Роль клеточных Toll-подобных рецепторов в формировании колонизационной резистентности урогенитального тракта при хламидиозе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Байракова, Александра Львовна

• Байракова, Александра Львовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Байракова, Александра Львовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 .Медицинское, эпидемиологическое и социальное значение урогенитальной хламидийной инфекции.

1.2.Этиологическая роль хламидий в возникновении и развитии воспалительных процессов женской половой сферы при УГХ.

1.3.Состояние местной антиинфекционной резистентности УГТ.

1.4.Роль То11-подобных рецепторов эпителия слизистых открытых полостей в развитии заболеваний.2.

1.4.1.Экспрессия TLR на клетках и в тканях человека.

1.4.2.Роль TLR в патогенезе инфекционных заболеваний и инициации местной антиинфекционной резистентности.

1.4.3.Количественная и функциональная оценка То11-подобных рецепторов.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

2.1 .Характеристика пациентов.

2.2.Клинико-лабораторные методы исследования.

2.2.1 .Микроскопическое исследование мазков со слизистых УГТ.

2.2.2 Микробиологические исследования.

2.2.3.Молекулярно-генетические методы определения экспрессии генов TLR-2 и TLR-4.

2.2.4.Иммунологические методы исследования.

2.2.4.1.Определение иммуноглобулинов в ЦС женщин.

2.2.4.2.0пределение цитокинов в ЦС женщин.

2.2.5.Статистическая обработка полученных данных.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1.Диагностическое и прогностическое значение оценки уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 при УГХ.

3.2.Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями микробиоценоза урогенитального тракта при УГХ у женщин.

3.3.Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями цитокинового профиля урогенитального тракта при УГХ у женщин.

3.4.Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями иммуноглобулинового профиля урогенитального тракта при

УГХ у женщин.

Глава 4. Обсуяадение полученных результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль клеточных Toll-подобных рецепторов в формировании колонизационной резистентности урогенитального тракта при хламидиозе»

Масштабность распространения сексуально-трансмиссивных инфекций продолжает оставаться актуальной во всем мире [65,86,98]. Инфекционно-воспалительные заболевания репродуктивной сферы, несмотря на достижения современной медицины, лидируют в структуре гинекологической заболеваемости и остаются традиционно значимыми на протяжении последних лет [6,23]. Урогенитальный хламидиоз (УГХ) занимает ведущее место в структуре инфекций передаваемых половым путём (ИППП). Возбудители хламидиоза - обли-гатные внутриклеточные паразиты - не относятся к патогенам, представляющим особую опасность, но на фоне растущей урбанизации, ухудшения социально-демографической и экологической ситуации инфицирование Chlamydia trachomatis способно приводить к формированию различных осложнений, оказывающих неблагоприятное влияние как на общее состояние здоровья, так и на репродуктивную функцию населения [30,70,97]. Клинические варианты течения хламидийной инфекции в наибольшей степени определяются выраженностью изменений, вызываемых возбудителем в месте своей локализации, и эффективностью колонизационной резистентности слизистых (способность микрофлоры данного биотопа и макроорганизма, кооперативно взаимодействуя, защищать экосистему от патогенной микрофлоры) [40,175].

Ключевым звеном в распознавании макроорганизмом патогенов являются образраспознающие рецепторы врожденной иммунной системы — Toll-like рецепторы (TLR), составляющие основу мембранных комплексов и экспресси-рующиеся на всех клеточных элементах, участвующие в формировании резистентности (включая колонизационную резистентность слизистых) [163,178,10,19,152]. TLR способны распознавать консервативные молекулярные структуры, распространенные среди микроорганизмов и отсутствующие у человека [134,159,160,161]. Защита на местном уровне развивается путем формирования типичной воспалительной реакции после взаимодействия патогенов с мембранными TLR, сопровождающейся активацией генов цитокинового каскада, ответственных за активацию фагоцитов и других иммунокомпетентных клеток, иммуноглобулинов, что определяет блокирование жизнедеятельности, дезинтеграцию и удаление инфекционного агента из организма [4,56,114,128]

Представляется актуальным изучение корреляции уровней экспрессии TLR на поверхности слизистых и иммунологических показателей в секретах урогенитального тракта (УГТ) женщин с различными вариантами клинического течения УГХ.

Цель исследования

Установление роли TLR-2 и TLR-4, микрофлоры, основных цитокинов и классов иммуноглобулинов в формировании колонизационной резистентности слизистых и в патогенезе урогенитального хламидиоза. Задачи исследования

1. Изучение взаимосвязи между экспрессией генов TLR-2 и TLR-4 в соскобном материале слизистых урогенитального тракта и проявлениями урогенитального хламидиоза у женщин.

2. Установление роли TLR-2 и TLR-4 в регуляции колонизационной резистет-ности влагалища, цервикального канала и уретры, стабилизирующей нормоф-лору и препятствующей инфицированию хламидиями и условно-патогенными микроорганизмами.

3. Оценка взаимозависимости уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 в соскобном материале слизистых урогенитального тракта и выраженностью цитокинового профиля секрета цервикального канала женщин с урогенитальной хламидийной инфекцией.

4. Исследование взаимосвязи уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 в соскобном материале слизистых урогенитального тракта и особенностей имму-ноглобулинового профиля секрета цервикального канала женщин с урогенитальной хламидийной инфекцией.

Научная новизна

Впервые установлена определяющая роль TLR-2 и TLR-4 слизистых нижних отделов урогенитального тракта в ответе макроорганизма на инфицирование хламидиями при урогенитальном хламидиозе. Уровни экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 служат критериями оценки выраженности хламидийной инфекции и наличия воспалительного процесса у больных, а при выздоровлении их снижение может свидетельствовать об эрадикации возбудителя. Нарушения в экспрессии генов приводят к хроническому течению урогенитального хламидиоза. Низкие уровни TLR-2 и TLR-4 могут указывать на возможность начала хронизации инфекционного процесса. TLR слизистых урогенитального тракта через цитокиновую систему запускают местную воспалительную реакцию, определяют уровни IgG, slgA и секреторного компонента (sc). Реакция эпителиальных поверхностей урогенитального тракта на условно-патогенную микрофлору и нормофлору зависит от экспрессии генов TLR-2 и TLR-4, что определяет колонизационную резистентность слизистых.

Практическая значимость

Разработаны и предложены лабораторные критерии диагностики урогенитального хламидиоза с установлением острой и хронической рецидивирующей формы заболевания, защищенные Патентом РФ «Способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза» №2327995. Зарегистрирован 27.06.2008 г.

Апробированный при проведении исследований метод определения уровня экспрессии генов TLR ПЦР в реальном времени, совмещенной с обратной транскрипцией с использованием специфических праймеров, может быть востребован при лабораторной верификации возбудителя при урогенитальном хламидиозе и явится дополнительным критерием диагностической и прогностической оценки течения урогенитального хламидиоза наряду с ИФА, уточняющим клинические формы и прогнозирующим исход заболевания. Метод воспроизводится в условиях стандартной клинической лаборатории. Внедрение результатов работы

Результаты исследования используются в научно-практической работе лаборатории клинической микробиологии и биотехнологии ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Впервые установлена диагностическая и прогностическая значимость оценки уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 при урогенитальном хламидиозе у женщин. Воспалительная реакция и реакция слизистых урогенитального тракта на условно-патогенную микрофлору и нормофлору, колонизационная резистентность координируются TLR-2 и TLR-4.

2. Передача активационных сигналов от TLR-2 и TLR-4 на клетки урогенитального тракта может опосредоваться местной цитокиновой системой.

3. То11-подобные рецепторы слизистых урогенитального тракта могут определять местный иммуноглобулиновый статус.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Байракова, Александра Львовна

Выводы

1. Впервые установлено, что оценка уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 в соскобном материале из цервикального канала и уретры больных урогени-тальной хламидийной инфекцией позволяет различить острую и хроническую форму течения хламидиоза, а также выявить начало хронизации инфекционного процесса.

2. При остром урогенитальном хламидиозе снижение уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 наряду с прямыми методами детекции возбудителя могут косвенно свидетельствовать об эрадикации хламидий.

3. Реакция TLR на условно-патогенную микрофлору и нормофлору определяет цитокиновый и иммуноглобулиновый профили и колонизационную резистентность слизистых урогенитального тракта.

4. При урогенитальном хламидиозе То11-подобные рецепторы запускают местную воспалительную реакцию, определяют уровни IgG, slgA и sc.

5. Цитокиновая система опосредует передачу активационных сигналов от TLR на клетки УГТ макроорганизма.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Байракова, Александра Львовна, 2010 год

1. Абелев Р.И. Основы иммунитета //Саровский образовательный журн.-1996.-№5.-С. 4-10.

2. Аковбян В.А. Азитромицин (сумамед), как препарат первого выбора при лечении урогенитального хламидиоза//ИППП.-2 002.-№ 1.-С. 20-40.

3. Ашмарин И.П., Воробьёв А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.-JI.-1962.

4. Абатуров А.Э. Молекулярные механизмы неспецифической защиты респираторного тракта: распознавание патоген-ассоциированных молекулярных структур //Журн. здоровье ребенка.-2006.-Т. 2, № 2.-С. 14-18.

5. Бакулев A.JI., Слесаренко Н.А. О клинической классификации болезни Рейтера //Рос. журн. кож. и вен. болезней.-2002.-№ 2.-С. 66-68.

6. Бакулев A.JL, Василенко JI.B., Оркин В.Ф., Степанов С.А. Воспалительные заболевания гениталий инфекционной природы у женщин. Учебное пособие.-М., Изд. Дрофа.-2008.

7. Барычева Л.Ю., Орехов К.В., Голубева М.В. Показатели иммунного статуса и иммунопатологические синдромы у детей с врожденной хламидийной инфекцией //Иммунология.-2004-№ 6.-С. 361-364.

8. Баткаев Э.А., Рюмин Д.В. Этиотропная терапия урогенитального хламидиоза //Клин, дерматол. и венерол. -2003.-№ З.-С. 13-19.

9. Белькова Ю.А. Инфекции передающиеся половым путем, при беременности: влияние на ее исходю Возможности профилактики и леченияю //Фарматека: международный медицинский журнал.-2006.-№ 14.-С. 59-66.

10. Бутов Ю.С., Васенова В.Ю., Новик Ф.К., Аверкиев В.Г. Терапия больных урогенитальным хламидиозом с хроническим осложненным течением //Гинекология.-2005.-Т. 7, № 2.-С. 124-126.

11. Васильев М.М. Николаева Н.В. Хламидийная инфекция. Проблема антибио-тикорезистентности //Вест, дермат. и венер.-2003.-№ З.-С. 18-21.

12. Вард М.Е. Современные данные об иммунологии хламидийной инфекции //ЗППП.-1996.-№ 6.-С. 3-6.

13. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. Руководство для врачей. /Под ред. В.И. Козлова, А.Ф. Пухнер.-М.:Триада-Х.-2003.

14. Воробьев А.А. (ред.) Полимеразная цепная реакция и ее применение для диагностики в дерматовенерологии. -М., Мед. информ. Агенство.-2004.

15. Воропаева Е. А., Афанасьев С. С., Алешкин В. А. И др. Способ оценки микробиоценоза влагалища.- Патент РФ № 2249821. Зарегистрирован 10.04.2005.

16. Воропаева Е.А., Афанасьев С.С., Алёшкин В.А. и др. Микрофлора биотопов влагалища, ротоглотки и кишечника женщин с угрозой прерывания беременности на ранних сроках //Вестн. РАМН.-2008.-№ 2.-С. 6-12.

17. Ганковская О.А., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. и др. Роль То11-подобных рецепторов и дефензинов в противомикробной защите урогенитального тракта женщин//Журн. микробиол.-2008.-№ 1.-С. 46-50.

18. Герасимова Н.М., Скидан Н.И. Новая схема применения сумамеда в терапии генитальной хламидийной инфекции у мужщин //Сиб. журн. дерматол. и венерол.-2001.-№ 1.-С. 66.

19. Гизингер О.А., Долгушин И.И. Система провоспалительных цитокинов в цервикальном секрете у женщин с урогенитальным хламидиозом //Цитокины и воспаление.-2006.-Т. 5, № 4.-С. 13-16.

20. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с анг.-М., Практика.-1998.

21. Гомберг М.А., Поздняков О.Л., Соловьев A.M. Урогенитальная хламидийная инфекция: лечить или не лечить? //Consilium medicum.-2006.-T. 8, № 4.-С. 2125.

22. Гранитов В.М. Хламидиозы.-М.: Медициская книга, Н.Новгород: Издательство НГМА.-2002.

23. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. Иллюстрированное руководство.-М.: Медицинская книга.-2007.

24. Долгушин И.И., Гизингер О.А., Телешева Л.Ф. Иммунологические и микробиологические аспекты действия низко-интенсивного лазера на факторы местного иммунитета репродуктивного тракта женщин с хламидийной инфекцией //Журн. микробиол.-2006.-№ 4.-С. 105-109.

25. Долгушин И.И., Андреева Ю.С. Роль нейтрофилов в регуляции микробиоценоза репродуктивного тракта женщин //Журн. микробиол.-2005.-№ 5.-С. 84-87.

26. Дубровская М.И., Мухина Ю.Г., Кафарская Л.И., Шумилов П.В. Современные представления о механизмах формирования иммунного ответа слизистой оболочки кишечника у детей раннего возраста //Журн. трудный пациент.-2006.-Т. 4, № 6.-С. 9-14.

27. Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемые половым путем.-М., Мед. лит-ра.-2003.

28. Иванов О.Л., Халдин А.А., Фадеев А.А., Изюмова И.М. К диагностике и терапии негонококковых уретритов авелоксом //Рос. журн. кож. и вен. болезней. -2002.-№ 6.-С. 65-67.

29. Иммунобиологические препараты, перспективы применения в инфектоло-гии. Г.Г. Онищенко, В.А. Алёшкин, С.С. Афанасьев, В.В. Поспелова (ред.).-М., ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ.-2002.

30. Иммунологические методы. Г. Фримеля (ред.).-М.-Медицина.-1987.

31. Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитация больных. С.С. Афанасьев, Г.Г. Онищенко, В.А. Алёшкин и др.(ред.).-М., Триада-Х.-2005.

32. Инфекции в акушерстве и гинекологии. Макаров О.В., Алёшкин В.А., Савченко Т.Н. (ред).-М., «МЕДпресс-информ».-2007.

33. Калинина Н.М., Сосюкин А.Е., Вологжанин Д.А. и др. Травма: воспаление и иммунитет //Цитокины и воспаление.- 2005.-Т. 4, № 1.-С. 28-35.

34. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета //Иммунология.-1995.-№ З.-С. 3044.

35. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз.-Санкт-Петербург, ООО «Нева-Люкс».-2001.

36. Клиническая лабораторная аналитика в пяти томах. Том IV. /Под ред. В.В. Меныпикова.-М., Агат-Мед.-2003.

37. Клинышкова Т.В. Локальный синтез иммунорегуляторных цитокинов у женщин с бесплодием на фоне восходящей хламидийной инфекции //Клин, дерматол. и венерол.-2005.-№ 4.-С. 89-92.

38. Ковальчук Л.В. Врожденный и приобретенный иммунитет: клинические проблемы.-XIII российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Москва, 3-7 апреля 2006г. Лекции для практикующих врачей.-2006.-М.-С. 103121.

39. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода А.С. и др. Роль рецепторов врожденного иммунитета в развитии острого инфаркта миокарда //Журн. микро-биол.-2008.-№ 4.-С. 64-98.

40. Ковальчук JI.B., Хорева М.В., Варивода А.С. и др. Рецепторы врожденного иммунитета: подходы к количественной и функциональной оценке Toll-подобных рецепторов человека //Иммунология.-2008.-Т. 29, № 4.-С. 223-227.

41. Коджаева М.Х., Подзолкова Н.М., Кулаков А.В. и др. Полиоксидоний в комплексной терапии рецидивирующих инфекций урогенитального тракта у женщин //Terra Medica nova. Медицинский журнал для врачей всех специально-стей.-2004.-Т. 4.-С. 14-18.

42. Краткая медицинская энциклопедия. Т. I. /Под. ред. В.И. Покровского.-М.: НПО «Медицинская энциклопедия», «Крон-Пресс».-1994.

43. Кудрявцева JI.B., Мисюрина О.Ю., Генерозов Э.В. и др. Клиника, диагностика и лечение хламидийной инфекции (пособие для врачей).-М.-2001.

44. Куляш Г.Ю. Персистирующая урогенитальная инфекция: возможности и нерешенные вопросы лабораторной и клинической диагностики //Ш11И 1.-2003 .-№ З.-С. 3-8.

45. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Новая иммунология- иммунология образрас-познающих рецепторов //Журн. известия РАН.-2006-Т. 33, № 5.-С. 517-529.

46. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Конфликт организма человека с его микрофлорой //Природа.-2007.-№ 7.-С. 1-8.

47. Лобзин Ю.В., Лященко Ю.И., Позняк А.Л. Хламидийные инфекции. Руководство для врачей.- СПб.: ООО «Издательство Фолиант».-2003.

48. Люк О'Нил. Врожденный иммунитет: система раннего оповещения //Журн. в мире науки.-2005.-№ 4.-С.32-39.

49. Мавров ГЛ., 4iHOB Г.П. Роль цитоюшв у патогенез! хламщюзу //Украшський журнал дерматологи, венерологи, косметологи.-2004.-№ 1.-С. 53-59.

50. Малова И.О. Современный взгляд на проблему урогенитального хламидиоза у девочек младшего возраста.-1-ый Сибирский конгресс акушеров-гине-кологов и дерматовенерологов. Материалы конгресса.-Новосибирск.-2006.-С. 34-37.

51. Малышев Н.А., Смагулов К.З., Леоньтева Н.И. Хламидиозы. Методические рекомендации (№13) для врачей-инфекционистов и врачей других специальностей. Москва 1999 г. 10с.

52. Майоров М.В. Урогенитальный хламидиоз в амбулаторной гинекологии //Журн. провизор.-2004.-№ 10.-С. 40-43.

53. Медведев Б.И., Казачкова Э.А., Казачков Е.Л. Особенности местного иммунитета при ассоциированных с хламидиями хронических воспалительных заболеваниях органов малого таза у женщин //Журн. микробиол.-2000.-№ 2.-С. 8992.

54. Метельская В.А., Алешкин В.А., Зверев В.В. и др. Современные методы лабораторной диагностики хламидиозов //Журн. микробиол.-2008.-№ 4.-С. 111117.63 .Методические рекомендации «Исследование иммуноглобулинов и других белков в секретах человека».-М.-1987.

55. Могилевец Т.Л. Клинико-иммунологическая характеристика урогенитальной хламидийной инфекции у женщин.-Автореф. дис. канд. мед. наук.-Санкт-Петербург.-2002.-23 с.

56. Молочков В.А., Зур Н.Н. Азитрал в комплексном лечении урогенитального хламидиоза у мужчин //Рос. журн. кож. и вен. болезней.-2004.-№ 5.-С. 53-55.

57. Молочков А.В. Место иммунотерапии в комплексном лечении хронической урогенитальной хламидийной инфекции //Журн. эффективная фармакотерапия в акушерстве и гинекологии.-2007.-№ 2.-С. 12-15.

58. Мортон Р.С., Мортон Р.С., Кингхорн Дж. Р. Урогеннитальная хламидийная инфекция: переоценка данных и гипотезы //И1И 111.-2000.- № 2.-С. 4-15.

59. Нагорнев В.А., Пигаревский В.П., Мальцева С.В. Шапероны и их роль в атеросклерозе //Вестн. РАМН.-2008.-№ 1.-С. 41-45.690 совершенствовании контроля за заболеваниями, передаваемыми половым путем. Методические рекомендации.-М.-1995.

60. Порсохонова Д.Ф., Курбанов Д.Д., Арифов С.С., Мусаходжаева Д.А. Клини-ко-иммунологическая характеристика урогенитальных и экстрагенитальных поражений при хламидийной и уреаплазменной инфекции //Цитокины и воспа-ление.-Т. 4, № 4.-2005.-С. 3-6.

61. Приказ МЗ РФ № 415 от 20.08.2003 г. «Гонококковая инфекция».

62. Приказ МЗ СССР № 936 от 12.07.85 г. «Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза».