Изучение влияния структуры меченных флуорохромами антигенов на их взаимодействие с антителами и разработка методов иммуноанализа пестицидов, сурфактантов и полиароматических углеводородов для контроля окружающей среды и продуктов питания тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат химических наук Лобанова, Анна Юрьевна

• Лобанова, Анна Юрьевна
• кандидат химических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат химических наук Лобанова, Анна Юрьевна

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

2. ВВЕДЕНИЕ.

3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

3.1 ПАВ: получение, применение, биодеградация в окружающей среде.

3.2 Полиароматические углеводороды.

3.3 Методы определения НФ, JIAC и ПАУ.

3.4 Иммунохимические методы анализа.

3.5 Получение иммунореагентов к низкомолекулярным веществам.

3.6 Определение констант аффинности антител.

3.7 Применение ПФИА для анализа объектов окружающей среды.

4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4.1 Материалы и оборудование.

4.2 Синтез имм>ногенов.

4.3 Синтез трейсеров (конъюгатов с флуоресцеином).

4.4 Методика проведения ПФИА.

4.5 Определение аналитических характеристик ПФИА.

4.6 Методика проведения микропроточного иммуноферментного анализа с хемилюминесцентной (XJI) детекцией (микрочипы).

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5.1 Микропроточный иммуноферментный анализ на атразин с хемилюминисцентной детекцией.

5.2 Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ на ацетохлор.

5.3 Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ на нонилфенол.

5.4 Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ на линейные алкилбензолсульфонаты.

5.5 Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ на полиароматические углеводороды.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение влияния структуры меченных флуорохромами антигенов на их взаимодействие с антителами и разработка методов иммуноанализа пестицидов, сурфактантов и полиароматических углеводородов для контроля окружающей среды и продуктов питания»

с каждым годом все более остро встает проблема загрязнения природныхобъектов и продуктов питания токсичными веществами. В число такихзагрязнителей входят пестициды, поверхностно активные вещества (ПАВ) иполиароматические углеводороды (ПАУ).Хлорсодержащие пестициды широко применяются в сельском хозяйстве иявляются распространенными загрязнителями природных вод и почв. Наиболееиспользуемыми в промышленности, в том числе при производстве детергентов,являются представители анионных ПАВ линейные алкилбензолсульфонаты (ЛАС)и широко распространенная группа неионных ПАВ - нонилфенолполиэтоксилаты,которые в процессе биодеградации образуют стабильный продукт нонилфенол(НФ). ПАВ обладают эстрогенной активностью и значительно изменяютгормональный фон живых существ [1]. ПАУ образуются в результате деятельностихимической, металлургической, целлюлозно-бумажной промышленности. Этоткласс органических соединений объединяет десятки веществ, для которыххаракгерно наличие в химической структуре двух и более конденсированныхбензольных колец. ПАУ представляют особую опасность, поскольку все этисоединения крайне устойчивы, многие из них являются токсичными,канцерогенными и мутагенными. ПАУ редко содержатся в пробах какиндивидуальные соединения, чаще всего они представлены как сложная смесь, чтоделает затруднительным их детальный анализ.В настоящее время для определения вышеперечисленных групп веществшироко применяют в основном традиционные физико-химические методы анализа[2-9]. Однако при их высокой чувствительности и точности, эти методы являютсядорогостоящими и требуют длительной пробоподготовки образцов, чтосовершенно неприемлемо для целей массового скрининга.Поэтому аюуальной является разработка высокоспецифичных, надежных, иодновременно быстрых и недорогих методов анализа. Этим требованиямудовлетворяют методы иммунохимического анализа, основанные на уникальномспецифическом взаимодействии антиген-антитело.к наиболее экспрессным и простым в исполнении иммунохимическимметодам относится ноляризационно-флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА),поэтому в рамках данной работы особое внимание уделялось разработке методикПФИА. Целыо работы являлось изучение закономерностей взаимодействия антителс антигенами и разработка иммунохимических методов анализа ряда ароматическихсоединений, являющихся загрязнителями окружающей среды. Основная часть работыпосвящена ПФИА на пестициды, ПАВ и ПАУ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Лобанова, Анна Юрьевна

6. выводы

1. Установлено, что структуры иммунореагентов влияют на чувствительность и специфичность поляризационного флуороиммуноанализа. Выявлено, что для низкомолекулярных соединений со слабыми антигенными детерминантами наиболее важным является выбор углеводородной «ножки» в структуре иммунореагентов. В исследованных случаях оптимальным вариантом оказалось сочетание гомологичных по структуре иммуногена и трейсера, обладающих средней по длине углеводородной ножкой.

2. Изучено влияние метода иммобилизации антител на кремниевом носителе на чувствительность и стабильность микропроточного иммуноферментного анализа на атразин. Наибольшая стабильность и низкий предел обнаружения .метода наблюдались в случае ковалентной иммобилизации антител на модифицированном микрочипе.

3. Получены поликлональные антитела и флуоресцеин-меченный трейсер для гербицида ацетохлора и разработан специфичный ПФИА на ацетохлор с пределом обнаружения 9 мкг/л, позволяющий проводить определение агразина в яблочном соке.

4. Подобраны оптимальные иммунореагенты на детергент нонилфенол. Наилучшая чувствительность наблюдалась в случае использования антител, полученных на иммуноген, синтезированный посредством присоединения смеси изомеров НФ к белку-носителю через формальдегид (по реакции Манниха). Впервые был разработан ПФИА на НФ с пределом обнаружения 4 мг/л. Метод был оптимизирован для анализа речной воды. Процент открытия составил порядка 80%.

5. Разработан ПФИА на линейные алкилбензолсульфонаты. Синтезированы трейсеры с разной структурой углеводородной ножки и исследовано их влияние на характеристики анализа. Наиболее чувствительный анализ (с пределом

82 обнаружения 0,5 мг/л) был получен при использовании трейсера, имеющего среднюю по длине и разветвлённости углеводородную ножку и по структуре наиболее близкого к иммуногену. В ряду уменьшения длины углеводородной ножки в структуре трейсера наблюдалось ухудшение его связывания с антисывороткой.

6. Впервые разработан ПФИА на полиароматические углеводороды. Были подобраны оптимальные иммунореагенты и найдены аналитические характеристики метода. Предел обнаружения бенз(а)пирена составил 1 нг/мл. Показано, что при варьировании иммунореагентов возможно получить класс-специфичный или специфичный на одно соединение анализ. Рассчитанные константы связывания антител с трейсером имели значения в диапазоне Ю8-Ю10 М'1 и коррелировали с характеристиками чувствительности и специфичности анализа.

7. Разработанные методики, успешно апробированные для анализа реальных образцов, являются перспективными для экспресс-мониторинга объектов окружающей среды и продуктов питания на содержание сурфактантов, пестицидов и полиароматических соединений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Лобанова, Анна Юрьевна, 2006 год

1. Marcomini A., Giger W. Simultaneous determination of linear alkylbenzenesulphonates, alkylphenol polyethoxylates and nonylphenol by high-perfomance liquid chromatography. // Anal. Chem. 1987. V. 59. N. 13. P. 17091715.

2. Guo-Sheng Y., Shi-Ling Y., Xian-Jie L., Zhong-Nan Qi. A Study of ти-л; Interaction in High Perfomance Liquid Chromatography by Molecular Modeling. // Anal. Letters. 2004. V. 37. N.l. P. 529-543.

3. Pagliuca G., Gazzotti Т., Zironi E., Serrazanetti G-P., Mollica D., Rosmini R. Determination of High Molecular Mass Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in a Typical Italian Smoked Cheese by HPLC-FL. // J. Agric. Food Chem. 2003. V.51. P.5111 -5115.

4. Предельно допустимые концентрации химических веществ в воде, водных объектах хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования. Гигиенические нормативы. М. «Минздрав России». 1998. С. 171.

5. Терней А. Современная органическая химия. Т.2. М. «Мир». 1981. С.342-345

6. Thiele В., Gunther К., Schwuger M.J. Alkylphenol Ethoxylates: Trace Analysis and Enviromental Behavior. // Chem. Rev. 1997. V. 97. P. 3247-3272.

7. Kielhorn J., Boehncke A. Polynuclear Aromatic Hydrocarbons. Guidelines for drinking-water quality, Addendum to Vol. 2. Health criteria and other supporting information. // World Health Organisation (WHO). Geneva. 1998. P. 123-152.

8. Johansson I., Bert van Bavel. Polycyclic aromatic hydrocarbons in weathered bottom ash from incineration of municipal solid waste. // Chemosphere. 2003. V.53. P. 123-128.

9. Vasconcellos P., Zacarias D., Pires M., Pool C.S. and Carvalho L. Measurements of polycyclic aromatic hydrocarbons in airborne particles from the metropolitan area of Sao Paulo City, Brazil. // Atmospheric Environ. 2003. V. 37. P. 3009-3018.

10. Schnelle-Kreis J., Gebefugi I., Welzl G., Jaensch Т., Kettrup A. Occurrence of Particle-associated Polycyclic Aromatic Compounds in Ambient Air of the City of Munich. // Atmospheric Environ. 2001. V. 1. P. 71-81.

11. Groner M., Muroski A.R., Myrick M.L. Identification of Major Water-Soluble Fluorescent Components of Some Petrochemicals. // Marine Pollution Bulletin 2001. V. 42. P. 935-941.

12. Davi M.L. Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Drinking Water by Mass Spectrometry. // Life Chemistry Reports. 1994. V.10. P. 181-188.

13. EEC, Council Directive of 15th July 1980 Relating to the Quality of Water Intended for Human Consumption (80/778/EEC). // Official J. of the European Commission. 1980. V. 229. P. 11.

14. Dennis M.J., Massey R.C., Cripps G., Venn I., Howarth N., Lee G. Factors Affecting the Polycyclic Aromatic Hydrocarbons Content of Cereals, Fats and Other Food-products. // Food Additives and Contaminants. 1991. V.8. P. 517-530.

15. Moret S., Conte L.S. Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Edible Fats and Oils: Occurrence end Analytical Methods. // J. Chromatogr. 2000. V. 882. P. 245-253.

16. Crepineau C., Rychen G., Feidt C., Le Roux Y., Lichtfouse E., Laurent F. Contamination of Pastures by Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs) in the Vicinity of a Highway. // J. Agric. Food Chem. 2003. V. 51. N.16. P. 4841 4845.

17. Pino V., Ayala J.H., Afonso A.M., Gonzalez V. Ultrasonic Micellar Extraction of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons from Marine Sediments. // Talanta. 2001. V.54, P. 15-23.

18. Tuhackova J., Cajthaml Т., Novak N., Novotny C., Mertelik J., Sasek V. Hydrocarbon Deposition and Soil Microflora as Affected by Highway Traffic. // Environmental Pollution. 2001. V. 113. P. 255-262.

19. Andersson B.E., Tornberg K., Henrysson Т., Olsson S. Three-dimensional Outgrowth of a Wood-Rotting Fungus Added to a Contaminated Soil from a Former Gasworks Site. // Bioresource Technology. 2001. V. 78. P. 37-45.

20. Fang C., Radosevich M., Fuhrmann J.J. Atrazine and Phenanthrene in Grass Rhizosphere Soil. // Soil Biology and Biochemistry. 2001. V. 33. P. 671-678.

21. Ester E., Bricelj M. and Leskovek H. Toxicity of fluoranthene and its biodegradation metabolites to aquatic organisms. // Chemosphere. 2003. V.2. P.1125-1113.

22. Lee H.J., Villaume J., Cullen D.C., Chan Kim B. and Gu M. B. Monitoring and classification of PAH toxicity using an immobilized bioluminescent bacteria. // Biosensors and Bioelectronics. 2003. V. 18. N.5-6. P. 571-577.

23. Dennis M.J. Analysis of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in UK Total Diets. // Food and Chemical Toxicology. 1983. V. 21. P. 569-574.

24. Bruni C., Gandolfi A., Germani A. Proceedings of the IFIP Working Conference on Mathematical Modeling in Immunology and Medicine. Moscow. July 1982. Amsterdam: North-Holland.

25. Bruni C., Gandolfi A., Germani A. Analysis of the parameter constraints for a proposed antibody affinity distribution. // J. Theor. Biology. 1984. V. 109. N.l. P.71-76.

26. Варфоломеев С.Д., Зайцев C.B. Кинетические методы в биохимических исследованиях. // М. Московский университет. 1982. С.188-191.

27. Tilton F., Benson W.H., Schlenk D. Elevation of serum 17-b-estradiol in channel catfish following injection of 17-b-estradiol, ethynyl estradiol estrone, estriol and estradiol-17-b-glucuronide. //Env. Toxic. And Pharm. 2001. V.9. N. 4. P.16£-172.

28. Mart'ianov A.A., Zherdev A.V., Eremin S.A., Dzantiev B.B. Preparation of antibodies and development of enzyme-linked immunosorbent assay for nonylphenol. // Intern. J. Environ. Anal. Chem. 2004. V. 84. N. 13. P. 965-978.

29. Evtugyn G.A., Eremin S.A., Shaljamova R.P., Ismagilova A.R. and Budnikov H.C. Amperometric immunosensor for nonylphenol determination based on peroxidase indicating reaction. // Biosens. Bioelectron. 2006. V. 22. N.l. P. 56-62.

30. Ермолаева Т.Н., Дергунова E.C., Калмыкова E.H., Еремин С.А. Проточно-инжекционное определение нонилфенола в жидких средах с помощью пьезокварцевого иммуносенсора. // Журн. аналит. химии. 2006. Т. 61. № 6. С.660-665.

31. Moriwaki H., Ishitake M., Yoshikawa S. Determination of Polycyclic Aromatic Hidrocarbons in Sediment by Liquid Chromatography-Atmospheric Pressure Photoionization-Mass-Spectrometry. // Anal. Sciences. 2004. V. 20. P. 375-377.

32. Globig D., Weickhardt C. Rapid analysis of aromatic contaminants in water samples by means of ionization mass spectrometry. // Anal. Bioanal. Chem. 2003. V. 377. P. 1124-1132.

33. Scharnweber Т., Fisher M., Suchanek M., Knopp D., Niessner R. Monoclonal antibody to polycyclic aromatic hydrocarbons based on a new benzoa.pyrene immunogen. // Fresenius J Anal Chem. 2001. V. 371. P. 578-585.

34. Szekacs A., Le H., Knopp D. and Niessner R. Modified ELISA for Polyaromatic Hydrocarbons. // Analytica Chimica Acta. 1999. V. 399. P. 127-134.

35. Kado N.Y., Wei E.T. Radioimmunoassay for Benzo(a)pyrene. // J. Natl. Cancer Inst. 1978. V.61.P. 221-225.

36. Herikstad B.V., Ovrebo S., Haugen A., Hagen I. Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Urine from Coke-oven Workers with a Radioimmunoassay. // Carcinogenesis. 1993. V. 14. P. 307-309.

37. Ius A., Bacigalupo M.A., Rocla A., Vaccari C. Development of a Time-resolved Fluoroimmunoassay of Benzo(a)pyrene in Water. // Fresenius J. Anal. Chem. 1992. V. 343. P. 55-56.

38. Howerton S.B., Goodpaster J.V. and McGuffin V.L. Characterization of polycyclic aromatic hydrocarbons in environmental samples by selective fluorescence quenching. // Analytica Chimica Acta. 2002. V. 459. N. 1. P.61-73.

39. Liu M., Rechnitz G.A., Li K., Li Q.X. Capacitive Immunosensing of Polycyclic Aromatic Hydrocarbon and Protein Conjugates. // Analytical Letters. 1998. V. 31. P. 2025-2038.

40. Van Emon J.M., Gerlach C.L., Bowman K., Bioseparation and Bioanalytical Techniques in Environmental Monitoring. // Journal of Chromatography. 1998. V.715. P. 211-228.

41. Cichna M., Knopp D., Niessner R. Immunoarnnity Chromatography of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Columns Prepared by the Sol-gel Method. // Analytica Chimica Acta. 1997. V. 339. P. 241-250.

42. Thompson S., Budzinsi H., LeMenach K., Letellier M., Garrigues P. Multi-residue analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons, polychlorobiphenyls, and organochlorine pesticides in marine sediments. // Anal. Bioanal. Chem. 2002. V. 372. P. 196-204.

43. Fahnrich K.A., Pravda M., Guilbault G.G. Disposable amperometric immunosensor for the detection of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) using screen-printed electrodes. //Biosensors and Bioelectronics. 2003. V. 18. P.73-82.

44. Fernandez-Sanchez J.F., Seruga Carretero A., Benitez-Sanchez J.M. Fluorescence optosensor using an artificial neural network for screening of polycyclic aromatic hydrocarbons. // Analitica Chimica Acta. 2004. V. 510. P. 183-187.

45. Gutierrez M.C., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Immunoassay Method Based on Fluorescence Polarization. // Talanta. 1989. V. 36. N. 12. P. 1187-1201.

46. Schedl M., Wilharm G., Achatz S., Kettrup A., Niessner R., Knopp D. Monitoring Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Metabolites in Human Urine: Extraction and Purification with a Sol-Gel Glass Immunosorbent. // Anal. Chem. 2001. V. 73. P.5669-5676.

47. Cai Y., Jiang G., Liu J. Solid-Phase Microextraction Couped with HPLC-UV Detection for the determination of PAH in Enviromental Water Samples. // Enviromental Analysis. 2003. V. 36. N. 2. P. 389-404.

48. Boer J. and Law R.J. Developments in the use of chromatographic techniques in marine laboratories for the determination of halogenated contaminants and polycyclic aromatic hydrocarbons. // J. Chromat. A. 2003. V. 1000. N.l-2. P. 223-251.

49. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова E.M. Теория и практика иммуноферментного анализа. // М. Высшая школа. 1991.

50. Yalow R.S., Berson S.A. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man. // J. Clin. Invest. 1960. V. 39. P. 1157-1175.

51. Пол У. Иммунология. Т. 1. M. «Мир», 1987.

52. Haas G.J., Guardia E.J. Production of antibodies against insectecide-protein conjugates. // Soc. Exper. Biol. Med. 1968. V. 129. P. 546-551.

53. Centeno E.R., Johnson W.J., Sehon A.H., Antibodies to two common pesticides, DDT and Malation. // Int. Arch. Allergy. 1970. V. 37. P. 1-13.

54. Weber G. Polarization of Fluorescence of Macromolecules. // Biochem J. 1952. V.51.P. 155-167.

55. Dandliker W.B., Kelly K.J., Dandliker J., Levin J. Fluorescence Polarization Immunoassay. Theory and Experimental Method. // Immunochemistry. 1973. V.10. P. 219-227.

56. Spenser R.D., Toledo F.B., Williams B.T., Yoss N.L. Design, Construction and Two Applications for an Automated Flow-cell Polarization Fluorometer with Digital Read-Out. // Clin. Chem. 1973. V. 19. P. 838-844.

57. Бекбергенов Б.М., Житников В.Г. Иммуноанализ на основе прямого измерения поляризации флуоресценции при изучении фармакинетики антибиотиков. // Антибиотики и химиотерапия. 1988. Т. 33. №1. С. 72-76.

58. Williams A.T.R., Smith D.S., Methods of Immunological Analysis. Albert W.H.W., Staines N.A. Eds. Wolnheim: VCH. 1991. V.l

59. Gutierrez M.C., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D. Immunoassay Methods Based on Fluorescence Polarisation. // Talanta. 1989. V. 36. N. 12. P. 1187-1201.

60. Савицкий А.П. Итоги науки и техники. // Биотехнолог ия. М. ВИНИТИ. 1987. №З.С.117-166.

61. Коллинз У.Н. Новые методы иммуноанализа. М. «Мир», 1991. С.138-148.

62. Березин И.В., Клёсов А.А., Швядас В.К. и др. Инженерная энзимология. М. «Высшая школа». 1987. С.99-122.

63. Marco М.Р., Gee S., Hammock B.D. Immunochemical techniques for enviromental analysis. Antibody production and immunoassay development. // Trends in analytical chemistry. 1995. V. 14. N. 8. P. 415-425.

64. Gallacher G., Coxon R., Landon J., Rae C.J. and Abuknesha R. Design of the immunogen and label for use in a fluoroimmunoassay for paracetamol. // Ann Clin Biochem. 1988. V.25. P.42-48.

65. Bull J.P., Serreqi A.N., Gamboa H.R. and Breuil C. Improved Enzyme-Linked Immunosorbent Assay To Detect Didecyldimetylammonium Chloride, a Quaternary Ammonium Compaund. // J Agric Food Chem. 1998. V. 46. P. 4779-4786.

66. Oubina A., Barcelo D., Marco M.-P. Effect of competitor design on immunoassay specificity: Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for 2,4-dinitrophenol. // Analytica Chimica Acta. 1999. V. 387. P. 267-279.

67. Goodrow M.H., Hammock B.D. Hapten design for compaund-selective antibodies: ELISAS for enviromentally deleterious small molecules. // Analytica Chimica Acta. 1998. V. 376. P. 83-91.

68. Colbert D.L., Eremin S.A. and Landon J. The effect of fluorescein labels on the affinity of antisera to small haptens. // Journal of Immunological Methods. 1991. V. 140. P. 227-233.

69. Ерёмин C.A., Лунская И.М., Егоров A.M. Влияние структуры трейсера на чувствительность и специфичность поляризационного флуороиммуно-анализа 2,4-дихлоруксусной кислоты // Биоорганическая Химия. 1993. Т. 19. № 8. С.836-843.

70. Ерёмин С.А., Лунская И.М., Егоров A.M. // Биоограническая Химия. 1993. Т.19.№ 8. С.836-843.

71. Rau D., Kramer К., Hock В. Cloning, functional expression and kinetic characterization of pesticide-selective Fab fragment variants derived by molecular evolution of variable antibody genes. // Anal. Bioanal. Chem. 2002. V.372. P.261-267.

72. Ohno К., Fukushima Т. Estrogen receptor binding assay method for endocrine disruptors using fluorescence polarization. // Anal. Chem. 2002. V.74. N.l7. P.4391-4396.

73. Bruni C., Germani A., Koch G., Strom R. Derivation of antibody distribution from experimental binding data. //J. Theor. Biology. 1976. V.61. N1. P. 143-170.

74. Kim B.B., Dikova E.B., Sheller U., Dikov M.M., Gavrilova E.M., Egorov A.M. Evaluation of dissociation constants of antigen-antibody complexes by ELISA. // J. Immunol. Meth. 1990. V.131. N.2. P. 213-222.

75. Krikounova V.S., Abuknesha R. and Eremin S.A. Express detection of pentachlorophenol as dioxins precursor in natural water. // The Scientific World J. 2002. V. 2. P. 1132-1137.

76. Ерёмин C.A., Уфимцева E.B., Изотов Б.Н. Поляризационный флуороиммуноанализ опиатов в моче. // Биологические аспекты наркологии. 1995. № 5. С.31-36.

77. Смирнов А.В., Ерёмин С.А., Егоров A.M., Изотов Б.Н. Поляризационный флуороиммуноанализ эфедрина в моче // Хим.-фарм. журнал. 1994. №1. С.54-60.

78. Myrtazina N.R., Eremin S.A., Mozoleva O.V., Everest S.J., Brown A.J., Jackman R. Fluorescent polarization immunoassay for sulphadiazine using a high specificity antibody. // Intern. J. Food Sci. Tech. 2004. V. 39. N. 10. P. 879-891.

79. Колосова А.Ю., Ерёмин С.А., Гаврилова E.M., Егоров A.M. Поляризационный флуороиммуноанализ прогестерона. // Проблемы эндокринологии. 1994. №4. С.48-51.

80. Ерёмин С.А., Крикунова B.C., Краснова А.И., Попова В.А., Оннерферд П. Разработка метода экспрессного определения пестицида 2,4,5-Т, предшественника диоксинов. // Агрохимия. 1998. №6. С.80-85.

81. Ерёмин С.А., Егоров A.M., Мельниченко О.А., Туманов А.А. Определение пестицида 2,4,5-трихлорфеноксиуксусной кислоты методомполяризационного флуороиммуноанализа. // Журнал аналитической химии. 1995. Т.50. №2. С.215-218.

82. Поляк И.М., Ерёмин С.А., Егоров A.M., Колар В., Франек М. Проблемы получения высокоспецифических антител к 2-метил-4-хлорфеноксиуксусной кислоте и разработка поляризационного флуороиммуноанализа. // Иммунология. 1995. №1. С. 17-21.

83. Краснова А.И., Рыжова В.В., Буркин А.А., Ерёмин С.А. Экспресс-определение пропанила методом поляризационного флуороиммуноанализа. // Агрохимия. 2001. №4. С.92-96.

84. Choi M.J., Lee J.R., Eremin S.A. Development of Single Reagent for Fluorescence Polarization Immunoassay of Atrazine. // Food and Agric. Immun. 2002. V. 14. N 2. P. 107-120.

85. Krikunova V.S., Eremin S.A., Smith D.S., Landon J. Preliminary Screening Method for Dioxin Contamination Using Polarization Fluoroimmunoassay for Chlorinated Phenoxyacid Pesticides. // Intern. J. Environ. Anal. Chem. 2003. V.83. N.7-8. P. 585-595.

86. Ерёмин С.А., Мельниченко О.А., Крейсинг С., Хок Б. Экспрессный иммунохимический метод определения гербицида метабензтиазурона. // Журнал аналитической химии. 1995. Т.50. №9. С.971-978.

87. Matveeva E.G., Popova V.A., Eremin S.A. Detection of 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid in Reverse Micelles AOT/n-Octane by Polarization and Quenching Fluoroimmunoassays. //Journal ofFluorecence. 1997. V.7. N. 4. P.251-256.

88. Матвеева Е.Г., Самсонова Ж.В., Ерёмин С.А. Поляризационный флуороиммуноанализ пропазина в обращённых мицеллах аэрозоля в октане. // Биоорганическая химия. 1996. Т.22. №12. С.931-937.

89. Чарыков А.К. Математическая обработка результатов химического анализа. JL: Химия. 1984.

90. Long G.L., Winefordner J.D. Limit of Detection. A Closer Look at the IUPAC Definition. // Anal.Chem. 1983. V. 55. N. 7. P. 712A-724A.

91. Bennet A.P., Gallacher G., Landon J. The raising and characterisation of antibodies to salicylate. // Ann. Clin. Biochem. 1987. V. 24. P. 374-384.