Регуляция каталитической активности алкогольдегидрогеназы фармакологическими препаратами Пирацетам, Зорекс и Унитиол тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Золотарева, Наталья Владимировна

• Золотарева, Наталья Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Золотарева, Наталья Владимировна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. Обзор литературы.

2.1 .Физико-химические особенности строения алкогольдегидрогеназ.

2.2. Катализируемые реакции и субстратная специфичность различных классов алкогольдегидрогеназ.

2.3. Выделение и очистка алкогольдегидрогеназ из различных источников.

2.4. Кинетика ферментативных реакций, катализируемых алкогольдегидрогеназами.

2.5. Изучение влияния типов ингибиторования на каталитическую активность биокатализаторов.

2.6. Эффекторы алкогольдегидрогеназ различной химической природы.

3 .ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Используемые в работе вещества.

3.2. Посуда, приборы и оборудование.

3.3. Методы исследования.

3.3.1. Метод Г.А. Кочетова для выделения и очистки алкогольдегидолгеназ.

3.3.2. Определение концентрации белка по методу биуретовой 60 реакции.

3.3.3. Метод определения ферментативной кинетической 61 активности алкогольдегидрогеназы.

3.3.4. Метод Лайнуивера - Берка для обработки данных 62 ферментативной кинетики.

3.3.5. Метод векторных диаграммных построений.

3.3.6. Программное обеспечение Microlab Origin.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1 Выделение, очистка и определение субстратной специфичности 70 алкогольдегидрогеназы.

4.2 Определение молекулярно-кинетических параметров каталитической активности алкогольдегидрогеназы печени лошади в 81 системе контроля (ферментативная система-1).

4.3. Изучение влияния Пирацетама на каталитические параметры алкогольдегидрогеназы печени лошади (ферментативная система-2).

4.4.Выяснение действия НАД на ферментативные параметры алкогольдегидрогеназы печени лошади (ферментативная система-3).

4.5. Исследование влияния препарата Зорекс на ферментативные параметров АДГ печени лошади (ферментативной системы-4).

4.6. Выяснение влияния Унитиола на каталитическую активность алкогольдегидрогеназы печени лошади (ферментативная система-5).

5. Анализ данных ферментативной кинетики с использованием трехмерной Км'У' - системы координат.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Регуляция каталитической активности алкогольдегидрогеназы фармакологическими препаратами Пирацетам, Зорекс и Унитиол»

Актуальность исследования

Одна из наиболее актуальных в физико-химическом аспекте проблем биохимии алкоголизма - регуляция активности алкогольдегидрогеназы (АДГ). Действующее начало в любом алкогольном напитке - этанол [68; 71; 174]. Достаточно полно изучен физиологический аспект действия этанола на организм человека [18], а также исследован ферментативный механизм утилизации этанола в организме человека [27; 41; 47] при участии фермента алкогольдегидрогеназы. Однако вопросы регуляции ферментативной активности алкогольдегидрогеназы изучены недостаточно.

Алкогольдегидрогеназа - фермент класса оксидоредуктаз (1.1.1.1), катализирующий процессы окисления никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) первичных алифатических спиртов в соответствующие альдегиды [31]. Алкогольдегидрогеназы найдены в тканях животных (печени лошади) [92; 177], растениях (томатах и картофеле), грибах, дрожжах, бактериях [1] и др. Наиболее изученными ферментами являются алкогольдегидрогеназы, выделенные из дрожжей, а также печени лошади [60; 82; 87].

Алкогольдегидрогеназы являются недостаточно исследованными биокатализаторами с точки зрения использования различных фармпрепаратов, применяемых для лечения больных хроническим алкоголизмом [19; 44; 78]. До настоящего времени актуальным является поиск специфических эффекторов фермента АДГ, окисляющих этанол, с целью регулирования концентрации этанола и ацетальдегида в организме, что важно в изучении молекулярных основ биохимии алкоголизма [91; 127].

Вопросы изучения и установления молекулярных механизмов такого рода эффекторов (активаторов или ингибиторов фермента) относятся к перспективным направлениям современной энзимологии и обсуждались на Symposium of A.I. Oparin: "Biochemistry of the twenty-first century: problems and frontiers 1994, а также в научных работах [14; 182]. Поиск решения поставленной задачи и определяет актуальность данной работы.

В практической медицине довольно широко используются фапмпрепараты Пирацетам и Зорекс [2; 84; 106; 108; 176]. Физиологические основы действия данных регуляторов известны: Пирацетам, являясь ноотропным фармпрепаратом, изменяет метаболические и биоэнергетических процессы в нервной клетке, улучшает функции головного мозга, усиливая кровоток [81; 106]; Унитиол, i в свою очередь, в составе Зорекса способствует восстановлению обмена веществ в нервных клетках выведению продуктов распада этанола из органов и тканей [149; 159]. Эффективное использование этих фармпрепаратов базируется на информации о молекулярно-кинетическом характере их действия на фермент АДГ, который в полной мере не изучен.

Цель диссертационной работы: исследование молекулярно-кинетического аспекта действия фармакологических препаратов Пирацетама, Зорекса и Унитиола (составной части Зорекса) на каталитическую активность алкогольдегидрогеназы в условиях in vitro. Задачи исследования:

1. Выделить и очистить алкогольдегидрогеназу из пекарских дрожжей по методу Г.А. Кочетова. Изучить субстратную специфичность фермента в группе этанол-бутанол-изопропанол и рассчитать его основные ферментативные параметры и выявить оптимальную концентрацию специфичного субстрата. Сравнить ферментативные показателей алкогольдегидрогеназы пекарских дрожжей и алкогольдегидрогеназы печени лошади.

2. Разработать многоэтапный научно-методический подход по изучению каталитической активности алкогольдегидрогеназы печени лошади в присутствии регуляторов и оптимизировать его: рассчитать значения важнейших ферментативных параметров каталитической активности алкогольдегидрогеназы печени лошади для системы контроля;

- выявить влияние Пирацетама и никотинамидадениндинуклеотида на каталитическую активность алкогольдегидрогеназы. Найти их оптимальные концентрации;

- определить действие Зорекса и Унитиола на активность биокатализатора.

3. Установить тип регулирования алкогольдегидрогеназы в присутствии Пирацетама, Зорекса и Унитиола.

4. Для изученных ферментативных систем построить геометрический «портрет» в трехмерной Км' V' — системе координат и на этой основе рассчитать дополнительный интегративный ферментативный параметр длину р1ат -, р1а{2) р1а{%) - векторов.

Научная новизна результатов исследования

Разработан многоэтапный научно-методический подход по изучению влияния фармакологических препаратов Пирацетам, Зорекс и Унитиол на каталитическую активность АДГ.

Впервые выявлены типы активации АДГ при действии на фермент фармпрепаратов Пирацетама, Зорекса и Унитиола и установлена эффективность функционирования биокатализатора на основе векторных построений данных ферментативной кинетики в трехмерной Км'У -системе координат, позволивших впервые получить визуализацию хода ферментативного процесса с участием АДГ в присутствии Пирацетама, Зорекса и Унитиола и рассчитать новый ферментативный параметр -длину вектора, характеризующего интенсивность активации фермента и отражающего суммарную эффективность функционирования биокатализатора.

Теоретическая и практическая значимость работы

Работа носит фундаментальный характер и направлена на изучение молекулярно-кинетического поведения алкогольдегидрогеназы.

Полученные данные в рамках разработанного в данной работе многоэтапного научно-методического подхода расширяют и развивают теоретические представления об эффективности регулирования биокатализа в присутствии различных добавок.

Разработанная схема изучения типа регулирования (активации или ингибирования) АДГ для фармакологических препаратов (Пирацетама, Зорекса и Унитиола), направленная на поиск оптимальных условий течения ферментативной реакции, может служить моделью для изучения других фармпрепаратов, действующих на фермент утилизации этанола -алкогольдегидрогеназу - с целью устранения последствий интоксикации . организма.

Часть полученных данных и сделанные выводы использованы при выполнении проекта № 2.1.1/1897 «Исследование взаимосвязи структурно-динамических свойств ферментов с их функциональной активностью и разработка новых биокатализаторов на основе иммобилизованных окислительно-восстановительных ферментов для биомедицинской и пищевой промышленности», выполняемого по аналитической ведомственной целевой программе "Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2011 годы)". (Заказчик проекта — Министерство образования и науки Российской федерации, Федеральное агентство по образованию).

Научные результаты, выносимые на защиту

1. Максимальная субстратная специфичность выделенной и очищенной из пекарских дрожжей алкогольдегидрогеназы среди спиртов различного строения наблюдается к этиловому спирту. Рассчитаны значения важнейших ферментативных параметров биокатализатора (Кш, Ушах и

Ккат). Выявлена оптимальная концентрация специфичного субстрата -этанола, равная 1,5-10"~М.

2. Разработанный многоэтапный научно-методический подход по изучению каталитической активности алкогольдегидрогеназы позволил установить, что фармпрепарат Пирацетам как активатор алкогольдегидрогеназы обладает большей эффективностью в сравнении с Зорексом и Унитиолом.

3. Пирацетам, Зорекс и Унитиол по разному активируют алкогольдегидрогеназу, а именно в случае Пирацетама — двухпараметрически рассогласованный тип активации (lía-тип, Крупянко В.И., 1994), для Зорекса и Унитиола - двухпараметрически согласованный тип активации (la-тип, Крупянко В.И., 1994) фермента.

4. Расчет дополнительного ферментативного параметра — значения • длины вектора на основе векторного построения геометрического «портрета» алкогольдегидрогеназной реакции подтвердил наибольшую эффективность фармпрепарата Пирацетама в сравнении с Зорексом и Унитиолом.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Полученные результаты соответствуют пункту 4 паспорта специальности 03.01.04 «Биохимия (биологические науки)».

Апробация и реализация результатов диссертации

Основные положения и выводы диссертации апробированы в выступлениях на научных конференциях. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на V и VII научных конференциях аспирантов и студентов химического факультета (Тверской государственный университет, Тверь, 2006 и 2008); на XVI и XVII Региональных Каргинских чтениях «Физика, химия и новые технологии» (Тверской государственный университет, Тверь, 2009 и 2010); на Международной конференции «Состояние воды в биологических и модельных системах» (Тверская государственная медицинская академия,

Тверь, 2007); Всероссийской научной школе для молодежи «Приборное и научно-методическое обеспечение исследований и разработок в области каталитического превращения бифункциональных органических соединений» (Тверская государственная сельскохозяйственная академия, Тверь, 2010), а также на научных семинарах кафедры физико-химической экспертизы биоорганических соединений ТвГУ и при выполнении дипломных работ, в которых соискатель был научным руководителем дипломников.

Полученные результаты по выявлению особенностей ферментативного поведения алкогольдегидрогеназы печени лошади и оптимизации метода выделения фермента из пекарских дрожжей используются в исследовательской работе и в учебном процессе на кафедре физико-химической экспертизы биоорганической экспертизы ТвГУ: в курсе лекций, при подготовке курсовых и дипломных работ студентов.

Публикации

Результаты исследования отражены в 9 публикациях, 3 из которых в рецензируемых научных журналах, включенных в перечень ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 182 источника, из которых 80 иностранных. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 68 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Золотарева, Наталья Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Выделена и очищена алкогольдегидрогеназа из пекарских дрожжей. Рассчитано содержание фермента, изучена субстратная специфичность и исследованы важнейшие ферментативные параметры биокатализатора. Выявлена максимальная субстратная специфичность алкогольдегидрогеназы дрожжевой к этанолу.

2. Разработан многоэтапный научно-методический подход по изучению каталитической активности алкогольдегидрогеназы в модельной ферментативной системе в присутствии регуляторов ферментативной активности:

• для системы контроля определены значения важнейших ферментативных параметров каталитической активности алкогольдегидрогеназы печени лошади: Km = (2,51 ± 0,17) -10"5 моль/л; Vmax = (3,51 ± 0,17) -10"5 опт.ед. /с; Ккат = (1,45 ± 0,17) -10"' с1. Найдено удовлетворител ьное соответствие ферментативных показателей алкогольдегидрогеназы печени лошади и алкогольдегидрогеназы пекарских дрожжей;

• введение Пирацетама ухудшает связывание фермента с субстратом (значения Km больше на 71 %, чем в системе контроля), но улучшает течение каталитической реакции (в 5,7 раз возрастает значение Vmax) при использовании 1-го и 2-го способов оценки активности биокатализатора. Наибольшее влияние на алкогольдегидрогеназу найдено для концентрации Пирацетама, составляющей 1,5-10"2М;

• наиболее эффективное течение ферментативного процесса наблюдается для концентрации никотинамидадениндинуклеотида равной 1,5Т0~2М;

• каталитическая активность алкогольдегидрогеназы возрастает в 2 раза при добавлении Зорекса в модельную систему, а в случае с Унитиолом найдено двукратное возрастание активности биокатализатора. Введение в ферментативную систему Зорекса и Унитиола на 16 — 20 % улучшает взаимодействие фермента (алкогольдегидрогеназы печени лошади) и субстрата (С2Н5ОН) в сравнении с системой контроля.

3. При введении в модельную ферментативную систему Пирацетама установлен тип активации - Па-тип (двухпараметрически рассогласованная активация). При использовании Зорекса и Унитиола алкогольдегидрогеназа активируется по 1а-типу (двухпараметрически согласованная активация).

4. Построена и проанализирована пространственная кривая течения кинетической реакции для алкогольдегидрогеназы, её геометрический «портрет», при добавлении в ферментативную систему Пирацетама, Зорекса и Унитиола. Установлено, что введение изученных фармпрепаратов в модельную систему с алкогольдегидрогеназой меняет не только интенсивность, но и тип и механизм изученной ферментативной реакции. Рассчитан дополнительный интегральный ферментативный параметр — длина вектора, показавший, что наиболее эффективным для активации алкогольдегидрогеназы является фармпрепарат Пирацетам.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Золотарева, Наталья Владимировна, 2011 год

1. Авилова Т.В., Егорова O.A., Новикова Т.В. Условия биосинтеза, выделение и свойства NAD-зависимой алкогольдегирогеназы // Биохимия. 2001. - Т.51, Вып. 10. - С. 1673-1681.

2. Авруцкий Г. Я., Нисс А. И. Фармакология ноотропов. — М.: Медицина, 2001.-С. 112-118.

3. Антропов В.К. Химия протеализа. М.: Наука. - 1999. - 321 с.

4. Артеменко А.И., Такунова И.В., Малеванный В.А. Справочное руководство по химии. М.: Высшая школа, 2003. - 367 с.

5. Ашмарина И.П. Алкогольдегидрогеназа млекопитающих объект молекулярной медицины.-М.: Медицина, 2003. - С. 145-178.

6. Ашмор П., Катализ и ингибирование химических реакций: пер. с англ. -М.: Наука, 1966-320 с.

7. Бардина JI. Р., Сатановская В. И., Пронько П. С. Системы обмена этанола и ацетальдегида печени коротко и долго спящих крыс //Пробл. соврем, наркологии: Респ. сб. науч. тр. / РСФСР. 2-й Моск. гос. мед. ин-т. -М., 1991.-С. 105-107.

8. Березин И.В., Варфоломеев С.Д. Биокинетика. М.: Химия, 1979. -392 с.

9. Березин И.В., Клесов А.А Практический курс химической и ферментативной кинетики. М.: Мир, 1998. - 320 с.

10. Ю.Березин И.В., Мартинек К. Основы физической химии ферментативного катализа. М.: Высшая школа, 1977. - 432 с.

11. П.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. — 3-е изд. — М.: Медицина, 1998.-398 с.

12. Бернхард С. Структура и функция ферментов. — М.: Мир, 2003. 379 с.

13. Биохимическая термодинамика / под ред. М.Р. Джоунса. М.: Мир, 2001.-456 с.

14. М.Бонитенко Е.Ю., Бабаханян Р.В., Есаян A.M. Влияние ингибиторов алкогольдегидрогеназы на биохимические и гистологические изменения при экспериментальных отравлениях // Нефрология. 2003. - Т.7, № 3. -С. 60-66.

15. Бонитенко Е.Ю., Бонитенко Ю.Ю. Влияние совместного применения этанола и ингибитора алкогольдегидрогеназы на токсичность этиленгликоля // Мед.-биол. и соц.-психол. пробл. безопасности в чрезв. ситуациях. 2009. - № 4. - С. 42-47.

16. Бреслер С.Е. Ерусалимский Б.Л. Физика и химия макромолекул. М.: Наука, 2000. - С. 58-94.

17. Брухман Э.Э. Прикладная биохимия: пер. с нем. М.: Высшая школа, 1981.-С. 152-291.

18. Бурков Ю.В. Иванова H.H. Последствия интоксикации организма алкоголем. — М.: Медицина, 2008. С. 325.

19. Буров Ю.В., Ведерникова H.H. Нейрохимия и фармакология алкоголизма. М.: Медицина, 1995. - 237 с.

20. Буров Ю. В., Меткалова С. Е., Давыдова JI. Е. Поиск новых лекарственных средств для выведения из острой алкогольной интоксикации //Вопр. наркологии. 1994. - № 4. - С. 50-56.

21. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика: Практический курс.

22. М.: ФАИР ПРЕСС, 2007. - С. 13-27.

23. Варфоломеев С.Д., Зайцев C.B. Кинетические методы в биохимических исследованиях. — М.: Химия, 1982. 219 с.

24. Векуа М.Г. Кинетика мембранных транспортных ферментов. М.: Мир, 2004.-106 с.

25. Волькенштейн М.В. Физика ферментов. — М.: Наука, 2003. — 616 с.

26. Говорова Т.П. Физико-химические свойства алкогольдегидрогеназы // Биохимия. Якутск. - 2004. - Т.2. - С. 14-19.

27. Гребенщикова О.Г., Алексеева А.Е., Потапкина Т.А. и др. // Биохимия. -1994.-Т 59.-С. 509-515.

28. Груздева К. H., Высокогорский В. Е., Купор В. Г. Ферменты окисления этанола и его метаболитов при острой алкогольной интоксикации и иммобилизационном стрессе // Вопр. наркологии. 2001. - № 4. — С. 2-9.

29. Гуртовенко В.М. Влияние алкогольной интоксикации на активность ферментов окисления этанола и аргиназы печени крыс // Вопросы медицинской химии. 2008. - Т. 9, №4. — С. 51-55.

30. Давид Р. Введение в биофизику. М.: Мир, 2002. - 205 с.

31. Дженкс Б. Катализ в химии и энзимологии. М.: Высшая школа, 1972. -459 с.

32. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир. - 2005. - Т.З. - С. 167-189.

33. Досон М. Элиот Д. Справочник биохимика. М.: Мир, 1991. - 543 с.

34. Еремин А.Н., Метелица Д.И. Регуляция каталитической активности пероксидазы в смешанных мицеллах ПАВ // Биохимия. 2001. - Т.50. №7.-С. 102-108.

35. Жмаева Е.В., Бычков П.В., Шеховцева Т.Н. Ферментативный метод определения неорганических и органических ингибиторов алкольдегидрогеназы // Журнал аналитической химии. — 2006. Т. 55, №8. - С. 869-878.

36. Золотарева Н.В. Воздействие Пирацетама на каталитическую активность алкогольдегидрогеназы печени лошади // Тез. докл. XVI Региональные Каргинские чтения «Физика, химия и новые технологии». Тверь: Твер. гос. ун-т, 2009. - С.40.

37. Исакова О.П., Тарасевич Ю.Ю., Юзюк Ю.И. Обработка и визуализация данных физических экспериментов с помощью пакета Origin. М: Книжный дом «ЛИБКОМ», 2009. - С. 136.

38. Келети Т. Основы ферментативной кинетики. — М.: Мир, 1990. — 342 с.

39. Кершенгольц Б.М., Рогожин В.В. Влияние межсубъединичного взаимодействия в алкогольдегидрогеназе из печени лошади на кинетику окисления этанола // Биохимия. 1998. - Т. 44, №4. — С. 656—671.

40. Кершенгольц Б. М., Серкина Е. В. Некоторые методические подходы к изучению метаболизма этанола // Лабор. дело. — 1998. — № 2. С. 126.

41. Клесов A.A., Березин И.В. Ферментативный катализ. — М.: Изд-во МГУ, 2002. 264 с.

42. Кож Ф. Регуляция ферментативной активности. М.: Мир, 2004. -244 с.

43. Кожемякин Л.А., Зеленин К.Н., Бонитенко Ю.Ю. и др. Ингибиторы алкогольдегидрогеназы и их влияние на основные ферментативные системы // Вопросы мед. химии. 2003. - Т.36, Вып. 3. - С.61-79.

44. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия. М.: Дрофа, 2004. - 456 с.

45. Кононский А. И. Биохимия животных. 3 изд., перераб. и доп.— М.: Колос, 1992.-526 с.

46. Коноплицкая К. Л., Мышенко Т. П., Запашун Т. Е. Ферменты обмена этанола печени крыс с различной алкогольной мотивацией при острой алкоголизации //Укр. биох. ж. 1993. - Т. 65, № 4. - С. 33-39.

47. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. — М.: Химия, 1982.-234 с.

48. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1998.-267 с.

49. Кретович В. Л. Введение в энзимологию. М.: Мир, 1997 - 391 с.

50. Крупянко В.И. Векторный метод представления ферментативных реакций. М.: Наука, 1999. - 154 с.

51. Курганов Б.И. Коферментная и регуляторная функции никотинамидадениндинуклеотидов, кинетический аспект // Коферменты. М.: Медицина, 2003. - С. 83-112.

52. Курганов Б.И. Физико-химические механизмы регуляции активности ферментов. М.: Мир, 2008. - 412 с.

53. Куценко A.C., Кузнецов Д.А., и др. Картирование активного центра алкогольдегидрогеназы низкомолекулярными лигандами // Биоорганическая химия. 2000. - Т.23, №3. - С. 17-183.

54. Кучеренко Н.Е. Биохимия. Киев: Высшая школа, 1988. - 297 с.

55. Лапина Г.П., Золотарева Н.В. Анализ данных ферментативной кинетикис использованием трехмерной kmv системы координат // Вестник ТвГУ. Сер. «Биология и экология». - 2010. - Вып. 17, №.16 - С.71-76.

56. Лапина Г.П., Золотарева Н.В. Пирацетам регулятор каталитической активности алкогольдегидрогеназы печени лошади // Вестник ТвГУ. Сер. Биология и экология. - 2009. - Вып. 11, №2. — С.56-62.

57. Лапина Г.П., Сметанникова Н.В. Регуляция активности алкогольдегидрогеназы печени лошади Пирацетамом // Тез. докл. I Международной конференции «Состояние воды в биологических имодельных системах», Тверская гос. мед. академия. — Тверь, 2007. — С.173-174.

58. Лапина Г.П. Элементы кинетики ферментативных реакций. — Тверь: Твер. гос. ун-т, 1998 64 с.

59. Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. - 260 с.

60. Лурье Ю. Ю. Справочник по аналитической химии — 6-е изд., перераб. и доп. М.: Химия, 1989. - 448 с.

61. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: в 2 Т. -М.: Мир, 1993. Т. 1. - 384 с.

62. Мецлер Д. Биохимия. М.: Высшая школа, 1997. - Т.2. - С. 136-214.

63. Мищенко И.Н., Узиенко А.Б., Ясников A.A., Михайловский C.B., Стрелко В.В. Алкогольдегидрогеназная реакция на углях // Украинский биохимический журнал. 2003. - Т.61, №5. - С. 99-109.

64. Мотавкин П.А. Охотин В.Е. Еременко П.С. и др. Локализация алкоголь- и альдегиддегидрогеназы в спинном и головном мозге человека // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 2004. - Т. 94, №11. -С. 32-38.

65. Островский Ю.М., Сатановская В.И., Садовник М.Н. Биологический компонент в генезисе алкоголизма. Минск: Наука и техника, 1986. - С. 293.

66. Петков В. Д. Фармакология ноотропов. М., 1989. - С. 20-25.

67. Полторак С.М., Чухрай Е.С. Физико-химические основы ферментативного катализа. М.: Высшая школа, 1971. — 234 с.

68. Попечителов Е.П., Старцев O.A. Аналитические исследования в медицине, биологии и энзимологии. М.: Высшая школа, 2007. - 279 с.

69. Практикум по биохимии / под ред. С.Е. Северина, Г.А. Соловьевой. -М.: Моск. гос. ун-т, 2007. 288 с.

70. Привалов П.Л. Энергетика структуры белковых молекул // Биофизика. -2003. Т.32, №3. - С. 98-113.

71. Пронько П. С., Кузьмич А. Б., Зиматкин С. М. Концентрация ацетальдегида в крови у интактных крыс при алкогольной интоксикации и действии ингибиторов альдегиддегидрогеназы // Вопр. наркологии. -1993. -№3.- С. 40-54.

72. Пустовалова Л.М. Практикум по биохимии. Ростов н/Д: Феникс, 1999. -167 с.

73. Рогожин В.В., Говорова Т.П. Очистка и некоторые свойства алкогольдегидрогеназы растений // Этанол и его метаболизм в высших организмах. Якутск, 1995.-С. 14-19.

74. Руденко Г. М. Клинические значения ноотропных препаратов. Симпозиум. -М.: Медицина, 1996. С. 71-78.

75. Сапожников Г.П., Лозитнова А.Б. Активность алкогольдегидрогеназ субклеточных фракций дрожжей, выращенных на глюкозе и гексадекане // Микробиология. 2004. - Т.47, №4. - С. 682-688.

76. Северин Е.С. Биохимия. 2-е изд., испр. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. -784 с.

77. Скоупс Р. Методы очистки белка. М.: Мир, 1985. - 213 с.

78. Сладков А.З. Таблицы буферных растворов // Заводск. лаб. 1997. Т. 35, №9.-С. 1146-1148.

79. Современные проблемы биокинетики / под ред. С.Д. Варфоломеева. -М.: Химия, 1987.-319 с.

80. Степанов В. М. Структура и функции белков. М.: Высшая школа, 1996.-321 с.

81. Судовцов В.Е. Исследование активности алкогольдегидрогеназы из цитоплазмы клеток некоторых дрожжей // Прикл. биохимия и микробиол. 1995. - Т.27, № 1. - С.61-67.

82. Уэбб Л. Ингибиторы ферментов и метаболизма. М.: Мир, 1998. -356 с.

83. Фершт С. Структура и механизм действия ферментов. М.: Мир, 2002. -389 с.

84. Филлипович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Дрофа, 2003. - 432 с.

85. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. М.: Мир, 1980 — 453 с.

86. Хазипов Н. 3., Аскарова А. Н., Тюрикова Р. П. Биохимия животных с основами физколлоидной химии. М.: Мир, 2010.-371 с.

87. Химическая энциклопедия. М.: Наука, 1995. — Т. 5 - 589 с.

88. Шеховцова Т.Н Ферменты: их использование в химическом анализе // Соросовский образовательный журнал. 2000. — Т. 6, №1. - С.44-48.

89. Шпикитер О. В. Методы исследования биополимеров с помощью аналитической ультрацентрифуги // Современные методы в биохимии. -М.: Химия, 1994. С 203-224.

90. Щорс Е.С., Либинзон Р.Е. Биохимические аспекты алкоголизма // Химико-фармацевтический журнал. 1978. - №7. - С. 3—13.

91. Элиот В., Элиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М.: МАИК «Наука/Интерериодика», 2005.-445 с.

92. Янг И., Жоу X. Влияние ионов цинка на конформационную стабильность дрожжевой АДГ // Биохимия. — 2001. Вып. 1. — С. 61-70.

93. Яцимирский К.Б. Кинетические методы анализа. — 2-е изд. М.: Химия, 2005. - 200 с.

94. Agarwal D. P., Harada S., Goedde Н. W. Role of alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase isozymes //Alcohol.: Clin, and Exp. Res. — 1981. -Vol. 5,№ l.-P. 12-16.

95. Andersson P., Kvassman J., Oldn B. Synergism coenyme and alcohol binding to liver alcohol dehydrogenase // Eur. J. biochem. 1994. - Vol. 12. -P.-482.

96. Ashmarin I.P., Danilova R.A., Obukhova M.F., Moskvitina T.A., Prosorovsky V.N. // FEBS Lett. 2003. - Vol. 486. - P. 49-51.

97. Ashmarin I.P., Pshezhetsky A.V., Fedorova 1.М., Benzi G., Pastoris O., Villa R. F., et al. // Biochem. Pharmacol. 2004. - Vol. 34, № 9. - P. 14771483.

98. Bergmeyer H. U. Methoden der enzymatische analyse in enzymology and related areas of molecular biology. 1989. - Vol. 1 - P. 45.

99. Billardon M. et al. // J. Intern. Medecine. 1997. - Vol. 257, Suppl. P. 115-118.

100. Bonnichsen R. K., Wassen A.M. Crystalline alcohol dehydrogenase from horse liver. // Arch. Biochem. Biophys. 1984. - Vol. 18. - P. 361.

101. Boyer P., Lardy H. Myrback K. The Ensymes. New-York-London: Akademie Press. - 1983. - Vol. 11. - P.103.

102. Buhler R., Hess M., Wartburg Y.P. Immunohistochemical localization of human liver alcohol degydrogenase in liver tissue cultured fibroplasts and Hela cells. // Amer. J. Path. 2003. - Vol. 108. - P. 89-99.

103. Cheng Li-Yao FEBS Lett. 2004. - Vol. 300. - P. 251-253.

104. Cheung C., Smith C.K., Hoog J.-O., Hotchkiss S.A.M. et. al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - Vol. 261. - P. 100-107.

105. Coleman P.L., Weiner H. Simultaneous binding of competive ligands to horse liver alcohol dehydrogenase // Biochem. 1989. - Vol. 12. - P. 1705— 1709.

106. Coles B., Beale D., Miller D., Lay J., Kadlubar F., Aitken A., Ketterer B. et. al. // Chemico-Biological Interactions. 1998. - Vol. 64. - P. 181-192.

107. Consalvi V., MDrdh G., Vallee B.L. // Biochem. biophys. res. commun. -2002.-Vol. 139.-P. 1009-1016.

108. Creigliton D. J., Flajdu J., Mooser G., Sigman D. S. Model dehydrogenase reactions // J. Amer. Chem. 2004. - Vol. 95 - P. 6855-6867.

109. Dawidek-Pietryka K., Szozepaniak S., Dudka J., Mazur M. // Arch. Toxicol. 1998. - Vol. 72. - P. 604-607.

110. Drdh G., Vallee B. Biochemistry, 1996. Vol. 25. - P. 7279-7282.

111. Dworschack R.T., Plapp B.V. Kinetics of native and activated isozymes of horse liver alcohol dehydrogenase // Biochemistry. 1997. - Vol. 17 - P. 111116.

112. Eklund H., Branden C.I. Biological macromolecules and assemblies. New York, 1987.-P. 73-143.

113. Eklund H., Branden C. Structural differences between apo- and holoenzyme of horse liver alcohol dehydrogenase // J. Biol. Chem. 1998. -Vol. 254.-P. 3458.

114. Evans S.A., Shore J.D. The role of zinc-bound water in liver alcohol dehydrogenase // J.Biol. Chem. 1980. -Vol. 255. - P. 1509.

115. Farres J., Moreno A., Crosas B., Peralba J.M., Allali-Hassani A., Hjelmqvist L., Jornvall H., Pares X. Structure of enzymes // Eur. J. Biochem.1994. Vol. 224(2). - P. 549-557.

116. Forsht A. Enzyme structure and mechanism. — London: Academic Press,1995.-P. 27-47.

117. Frey W.A., Vallee B.L. Human liver alcohol dehydrogenase an enzyme essential to the metabolism of digitalis // Biochemical and biphysical research communications. - 1979. - Vol. 91(4). - P. 1543-1548.

118. Goldberg L., Rudberg U. Inhibition of ethanol metabolism in vivo by administrator of pyrasole // Biochem. Pharmacol. — 2004. Vol.18. -P. 1749-1762.

119. Goldstein B.M., Li H., Jones J.P., Bell J.E., Zeidler J., Pankiewiez K.W., Watanabe K.A. et. al. // J. Med. Chem. Vol. 37. - P. 392-399.129:Gough W.H., VanOoteghem S., Sint T.,Kedishvili N. // J. Biol. Chem. -2001. Vol. 273.-P. 1978-1985.

120. Greens R. W., MeKay R. H. Behavior of horse liver alcohol dehydrogenase in guanidine hydrochloride solution // J. Biol. Chem. 1969. Vol. 244. - P. 5034-5043.

121. Haselbeck R., Duester G. Developmental dynamics alcohol degydrogenase.- 1998. Vol. 213. - P. 114-120.

122. Hayes J., Velick S. Yeast alcohol degydrogenase. Molecular weight,coenzyme binding and reaction equilibrium. // J. Biol. Chem. 1994. - V. 207.-P. 225-244.

123. Hurley T.D., Bosron W.F., Stone C.L. //J. Mol. Biol. 1994. - Vol. 239(3). -P. 415-429.

124. Irwin A. J., Jones J. B. Regiospecific and enantioselective horse liver alcohol dehydrogenase catalyzed oxidations of some hydroxycyclopentanes // J. Amer. Chem. Soc, 1999. Vol. 98. - P. 1625-1630.

125. Irwin A. J., Jones J. B. Stereoselective horse liver alcohol dehydrogenase catalyzed oxidoreductions. // J. Amer. Chem. Soc. 1998. — Vol. 98. - P. 8476—8482.

126. Jomvall H. Horse liver alcohol dehudrogenase. On the primary structure of the isozymes // Eur. J. biochem. 1998. -Vol. 16. - P.25-32.

127. Jornvall H., Hempel J., Bahr-Lindstrom H., Hoog J.O., Vallee B.L. // Alcohol Alcohol. 1987. - Suppl.l. - P. 13-23.

128. Jornvall H., Hoog J.O., Persson B., Pares X. Pharmacogenetics of the alcohol dehydrogenase system // Pharmacology. 2000. - Vol. 61, № 3 - P. 91-184.

129. Kedishvili N., Gough W.H., Davis W., Parsons S., Li T.-K., Bosron W.F. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - Vol. 249. - P. 191-196.

130. Kemper R.A., Elfarra A.A., Myers S.R. // Drug Metab. Dispos. 2001. -Vol. 26.-P. 849-914.

131. Keung W.M. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Vol. 174. - P. 701-707.

132. Krebs H. A., Perkins J. R. The physiological role of liver alcohol dehydrogenase // biochem. J. 1970. -Vol. 118. - P. 630-644.

133. Langeland B.T., McKinley-McKee J.S. // Archiv. Biochem. Biophys. -1997. Vol. 308. - P. 367-373.

134. Lehmann J. // Biochem. 1997. - Bd.272. - P. 95.

135. Li T.-K., Bosron W.F. et. al. // Annals New York Academy Sci. 1998. -Vol. 492.-P. 3-15.

136. Lowe J. N., Ingraham L. L. An introduction to biochemical reactions mechanisms. New Jersey, 1974. - P. 345-386.

137. Mezey E., Potter J. J. Rat liver alcohol dehydrogenase activity // Endocrinolol. 1979. - Vol. 104. - P. 1667-1673.

138. Miwa K., Okuda H., Ogura K., Watabe T. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - Vol. 142. - P. 993-998.

139. Ostrovskaja R. U., Hoffmann W., Molodawkin G. M. // Dr. Pharmazie. -1993.-Vol. 38.-P. 251-253.

140. Page R.A., Kitson K.E., Hardman M.J. // Biochem. 1991. - Vol. 278. - P. 659-665.

141. Park D.H., Plapp B.V. Interconversion of E and S Isoenzymes of horse liver alcohol dehydrogenase // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 11. - P. 55275533.

142. Plane R.A., Theorell H. et. al. // Acta Chem. Scand. 2001. - Vol. 1 5. - p^ 1866-1871.

143. Plapp B.V., Green D.W., Sun H.W., Park D.H. Substrate sheciflcity o^alcohol dehydrogenases // Adv. Exp. Med. Biol. 1993. -Vol. 328. - P.391.400.

144. Potapov A. S. Synthesis of mixed-ligand copper(II) complexes containin.<^-bis(pyrazol-l-yl)methane ligands / A. S. Potapov, A. I. Khlebnikov /y Polyhedron. 2006. - Vol. 25, Is. 14. - P. 2683-2690.

145. Potter J. J., MacDougald O. A., Mezey E. Regulation of rat alcohox dehydrogenase // Arch, biochem. biophys. 1995. - Vol. 321, № 2. — p.335.

146. Rasherd N., Rabin B. Inhibition of yeast alcohol dehydrogenase alkylating agents // Eur. J. Biochem. 1995. - Vol. 50. - P. 475-481.

147. Raskin N.H. Alcogol dehydrogenase in brain a toxicologic role // Ajtltx N.Y. Acad. Sci. 2005. - Vol. 215. - P. 49-53.

148. Reid M. F., Fewson C.A. Molecular characterization of microbial alcotiQ>j dehydrogenases // Crit. Rev. Microbiol. 1994. - Vol. 20. - P. 13-56.

149. Roglev M. // Med. Biol. Inf. 2001. - Vol. 3. - P. 15-17.

150. Sachan D. S., Cha Y. S. Acetylcarnitine inhibits alcohol dehydrogenase // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. - Vol. 203, № 3. - P. 1496-1501 .

151. Satre M.A., Zgombic-Knight M., Duester G. The Complete structure human class IV alcohol dehydrogenase (retinol dehydrogenase) determined from the ADH gene // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269, № 22. - p. 1560g 15612.

152. Schindler J.F., Berst K.B., Plapp B.V. // Med. Chem. 1998. - Vol. 41 ^ P. 1696-1700.

153. Scopes R. K. An iron-activated alcohol dehydrogenase // FEBS Letters 1983. Vol. 156. - P. 303-306.

154. Smith M. // Biochem. soc. transactions. 1999. - Vol. 16. - P. 227-230.

155. Spirm A.S. On macromolecular structure of native high-polyme^ribonucleic acid in solution // Journal of Molecular Biology. 1960. - Vol. 2.1. P. 431-446.

156. Svensson S., Lundsjo A., Cronholm T., Hoog J.-O. // FEBS Letters. 199 <5* -Vol. 394.-P. 217-220.

157. Sytkowski A.I. Coenzyme Binding, and Zinc and Cobalt Exchange highly purified yeast alcohol dehydrogenaze // Arch. Biochem. Biophys. 2006.-Vol. 184,No. 17.-P. 505-510.

158. Theorell H., McKinley McKee J. S. // Acta chem scand. 1961. - Vol. 1 -P. 1811-1833.

159. Tompson J.D., Higgins D.G., Gibson T.J. // Nucl. Acids Res. 1994. -V^ 22. -P. 4673-4680.

160. Vallee B. L. Zinc in horse liver alcohol dehudrogenase // J. Biol. Cher^-^ 1957. Vol. 226. - P. 185-195.

161. Vallee B.L., Sellin S., Holmquist B., Mannervik B. // Biochemistry. --Vol. 30.-P. 2514-2518.

162. Wallenfels K., Summ H.D. // Klin, wochshr. 1987. - Bd. 35. - P. 849.

163. Wallenfels. K., Sund H. // Biochem. 2004. - Bd. 329. - P.48.

164. White, A.M. Alcohol, memory blackouts, and the brain // Alcohol Researx^j^ & Health. 1999. - Vol. 27(2) - P. 186-196.

165. Witter A. //Acta Chem. Scand. 1990. - Vol. 14. - P. 1717-1725.

166. WyHie M. G., Paciorec P. M., Waterfall J. F. // Biochem. Pharmacol^ 1981.-Vol. 30.-P. 1605-1612.

167. Xie P., Parsons S.H, Speckhard D.C., Bosron W.F., Hurley T.D. et. al. // Biol. Chem. USA. 2004. - Vol. 272, No. 30. - P. 18558-18563.

168. Yasunami M., Chen C.-S., Yoshida A. // Biochem. Genetics. 1990. — voj 28.-P. 591-599.

169. Yin S.J., Bosron W.F., Magnes L.J., Li T.K. Human liver dehydrogenase: Purification and kinetic characterization // Biochemistry 1984. Vol. 23, № 24. - P. 5847-5853.

170. Zgombic-Knight M., Ang H.L., Foglio M.H., Duester G. // J. Biol. Cherry USA. 1995. - Vol.270,No. 18.-P. 10868-10877.

171. Zhmaeva E.V., Bychkov P.V., Shekhovtsova T.N. Enzymatic determination of inorganic and organic inhibitors of alcohol dehydrogenases // Abstracts of vith international Symposium «Kinetics in analytical chemistry» -Romania. Bucharest, 2001. P. 145.

172. Zidoni E., Kreter M. L. // Arch. Biochem. Biophys, 2004. P. 161.Jpi\