Состав и свойства тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений Inonotus obliquus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Никитина, Светлана Александровна

• Никитина, Светлана Александровна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Никитина, Светлана Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

Список сокращений и условных обозначений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в сырье

1.2 Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в шроте чаги

1.3 Состав тритерпеноидных и стероидных соединений в меланине чаги

1.3.1 Характеристика меланина

1.3.2 Исследование химического состава меланина

1.4 Биологическая активность экстрактов, тритерпеноидных и стероидных соединений чаги 28 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДБ1

2.1 Объекты исследования

2.1.1 Способ получения водных извлечений чаги

2.1.2 Способ выделения меланина чаги

2.1.3 Способы получения петролейных экстрактов из сырья, шрота и меланина чаги

2.1.3.1 Получение петролейного экстракта из сырья и шрота чаги

2.1.3.2 Получение петролейного экстракта из меланина чаги

2.2 Пробоподготовка для проведения анализа тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им веществ в сырье, шроте и меланине чаги

2.3 Общие методы анализа

2.3.1 Определение содержания сухих веществ, золы и влажности

2.3.2 Определение растворимости меланинов

2.3.3 Определение антиоксидантной активности

2.3.4 Определение размеров частиц меланинов методом фотон-корреляционной спектроскопии

2.3.5 Исследование элементного состава рентгенофлуоресцентным методом

2.3.6 Определение тритерпеноидных и стероидных соединений спек-трофотометрическим методом с хлорным железом

2.3.7 Определение тритерпеноидных и стероидных соединений спек-трофотометрическим методом с ванилином

2.3.8 Тонкослойная хроматография липофильных веществ

2.3.9 Высокоэффективная жидкостная хроматография

2.3.10 Газожидкостная хроматография

2.3.11 Хромато-масс-спектрометричесий анализ

2.3.12 Определение общей токсичности

2.3.13 Определение противоопухолевой активности

2.3.14 Статистическая обработка результатов 53 ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

3.1 Извлечение тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих соединений из сырья и шрота чаги

3.2 Извлечение тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений из меланина чаги

3.3 Физико-химические свойства фракций меланина, полученных при

его разделении с помощью петролейного эфира

3.4 Определение качественного состава и содержания тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений в сырье, шроте и меланине

3.4.1 Сравнение содержания тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений в экстрактах, полученных из сырья, шрота и меланина

3.4.2 Определение качественного состава петролейных экстрактов, полученных из сырья, шрота и меланина чаги, методом тонкослойной хроматографии

3.4.3 Разделение петролейных экстрактов, полученных из сырья и

шрота, методом колоночной и тонкослойной хроматографии

3.4.4 Разделение петролейного экстракта, полученного из меланина

чаги, методом тонкослойной и колоночной хроматографии

3.4.5 Определение состава углеводородов сырья и меланина методами газожидкостной хроматографии и хромато-масс-спектрометрии

3.4.6 Определение состава тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений в сырье, шроте и меланине методом хромато-масс-спектрометрии

3.4.7 Сравнение состава тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений сырья, шрота и меланина 88 3.5 Физико-химические характеристики, биологическая активность и нормы качества Липофита чаги 90 ВЫВОДЫ 100 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 102 ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АОА - антиоксидантная активность

АСМ - атомно-силовая микроскопия

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГХ/МС - хромато-масс-спектрометрия

ГЖХ - газожидкостная хроматография

ФКС - фотон-корреляционная спектроскопия

ТСХ - тонкослойная хроматография

Г1ФК - полифенолоксикарбоновый комплекс

ГФ - Государственная фармакопея

ИК - инфракрасная спектроскопия

ЯМР - ядерный магнитный резонанс

ЭПР - электронный парамагнитный резонанс

ГРП - гиперразветвленный полимер

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

п - количество данных, взятых для статистической обработки

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Состав и свойства тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений Inonotus obliquus»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. В настоящее время на основе водных извлечений чаги (¡попоШб оЬПяииБ) фармацевтические предприятия выпускают препараты, терапевтическая эффективность которых обусловлена наличием хромогенного комплекса - меланина, обладающего широким спектром биологической активности.

Исследования последних десятилетий показывают, что в биологическую активность, проявляемую экстрактами и лекарственными средствами на основе чаги, значительный вклад вносят тритерпеноидные и стероидные соединения. Содержание их в грибе составляет не более 0,8% от сухих веществ и представлены они ланостеролом, его многочисленными производными, а также эргосте-ролом. Большинство данных соединений проявляет выраженные противоопухолевые, противовоспалительные, противовирусные и иммуномодулирующие свойства как при испытании индивидуальных соединений, так и суммарных водных и органических экстрактов.

В водном извлечении тритерпеноидные и стероидные соединения находятся в связанном или слабосвязанном с меланином состоянии. Однако до сих пор их состав и содержание в шроте и меланине чаги не исследованы, нет данных о вкладе этих соединений в биологическую активность меланина. Исследование данных соединений в сырье, шроте и меланине является актуальным для создания на их основе новых эффективных лекарственных средств, которые будут обладать высокой активностью и специфичностью действия. Кроме того, перспективно исследование распределения тритерпеиоидных и стероидных соединений в сырье, меланине и шроте чаги. Полученные данные позволят в дальнейшем разработать методики стандартизации лекарственных средств и биологически активных добавок, разработанных на основе чаги.

Цель работы. Разработать комплексный подход для определения количественного и качественного состава тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений в сырье, меланине и шроте чаги, выявить фракции, об-

ладающие противоопухолевой и антиоксидантной активностью, для разработки на их основе эффективных лекарственных средств.

Для достижения цели решались следующие задачи:

- разработать способы экстракции сырья, меланина и шрота чаги для максимального извлечения из них тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений;

- провести поэтапное разделение веществ полученных экстрактов для определения их состава;

- определить возможность использования фракций меланина чаги, полученных после экстракции меланина петролейпым эфиром;

- выявить наиболее перспективный экстракт, содержащий максимальное количество тритерпеноидных и стероидных соединений, разработать метод анализа в нем тритерпеноидных и стероидных соединений, определить его биологическую активность и на основании полученных результатов разработать нормы качества.

Научная новизна работы. Впервые разработанный комплексный подход к исследованию тритерпеноидных, стероидных и сопутствующих им соединений позволил: увеличить их выход, определить их содержание в сырье, шроте и меланине, а также уточнить их качественный состав.

В шроте впервые идентифицированы инотодиол, траметеноловая кислота, 22,25-эпоксиланост-8-ен-3,24-диол, ланостерол, 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль, ланоста-8-ен-3,22,24-триол, 25-метокси-21,22-цикло-ланоста-8-ен-3,21-диол, 3,22-дигидроксиланоста-8,23-диеп-25-пероксид, З-гидроксиланоста-8,24-диен-21,23-лактоп, 3,25-дигидрокси-лапоста-8-ен-20,24-олид, З-гидрокси-5-холен-24-овая кислота.

В меланине чаги впервые идентифицированы траметеноловая кислота, 22,25-эпоксилапост-8-ен-3,24-диол, 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль, лано-ста-8-ен-3,24,24-триол, 25-метокси-21,22-циклоланоста-8-ен-3,21 -диол, 3,22-дигидроксиланоста-8,23-диен-25-пероксид, 21,24-циклопенталаноста-3,21,25-триол-8-ен, ланоста-8,24-диен-3,11 -диол, 21,22-циклоланоста-8-ен-3,21-диол

ацетат, производное ланостерола с м.в. 441, 3-гидрокси-5-холен-24-овая кислота, 4-холестен-7-ол, холеста-5,24-диен-3-ол, холестерол, 24-метиленхолестерол (халинастерол), 5-холестан-З-ол; углеводороды: насыщенные - СиН12> С20Н12, С2зН)8- Сз]Ы64, СзД'Ьо, С35Н72, С37Н76, изоиреноидные - пристан и фитан, полициклические - холестан, эргостан, кампестан, стигмастан или ситостан, гопан, олеанан.

Впервые проведено разделение меланина чаги с использованием петро-лейного эфира с получением двух фракций, отличающихся друг от друга физико-химическими свойствами.

Практическая ценность работы. Впервые обоснована возможность использования фракций меланина, полученных после его экстракции петролей-ным эфиром, в качестве субстанций для дальнейшей разработки на их основе лекарственных средств с антиоксидаптными свойствами.

Разработан способ получения петролейного экстракта из шрота, который содержит до 85% тритерпепоидных и стероидных соединений (Липофит чаги), перспективный для разработки на его основе лекарственного средства, обладающего противоопухолевым действием.

Разработана методика количественного определения тритерпеноидных соединений в сырье чаги и лекарственных средствах на его основе, которая может быть использована для их стандартизации.

Разработаны нормы качества на субстанцию Липофит чаги.

Новизна способов получения меланина и фракций липофильных веществ из чаги подтверждена патентами на изобретения (Пат. №2522952, №2523414 и №2530636), и заявкой на изобретение (№2014126328 от 27.06.2014).

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований внедрены на кафедре Пищевой биотехнологии ФГБОУ ВПО «КНИТУ» в учебный процесс бакалавров, обучающихся по направлению «Биотехнология» - дисциплина «Физико-химические методы анализа биологически активных веществ», магистров, обучающихся по профилю «Бионанотехнология» - дисциплина «Бионанотехнология в фармации и медицине», и использованы в научных ис-

следованиях при выполнении специалистами и магистрами выпускных квалификационных работ.

На защиту выносятся: положения, сформулированные в разделах научная новизна работы и в выводах.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на: Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 2008 г., 2010 г., 2012 г., 2014 г.), IV Международной конференции «Экстракция органических соединений» (Воронеж, 2010 г.), VI Всероссийской научно-технической конференции «Интенсификация тепло- и массообменных процессов в химической технологии» (Казань, 2010 г.), I Всероссийском симпозиуме по поверхностно-активным веществам «От коллоидных систем к папохимии» (Казань, 2011 г.), III Международном симпозиуме «Клеточная сигнализация у растений» (Казань, 2011 г.), XIX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Волгоград, 2011 г.), II Всероссийской молодежной научной конференции «Химия и технология новых веществ и материалов» (Сыктывкар, 2012 г.), V Всероссийской конференции с международным участием «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2012 г.), Всероссийской конференции «Современные проблемы химической науки и образования» (Чебоксары, 2012 г.), XIII Международной научно-технической интернет-конференции «Актуальные проблемы лесного комплекса» (Брянск, 2012 г.), Всероссийской молодежной научной школе «Биоматериалы и нанобиоматериалы: актуальные проблемы и вопросы безопасности» (Казань, 2012 г.).

Публикации. Основные результаты работы изложены в 2 статьях в изданиях, рекомендованных ВАК, 15 публикациях по материалам конференций, 3 патентах на изобретение.

Личный вклад автора. Весь теоретический и экспериментальный материал, положенный в основу диссертационной работы, получен, обработан и проанализирован автором самостоятельно. Вклад автора заключается также в

непосредственном участии в постановке задач, формулировании выводов, написании и оформлении статей.

Часть результатов работы получена в совместных исследованиях, проведенных на оборудовании ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет»: газожидкостная хроматография (ГЖХ) и хромато-масс-спектрометрический (ГХ/МС) анализ углеводородов совместно с зав. лабораторией Носовой Ф.Ф., определение антиоксидантной активности (АОА) образцов в сотрудничестве с к.х.н. Зиятдиновой Г.К., определение противоопухолевой активности в НОЦ Фармацевтики совместно с Штырлиным Ю.Г. и Иксановой А.Г. В ЦКГ1 ФГБУН Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского НЦ РАН проведены ГХ/МС тритерпеноидных и стероидных соединений совместно с к.х.н. Ризвановым И.Х., фотон-корреляционная спектроскопия (ФКС) совместно с д.х.н. Захаровой Л.Я. В ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Минздрава России» проведен ВЭЖХ-анализ в сотрудничестве с д.х.н. Мельниковой Н.Б. В ЦКП ФГБОУ ВПО «Казанский национальный исследовательский технологический университет» определен элементный состав меланинов рентгепофлуоресцентным методом (РФА) совместно с д.х.н. Юсуповым Р.А, микроснимки меланина методом атомно-силовой микроскопии (АСМ) сделаны в сотрудничестве с к.х.н., зав. лабораторией Низамеевым И.Р. В ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» определена общая токсичность образцов в сотрудничестве с д.б.н. Тремасовым М.Я.

Автор выражает благодарность соавторам за консультации и помощь в проведении экспериментов, а также куратору доценту кафедры ПищБТ КПИТУ, к.х.п. Хабибрахмановой В.Р. за помощь в проведении исследовательской работы.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, трёх глав, выводов, библиографического списка, приложений. Работа изложена на 139 страницах машинописного текста, содержит 26 рисунков, 34 таблицы и 172 литературных источника.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технического комплекса России на 2007-2013 годы» по Госконтракту №01201252915 от 28.02.2012; Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по федеральной программе «УМНИК» по Госконтракту №11717р/17263 от 05.04.2013 и по Договору № 3108ГУ2/2014 от 05.08.2014, тема НИОКР «Разработка способа создания биологически активных добавок на основе меланина чаги».

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Состав тритерненоидных и стероидных соединений в сырье

На протяжении тысячелетий грибы ценились не только в качестве полноценной пищи, но и на их основе получали лекарственные средства. В большей степени это касается трутовых грибов, древние знания о пользе которых подтверждаются современными исследованиями. В традиционной медицине Китая, Кореи, Японии и других стран Юго-Восточной Азии и странах Западной Европы применяются более 100 видов, наиболее распространенные из них - рейши (Ganoderma lucidum (W. Curt.: Fr.) P. Karst), шиитаке (Lentinus edodes (Berk.) Singer), чага {Inonotus obliquus (Pers.: Fr.) Pilât). Они являются обширным и еще в значительной степени неиспользованным источником биологически активных соединений: тритерпеноидов, полисахаридов, фенольных веществ [1, 2]. Экстракты и настои из этих грибов применяются для лечения и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта и простудных заболеваний, различных форм рака, бронхиальной астмы, преодоления синдрома хронической усталости, проявляют иммуномодулирующий эффект, улучшают гормональный баланс, обладают антиоксидантными свойствами [2-4].

Чага с биологической точки зрения представляет собой бесплодную (стерильную) стадию развития березового гриба (Fungus betulimis), по ботанической классификации - трутовик скошенный - Inonotus obliquus (Rers.) PU. síerilis [5]. Чага и рейши относятся к грибам-разрушителям древесины, которые вызывают белую сердцевинную «гниль», при этом под действием ферментов гриба разлагаются все компоненты древесины [6]. Однако рейши встречается в основном на пнях и мертвой древесине, а чага развивается только на живых деревьях. Это вероятно влияет на процессы метаболизма этих грибов и определяет существенные различия в накоплении ими биологически активных соединений.

Тритерпеноидные соединения и в рейши, и в чаге представлены преимущественно производными тетрациклического тритерпеноида ланостерола, который синтезируется в ходе многоцентровой циклизации сквален-оксида [7].

На сегодняшний день в G. lucidum обнаружено более 100 тритерпенои-дов. Отличительной особенностью является то, что все они представляют собой высокоокисленные соединения, подавляющее большинство - ганодеровые и люцидиновые кислоты, присутствуют также ганодерали, ганодериолы и гано-дермовые кислоты (рис. 1.1). При этом выращивание гриба рейши в условиях искусственной культуры позволяет практически повторить состав соединений, накапливаемых грибом в природной среде [8-11].

Рисунок 1.1 - Ганодеровые кислоты из G. lucidum

Тритерпеноидные и стероидные соединения из чаги извлекали экстракцией различными органическими растворителями: гексаном, петролейным эфиром, хлороформом, метанолом, этанолом. Применение разнообразных экстра-гентов и последующее фракционирование полученных экстрактов позволило получить широкий спектр соединений. К настоящему времени из чаги выделены около 40 тритерпеноидных соединений ланостанового типа, некоторые из них показаны в таблице 1.1 [11-44]. Кроме того, в следовых количествах в чаге показаны пентациклические тритерпены лупанового ряда: бетулин, лупеол, лу-

пенон, и стероидные соединения - производные эргостерола, ситостерол, стиг-мастерол, ситостанол и холестерол [38-40].

Таблица 1.1- Тритерпеноидные и стероидные соединения из сырья чаги

Название Формула, Молек. вес Способ выделения Данные МС, ХМС Ссылки

1 2 3 4 5

3(3-гидрокси-ланоста-8,24- диен (ланостерол) С30Н50О, 426 Спиртовые, гексановые, хлороформные, диэтиловые экстракты чаги Е1-МБ т/г (ге1лт): М+ 426(35), 412(31), 411 (100), 394(17), 393(55), 273(7), 255(9), 241(13), 109(44), 69(66), 55(25), 41 (21) [12,14, 19, 43]

ЗР,22-дигидрокси-ланоста-8,24-диен(инотодиол) С30И50О2, 442 Спиртовые, гексановые, хлороформные, диэтиловые экстракты чаги ЕЬМБ ш/г(ге1Лт): М+ 442(35), 427(32), 409(21), 372(28), 357(50), 339(17), 273 (9), 255(11), 109(39), 99(100), 69(63), 55(34), 41(33) [13,14, 19, 43]

3[3-гидрокси-ланоста-8,24-диен-21-овая кислота (инонотовая кислота, траметеноловая кислота с30н4«о3, 456 Спиртовые, гексановые, хлороформные, диэтиловые экстракты чаги Е1-М8 т/г (геПт): М+ 456(56), 441 (68), 423(100), 395(12), 299(11), 281 (18), 273(6), 255(7), 109(20), 95(32), 69(34), 55(25), 41 (26) [14, 19, 43]

Зр-гидроланоста-8,24-диен-21-аль С30Н48О2, 444 Гексановые, спиртовые экстракты гриба т/г ( ге1. ¡т.): 440(96), 425(70), 407(65), 358(62), 299(37), 288(35), 281(40), 69(100) [16]

3(3,22-дигидроланоста-7,9(11),24-триен С30Н48О2, 444 Гексановый, спиртовые экстракты гриба т/г ( ге1. пИ.): 440(5), 407(2), 319(12), 248(52), 191(45), 109(41), 81(47), 69(100) [17]

зр- гидроксиланоста -8,24-диен-21,23-лактон С30М16О3, 454 Спиртовые экстракты чаги Е1-НЯ-М8 т/г: 454 [М+] [19]

21,24-циклопента-лаиоста-3[3,21,25-триол-8-ен С29Н47О3, 443 Спиртовые экстракты чаги Е1-МБ т/г [ге1Лт (%)]: 458(45) [М+1, 443(32), 425(100), 407(90), 389(13), 299(45), 281(28), 273(8), 255(7), 109(26), 95(24), 69(22), 55(14), 41(10) [21]

Продолжение таблицы 1.1.

1 2 3 4 5

2211,25-эпоксиланост-8-ен- ЗР,248-диол (инонотсуоксид А) С30Н50О3, 458 Хлороформные экстракты чаги ЕЬМБ т/г [геЫт (%)]: 458 (52) [М]+, 443 (75) [М Ме]+, 425 (бб), 407 (11),339 (17),314 (10),311 (10), 301 (11), 283 (12), 115 (100), 71 (68)- [26]

22Б,25-эпоксиланост-8-сн- Зр,248-диол (инонотсуоксид В) С30Н50О3, 458 Хлороформные экстракты чаги Е1МБ т!г (ге1. ¡пи): 458 (23) [М]+, 443 (24) [М Ме]+, 425 (19), 339 (3), 314 (3), 301 (2), 283 (2), 115 (100), 71 (44). [26]

ланоста-8-ен-3(3,2211,24 Я-триол (иноногсутриол Э) С30Н50О3, 458 Хлороформный экстракт чаги ЕЬМЭ т/7. (ге1. ¡т.): 458 (9) [М]+, 425 (3), 407 (3), 357 (75), 339 (18), 31 1 (13), 299 (8), 281 (7), 215 (6), 187 (8) [30]

ланоста-8-ен-Зр,24Я,248-триол (ипоиотсутриол Е) С30Ы50О3, 458 Хлороформный экстракт чаги Е1-МЭ т/г (ге1. ¡т.): 458 (9) [М]+, 407 (3),357 (75), 339 (18), 311 (13), 299 (8), 281 (7), 215 (6), 187 (8) [30]

3(3,25-дигидроксиланоста -8-ен-20,24-олид (инонотсулид А) СзоН.^О.!, 472 Хлороформный экстракт чаги ЕЬМБ: 472(62 ,М+), 457 (100), 439 (46), 411 (13), 393 (11), 314 (19), 299 (19). [27]

3(3,25-дигидроксиланоста -8-ен-20,24-олид (инонотсулид В) СзоН,80.4, 472 Хлороформный экстракт чаги ЕЬМБ: 472(68, М+), 457 (100), 439 (53). 411 (15), 393 (12), 314 (26), 299 (21). [27]

3(3,25-дигидроксилапоста -7,9(11)-диен-20,24-олид (инонотсулид С) СзоН,(б04, 470 Хлороформный экстракт чаги Е1-МБ: 470 (100, М+), 455 (17), 437 (9), 383 (4), 312 (64), 297 (22) [27]

3,7-дигидр'окси- 7(8—>9)абео-ланост-24-ен-8-он (спироинонотсу-оксодиол) С30Н50О3, 458 Хлороформный экстракт чаги РАВМЭ т/г (ге1. Ы.): 458 (28)[М]+, 443 (7), 440(37), 369(25), 327(20), 318(5), 305.24(100) [С20НззО2]+, 205.19(14) (С15Н25]+, 179(22), 161(39), 136(35) [32]

25-метокси-21,22-циклоланоста-8-сн-Зр,21а-диол (Фускопорианол А) С31Н52О3, 472 Петролейный экстракт чаги ЕЬМЭ т/г 472 (30), 457 (10), 440 (40), 425 (100), 407 (91 ), 314 ( 13), 299 (52), 281 (39), 274 (21), 109 (46), 73 (61) [24]

Зр,22а-дигидрокси-ланоста-8,23Е-диен-25-пероксид (Фускопорианол В) С30Н50О4, 474 Петролейный экстракт чаги ЕЬМБ т/г 474 (12), 441 (49), 425 (30), 407 (38), 311 (51), 109 (100) [24]

Продолжение таблицы 1.1.

1 2 3 4 5

3(3,22а,25-тригидрокси-ланоста-8,23Е-диен (Фускопорианол С) С30Н50О3, 458 Петролейный экстракт чаги Е1-МБ т/г 458 (27), 440 (34), 425 (68), 407 (73), 343 (100), 325 (89), 311 (39), 109(11) [24]

зр.пр- дигидроксиланоста-8,24-диен (инонотсудиол А) СзоН.^Ог, 440 Хлороформный экстракт чаги РАВМБ т/г (ге1. Ы.): 456 (22)[М]+, 441 (20), 438(27), 371(21), 341(58), 311(66), 261(36) [34]

Зр,22-дигидроксиланоста- 8,24-диен-11-он (инонотсуоксодиол) С30Н48О3, 456 Хлороформный экстракт чаги РАВМ8 т/г (ге1.1т.): 456 (4822)[М]+, 386(100), 369(10), 339(11), 290(17), 261(15), 235(35), 135(9) [34]

Эргостерол С28Н44О, 396 Спиртовые, гексановые экстракты чаги 396 (50), 381 (2), 378 (3), 363 (40), 337 (27), 143 (100), 81 (92), 67 (73), 55 (68). [38]

Эргостерол-пероксид 5а,8а-эпидиокси-22Е-эргоста-6,22-диен-Зр-ол СгвМ-ыОз. 428 Спиртовые экстракты чаги - [38]

Первые тритерпеноидные соединения в чаге были обнаружены польскими учеными Я-Б Ьиёшюгак и и. \Vrecino [12]. Они выделили 3|3-гидрокси-ланоста-8,24-диеп (ланостерол) и его производное 3(3,22-дигидрокси-ланоста-8,24-диен (инотодиол).

Максимальный выход тритерпеноидных и стероидных соединений из сырья чаги достигается при его экстракции диэтиловым эфиром. Полученный эфирный экстракт сконцентрирован в вакууме и обработан 5 % раствором едкой щелочи. Щелочной раствор, содержащий фенольные компоненты, удаляли, а в диэтиловом экстракте сохранялись тритерпены, количество которых в пересчете на ланостерол составляло от 0,35 до 0,8 % [41].

Экстракция чаги этанолом позволяет извлечь до 0,2 % стероидных и тритерпеноидных соединений. Сконцентрированные экстракты разделяли методом колоночной хроматографии на окиси алюминия [14], или на силикагеле [19-21, 42]. В качестве элюептов использовали петролейный эфир, бензол, эфир, смесь эфира и метанола (1:1) и метанол, что позволило выделить пять соединений в кристаллическом состоянии - ланостерол, инотодиол, эргостерол и два неиден-

тифицировапных соединения - производных ланостерола, а также две кислоты

- инонотовая (траметеноловая) и обликвиновая [14].

Разделение спиртового экстракта с использованием гексана, этилацетата, смеси гексан-этилацетат (25:1), и этанола позволило обнаружить три новых соединения 21,24-циклопепталаноста-Зр,21,25-триен, 3(3-гидроксиланоста-8,24-диен-21,23-лактон, Зр,22,25-тригидроксиланоста-8-ен [19-21]; а при использовании элюентов петролейный эфир - вода (1:1), этилацетаг и бутанол показаны 6 соединений - ланостерол, инотодиол, траметеноловая кислота, 3-гидроксиланоста-8,24-диен-21-аль, эргостерол и эргостерол-пероксид [42].

В работе Жуковича Е.Н. [43] сконцентрированный этаиольный экстракт проэкстрагирован эфиром и далее последовательно обработан насыщенным раствором и щелочи (0,5 и 5 %). Очищенный экстракт промыт водой,

высушен над безводным Ыа2804 и упарен в вакууме до выхода очищенной нефенольной фракции, содержащей преимущественно тетрациклические тритерпены, из которой в кристаллическом виде выделены ланостерол, инотодиол, эргостерол и траметеноловая кислота.

Экстракция сырья этанолом и дальнейшая обработка смесыо хлороформ

- вода (1:1), этилацетатом и бутанолом, позволила обнаружить в этилацетатной фракции 7 новых тритерпенов, дитерпен абиетанового типа, а также 10 тритерпеновых и 6 стероидных соединений, ранее показанных другими исследователями. Такой результат дало многократное разделение этилацетатного экстракт па колонке с силикагелем с применением элюентов: смеси петролейный эфир - ацетон, хлороформ - ацетон, хлороформ - метанол в различных соотношениях с возрастающей полярностью [36].

Экстракция чаги метанолом с последующим фракционированием экстракта с помощью гексана, дихлорметапа и этилацетата позволила получить 8 тритерпеновых и стероидных соединений - ланостерол, ино-тодиол, траметеноловую кислоту, 3-гидроксилапоста-8,24-диен-21-аль, 3,22,24-тригидроксиланоста-8,25-диен, ситостерол, эргостерол-пероксид, бетулин [34].

Использование ультразвука при экстракции сырья метанолом, с последующим разделением экстракта методом ВЭЖХ, показало наличие 0,23 % тритерпепоидных и стероидных соединений, включающих бетулин, эргостерол, холестерол, ланостерол, стигмастерол и ситостерол [40].

Хлороформ для экстракции чаги был использован в работах [26-33], с его помощью из сырья извлечено около 0,1% тритерпепоидных и стероидных соединений. После упаривания экстракта был получен темно-коричневый остаток. Последующее разделение этого остатка проведено с использованием колоночной хроматографии на силикагеле с системами хлороформ - этилацетат в различных соотношениях, жидкостной хроматографии со средним и высоким давлением. В результате в хлороформных экстрактах обнаружено около 20 соединений - производных ланостерола, из них впервые показаны 3,7-дигидрокси-7(8—>9)абео-ланоста-24-еп-8-он, 3(3,11 Р-дигидроксиланоста-8,24-диен, 3(3,22-дигидроксиланоста-8,24-диен-11-он, 22К,25-эпоксиланост-8-ен-Зр,248-диол, ланосга-8-ен-3(3,22Я,24К-триол, 3(3,25-дигидроксиланоста-8-ен-20,24-олид и их эпимеры.

Экстракция сырья гексаном, нагрев сконцентрированного экстракта с сухим эфиром, фракционирование с использованием 1 % раствора ИаОН и разделение на колонке с оксидом алюминия позволило выделить в чистом виде лишь два соединения - ланостерол и обликвол (инотодиол) [13].

При экстракции гриба гексаном и разделения экстракта с помощью колоночной хроматографии при использовании в качестве адсорбента оксида алюминия обнаружены ланостерол, инотодиол, траметеноловая кислота и 3(3-гидролапоста-8,24-диен-21-аль [16]. В другом опыте [17] растворитель из гек-сапового экстракта чаги был удален, остаток растворен в диэтиловом эфире и к нему добавлен 1 % раствор щелочи. Эфирная фракция разделена при помощи колоночной хроматографии с оксидом алюминия с получением нового соединения ланостапового типа - 3[3,22-дигидролапоста-7,9,24-триен.

Для извлечения из сырья чаги тршерпеноидных и стероидных соединений также применен петролейный эфир. Экстракцию проводили в

аппарате Сокслета, сконцентрированный экстракт разделяли методом колоночной хроматографии, в качестве элюентов использовали петролейный эфир и ацетон [23,24]. В результате извлечены 5 новых соединений - 3,22-дигидроксиланоста-8,24-диен-25-пероксид, 3,22,25-тригидроксиланоста-8,24-диен, 25-метокси-21,22-циклоланоста-8-ен-3,21 -диол, 3,22-дигидрокси-ланоста-8,23-диен-25-пероксид, 3,22,25-тригидрокси-ланоста-8,23-диен.

Измельченную чагу обрабатывали последовательно растворителями с возрастающей полярностью: петролейным эфиром, хлороформом, этилацетатом, ацетоном, этанолом и горячей водой. Далее собранные экстракты центрифугировали, концентрировали и подвергали лиофильной сушке [44]. В петролейпом экстракте, содержащем преимущественно тритерпены в количестве около 0,1 %, идентифицированы 4 новые соединения. В экстрактах, полученных с помощью хлороформа, этилацетата, ацетона и этанола, также были обнаружены тритерпеноидные соединения и вещества фенольной природы.

Примененные авторами вышеописанные способы выделения три-терпеноидных и стероидных соединений не позволили достичь их максимального выхода. Наибольший выход данных соединений наблюдается при применении в качестве экстрагента диэтилового эфира, а при экстракции сырья хлороформом или этанолом извлекается широкий спектр - около 20 тритерпеноидных и стероидных соединений. Однако в этих случаях при использовании полярных растворителей вместе с тритерпеноидными и стероидными соединениями извлекается большое количество фенольных веществ. Чем ниже полярность примененного растворителя, тем более селективно он извлекает липофильные вещества, в частности петролейный эфир преимущественно экстрагирует тритерпеноидные и стероидные соединения. Следовательно, актуальной задачей является поиск способов эффективного выделения этих соединений из чаги с помощью петролейного эфира.

Для идентификации индивидуальных тритерпеноидных и стероидных соединений применяются различные современные методы - ИК- и ЯМР-спектроскопии, рентгеноструктурный анализ. Для разделения исследуемых веществ в экстрактах чаще используют ВЭЖХ и ГЖХ с дальнейшим применением масс-спектрометрии. Метод масс-спектрометрии электронного удара является одним из наиболее используемых инструментальных методов исследования. Каждый тип тритерпеноидов имеет особенную фрагментацию, и как следствие, присущие ему характеристические ионы [45].

Разбиение молекулы ланостерола под действием электронного удара происходит с появлением следующих ионов (рис. 1.2), [20-22]: М+ (m/z 426), [М-15]+ (m/z 411), [М-18]+ (m/z 408), [M-33]+(m/z 393), расщепление кольца D -m/z 255 и 273; m/z 109 - образование фрагмента с двойной связью после расщепления боковой цепи; m/z 69 - изопентенильная группировка в боковой цепи. Для инотодиола специфичным является появление пика с m/z 99, который обусловлен наличием гидроксильной группы в боковой цепи. Пик с m/z 95 свидетельствует о наличии карбоксильной группы в боковой цепи, например для траметеноловой кислоты. В целом для ланостанового скелета характерно

Рисунок 1.2 - Пути фрагментации ланостерола и его производных [20-22,

наличие пиков с m/z 426, 325, 311, 299, 281 и 109 [46-49].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Никитина, Светлана Александровна, 2015 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Wasser, P.S. Current findings, future trends, and unsolved problems in studies of medicinal mushrooms / P.S. Wasser // Appl. Microbiol. Biotechnol. -2011.-V. 89,- P. 1323-1332.

2. Fan, L. Advances in Mushroom Research / L. Fan, H. Pan, A.T. Soccol, A. Pandey, C.R. Soccol // Food Technol. Biotechnol. - 2006. - V. 44, № 3. - P. 303311.

3. Lindequist, U. 'Hie pharmacological potential of mushrooms / U. Lindequist, T.H.J. Niedermeycr, W.D. Julich // eCAM. - 2005. - V. 2, № 3. - P. 285-299.

4. De Silva, D.D. Medicinal mushrooms in supportive cancer therapies: an approach to anticancer effects and putative mechanisms of action / D.D. De Silva, S. Rapior, F. Fons, A.I I. Bahkali, IC.D. Hyde // Fungal Diversity. - 2012. - V. 55. -P. 1-35.

5. Никитина, С.А. Роль базидиомицетов в биоценозе леса и биологически активные вещества, продуцируемые ими / С.А. I-Тикитина, А.И. Носов, В.Р. Ха-бибрахманова, М.А. Сысоева // Актуальные проблемы лесного комплекса: тез. докл. - Брянск: Б1 'ИТА, 2012. - С. 165 - 167.

6. Бондарцева, М.А. Определитель грибов СССР: Порядок афиллофоро-вые / М.А. Бондарцева, Э.Х. Пармасто. - Вып. 1. - Л.: Наука, 1986. - 192 с.

7. Низковская, О.П. К биологии возбудителя чаги на березе / О.П. Низ-ковская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959,- С. 32-35.

8. Племенков, В.В. Введение в химию природных соединений / В.В. Пле-менков. - Казань, 2001. - 376 с.

9. Shiao, M.S. Natural products of the medicinal fungus Ganoderma lucidum: occurrence, biological activities, and pharmacological functions / M.S. Shiao // The Chemical Record. - 2003. - V. 3. - P. 172-180.

10. Gao, J.M. New biologically active metabolites from Chinese higher fungi / J.M. Gao // Current Organic Chemistry. - 2006. - V. 10. - P. 849-871.

11. Wang, F. Highly oxygenated lanostane triterpenoids from the fungus Ganoderma applanatum / F. Wang, J.K. Liu // Chem. Pharm. Bull. - 2008. - V. 56, №7. -P. 1035-1037.

12. Rios, J.L. Lanostanoids from fungi: a group of potential anticancer compounds / J.L. Rios? 1. Anduujar, M.C. Recio, R.M. Giner // J. Nat. Prod. - 2012. - V. 75.-P. 2016-2044.

13. Ludwiczak, R.S. Forschungen über die chemischen Bestandteile des Inono-tus obliquus. V. Weitere Forschungen über die Struktur des Inotodiols / R.S. Ludwiczak, U. Wrecino // Rocz. Chem. - 1962. - № 36. - P. 497-502.

14. Kier, L.B. Triterpenes of Poria oblique / L.B. Kier // J. Pharm. Sei. - 1961. -V. 50, № 6.-P. 471-474.

15. Ловягина, L.B. О с1ероидных соединениях гриба чаги / E.B. Ловягина, А.Н. Шиврина // Биохимия. - 1962. - Т. 27, № 5. - С. 794-800.

16. Ловягина, L.B. Характеристика древоразрушающих грибов по содержанию в них стероидных соединении / Е.В. Ловягина, A.LI. Шиврина // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. -М.-Л., 1965.-С. 59-64.

17. Kahlos, К. 3ß-hydroxy-lanosta-8,24-dien-21-al,a new triterpene from Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen, M.V. Schantz // Planta Medica. - 1984. -№50.-P. 197-198.

18. Kahlos, K. 3ß,22-Dihydroxylanosta-7,9(l l),24-triene, a new minor compound from Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen // Planta Medica. - 1986. -№52.-P. 495-496.

19. Kahlos, K. Antitumor activity of triterpenes in Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen, L. Kangas // Planta Medica. - 1986. -№ 52. - P. 554.

20. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus. I. A new triterpene, 3ß-hydroxy-8,24-dien-lanosta-21,23-lactone from Sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Euras. J. Forest Res. - 2000. - V. 1. - P. 43-50.

21. Shin, Y. Chemical constituents oflnonotus obliquus. III. A new triterpene, 3(3,22,25-trihydroxy-lanosta-8-ene from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Int. J. of Med. Mush. - 2000. - V. 2, 1. 3. - P. 201-207.

22. Shin, Y. Chcmical constituents of Inonotus obliquus. II. A new triterpene, 21,24-cyclopentalanosta-3b,21,25-triene from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa//.!. Wood Science. - 2001V. 47, I. 4. - P. 313-316.

23. Shin, Y. Triterpenoids, steroids and a new sesquiterpen from Inonotus obliquus (Pers.: Fr.) Bond, et Sing. / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Int. J. of Med. Mush. - 2001. - V. 3. - P. 250.

24. Me, J. Triterpenoids from Fuscoporia oblique / J. Me, X. Feng, B. Zhao, Y. Lu // Chin. Chem. Letters. - 2000. - V. 1 1, № 1. - P. 45-58.

25. Me, J. Three new triterpenoids from Fuscoporia oblique/ J. Me, X. Feng, B. Zhao, Y. Lu Hi. Asian Nat. Prod. Research. - 2001. - V. 3.-P. 55-61.

26. Kim, E.J. A study on the mechanism by which the aqueous extract of Inonotus obliquus induces apoptosis and inhibits proliferation in FIT-29 human colon cancer cells / E.J. Kim, Y.J. Lee, H.K. Shim, J.FI. Yoon // J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. - 2006. - V. 35, № 5.-P. 516-523.

27. Nakata, T. Structure determination of inonotsuoxides A and B and in vivo anti-tumor promoting activity of inotodiol from the sclerotia of Inonotus obliquus / T. Nakata, S. Taji, T. Yamada // Bioorg. Med. Chem. - 2007. - V. 15, I. 1. - P. 257264.

28. Taji, S. Three new lanostane triterpenoids from Inonotus obliquus / S. Taji, T. Yamada, Y. In, S. Wada, Y. Usami, K. Sakuma, R. Tanaka // Helvetica Chimica Acta. - 2007. - V. 90. - P. 2047-2057.

29. Taji, S. Three new lanostane triterpenoids, Inonotsutriols A, B, and C from Inonotus obliquus / S. Taji, T. Yamada, R. Tanaka // Flelvetica Chimica Acta. - 2008. - V . 91.-P. 1513-1524.

30. Taji, S.Lanostane-type triterpenoids from the sclerotia oflnonotus obliquus possessing antitumor promoting activity / S. Taji, T. Yamada, S. Wada, FI. Tokuda, K. Sakuma // Eur. J. Med. Chem. - 2008. - V. 43. - P. 2373-2379.

31. Nakata, T. New lanostanc triterpenoids, inonotsutriols D and E from Inonotus Obliquus / T. Nakata, S. Taj'' ' • Yamada // Bulletin of Osaka University of Pharmaceutical Sciences. - 2009. - V. 3. - P. 53-64.

32. Zhong, X.Progress of research on Inonotus obliquus / X. Zhong, K. Ren, S. Lu, S.Yang, D. Sun//Chin. J. Integr. Med. - 2009. - V. 15, №2.-P. 156-160.

33. Handa, N. An unusial lanostane-type triterpenoid, spiroinonotsuoxodiol, and other triterpenoids from Inonotus obliquus / N. Handa, T. Yamada, R. Tanaka // Phytochemistry. - 2010. - V. 71. - P. 1 774-1779.

34. Handa, N. four new lanostane-type triterpenoids from Inonotus obliquus / N. Handa, T. Yamada, R. Tanaka // Phytochemistry Letters. - 2012. - V. 5. - P. 480™ 485.

35. Kim, Y.J. Chemical constituents from the sclerotia of Inonotus obliquus / Y.J. Kim, J. Park, B.S. Min, S.I I. Shin // J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. - 2011. -V. 54, № 2. - P. 287-294.

36. Zheng, W.Chemical diversity of biologically active metabolites in the sclerotia of Inonotus obliquus and submerged culture strategies for up-regulating their production / W. Zheng, K. Miao, Y. Liu, Y. Zhao, M. Zhang, S. Pan, S. Dai // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2010. - V. 87. - P. 1237-1254.

37. Liu, C. Chemical constituents from Inonotus obliquus and their biological acti-vities / C. Liu, C. Zhao, H.-H. Pan, J. Kang, X. Yu // J. Nat. Prod. - 2014. -V. 77, № l.-P. 35-41.

38. Song, F.Q. Progress on Understanding Anticancer Mechanisms of the Medicinal Mushroom: Inonotus Obliquus / F.Q. Song, Y. Liu, X.S. Kong, W. Chang, G. Song//Asian Pacific J. Cancer Prevention. - 2013. - V. 14.-P. 1571-1578.

39. Kahlos, K. Inonotus obliquus (Chaga Fungus): In vitro culture and the production of Inotodiol, sterols, and other secondary metabolites / K. Kahlos // Biotechnology in Agriculture and Forestry 26: Medicinal and aromatic plants VI. -1994.-P. 179-198.

40. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus IV. Triterpene and steroids from cultured mycelia / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Euras. J. Forest Res.-2001.-V. 2.-P. 27-30.

41. Gao, Y.Quantitative determination of steroids in the fruiting bodies and submerged-cultured mycelia of Inonotus obliquus / Y.Gao, FI. Xu, Z. Lu, Z. Xu // Chin. J. Chromatography. - 2009. - V. 29, № 6. - P. 745-749.

42. Жукович, E.H. К вопросу стандартизации препаратов «Чага настойка» и «Бефунгин» / Е.Н. Жукович, М.Ю. Семенова, J1.A. Шарикова // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, № 3. - С. 35-37.

43. Ma, L.Anti-inflammatory and anticancer activities of extracts and compounds from the mushroom Inonotus obliquus / L. Ma, FI. Chen, P. Dong, X. Lu // Food Chemistry. - 2013. - V. 139. - P. 503-508.

44. Жукович, Е.Н. Тетрациклические тритерпены чаги, произрастающей в России / Е.Н. Жукович, М.Ю. Семенова, JI.А. Шарикова, Т.Ф Прибыткова // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, № 9. - С. 28-29.

45. Zheng, W. Analysis of antioxidant metabolites by solvent extraction from sclerotia of Inonotus obliquus (Chaga) / W. Zheng, M. Zhang, Y. Zhao, K. Miao, S. Pan, F. Cao, Y. Dai // Phytochem. Anal. - 201 1. - V. 22. - P. 95-102.

46. Кузьменко, A.M.Изучение состава растительного лекарственного сбора методом газо-жидкостной хроматографии с хромато-масс-снектрометрическим ;ieiei<i ированием / A.FI. Кузьменко, Е.Б. Пашкова, А.В. Пирогов, Р.В. Разживин, В.10. Решетник // Вестник Московского ун-та. Химия. -2010. - Т. 51, № 2. - С. 132-138.

47. Budzikiewicx, 11. Steroids / Н. Budzikiewicz // Biochemical Applications of Mass Spectrometry. - Wiley, New York, 1980. - P. 211-228.

48. Kasal, A. Spectroscopic methods of steroid analysis / A. Kasal, M. Budesinsky, W.J. Griffiths // Steroid analysis. - 2010. - P. 27-161.

49. Преч, Э. Определение строения органических соединений. Таблицы спектральных данных / Э. Преч, (I). Бюльмапп, К. Аффольтер. - М.: Мир, 2006. -438 с.

50. Герег, III. Количественный анализ стероидов /Ш. Герег. - ricp. с англ. -М.: Мир, 1985.-504 с.

51. Ведерников, Д.11.Экстрактивные вещества веток березы повислой. 1. Групповой химический состав. Нейтральные экстрактивные вещества корки / Д.Н. Ведерников, Е.Е. Смирнова, П.Ю. Смирнова, В.И. Рощин // Химия растительного сырья. - 2010. - № 4. - С. 121-129.

52. Кузнецова, С.Л.Изучение состава гексанового экстракта бересты и его токсико-фармакологических свойств / С.А. Кузнецова, Б.Н. Кузнецов, О.Ф. Ве-селова, Т.П. Кукина, Г".С. Калачева, Г.I I. Скворцова, Е.С. Редькина // Химия растительного сырья. - 2008. - № 1. - С. 45-49.

53. Бабаев, В.М. Масс-спектрометрия изопреноидов / В.М. Бабаев, Р.З. Мусин, В.И.1 аврилов // Вестник КГТУ. - 201 1. - Т. 14, № 4. - С. 12-17.

54. Brooks, C.J.W. Some aspects of mass spectrometry in research on steroids / C.J.W. Brooks // Phil. Trans. R. Soc. Lond. - 1979. - V. 293. - P. 53-67.

55. Низковская, О.II. К вопросу биологии и биохимии культуры чаги / О.П. Низковская, U.M. Милова, A.M. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова // Труды института микробиологии АН СССР. - 1959. - №6. - С. 277-285.

56. Юмаева, J1.P. Исследование шрота, оставшегося после получения водного извлечения чаги. I. Оптимизация процесса получения спиртовых экстрактов /Л.Р. Юмаева, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // Вестник КГТУ. - 2009. - № 4. - С. 227-232.

57. Юмаева, Л.Р. Состав и свойства экстрактов из шрота чаги: авгореф. дис. ... канд. хим. наук: 15.00.02 / Юмаева Ляйсап Рифгатовна. - Казань, 2009. - 16с.

58. Бабицкая, В.Г. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliquus / В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, II.В. Иконникова // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. - Т. 36, № 4. - С. 439-444.

59. Хабибрахманова, В.Р. Состав и свойства дисперсной фазы золя водных извлечений чаги: автореф. дис. ... канд. хим. наук: 15.00.02 / Хабибрахманова Венера Равилевпа. - Казань, 2008. - 18 с.

60. Сысоева, М.Л. Высокоактивные антиоксиданты на основе гриба Inonotus obliquus: автореф. дис. ... д-ра хим. наук: 15.00.02 / Сысоева Мария Александровна. - Казань, 2009. - 32 с.

61. Соловьев, В.Л. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушаю-щих грибов / В.А. Соловьев, A.M. Кутневич // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. - Л., 1973. - С. 35-39.

62. Иванова, Г.А. Влияние гиперразветвленных полимеров на антиокси-дантную активность водных извлечений и меланинов чаги: автореф. дис. ... канд. хим. паук: 15.00.02 / Иванова Гузель Адгамовна. - Казань, 201 1. - 18 с.

63. Сысоева, М.А. Исследование золя вводных извлечений чаги IV. Анти-оксидантная активность. Влияние способа извлечения и применение комгиюк-сопов, гидроокиси натрия / М.А. Сысоева, O.IO. Кузнецова, B.C. Гамаюрова, П.П. Суханов, Г.К. Зиятдииова, Г.К. рудников // Химия растительного сырья. -2005. -№ 1,-С. 41-47.

64. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. I. Аптиоксидантная активность / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахма-нова, B.C. Гамаюрова, Г.К. Зиятдииова, Г.К. Будни ков // Химия растительного сырья. - 2007. - № 4. - С. 101-104.

65. Сысоева, М.А. Повышение антиоксидантной активности водных извлечений и меланинов чаги I. Обработка водных извлечений чаги водными растворами гиперразветвленных полимеров / М.А. Сысоева, Г.А. Иванова, B.C. Гамаюрова, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников, Л.Я. Захарова, М.А. Воронин // Химия расти тельного сырья. - 2010. - № 2. - С. 105-108.

66. Шиврина, A.I 1. К характеристике комплекса сложных органических соединений чаги / А.И. Шиврина, Г.В. Ловягина, Е.Г. Платонова // Чага и её лечебное применение при раке IV с тадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С. 72-84.

67. Рыжова, ГЛ. Химические и фармакологические свойства сухого экстракта чаги / ГЛ. Рыжова, С.С. Кравцова, С.А. Матасова, Н.В. Грибель, В.Г.

Пашинский, К.А. Дычко // Химико-фармацевтический журнал. - 1997. - № 10. _ С. 44-47.

68. Калашникова, Е.А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «Бефунгин»: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / Калашникова Екатерина Александровна. - Пятигорск, 2003.-23 с.

69. Mazurkiewicz, W.Separation of an aqueous extract Inonotus obliquus (Chaga). A novel look at the efficiency of its influence on proliferation of A549 human lung carcinoma cells / W. Mazurkiewicz, K. Rydel, D. Pogocki, M.K. Lemieszek, E. Langner, W. Rzcski // Acta Poloniac Pharmaceutica. - 2010. - V. 67, № 4. - P. 397-406.

70. Mazurkiewicz, W.Analysis of aqueous extract of Inonotus obliquus / W. Mazurkiewicz // Acta Poloniac Pharmaceutica. - 2006. - V. 63, № 6. - P. 497501.

71. Шиврина, A.I I. Аминокислотный состав гуминоподобных веществ, образуемых некоторыми древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, Р.А. Маслова // Почвоведение. - 1963. - № 11. - С. 63-67.

72. Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - M.-JI.: Наука, 1966.-С. 38-42.

73. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XI. Лигш-ды водного извлечения чаги / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Га-маюрова, А.Х. Тазеева // Химия растительного сырья. - 2008. - № 3. - С. 119122.

74. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. III. Состав линидов, отделяемых из водного извлечения чаги этил-ацетатом / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, Э.Ф. Зайнет-динова//Химия растительного сырья. - 2008. - № 1.-С. 111-114.

75. Сысоева, М.Л. Исследование золя водных извлечений чаги. XIII. Биологически активные вещества коллоидной системы, формируемой после удаления дисперсной фазы из водного извлечения чаги хлористоводородной кислотой / М.Л. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова // Химия растительного сырья. - 2009. - № 3. - С. 151 -156.

76. Бурмасова, М.Л. Фенольные и сопутствующие им соединения водного извлечения гриба чаги: автореф. дис. канд. хим. наук: 14.04.02 / Бурмасова Марина Александровна. - Казань. - 2013. - 18 с.

77. Березина, М.П. Физиологические исследования больных раком IV стадии во время лечения чагой / МЛ I. Березина // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959.-С. 143-159.

78. Булатов, П.К. Клинические наблюдения больных раком IV стадии при лечении чагой / П.К. Булатов // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959,- С. 261-270.

79. Булатов, 11.К. Клинические наблюдения за лечебным действием чаги на больных раком IV стадии / П.К. Булатов, Е.Я. Мартынова // Комплексное изучение физиологически акт ивных веществ низших растений. - М.-Л.: Наука, 1961.-С. 247-253

80. Мартынова, П.Я. Клинические наблюдения больных раком желудка IV стадии при лечении чагой / П.Я. Мартынова // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С. 271-278.

81. Березина, М.П. Влияние чаги на развитие привитой саркомы МОП у крыс / М.П. Березина, 11.К. Булатов, Ф.Я. Вандышева // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С. 119-126.

82. Кроткипа, П.А. Влияние чаги на перевиваемые опухоли у крыс / Н.А. Кроткипа // Чага и ее применение при лечении рака IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959.-С. 114-118.

83. Рудаков, В.Ф. Влияние чаги на метастазирование опухоли Эрлиха у мышей / В.Ф. Рудаков // Высшие грибы и их физиологически активные соединения.-Л.: Наука, 1973 - С. 52-54.

84. Burczyk, J. Antimitotic activity of aqueous extracts of Inonotus obliquus / J. Burczyk, A. Gawron, M. Slotwinska, B. Smietana, K. Terminska // Boll. Chim. Farm. - 1996. - V. 135. - P. 306-309.

85. Шашкииа, М.Я. Чага в онкологии / М.Я Шашкина, FI.FI. Шашкин, А.В. Сергеев // Российский биотерапевтичсский журнал. - 2005. - Т. 4, № 4. -С. 59-72.

86. Youn, M.J. Chaga mushroom (Inonotus obliquus) induces G0/G1 arrest and apoptosis in human hepatoma I lepG2 cells / M.J. Youn, J.K. Kim, S.Y. Park // World J Gastroenterol. - 2008. - V. 14, № 4. - P.511-517.

87. Shin, S.H. Inhibition Effect of Cell Proliferation and Apoptosis by Inonotus obliquus in Human Glioblastoma IJ-87 MG Cells / S.FI. Shin, Y.J. Kim, J. Park // J. Korean Soc. Food Sci. and Nutr. - 2013. - V. 42, № 7. - P. 1022-1028.

88. Yoon, T.J. Antitumor metastasis activity by extracts of Inonotus obliquus / T.J. Yoon, W.K Moon, K.I I. Lee // Korean J. Food and Nutr. - 2007. - V. 20, № 3. -P. 253-258.

89. Lee, S.H. Antitumor activity of water extract of a mushroom, Inonotus obliquus, against HT-29 human colon cancer cells / S.FI. Lee, H.S. Llwang, J.W. Yun // Phytother. Res. - 2009. - V. 23. - P. 1784-1789.

90. Koyama, T. Fungal medicine, Fuscoporia obliqua, as a traditional herbal medicine: its bioactivities, in vivo testing and medicinal effects / T. Koyama, Y. Gu, A. Taka // Asian Biomedicine. - 2008. - V. 2, № 6. - P. 459-469.

91. Chen, C. Aqueous extract of Inonotus obliquus (Fr.) Pilat (Flymenochaetaceac) significantly inhibits the growth of sarcoma 180 by inducing apoptosis / C. Chen, W. Zheng, X. Ga, X. Xiang // American J. Pharm. and Tox. -2007,-V. 2, № l.-P. 10-17.

92. Illana-Lstcban, C. Intcres medicinal del "Chaga" (Inonotus obliquus) / C. Illana-Esteban // Bol. Soc. Micol. - 201 1. - V. 35. - P. 175-185.

93. Youn, M. Potential anticancer properties of the water extract of Inonotus obliquus by induction of apoptosis in melanoma B16-F10 cells / M. Youn, J.K. Kim, S. Park, Y. Kim, C. Park // J. Ilthnopharmacology. - 2009. -V. 121. - P. 221-228.

94. Park, E. Ethanol Extract of Inonotus obliquus Shows Antigenotoxic Effect on Hydrogen Peroxide Induced DNA Damage in Human Lymphocytes / E. Park, K. Jeon, B.I I. Byun // Cancer Prevention Research. - 2005. - V. 10, № 1. - P. 54-59.

95. Hackathorn, A. Ethanol extracts from the mushroom Inonotus obliquus (Chaga) alter melanoma cell viability and morphology / A. Hackathorn, E. Boisvert, K. Masterjohn, H. Belli/./.i, 1". Flanders, D. Mitchell, B. Bryan, D. Frink // BIOS. -2013.-V. 84, №2.-P. 74-81.

96. Sun, Y. In Vitro Antitumor Activity and Structure Characterization of Ethanol Extracts from Wild and Cultivated Chaga Medicinal Mushroom, Inonotus obliquus / Y. Sun, T. Yin, X.I 1. Chen, G. Zhang // Int. J. Med. Mush. - 2011. - V. 13, №2.-P. 121-130.

97. Nomura, M. Inotodiol, a lanostane triterpenoid, from Inonotus obliquus inhibits cell proliferation through caspase-3-dependent apoptosis / M. Nomura, T. Takahashi, A. Uesugi, R. Tanaka, S. Kobayashi // Anticancer research. - 2008. -V. 28.-P. 2691-2696.

98. Chung, M.J. Anticancer activity of subfractions containing pure compounds of Chaga mushroom (Inonotus obliquus) extract in human cancer cells and in Balbc/c mice bearing sarcoma-180 cells / M.J. Chung, C.K. Chung, Y. Jeong, S. Ham // Nutr. Res. Pract. - 2010. - V. 4. - P. 177-182.

99. Ганцев, 1II.X. Амбулаторно-иоликлиническая онкология: рук-во для врачей / III.X. Ганцев, В.В. Старинский, И.Р. Рахмагуллина, JT.H. Кудряшова, Р.З. Султанов.-М.: 1 ООТАР-Медиа, 2012.-448 с.

100. Lu, X. Phytochemical characteristics and hypoglycaemic activity of fraction from mushroom Inonotus obliquus / X. Lu, FI. Chen, P. Dong, L. Fu, X. Zhang//J. Sci. Food Agric. - 2010. - V.90. - P. 276-280.

101. Keller, A.C. Antimicrobial steroids from the fungus Fomitopsis pinicola / A.C. Keller, M.P. Maillard, К. I Iostettmann // Phytochem. - 1995. - V. 41. -P. 1041-1046.

102. Lee, I.К. New antioxidant polyphenols from the medicinal mushroom inonotus obliquus / I.K. Lee, Y.S. Kim, Y.W. Jang, J.Y. Jung, B.S. Yun // Bioorg. Med. Chem. Letters. - 2007. - V. 17. - P. 6678-6681.

103. Ham, S.S. Antimutagenic effects of subfractions of Chaga mushroom (Inonotus obliquus) extract / S.S. Mam, S.H. Kim, S.Y. Moon, M.J. Chung, C.B. Cui, E.K. Han, C.K. Chung, M. Choe // Mutation Research. - 2009. - V. 672. - P. 55-59.

104. Frye, L.L. Lanosterol analogues: dual-action inhibitors of cholesterol biosynthesis / L.L. Frye, D.A. Leonard // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. - 1999. -V. 34.-P. 123-140.

105. Koyama, T. Cardiovascular effects produced by a traditionl fungal medicine, Fuscoporia obliqua extract, and microvesscls in the left ventricular wall of stroke-prone spontaneously hypertensive rat / T. Koyama, A. Taka, H. Togashi // Clin. Plemorheol. Microcirc. - 2006. - V. 35. - P. 491-498.

106. Толстиков, Г.А. Бстулип и его производные. Химия и биологическая активность / Г.А. Толстиков, О.Б. Флехтер, Э.Э. Шульц // Химия в интересах устойчивого развития. - 2005. - Т. 13.-С. 1-30.

107. Толстикова, Т.Г. Терпеноиды ряда лупана — биологическая активность и фармакологические перспективы. I. Природные производные лупана / Т.Г. Толстикова, И.В. Сорокина, Г.А. Толстиков, А.Г. Толстиков, О.Б. Флехтер // Биоорганическая химия. - 2006. - Т. 32, № 1. - С. 42-55.

108. Tokuda, II. Inhibitory Effects of Ursolic and Oleanolic Acid on Skin Tumor Promotion by 12-0-Tetradecanoylphorbol-13-acetate / H. Tokuda, II. Ohigashi, K. Koshimizu, Y. Ito // Cancer Lett. - 1986. - V. 33. - P. 279-285.

109. Geetha, T. Anti-Inflammatory Activity of Lupeol and Lupeol Linoleate in Rats / T. Geetha, P. Varalakshmi // J. Ethnopharmacol. - 2001. - V. 76. - P. 77-80.

110. Zhong, X. Effects of Inotodiol Extracts from Inonotus Obliquus on Proliferation Cycle and Apoptotic Gene of Human Lung Adenocarcinoma Cell Line A549 / X. Zhong, L. Wang, D. Sun // Chin. J. Integr. Med. - 2011. - V. 3. - P. 218223.

111. Kim, II.W. Biomcdicinal triterpcnoids ofGanoderma lucidum (Curt. :Fr.) P. Karst (aphyllophoromycctidac) / H.W. Kim, B.K. Kim // Int. J. Med. Mush. -1999,-V. I.-P. 121-138.

112. Kimura, Y. Antitumor and antimetastic effects on liver triterpenoid fractions of Ganoderma lucidum: mechanism of action and isolation of an active substance / Y. Kimura, M. Taniguchi, K. Baba // Anticancer Research. - 2002. -V. 22, № 6A. - P. 3309 - 3318.

113. Sliva, D. Ganoderma lucidum (Reishi) in cancer treatment / D. Sliva // Integrative cancer therapies. - 2003. - V. 2, № 4. - P. 358 - 364.

114. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. -М., 2012. - 1216с.

115. Лекарственные препараты в России [Электронный ресурс] // Справочник Видаль. - Режим доступа: http://www.vidal.ru/drugs.

116. Справочник лекарственных средств [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.rlsnet.ru/ mnn_alf.htm.

117. Толстикова, Т.Г. 11а пути к низкодозным лекарствам / Т.Г. Толстико-ва, А.Г. Толстиков, Г.А. Толстиков // Вестник РАН. - 2007. - № 77, Т. 10. -С. 867-874.

118. Официальный cai'n National Cancer Institute at The National Institute of Flealth (USA) [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.cancer.gov/clinicaltrials.

1 19. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. II. Изменение изучаемой системы при проведении экстракции различными способами / М.А. Сысоева, О.Ю. Кузнецова, B.C. Гамаюрова, П.П. Суханов, Ф.Г. Халитов // Вестник КГТУ. - 2003. - № 2. - С. 172-1 76.

120. Фармакопейная статья на Бефунгип «ФС 42-3291-96». - 8 с.

121. Ермаков, А.И. Методы биохимического исследования растений / А.И. Ермаков, В.В. Арасимович, М.И. Смирнова-Иконникова, Р1.Г1. Ярош, Г.А. Луковникова. - М., 1972. - 400 с.

122. Кейтс, М. Техника лииидологии / М. Кейтс. -М., 1975.-324 с.

123. Северин, С.Е. Практикум по биохимии / С.Е. Северин, Г.А. Соловьева. - М.: Изд-во МГУ, 1989. - 509 с.

124. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1990. -400 с.

125. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1: Общие методы анализа. -11-е изд., доп. - М., 1987. - 336 с.

126. Абдуллин, И.Ф. "Электрогенерировапный бром - реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов / И.Ф. Абдуллин, E.H. Турова, Г.К. Будпиков // Заводск. лаборатория. - 2002. - Т. 68, № 9. -С. 12-15.

127. Пат. 2253114 РФ, M1IK G01N33/48. Способ определения интегральной антиоксидантной емкости биологических жидкостей / В.И. Погорельцев, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будпиков; заявитель и патентообладатель Казанский го-суд. мед. уи-т. - № 2002134634/15; заявл. 23.12.2002; опубл. 27.05.2005.

128. Zakharova, L.Ya. Nanosized reactors based on polyethylene imines: from microheterogeneous systems to immobilized catalysts / L.Ya. Zakharova, A.R. Ibragimova, L.A. Kudryavtseva // Langmuir. - 2007. - V. 23. - P. 3214-3224.

129. Антииова, Л.В. Физические методы контроля сырья и продуктов в мясной промышленности / JI.B. Антииова, H.H. Безрядин. - СПб.: ГИОРД, 2006.-200 с.

130. Заявка на патент РФ Способ количественного определения тетрацикличсских тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги / М.А. Сысоева, С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова. - № 2014126328 от 27.06.2014.

131. Шталь, Э. Хроматография в тонких слоях / Э. Шталь. - М.: Мир, 1965.-508 с.

132. Краснов, Е.А. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексеюк. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 1987. - 184 с.

133. База данных N181" |Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://webbook.nist.gov/chemistry-

134. ГОСТ Р 52337-2005. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичноеги. - М., Стандартинформ, 201 1. - 19 с.

135. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

136. Никитина, С.А. Липидпый состав гриба чаги, водных извлечений и шрота / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов II Всероссийской молодежной научной конференции «Химия и технология новых веществ и материалов». - Сыктывкар, 2012. - С. 80.

137. Гальцова, Р.Д. Стсринообразование у дрожжевых организмов / Р.Д. Гальцова . - М: Наука, 1980. - 224 с.

138. Пат. 2530636 РФ МПК8 А61К36/06, В0т11/02. Способ получения фракции липофильных веществ из чаги / М.А. Сысоева, С.А. Никитина,

B.Р. Хабибрахманова; заявитель и патентообладатель: ФГБОУ ВГЮ КНИТУ. -№ 2013136838/15; заявл. 06.08.2013, опубл. 10.10.2014, Бюл. № 28. - 6 с.

139. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги III. Влияние состава сырья на выход экстрактивных ве-ществ водных извлечений чаги / М.А. Сысоева, О.Ю. Кузнецова, В.С. Гамаюрова // Химия растительного сырья. - 2004. -№ 4. - С. 29-34.

140. Никитина, С.А. Изучение биологически активных соединений поли-фенолоксикарбонового комплекса чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов IX Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань, 2008. — С. 199-200.

141. Никитина, С.А. Выделение липидных веществ из меланина чаги /

C.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов IV Международной конференции «Экстракция органических соединений». -Воронеж: ВГТА, 2010. - С. 413.

142. Никитина, С.А. Исследование меланина чаги па наличие стеринов и их производных / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов III Международного симпозиума «Клеточная сигнализация у растений». - Казань, 2011. - С. 40.

143. Никитина, С.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XIV. Количественный и качественный состав липидных веществ водного извлечения чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Вестник КГТУ, 2012.-Т. 15, № 18.-С. 217-219.

144. Никитина, С.А. К вопросу о липидном составе меланина чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов XIX Менделеевского съезда по общей и прикладной химии: в 4 т. - Т. 2. -Волгоград, 2011.- С. 470.

145. Пат. 2522952 Российская Федерация МПК8 А61К30/06, А61К31/56, В0Ш11/02. Способ получения фракции липофильных веществ из чаги / М.А. Сысоева, С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова; заявитель и патентообладатель: ФГБОУ ВНО КНИГУ. - 2013116569/15; заявл. 15.04.2013, опубл. 20.07.2014, Бюл. №.20,- 7 с.

146. Никитина, С.А. Способ реорганизации нативного меланина чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов Всероссийской молодежной научной школы «Биоматериалы и нанобиома-териалы: актуальные проблемы и вопросы безопасности». - Казань, Отечество, 2012.-С. 16.

147. Никитина, С.А. Элементный состав меланина чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов IX Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань, 2014.-С. 40.

148. Пат. 2523414 РФ МПК8 А61К36/07, В0Ю11/02. Способ получения меланина из чаги / М.А. Сысоева, С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова; заявитель и патентообладатель: ФГБОУ ВПО КНИТУ. - №2013129227/15; заявл. 25.06.2013, опубл. 20.07.2014, Бюл. №.20. - 6 с.

149. Книгам, Ф.Т. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов / Ф.Т. Бингам, М. Коста, Эйхспбсргср Э. - М.: Мир, 1993.-368 с.

150. Никитина, С.А. Разработка биологически активных добавок на основе меланина чаги / С.Л. Ппкшипа, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов XII Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и био1ехнологии». - Казань, 2012. - С. 135-138.

151. Никитина, С.А. Исследование коллоидных систем, формируемых на основе водных извлечений ча! и / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, Е.С. Чугунова // Сборник тезисов I Всероссийского симпозиума по поверхностно-активным веществам «Ог коллоидных систем к панохимии». -Казань, 201 1.- С. 125

152. Никитина, С.А. Анализ антиоксидантной активности водных экстрактов трутовых грибов / С.А. Никипша, А.И. Носов, М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, Г.К. Будни ков, Г.К. Зиятдинова // Современные проблемы химической пауки и образования : в 2 т. - Т. 2: тез. докл. - Чебоксары, 2012. -С. 172-173

153. Никитина, С.A. Oiделение и исследование липидов меланина чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов докладов XI Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань, 2010. - С. 259.

154. Никитина, С.А. Линиды, выделяемые из меланина чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов VI Всероссийской научно-технической конференции «Интенсификация тепло- и массообменных процессов в химической технологии». - Казань, 2010. - С. 150.

155. Пат. 1099964 СССР А61 КЗ 1/575 Способ получения холестерина / Т.К. Митрофанова, О.Г. Саканделидзс, В.А. Внуков, Г.А. Ермолин; заявитель и патентообладатель: Центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей. -№ 3415621/28-13; заявл. 01.04.1982, опубл. 30.06.1984, Бюл. №.24. -3 с.

156. Никитина, С.А. Исследование меланина чаги. I. Липофильные вещества меланина чаги / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Химия растительного сырья. - 2014. -№3. - С. 185-191.

157. Никитина, С.А. Биологически активные углеводороды меланина Inonotus obliquus / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева // Сборник тезисов V Всероссийской конференции с международным участием «Новые достижения в химии и химической юхнологии растительного сырья». -Барнаул: изд-во Алт. ун-та, 2012. - С. 305.

158. Семенов, A.A. Очерк химии природных соединений / A.A. Семенов. - Новосибирск: Наука, 2000. - 664 с.

159. База данных масс-спскфов |Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.massbank.jp.

160. База данных ¡Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://sdbs.db.aist.go.jp/sdbs/cцi-Ьin/dircct frame top.cgi.

161. Браун, Д. Спектроскопия органических веществ / Д. Браун, А. Флойд, М. Сейнзбери. пер. с англ. - М.: Мир, 1992. - 300 с.

162. Преч, Э. Определение строения органических соединений. Таблицы спектральных данных / Э. Преч, Ф. Бюльманн, К. Аффольтер; пер. с англ. - М.: Мир, 2006.-438 с.

163. Ульмер, Х.Ф. Физиология человека / Х.Ф. Ульмер: В 3 т. - М.: Мир, 1996.- 230 с.

164. Nakajima, Y. Cancer cell cytotoxicity of extracts and small phenolic compounds from Chaga / Y. Nakajima, H. Nishida, S. Matsugo, T. Konishi // J. Med. Food. - 2009. - № 12. - P. 501 -507.

165. Никитина, С.А. Адаптация сиектрофотометрического определения стериновых веществ в Haie и препаратах, полученных на ее основе / С.А. Никитина, В.Р. Хабибрахманова, 11.Д. Шарафутдинова, Д.А. Гайнанова // Сборник тезисов докладов XI Международной конференции молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань, 2012. - С. 146.

166. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений». - М.: Изд-во стандартов, 2002. - 62 с.

167. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 « Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений». - М.: Изд-во стандартов, 2002. -38 с.

168. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений». - М.: Изд-во стандартов, 2002. -34 с.

169. Руководство по инструментальным методам исследований при разработке и экспертизе качества лекарственных препаратов / Под ред. С.Н. Быковского. - М.: Изд-во Перо, 2014. - 656 с.

170. Дворкин, В.И. Метрология и обеспечение качества количественного химического анализа / В.И. Дворкин. - М.: Химия, 2001. - 263 с.

171. Appendix Г. Guidelines for Standart Metod Performance Requirements Internacional AOAC. [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.eoma.aoac.ora/app_f.pdf.

172. Данченко, Е.О. Опенка цитотоксичности фармацевтических субстанций с использованием клеточных культур / Е.О. Данченко // Иммунопатология, аллергология, иифектология. - 2012. - № 2. - С. 22 - 31.