Совершенствование схем специфической профилактики бруцеллёза маралов с использованием живой слабоагглютиногенной вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-AB тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Тяпин, Владимир Валерьевич

• Тяпин, Владимир Валерьевич
• кандидат ветеринарных наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Тяпин, Владимир Валерьевич

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Характеристика бруцеллёза маралов

1.2. Роль специфической профилактики в системе противобруцеллёзных мероприятий у животных

1.3. Живые противобруцеллёзные вакцины

2. Собственные исследования 34 2.1. Материалы и методы исследования

3. Результаты исследования

3.1. Биологические особенности маралов и система ведения пантового оленеводства

3.2. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма

В. abortus 82 при бруцеллёзе маралов в Алтайском крае

3.3. Изучение приживаемости и возможности миграции вакцинного штамма 75/79-АВ в организме маралов

3.4. Изучение иммуногенных свойств вакцины из штамма

В. abortus 75/79-АВ, определение оптимальной иммунизирующей дозы

3.4.1. Методика эутоназии опытных животных

3.5. Изучение сравнительной иммунологической эффективности и антигенных свойств противобруцеллёзных вакцин из штаммов

В. abortus 82 и В. abortus 75/79-АВ в опыте на маралах 75 3.5.1. Патоморфологические изменения при экспериментальном бруцеллёзе маралов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование схем специфической профилактики бруцеллёза маралов с использованием живой слабоагглютиногенной вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-AB»

Актуальность темы. Пантовое оленеводство - динамично развивающая отрасль сельского хозяйства, дающая два вида продукции: основную (панты) и побочную (мясо, кровь, хвосты, пенисы, жилы, зародыши), которые, в свою очередь, служат ценным лекарственным сырьем, применяемым в восточной и отечественной медицине для лечения различных заболеваний. Существенным сдерживающим фактором её развития являются инфекционные заболевания, одно из которых - бруцеллёз.

Бруцеллёз сельскохозяйственных животных является распространённой инфекционной болезнью, поражающей животных всех видов и представляющей серьёзную угрозу здоровью людей.

Уже давно стало очевидным, что успешная борьба с этой зооантропоноз-ной инфекцией в широких масштабах практически невозможна без использования средств специфической профилактики (Косилов И.А., 1985, 1992; Шумилов К.В., 1987; Салмаков К.М., 1975, 1987; Димов С.К., 1993 и др.). Необходимость их применения особо возрастает в связи с изменениями, происходящими в агропромышленном комплексе нашей страны: расформирование колхозов, совхозов, создание акционерных обществ, фермерских хозяйств, расширение и увеличение крестьянских подворий.

Существуют различные типы противобруцеллёзных вакцин, но наибольший интерес вызвали живые вакцины из штаммов В. abortus 19 и 82. В настоящее время как на крупном рогатом скоте, так и на маралах используется вакцина из слабоагглютиногенного штамма В. abortus 82. Указанная вакцина обладает достаточно высоким уровнем иммуногенности и противоэпизоотической эффективности, однако имеет и ряд недостатков, связанных, прежде всего, с нестабильностью её биологических свойств, а также абортогенностью (Димов С.К., 1993; Климанов А.И. с соавт., 1983; Новицкий А.А., 1988; Ощепков В.Г., 1998). Результаты применения этой вакцины на маралах свидетельствуют о ещё одной негативной стороне — длительном сохранении поствакцинальных реакций (от 12-18 месяцев и до 5 лет после иммунизации).

Таким образом, очевидна необходимость поиска новых, современных противобруцеллёзных вакцин. Одной из таких вакцин является вакцина из штамма В. abortus 75/79-АВ, которая была селекционирована и комплексно изучена И.П. Никифоровым (1996) на крупном рогатом скоте.

Апробация данной вакцины в производственных условиях показала, что её применение в общем комплексе противобруцеллёзных мероприятий позволяет резко ослабить напряженность эпизоотического процесса в течение 6-8 месяцев и добиться ликвидации очагов бруцеллёза крупного рогатого скота в более короткие сроки. Кроме того, вакцина не абортогенна, популяция микробных клеток однородна, угасание серологических реакций наступает через 2-3 месяца после иммунизации.

Все это позволяет считать работу с этой вакциной весьма перспективной, а её испытание на маралах - актуальным.

Цель исследований - изучить основные свойства вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-АВ на маралах.

Для выполнения указанной цели в задачи исследования входило:

1. Изучение эпизоотической ситуации по бруцеллёзу маралов в Алтайском крае и противоэпизоотической эффективности вакцины из штамма В. abortus 82.

2. Изучение приживаемости и возможности миграции вакцинного штамма 75/79-АВ в организме маралов.

3. Изучение иммуногенных свойств вакцины из штамма В. abortus 75/79-АВ на маралах, отработка оптимальной иммунизирующей дозы.

4. Изучение сравнительной иммунологической эффективности и антигенных свойств вакцин из штаммов В. abortus 82 и В. abortus 75/79-АВ в опыте на маралах.

Научная новизна. Впервые на маралах изучены приживаемость, возможность миграций, а также иммуногенные свойства вакцины из штамма 75/79-АВ, при этом определена оптимальная иммунизирующая доза. Проведена сравнительная оценка иммуногенных и антигенных свойств вакцин из штаммов В. abortus 82 и В. abortus 75/79-АВ на маралах; отработана методика эутоназии маралов миорелаксантом «Адилин-супер».

Практическая значимость. В ходе проведённых исследований разработаны рекомендации «Диагностика, профилактика и меры борьбы с бруцеллёзом маралов» (2005), утвержденные учёным советом ВНИИПО (протокол № 1 от 11 февраля 2005 г.), и рекомендованы к внедрению научно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.).

Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на научно-практической конференции молодых учёных «Вопросы пантового оленеводства и болезней сельскохозяйственных животных» (г. Барнаул, 2003); региональной научной студенческой конференции «Достижения и перспективы студенческой науки в АПК» (г. Барнаул, 2003); Международной научно-практической конференции молодых учёных СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых учёных» (Новосибирская область, п. Краснообск, 2004); Международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний» (Новосибирская область, ГНЦ ВБ «Вектор», 2004), учёных советах ВНИИ пантового оленеводства (2001-2004) и научно-техническом совете управления ветеринарии администрации Алтайского края (2005).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации отражены в 7 научных работах. Научные исследования, изложенные в диссертации, являются составной частью научных проблем Всероссийского научно-исследовательского института пантового оленеводства, тема № 02.01.01.

Выносятся на защиту:

1. Анализ эпизоотической ситуации по бруцеллёзу маралов в Алтайском крае и противоэпизоотической эффективности вакцины из штамма Brucella abortus 82.

2. Приживаемость и возможность миграции вакцинного штамма Brucella abortus 75/79-АВ в организме маралов.

3. Определение иммуногенных свойств вакцины из штамма Brucella abortus 75/79-АВ, изыскание оптимальной иммунизирующей дозы для маралов.

4. Определение сравнительной иммунологической эффективности и антигенных свойств вакцин из штаммов Brucella abortus 82 и Brucella abortus 75/79-АВ на маралах.

1. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Тяпин, Владимир Валерьевич

119 Выводы

1. Оздоровление маралоферм от бруцеллеза с применением противобру-целлёзной вакцины из штамма 82 вполне приемлемо, однако длительно сохраняющиеся серологические реакции существенно затрудняют диагностику болезни.

2. Слабоагглютиногенный вакцинный штамм В. abortus 75/79-АВ введённый в дозе 50 млрд м.к., в объёме 5 мл физиологического раствора, в область средней трети шеи, подкожно, приживается в организме маралух 4-5 летнего возраста в течение 55 дней. По результатам серологического и бактериологического исследований явления миграции штамма не установлено.

3. При иммунизации маралят вакцинным штаммом В. abortus 75/79-АВ в возрасте 6 месяце в дозах 50 и 100 млрд м.к. серологические реакции появляются независимо от дозы на 15-й день (РСК), выпадают на 33-и сутки. Защитный эффект при искусственном конъюнктивальном инфицировании животных референтным штаммом В. abortus 544 через 6 месяцев после вакцинации составил 100 и 80 % соответственно. Иммунизирующей дозой для вакцинации маралов против бруцеллёза является 50 млрд м.к.

4. Из шести испытанных доз миорелаксанта «Адилин-супер» (0,09; 0,135; 0,18; 0,27, 0,36 и 0,45 г действующего вещества) доза равная 0,18 г сухого вещества в 2 мл 3,5%-ного раствора при внутримышечном введении обеспечила эутаназию подопытных животных.

5. Сравнительное изучение иммуногенных и антигенных свойств вакцин из штаммов В. abortus 82 и 75/79-АВ показало, что при одинаковой иммунизирующей дозе 50 млрд м.к. получен равный защитный эффект при искусственном конъюнктивальном инфицировании животных через 6 месяцев после иммунизации. Поствакцинальные серологические реакции у животных привитых штаммом 82, сохраняются в РА и РСК с R(bovis)-aHTHreHOM вплоть до заражения (в течение 6 месяцев), а у вакцинированных штаммом 75/79-АВ в течение 4 месяцев и только в РСК с R(bovis)-aHTHreHOM.

6. У контрольных маралят после искусственного заражения в крови повышается в 1,5-2 раза уровень содержания лейкоцитов на протяжении всего срока исследования, чаще понижается количество общего белка и альбуминов. Соответственно у вакцинированных лейкоциты не имеют чёткой динамики; количество их то возрастает, то убывает, содержание общего белка и альбуминов также неоднозначны, но чаще повышается. При понижении или повышении альбуминов у животных всех групп гамма-глобулиновая фракция имеет противоположные значения.

7. Спустя 50 дней после искусственного заражения контрольных саюшек наблюдали увеличение в 1,5-4 раза лимфоузлов (подчелюстных, заглоточных, предлопаточных и надвыменных). Видимых изменений паренхиматозных органов (печень, селезёнка) не обнаружено. При гистологическом исследовании в лимфатических узлах контрольной группы выявлены изменения свойственные серозному лимфадениту.

Практические предложения

1. При диагностике и ликвидации бруцеллёза маралов руководствоваться методическими рекомендациями «Диагностика, профилактика и меры борьбы с бруцеллёзом маралов» утверждённые учёным советом ГНУ ВНИИПО СО РАСХН (протокол № 1 от 11 февраля 2005 г.) и научно-техническим советом управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 2 от 18 марта 2005 г.).

2. В «Наставление по применению вакцины живой сухой из штамма Brucella abortus 75/79-АВ при бруцеллёзе крупного рогатого скота», утверждённого Департаментом ветеринарии Минсельхоза России (2003 г.), в п. 3.1.4 внести дополнения дозы для маралов 50 млрд м.к. Выделить отдельный пункт по иммунизации маралов согласно данным, изложенным в рекомендациях.

3. При серологической диагностике маралов на бруцеллёз наряду с РА и РСК рекомендуем применять РБП.

4. При проведении экспериментальных исследований на маралах с последующим их убоем и утилизацией применять миорелаксант «Адилин-супер» в дозе 0,18 г сухого вещества в 2 мл 3,5%-ного раствора, при внутримышечном введении.

122

Заключение

Во многих странах, в том числе в России, проблема искоренения бруцеллёза животных не теряет своей актуальности.

Инфекция представляет угрозу не только животным, но и человеку, так как является типичным зооантропонозом. В связи с этим борьба с бруцеллёзом имеет не только экономическое, но и социальное значение.

Заболевание регистрируется как среди мелкого и крупного рогатого скота, так и маралов.

В маралохозяйствах вакцина из штамма 82 является приемлемой для иммунизации маралов. Однако результаты практического применения вакцины свидетельствуют, что отдельные животные, иммунизированные будучи молодняком (телята), реагируют в РСК спустя 2 и более лет, а в некоторых случаях маралы могут быть серопозитивны как в РСК, так и в РА спустя 12-18 месяцев, 5 и более лет, что затрудняет диагностику болезни.

Обобщая материалы литературных данных по проблеме специфической профилактики бруцеллеза животных, можно констатировать ее ведущую роль в системе противобруцеллезных мероприятий. При этом важно иметь такую вакцину, которая бы при обеспечении длительного иммунного состояния в стадах давала возможность беспрепятственной поствакцинальной диагностики в самые короткие сроки после введения, учитывая закономерности вторичного иммунного ответа и была бы максимально экологически безопасна.

У инагглютиногенных вакцинных штаммов низок уровень иммуногенно-сти, но его можно повышать как за счёт увеличения дозы, кратности и интервалов, а также при помощи иммуномодуляторов различной природы. Однако материалов для окончательного решения данного вопроса пока недостаточно.

Живые агглютиногенные и слабоагглютиногенные вакцины обладают, по сравнению с убитыми культурами, достаточно высоким уровнем иммуногенно-сти и эпизоотически безопасны. Однако это весьма относительно в связи с высокой степенью аглютиногенности первых и нестабильностью антигенных свойств-вторых.

Определенные надежды в решении проблем, существующих при проведении специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота, связывают с вакциной из слабоагглютиногенного штамма В. abortus 75/79-АВ, успешно зарекомендовавшего себя при оздоровлении неблагополучных пунктов в Алтайском крае.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследования

Работа выполнялась с 2001 по 2005 гг. во Всероссийском научно-исследовательском институте пантового оленеводства, на кафедре эпизоотологии и ВСЭ ИВМ АГАУ, а также в мараловодческих хозяйствах Алтайского края.

Биологические особенности маралов и систему ведения отрасли мы описывали, руководствуясь работами B.C. Галкина, В.Н. Егеря, И.И. Миронова, П.В. Митюшова, а также основываясь на собственных наблюдениях.

Материалом для изучения и анализа эпизоотической ситуации по бруцеллёзу маралов послужили архивные данные годовой ветеринарной отчётности Алтайского края за период с 1969 по 2003 гг. При этом выясняли количество неблагополучных по данной инфекции пунктов, число исследованных и реагирующих в серологических тестах (РА, РСК) животных, вынужденно убитых и иммунизированных противобруцеллёзными вакцинами маралов.

Для изучения приживаемости и возможности миграции вакцинного штамма В. abortus 75/79-АВ в ОПХ «Новоталицкое» было взято 20 маралух 4-5-летнего возраста, раннее не вакцинированных никакими противобруцеллёзными вакцинами. Всех животных забирковали индивидуальными новозеландскими бирками и сформировали 2 группы: в I группе — 15 животных (опытные), во II группе — 5 (контрольные).

Перед закладкой опыта всех животных исследовали в реакции агглютинации (РА) и реакции связывания комплемента (РСК). Их постановка и учёт регламентированы действующим «Наставлением по диагностике бруцеллёза животных» (2000).

Взятие крови и получение сыворотки для серологических исследований (РА, РСК) проводили следующим образом: животных фиксировали в панторезном станке (при содержании в виварии ВНИИПО в специальном расколе) и с правой стороны шеи в области яремной вены выстригали шерсть, накладывали жгут, место укола дезинфицировали 70°-ным раствором спирта (фото 1). Взятие крови осуществляли кровобрательной иглой Боброва А-26х4017И52. Пробы крови отбирали в бактериологические пробирки по 10-15 мл. Для получения сыворотки их помещали в термостат на 3 часа при температуре 37°С, после ретракции сгусток осаждали центрифугированием (1000-1500 об/мин). Сыворотку сливали и исследовали в течение 10 дней свежую либо замораживали, сохраняя в таком виде непосредственно до проведения серодиагностики.

Фото i. Взятие крови у опытных животных

Животных опытной и контрольной групп содержали совместно на протяжении всего опыта (4 месяца). Кормление маралух осуществлялось по типовым рационам, в который входило (из расчета на 1 голову); сена — 6-7 кг, силоса -5-6 кг, концентратов - 0,5 кг, соли - 15-18 г. Общая питательность суточного рациона составила 3,9-4,2 к, ед., что удовлетворяет потребностям для данной возрастной группы. Источником питьевой воды в зимнике служил ручей.

Иммунизацию маралух опытной группы проводили комиссионно, в панторезном станке. Вакцину из штамма В. abortus 75/79-АВ вводили подкожно, в область средней трети шеи, в дозе 50 млрд м.к., в объёме 5 мл. Разводили данный препарат в стерильном остуженном физиологическом растворе (0,85%-ный) из расчета одна доза для крупного рогатого скота в 10 мл растворителя. Шерсть на месте инъекции предварительно выстригали ножницами, а кожу обрабатывали 70° спиртом.

Динамику появления и угасания серологических реакций изучали, исследуя сыворотку крови в РА и РСК с единым бруцеллёзным биофабричным S- и R(ovis)-aHrareHOM (изготовленный 15.01.2003 г. НПФ «Биоцентр», г. Омск, серия 1, контроль 1, срок годности 12 месяцев).

Сыворотку крови исследовали на 15, 33, 55, 89 и 122 день после иммунизации. В каждый срок, после забора крови, проводили убой 4 маралух (3 из опытной и 1 из контрольной групп) с последующим отбором биоматериала и бактериологическим исследованием. От каждого животного были взяты следующие органы: парные лимфатические узлы (подчелюстные, заглоточные, околоушные, предлопаточные, паховые, надвыменные, бронхиальные, тазовые, мезентериальные, парааортальные), непарные (средостенный и портальный), а также печень и селезёнка.

Высевы из каждой пробы проводили на питательные среды, предварительно проверенные на ростовые качества: мясопептонный печёночный глюко-зо-глицериновый бульон (Ml 11Ш Б) и агар (МППГГА). Приготовление указанных питательных сред и методика посева регламентировано действующим «Наставлением по диагностике бруцеллёза животных» (2000).

Посевы инкубировали в термостате в течение 30 суток при температуре 37-38°С. Первичный осмотр проводили через сутки. В дальнейшем посевы просматривали каждые 3-4 суток визуально, при необходимости через лупу. На 7-й и 14-й день инкубирования их орошали посевным материалом и трижды учитывали результаты.

Выделенные культуры идентифицировали по тинкториальным (окраска мазков по Козловскому), морфологическим, культуральным свойствам и в реакции агглютинации на стекле с использованием набора компонентов для серологической дифференциации бруцелл. Методика окраски, а также постановка и учёт реакции регламентированы действующим «Наставлением по диагностике бруцеллёза животных» (2000).

Для изучения иммуногенных свойств вакцины из штамма В. abortus 75/79-АВ и определения оптимальной иммунизирующей дозы в ОПХ «Новота-лицкое» были сформированы 3 группы телят (6-месячного возраста) по 5 в каждой: I и II группы - опытные, III - контрольная. Всех животных забирковали индивидуальными новозеландскими бирками с последующим взятием крови для серологического исследования в РА и РСК. После получения отрицательных результатов нами была проведена закладка эксперимента.

Содержание телят маралов всех групп было совместное на протяжении всего опыта: в течение 6 месяцев в отдельном зимнике на маралоферме «Покровка», а по истечении данного срока в виварии ВНИИПО. Кормление животных в зимний период осуществлялось по типовым рационам, в который входило (из расчета на 1 голову): сена - 2,5-3 кг, силоса - 2-3 кг, концентратов - 1 кг, соли - 15-18 г. Общая питательность суточного рациона составила 2,2-2,5 к.ед., что удовлетворяет потребностям для данной возрастной группы. Источником питьевой воды служил ручей, текущий через зимник.

В виварии ВНИИПО телят кормили луговой травой (фото 2).

Корм задавали три раза в день по 10 кг, что составило по питательности 2,0-2,5 к.ед. (из расчёта на 1 голову). Воду для питья наливали при помощи шланга в специальную поилку. Источником соли служил «лизунец», расположенный в углу вивария.

Фото 2. Кормление опытных саюшек в виварии ВНИИПО.

Кормление и поение животных после инфицирования проводили в специальной одежде, которую по завершении опыта автоклавировали. Перед виварием был устроен дезбарьер с раствором едкого натра (3-5%-ный). При взятии крови использовали халаты и одноразовые перчатки. Кровобрательные иглы после очередного забора крови обеззараживали кипячением. Руки исследователей обрабатывали раствором хлорамина (1%-ный) или спиртом (70°).

Иммунизацию телят опытных групп проводили комиссионно, в панторезном станке. Вакцину из штамма В. abortus 75/79-АВ вводили подкожно, в область средней трети шеи, в объёме 5 мл, в дозе 50 млрд м.к. (животным первой группы) и 100 млрд м.к. (телятам второй группы). Разводили данный препарат в стерильном остуженном физиологическом растворе (0,85%-ный) из расчета одна доза для крупного рогатого скота (100 млрд м.к.) в 10 и 5 мл растворителя соответственно. Предварительно шерсть на месте инъекции выстригали ножницами, а кожу обрабатывали 70и спиртом.

Динамику появления и угасания серологических реакций изучали, исследуя сыворотку крови в РА и РСК с единым бруцеллёзным биофабричным S- и R(ovis)-aHTHreHOM на 15, 33, 55, 89, 122, 143 день после иммунизации, а также перед заражением и через 16, 22, 28, 35, 41 день после него.

Кроме того, для определения естественной резистентности телят были проведены исследования морфобиохимического состава крови по общепринятым методикам. Пробы крови отбирали в пробирки Флоринского в количестве 3-4 мл с добавлением антикоагулянта трилона-Б (3-4 капли). В цельной крови определяли общее количество лейкоцитов и эритроцитов (в камере Горяева в 1 мкл крови); в сыворотке крови: содержание общего белка - рефрактометрическим методом (ИФР-22), фракции белка - нефелометрическим методом по И.П. Кондрахину (1985).

Технология взятия крови и приготовление образцов сыворотки подробно описана в предыдущем опыте.

Заражение животных патогенным штаммом В. abortus 544 (музейный штамм, ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН) с целью проверки иммунитета проводили через 6 месяце после иммунизации, комиссионно, с соблюдением правил работы как с маралами, так микроорганизмами. Для этого всех телят перевезли из ОПХ «Новоталицкое» в виварий ВНИИПО; каждое животное фиксировали в специальном расколе силой 3 человек, 4-й наносил суспензию в объёме 0,1 мл на конъюнктиву каждого глаза с последующим растиранием (фото 3). Инфицирующая доза была равна 15 млн м.к., что составило 7,5 млн м.к. бруцелл в 0,1 мл.

Суспензию из патогенного штамма готовили путём последовательных разведений взвеси бруцелл в физиологическом растворе (по стандарту мутности).

Фото 3. Заражение телят патогенным штаммом бруцелл

Убой животных проводили по истечении 41 дня после заражения при помощи миорелаксанта «Адилин-супер» (изготовленный ООО «Ветбиосервис», г. Казань, партия № 1, дата выпуска 26.05.2002 г., срок годности - 18 мес.). Раствор в концентрации 3,5% вводили внутримышечно, в среднюю треть шеи в объеме 1, 1,5, 2, 3, 4 и 5 мл на животное, что составило, соответственно, дозу 0,09; 0,135; 0,18; 0,27; 0,36 и 0,45 г сухого вещества. Во время эксперимента вели учет: температуры тела, частоты дыхания, сердечных сокращений, акта ру-менации, глазного и болевого рефлекса, тактильной чувствительности, а также времени начала действия препарата и наступления летального исхода.

Указанные клинические методы исследования проводили по общепринятым в ветеринарии методам.

Патологическую картину бруцеллёза у вынужденно убитых телят маралов изучали методом полного патологоанатом и чес кого вскрытия по методике МС. Жакова (1977).

Вскрытие с последующим отбором биоматериала и бактериологическим исследованием, а также утилизацию животных проводили на скотомогильнике учхоза «Пригородное». От каждого животного были взяты следующие органы: парные лимфатические узлы (подчелюстные, заглоточные, околоушные, пред-лопаточные, паховые, надвыменные, бронхиальные, тазовые, мезентериальные, парааортальные), непарные (средостенный и портальный), а также печень и селезёнка.

Высевы из каждой пробы проводили на питательные среды, предварительно проверенные на ростовые качества: мясопептонный печёночный глюко-зо-глицериновый бульон (МППГГБ) и агар (МППГГА) - фото 4. Методика посева регламентирована действующим «Наставлением по диагностике бруцеллёза животных»(2000).

Фото 4. Лабораторные исследования

Посевы инкубировали в термостате в течение 30 суток при температуре 37-38°С. РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННА. ■

41 *

Первичный осмотр проводили через сутки. В дальнейшем посевы просматривали каждые 3-4 сутки визуально, при необходимости через лупу. На 7-й и 14-й день инкубирования их орошали посевным материалом и трижды учитывали результаты.

Выделенные культуры идентифицировали по тинкториальным (окраска мазков по Козловскому), морфологическим, культуральным свойствам и в РА на стекле. Пластинчатую РА на стекле изучали S- и R-бруцеллёзными сыворотками и трипофлавином.

Методика окраски, а также постановка и учёт реакции регламентирован действующим «Наставлением по диагностике бруцеллёза животных» (2000).

Для изучения иммунологической эффективности и антигенных свойств вакцин из штаммов В. abortus 82 и В. abortus 75/79-АВ в ОПХ «Новоталицкое» были сформированы 3 группы телят (6-месячного возраста) по 5 в каждой: I и II группы - опытные, III - контрольная. Всех животных пометили индивидуальными новозеландскими бирками и произвели взятие крови с последующим серологическим исследованием сыворотки в РА и РСК. После получения отрицательных результатов в тест-системах была проведена закладка опыта.

Содержание телят маралов всех групп, на протяжении всего опыта, было совместное: в течение 6 месяцев в отдельном зимнике на маралоферме «Покровка», а по истечении - в виварии ВНИИПО. Кормление животных в зимний период осуществлялось по типовым рационам, в который входило (из расчета на 1 голову): сена - 2,5-3 кг, силоса — 2-3 кг, концентратов - 1 кг, соли — 15-18 г, что по питательности составило 2,2-2,5 к.ед. Источником питьевой воды служил ручей, текущий через зимник.

В виварии ВНИИПО телят кормили луговой травой. Корм задавали три раза в день по 10 кг, что составило по питательности 2,0-2,5 к.ед. (из расчёта на 1 голову). Воду для питья наливали при помощи шланга в специальную поилку. Источником соли служил «лизунец».

Кормление и поение животных после инфицирования проводили с соблюдением санитарных правил.

Иммунизацию телят опытных групп проводили комиссионно, в панторезном станке. Вакцину из штаммов В. abortus 82 и 75/79-АВ вводили подкожно, в область средней трети шеи, в объёме 5 мл, в дозе 50 млрд м.к. Разводили данные препараты в стерильном остуженном физиологическом растворе (0,85%-ный) из расчета одна доза для крупного рогатого скота (100 млрд м.к.) в 10 мл растворителя. Предварительно шерсть на месте инъекции выстригали ножницами, а кожу обрабатывали 70° спиртом.

Реактогенные свойства вакцины изучали в течение 13 дней путем пальпации места инъекции. При этом учитывали болезненность, температуру на месте введения препарата, размеры отечности и её консистенцию, также проводили термометрию опытных и контрольных животных по известной в ветеринарии методике. Кроме этого нами были проведены наблюдения за общим состоянием животных.

Динамику появления и угасания серологических реакций у подопытных животных изучали, исследуя сыворотку крови на бруцеллез в РБП, РА и РСК с единым бруцеллёзный биофабричный S- и R(bovis, оу1з)-антигенами до вакцинации и через 5, 10,13, 29, 62, 91, 125, 153 дня после нее, а также перед заражением (спустя 6 месяцев) и через 7, 14, 21, 28, 35, 42, 50 дней после заражения. Постановка и учёт указанных методов проводили согласно регламентированным методикам. При постановке РБП использовали цветной антиген (антиген бруцеллёзный для РБП, производства Щёлковского биокомбината, серия 4, годен до 12.2005 г.). Для РСК использовали R(ovis) — производства НПФ «Биоцентр», г. Омск; и R(bovis)-aHTHreHbi — производства ВНИИБТЖ (из штамма 16/4, JI.B. Дегтяренко).

Кроме того, для определения естественной резистентности телят были проведены исследования морфобиохимического состава крови по общепринятым методикам.

• Заражение животных патогенным штаммом В. abortus 544 (музейный штамм, ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН) с целью определения иммунологической эффективности вакцин из штаммов 82 и 75/79-АВ проводили через 6 месяцев после иммунизации. Для этого всех телят перевезли из ОПХ «Новоталицкое» в виварий ВНИИПО; каждое животное фиксировали в специальном расколе силой 3 человек, 4-й наносил суспензию в объёме 0,1 мл на конъюнктиву каждого глаза с последующим растиранием. Инфицирующая доза была равна 30 млн м.к., что составило 15 млн м.к. бруцелл в 0,1 мл.

Суспензию из референтного штамма 544 готовили по аналогии с предыдущим опытом.

Убой животных проводили по истечении 50 дней после заражения при помощи миорелаксанта «Адилин-супер» (3,5%-ный). Раствор вводили внутримышечно, в среднюю треть шеи, в объеме 2,0 мл на животное, что составило дозу 0,18 г действующего вещества.

Патологическую картину бруцеллёза у вынужденно убитых телят маралов изучали по методике М.С. Жакова (1977).

Вскрытие с последующим отбором биоматериала и бактериологическим исследованием, а также утилизацию животных проводили на скотомогильнике учхоза «Пригородное». От каждого животного были взяты, как и в предыдущем опыте, парные и непарные лимфатические узлы, а также печень и селезёнка.

Высевы из каждой пробы проводили на питательные среды, предварительно проверенные на ростовые качества: мясопептонный печёночный глюко-зо-глицериновый бульон (Ml И 11 1 Б) и агар (Ml И111 А). Методика посева регламентирована действующим «Наставлением по диагностике бруцеллёза животных» (2000).

Посевы инкубировали в термостате в течение 30 суток при температуре 37-38°С. Первичный осмотр проводили через сутки. В дальнейшем посевы просматривали каждые 3-4 сутки визуально, при необходимости через лупу.

На 7-й и 14-й день инкубирования их орошали посевным материалом и трижды учитывали результаты.

Выделенные культуры идентифицировали по тинкториальным (окраска мазков по Козловскому), морфологическим, культуральным свойствам и в РА на стекле. Пластинчатую РА на стекле изучали с S- и R-бруцеллёзными сыворотками и трипофлавином.

Патоморфологические изменения макрокартины органов при экспериментальном бруцеллезе изучали на секции у животных визуально, а микрокартины — при анализе микроструктуры приготовленных гистологических срезов под 56-кратным увеличением биологического микроскопа МБИ-1. Методика приготовления гистосрезов подробно описана в соответствующем разделе. При описании микрокартины руководствовались атласом микроскопического и ультрамикроскопического строения клеток, тканей и органов.

Полученный цифровой массив подвергался стандартной статистической обработке в операционной системе Windows 2000 ХР на PC Pentium 4 с помощью программы Microsoft Excel 2000 г.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Тяпин, Владимир Валерьевич, 2005 год

1. Авилов В.М. Селиверстов В.В., Пылинин В.Ф. Бруцеллез животных и его специфическая профилактика // Ветеринария. — 1997. — № 7. — С. 3-13.

2. Авилов В.М., Косилов И.А., Аракелян П.К. Состояние и перспектива специфической профилактики бруцеллеза овец // Ветеринария. 1999. — № 3. — С. 8-12.

3. Аракелян П.К. Оптимизация противоэпизоотических мероприятий при заболеваниях, вызываемых у овец бруцеллами видов melitensis и ovis: Автореф. дис. докт. вет. наук. Омск, 1997. — 38 с.

4. Бадалян С.Г. Определение возможности выделения вакцинной культуры из штамма Рев-1 с молоком овцематок, привитых разными дозами этой вакцины в период лактации // Бюл. ВИЭВ. 1987. - Вып. 64. - С. 73-75.

5. Базалей Ф.К., Евстафиади К.П., Таран И.Ф. и др. Применение вакцин из штаммов В. abortus 19 и В. melitensis Rev-1 для профилактики бруцеллеза овец // Ветеринария. 1985. - № 4. - С. 32.

6. Бойко А.А. Практика искоренения бруцеллеза в СССР // Бруцеллез и туберкулез сельскохозяйственных животных: Матер. Междунар. конф. МЭБ. -М., 1967.-С. 18-26.

7. Вершилова П.А., Голубева А.А. Бруцеллез в СССР и пути его профилактики. -М.: Медицина, 1970. — 190 с.

8. Вершилова П.А. Профилактическая вакцинация животных против бруцеллеза // Бруцеллез в СССР и пути его профилактики. — М., 1970. — С. 157-160.

9. Виттоз Р. Доклад Международного эпизоотического бюро // Бруцеллез и туберкулез сельскохозяйственных животных: Матер, междунар. конф. МЭБ.-М., 1967.-С. 9-18.

10. Вышелесский С.Н. Научная оценка современных мер борьбы с бруцеллезом сельскохозяйственных животных // Труды 34-го пленума ветеринарной секции. М., 1955. - С. 5-17.

11. Вышелесский С.Н. Бруцеллез крупного рогатого скота // Избранные труды.-М., 1977.-С. 134-153.

12. Громашева В.М., Хлыстунов А.Г. Роль специфической профилактики в системе контроля эпизоотического процесса бруцеллёза овец // Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве: Сб. науч. тр. ИЭВС и ДВ. — Новосибирск, 2000. С. 230-234.

13. Димов С.К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом бруцеллеза // Эпизоотология, диагностика и профилактика туберкулеза и бруцеллеза животных / Сибирское отд-ние. Новосибирск, 1989. - С. 113-117.

14. Димов С.К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом бруцеллеза: Автореф. дисс. докт. вег. наук. — Новосибирск, 1993. — 45 с.

15. Дуранов B.C. Свойства бруцелл, выделенных из абортированных плодов коров, привитых вакциной из штамма 82 // Ветеринария. — 1975. — № 11. -С. 32-33.

16. Жованик П.Н., Демченко А.В., Божко Г.А. Бруцеллез. — Киев: Урожай, 1975. 224 с.

17. Жаков М.С. Анализ патологоанатомического вскрытия. — М.; Колос,1977.

18. Здродовский П.Ф. Бруцеллез. — М.: Медицина, 1953. — 24 с.

19. Иванов А.А. Сравнительная характеристика противоэпизоотической эффективности некоторых противобруцеллёзных вакцин в овцеводческих хозяйствах: Автореф. дис. канд. вет. наук. — Омск, 1996. — 20 с.

20. Иванов М.М., Климанов А.И., Попова Г.Г. и др. Оценка эффективности противобруцеллёзных вакцин из штаммов 19, 82, 89/23, Н-12 и Rev-1 // Ветеринария. 1971. - № 7. - С. 32-34.

21. Иванов Н.П. Основные мероприятия по борьбе с бруцеллезом сельскохозяйственных животных в Казахстане // Вестник с.-х. науки Казахстана. — 1981.-№7.-С. 64-72.

22. Иванов Н.П., Кашкинбаев К.А., Султанов А.А. Реактивность организма овец на введение вакцины из штамма Rev-1 // Вестник с.-х. наук Казахстана. 1988. - № 4. - С. 70.

23. Искандеров М.И. Иммунологическая реакция крупного рогатого скота при использовании малой дозы вакцины из штамма 19: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 1986. - 21 с.

24. Исхаков О.В., Косилов И.А. и др. Хроническим болезням — надежный заслон // Ветеринария. — 1986. — № 2. — С. 8-10.

25. Исхаков О.В., Карпенко И.Г., Кузьмин Г.Г. и др. Итоги применения противобруцеллезной вакцины крупному рогатому скоту из штамма 82 в хозяйствах РСФСР // Сборник научных трудов Казанского ветеринарного института. 1980 (1981). - № 135. - С. 34-44.

26. Исхаков О.В. Роль и место вакцинации в системе противобруцеллёзных мероприятий: Автореф. дис. канд. вет. наук. Ленинград, 1991. - 20 с.

27. Какоулин Т.Е., Сазонов Ю.И. Изучение реактогенных и иммуноген-ных свойств некоторых противобруцеллезных вакцин (сообщение 1) // Сборник трудов Иркутской НИВС. Иркутск, 1976. - № 3. - С. 106-108.

28. Какоулин Т.Е., Сазонов Ю.И. Изучение реактогенных и иммуноген-ных свойств некоторых противобруцеллезных вакцин (сообщение 2) // Сборник трудов Иркутской НИВС. Иркутск, 1976. - № 3. - С. 109-113.

29. Касымов Т.К. Эпизоотология и оптимизация противобруцеллезных мероприятий в условиях Кыргызстана: Автореф. дис. докт. вет. наук — Новосибирск,2002. 47 с.

30. Касьянов А.Н., Ягудин Р.Г., Искандеров М.И. Течение вакцинного процесса у телок, иммунизированных малыми дозами вакцины из штамма 19 // Пути ликвидации инфекционных и инвазионных болезней с.-х. животных. — Новосибирск, 1985. С. 23-25.

31. Климанов А.И., Малахова Т.И., Шумилов К.В. и др. Результаты изучения биологических свойств штамма В. abortus 82 // Тр. института ВГНКИ. — 1983.-С. 14-19.

32. Клочков А.А., Шумилов К.В., Ромахов В.А. и др. Изучение свойств вакцинного штамма 104 М, пассированного через организм нетелей и морских свинок // Бюллетень ВИЭВ. М., 1981. - № 43. - С. 47-50.

33. Кондрахин И.П., Курилов Н.В. и др. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание. — М.: Агропромиздат, 1985. — 287 с.

34. Клочков Г.С., Скореев А.А. Реактогенность вакцины из штамма Rev-1 // Пути совершенствования профилактики и диагностики бруцеллеза с.-х. животных: Сб. науч. тр. Омск, 1990. - С. 58-62.

35. Косилов И.А. О провоцирующих свойствах вакцины из инагглю-тиногенного штамма В-1 // Сборник научных трудов СибНИВИ. — Омск, 1972. -№20.-С. 65.

36. Косилов И.А., Попов А.И., Байгазинов Ш.А. Некоторые результаты применения вакцины из штамма В. abortus 104 М телятам в производственных условиях // Сборник научных трудов СибНИВИ. Омск. 1975. - № 22. — С. 18-23.

37. Косилов И.А., Дегтяренко JI.B., Константинов А.П. и др. Иммуноген-ные свойства вакцины из штамма В. abortus 104 М в опыте на коровах // Научно-технический бюллетень ВАСХНИЛ, Сибирское отд-ние ИЭВС и ДВ. Новосибирск, 1985.-№32.-С. 41-45.

38. Косилов И.А. Роль специфической профилактики в системе противобруцеллёзных мероприятий // Эпизоотология и меры борьбы с инфекционными болезнями животных. Новосибирск, 1985. — С. 30-34.

39. Косилов И.А., Димов С.К., Падалица А.Г. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма 82 в общем комплексе противобруцеллёзных мер // Эпизоотология, диагностика и меры борьбы с инфекционными болезнями. Новосибирск, 1986. - С. 37-43.

40. Косилов И.А., Димов С.К., Джупина С.И. Оптимизация системы мер борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота // Современные проблемы профилактики зоонозных болезней и пути их решения: Матер. 3-й республ. науч.-практ. конф. — Гродно, 1987. С. 98.

41. Косилов И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. Новосибирск, 1992.-260 с.

42. Косилов И.А., Аракелян П.К., Димов С.К., Хлыстунов А.Г. Бруцеллез сельскохозяйственных животных: Монография / Под ред. И.А. Косилова. — Новосибирск, 1999.-344 с.

43. Косилов И.А., Аракелян П.К. Противоэпизоотическая и противоэпидемическая эффективность специфической профилактики бруцеллеза овец // Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве. Новосибирск, 2000. - С. 120-130.

44. Косилов И.А., Аракелян П.К. Оптимизация противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе мелкого рогатого скота // Ветеринария. — 2001, -№6.-С. 12-15.

45. Кузьмин Г.Н. Изучение иммуногенных свойств инагглютиногенных штаммов бруцелл с различной степенью диссоциации: Автореф. дис. канд. вет. наук. — М., 1970.-22 с.

46. Курдина Д.С. Изучение вакцинного штамма В. melitensis Rev-1 (Сообщение 1) // ЖМЭИ. 1961.№ 11. - С. 99-104.

47. Курдина Д.С. Сравнительное изучение остаточной вирулентности вакцинных штаммов бруцелл разных типов (Сообщение 2) // ЖМЭИ. — 1963. -№4. -С. 97-102.

48. Куренская Н.И. Роль рациональных схем специфической профилактики и поствакцинальной диагностики в системе противобруцеллёзных мероприятий у крупного рогатого скота: Автореф. дисс. канд. вет. наук. Барнаул, 1998.-25 с.

49. Локтева Ф.П., Фомина Л.М. Производственное испытание бруцеллезной вакцины ЛенНИВИ на крупном рогатом скоте // Сборник трудов Ростовской НИВС. Ростов, 1968. -№ 13 (1).-С. 28-33.

50. Локтева Ф.П. Результаты широкого применения бруцеллезной вакцины из штамма 19 на крупном рогатом скоте в хозяйствах Ростовской области // Сборник трудов Ростовской НИВС. Ростов, 1968. - № 13 (1). - С. 4-22.

51. Лукин А.К. Результаты применения вакцины из штамма 82 при противобруцеллезных мероприятиях в Саратовской области // Материалы Всесоюзной научной конференции. Омск, 1980. — С. 247-249.

52. Луницын В.Г. Болезни пантовых оленей. — Новосибирск, 1998. — 96 с.

53. Луницын В.Г. Пантовое оленеводство России. Барнаул, 2004. — 445 с.

54. Львов А.Я. Результаты прививок крупного рогатого скота вакциной из штамма № 19 // Материалы межведомственной конференции по борьбе с бруцеллёзом. — Алма-Ата, 1963. — С. 126-128.

55. Малахова Т.И., Шумилов К.В., Саморуков Ю.А. и др. Изучение свойств эталонной и производственной серий вакцины из штамма В. abortus 82 // Тр. ин-та. ВГНКИ. 1983. - С. 6-11.

56. Мироненко В.А. Состояние иммунной системы у крупного рогатого скота при иммунизации штаммами В. abortus 104 М и 19 в уменьшенных дозах при бруцеллёзе // Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1986. С. 63-69.

57. Мироненко В.А., Кандауров Б.И. Т- и Б-системы иммунитета у телят после введения малых доз бруцелл // Проблемы ветеринарной иммунологии. — М., 1983.-Т. 57.- С. 97-100.

58. Морозов И.Ф., Сочнев В.В. Профилактика и ликвидация бруцеллеза в зоне интенсивного животноводства // Материалы Всесоюзной научной конференции. Омск, 1980. - С. 234-236.

59. Настехин А.Г. Ликвидация бруцеллёза крупного рогатого скота в Московской области // Бруцеллёз и туберкулёз сельскохозяйственных животных: Матер, междунар. конф. МЭБ. -М.: Колос, 1967.

60. Никифоров И.П., Морковкина В.Н. Причины серологических реакций у крупного рогатого скота в отдаленные сроки после прививки вакцины из штамма 82 // Научно-технический бюллетень ИЭВС и ДВ. — Новосибирск, 1980. -№ 19.-С. 3-8.

61. Никифоров И.П., Разумовская В.В., Шумилов К.В. и др. Апробация вакцины из штамма В. abortus 75/79-АВ на крупном рогатом скоте // Ветеринария. 1995. - № 8. - С. 20-23.

62. Никифоров И.П. Живые слабоагглютиногенные вакцины в системе противобруцеллёзных мероприятий: Дис. докт. вет. наук (в форме научного доклада). Новосибирск, 1996. - 46 с.

63. Новицкий А.А. Оптимизация специальных мероприятий против бруцеллеза крупного рогатого скота: Автореф. дис. докт. вет. наук. — Казань, 1989. -46 с.

64. Новицкий А.А. Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота // Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным. —М., 1989. — С. 159-161.

65. Новицкий И.П., Троицкая Л.И., Горбунов В.И. Иммунологические реакции у крупного рогатого скота, привитого противобруцеллезной вакциной из штамма 82 // Хронические инфекции животных. — Новосибирск, 1981. — С. 17-20.

66. Орлов Е.С. Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза в СССР // Бюл. ВИЭВ. 1971. - Вып. 10. - С. 5-12.

67. Орлов Е.С. Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза животных // Новое в лечении и профилактике инфекционных болезней животных.-М., 1971.-С. 52-72.

68. Орлов Е.С., Данышев И.А., Клочков А.А. К производственной проверке штамма В. abortus В-1 при бруцеллезе крупного рогатого скота // Сборник трудов Саратовской НИВС. Саратов, 1967. - № 7. - С. 26-31.

69. Орлов Е.С. Сравнительное изучение вирулентных и иммуногенных свойств шести вакцинных штаммов бруцелл // Бюллетень ВИЭВ. — М., 1971. -№ 10.-С. 160-172.

70. Орлов Е.С., Акулов А.В., Шумилов К.В. Испытание вакцин из штаммов 104 М и 19 на телятах // Ветеринария. 1972, - № 4. - С. 29.

71. Падалица А.Г. Противоэпизоотическая эффективность вакцины из штамма B.abortus 82: Автореф. дис. канд. вет. наук. — Новосибирск, 1983. — 21 с.

72. Пинигин А.Ф., Меринов С.П., Даниленко С.К. К вопросу о бруцеллезе яков // Тр. Иркутск, науч.-исслед. противочум. ин-та. Сибири и Дальнего Востока. 1966. - Т. 26. - С. 86-93.

73. Пинигин А.Ф. Бруцеллез северных оленей. — Иркутск, 1971. — 200 с.

74. Попов А.И. Специфическая профилактика бруцеллеза разными вакцинами в мясном скотоводстве: Автореф. дис. канд. вет. наук. — Улан-Уде: Бурятский СХИ, 1971. 32 с.

75. Попова Т.Г. Диагностическое значение методов исследования на бруцеллез молока коров, реиммунизированных противобруцеллезными вакцинами: Автореф. дисс. канд. вет. наук. — Новосибирск, 1990. — 16 с.

76. Постричева О.В. Бруцеллез промысловых животных Казахстана: Автореф. дис. канд. вет. наук. — Алма-Ата, 1966. — 20 с.

77. Потапов Н.М. Некоторые вопросы эпизоотологии и профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота в Приморском крае // Материалы Всесоюзной научной конференции. — Омск, 1980. С. 232-233.

78. Ременцова М.М., Постричева О.В., Рыбалко С.И. Бруцеллез промысловых животных. М., 1969, - 228 с.

79. Садыков С.Ж. О результатах производственного испытания вакцины из штамма Rev-1 в хозяйствах Карагандинской области // Инфекционные и незаразные болезни сельскохозяйственных животных в Казахстане: Сб. науч. тр. -Алма-Ата, 1983. С. 59-63.

80. Сазонов Ю.И. Опыт применения вакцины из слабоагглютиногенного штамма В-1 // Сборник трудов Иркутской НИВС. 1976. - № 3. - С. 37-40.

81. Сайченко В.И. Эпизоотологический мониторинг при бруцеллезе крупного рогатого скота на территории с широким применением вакцин: Автореф. дис. канд. вет. наук. Новосибирск, 1995. — 22 с.

82. Салмаков К.М. Результаты испытания новой противобруцеллёзной вакцины на морских свинках и крупном рогатом скоте // Материалы доклада научной конференции, посвященной 50-летию Великого Октября. — Казань, 1967.-С. 56.

83. Салмаков К.М. Живая вакцина против бруцеллеза из штамма 82 // Ветеринария. 1975. - № 7. - С. 43.

84. Салмаков К.М. Изыскание и совершенствование вакцинных препаратов против бруцеллёза // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллёзом и туберкулёзом животных: Тез. докл. конф. — Новосибирск, 1987. -С. 26-35.

85. Скляров О.Д. Влияние инертных газов на сохранность свойств бруцелл в вакцине из штамма В. abortus 19: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 1990.-24 с.

86. Студенцов К.П. Бруцеллез животных. Алма-Ата: Кайнар, 1975.234 с.

87. Султанов А.А. Динамика поствакцинальных антител у ярочек, иммунизированных разными дозами вакцины из штамма Rev-1 // Сборник научных трудов КазНИВИ. 1984, - С. 3-6.

88. Султанов А.А. Динамика поствакцинальных антител у овцематок, ревакцинированных разными дозами вакцины из штамма В. melitensis Rev-1 //

89. Меры борьбы с инфекционными, паразитарными и незаразными болезнями сельскохозяйственных животных в Казахстане: Сб. науч. тр. — Алма-Ата, 1985. С. 33-39.

90. Султанов А.А. Оптимизация специальных противобруцеллезных мероприятий в овцеводстве: Автореф. дис. докт. вет. наук. — Новосибирск, 1991. -40 с.

91. Тавамайшвили М.Е., Ломинейшвили М.М., Гичилаидзе А.Д. Иммунизация крупного рогатого скота против бруцеллеза вакциной из штамма

92. B. abortus 19 в отгонном скотоводстве // Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным. — М., 1989.1. C. 171-173.

93. Третьяков Ю.К., Софронов Н.В. Сравнительное изучение вакцинных штаммов бруцелл // Бруцеллез в Казахстане. — Алма-Ата: Изд-во «Наука» Каз. ССР, 1970.-С. 65-69.

94. Третяк Н.Т. Экспериментальное изучение бруцеллеза маралов // Тр. ин-та ЦНИЛПО. -М., 1984.-Т. 30. С. 156-160.

95. Третяк Н.Т. Биохимические изменения крови маралов в норме и при бруцеллезе // Труды Новосибирского СХИ. Новосибирск, 1972. - Т. 69. - С. 23-25.

96. Третяк Н.Т. Бруцеллез маралов и его значение в эпизоотологии инфекций среди домашних животных // Труды Новосибирского СХИ. — Новосибирск, 1972. Т. 69. - С. 15-17.

97. Третяк Н.Т. Бруцеллез маралов // Труды Новосибирского СХИ. -Новосибирск, 1972. Т. 69. - С. 12-14.

98. Третяк Н.Т. Диагностика бруцеллеза маралов // Материалы научно-практической конференции АГАУ. Барнаул, 1996. — С. 76-77.

99. Третяк Н.Т. Динамика поствакцинальных серологических реакций и значение биологической пробы в комплексе оздоровления маралов от бруцеллеза // Труды института ЦНИЛПО. М., 1982. - Т. 28. - С. 118-122.

100. Третяк Н.Т. Изучение иммунизирующих свойств противобруцеллез-ной вакцины из штамма № 19 на маралах // Труды института АНИВС. Барнаул, 1972. - Вып. 3.-С. 128-129.

101. Третяк Н.Т. Изучение иммуногенных свойств вакцины из штамма 82 при бруцеллезе маралов // Труды АСХИ. Барнаул, 1981.-С.12-18.

102. Третяк Н.Т. Изучение противобруцеллезной вакцины из штамма 82 на маралах // Труды АГАУ. Барнаул, 1990. - С. 43-47.

103. Третяк Н.Т. Некоторые вопросы эпизоотологии и диагностики бруцеллеза маралов // Труды института ЦНИЛПО. — Горно-Алтайск, 1971. — Вып.З.-С. 167-171.

104. Третяк Н.Т. О диагностической ценности РА на бумаге при выявлении бруцеллеза у маралов // Труды института АСХИ. Барнаул, 1971. — С. 52-54.

105. Третяк Н.Т. Об эпизоотологии и лабораторной диагностике бруцеллеза маралов // Труды института АНИИЗиС. Барнаул, 1971. - Вып. 2. -С. 431-434.

106. Третяк Н.Т. Оздоровительные и закрепительные мероприятия при бруцеллезе маралов в совхозе «Абайский» // Труды института АСХИ. Барнаул, 1981.-С. 3-7.

107. Третяк Н.Т. Отчет борьбы и специфической профилактики бруцеллеза маралов // Информ. листок Алт. ЦНТИ. Барнаул, 1985. - Вып. 70-87. — 4 с.

108. Третяк Н.Т. Серологические реакции при диагностике бруцеллеза маралов // Труды института АСХИ. Новосибирск, 1972. - Т. 69. — С. 41-43.

109. Третяк Н.Т. Сравнительные показатели крови у маралов Горного Алтая в разные сезоны года // Труды института АСХИ. — Новосибирск, 1984. — С. 50-53.

110. Третяк Н.Т., Лещенко Л.П., Осокина Г.Н. Изучение консервированных пантов, пантогематогена и патологического материала маралов на бруцеллез // Труды института Новосибирского СХИ. Новосибирск, 1972. — Т. 69. -С. 30-32.

111. Третяк Н.Т., Хорьков И.А. Рекомендации по профилактике и борьбе с бруцеллезом маралов в хозяйствах Алтайского края // Труды института АСХИ. Барнаул, 1978. - 12 с.

112. Третяк Н.Т., Хорьков И.А. Изучение иммунизирующих свойств про-тивобруцеллезной вакцины из штамма 19 на маралах в производственных условиях // Труды института ЦНИЛПО. Барнаул, 1975. - С. 149-150.

113. Третяк Н.Т., Хорьков И.А. Об эпизоотологии и бактериологической диагностике бруцеллеза маралов // Труды института АСХИ. — Барнаул, 1971. — С. 59-62.

114. Триленко П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. — JL: Колос, 1976.-С. 210-249.

115. Уласевич П.С., Аливердиев А.А., Юсупов О.Ю. Иммунизация овец вакциной из штамма В. melitensis Rev-1 // Ветеринария. — 1975. — № 12. -С. 57-59.

116. Уласевич П.С. Применение вакцины из штамма Rev-1 в целях профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота // Труды ВИЭВ. 1974. - Т. 42. -С. 217-219.

117. Чернышева М.И. Значение метода иммунофлюоресценции в диагностике бруцеллёза // Бюлл. ВИЭВ. 1971. - Вып. 10. - С.29-32.

118. Шумилов К.В., Касьянов А.Н., Ромахов В.А. Результаты изучения вакцинного штамма В. abortus 104 М // Сборник трудов ВИЭВ. М., 1984. -№61.-С. 10-21.

119. Шумилов К.В., Акулов А.В. Изучение вакцинных штаммов В. abortus 104 М, В. melitensis Rev-1 и В. abortus 82 на крупном рогатом скоте // Труды ВИЭВ. М.,1977. - Т.45. - С. 29-37.

120. Шумилов К.В. Оптимальные иммунизирующие дозы вакцинных штаммов бруцелл // Ветеринария. 1979. — № 8. - С. 31-34.

121. Шумилов К.В. Разработка и усовершенствование средств и методов специфической профилактики и диагностики бруцеллёза животных: Дис. докт. вет. наук (в форме научного доклада). — М., 1987. 48 с.

122. Шумилов К.В., Альбертян А.А. Вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота // Ветеринария. 1984. - № 12. - С. 26-28.

123. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков А.А. и др. Биологические свойства вакцинного штамма В. abortus 104 М // Сборник трудов ВИЭВ. — М.,1983. -№ 57.-С. 42-47.

124. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков А.А. и др. Иммунизация телок малой дозой вакцины из штамма В. abortus 104 М // Бюллетень ВИЭВ. — М, 1983.-№51.-С. 71-74.

125. Шумилов К.В., Малахова Т.И., Климанов А.И. и др. Изучение стабильности штамма В. abortus 82, предложенного в качестве вакцинного // Труды института ВГНКИ. 1983. - С. 20-24.

126. Юсковец М.К. Результаты оздоровления хозяйств с помощью вакцинации // Бруцеллез сельскохозяйственных животных. М., 1953. - С. 39-57.

127. Юсковец М.К. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. М., 1960.- 141 с.

128. Юсупов О.Ю. Система мер борьбы с бруцеллезом овец в условиях отгонного животноводства // Сборник материалов научной сессии РАСХН. — М., 1999.— С.176-177.

129. Alton G.G. Duration of immunity produced in goats by Rev.l Brucella melitensis vaccine // J.Comp. Path. 1966. - Vol. 76. - P. 241-253.

130. Alton G.G. Further studies on the duration of immunity produced in goats by the Rev.l Brucella melitensis vaccine // J. Сотр. Path. 1968. - Vol. 78. - P. 173-178.

131. Alton G.G., Plommet M. Brucellosis summit in Geneva. Report of a meeting of the FAO / WHO Expert Committee on Brucellosis, 12-19 November 1985 // WHO (Expert Committee on Brucellosis) chronicle. 1986. - Vol. 40. - № 1. -P. 19-21.

132. Alton G.G. Recent development in vaccination against bovine brucellosis // Aust. veter. 1978. - Vol. 54. - № 12. - P. 551-557.

133. Alton G.G., Elberg S.S., Crouch D. Rev-1 Brucella melitensis vaccine the stability of the degree of attenuation // J. Сотр. Path. — 1967. — Vol. 77. -P. 293-300.

134. Alton G.G. The control of bovine brucellosis. Recent development // World anim. Rev. 1981. - Vol. 39 - P. 17-24.

135. Alton G.G., Corner L.A., Plackett P. Vaccination of cattle against brucellosis using either a reduced dose of strain 19 or one or two doses of 45/20 vaccine // Austral. Vet. J. 1983 - Vol. 60 (6). - P. 175-177.

136. Alton G.G., Corner L.A. Vaccination of heifers with a reduced dose of B. abortus strain 19 vaccine before first mating // Austral. Vet. J. 1981. - Vol. 57. -№ 12.-P. 548-550.

137. Alton G.G., Corner L.A., Plackett P. Vaccination against Bovina Brucellosis // Ltd Intemat. Symp. on Bruceliosis. 1983. - P. 56.

138. Alton G.G., Corner L.A., Plackett P. Vaccination of pregnant cows with low doses of B. abortus strain 19 vaccine // Austral. Vet. J. 1980. - Vol. 56. - № 8. -P. 369-372.

139. Bang В., Stribold T. The etiology of contagions abortion Zeitschrift // Tiermed. — 1897. P. 103-105.

140. Baroton D.T., Lomrae J.R. Reduced dose whole vaccination against brucellosis; a review of recent experience // S. Amer. Vet. Med. Ass. — 1980. -Vol. 177.-№12.-P. 1218-1220.

141. Beckett F.W., Mac Diarmid S.C. The effect of reduced dose Brucella abortus strain 19 vaccination in accredited dairy herds // Brit. Vet. J. - 1985. -Vol. 141. -№ 5. — P. 507-514.

142. Berthelon M., Royal L., Rampin D. Experimentation d'un nouveau vaccin antibrucellinue // Rev. Med. Vet. 1962. - Vol. 113 (11). - P. 1-9.

143. Burki F. Standardising der Komplementbindings reaktion auf brucellosis // Zbl. Bact. 1. - Abt. Orig. - 1961. - Vol. 183 - № 2. - P. 225.

144. Butler Т.Е. Glass and subglass antibody response of Brucella abortus strain 19 / Т.Е. Butler, G.I. Senright, P.L. Mc'Gilvem et al. // Ruminant Immune Sust

145. Proc. Int. Symp. Plymout, 7-10 July, 1980. New York; London, - 1981. -P. 790-791.

146. Cock E., Davies G. Brucella abortus strain 19 vaccine: potency tests in cattle//J. Boil. Standartiz. 1973.-Vol. l-№2.-P. 171-178.

147. Cotton W.E., Buck J.M., Smith H. Furthe studies of vaccination during calfhood to prevent Bang's desiase // J. Amer. Veter. Med. Ass. 1934. - № 38. -P. 389.

148. Cotton W.E., Buck J.M., Smith H. Studies of five Brucella abortus (bovine) strain as immunising agent against Bang disease (infection abortus) // J. Amer. Veter. Med. Ass. 1934. - № 85. - P. 232-234.

149. Elberg S.S., Faunce W.K. Immunization against Brucella infection. IV / Immunity conferred on goats by nondependant mutant from a streptomicin-dependant mutant strain of brucella melitensis // J. Bact. 1957. - Vol. 73. - P. 211-217.

150. Falade S. Studies on Brucella melitensis Rev-1 vaccine in goats // Zbl. Vet. Med.- 1981.-Vol. 28(B).-P. 749-758.

151. Geborieau R. Essai de prophylaxie de brucellose dans une exploitation in-fectes par IP vaccination avec la souche tuse "Brucella abortus" et avec la souche designer soua le nom de 19 // Bull. Mensuel. Vet. Prat. Fr. 1970. - Vol. 54(6). -P. 310-319.

152. Herzberg M., Elberg S.S. Immunisation against Brucella infection. III. Response of mice and guinea pigs to infection of B. melitensis // J. Bact. 1955. -Vol. 69.-P. 432-435.

153. Huddleson I. Brucellosis in man and animals // The Common wealth Fund.-1943.-200 p.

154. Morgan W.L.B., Littejohn A.L., Mackinson D.J. et al. The degree of protection given by living vaccines against experimental infection with Brucella melitensis in goats // Bull. Wid. Org. 1966. - Vol. 134. - № 1. -P. 33-40.

155. Neeman L. The safety of the Rev.l strain of Brucella melitensis for pregnant sheep by natural contact // J. Refiiah Vet. 1968. - Vol. 25. - P. 255-260.

156. Nicolleti P., Jons L.M., Berman D.T. Comparison of the subcuta-neus and conjunctival route of vaccination the Brucella abortus strain 19 vak-cin in adult cattle // J. Am. Med. Assoc. 1978. - Vol. 179 - № 11. -p. 445-449.

157. Plackett P., Alton G.G., Carter P.D. Corner D.A. Failure of a single dose of Brucella abortus strain 19 vaccine to protect cattle when given earli in calfhood // Austral. Vet. J. 1986. - Vol. 56 (9). - P. 409-412.

158. Plommet M. La vaccination conjunctivalepar la scuche B. abortus 19 centre la brucellose bovine Principe et indications // Bull. Necsical. de la Societo Veteri-nare Pratigue de France. 1980. - Vol. 64. - № 10. - P. 813-823.

159. Plommet M. Progress recent in immunization control' infectione Brucella abortus immunization ches bovine // Prev. Veter. Med. 1984. - Vol. 2. - № 1-4. -P. 205-214.