Разработка технологии производства субстанций терапевтических вакцин против заболеваний, ассоциированных с вирусом папилломы человека 6/11 и 16/18 типов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Леонов, Вячеслав Сергеевич

• Леонов, Вячеслав Сергеевич
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Леонов, Вячеслав Сергеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Принцип действия вакцины для иммунотерапии заболеваний, ассоциированных с ВПЧ 6, 11, 16 и 18 типов

1.2. Белки Е7 - их структура и функции

1.3. Белок ШР-70 - структура и функции

1.4. Примеры получения фьюза Е7-Н8Р-70

1.5. Производство рекомбинантных белков в & сегеушяе в промышленных условиях

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Разработка процесса культивирования штаммов - продуцентов гибридных рекомбинантных белков Е7(11)-Н8Р70, Е7(6)-Н8Р70 и Е7(16)-ШР70, Е7(18)-Н8Р70

2.2.1.1. Описание штаммов-продуцентов

2.2.1.2. Обоснование общей стратегии процесса культивирования на основании проведенного анализа

2.2.1.3. Оценка ростовых свойств и продуктивности штаммов-продуцентов

2.2.1.4. Выбор модельного штамма для проведения исследований

2.2.1.5. Разработка этапа накопления биомассы

2.2.1.6. Этап экспрессии целевого белка

2.2.1.6.1. Питательная среда и условия культивирования этапа экспрессии целевого белка

2.2.1.6.2. Выбор оптимального способа индукции и углеродсодержащего

субстрата

2.2.1.6.3. Анализ протестированных способов индукции

2.2.1.6.4. Оптимизация этапа биосинтеза путем математического моделирования

2.2.1.6.5. Апробация двухстадийной подпитки на штаммах-продуцентах SCR-E7(18)-HSP70 и SCR-E7(11)-HSP70, SCR-E7(6)-HSP70

2.2.2. Разработка способа дезинтеграции

2.2.2.1. Выбор состава лизирующего буфера

2.2.2.2. Влияние температуры на стабильность целевого продукта

2.2.2.3. Выбор соотношения лизирующий буфер - биомасса

2.2.2.4. Влияние давления и количества циклов дезинтеграции

2.2.3. Очистка субстанции гибридных рекомбинантных белков

2.2.4. Технологическая схема производства терапевтических вакцин

2.2.5. Предвалидация технологического процесса

3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

4. ВЫВОДЫ

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии производства субстанций терапевтических вакцин против заболеваний, ассоциированных с вирусом папилломы человека 6/11 и 16/18 типов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Вирус папилломы человека (ВПЧ) - это семейство ДНК вирусов, включающее в себя около 200 типов вирусов, которые обладают заметным тропизмом по отношению к тканям эпителия [145]. Несмотря на сходное строение генома, разные типы ВПЧ поражают эпителий на различных областях тела. Около 40 типов ВПЧ инфицируют аногенитальную область и слизистую оболочку полости рта. ВПЧ является наиболее распространенным вирусом, передаваемым половым путем. Например, в США каждый год им заражаются 6,2 миллиона человек [211]. Основываясь на клиническом прогнозе развития заболевания, типы ВПЧ делят на «ВПЧ низкого риска» и «ВПЧ высокого риска» [152].

«ВПЧ низкого риска» или неонкогенные, к которым относятся типы 6 и 11, могут вызвать доброкачественные или малоопасные аномалии шейки матки, доброкачественную эпителиальную гиперплазию (возникновение аногенитальных кондилом, папиллом) и заболевание дыхательных путей - рекуррентный респираторный папилломатоз (РРП) [130].

«ВПЧ высокого риска» или онкогенные, к которым относятся типы 16 и 18, могут привести к неоплазии аногенитальной области, в том числе раку шейки матки, вульвы, влагалища, пениса и ануса, а также некоторым видам рака ротоглотки [95, 159, 209]. Среди последствий инфекции ВПЧ, ассоциированных с онкологическими заболеваниями, самым серьезным является рак шейки матки. В 2008 году в мире было зафиксировано более чем 500 000 случаев заболевания и 275 000 смертей, вызванных раком шейки матки [82, 159]. В Российской Федерации заболеваемость раком шейки матки находится на высоком уровне - 14 случаев на 100 000 взрослого женского населения (для сравнения в США этот показатель составляет 9 случаев на 100 000). Ежегодно в России впервые выявляется около 12-13 тысяч случаев заболевания раком шейки матки; 8 тысяч женщин умирает от этого заболевания. При этом аналогичный показатель смертности в США составляет только 3,5 тыс. женщин в год при сопоставимом

количестве заболевших. Причиной этого является скрининг, проводимый в США и направленный на выявление ранних форм заболевания [11, 38-41].

Инфекции ВПЧ высокого риска обнаруживаются почти во всех случаях рака шейки матки; около 70% случаев рака шейки матки в мире связано с типами 16 и 18 [55, 89]. Хотя хроническая инфекция ВПЧ высокого риска считается необходимым условием для развития рака шейки матки, она не является достаточным условием, так как у подавляющего большинства женщин, инфицированных ВПЧ высокого риска, рак не развивается [90, 112, 148].

Генитальные инфекции ВПЧ, в первую очередь передаются путем генитального контакта, обычно (но не обязательно) посредством полового контакта [213]. Большинство инфекций ВПЧ являются временными и бессимптомными и не вызывают никаких клинических проявлений. Исследования показали, что более 90% новых случаев инфицирования ВПЧ, в том числе и ВПЧ высокого риска, самоизлечиваются или становятся недетектируемыми в течение двух лет. Исчезновение инфекции обычно происходит в первые 6 месяцев после инфицирования [113, 148, 149, 180].

Неонкогенными формами проявления инфекции ВПЧ являются аногенитальный кондиломатоз и рецидивирующий респираторный папилломатоз (РРП).

Практически все случаи аногенитального кондиломатоза - возникновение кондилом в аногениталыюй области у мужчин и женщин - связаны с инфицированием ВПЧ низкого риска. Примерно за 90% случаев этого заболевания ответственны ВПЧ 6 и 11 типов, за оставшиеся 10 % случаев — ВПЧ 42 и 54 типов [4, 24].

Заболеваемость аногенитальным кондиломатозом наиболее высока среди женщин в возрасте 15-24 лети мужчин в возрасте 20-29 лет [212]. Показатель заболеваемости аногенитальным кондиломатозом в некоторых регионах России достигает 120 — 150 человек на 100 тыс. населения. Кондиломы у детей часто появляются в результате инокуляции вируса при рождении [31, 44, 175, 214].

Аногенитальный кондиломатоз обычно развивается примерно через 2-3 месяца после заражения ВПЧ. Однако, не все у всех лиц, инфицированных ВПЧ 6 и 11 типов, развиваются остроконечные кондиломы. Кондиломы аногенитальной области поддаются лечению, хотя многие (20-30%) спонтанно регрессируют [190].

Клинические проявления остроконечных кондилом многообразны: в некоторых случаях они ограничиваются объемным образованием в перианальной области, в других - появляются жалобы на кровотечение, зуд, дискомфорт. Течение заболевания длительное, нередко осложняющееся присоединением вторичной инфекции [7, 12, 31].

Несмотря на отсутствие летальных случаев, аногенитальные кондиломы наносят существенный вред здоровью, снижают качество жизни пациентов и часто рецидивируют независимо от типа лечения [6, 9, 19, 74, 103].

РРП является редким заболеванием, при котором в верхних дыхательных путях, в частности в гортани, образуются рецидивирующие папилломы. Выделяют две формы респираторного рецидивирующего папилломатоза: юношеский (с началом заболевания либо в младенческом возрасте, либо в возрасте 11-12 лет) и взрослый (возникающий в возрасте 30-40 лет и старше 60 лет) [5]. Юношеская форма, как полагают, возникает в результате передачи инфекции ВПЧ в перинатальный период от матери к ребенку во время родов. Отмечено, что более чем у 75% больных симптомы РРП возникают до 5 лет, а пик заболеваемости приходится на детей первого (22,8 %) и второго (23,6 %) годов жизни [34].

РРП является тяжелой патологией. Рост папиллом в самом узком участке дыхательных путей приводит к выраженному стенозу гортани, вплоть до асфиксии. Заболевание длительно и клинически непредсказуемо [3, 37, 33]. Анализ литературы свидетельствует, что этиологическим фактором РРП является вирус папилломы человека, преимущественно 6 и 11 типов. Это подтверждается в подавляющем большинстве случаев при исследовании биопсийного материала удалённых папиллом гортани методом полимеразной цепной реакции [1, 3].

ВПЧ-инфекция вызывается вирусом и потому сама инфекция практически не излечима; лечение направлено на облегчение состояний, ассоциированных с инфекцией ВПЧ. Основная цель лечения видимых аногенитальных папиллом - их удаление. У большинства пациентов лечение помогает на какой-то период избавиться папиллом. Единственного и универсального метода лечения, идеально подходящего всем пациентам, не существует. Большинству пациентов требуется курс терапии, а не однократное лечение [190]. Удаление кондилом не исключает последующей передачи вируса партнеру, поскольку пациент остается вирусоносителем и при поверхностном расположении в коже зараженных клеток может являться источником инфицирования [13, 14].

К настоящему времени в миресугцествуют две вакцины против ВПЧ, лицензированные FDA (Food and Drug Administration of the United States Department of Health and Human Services, USA): квадривалентная вакцина (ВПЧ4; Гардасил, Merck и Co, Inc) и бивалентная вакцина (ВПЧ2; Церварикс, Glaxo Smith Kline) [81]. Обе вакцины состоят из вирусоподобных частиц, полученных из

I

рекомбинантного капсидного белка LI целевых типов ВПЧ. Вакцина Церварикс направлена против двух онкогенных типов (ВПЧ 16 и 18), вакцина Гардасил направлена против двух онкогенных типов (ВПЧ 16 и 18) и двух неонкогенных типов (ВПЧ 6 и 11). Вакцины являются профилактическими и не оказывают терапевтического эффекта на заболевания, связанные с ВПЧ или на риск прогрессирования болезни у лиц, которые имеют ВПЧ-инфекции во время вакцинации. Вакцина Гардасил получила в 2006 и 2009 годах лицензии от FDA для использования у женщин и мужчин в возрасте от 9 до 26 лет. Церварикс получила лицензию от FDA в 2009 году для использования у женщин в возрасте от 10 до 25 лет [79,139].

Клинические испытания, в которых участвовали более 18 000 женщин в возрасте 15-25 лет для ВПЧ2 и более 20 000 женщин в возрасте 16-26 для ВПЧ4, продемонстрировали высокие уровни эффективности обеих вакцин в профилактике предраковых состояний рака шейки матки, вызванными целевыми типами ВПЧ у женщин, не имевших инфекции во время вакцинации. ВПЧ4 также

продемонстрировала высокую эффективность против ВПЧ 6 и ВПЧ 11, вызывающих образование остроконечных кондилом у мужчин и женщин (56, 78, 80, 156, 174].

Высокоспецифичная терапевтическая вакцина для иммунотерапии ВПЧ высокого и низкого риска, активирующая Т-клеточный иммунный ответ против антигенов ВПЧ, экспрессируемых в инфицированных клетках, позволила бы в случае инфекции ВПЧ низкого риска избежать рецидивов заболевания или снизить их число, а в случае ВПЧ высокого риска избежать поражений, ведущих к аномальным изменениям эпителиальных клеток, возникновению предракового состояния и инвазивному раку [17, 25, 29].

Таким образом, создание высокоспецифичной терапевтической вакцины для иммунотерапии ВПЧ высокого и низкого риска, к которым относятся 16/18 и 6/11 типы соответственно, способствует повышению качества жизни и здоровья населения РФ и является актуальной задачей.

В качестве штамма-продуцента в производстве Гардасила используется штамм-продуцент БасскаготусеБ сег^1з1ае, экспрессирующий растворимый капсидный белок Ы соответствующего серотипа в количестве 300-400 мг/л [62], а при производстве Церварикса - линия клеток насекомых, экспрессирующая капсидный белок Ы в количестве 100-200 мг/л культуралыюй жидкости. Кроме того, по редварительным исследованиям для терапевтической вакцины против ВПЧ необходимы дозировки активных компонентов пятикратно превышающие используемые в профилактичеких вакцинах [81, 79, 139].

Исходя из того, что доза терапевтической вакцины является достаточно большой, для создания эффективной и коммерчески рентабельной технологии производства отечественной терапевтической вакцины против ВПЧ-ассоциированных заболеваний, необходимо обеспечить в три-пять раз большую продуктивность процесса культивирования.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлась разработка технологии производства двух терапевтических вакцин для иммунотерапии заболеваний, ассоциированных с ВПЧ 6/11 и 16/18 типов, на

основе 4-х гибридных рекомбинантных белков Е7 ВПЧ соответствующего серотипа и белка теплового шока HSP 70 Mycobacterium tuberculosis для проведения доклинических испытаний в рамках соответствующих государственных контрактов № 16.N08.12.1024 по теме: «Доклинические исследования отечественной терапевтической вакцины против рецидивирующего респираторного папилломатоза и аногенитального кондиломатоза, произведенной на основе клеток эукариот» и № 13411.1008799.13.173 по теме: «Доклинические исследования лекарственного средства на основе композиции рекомбинантных белков Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов и белка теплового шока Mycobacterium tuberculosis для иммунотерапии и профилактики опухолевых заболеваний аногенитальной области»

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать универсальный способ культивирования рекомбинантных штаммов SCR-702-E7(6)-HSP70, SCR-702-E7(l 1)-HSP70, SCR-702-E7(16)-HSP70 и SCR-702-E7(18)-HSP70, созданных на основе штамма-реципиента S. cerevisiae D702 и экспрессионного вектора pPDX3U-E7-HSP70, продуцирующих гибридные белки E7(6)-HSP70, E7(l 1)-HSP70, E7(16)-HSP70 и E7(18)-HSP70.

2. Создать математическую модель стадии биосинтеза целевого белка Е7(16)-HSP70, позволяющую прогнозировать выходные параметры процессов культивирования.

3. Разработать способ дезинтеграции биомассы штаммов-продуцентов SCR-702-E7(11)-HSP70, SCR-702-E7(6)-HSP70, SCR-702-E7(16)-HSP70 и SCR-702-E7(18)-HSP70.

4. Создать на основе полученных субстанций готовые лекарственные формы двух терапевтических вакцин против рецидивирующего респираторного папилломатоза, аногенитального кондиломатоза и против рака шейки матки.

5. Разработать опытно-промышленные регламенты на производство вакцин против заболеваний, ассоциированных с вирусом папилломы человека.

Научная новизна.

Впервые в России создана математическая модель стадии биосинтеза целевого белка Е7(16)-Н8Р70, позволяющая оптимизировать процесс культивирования. Рассчитанная по математической модели двухстадийная подпитка лимитирующим компонентом позволяет максимизировать объемную продуктивность и прогнозировать выходные параметры процесса культивирования. Оптимизированная двухстадийная подпитка состоит из подпитки по экспоненциальному закону при удельной скорости роста 0,08 ч'1 и подпитки с расходом, рассчитанным по оптимальному постепенно снижающемуся профилю скорости роста, вычисленному с применением методов вариационного исчисления, а именно уравнений Эйлера-Лагранжа.

Впервые в России разработана универсальная технология промышленного культивирования штаммов, созданных на основе штамма-реципиента 5. сегеушяе 0702 и экспрессионного вектора рРОХЗи-Е7-Н8Р70, продуцирующих гибридные рекомбинантные белки Е7(6)-Н8Р70, Е7(11)-Н8Р70, Е7(16)-Н8Р70 и Е7(18)-ШР70.

На основании разработанного способа культивирования подана заявка на патент РФ №2013146057 на изобретение «Способ микробиологического синтеза гибридного белка Е7(6)-Н8Р70 или Е7(11)-ШР70 или Е7(16)-Н8Р70 или Е7(18)-ШР70», принято решение Роспатента о выдаче патента (приоритет от 16.10.2013).

Практическая значимость. Разработанная технология использована в производстве ГЛФ вакцин для проведения доклинических испытаний и исследований стабильности в рамках государственных контрактов № 16.N08.12.1024 и № 13411.1008799.13.173 от Минобрнауки и Минпромторга России.

Разработаны и утверждены опытно-промышленные регламенты на производство терапевтических вакцин под № 00479942-03-14 и № 00479942-0115.

Произведены опытные серии двух терапевтических вакцин против рецидивирующего респираторного папилломатоза, аногенитального

кондиломатоза и против рака шейки матки, прошедшие контроль согласно ФСП.

Личный вклад соискателя. Автор выполнял работу по созданию и характеризации клеточных банков культур, исследованию ростовых и продуктивных свойств штаммов-продуцентов, разрабатывал способ культивирования штаммов-продуцентов, разрабатывал математическую модель процесса биосинтеза, способ дезинтеграции биомассы, осветления клеточного лизата. Автор выполнял работы по масштабированию процессов культивирования, дезинтеграции и проведению установочных серий.

Разработка методики очистки целевых белков выполнялась совместно с нач. лаб. биохимии Селищевым C.B. Разработка способа получения фармацевтических субстанций и ГЛФ терапевтических вакцин, контроль стабильности проводились совместно с Жученко М.А. Нормативная документация на производство вакцин разрабатывалась совместно с Кухаренко А.Е.

Штаммы-продуценты были получены в лаборатории эукариотических систем экспрессии генов (лаб. №20) под руководством зав. лаб. к.б.н. Д.Г. Козлова (ФГУП ГосНИИгенетика), за что выражаю ему глубокую благодарность.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены на межлабораторном семинаре сотрудников ФГУП «ГосНИИгенетика» (Москва, 2014).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК, подана 1 заявка на патент.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 190 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практическое использование результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список литературы (221 источников, из них 180 иностранных авторов). Диссертация включает 48 рисунков, 20 таблиц, 22 страницы приложений.

На защиту выносятся следующие положения и результаты: 1. Промышленная технология, основанная на использовании штамма-

реципиента Saccharomyces cerevisiae D702 и экспрессионного вектора pPDX3U-E7-HSP70, базирующаяся на двухстадийном культивировании с оптимизированными подпитками, обеспечивает получение целевых рекомбинантных белков E7(16)-HSP70, E7(18)-HSP70, E7(11)-HSP70 и Е7(6)-HSP70 для изготовления терапевтических вакцин против заболеваний, ассоциированных с ВПЧ 16/18 и 6/11 типов, с продуктивностью не менее 180,0 ± 17,5 мг, 692,4 ± 72,1 мг, 425,1 ± 35,3 мг, 395,0 ± 43,2 мг очищенного белка с 1 л культуральной жидкости, соответственно.

2. Математическая модель стадии биосинтеза целевого белка E7(16)-HSP70 позволяет путем использования оптимизированного профиля подпитки лимитирующим компонентом увеличить объемную продуктивность полунепрерывных процессов культивирования штаммов-продуцентов SCR-E7(16)-HSP70, SCR-E7( 18)-HSP70, SCR-E7(11)-HSP70 и SCR-E7(6)-HSP70, соответственно, в 16,7 раз, в 9,4 раз, в 10,6 раза и в 10,2 раза по сравнению с периодическим процессом.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Принцип действия вакцины для иммуиотерапии заболеваний, ассоциированных с ВПЧ 6,11,16 и 18 типов

Необходимость создания вакцины для высокоспецифичной иммунотерапии инфекции ВПЧ подробно описана во введении.

Для создания терапевтической вакцины против ВПЧ необходимо выбрать антиген для стимуляции специфического иммунного ответа.

Белок Е7 играет ключевую роль в репликации ВПЧ и способен влиять на дифференциацию инфицированных клеток. Белок Е7 нарушает регуляцию контроля клеточного цикла, образуя стабильный неактивный комплекс с серией регулирующих клеточный цикл белков, инициирует репликацию вирусных генов и нарушает регуляцию пролиферации инфицированных клеток [28, 73].

Белок Е7 является белком исключительно вирусного происхождения, постоянно присутствует в инфицированных клетках и отсутствует в неинфицированных, поэтому он является подходящей мишенью для высокоспецифичной иммунотерапии для предотвращения и лечения папилломатоза.

Иммуногенность белка Е7 в составе терапевтических вакцин может быть увеличена за счет присоединения к нему белка-носителя, который стимулирует Т-клеточный ответ. Этим белком может являться белок теплового шока HSP70 Mycobacterium tuberculosis. Иммунные системы животных способны распознавать многочисленные В и Т клеточные эпитопы, которые присутствуют в составе этого белка, что позволяет ему выполнять функцию мощного неспецифического стимулятора иммунной системы [170]. Показано, что для того чтобы стимулировать полноценный иммунный ответ, Е7 должен располагаться на N-конце относительно белка HSP70 [132].

Таким образохм, иммунотерапия нацелена на активацию Т-клеточного иммунного ответа против антигенов ВПЧ, экспрессируемых в инфицированных клетках [121], а антиген, активный компонент вакцины, используемый для

стимулирования специфического ответа против ВПЧ, представляет собой рекомбинантный гибридный белок E7-HSP70, то есть онкобелок Е7 ВПЧ 6, 11, 16 или 18 типов, слитый с аминокислотной последовательностью белка теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (HSP70) бактерий Mycobacterium tuberculosis [15].

1.2. Белки Е7 — их структура и функции

Трансформация клеток белками Е7 ВПЧ. В середине 1980-х годов было признано, что геномы ВПЧ высокого риска кодируют некую активность, направленную на трансформацию клеток. Это было показано при исследовании на линии фибробластов грызунов, таких как клетки NIH3T3 [218] или в классических клетках для анализа онкогенов - в клетках почек крысят [141]. Последующие мутационные исследования показали, что в этих системах анализа основную роль в трансформирующей активности ВПЧ высокого риска играет белок Е7 [49, 120, 162, 206, 207, 219].

Более поздние исследования показали, что экспрессия клонированных геномов ВПЧ высокого риска в клетках, являющихся природным хозяином ВПЧ, т.е. в эпителиальных клетках гениталий человека, вызывает увеличение продолжительности жизни и иммортализацию клеток, ингибирует дифференциацию кератиноцитов и облегчает иммортализацию [181, 215]. Мутационный анализ показал, что белок Е7 совместно с белком Е6 необходим для трансформационной активности в эпителиальных клетках человека [49, 106, 117, 150, 151]. Трансформирующая активность белков Е7 ВПЧ коррелирует с классификацией ВПЧ низкого риска/высокого риска. Так, белки Е7 ВПЧ низкого риска, в частности ВПЧ 6 и 11 типов, показывают значительное снижение способности к трансформации и иммортализации по сравнению с белками Е7 ВПЧ высокого риска [47, 105].

Биохимические характеристики белков Е7. Белки Е7 представляют собой небольшие кислые полипептиды, состоящие приблизительно из 100 аминокислот (Рисунок 1). N-конец Е7 содержит область, чья последовательность сходна с

частью консервативной области 1 (conserved region 1, CRI) и полной консервативной областью CR2 аденовируса Ad El А, а также с последовательностями, родственными последовательностям большого опухолевого антигена (Т Ag) вакуолизирующего обезьяньего вируса 40 (SV40) [86, 162, 205]. Консервативные области CR1 и CR2, как и SV40 Т Ag и Ad El А, вносят значительный вклад в трансформирующую активность онкобелков Е7 ВПЧ высокого риска [119, 161, 186, 208]. Мотив Leu-X-Cys-X-Glu (LXCXE) в гомологичной области CR2 является необходимым и достаточным для связывания белка Е7 с белком-супрессором опухоли ретинобластомы PRB (англ. retinoblastoma tumor suppressor protein, PRB) [150]. С-конец Е7 содержит домен связывания цинка, который состоит из двух мотивов Cys-X-X-Cys и функционирует как домен димеризации [48, 61, 133, 154].

У белка Е7 отсутствует какая-либо природная ферментативная активность и специфическая ДНК связывающая активность, и в настоящее время признается, что биологическая активность Е7 связана с его способностью нарушать нормальную деятельность клеточных регуляторных комплексов путем взаимодействия с ними.

На рисунке 1 [145] схематично изображен онкопротеин ВПЧ Е7 и процесс трансформации клеток.

Gene Transcription Epigenetic Preprogramming

Cell Death

Cellular Metabolism

Protein Degradation

Genomic integrity

Aberrant DNA synthesis

Cytokine Signaling

Рисунок 1. Схематическое изображение онкопротеина ВПЧ Е7 и процесс

трансформации клеток [145]

Неструктурированный N-конецевой домен из Е7 ВГТЧ 16 типа размером 37 аминокислотных остатков имеет последовательности сходные с частью CR1 (зеленый) и полноразмерной CR2 (красный) аденовируса Ad El А со специфическими идентичными и химически сходными аминокислотными остатками, указанными красными и синими блоками соответственно. Последовательности CR1 необходимы для трансформации клеток и деградации белка-супрессора PRB, но напрямую не способствуют связыванию PRB. Ядро сайта связывания PRB (LXCXE) необходимое для трансформации находится в CR2, прилегает к консенсус-последовательности сайта фосфорилирования казеинкиназы II (CKII). На рисунке 1 показан С-конецевой домен Е7, чья структура определена с помощью рентгеновской кристаллографии [154]. Эта часть последовательности Е7 имеет компактную (31 (32а, (33а2 топологию и представляет собой уникальную структуру, связывающую цинк. Клеточные процессы, затронутые Е7 и обсуждаемые в этой главе, указаны в серых блоках на рисунке 1.

Сравнение белков Е7 различных типов ВПЧ. Аминокислотные последовательности белков Е7 6, 11, 16 и 18 типов ВПЧ были проанализированы с помощью программы CLUSTALO [69] и показано, что четыре белка Е7 имеют 32 идентичные аминокислотные позиции (выделение серым цветом на рисунке 2). При сравнении белков Е7 попарно, исходя из классификации по степени риска, белки Е7 высокой степени риска, то есть Е7 16 и 18 типов имеют 40 % гомологии, а белки Е7 низкого риска, т.е. Е7 11 и 6 типов, имеют 54,5 % гомологии (Рисунок 2).

1 HHGRHVTLKDIVLDLQPP--DPVGLHCYEQLVDSSEDEVDEVDG--QDSQPLK----QHF 52 Р06464 VE7_HPV6B

1 HHGD TPTLHEYHLDLQPE---TTDLYCYEQLNDSSEEED-EIDGPAGQAEPDR----AHY 52 РОЗ 129 VE7_HPV16

1 MHGP К ATL QDIVL HL E P QUE IPVDLLС HEQL SDSEEE-NDEID GVNHQHL P ARRAE P QRH 59 P06738 VE7_HPV18

1 MHGRLVTLKDIVLDLQPP—DPVGLHCYEQLEDSSEDEVDKVDK—QDAQPLT----QHY 52 PÛ4Û20 VE7_HPV11

*** **:: :*.*:* . **;****-*.*; * : * : * :.

53 QIVTCCCGCDSNVRL WQC TE TD IREVQQLL L GTLNIVCPIС АРKT 98 PO6464 VE7_HPV6B

53 NIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLHGTLGIVCPICSQKP 98 РОЗ 129 VE7_HPV16 60 THLCHCCKCEARIKLWESSADDLRAFQQLFLNTLSFVCPWCASQQ 105 P06788 VE7_HPV18 53 QIL TCCC GC D SNVRL WE С TD GDIRQL QDLL L GTLN IVCPIС АР KP 98 P0402 0 VE7_HPV11

.■ *.• *:.: *:* .::*:: ** :*** *: :

Рисунок 2. Анализ гомологии аминокислотной последовательности белков Е7 ВПЧ 6,11,16 и 18 типов

Можно предположить, что при экспрессии гибридных рекомбинантных белков, в состав которых входят гомологичные белки Е7 6, 11, 16, 18 типа, их штаммы-продуценты будут иметь при культивировании сходные свойства.

1.3. Белок HSP-70 - структура и функции

Белки теплового шока (Heat shock protein, HSP) относятся к семейству стрессовых белков и представляют собой полифункциональные белки, метаболизм которых в клетках изменяется в ответ на воздействие неблагоприятных условий. Внутриклеточный уровень стрессовых белков (в том числе HSP) повышается в условиях теплового стресса, ацидоза, гипоксии или гипероксии, энергетического истощения клетки, а также при вирусных и микробных инфекциях [127].

Важнейшими свойствами белков HSP являются их способность к улучшению презентации антигена на поверхности дендритных клеток и макрофагов, а также способность выступать в роли носителей иммуногенных пептидов [15, 29, 91, 124, 134].

Одними из наиболее важных представителей белков HSP являются белки семейства HSP70. В настоящее время известно более 10 представителей HSP 70 эукариот [51]. В качестве основного компонента новых препаратов наиболее предпочтительным является использование HSP 70 молекулярной массой около 70 кДа из Mycobacterium tuberculosis, поскольку этот белок вызывает наиболее мощную стимуляцию клеточного иммунологического ответа к связанным с ним антигенным пептидам [10,15].

1.4. Примеры получения фьюза E7-HSP-70

Рекомбинантные гибридные белки, состоящие из слитых последовательностей белка Е7 и белка теплового шока HSP70, могут быть получены в клетках бактерий или дрожжей, несущих экспрессионную конструкцию [10, 17, 27].

В патенте компании «Stressgen Biotechnologies corp.» [25] описан способ лечения заболеваний, связанных с ВПЧ (бородавки, рак шейки матки и прямой кишки и т.д.) с помощью композиции, содержащей гибридный белок, включающий микобактериальный белок теплового шока (HSP 65 или HSP 70 из Mycobacterium bovis) и белок ВПЧ. Лечение может осуществляться либо путем введения пациенту рекомбинантного гибридного белка, либо путем введения нуклеиновой кислоты, кодирующей гибридный белок, которая содержится в вирусном векторе. Клинические испытания этой вакцины дали положительный результат - при лечении рецидивирующего респираторного папилломатоза трехкратное применение вакцины в дозе 500 мкг позволило более чем на 40% увеличить интервал между рецидивами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Леонов, Вячеслав Сергеевич, 2015 год

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антонив, В.Ф. Папилломатоз гортани! Роль вируса папилломы человека, перспективы диагностики и лечения / В.Ф. Антонив, А. Мицконас, Т.В. Антонив // Вестн. Оториноларингологии. — 2004. - № 3. - С. 23-26.

2. Арзамасцев, A.A. Математические модели кинетики микробиологического синтеза: возможности использования и новые подходы к разработке / A.A. Арзамасцев, A.A. Андреев // Вестник ТГУ. - 2000. - Т. 5. - С. 111-123.

3. Барышев, В.В. Современные аспекты изучения респираторного папилломатоза. Часть II. Лечение / В.В. Барышев, В.Г. Андреев, В.В. Попучиев // Сиб. Онкол. Журн. - 2010. - № 1 (37).-С. 68-72.

4. Баткаев, Э.А. Вирусные заболевания кожи и слизистых: учебное пособие / Э.А. Баткаев, В .Я. Кицак, И.М. Корсунская, Е.В. Липова. - М., 2001.

5. Башмакова, М.А. Папилломавирусная инфекция / М.А. Башмакова, A.M. Савичева. - Н. Новгород : Издательство НГМА, 2002. - 20 с.

6. Беляева, Т.Л. Современные аспекты лечения остроконечных кондилом / Т.Л. Беляева, A.A. Антоньев // Вестник дерматологии и венерологии. - 1989. — №7. - С.58-60.

7. Богатырева, И.И. Клиника, диагностика и комбинированный метод лечения проявлений папилломавирусной инфекции человека на слизистых оболочках урогенитального тракта / И.И. Богатырева // Вестник дерматологии и венерологии. - 1997. - № 3. - С.70-72.

8. Богомильский, М.Р. Врожденный ювенильный респираторный папилломатоз гортани / М.Р. Богомильский, Ю.Л. Солдатский, И.В. Маслова и др. // Вестн. Оторинолар. -1998 - №6. - С. 28.

9. Васильев, В.В. Современные аспекты папилломавирусной инфекции урогенитального тракта (клиника, диагностика, лечение) / В.В. Васильев, И.И. Богатырева, Л.К. Котова // ЗППП. - 1999. - № 5. - С. 20-26.

10. Гужова, И.В. Шаперон Hsp70 и перспективы его использования в

противоопухолевой терапии / И.В. Гужова, С.С. Новоселов, Б.А. Маргулис // Цитология. - 2005. - № 3. - С. 187-199.

11. Давыдов, М.И. Статистика злокачественных новообразований в России и в странах СНГ в 2008 г. / М.И Давыдов, Е.М. Аксель // Вестник РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. - 2010. - Т.21, №2. (прил. 1).-С.160.

12. Дубенский, В.В. Клинические формы папилломавирусной инфекции и их комплексное лечение / В.В. Дубенский // Российский журнал кожных и венерических болезней. - 2003. — №1. — С. 44-50.

13. Егоров, H.A. О терапии остроконечных кондилом / H.A. Егоров, И.Б. Щербаков // Вестник дерматологии и венерологии. — 1983. - № 5. — С. 60-61.

14. Жуков, H.A. Лечение остроконечных кондилом у мужчин / H.A. Жуков // Вестник дерматологии и венерологии. -1983. - № 9. - С. 65-66.

15. Киселев, В.И. Белок теплового шока повышает иммуногенность онкобелка Е7 вируса папилломы человека в составе химерной конструкции (Е7 BH4-HSP70) / В.И. Киселев, А.М. Ульянов, Е. Курбатова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2010. - № 3. - С. 36-39.

16. Клыков, С.П. Зависимость возрастной структуры популяции клеток, потребления субстрата и синтеза продуктов от энергетических затрат / С. П. Клыков, В. В. Дербышев // Биотехнология. - 2009. - № 5. - С. 80-89.

17. Козлов Д.Г., Чеперегин С.Э., Губайдуллин И.И., Ефремов Б.Д., Тюрин О.В., Залунин И.А. Способ получения белка E7-HSP70 и штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae для его осуществления // Патент РФ № 2489481. 2013

18. Козлов Д.Г., Чеперегин С.Э., Губайдуллин И.И., Ефремов Б.Д., Тюрин О.В., Залунин И.А. Способ получения белка E7-HSP70 и штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae для его осуществления // Патент РФ №2489481.2013

19. Козлова, В.И. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий : руководство для врачей / В.И. Козлова, А.Ф. Пухнер. - Спб.: Ольга, 2000. - 572 с.

20. Кухаренко А.Е. Стандартизация готовой лекарственной формы терапевтической вакцины против впч-ассоциированных заболеваний А.Е. Кухаренко, H.A. Гаврилова, И.В. Гравель, С.А.Черепушкин, Орлова Н.В., Ловцова Л.В. // Фундаментальные исследования. — 2014 - №12(7). - С. 14771481

21. Кухаренко А.Е. Методические подходы к контролю качества терапевтических вакцин против ВПЧ-ассоциированных заболеваний / А.Е. Кухаренко, H.A. Гаврилова, И.В. Гравель, E.H. Сауткина, P.A. Хамитов // Биопрепараты. — 2014 - №4(52). - С. 14-23.

22. Леонов, B.C. Оптимизация биосинтеза гибридных рекомбинантных белков Е7 вируса папилломатоза человека 6, 11, 16, 18 типов и белка теплового шока HSP 70 методом математического моделирования / B.C. Леонов, И.Р. Яхин, Н.В. Стратонова // Биофармацевтический журнал - 2015. - Т. 7. -№1. - С. 15-19.

23. Леонов, B.C. Разработка промышленного способа дезинтеграции биомассы штаммов-продуцентов гибридных рекомбинантных белков Е7 вируса папилломатоза человека 16 и 18 типов и белка теплового шока HSP 70 / B.C. Леонов, Е.В. Горожанина, С.А. Черепушкин // Биофармацевтический журнал -2014. - Т. 6. - №6. - С. 10-16.

24. Миченко, A.B. Аногенитальные кондиломы: современные представления о патогенезе и подходы к терапии / A.B. Миченко, А.Н. Львов // Consilium Medicum. - 2010. - №2. - Прил. Дерматология. - С.37-41.

25. Ниф Д., Голдстоун С., Уиннет М., Сиджел М., Бу Л. Лечение инфекции, вызываемой вирусом папилломы человека // Патент РФ № 2282461. 2001.

26. Нурмухаметов, Р.Х. Применение препаратов, интерферона при ювенильном.респираторном папилломатозе : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Р.Х. Нурмухаметов. - М., 1998. - 22 с.

27. Пальцев М.А., Северин Е.С., Киселев О.И. Композиция рекомбинантных белков, способ получения такой композиции, фармацевтический набор реагентов

для иммунотерапии и профилактической вакцинации опухолевых заболеваний аногенитальной сферы, способ иммунотерапии и профилактической вакцинации на его основе // Патент РФ № 2229307. 2002.

28. Сахарова, О.В. Роль вирусов папиллом человека в патогенезе рака шейки матки: Обзор / О.В. Сахарова, Ф.Л. Киселёв, М.И. Нечушкин // Вест. Он-кол. Науч. Центра им. H.H. Блохина. - 1999. - № 4. - С. 20-29.

29. Свешников П.Г., Киселёв В.И., Яроцкий C.B., Могутов М.А. Рекомбинантный гибридный белок, препарат для иммунотерапии на его основе и способ иммунотерапии рецидивирующего папилломатоза гортани // Патент РФ № 2290204. 2005.

30. Скиба, Е.А. Технология производства дрожжей: Учебное пособие / Е.А. Скиба. - Бийск: Издательство Алтайского государственного технического университета им. И.И. Ползунова. - 2010. — 121 с.

31. Скрипкин, Ю.К. Современные проблемы детской и подростковой дерматовенерологии / Ю.К. Скрипкин, В.Н. Гребенюк, Н.П. Торопова // Российский вестник перинатологии и педиатрии. — 1998. — № 2. - С. 7-11.

32. Солдатский, Ю.Л. Адъювантная терапия рецидивирующего респираторного папилломатоза в детском возрасте / Ю.Л. Солдатский // Педиатр.фармакол. — 2006.-№2.-С. 26-30.

33. Солдатский, Ю.Л. Исходы ювенильного респираторного папилломатоза / Ю.Л. Солдатский, Е.К. Онуфриева, Н.В. Щепин и др. // Рос. Оториноларингология. - 2004. -№ 4 . - С. 70-73.

34. Солдатский, Ю.Л. Рецидивирующий респираторный папилломатоз / Ю.Л. Солдатский // Вопросы современной педиатрии: науч.-практ. Журнал Союза педиатров России. - 2007. - Т. 6, № 1. - С. 69-74.

35. Спецификация на дрожжевой экстракт Springer 0207 (тип Б), микрогранулы. [Электронный ресурс]. — Режим доступа: http://www.dia-m.ru/reactive.php?productid=15831.

36. Тимербулатов, В.M. Проблема остроконечных перианальных кондилом / В.М. Тимербулатов, В.Г. Сахаутдинов, И.И. Хидиятов // Вестник хирургии им. Грекова. -1993. - № 5-6. - С. 123-125.

37. Чирешкин, Д.Г. Опыт лечения детей с респираторным папилломатозом / Д.Г. Чирешкин, Е.К. Онуфриева, А.Д. Прицкер // Вестн. Оторинолар. — 1993. -№ 1.- С. 24-26.

38. Чиссов, В.И. Злокачественные новообразования в России накануне XXI века как медицинская и социальная проблема / В.И. Чиссов, В.В. Старинский, JI.B. Ременник // Рос. Онкол. Журн. - 1998. - №3. - С. 8-20.

39. Чиссов, В.И. Злокачественные образования в России в 1998 г. (Заболеваемость и смертность) / В.И. Чиссов, В.В. Старинский. - М., 1999. - 282 с.

40. Чиссов, В.И. Состояние онкологической помощи населению в России в 2003 г. / В.И. Чиссов, В.В. Старинский, Г.В. Петрова. - М., 2004. - 196 с.

41. Чиссов, В.И. Состояние онкологической помощи населению в России в 2006 г. / В.И. Чиссов, В.В. Старинский, Г.В. Петрова. - М., 2007. - 178 с.

42. Alberghina, L. Efficient productionofrecombinantdnaproteinsin Saccharomyces cerevisiae by controlled high-cell-densityfermentation / L. Alberghina, D. Porro, E. Martegani // Biotechnol. Appl. Biochem. - 1991. - Vol. 14. - P. 82-92.

43. Alexander, B. The relationship between chemiosmotic parameters and sensitivity to anions and organic acids in the acidophile Thiobacillus ferrooxidans / B. Alexander, S. Leach // J.Gen. Microbiol. - 1987.-Vol. 133.-P. 1171-1179.

44. Allen, A.L. The natural history of condyloma in children / A.L. Allen, E.C. Siegfried // J. Am Acad. Dermatol. - 1998. - Vol. 39(6). - P. 951-955.

45. Alonso, Leonardo G. High-risk (HPV16) Human papillomavirus E7 oncoprotein is highly stable and extended, with conformational transitions that could explain its multiple cellular binding partners / Leonardo G. Alonso, M. Garcia-Alai Maria,

Alejandro D. Nadra, et al. // Biochemistry. - 2002. - Vol. 41. - P. 510-518.

46. Arbige, M.V. Industrial enzymology: a look towards the future / M.V. Arbige, W.H. Pitcher // Trendsbiotechnol. - 1989. - Vol. 7. - P. 330-335.

47. Barbosa, M.S. In vitro biological activities of the E6 and E7 genes vary among human papillomaviruses of different oncogenic potential / M.S. Barbosa, W.C. Vass, D.R. Lowy // J Virol. - 1991. - Vol. 65(1). - P. 292-298.

48. Barbosa, M.S. Papillomavirus polypeptides E6 and E7 are zinc-binding proteins / M.S. Barbosa, D.R. Lowy, J.T. Schiller // J Virol. - 1989. - Vol. 63(3). - P. 14041407.

49. Bedell, M.A. Identification of human papillomavirus type 18 transforming genes in immortalized and primary cells / M.A. Bedell, K.H. Jones, S.R. Grossman // J. Virol. - 1989.-Vol. 63(3).-P. 1247-1255.

50. Beggs, J.D. Abnormal expression of chromosomal rabbit beta-globin gene in Saccharomyces cerevisiae / J.D. Beggs, J. van den Berg, A. van Ooyen // Nature. — 1980. - Vol. 283(5750). - P. 835-840.

51. Bernelli-Zazzera, A. Stress proteins and reperfusion stress in the liver / A. Bernelli-Zazzera, G. Cairo, L. Schiaffonati // Ann N Y Acad Sci. - 1992. - Vol. 663. — P. 120-124.

52. Beudeker, R.F. Developments in baker's yeast production / R.F. Beudeker, H.W. van Dam, K. Vellenga // Yeast biotechnology and biocatalysis. - 1990. - P. 103-146.

53. Boer, E. Xplor 2-an optimized transformation expression system for recombinant protein production in the yeast Arxula adeninivorans / E. Boer, M. Piontek, G. Kunze // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2009. - Vol. 84. - P. 583-594.

54. Boer, E. Yeast expression platforms / E. Boer, G. Steinborn, G. Kunze, G. Gellissen // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2007. - Vol. 77. - P. 513-523.

55. Bosch, F.X. Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections and type-specific implications in cervical neoplasia / F.X. Bosch, A.N. Burchell, M. Schiffman, et al. // Vaccine. - 2008. - Vol. 26. - P. 1-16.

56. Brown, D.R. The impact of quadrivalent human papillomavirus (HPV; types 6, 11, 16, and 18) LI virus-like particle vaccine on infection and disease due to oncogenic nonvaccine HPV types in generally HPV-naive women aged 16-26 years / D.R. Brown, S.K. Kjaer, K. Sigurdsson, et al. // J. Infect Dis. - 2009. - Vol. 199. - P. 926-935.

57. Buckholz, R.G. Yeast systems for the commercial production of heterologous proteins / R.G. Buckholz, M.A. Gleeson // Biotechnology (NY). - 1991. - Vol. 9. - P. 1067-1072.

58. Cameron I.T. Product and Process Modeling: A Case Study Approach 1st Edition / I.T. Cameron, R. Gani. - Amsterdam : Elsevier, 2011. - 548 p.

59. Cereghino, G.P. Applications of yeast in biotechnology: protein production and genetic analysis / G.P. Cereghino, J.M. Cregg // Curr. Opin. Biotechnol. - 1999. - Vol. 10.-P. 422—427.

60. Clare, J.J. Production of mouse epidermal growth factor in yeast: high-level secretion using Pichia pastoris strains containing multiple gene copies / J.J. Clare, M.A. Romanos, F.B. Rayment//Gene. - 1991.-Vol. 105.-P. 205-212.

61. Clemens, K.E. Dimerization of the human papillomavirus E7 oncoprotein in vivo / K.E. Clemens, R. Brent, J. Gyuris // Virology. - 1995. - Vol. 214(1). - P. 289-293.

62. Cook, J.C. Purification of virus-like particles of recombinant human papillomavirus type 11 major capsid protein LI from Saccharomyces cerevisiae / J.C. Cook, J.G. Joyce, H.A. George, et al. // Protein Expr. Purif. - 1999. - Vol. 17. - P. 477484.

63. Couderc, R. Oxidation of methanol by the yeast Pichia pastoris, Purification and properties of alcohol oxidase / R. Couderc, J. Barratti // Agric. Biol. Chem. - 1980. -Vol. 44.-P. 2279-2289.

64. Cregg, J.M. High-level expression and efficient assembly of hepatitis B surface antigen in the methylotrophic yeast Pichia pastoris / J.M. Cregg, J.F. Tschopp, C. Stillman // BioTechnology. - 1987. - Vol. 5. - P. 479-485.

65. Cregg, J.M. High-level expression and efficient assembly of hepatitis B surface

antigen in the methylotrophic yeast Pichia pastoris / J.M. Cregg, J.F. Tschopp, C. Stillman, R. Siegel // BioTechnology. - 1987. - Vol. 5. - P. 479-485.

66. Cregg, J.M. Recombinant protein expression in Pichia pastoris / J.M. Cregg, J.L. Cereghino, J. Shi // Mol. Biotechnol. - 2000. - Vol. 16. - P. 23-52.

67. Curvers, S. Human chymotrypsinogen В production with Pichia pastoris by integrated development of fermentation and downstream processing. Part 1. Fermentation / S. Curvers, P. Brixius, T. Klauser // Biotechnol Prog. - 2001. - Vol. 17. -P. 495-502.

68. Dasilva, N.A. Construction and characterization of a temperature-sensitive expression system in yeast / N.A. Dasilva, J.E. Bailey // Biotech. Prog. - 1989. - Vol. 5. -P. 18-26.

69. Database Uniprot [Электронный ресурс]. — Режим доступа: http://www.uniprot.org/

70. Dato, L. Advances in the development of Zygosaccharomyces bailii as host for biotechnological productions and construction of the first auxotrophic mutant / L. Dato, P. Branduardi, S. Passolunghi // FEMS Yeast Res. - 2010. - Vol. 10. - P. 894-908.

71. De Deken, R.H. The Crabtree effect: a regulatory system in yeast / R.H. De Deken // J. Gen. Microbiol. - 1966. - Vol. 44. - P. 149-156.

72. De Hollander, J.A. Kinetics of microbial product formation and its consequences for the optimization of fermentation processes / J.A. De Hollander // Antonie van Leeuwenhoek. - 1993. - Vol. 63. - P. 375-381.

73. De Villiers, E.M. Human pathogenic papillomavirus types: an update / E.M. De Villiers // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1994. - Vol. 186. - P. 1-12.

74. Denise Zielinski, G. High-risk HPV testing in women with borderline and mild dyskaryosis: long-term follow-up data and clinical relevance / G. Denise Zielinski, P.J. Snijders, L.J. Rozendaal, et al. // Pathol. - 2001. - Vol. 195(3). - P.300-306.

75. Diers, I. Glucose isomerase in Bacillus coagulans / I. Diers // Culture 6: Applications and New Fields. - 1976. - P. 208-225.

76. Digan, M.E. Continuous production of a novel lysozyme via secretion from the

yeast, Pichia pastoris / M.E. Digan, S.V. Lair, R.A. Brierley // Biofrechnology. - 1989. -Vol. 7.-P. 160-164.

77. Dominguez, A. Non-conventional yeasts as hosts for heterologous protein production / A. Dominguez, E. Ferminan, M. Sanchez // Int. Microbiol. - 1998. - Vol. l.-P. 131-142.

78. Einstein, M.H. Comparison of the immunogenicity and safety of Cervarix and Gardasil human papillomavirus (HPV) cervical cancer vaccines in healthy women aged 18-45 years / M.H. Einstein, M. Baron, M.J. Levin, et al. // Hum. Vaccin. - 2009. - Vol. 5.-P. 705-719.

79. FDA licensure of bivalent human papillomavirus vaccine (HPV2, Cervarix) for use in females and updated HPV vaccination recommendations from the Advisory Committee on Immunization Practices // MMWR. - 2010. - Vol. 59. - P.626-629.

80. FDA licensure of quadrivalent human papillomavirus vaccine (HPV4, Gardasil) for use in males and guidance from the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) // MMWR. - 2010. - Vol. 59. - P. 630-632.

81. FDA. Complete list if vaccines licensed for immunization and distribution in the US [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fda.gov/biologicsbloodvaccinesA^accines/approvedproducts/ucm093833.ht m

82. Ferlay, J. GLOBOCAN 2008, Cancer Incidence and Mortality Worldwide [Электронный ресурс] / J. Ferlay, H.R. Shin, F. Bray, et al. // IARC cancerbase. -2010. - № 10. - Режим доступа: http://globocan.iarc.fr

83. Ferrer-Miralles, N. Microbial factories for recombinant pharmaceuticals /N. Ferrer-Miralles, J. Domingo-Espin, J. Corchero // Microb. Cell Fact. - 2009. - Vol. 8. -P. 17.

84. Fiechter, A. Regulation of glucose metabolism in growing yeast cells / A.

Fiechter, G.F. Fuhrmann, O. Kappeli // Adv Microb Physiol. - 1981. - Vol. 22. - P. 123-183.

85. Fieschko, J.C. Controlled expression and purification of human immune interferon from high-cell-density fermentations of Saccharomyces cerevisiae / J.C. Fieschko, K.M. Egan, T. Ritch // Biotechnol. Bioeng. - 1987. - Vol. 29. - P. 11131121.

86. Figge, J. Prediction of similar transforming regions in simian virus 40 large T, adenovirus El A, and myc oncoproteins / J. Figge, T. Webster, T.F. Smith // J Virol. -1988.-Vol. 62(5).-P. 1814-1818.

87. Fleer, R. Stable multicopy vectors for high-level secretion of recombinant human serum albumin by Kluyveromyces yeasts / R. Fleer, E. Yeh, N. Amellal // Bio/technology. - 1991. - Vol. 9. - P. 968-975.

88. Fonseca, G.G. The yeast Kluyveromyces marxianus and its biotechnological potential / G.G. Fonseca, E. Heinzle, C. Wittmann // Appl. Microbiol. Biotechnol. -2008.-Vol. 79. P. 339-354.

89. Franco, E.L. Cervical cancer: epidemiology, prevention and the role of human papillomavirus infection / E.L. Franco, E. Duarte-Franco, A. Ferenczy // Can. Med. Assoc. J.-2001.-Vol. 164.-P. 1017-1025.

90. Franco, E.L. Cervical cancer: epidemiology, prevention and the role of human papillomavirus infection / E.L. Franco, E. Duarte-Franco, A. Ferenczy // Can. Med. Assoc. J.-2001.-Vol. 164.-P. 1017-1025.

91. Gaston, J.S.H. Heat shock proteins and innate immunity / J.S.H. Gaston // Clin Exp Immunol. - 2002. - Vol. 127(1).-P. 1-3.

92. Gellissen, G. Application of yeasts in gene expression studies: a comparison of Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha and Kluyveromyces lactis - a review / G. Gellissen, C.P. Hollenberg // Gene. - 1997. - Vol. 190. - P. 87-97.

93. Gellissen, G. Heterologous gene expression in Hansenula polymorpha: efficient

secretion of glucoamylase. / G. Gellissen, Z.A. Janowicz, M. Piontek // Bio/technol. -1991. Vol. 9.-P. 291-295.

94. Gellissen, G. New yeast expression platforms based on methylotrophic Hansenula polymorpha and Pichia pastoris and on dimorphic Arxula adeninivorans and Yarrowia lipolytica - a comparison / G. Gellissen, G. Kunze, C. Gaillardin // FEMS Yeast Res. -2005. - Vol. 5. - P. 1079-1096.

95. Gillison, M.L. Human papillomavirus-related diseases: oropharynx cancers and potential implications for adolescent HPV vaccination / M.L. Gillison // J. Adolesc. Health. - 2008. - Vol. 43. - P. 52-60.

96. Giuseppin, M.L.E. Comparative study on the production of guar-galactosidase by Saccharomyces cerevisiae SU50B and Hansenula polymorpha 8/2 in continuous culture / M.L.E. Giuseppin, J.W. Almkerk, J.C. Heistek // Appl. Environ. Microbiol. - 1993. -Vol. 59.-P. 52-59.

97. Golemis, E. A. Protein-Protein Interactions: A Molecular Cloning Manual / E.A. Golemis, P.D. Adams // Cold Spring Harbor Laboratory Press. - 2002 - P. 65-68.

98. Goodey, A.R. The production of heterologous plasma proteins / A.R. Goodey // Trends Biotechnol. - 1993. - Vol. 11. - P. 430-433.

99. Goodman, M. Market watch: Sales of biologies to show robust growth through to 2013 / M. Goodman // Nat. Rev. Drug Discov. - 2009. - Vol. 8. - P. 837.

100. Gordonova, I.K. Comparative study of Saccharomyces cerevisiae LPS / I.K. Gordonova, Z.K. Nikitina, V.A. Bykov // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. - 2002. - Vol. 134(4). - P. 370-373.

101. Guideline on the specification limits for residues of metal catalysts or metal reagents. - EMEA/CHMP/SWP/4446/2000. - 2008. - P. 23.

102. Hacking, A.J. Economic aspects of biotechnology / A.J. Hacking. - Cambridge : Cambridge University Press, 1986. - 306 p.

103. Hadzic, B. Morphologic manifestations of human papillomavirus infection in the vulvar and anogenital region / B. Hadzic, S. Djurdjevic, M. Hadzic // Med. Pregl. -1998. - Vol. 51(5-6). - P.265-70.

104. Hagenson, M.J. Expression of streptokinase in Pichia pastoris yeast / M.J. Hagenson, K.A. Holden, K.A. Parker // Enzyme Microb. Technol. - 1989. - Vol. 11.— P. 650-656.

105. Halbert, C.L. The E6 and E7 genes of human papillomavirus type 6 have weak immortalizing activty in human epithelial cells / C.L. Halbert, G.W. Demers, D.A. Galloway // Journal of Virology. - 1992. - Vol. 66. - P. 2125-2134.

106. Hawley, P. HPV 16 E6 and E7 proteins cooperate to immortalize human foreskin keratinocytes / P. Hawley-Nelson, K.H. Vousden, N.L. Hubbert // EMBO J. - 1989. -Vol. 8(12).-P. 3905-3910.

107. Heijnen, J.J. Application of balancing methods in modeling the penicillin fermentation / J.J. Heijnen, J.A. Roels, A.H. Stouthamer// Biotechnol. Bioeng. - 1979. -Vol. 21.-P. 2175-2201.

108. Heijnen, J.J. Fundamental bottlenecks in the application of continuous bioprocesses / J.J. Heijnen, A.H. Terwisscha van Scheltinga, A.J. Straathof // J.

Biotechnol. - 1992. - Vol. 22. -P. 3-20.

»

109. Hensing, M.C. Physiological and technological aspects of large-scale heterologous-protein production with yeasts / M.C. Hensing, R.J. Rouwenhorst, J.J. Heijnen // Antonie Van Leeuwenhoek. - 1995. - Vol. 67(3). - P. 261-79.

110. Hinnen, A. Heterologous gene expression in yeast. In: Barr PJ, Brake AJ & Valenzuela P (Eds) / A. Hinnen, B. Meyhack, J. Heim // Yeast genetic engineering. -1989.-P. 193-213.

111. Hitzeman, R.A. Expression of a human gene for interferon in yeast / R.A. Hitzeman, F.E. Hagie, H.L. Levine //Nature. - 1981. - Vol. 293. - P. 717-722.

112. Ho, G.Y. Natural history of cervicovaginal papillomavirus infection in young women / G.Y. Ho, R. Bierman, L. Beardsley, C.J. Chang, R.D. Burk // N. Engl. J. Med. - 1998. - Vol. 338. - P. 423-428.

113. Ho, G.Y. Persistent genital human papillomavirus infection as a risk factor for

persistent cervical dysplasia / G.Y. Ho, R.D. Burk, S. Klein, et al. // J. Natl. Cancer Inst. -1995.-Vol.87.-P. 1365-1371.

114. Hodgkins, M. Expression of the glucose oxidase gene from Aspergillus niger in Hansenula polymorpha and its use as a reporter gene to isolate regulatory mutations / M. Hodgkins, D. Mead // Yeast. - 1993. - Vol. 9. - P. 625-635.

115. Hohenblum, H. Assessing viability and cell-associated product of recombinant protein producing Pichia pastoris with flow cytometry / H. Hohenblum, N. Borth, D. Mattanovich // J. Biotechnol. - 2003. - Vol. 102. - P. 281-290.

116. Hough, J.S. Continuous culture in brewing / J.S. Hough, C.W. Keevil, V. Marie // Continuous culture 6: Applications and new fields. - 1976. - P. 226-237.

117. Hudson, J.B. Immortalization and altered differentiation of human keratinocytes in vitro by the E6 and E7 open reading frames of human papillomavirus type 18 / J.B. Hudson, M.A. Bedell, D.J. Mccance // J Virol. - 1990. - Vol. 64. - P. 519-526.

118. Janowicz, Z.A. Expression system based on the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha / Z.A. Janowicz, A. Merckelbach, M. Eckart // Yeast. - 1988. - Vol. 4. - P. 155.

119. Jewers, R.J. Regions of human papillomavirus type 16 E7 oncoprotein required for immortalization of human keratinocytes / R.J. Jewers, P. Hildebrandt, J.W. Ludlow //J Virol. - 1992. - Vol. 66(3). - P. 1329-1335.

120. Kanda, T. Immortalization of primary rat cells by human papillomavirus type 16 subgenomic DNA fragments controlled by the SV40 promoter / T. Kanda, S. Watanabe, K. Yoshiike// Virology. - 1988. -Vol. 165(1).-P. 321-325.

121. Kanodia, S. Recent advances in strategies for immunotherapy of human papillomavirus-induced lesions / S. Kanodia, D.M. Da Silva, W.M. Kast // Int. J. Cancer. - 2008. - Vol. 122(2). - P. 247-59.

122. Kashima, H.K. Recurrent respiratory papillomatosis / H.K. Kashima, P. Mounts, K. Shah // Obstet Gynecol Clin North Am. -1996. - № 23. - P. 699-706.

123. Kaspar von Meyenburg, H. Energetics of the budding cycle of Saccharomyces

cerevisiae during glucose limited aerobic growth / H. Kaspar von Meyenburg // Mikrobiologie. - 1969. - Vol. 66(4). - P. 289-303.

124. Khlebodarova, T.M. How cells protect themselves against stress? / T.M. Khlebodarova // Russian Journal of Genetics. - 2002. - Vol. 38. - P.345-358.

125. Kobayashi, K. High level secretion of recombinant human serum albumin by fed-batch fermentation of the methylotrophic yeast, Pichia pastoris, based on optimal methanol feeding strategy / K. Kobayashi, S. Kuwae, T. Ohya // J. Biosci. Bioeng. -2000. - Vol. 90. - P. 280-288.

126. Kobayashi, K. High level secretion of recombinant human serum albumin by fed-batch fermentation of the methylotrophic yeast, Pichia pastoris, based on optimal methanol feeding strategy / K. Kobayashi, S. Kuwae, T. Ohya // J. Biosci. Bioeng. — 2000. - Vol. 90. - P. 280-288.

127. Kregel, K.C. Heat shock proteins: modifying factors in physiological stress responses and acquired thermotolerance / K.C. Kregel // J Appl Physiol. - 2002. - Vol. 92(5).-P. 2177-2186.

128. Krogh, A.M. Stability of heterologous protein production by. Saccharomyces cerevisiae in continuous cultures [Электронный ресурс] / A.M. Krogh // Ph.D. Thesis. - 2009. - Режим доступа:

http://orbit.dtu.dk/fedora/obiects/orbit:82658/datastreams/file 5050782/content

129. Kurtzman, C.P. Phylogenetic circumscription of Saccharomyces, Kluyveromyces and other members of the Saccharomycetaceae, and the proposal of the new genera Lachancea, Nakaseomyces, Naumovia, Vanderwaltozyma and Zygotorulaspora / C.P. Kurtzman // FEMS Yeast Res. - 2003. - Vol. 4. - P. 233-245.

130. Lacey, C.J. Chapter 4: Burden and management of non-cancerous HPV-related conditions: HPV-6/11 disease / C.J. Lacey, C.M. Lowndes, K.V. Shah // Vaccine. -2006.-Vol. 24.-P. 35-41.

131. Lelieveld, H.L.M. Mixed-strain continuous milk fermentation / H.L.M. Lelieveld // Proc. Biochem. - 1984. - Vol. 19. - P. 112-113.

132. Li, J. Crystal structure of yeast Sisl peptide-binding fragment and Hsp70 Ssal C-terminal complex / J. Li, Y. Wu, X. Qian, B. Sha // Biochem J. - 2006. - Vol. 398(3). -P. 353-360.

133. Liu, X. Structure of the human Papillomavirus E7 oncoprotein and its mechanism for inactivation of the retinoblastoma tumor suppressor / X. Liu, A. Clements, K. Zhao, R. Marmorstein // J Biol Chem. - 2006. - Vol. 281(1). - P. 578-586.

134. Lussow, A.R. Mycobacterial heat-shock proteins as carrier molecules / A.R. Lussow, C. Barrios, J. van Embden // Eur J Immunol. - 1991. - Vol. 21(10). - P. 22972302.

135. Macauley-Patrick, S. Heterologous protein production using the Pichia pastoris expression system / S. Macauley-Patrick, M.L. Fazenda, B. Mcneil // Yeast. - 2005. -Vol. 22.-P. 249-270.

136. Macdonald, G. Bio drugs to dominate top ten list by 2014 [электронный ресурс] / G. Macdonald // In-Pharma Technologist. — 2010. — Режим доступа: http://www.in-pharmatechnologist.com/Industry-Drivers/Bio-drugs-to-dominate-top-ten-list-by-2014.

137. Madzak, C. Heterologous protein expression and secretion in the non-conventional yeast Yarrowia lipolytica: a review / C. Madzak, C. Gaillardin, J.M. Beckerich // J. Biotechnol. - 2004. - Vol. 109. - P. 63-81.

138. Makdesi, A.K. Evaluation of media for enumerating heat- stressed, benzoate-resistant Zygosaccharomyces bailii / A.K. Makdesi, L.R. Beuchat // Int. J. Food Microbiol. - 1996. - Vol. 33. - P. 169-181.

139. Markowitz, L.E. Quadrivalent Human Papillomavirus Vaccine: Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) / L.E. Markowitz, E.F. Dunne, M. Saraiya // MMWR Recomm Rep. - 2007. - Vol. 56. - P. 124.

140. Martegani, E. Expression of high levels of human tissue plasminogen activator in yeast under the control of an inducible GAL promoter / E. Martegani, N. Forlani, I. Mauri // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1992. - Vol. 37. - P. 604-608.

141. Matlashewski, G. Human papillomavirus type 16 DNA cooperates with activated ras in transforming primary cells / G. Matlashewski, J. Schneider, L. Banks, et al. // EMBO J. - 1987. -Vol. 6(6). - P. 1741-1746.

142. Mattanovich, D. Recombinant protein production in yeasts / D. Mattanovich, P. Branduardi, L. Dato, B. Gasser// Methods Mol Biol. - 2012. - Vol. 824. - P. 329-358.

143. Maurer, M. Versatile modeling and optimization of fed batch processes for the production of secreted heterologous proteins with Pichia pastoris / M. Maurer, M. Kuhleitner, D. Mattanovich // Microb. Cell Fact. - 2006. - Vol. 5. - P. 37.

144. Mclaughlin-Drubin, M.E. The Human Papillomavirus E7 Oncoprotein / M.E. Mclaughlin-Drubin, K. Munger // Virology. - 2009. - Vol. 384(2). - P. 335-344.

145. Mclaughlin-Drubin, Margaret E. The human papillomavirus E7 oncoprotein / Margaret E. Mclaughlin-Drubin, Karl Munger // Virology. - 2009. - Vol. 384(2). - P. 335-344.

146. Mitten, H.R. Temperature Increase Due to Homogenization / H.R. Mitten, H.L. Preu //J. Dairy Sci.- 1959. —Vol.42. -P. 1880.

147. Modak, J.M. General characteristics of optimal feed rate profiles for various fed batch fermentation processes / J.M. Modak, H.C. Lim, Y.J. Tayeb // Biotechnol Bioeng, - 1986.-Vol. 28.-P. 1396-1407.

148. Molano, M. Determinants of clearance of human papillomavirus infections in Colombian women with normal cytology: a population- based, 5-year follow-up study / M. Molano, A. Van den Brule, M. Plummer, et al. // Am. J. Epidemiol. - 2003. - Vol. 158.-P. 486-494.

149. Moscicki, A.B. Impact of HPV infection in adolescent populations / A.B. Moscicki // J. Adolesc. Health. - 2005. - Vol. 37. - P. 3-9.

150. Munger, K. Complex formation of human papillomavirus E7 proteins with the retinoblastoma tumor suppressor gene product / K. Munger, B.A. Werness, N. Dyson // Embo J. - 1989. - Vol. 8(13). - P. 4099-4105.

151. Munger, K. The E6 and E7 genes of the human papillomavirus type 16 together are necessary and sufficient for transformation of primary human keratinocytes / K. Munger, W.C. Phelps, V. Bubb // J Virol. - 1989. - Vol. 63(10). - P. 4417-4421.

152. Munoz, N. Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer / N. Munoz, F.X. Bosch, S. de Sanjose, et al. // N. Engl. J. Med. - 2003. - Vol. 348. P. 518-527.

153. Ni, Y. Extracellular recombinant protein production from Escherichia coli / Y. Ni, R. Chen // Biotechnol. Lett. - 2009. - Vol. 31. - P. 1661-1670.

154. Ohlenschlager, O. Solution structure of the partially folded high-risk human papilloma virus 45 oncoprotein E7 / O. Ohlenschlager, T. Seiboth, H. Zengerling // Oncogene. - 2006. - Vol. 25. - P. 5953-5959.

155. Ohno, H. Optimal control of a semibatch fermentation / H. Ohno, E. Nakanishi, T. Takamatsu // Biotechnol. Bioeng. - 1976. - Vol. 18. - P. 847-864.

156. Paavonen, J. Efficacy of human papillomavirus (HPV)-16/18 AS04-adjuvanted vaccine against cervical infection and precancer caused by oncogenic HPV types (PATRICIA): final analysis of a double-blind, randomised study in young women / J. Paavonen, P. Naud, J. Salmeron, et al. // Lancet. - 2009. - Vol. 374. P. 301-314.

157. Panda, A.K. Bioprocessing of therapeutic proteins from the inclusion bodies of Escherichia coli / A.K. Panda // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. - 2003. - Vol. 85. - P. 43-93.

158. Pandhal, J. N-Linked glycoengineering for human therapeutic Proteins in bacteria / J. Pandhal, P.C. Wright // Biotechnol. Lett. - 2010. - Vol. 32. - P. 1189-1198.

159. Parkin, D.M. Chapter 2: The burden of HPV-related cancers / D.M. Parkin, F. Bray // Vaccine. - 2006. - Vol. 24. - P. 11-25.

160. Petrik, M. An expanded concept for the glucose effect in the yeast Saccharomyces uvarum: involve- ment of short- and long-term regulation / M. Petrik,

O. Kappeli, A. Fiechter // J. Gen. Microbiol. - 1983. - Vol. 129. - P. 43-49.

161. Phelps, W.C. Structure-function analysis of the human papillomavirus E7 oncoprotein / W.C. Phelps, K. Miinger, C.L. Yee // Journal of Virology. - 1992. - Vol. 66.-P. 2418-2427.

162. Phelps, W.C. The human papillomavirus type 16 E7 gene encodes transactivation and transformation functions similar to those of adenovirus El A / W.C. Phelps, C.L. Yee, K. Munger // Cell. - 1988. - Vol. 53(4). - P. 539-47.

163. Pirt, S.J. The maintenance energy of bacteria in growing cultures / S.J. Pirt // Proc. Royal Soc. London. - 1965. - Vol. 163B. - P. 224-231.

164. Pirt, S.J. The theory of fed batch culture with reference to the penicillin fermentation / S.J. Pirt // J. Appl. Chem. Biotechnol. - 1974. - Vol. 24. - P. 415^124.

165. Poldermans, B. Commerci~le enzymen en koolhydraten / B. Poldermans // Koolhydraten in Nederland. - 1989. - Vol. 5. - P. 25-28.

166. Porro, D. Heterologous gene expression in continuous cultures of budding yeast / D. Porro, E. Martegani, B.M. Ranzi // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1991. - Vol. 34. -P. 632-636. '

167. Porro, D. Relating growth dynamics and glucoamylase excretion of individual Saccharomyces cerevisiae cells / D. Porro, M. Venturing L. Brambilla // J. Microbiol. Methods. - 2000. - Vol. 42. - P. 49-55.

168. Postma, E. Enzymic analysis of the crabtree effect in glucose-limited chemostat cultures of Saccharomyces cerevisiae / E. Postma, C. Verduyn, W.A. Scheffers // Appl. Env. Microbiol. - 1989. - Vol. 55. - P. 468-177.

169. Potgieter, T.I. Antibody expression kinetics in glycoengineered Pichia pastoris / T.I. Potgieter, S.D. Kersey, M.R. Mallem // Biotechnol. Bioeng. - 2010. - Vol. 106. -P. 918-927.

170. Qian, S.B. CHIP-mediated stress recovery by sequential ubiquitination of substrates and Hsp70 / S.B. Qian, H. Mcdonough, F. Boellmann, D.M. Cyr, C. Patterson // Nature. - 2006. - Vol. 440(7083). - P.551-555.

171. Qian, X. Prophylactic, therapeutic and anti-metastatic effects of an HPV-16me68/me7/tbhsp708 fusion protein vaccine in an animal model / X. Qian, Y. Lu, Q. Liu, et al. // Immunol Lett. - 2006. - Vol. 102. - P. 191-201.

172. Raymond, C.K. Development of the methylotrophic yeast Pichia methanolica for the expression of the 65 kilodalton isoform of human glutamate decarboxylase / C.K. Raymond, T. Bukowski, S.D. Holderman // Yeast. - 1998. - Vol. 14. - P. 11-23.

173. Reiser, J. Transfer and expression of heterologous genes in yeasts other than Saccharomyces cerevisiae / J. Reiser, V. Glumoff, M. Kalin // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. - 1990. - Vol. 43. -P. 75-102.

174. Reisinger, K.S. Safety and persistent immunogenicity of a quadrivalent human papillomavirus types 6, 11, 16, 18 LI virus-like particle vaccine in preadolescents and adolescents: a randomized controlled trial / K.S. Reisinger, S.L. Block, E. Lazcano-Ponce, et al. // Pediatr. Infect. Dis. J. - 2007. - Vol. 26. - P. 201-209.

175. Rhea, W.G. Jr. Condyloma acuminata: a fatal disease? / W.G. Jr. Rhea, B.M. Bourgeois, D.R. Sewell //Am Surg. - 1998. - Vol. - 64(11). - P. 1082-1087

176. Rocha, S.N. Heterologous expression of glucose oxidase in the yeast Kluyveromyces marxianus / S.N. Rocha, J. Abrahao-Neto, M.E. Cerdan // Microb. Cell Fact.-2010. Vol. 9.-P. 4.

177. Roels, J.A. Energetics and kinetics in biotechnology / J.A. Roels. - Amsterdam.: Elsevier sciencepublishers, 1983. - 330 p.

178. Romanos, M.A. Foreign gene expression in yeast: a review / M.A. Romanos, C.A. Scorer, J.J. Clare // Yeast. - 1992. - Vol. 8. - P. 423^188.

179. Romanos, M.A., Recombinant bordetella pertussis pertactin (p69) from the yeast Pichia pastoris: high-level production and immunological properties / M. A. Romanos, J.J. Clare, K.M. Beesley // Vaccine. - 1991. - Vol. 9. - P. 901-906.

180. Schiffman, M. Chapter 2: Natural history of anogenital human papillomavirus infection and neoplasia / M. Schiffman, S.K. Kjaer // J. Natl. Cancer Inst. - 2003. - Vol. 31.-P. 14-19.

181. Schlegel, R. Quantitative keratinocyte assay detects two biological activities of human papillomavirus DNA and identifies viral types associated with cervical carcinoma / R. Schlegel, W.C. Phelps, Y.L. Zhang // EMBO J. - 1988. - Vol. 7(10). -P. 3181-3187.

182. Sinclair, C.G. Fermentation kinetics and modelling / C.G. Sinclair, B. Kristiansen, J.D. Bu'Lock. - Milton Keynes: Open University Press, 1987.

183. Sousa, M.J. Transport of acetic acid in Zygosaccharomyces bailii: effects of ethanol and their implications on the resistance of the yeast to acidic environments / M.J. Sousa, L. Miranda, M. Corte-Real // Appl. Environ. Microbiol. - 1996. - Vol. 62. -P. 3152-3157.

184. Sreekrishna, K. High-level expression, purification and characterization of recombinant human tumor necrosis factor synthesized in the methylotrophic yeast Pichia pastoris / K. Sreekrishna, L. Nelles, R. Potenz // Biochem. - 1989. - Vol. 28. - P. 4117-4125.

185. Stockmann, C. Process development in Hansenula polymorpha and Arxula adeninivorans, a reassessment / C. Stockmann, M. Scheidle, B. Dittrich // Microb. Cell Fact. - 2009. - Vol. 8. - P. 22.

186. Storey, A. Mutations of the human papillomavirus type 16 E7 gene that affect transformation, transactivation and phosphorylation by the E7 protein / A. Storey, N. Almond, K. Osborn // J Gen Virol. - 1990. - Vol. 71(4). - P. 965-970.

187. Stouthamer, A.H. Microbial energetics should be considered in manipulating metabolism for biotechnological purposes / A.H. Stouthamer, H.W. van Verseveld // Trends Biotechnol. - 1987. - Vol. 5. - P. 149-155.

188. Stouthamer, A.H. Utilization of energy for growth and maintenance in continuous and batch cultures of microorganisms. A réévaluation of the method for the determination of ATP production by measuring molar growth yields / A.H. Stouthamer, C. Bettenhansen // Biochim. Biophys. Acta. - 1973. - Vol. 301. - P. 53-70.

189. Sudbery, P.E. Hansenula polymorpha as a novel yeast system for the expression of heterologous genes / P.E. Sudbery, M.A. Gleeson, R.A. Veale // Biochem. Soc.

Trans.-1988.-Vol. 16.-P. 1081-1083.

190. Susan, H. Manual for the Surveillance of Vaccine-Preventable Diseases [Электронный ресурс] / H. Susan, S. Mona // Center for disease control and prevention publications. - 2012. - Chapter 5. - Режим доступа: http://www.cdc.gov/vaccines/pubs/surv-manual/index.html

191. Takegawa, К. Production of heterologous proteins using the fission-yeast (Schizosaccharomyces pombe) expression system / K. Takegawa, H. Tohda, M. Sasaki // Biotechnol. Appl. Biochem. - 2009. - Vol. 53. - P. 227-235.

192. Tcttrup, H.V. A process for the production of human proinsulin in Saccharomyces cerevisiae / H.V. Tcttrup, S. Carlsen // Biotechnol. Bioeng. — 1990. — Vol. 35.-P. 339-348.

193. Terwisscha van Scheltinga, A.H. General production methods / A.H. Terwisscha van Scheltinga // Enzymes in industry: production and application. - 1990. - P. 33-43.

194. Tripathi, N.K High yield production of heterologous proteins with Escherichia coli / N.K. Tripathi, K. Sathyaseelan, A.M. Jana // Defence Science Journal. - 2009. -Vol. 59.-P. 137-146.

195. Tschopp, J.R. High-level secretion of glycosylated invertase in the methyotrophic yeast, Pichia pastoris / J.R. Tschopp, G. Sverlow, R. Kosson // Bio/Technology. - 1987. -Vol. 5.-P. 1305-1308.

196. Turner, B.G. Optimization of pro-urokinase secretion from recombinant Saccharomyces cerevisiae / B.G. Turner, G.C. Avgerinos, L.M. Melnick // Biotechnol. Bioeng. - 1991. - Vol. 37. - P. 869-875.

197. Van Dijk, R. The methylotrophic yeast Hansenula polymorpha: a versatile cell factory / R. Van Dijk, K.N. Faber, J.A. Kiel // Enzyme Microb. Technol. - 2000. - Vol. 26.-P. 793-800.

198. Van Dijken, J. P. Redox balances in the metabolism of sugars by yeasts / J.P. Van Dijken, W.A. Scheffers // FEMS Microbiol, Rev. - 1986. - Vol. 32. - P.199-224.

199. Van Dijken, J.R. Growth of Hansenula polymorpha in a methanol limited chemostat: physiological responses due to the involvement of methanol oxidase as a key

enzyme in methanol metabolism / J.R. Van Dijken, R. Otto, W. Harder // Arch. Microbiol.-1976.-Vol. 111.-P. 137-144.

200. Van Ooyen, A. Heterologous protein production in the yeast Kluyveromyces lactis / A. Van Ooyen, P. Dekker, M. Huang // FEMS Yeast Res. - 2006. - Vol. 6. - P. 381-392.

201. Van Urk, H. Transient-state analysis of metabolic fluxes in Crabtree-positive and Crabtree-negative yeasts /H. Van Urk, W.S.L. Voll, W.A. Scheffers // Appl. Environ. Microbiol. - 1990. - Vol. 56. - P. 281-287.

202. Van Verseveld, H.W. Modeling of microbial substrate conversion, growth and product formation in a recycling fermentor / H.W. Van Verseveld, J.A. de Hollander // Antonie van Leeuwenhoek. - 1986. - Vol. 52. - P. 325-342.

203. Verduyn, C. Effect of benzoic acid on metabolic fluxes in yeast: a continuous culture study on the regulation of respiration and alcoholic fermentation / C. Verduyn, E. Postma, W.A. Scheffers // Yeast. - 1992. - Vol. 8. - P. 501-517.

204. Verduyn, C. Physiology of yeasts in relation to growth yields / C. Verduyn // Antonie van Leewenhoek. - 1991. - Vol. 60. - P. 325-353.

205. Vousden, K.H. Functional similarity between HPV16E7, SV40 large T and adenovirus El a proteins / K.H. Vousden, P.S. Jat // Oncogene. - 1989. - Vol. 4(2). -P. 153-158.

206. Vousden, K.H. The E7 open reading frame of human papillomavirus type 16 encodes a transforming gene / K.H. Vousden, J. Doniger, J.A Dipaolo // Oncogene Res. - 1988. - Vol. 3(2).-P. 167-175.

207. Watanabe, S. Human papillomavirus type 16 transformation of primary human embryonic fibroblasts requires expression of open reading frames E6 and E7 / S. Watanabe, T. Kanda, K. Yoshiike // J Virol. - 1989. - Vol. 63(2). - P. 965-969.

208. Watanabe, S. Mutational analysis of human papillomavirus type 16 E7 functions / S. Watanabe, T. Kanda, H. Sato //J Virol. - 1990. - Vol. 64(1). - P. 207-214.

209. Watson, M. Update of HPV-associated female genital cancers in the United

States 1999-2004 / M. Watson, M. Saraiya, X. Wu // J. Women Health. - 2009. - Vol. 18. -P.1731-1738.

210. Weik, R. Induction of oxidofermentative ethanol formation in recombinant cells of Saccharomyces cerevisiae yeasts / R. Weik, G. Striedner, A. Francky // Food Technol. Biotechnol. - 1999.-Vol. 37.-P. 191-194.

211. Weinstock, H. Sexually transmitted diseases among American youth: incidence and prevalence estimates, 2000 / H. Weinstock, S. Berman, W. Cates // Perspect Sex Reprod Health, Jr. - 2004. - Vol. 36. - P. 10.

212. Wen, L.M. Risk factors for the acquisition of genital warts: are condoms protective? / L.M. Wen, C.S. Estcourt, J.M. Simpson // Sex Transm. Infect. - 1999. -Vol. 75(5).-P. 312-316.

213. Winer, R.L. Genital human papillomavirus infection: incidence and risk factors in a cohort of female university students / R.L. Winer, S.K. Lee, J.P. Hughes // Am. J. Epidemiol.-2003.-Vol. 157.-P. 218-226.

214. Witte, K. Preventing the spread of genital warts: using fear appeals to promote self-protective behaviors / K. Witte, J.M. Berkowitz, K.A. Cameron // Health Educ Behav. - 1998. - Vol. 25(5). - P. 571-585.

215. Woodworth, C.D. Immortalization of human foreskin keratinocytes by various human papillomavirus dnas corresponds to their association with cervical carcinoma / C.D. Woodworth, J. Doniger, J.A. Dipaolo // J Virol. - 1989. - Vol. 63(1). - P. 159164.

216. World Enzymes to 2013 // The Freedonia Group, Inc. - 2009. - Vol. 2506. - P.50

217. Yamane, T. Fed-batch techniques in microbial processes / T. Yamane, S. Shimizu // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. - 1984. - Vol. 30. - P. 147-194.

218. Yasumoto, S. Human papillomavirus type 16 DNA-induced malignant transformation of NIH 3T3 cells / S. Yasumoto, A.L. Burkhardt, J. Doniger // J. Virol. -1986. - Vol. 57(2). - P.572-577.

219. Yutsudo, M. Functional dissociation of transforming genes of human papillomavirus type 16 / M. Yutsudo, Y. Okamoto, A. Hakura // Virology. - 1988. — Vol. 166(2).-P. 594-597.

220. Zhang, W. Maximization of production of secreted recombinant proteins in Pichia pastoris fed-batch fermentation / W. Zhang, J Sinha, L.A. Smith // Biotechnol. Prog. -2005. - Vol. 21. - P. 386-393.

221. Zur Hausen, H. Human papillomaviruses / H. Zur Hausen, E.M. Devillier // Annu. Rev. Microbiology. -1994. - Vol. 48. - P. 427^147.