней международной молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва, 2001 - 2002), на четвертой и пятой научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2000 - 2001), »на шестой международной иммунологической летней школе им.-Дж. Хэмфри (Пущино, 2002).

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и библиографического указателя. Работа изложена на 127 страницах машинописного текста, включая 7 таблиц и 19 рисунков. Список литературы содержит 185 работ отечественных и иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Холоденко, Роман Васильевич

выводы

1. Ганглиозиды способны индуцировать апоптоз в клетках мышиной Независимой Т-клеточной линии CTLL-2. Моносиалированные ганлиозиды проявляют максимальную способность к индукции апоптоза в этих клетках.

2. Ганглиозиды индуцируют апоптоз также в других Т-лимфоцитах, а именно в клетках тимуса мышей и в мононуклеарах периферической крови человека.

3. Ганглиозиды, представленные клеткам в составе липосом, являются более эффективными индукторами программируемой клеточной гибели, чем ганглиозиды, представленные в мицеллярной форме.

4. Ганглиозиды способны встраиваться в микроокружение поверхностных рецепторов Т-лимфоцитов (CD95, IL-2Ra, CD3 и CD4), что приводит к потере доступности эпитопов для антител. Данные рецепторы значимы для проведения сигнала на апоптоз.

5. Апоптотическое действие ди- и трисиалированных ганглиозидов пропорционально их концентрации, в то время как концентрационная зависимость моносиалированных ганглиозидов (GM1, GM2 и GM3) имеет форму параболы. По типу временных зависимостей ганглиозиды также делятся на две группы: первая группа характеризуется наличием плато (GM2, GTlb), а вторая группа -/р/минимумом на вторые сутки (GM1, GM3,

GDI а); такое различие объясняется разным действием ганглиозидов на прохождение клеточного цикла.

6. Действие интерлейкина-2 на индуцируемый ганглиозидами апоптоз разнонаправлено: Добавление rIL-2 приводит к уменьшению GM1-индуцируемого апоптоза и к усилению ОМ2-индуцируемого.

7. Индуцируемый ганглиозидами апоптоз является каспазозависимым. Ганглиозид GM1 запускает каскад каспаз, аналогичный запускаемому классическими индукторами апоптоза. Ассоциируемый с опухолями ганглиозид GM2 индуцирует программу гибели клеток, в которой каспаза 3 не принимает участия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Холоденко, Роман Васильевич, 2002 год

1. Lloyd К.О., Furukawa К. Biosynthesis and functions of gangliosides: recent advances. Glycoconjugate J. 1998. V. 15(7). P. 627-636.

2. Hakomori S. Cancer-associated glycosphingolipid antigens: their structure, organization, and function. Acta Anat. 1998.V. 161(1-4). P. 79-90.

3. Rebbaa A., Bremer E.G., Portoukalian J. Shedding of gangliosides by tumor cells. Trends Glicosci. Glicotechn. 1995. V. 7(35). P. 223-234.

4. Malisan F., Testi R. Lipid signaling in CD95-mediated apoptosis. FEBS Lett. 1999. V. 452(1-2). P. 100-103.

5. Okazaki Т., Kondo Т., Kitano Т., Tashima M. Diversity and complexity of ceramide signalling in apoptosis. Cell Signal. 1998. V. 10(10). P. 685-692.

6. Kusumi A., Sako Y. Cell surface organization by the membrane skeleton. Curr. Opin. Cell Biol. 1996. V. 8. P. 566-574.

7. Simons K., Ikonen E. Functional rafts in cell membranes. Nature. 1997. V, 387. P. 569-572.

8. Okamoto Т., Schlegel A., Scherer P.E., Lisanti M. Caveolins, a family of scaffolding proteins for organizing "preassembled signaling complexes" at the plasma membrane. J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 5419-5422.

9. Masserini M., Palestini P., Pitto M. Glycolipid-enriched caveolae and caveolae-like domains in the nervous system. J. Neurochem. 1999. V. 73. P. 111.

10. Kurzchalia T.V., Parton R.G. Membrane microdomains and caveolae. Curr. Opin. Cell Biol. 1999. V. 11. P. 424-431.

11. Sargiacomo M., Sudol M., Tang Z., Lisanti M.P. Signal transducing molecules and glycosyl-phosphatidylinositol-linked proteins form a caveolin-rich insoluble complex in MDCK cells. J. Cell Biol. 1993. V. 122. P. 789-807.

12. Kasahara К., Sanai Y. Functional roles of glycosphingolipids in signal transduction via lipid rafts. Glycoconjugate Journal. 2000. V. 17. P. 153-162.

13. Katagiri Y.U., Kiyokawa N., Fujimoto J. A role for lipid rafts in immune cell signaling. Microbiol. Immunol. 2001. V. 45 (1). P. 1-8.

14. Varma R., Mayor S. GPI-anchored proteins are organized in submicron domains at the cell surface. Nature. 1998. V. 394. P. 798-801.

15. Friedrichson Т., Kurzchalia T.V. Microdomains of GPI-anchored proteins in living cells revealed by crosslinking. Nature. 1998. V. 394. P. 802-805.

16. Shu L., Lee L., Chang Y., Holzman L.B., Edwards C.A., Shelden E., Shayman J.A. Caveolar structure and protein sorting are maintained in NIH 3T3 cells independent of glycosphingolipid depletion. Arch. Biochem. Biophys. 2000. V. 373. P. 83-90.

17. Ohanian J., Ohanian V. Sphingolipids in mammalian cell signaling. Cell. Mol. Life Sci. 2001. V. 58. P. 2053-2068.

18. Van Echten G., Birk R., Brenner-Weib G., Schmidt R.R., Sandhoff K. Modulation of sphingolipid biosynthesis in primary cultured neurons by long chain bases. J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 9333-9339.

19. Holleran W.M., Feingold K.R., Man M.Q., Gao W.N., Lee J.M., Elias P.M. Regulation of epidermal sphingolipid synthesis by permeability barrier function. J. Lipid Res. 1991. V. 32 P. 1151-1158.

20. Stoffel W., LeKim D., Sticht G. Metabolism of sphingosine bases. IX. Degradation in vitro of dihydrospingosine and dihydrospingosine phosphate to palmitaldehyde and ethanolamine phosphate Hoppe Seyler's Z. Physiol.Chem. 1968. V. 349. P. 664-670.

21. Rother J., Van Echten G., Schwarzmann G., Sandhoff K. Biosynthesis of sphingolipids: dihydroceramide and not sphinganine is desaturated by cultured cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. V. 189. P. 14:20.

22. Michel С., van Echten-Deckert G. Conversion of dihydroceramide to ceramide occurs at the cytosolic face of the endoplasmic reticulum. FEBS Lett. 1997. V. 416. P. 153-155.

23. Paul P., Kamisaka Y., Marks D.L., Pagano R.E. Purification and characterization of UDP-glucose: ceramide glucosyltransferase from rat liver Golgi membranes. J. Biol. Chem. 1996. V. 271.V. 2287-2293.

24. Warnock D.E., Lutz M.S., Blackburn W.A., Young W.W., Baenziger J.U. Transport of newly synthesized glucosylceramide to the plasma membrane by a non-Golgipathway. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 2708-2712.

25. Huwiler A., Kolter Т., Sandhoff K. Physiology and pathophysiology of sphingolipid metabolism and signaling. Biochim. Biophis. Acta. 2000. V. 1485. P. 63-99.

26. Kolter Т., Sandhoff K. Sialic acids-why always alpha-linked? Glycobiology. 1997. V. 7(7). P. 7-10.

27. Sommers L.W., Hirschberg C.B. Transport of sugar nucleotides into rat liver Golgi. A new Golgi marker activity. J. Biol. Chem. 1982. V. 257(18). P. 1081110817.

28. Kolter Т., Sandhoff K. Recent advances in the biochemistry of sphingolipidoses. Brain Pathol. 1998. V. 8. P. 79-100.

29. Wessling-Resnick M., Braell W.A. The sorting and segregation mechanism of the endocytic pathway is functional in a cell-free system. J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 690-699.

30. Kok J.W., Babia Т., Hoekstra D. Sorting of sphingolipids in the endocytic pathway ofHT29 cells. J. Cell Biol. 1991. V. 114. P. 231-239.

31. Schwarzmann G., Hinrichs U., Sonderfeld S. Gangliosides and modulation of neuronal functions. NATO ASI Series. 1987. V. 7(49). P. 217-229.

32. Steinman R.M., Mellman I.S., Muller W.A., Cohn Z.A. Endocytosis and the recycling of plasma membrane. J. Cell. Biol. 1983. V. 96(1). P. 1-27.

33. Sandhoff K., Kolter T. Topology of glycosphingolipid degradation. Trends Cell Biol. 1996. V. 6. P. 98-103.

34. Carlsson S.R., Roth J., Piller F., Fukuda M. Isolation and characterization of human lysosomal membrane glycoproteins, h-lamp-1 and h-lamp-2. Majorsialoglycoproteins carrying polylactosaminoglycan. J. Biol.Chem. 1988. V. 263. P. 18911-18919.

35. Hopkins C.R., Gibson A., Shipman M., Miller K. Movement of internalized ligand-receptor complexes along a continuous endosomal reticulum. Nature. 1990. V. 346. P. 335-339.

36. Van Deurs В., Holm P.K., Kayser L., Sandvig K., Hansen S.H. Multivesicular bodies in HEp-2 cells are maturing endosomes. Eur. J. Cel Biol. 1993. V. 61. P. 208-224.

37. Suzuki K. GM1 -gangliosidosis (gneralized gangliosidosis). Morphology and chemical pathology. Path. Europ. 1968. V. 3. P. 389-408.

38. Sandhoff K. in book: The metabolic and molecular basis of inherited disease (Scriver c, Beaudet A.L., Sly W.S. and Valle D.). 1995. P. 2427-2441. McGraw-Hill.

39. Gravel R.A. in book: The metabolic and molecular basis of inherited disease (Scriver c, Beaudet A.L., Sly W.S. and Valle D.). 1995. P. 2441-2479. McGraw-Hill.

40. Klima H., Klein A., Van Echten G., Schwarzmann G., Suzuki K., Sandhoff K. Over-expression of a functionally active human GM2-activator protein in Escherichia coll Biochem. J. 1993. V. 292. P. 571-576.

41. Meier E.M., Schwarzmann G., Furst W., Sandhoff K. The human GM2 activator protein. A substrate specific cofactor of beta- hexosaminidase A. J. Biol. Chem. 1991. V. 266 P. 1879-1887.

42. Furst W., Sandhoff K. Activator proteins and topology of lysosomal sphingolipid catabolism. Biochem. Biophys. Acta. 1992. V. 1126. P. 1-16.

43. Heinrich M., Wickel M., Schneider-Brachert W., Sandberg C., Gahr J., Schwandner R., Weber Т., Brunner J., Kronke M., Schutze S. Cathepsin D targeted by acid sphingomyelinase-derived ceramide. EMBO J. 1999. V. 18. P. 5252-5263.

44. Brindley D.N., Abousalham A., Kikuchi Y., Wang C.N., Waggoner D.W. "Cross talk" between the bioactive glycerolipids and sphingolipids in signal transduction. Biochem. Cell Biol. 1996. V. 74(4). P. 469 476.

45. Lambeth J., Sung Ho Ryu. Glycerolipids in signal transduction. In book: Biochemistry of lipids, lipoproteins and membranes. Eds: Vance D.E., Vance J.E. Elsevier Sci. 1996. P. 237-254.

46. Lu P., Sharom F. Gangliosides are potent immunosuppressors of IL-2-mediated T-cell proliferation in a low protein enviroment. Immunology. 1995. V. 86(3). P. 356-363.

47. Kong Y., Li R., Ladisch S. Natural forms of shed tumor gangliosides. Biochim. Biophys. Acta. 1998. V. 1394. P. 43-56

48. Ladish S., Kitata S., Hays E.F. Gangliosides shed by tumour cells enhance tumour formation in mice. J. Clin. Invest. 1987. V. 79. P. 1879-1886.

49. Ortaldo J., Mason A., Longo D. T cell activation via the disialoganglioside GD3: analysis of signal transduction. J. Leukoc. Biol. 1996. V 4. P. 533-539.

50. Ragupathi G. Carbohydrate antigens as targets for active specific immunotherapy. Cancer Immunol. Immunother. 1996. V. 43(3). P. 152-157.

51. Robb R.J. The suppressive effect of gangliosides upon IL-2-dependent proliferation as a function of lL-2-receptor association. J. Immunol. 1986. V. 136. P. 971-976.

52. Ladisch S., Becker H., Ulsh L. Immunosuppression by human gangliosides: 1. Relationship of carbohydrate structure to the inhibition of T cell responses. Biochim. Biophys. Acta. 1992. V. 1125(2). P. 180-188.

53. Tai Т., Sze L., Kawashima I., Saxton R.E., Irie R.F. Monoclonal antibody detects monosialogangliosides having a sialic acid alpha 2-3-galactosyl residue. J. Biol. Chem. 1987. V. 262(14). P. 6803-6807.

54. Morrison W.J., Young K., Offner H., Vandenbark A.A. Ganglioside (GM1) distinguishes the effects of CD4 on signal transduction through the TCR/CD3 complex in human lymphocytes. Cell. Mol. Biol. Res. 1993. V. 39(2). P. 159165.

55. Sorice M., Pavan A., Misasi R., Sansolini Т., Garofalo Т., Lenti L., Pontieri G.M., Frati L., Torrisi M.R. Monosialoganglioside GM3 induces CD4 internalization in human peripheral blood T-lymphocytes. Scand. J. Immunol. 1995. V. 41(2). P. 148-156.

56. Li R., Gage D., McKallip R., Ladisch S. Structural characterisation and in vivo immunosuppressive activity of neuroblastoma GD2. Glycoconj. J. 1996. V. 13(3). P. 385-389.

57. Lengle E. E., Krishnaraj R., Kemp R. C. Inhibition of the lectin-induced mitogenic response of thymocytes by glycolipides. Cancer Res. 1979. V. 39. P. 817-822.

58. Krishnaraj R., Lin J., Kemp R.J. Lectin and ionophore-stimulated Ca2+ -influx in murine lymphocytes: inhibition by disialogangliosides. Cell. Immunol. 1983. V. 78 P. 152-158.

59. Kato E., Akiyoshi K., Furuno. Т., Nakanishi M., Kikuchi A., Kataoka K., Sunimoto J. Interaction between gangioside-containing liposome and rat T-lymphocyte: confocal fluorescence microscopic study. Biochim. Biophys. Res. Com. 1994. V. 3. P. 1750-1755.

60. Heitger A., Ladish S. Gangliosides block antigen presentation by human monocytes. Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1303(2). P. 161-168.

61. Markus D.M. A review of the immunogenic and immunomodulatory properties ofglycosphingolipids. Mol. Immunol. 1984. V. 21. P. 1083-1091.

62. Sharom F.J., Chu A.L.H., Ross Т.Е. Gangliosides and glycophorin inhibit T-lymphocyte activation. Biochem. Cell Biol. 1990. V. 68 P. 735-744.

63. Irani D.N., Lin K.I., Griffin D.E. Brain-derived gangliosides regulate the cytokine production and proliferation of activated T cells. J. Immunol. 1996. V. 157(10). P. 4333-4340.

64. Parker J., Caldini G., Krishnamurti Ch., Ahrens P.B., Ankel H. Binding of interleukin 2 to gangliosides. FEBS Lett. 1984. V. 170. P. 391-395.

65. Chu J.W.K., Sharom FJ. Interleukin-2 binds to gangliosides in micelles and lipid bilayers. Biochim. Biophys. Acta. 1990. V. 1028. P. 205-214.

66. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель. "Наука". Санкт-Петербург. 1996. С. 296.

67. Kerr J.F., Wyllie А.Н., Curric A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer. 1972. V. 26. P. 239.

68. Ярилин A.A. Апоптоз и его место в иммунных процессах. Иммунология. 1996. Т. 2. С. 10.

69. Kroemer G., Zamzami В., Susin A. Mitochondrial control of apoptosis. Immunol. Today. 1997. V. 18(1). P. 44-51.

70. Borther C.D., Cidlowski J.A. Absence of volume regulatory mechanism contributes to the rapid activation of apoptosis in thymocytes. Am. J. Physiol. 1996. V. 271. P. 950-961.

71. Darzynkiewicz Z., Juan G., Li X., Gorczyca W., Murakami Т., Taganos F. Cytometry in cell necrobiology: analysis of apoptosis and accidental cell death (necrosis). Cytometry. 1997. V. 27. P. 1.

72. Gong J., Traganos F., Darzynkiewicz Z. Growth imbalance and altered expression of cyclins Bl, A, and D3 in MOLT-4 cells syncronized in the cell cycle by inhibitors of DNA replication. Cell Growth and Diff. 1995. V. 6. P. 1485.

73. Telford W.G.j King L.E., Fraker P.J. Rapid quantitation of apoptosis in pure and heterogeneous cell populations using flow cytometry. J. Immunol. Meth. 1994. V. 172. P. 1-16.

74. Cohen J,J. Glucocorticoid-induced apoptosis in the thymus. Sem. Immunol. 1992. V. 4. P. 363.

75. Ярилин А.А. Основы иммунологии. "Медицина". 1999. Москва.

76. Majno G., Joris I. Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death. Am. J. Pathol. 1995. V. 146. P. 3.

77. Petit P.X., Lecoeur H., Zorn E., Dauguet C., Mignotte В., Gougeon M.L. Alterations in mitochondrial structure and function are early events of dexametasone-induced thymocyte apoptosis. J. Cell Biol. 1995. V. 130. P. 157.

78. Zarnzami N., Marchetti P., Castedo M., Zanin C., Vayssiere J.L., Petit P.X., Kroemer G. Reduction in mitochondrial potential constitutes an early irreversible step of programmed lymphocyte death in vivo. J. Exp. Med. 1995. V. 181. P. 1661.

79. Fadok V.A., Voelker D.R., Capbell P.A. Cohen J.J., Bratton D.L., Henson P.M. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages. J. Immunol. 1992. V. 148. P. 2207-2216.

80. Fesus L. Apoptosis fashions T and В cell repertoire. Immunol. Lett. 1991. V. 30. P. 277-282.

81. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide. Science. 1995. V. 267. P. 1445.

82. Murgia H., Pizzo P., Sandona D., Zanovello P., Rizzuto R., Di Virgilio F. Mitochondrial DNA is not fragmented during apoptosis. J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 10939.

83. Onishi Y., Azuma Y., Sato Y., Mizuno Y, Tadakuma T, Kizaki H Topoisomerase inhibitors induce apoptosis in thymocytes. Biochem. Biophys. Acta. 1993. V; 175. P. 147.

84. Jacobson M.D., Burne J.F., Raff M.C. Programmed cell death and Bcl-2 protection in the absence of a nucleus. EMBO J. 1994. V. 13. P. 1899.

85. Cotter T.G., Glynn J.M., Green D.R. The induction of apoptosis by chemotherapeutic agents occurs in all phases of the cell cycle. Anticancer Res. 1992. V. 12. P. 773.

86. Duvall E., Wyllie A.H. Macrophage recognition of cells undergoing programmed cell death (apoptosis). Immunology. 1985. V. 52. P. 351.

87. Brian V. Morphological criteria for identifying apoptosis. Cell Biology: A Labory Handbook. 1998. V. 1. P. 1.

88. Hengarther M.O. The biochemistry of apoptosis. Nature. 2000. V. 407. P. 770776.

89. Grassme' H., Jekle A., Riehle A., Schwarz H., Berger J., Sandhoff K., Kolesnick R., Gulbins E. CD95 signaling via ceramide-rich membrane rafts. JBC. 2001. V. 276(23). P. 20589-20596.

90. Nicholson D.W., Thornberry N.A. Caspases: killer proteases. Trends Biochem. Sci. 1997. V. 22. P. 299.

91. Haunstetter A., Izumo S. Apoptosis. Basic mechanisms and implications for cardiovascular disease. Circ. Res. 1998. V. 82. P. 1111.

92. Xanthoudakis S., Sophie R., Rasper D., Hennesey Т., Aubin Y., Cassady J., Tawa P., Ruel R., Rosen A., Nicholson D.W. HSP60 accelerates the maturation of pro-caspase-3 by upstream activator proteases during apoptosis. EMBO J. 1999. V. 18.(8). P. 2049.

93. Cardone M.H., Salvesen G.S., Widmann C., Johnson G., Frisch S.M. The regulation of anoikis: MEKK-1 activation requires cleavage by caspases. Cell. 1997. V. 90. P. 315.

94. Porter A.G., Janicke R.U. Death substrates come alive. Bioassays. 1997. V. 19. P. 501.

95. Газиев А.И., Куцый М.П., Закржевская Д.Т. Связывание протеиназ с гистонами ядер крысиных тимоцитов. Мол. Биол. 1992. Т. 26. С. 532.

96. Самуилов В.Д., Олескин А.В., Лагунова Е.М. Программируемая клеточная смерть. Биохимия. 2000. Т. 65. С. 1029-1046.

97. Pan G., O'Rourke К., Chinnaiyan A.M., Gentz R., Ebner R., Ni J., Dixit V.M. The receptor for the cytotoxic ligand TRIAL. Science. 1997. V. 276. P. 111.

98. Nakagava Т., Zhu H. Caspase-12 mediates endoplasmic reticulum-speciflc apoptosis and cytotoxicity by amyloid-/. Nature. 2000. V. 403. P. 98-103.

99. Squier M.K., Miller A.C., Malkison A.M., Cohen J.J. Calpain activation in apoptosis. J. Cell. Physiol. 1994. V. 159. P. 229-237.

100. Hockenbery D.M. The bcl-2 oncogene and apoptosis. Sem. Immunol. 1992. V. 4. P. 413-420.

101. Delic J., Morange M., Magdelenat H. Ubiquitin pathway involvement in human lymphocyte gamma-irradiation-induced apoptosis. Mol. Cell Biol. 1993. V. 13. P. 4875-4883.

102. Drexler H.C.A. Activation of the cell death program by inhibition of proteasomefunction. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 855-860.

103. Monney L., Otter I., Olivier R., Ozer H.L., Haas A.L., Omura S., Borner C. Defects in the Ubiquitin Pathway induce caspase-independent apoptosis blocked by bcl-2. J.Biol. Chem. 1998. V. 273.(11). P. 6121-6131.

104. Hara S., Halicka H.D., Bruno S., Gong J., Traganos F., Darzynkiewicz Z. Effect ofprotease inhibitors on early events of apoptosis. Exp. Cell Res. 1996. V. 223. P. 372-384.

105. Kumar S., Baglioni C. Protection from tumor necrosis factor-mediated cytolysis by overexpression of plasminogen activator inhibitor type-2. J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 20960-20964.

106. De Belle I., Testolin I., Pandey S., Carson C., Walker P.R., Armato U., Sikorska M. Degradation of constitutive transcription factors during apoptosis in rat thymocytes. Biochem. Cell Biol. 1994. V. 72. P. 639-648.

107. Куцый М.П., Кузнецова?, Газиев А.И. Участие протеаз в апоптозе. Биохимия. 1999. Т. 64(2). С. 149.

108. Green D.R., Reed J.C. Science. 1998. V. 281. P. 1309-1312.

109. Kluck R.M., Bossy-Wetzel, Green D.R., Newwmeyer D.D. Science. 1997. V. 275. P. 1132-1136.

110. Susin S.A. et. al. Nature. 1999. V. 397. P.441-446.

111. Susin S.A., Zamazami N., Castedo M., Hirsch Т., Marchetti P., Macho A., Daugas E., Geuskens M., Kroemer G. Bcl-2 inhibits the mitochondrial release of an apoptogenic protease. J. Exp. Med. 1996. V. 184. P. 1331-1341.

112. Vander Heiden M.G., Chandel N.S., Williamson E.K., Schumacker P.T., Thompson C.B. Bcl-xL regulates the membrane potantial and volume homeostases of mitochonria. Cell. 1997. V. 91. P. 627-637.

113. Rose Т., Oliver R., Monney L., Rager M., Conus S., Fellay I., Jansen В., Borner C. Bcl-2 prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome c. Nature. 1998. V. 391. P. 496.

114. Kroemer G., Dallaporta В., Resche-Rigon M. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis. Annu. Rev. Physiol. 1998. V. 60. P. 619642.

115. Kluck R.M., Bossey-Wetzel E., Green D.R., Newmeyer D.D. The release of cytochrome с from mitochondra: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis. Science. 1997. V. 275. P. 1132-1136.

116. Liu X., Kim C.N., Yang J., Jemmerson, Wang Z. Cell. 1996. V. 275. P. 147157.

117. Vaux D.L., Cory S. Adams J.M. Bcl-2 gene promotes haemopoietic cell survival and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells. Nature. 1988. V. 335. P. 440-442.

118. Tsujimoto Y. Stress-resistance conferred by high level of bcl-2 alpha protein in human В lymphoblastoidcell. Oncogene. 1989. V. 4. P. 1331-1336.

119. Tsujimoto Y., Shimizu S. Bcl-2 family: life-or-death switch. Bcl-2 family: life-or-death switch. FEBS Letters. 2000. V. 466. P. 6-10.

120. Oltvai Z.N., Milliman C.L., Korsmeyer S.J. Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog, Bax, that accelerates programmed cell death. Cell.1993. V. 74. P. 609-619.

121. Yang E., Zha J., Jockel J., Boise L.H., Thompson C.B., Korsmeyer S.J. Bad, a heterodimeric partner for Bcl-XL and Bcl-2, displaces Bax and promotes cell death. Cell. 1995. V. 80. P. 285-291.

122. Knudson C.M., Korsmeyer S.J. Bcl-2 and Bax function independently to regulate cell death. Nature Genet. 1997. V. 16. P. 358-363.

123. Nakayama K., Nakayama K., Negishi I., Kuida K., Sawa H., Loh D.Y. Targeted disruption of Bcl-2 alpha beta in mice: occurrence of gray hair, polycystic kidney disease, and lymphocytopenia. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1994. V. 91. P. 3700-3704.

124. Knudson C.M., Tung K.S., Tourtellotte W.G., Brown G.A., Korsmeyer S.J. Bax-deficient mice with lymphoid hyperplasia and male germ cell death. Science. 1995. V. 270. P. 96-99.

125. Chinnaiyan A.M., O'Rourke K., Lane B.R., Dixit V.M. Interaction ofCED-4 with CED-3 and CED-9: a molecular framework for cell death. Science. 1997. V. 275. P, 1122-1126.

126. Chowdary D.R.,Dermody J.J., Jha K.K., Ozer H.L. Accumulation of p53 in a mutant cell line defective in the ubiquitin pathway. Mol. Cell Biol. 1994. V. 14. P. 1997-2003.

127. Ichihara A., Tanaka K. Roles of proteasomes in cell growth. Mol. Biol. Rep.1995. V. 21. P. 49-52.

128. Ginsberg D., Mechta F., Yaniv M., Oren M. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88. P. 9979-9983.

129. Ewen M.E., Miller S.J. p53 and translational control. Biochim. Biophys. Acta. 1996. V.1242. P. 181-184.

130. Mummenbrauer Т., Janus F., Muller В., Wiesmuller L.p53protein exhibits 3'-to-5' exonuclease activity. Cell. 1996. V. 85. P. 1089-1099.

131. Jayaraman J., Prives C. Activation of p53 sequence-specific DNA binding by short single strands of DNA requires the p53 C-terminus. Cell. 1995. V. 85. P. 1021-1029.

132. Lee S., Elenbaas В., Levine A., Griffith J. p53 and its 14 kDa C-terminal domain recognize primary DNA damage in the form of insertion/deletion mismatches. Cell. 1995. V. 81. P. 1013-1020.

133. Reed M., Woelker В., Wang P., Wang Y., Anderson M.E., Tegtmeyer P. The C-terminal domain of p53 recognizes DNA damaged by ionizing radiation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 9455-9459.

134. Raycroft L., Wu H.Y., Lozano G. Transcriptional activation by wild-type but not transforming mutants of the p53 anti-oncogene. Science. 1990. V. 249. P. 1049-1051.

135. Чумаков П.М. Функция гена p53: выбор между жизнью и смертью. Биохимия. 2000. Т. 65(1). С. 34-47.

136. Ludwig R.L., Bates S., Vousden K.H. Differential activation of target cellular promoters by p53 mutants with impaired apoptotic function. Mol. Cell Biol. 1996. V. 16. P. 4952-4960.

137. Miyashita Т., Reed J.C. Tumor suppressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene. Cell. 1995. V. 80. P. 293-299.

138. Bennett M., Macdonald K., Chan S.W., Luzio J.P., Simari R., Weissberg P. Cell surface trafficking of Fas: a rapid mechanism ofp53-mediated apoptosis. Science. 1998. V. 282. P. 290-293.

139. Ashkenazi A., Dixit W.M. Death receptors: signaling and modulation. Science. 1998. V. 281. P. 1305-1308.

140. Polyak K., Xia Y., Zweier J.L., Kinzler K.W., Vogelstein B. A model for p53-inducedapoptosis. Nature. 1997. V. 389. P. 300-305.

141. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. "Эдиториал УРСС" Москва. 2002. С. 126-127.

142. Yang Y., Ashwell P. Thymocyte apoptosis. J. Clin. Immunol. 1999. V. 19. P. 337-349.

143. Ogasawara J, Suda Т., Nagata S. Selective apoptosis of CD4+CD8+ thymocytes by anti-Fas antibody. J. Exp. Med. 1995. V. 181(2). P. 485-491.

144. Adachi M., Suematsu S., Kondo T. et.al. Targeted mutation in the Fas gene causes hyperplasia in peripheral lymphoid organs and liver. Nature Genet. 1995. V. 11. P. 294-299.

145. Scaffidi C., Kirchhoff S., Krammer P.H., Peter M.E. Apoptosis signaling in lymphocytes. Curr. Opinion Immunol. 1999. V. 11. P. 277-285.

146. Pitti R.M., Marsters S.A., Lawrence D.A., Roy M., Kischkel F.C., Dowd P., Huang A., Donahue С J., Sherwood S.W. et. al. Genomic amplification of decoy receptor fr Fas ligand in lung and colon cancer. Nature. 1998. V. 396. P. 699-703.

147. Vignaux F., Vivier E., Malissen В., Depraeter V., Nagata S., Golstein P. TcR/CD3 coupling to Fas-based cytotoxity. J. Exp. Med. 1995. V. 181(2). P. 781-786.

148. Brunner Т., Mogll RJ. La Face D. et. al. Cell-autonomous Fas(CD95)/Fas-ligand interaction mediates activation-induced apoptosis inT-cell hybridomas. Nature. 1995. V. 373. P.441-444.

149. Dhein J., Waiczak H., Baumier C. et.al. Autocrine T-cell suicide mediated by APO-1 (Fas/CD95). Nature. 1995. V. 373. P. 438-441.

150. Graves J.D., Draves K.E., Craxton A., Krebs E.G., Clark E.A. A comparison of signaling requierments for apoptosis of human В lymphocytes induced by В cell receptor and CD95/Fas. J. Immunol. 1998. V. 161. P. 168-174.

151. Fang W., Weintraub B.C., Dunlap В., Garside P., Pape K.A., Jenkins M.K., Goodnow C.C., Mueller D.L., Behrens T.W. Self-reactive В lymphocytes overexpressing Bcl-xL. Immunity. 1998. V. 9. P. 35-45.

152. Lee H., Arsura M., Wu M. Role of Rel-relatedfactors in control of c-myc gene transcription in receptor-mediated apoptosis of the murine В cell WEHI 231 line. J. Exp. Med. 1995. V. 181. P. 1169-1177.

153. Bharti A.Ch., Singh S.M. Induction of apoptosis in bone marrow cells by gangliosides produced by a T cell lymphoma. Immunol. Letters. 2000. V. 72. P. 39-48.

154. Zhou J., Shao H., Cox N.R., Baker H.J., Ewald S.J. Gangliosides enhance apoptosis of thymocytes. Cell Immunol. 1998. V. 183(2). P. 90-98.

155. De Maria, Lenti L., Malisan F., d'Agostino F., Tomassini В., Zeuner A., Rippo M.R., Testi R. Requirement for GD3 ganglioside in CD95- and ceramide induced apoptosis. Science. 1997. V. 277. P. 1652-1655.

156. De Maria R., Rippo M., Schuchman E., Testi R. Acidic sphingomyelinase (ASM) is necessary for Fas-indused GD3 ganglioside accumulation and efficient apoptosis of lymphoid cells. J. Exp. Med. 1998. V. 187(6). P. 897902.

157. Wang X.Q., Sun P., Amy S. Inhibition of integrin-linked kinase/protein kinase B/Akt signaling. J. Biol. Chem. 2001. V. 276(48). P. 44504-44511.

158. Wang X.Q., Sun P., AbQamari A., Tai T, Kawashima I., Paller A.S. Carbohydrate-carbohydrate binding of ganglioside to integrin x5 modulates a 5/31 function, J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 8436-8444.

159. Дятловицкая Э.В., Ахмед-Заде А. Прикл. биохимия и микробиология. 1983. Т. 19. С. 399-402.

160. Gillis S., Smith К.A. In vitro generation of tumor-specific cytotoxic lymphocytes. Secondary allogeneic mixed tumor lymphocyte culture of normal murine spleen cells. J. Exp. Med. 1977. V. 146. N. 2. P. 468-482.

161. Aubin J. E. Autofluorescence of viable cultured mammalian cells. J. Histochem. 1979. Cytol. V. 27. P. 36.

162. Rafaeli Y., Van Parijs L., London C.A., Tschopp J., Abbas A.K. Biochemical mechanisms of IL-2-regulated Fas-mediated T cell apoptosis. Immunity. 1998. V. 8. P. 615-623.

163. Torchilin V.P., Rammohan R., Weissig V., Levchenko T.C. TAT peptide on the surface of liposomes affords their efficient intracellular delivery even at low temperature and in the presence of metabolic inhibitors. PNAS. 2001. V. 98(15). P: 8786-8791.

164. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: enemies within. Science. 1998. V. 281. P. 1312-1316.

165. Liu X., Zou H., Staughter C., Wang X. DFF, a heterodimeric protein that functions downstream of caspase-3 to trigger DNA fragmentation during apoptosis. Cell. 1997. V. 89. P. 175-184.

166. Zou H., Li Y., Liu X., Wang X. An APAF-1-cytochrome с multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9. J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 11549-11556.