Структурные изменения в опухоли и печени мышей при нарастании множественной лекарственной устойчивости перевиваемой лимфосаркомы RLS40 в условиях полихимиотерапии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.02, кандидат медицинских наук Сенькова, Александра Васильевна

• Сенькова, Александра Васильевна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Сенькова, Александра Васильевна

СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль цитостатической терапии в лечении гемобластозов.

1.1.1. Механизмы действия цитостатических препаратов, входящих в схему CHOP.

1.2. Механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолей.

1.2.1. Роль Р-гликопротеина в формировании множественной лекарственной устойчивости.

1.2.2. Роль нарушения апоптоза в развитии множественной лекарственной устойчивости.

1.3. Токсическое поражение органов цитостатиками при терапии опухолевого процесса.

1.4. Токсическое поражение печени противоопухолевыми препаратами.

1.5. Роль лекарственных транспортеров в защите печени от токсического повреждения.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Лабораторные животные и опухолевые модели.

2.1.1. Описание исходных субштаммов лимфосарком LS и RLS.

2.1.2. Селекция высокорезистентной клеточной линии RLS40.

2.2. Экспериментальная часть.

2.2.1. Проведение полихимиотерапии по схеме CHOP мышам с лимфосаркомой RLS40.

2.2.1.1. Экспериментальная модель №1.

2.2.1.2. Экспериментальная модель №2.

2.3. Материалы, использованные в работе.

2.3.1. Реактивы и препараты.

2.3.2. Оборудование.

2.3.3. Буферы, использованные в работе.

2.3.4. Олигонуклеотиды.

2.4. Методы, использованные в работе.

2.4.1. Оценка эффективности ПХТ.

2.4.2. Морфологические методы исследования.

2.4.3. Молекулярно-биологические методы исследования.

2.4.3.1. Получение первичной культуры клеток из солидной опухоли.

2.4.3.2. Выделение суммарной клеточной РНК.

2.4.3.3. Определение уровня экспрессии генов в опухолевых клетках методом ОТ-ПЦР.

2.4.3.3.1. Обратная транскрипция.

2.4.3.3.2. ПЦР.

2.4.3.4. Определение чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам (МТТ-тест).

2.4.4. Статистический анализ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Влияние ПХТ на рост перевиваемой лимфосаркомы мыши М^о и продолжительность жизни животных-опухоленосителей.

3.2. Особенности гистологического строения лимфосаркомы М^о в зависимости от числа курсов ПХТ, воздействовавших на опухоль.

3.3. Исследование чувствительности клеток лимфосаркомы ЬИ^о к цитостатикам после нескольких курсов ПХТ.

3.4. Определение уровней экспрессии генов, участвующих в формировании МЛУ, в клетках лимфосаркомы мыши 1^X^840 после нескольких курсов ПХТ.

3.5. Исследование экспрессии Р-гликопротеина в клетках лимфосаркомы мыши И^о без лечения и при проведении ПХТ.

3.6. Структурные изменения в печени животных-опухоленосителей при пассировании лимфосаркомы Ы^о без лечения и при проведении ПХТ.

3.6.1. Патоморфологические изменения в печени мышей с лимфосаркомой Ш^о при пассировании опухоли без введения цитостатиков (контрольная группа).

3.6.2. Патоморфологические изменения в печени мышей с лимфосаркомой КЬ84о при пассировании опухоли с последующим проведением ПХТ (экспериментальная группа).

3.7. Структурные изменения в печени при проведении многокурсовой ПХТ мышам без опухоли и с перевиваемой лимфосаркомой Ш^о.

3.7.1. Патоморфологические изменения в печени мышей без опухоли при проведении трех курсов ПХТ.

3.7.2. Патоморфологические изменения в печени мышей с перевиваемой лимфосаркомой Ш^о при проведении трех курсов ПХТ.

3.8. Исследование экспрессии Р-гликопротеина в печени мышей с лимфосаркомой ВД^о без лечения и при проведении ПХТ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурные изменения в опухоли и печени мышей при нарастании множественной лекарственной устойчивости перевиваемой лимфосаркомы RLS40 в условиях полихимиотерапии»

Актуальность проблемы. Противоопухолевая терапия гемобластозов (опухолевых заболеваний крови) за последние десятилетия достигла значительных успехов: повысилось число полных ремиссий, увеличилась безрецидивная выживаемость больных, описаны случаи выздоровления (Поспелова Т.И. и др., 2004). Это связано с использованием эффективных программ полихимиотерапии (ПХТ), в которых используются определенные сочетания противоопухолевых препаратов с различным механизмом действия и токсическим профилем (King P., Perry М., 2001), а также с внедрением молекулярно-биологических методов верификации опухолевого клона, что делает возможным проведение направленного лечения (Ляхович В.В. и др., 2004; Имянитов E.H., Моисеенко В.М., 2008).

Вместе с тем, имеется ряд проблем, сдерживающих полноценное и максимально эффективное использование программной ПХТ: во-первых, это выраженная токсичность многокурсовой химиотерапии (Sanderson Н. et al., 2004); во-вторых, это формирование в опухоли множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) - приобретение опухолевыми клетками перекрестной резистентности к цитостатикам с разными механизмами действия и внутриклеточными мишенями (Ставровская A.A., 2000). Эти две проблемы могут усугублять друг друга и значительно снижать эффективность лечения.

Резистентность опухолевых клеток к химиотерапии может быть следствием разнообразных процессов: от снижения внутриклеточной концентрации противоопухолевого препарата, обусловленного активным выведением вещества в межклеточную среду АТФ-зависимым трансмембранным белком Р-гликопротеином (P-gp), являющимся продуктом гена MDR1, до нарушения механизмов апоптоза в самих опухолевых клетках (мутация или снижение экспрессии гена р53, нарушающие его проапоптотическую функцию и/или гиперэкспрессия гена Ьс1-2, вызывающая нечувствительность клеток к индукции апоптоза) (РШркэ М., 2004).

Основные механизмы возникновения МЛУ достаточно подробно изучены и описаны в литературе, однако эти обширные знания еще в полной мере не нашли применения в практической онкологии, в частности в лечении гемобластозов - опухолей, для которых цитостатическая терапия является приоритетной. Как правило, течение лейкозов и лимфом характеризуется наличием рецидивов, что предполагает проведение повторных курсов высокодозной полихимиотерапии, осложняющихся прогрессированием и модификацией процессов множественной лекарственной устойчивости, детальные механизмы которых до конца не ясны. Попытка перенести ситуацию, зачастую происходящую в клинике, в экспериментальные условия в определенной степени поможет переосмыслить подходы к терапии гемобластозов.

В настоящее время при лечении лейкозов и лимфом, как правило, используют не один цитостатик, а комбинацию химиотерапевтических агентов. При этом веским аргументом в пользу полихимиотерапии считается возможность суммации терапевтического действия используемых препаратов на опухоль при распределении их токсических эффектов по разным органам и снижении за счет этого общетоксического влияния на организм опухоленосителя (Поддубная И.В., 2002; Гольдберг В.Е., Матяш М.Г., 2004).

Исследование фармакокинетики противоопухолевых препаратов свидетельствует о том, что они, как и большинство лекарственных средств, подвергаются биотрансформации в печени с образованием токсических метаболитов, которые могут вызвать повреждение гепатоцитов (ТаеБсЫсе Н. е1 а1., 2002). Поражение печени является одним из основных лимитирующих факторов, ограничивающих проведение программной ПХТ в полном объеме, поскольку развитие постцитостатических осложнений в этом органе может быть причиной смертельных исходов у больных в период химиотерапевтического лечения.

В настоящее время в литературе широко представлены экспериментальные исследования, в которых производится однократное введение химиотерапевтических препаратов интактным животным в режиме монотерапии. Тогда как даже стандартный курс ПХТ подразумевает длительное и многократное введение комбинации цитостатических препаратов. При этом встречается мало исследований, в которых бы исследовалось влияние многократного воздействия комплекса цитостатиков на организм не только интактного животного, но и животного с опухолью, обладающей нарастающей резистентностью к химиотерапии.

Все это обуславливает необходимость изучения морфофункциональных изменений в печени при многократном введении комплекса противоопухолевых препаратов при наличии факторов, усугубляющих токсическое влияние ПХТ на печень (например, прогрессирование опухолевого процесса и нарастание резистентности опухоли к цитостатической терапии).

Мембранный транспортер Р-гликопротеин обнаруживается в клетках органов, участвующих в метаболизме и выведении лекарственных препаратов, в том числе и в печени. Изменение в печени экспрессии Р-гликопротеина и соответственно кодирующего его гена MDR1 развивается в ответ на воздействие различных повреждающих факторов: воспаление, эндотоксикоз (Hartmann M. et al., 2001), экзогенные токсические агенты (Fardel О. et al., 1998). Данное обстоятельство может изменять процессы метаболизма и распределения цитостатиков как в самой опухоли, так и в органах и тканях, и, соответственно, влиять на эффективность лечения и токсичность химиотерапии.

Изучение взаимосвязи морфофункциональных изменений в печени и процессов прогрессирования множественной лекарственной устойчивости в опухоли, возникающих после воздействия нескольких курсов ПХТ представляет интерес, как для клинической, так и для экспериментальной медицины. Указанные обстоятельства определили цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования: Изучить особенности патоморфологических изменений в опухоли и печени мышей в условиях прогрессирования множественной лекарственной устойчивости перевиваемой лимфосаркомы БИ^о в процессе полихимиотерапии.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние многокурсовой полихимиотерапии на динамику роста перевиваемой лимфосаркомы мыши Ш^о и продолжительность жизни животных-опухоленосителей.

2. Исследовать чувствительность клеток перевиваемой лимфосаркомы мыши Ш^о к цитостатикам без лечения и после нескольких курсов полихимиотерапии.

3. Определить уровни экспрессии генов, участвующих в формировании множественной лекарственной устойчивости (тс1г1а, тс!г1Ь) и реализации программы апоптоза (р53, Ьс1-2), в клетках перевиваемой лимфосаркомы мыши ВД^о без лечения и после нескольких курсов полихимиотерапии.

4. Изучить морфологические изменения и экспрессию Р-гликопротеина в опухоли в зависимости от числа курсов полихимиотерапии.

5. Сравнить морфологические изменения и уровень экспрессии Р-гликопротеина в печени мышей при проведении многокурсовой полихимиотерапии животным-опухоленосителям и животным без опухолевого процесса.

6. Изучить морфологические изменения и уровень экспрессии Р-гликопротеина в печени мышей с лимфосаркомой М^о без лечения и при проведении полихимиотерапии с использованием различных схем селекции лекарственно-устойчивых опухолевых клонов.

Научная новизна исследования: Впервые показано, что проведение многокурсовой ПХТ сопровождается прогрессированием лекарственной резистентности в клетках мышиной лимфосаркомы Ш,840, изначально проявляющей фенотип множественной лекарственной устойчивости, с дополнительным снижением чувствительности опухолевых клеток к доксорубицину и винкристину, нарастанием экспрессии гена шёг1Ь и увеличением экспрессии Р-гликопротеина на мембране опухолевых клеток.

Доказано, что повторные циклы введения цитостатиков вызывают нарушение механизмов апоптоза в клетках лимфосаркомы М^о, выражающееся в снижении объемной плотности опухолевой ткани в состоянии апоптотического распада, гиперэкспрессии гена Ьс1-2 и изменении уровня экспрессии гена р53.

Впервые выявлено, что клональная селекция клеток опухоли с нарастанием их лекарственной устойчивости обусловливает повышение токсической нагрузки на печень, выражающееся в нарастании деструктивных изменений, снижении процессов репаративной регенерации и увеличении экспрессии Р-гликопротеина на мембране гепатоцитов.

Впервые установлено, что проведение полихимиотерапии вызывает нарастание деструктивных изменений и увеличение уровня Р-гликопротеина в печени у безопухолевых животных, и более значительное - у мышей с лимфосаркомой ЭД^о параллельно с нарастанием МЛУ в клетках опухоли.

Научно-практическая значимость работы: Разработаны две экспериментальные модели формирования МЛУ. Достоинством модели с пассированием опухоли является возможность проводить неограниченное количество курсов ПХТ для изучения влияния многократного цитостатического воздействия на клетки опухоли. Преимуществом второй модели с проведением последовательных курсов химиотерапии является ее адекватность естественному процессу развития МЛУ.

Полученные результаты исследования дополнили новыми сведениями генетические механизмы прогрессирования МЛУ в результате воздействия нескольких курсов химиотерапии на опухоль, изначально резистентную к ряду цитостатических препаратов, что нередко встречается при лимфомах высокой степени злокачественности у человека.

Данное исследование выявило морфологические особенности поражения и динамику экспрессии Р-гликопротеина в печени в условиях многокурсовой ПХТ с нарастанием лекарственной резистентности опухоли, что может приводить к изменению процессов метаболизма лекарственных препаратов и должно учитываться при выборе подходов к лечению опухолевого процесса и методов терапии сопровождения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Проведение повторных курсов полихимиотерапии мышам с перевиваемой лимфосаркомой М^о, изначально имеющей фенотип множественной лекарственной устойчивости, сопровождается замедлением регрессии опухолевого узла под действием противоопухолевой терапии, снижением чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам, увеличением экспрессии генов, участвующих в формировании множественной лекарственной устойчивости, а также повышением устойчивости опухолевых клеток к индукции апоптоза под действием цитостатических препаратов.

2. Нарастание лекарственной резистентности перевиваемой лимфосаркомы Ы^о под действием полихимиотерапии вызывает повышение токсической нагрузки на печень, выражающееся в нарастании деструктивных изменений в паренхиме печени, снижении в ней репаративной регенерации, увеличении экспрессии Р-гликопротеина на мембране гепатоцитов.

Апробация работы: Материалы исследования были представлены на III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007), на конкурс-конференции студентов и молодых ученых НГМУ «Авиценна» (Новосибирск, 2008), на Всероссийской юбилейной научно-практической конференции патологоанатомов с международным участием к 100-летию профессора П. Г. Подзолкова «Актуальные вопросы современной патологии» (Красноярск, 2008), на научной конференции «Фундаментальные науки — медицине» (Новосибирск, 2008), на IV Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в онкогематологии» (Новосибирск, 2008), на III съезде Российского общества патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Самара, 2009), на научной конференции «Медицинская геномика и протеомика» (Новосибирск, 2009).

Заключение диссертации по теме «Патологическая анатомия», Сенькова, Александра Васильевна

ВЫВОДЫ:

1. Введение комплекса цитостатиков уменьшает размеры опухолевого узла и вызывает увеличение продолжительности жизни животных-опухоленосителей, но эффективность полихимиотерапии снижается по мере увеличения количества курсов химиотерапии, действовавших на опухоль.

2. Многократное воздействие комплекса цитостатиков на лимфосаркому мыши ВД-^о, изначально проявляющую фенотип множественной лекарственной устойчивости, вызывает дополнительное снижение чувствительности опухолевых клеток к доксорубицину и винкристину, входящим в использованную схему полихимиотерапии.

3. Повторные курсы введения цитостатиков снижают способность клеток лимфосаркомы мыши ЫЬ84о подвергаться апоптозу: а) при пассировании опухоли с последующим введением цитостатиков происходит снижение объемной плотности апоптических телец в ткани опухоли в 1,7 раза после четырех курсов химиотерапии, тогда как при пассировании опухоли без введения цитостатиков данный показатель не изменялся; при проведении трех последовательных курсов полихимиотерапии выявлено отсутствие изменений доли апоптозов в опухолевой ткани, тогда как при естественном развитии опухоли без лечения она нарастала; б) после воздействия нескольких курсов полихимиотерапии в опухолевых клетках выявлено нарастание экспрессии гена Ьс1-2 в 2 раза и изменение экспрессии гена р53 с нарушением его проапоптотической функции.

4. Проведение многокурсовой полихимиотерапии как при пассировании лимфосаркомы Ы^о, так и при проведении трех последовательных курсов лечения сопровождается увеличением в клетках опухоли уровня экспрессии гена т<1г1Ь (в 1,3 и 2,8 раза) и увеличением числа Р-гликопротеин положительных клеток (с 30% до 85% от всей популяции опухолевых клеток).

5. Введение комплекса цитостатиков животным без опухоли сопровождается развитием деструктивных изменений в печени, которые занимают до 50% от всей паренхимы, при этом регенераторная активность печени не снижается. Проведение полихимиотерапии на фоне роста перевитой лимфосаркомы RLS40 в мышцах бедра и метастазирования данной опухоли в печень характеризуется нарастанием суммарных деструктивных изменений, занимающих более 80% паренхимы печени, а также снижением в ней процессов регенерации.

6. Нарастание лекарственной устойчивости пассированной опухоли в результате воздействия на нее четырех курсов химиотерапии сопровождается повышением токсической нагрузки на печень, подвергавшейся одному курсу химиотерапии, что приводит к нарастанию объемной плотности некрозов паренхимы печени в 1,4 раза и снижению численной плотности двуядерных гепатоцитов в 1,8 раза.

7. При многократном воздействии комплекса цитостатиков происходит увеличение экспрессии Р-гликопротеина на мембране гепатоцитов у интактных (безопухолевых) животных, и более значительное - у животных-опухоленосителей. Нарастание лекарственной резистентности опухоли сопровождается более выраженной активацией Р-гликопротеина в печени под действием полихимиотерапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Противоопухолевая терапия гемоблаетозов за последние десятилетия увенчалась значительными успехами, что всецело связано с усовершенствованием методов диагностики данной группы опухолевых заболеваний, а также с использованием эффективных полихимиотерапевтических программ (Поспелова Т.Н. и др., 2004; Переводчикова Н.И., 2005). Однако, имеется ряд проблем, сдерживающих полноценное и максимально эффективное использование программной ПХТ: во-первых, выраженная токсичность многокурсовой химиотерапии (Sanderson Н. et al., 2004), во-вторых, формирование множественной лекарственной устойчивости в клетках опухоли (Ставровская А.А., 2000; Блохин Д.Ю., 2009). Эти две проблемы могут усугублять друг друга и значительно снижать эффективность противоопухолевого лечения.

В литературе имеются обширные экспериментальные данные, касающиеся вопросов морфофункциональных изменений в органах и тканях при использовании цитостатиков в монорежиме при отсутствии факторов, усугубляющих токсичность химиотерапии, например, при наличии агрессивного опухолевого процесса. Все это определяет актуальность исследования патоморфологических изменений в органах и тканях при проведении многокурсовой ПХТ животным-опухоленосителям в условиях нарастания агрессивных свойств опухоли и снижения ее чувствительности к стандартным схемам химиотерапии.

Цитостатическое поражение печени при гемобластозах занимает в этом аспекте особое место, поскольку печень является основным органом, участвующем в метаболизме цитостатических препаратов и занимает ключевые позиции в поддержании гомеостаза организма, что определяет высокую частоту поражения данного органа при естественном течении опухолевого процесса и при его лечении цитостатиками (Гольдберг Е.Д. и др., 1998; Лосева М.И. и др., 2005).

Множественная лекарственная устойчивость опухоли оказывает значительное влияние на эффективность и токсичность химиотерапии в результате изменения метаболизма и распределения цитостатиков как в самой опухоли, так и в тканях, что может значительно повысить концентрацию противоопухолевых препаратов в системном кровотоке. Поэтому развитие или усугубление лекарственной резистентности опухоли может изменять реальную цитостатическую нагрузку на органы и ткани, в том числе и на гепатоциты. С этих позиций данная экспериментальная работа является попыткой раскрыть новые общие патоморфологические особенности влияния многокурсовой ПХТ на организм при наличии опухолевого процесса с нарастающей лекарственной резистентностью.

Изучение процессов прогрессирования множественной лекарственной устойчивости опухоли и морфофункциональных изменений в печени проводили в условиях экспериментально созданного опухолевого процесса, изначально проявляющего МЛУ-фенотип. Это является важным моментом, поскольку первичная рефрактерность к стандартной химиотерапии при лимфомах встречается в 20-30% случаев (Кочемасов В.В. и др., 2007), что предполагает изначальную низкую эффективность и более высокую токсичность стандартной ПХТ. Также наличие самого опухолевого процесса оказывает самостоятельное негативное воздействие на органы и ткани, и патоморфологические изменения в печени при проведении многокурсовой ПХТ на этом неблагоприятном фоне могут значительно отличаться от таковых у интактных (безопухолевых) животных (Diamond J.R. et al., 2009).

Исследование процессов прогрессирования и модификации МЛУ в опухоли после проведения нескольких курсов ПХТ основано на исследовании с помощью МТТ-теста чувствительности опухолевых клеток к ряду цитостатиков и определении методом ОТ-ПЦР уровней экспрессии генов, участвующих в формировании лекарственной устойчивости в данной опухоли. Патоморфологическую оценку структурных изменений в печени и ткани опухоли при проведении многокурсовой ПХТ в условиях нарастания лекарственной резистентности опухоли проводили с помощью морфометрического исследования. Такой подход позволил комплексно оценить ряд общих структурных закономерностей реагирования органов и тканей на многокурсовую цитостатическую терапию в условиях лекарственно-резистентного опухолевого процесса.

В исследовании было использовано два способа моделирования синдрома МЛУ в эксперименте. Независимо от схемы селекции лекарственно-устойчивых опухолевых клонов введение комплекса цитостатиков достоверно уменьшало размеры опухолевого узла, а также вызывало увеличение продолжительности жизни животных-опухоленосителей, но эффективность ПХТ снижалась по мере нарастания цитостатической нагрузки на опухоль.

При морфометрическом исследовании ткани опухоли было выявлено, что повторные циклы введения цитостатиков снижают способность клеток опухоли подвергаться апоптозу, что может быть связано как с нарушением механизмов апоптоза в самих опухолевых клетках в результате дефектного функционирования гена р53 и/или гиперэкспрессии гена Ьс1-2, так и с неспособностью противоопухолевого препарата запустить программу апоптоза в клетках опухоли в результате недостаточной внутриклеточной концентрации цитостатика, обусловленной активным выведением вещества в межклеточную среду трансмембранным белком Р-гликопротеином -продуктом гена МОЮ.

Для оценки изменения чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам после проведения нескольких курсов ПХТ использовали МТТ-тест, с помощью которого можно определить концентрацию препарата, при которой погибает 50% клеток (Ю50). Было выявлено, что независимо от схемы селекции лекарственно-устойчивых опухолевых клонов и продолжительности интервала между курсами ПХТ, после многократного цитостатического воздействия на исходно резистентную опухоль происходит дополнительное снижение чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам.

Для ответа на вопрос о причинах выявленных изменений было проведено исследование экспрессии генов методом ОТ-ПЦР в клетках опухоли без лечения и после проведения нескольких курсов ПХТ. Показано, что независимо от схемы клональной селекции лекарственно-устойчивой опухоли проведение многокурсовой ПХТ сопровождается увеличением экспрессии гена тс1г1Ь и нарушением механизмов апоптоза, выражающееся в гиперэкспрессии гена Ьс1-2 и изменении экспрессии гена р53. При проведении иммуногистохимического исследования ткани опухоли было выявлено нарастание экспрессии Р-гликопротеина — белкового продукта гена 1уПЖ1 - в клетках опухоли после многократного цитостатического воздействия при использовании различных экспериментальных моделей прогрессирования МЛУ. Эти данные подтверждают гипотезу о том, что проведение нескольких курсов ПХТ сопровождается нарастанием лекарственной резистентности опухоли, изначально проявляющей МЛУ-фенотип.

Проведенное гистологическое и морфометрическое исследования печени позволило установить, что многократное введение комплекса цитостатиков сопровождается выраженными деструктивными изменениями в паренхиме печени, а наличие опухолевого процесса значительно усугубляет токсичность многокурсовой ПХТ. Также было выявлено, что клональная селекция клеток опухоли с нарастанием их лекарственной устойчивости может обусловливать повышение токсической нагрузки на печень. Это может быть связано с изменением метаболизма цитостатиков в опухоли в результате гиперэкспрессии Р-гликопротеина, отвечающего за выведение цитостатиков из клеток опухоли во внеклеточную среду. Следствием данного процесса может быть повышение реальной концентрации цитостатиков в системном кровотоке, а в итоге - и токсической нагрузки на органы и ткани.

148 s

При исследовании экспрессии Р-гликопротеина в ткани печени методом ИГХ было выявлено, что многократная цитостатическая нагрузка и нарастание лекарственной резистентности опухоли ведет к выраженному нарастанию экспрессии данного белка-транспортера на мембране гепатоцитов. Это свидетельствует о значительном напряжении механизмов защиты и детоксикации в печени (Barnes S.N. et al., 2007), одним из которых является изученный нами Р-гликопротеин. Исследованный механизм защиты является далеко не единственным в печени, а также в других органах, участвующих в метаболизме и выведении токсических агентов, и понятен не до конца, что является предметом отдельного и дополнительного анализа.

При проведении химиотерапии у людей необходимо учитывать множество факторов, влияющих на переносимость и токсичность ПХТ. У каждого больного эффективность одного и то же курса ПХТ может быть разной, что связано с генетически детерминированными индивидуальными особенностями метаболизма лекарственных препаратов, наличием сопутствующей патологии и других факторов, влияющих на детоксикационную функцию печени (Поспелова Т.И., Нечунаева И.Н., 2004). Одним из таких факторов может быть изученная в данном исследовании нарастающая резистентность опухолевого процесса к химиотерапии.

Безусловно, у человека метаболизм лекарственных препаратов является многофакторным процессом, и ответ организма на наличие самого опухолевого процесса, а также на введение лекарственных препаратов индивидуален для каждого больного. Реакции организма лабораторных животных одной генетической линии на воздействие токсических агентов протекают приблизительно по одному механизму. Поэтому проведенные экспериментальные исследования позволяют рассмотреть некую стандартную модель метаболизма цитостатических препаратов, а также дают понимание универсальных механизмов формирования патологии в органах и тканях при проведении многокурсовой ПХТ при нарастании лекарственной устойчивости опухолевого процесса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Сенькова, Александра Васильевна, 2010 год

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. — М.: Медицина, 1990. - 384 с.

2. Агеева Т.А. Патоморфологические аспекты постцитостатических поражений печени и желудка при гемобластозах. — Автореф. дисс. . д.м.н. — Новосибирск, 2002. — 42 с.

3. Агеева Т.А., Гвоздева Н.В. Патоморфологическое исследование цитотоксических эффектов цикловой полихимиотерапии на органы репродуктивной системы крыс-самок // Бюлл. экспер. биол. и медицины. — 2008. Приложение 1. - С. 45-48.

4. Агеева Т.А., Шкурупий В.А., Поспелова Т.Н., Лосева М.И. Ультраструктурные изменения в клетках печени при железодефицитной анемии // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 1993. - №12. - С. 642-645.

5. Андреева Е.М. исследование морфогенетических особенностей опухолей, оппозитных по чувствительности к циклофосфану, на модели перевиваемых лимфосарком мышей // Автореф. дисс. . к.м.н. -Новосибирск, 2006. 18 с.

6. Банержи А. Медицинская статистика понятным языком: вводный курс / пер. с англ. под ред. В.П. Леонова. — М.: Практическая медицина, 2007. -287 с.

7. Белоусов Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия: Руководство для врачей. — М.: Универсум паблишинг, 1997.-531 с.

8. Белушкина H.H., Северин С.Е. Молекулярные основы патологии апоптоза // Архив патологи. 2001. - №1. - С. 51-60.

9. Блохин Д.Ю. Механизмы формирования лекарственной устойчивости опухолевых клеток //Онкогематология. 2009. - Т. 2. — №1. -С. 167-175.

10. Бородин Ю.И., Любарский М.С., Наров Ю.Э. Коррекция эндотоксикоза при некоторых онкологических заболеваниях // Бюллетень СО РАМН. 2004. - №2 (112). - С. 7-12.

11. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптотической смерти клеток // Гематол. и трансфузиол. 2002. - Т. 2. - С. 35-40.

12. Владимирская Е.Б., Масчан A.A., Румянцев А.Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста // Гематол. и трансфузиол. 1997. - Т. 42. -№5.-С. 4-9.

13. Гершанович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М.: Медицина, 1982. - 224 с.

14. Гершанович М.Л., Филов В.А., Акимов М.А., Акимов A.A. Введение в химиотерапию злокачественных опухолей. Спб.: СОТИС, 1999. - 143 с.

15. Гольдберг В.Е., Матяш М.Г. Современные достижения лекарственной терапии злокачественных новообразований // Бюллетень СО РАМН. 2004. -№2(112). - С. 38-42.

16. Гольдберг Е.Д., Боровская Т.Г., Фомина Т.И. Морфологическое и функциональное состояние яичников крыс при введении противоопухолевых препаратов // Эксперим. и клинич. фармакология. 1998. - Т. 61. - №6. -С. 45-47.

17. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов B.B. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях. — Томск: STT, 1999. — 128 с.

18. Гольдберг Е.Д., Фомина Т.И., Ветошкина Т.В., Дубская Т.Ю., Гольдберг В.Е., Филиппова М.В. Морфология печени в ранние и отдаленные сроки после введения противоопухолевых препаратов // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 1998.-Т. 126.-№11.-С. 561-565.

19. Городецкий В.М. Осложнения противоопухолевой терапии // Гематол. и трансфузиол. 1998. - Т. 43. -№1. - С. 11-15.

20. Гришанова А.Ю., Мельникова Е.В., Каледин В.И., Николин В.П., Ляхович В.В. Возможная роль Р-гликопротеина в устойчивости к циклофосфамиду перевиваемой мышиной лимфосаркомы RLS // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 2005. - Т. 139. - №5. — С. 573-577.

21. Домникова Н.П., Петрусенко Е.Е., Мальцева H.A. Клиноко-морфологическая характеристика эритрона при лимфопролиферативных заболеваниях // Бюллетень СО РАМН. 2008. - №6 (134). - С. 35-40.

22. Захаров О.Д., Рыбалкина Е.Ю., Волкова М.А., Ставровская A.A. Маркеры множественной лекарственной устойчивости при острых миелоидных лейкозах // Онкогематология. 2006. - №1-2. - С. 9-15.

23. Зенков А.Н., Скворцова Н.В., Черноловская Е.Л., Зенкова М.А., Поспелова Т.И., Лосева М.И., Власов В.В. Экспрессия генов MDR1 и MRP у больных лимфомой с первичным поражением костного мозга // Бюлл. СО РАМН.-2004.-Т. 114-№4.-С. 110-113.

24. Зубова С.Г., Данилов А.О., Мышков А.И., Быкова Т.В., Зарицкий А.Ю., Окулов В.Б. Ген mdr и чувствительность клеток к различным воздействиям // Вопр. онкол. 2000. - Т. 46. - №2. - С. 199-201.

25. Иммунология и аллергология (цветной атлас): учебное пособие для студентов медицинских вузов / под ред. A.A. Воробьева, A.C. Быкова, A.B. Караулова М.: Практическая медицина, 2006. - 288 с.

26. Имянитов E.H., Моисеенко В.М. Применение молекулярно-генетического анализа для выбора противоопухолевой терапии // Вопр. онкол. 2008. - Т. 54. - №2. - С. 121-132.

27. Казначеев К.С. Отсроченное влияние антилейкемической полихимиотерапии на процессы клеточной гибели и пролиферации в ремиссии острого лимфобластного лейкоза у детей // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 2003. - Т. 135. - №3. - С. 325-329.

28. Каледин В.И., Попова H.A., Андреева Е.М. Изучение эффективности моно- и полихимиотерапии на модели перевиваемой мышиной лимфосаркомы, нечувствительной к индукции апоптоза // Вопр. онкол. -2006. Т. 52. - №1. - С. 70-73.

29. Карташов С.М., Удербаева Г.Ж, Белодед O.A. Апоптотический индекс в оценке эффективности лечения больных раком шейки матки // Онкология. 2005. - Т. 7. - № 3. - С. 209-212.

30. Ковынев И.Б. Клинико-иммуноцитохимическая характеристика и прогнозирование опухолевой прогрессии неходжкинских злокачественных лимфом // Автореф. дисс. . д.м.н. Новосибирск, 2007. - 38 с.

31. Ковынев И.Б., Поспелова Т.И., Агеева Т.А., Дьячкова Н.В., Скворцова Н.В., Воропаева E.H., Березина О.В., Нечунаева И.Н., Лямкина

32. A.C. Апоптоз и механизмы опухолевой прогрессии неходжкинских злокачественных лимфом // Бюллетень сибирской медицины. — 2008. — Т. 7. — Приложение 3. С. 26-32.

33. Кочемасов В.В., Саутина В.О., Воробьев А.И. Приоритетные направления развития фундаментальных научных исследований по проблеме гемобластозов до 2010г. // Гематол. и трансфузиол. — 2007. Т. 52. — №5. -С. 3-9.

34. Куценко С.А. Основы токсикологии: Учебное пособие. С.-Пб.: Фолиант. - 2004. - 720 с.

35. Лакин Г.Ф. Биометрия: учебное пособие для биол. спец. вузов. 4-е изд. перераб. и доп. - М.: Высшая школа. - 1990. - 352 с.

36. Ларионова В.Б., Горожанская Э.Г., Коломейцев O.A. Гепатотоксичность лекарственных препаратов у онкологических больных // Вестник интенсивной терапии. 2004. - №3. - С. 1-6.

37. Лихтенштейн A.B. Постоянный «приток» трансформированных клеток как источник клональной гетерогенности опухоли // Вопр. онкол. — 2007. Т. 53. - №5. - С. 596-597.

38. Лосева М.И., Поспелова Т.И. Печень при гемобластозах. -Новосибирск: Наука, 1999. 414 с.

39. Лосева М.И., Пуртова Л.А., Гавалова Р.Ф., Поспелова Т.И., Солдатова Г.С. Морфофункциональное состояние сердца прилимфогранулематозе в отдаленные сроки после химиолучевой терапии // Тер. архив. 2000. - Т. 72. - №10. - С. 64-67.

40. Лукьянова Н.Ю., Кулик Г.И., Чехун В.Ф. Роль генов р-53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей // Вопр. онкол. 2000. — Т. 46.-№2.-С. 121-129.

41. Ляхович В.В., Вавилин В.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Коваленко С.П. геномная медицина и новые подходы к диагностике и лечению онкозаболеваний // Бюлл. СО РАМН. 2004. - Т. 112 - №2. - С. 2026.

42. Молодых О.П., Лушникова ЕЛ., Клинникова М.Г., Непомнящих Л.М. Внутриклеточная реорганизация гепатоцитов при воздействии доксорубицина // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 2007. - Т. 144. - №10. -С. 464-472.

43. Молодых О.П., Лушникова Е.Л., Клинникова М.Г., Непомнящих Л.М. Структурная реорганизация печени крыс при цитотоксическом действии доксорубицина // Бюлл. экспер. биол. и медицины. — 2006. Т. 141. -№5.-С. 579-585.

44. Непомнящих Г.И., Дюбанова Г.А., Непомнящих Д.Л., Айдагулова C.B., Домникова Н.П., Мигуськина Е.И. Универсальные структурные маркеры гепатотоксического воздействия лекарственных препаратов // Бюллетень СО РАМН. 2008. - №6 (134). - С. 86-92.

45. Перпеводчикова H.H. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний. — М.: Практическая медицина, 2005. — 704 с.

46. Поддубная И.В. Обоснование лечебной тактики при неходжкинских лимфомах // Современная онкология. 2002. - Т. 4. — №1. - С. 3-7.

47. Под ред. Переводчиковой Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний // Краткое руководство. М.: Медицина. - 2000. - 391 с.

48. Позднякова C.B. Морфофункциональное исследование цитопротекторного действия аланинамидных производных бетулоновойкислоты на модели цитотоксического повреждения органов // Автореф. дисс. . д.м.н., 2007.-38 с.

49. Позднякова C.B., Грек O.P., Волхонская Т.А. Коррекция гематотоксического действия комплекса цитостатических средств водным экстрактом пятилистника кустарникового // Бюллетень СО РАМН. 2004. — №11 (lll).-C.112-115.

50. Попова H.A. Иммунология: Учебное пособие. — 2-е изд. / Новосиб. гос. ун-т. Новосибирск, 2006. - 256 с.

51. Поспелова Т.И. Клинико-функциональные и метаболические особенности поражения печени при некоторых формах гемобластозов // Автореф. дисс. . д.м.н. — Новосибирск, 1998. — 48 с.

52. Поспелова Т.И., Лосева М.И., Ковынев И.Б., Агеева Т.А., Зенкова М.А, Черноловская Е.Л., Зенков А.Н., Скворцова Н.В., Власов В.В. Основы опухолевой прогрессии гемобластозов // Бюлл. СО РАМН. 2004. - Т. 112-№2. - С. 73-76.

53. Поспелова Т.И., Нечунаева И.Н. Типы метаболизма при гемобластозах: научное издание НГМА, Новосибирск, 2004 —231 с.

54. Райхлин Н.Т., Райхлин А.Н. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях // Вопр. онкол. 2002. - Т. 48. - №2. -С. 159-172.

55. Резниченко А.Г. Влияние химио- и радиотерапии на сперматогенез у онкологических больных // Проблемы репродукции. 2007. - №4. - С. 70-75.

56. Ставровская A.A. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток // Биохимия. 2000. - Т. 65. -№1. - С. 112-126.

57. Струков А.И., Серов B.B. Патологическая анатомия. — М.: Медицина, 1995.-688 с.

58. Халястов И.Н. Медико-социальные основы заболеваемости, инвалидности вследствие злокачественных новообразований и научное обоснование оптимизации онкологической помощи. — Автореф. дисс. . д.м.н. — Москва, 2009. — 56 с.

59. Харкевич Д.А. Фармакология: Учебник. 7-е изд., перераб и доп. -М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - 728 с.

60. Чумаков П.М. Функция р53: выбор между жизнью и смертью // Биохимия. 2000. - Т. 65.-№1.-С. 34-47.

61. Шкляева O.A. Противоопухолевая и антиметастатическая активность siPHK, РНКазы А и ДНКазы I — препаратов, способных специфически и неспецифически вызывать деградацию нуклеиновых кислот // Автореф. дисс. . к.б.н. Новосибирск, 2009. - 20 с.

62. Шкурупий В.А. Ультраструктура клеток печени при стрессе. -Новосибирск: Наука, 1989. 142 с.

63. Шман Т.В., Углова Т.А., Савицкий В.П. Связь лекарственной чувствительности, спонтанного апоптоза лейкемических клеток с факторами прогноза при B-линейном остром лимфобластном лейкозе у детей // Гематол. и трансфузиол. 2002. - Т. 47. - №4. - С. 8-10.

64. Штиль A.A. Множественная лекарственная устойчивость опухоли и механизмспецифическая химиотерапия: противоречие? // Гематол. и трансфузиол. 2004. - Т. 49. - №3. - С. 30-34.

65. Штиль A.A. Эпигенетическая регуляция множественной лекарственной устойчивости в опухолевых клетках: передача сигналов, посттранскрипционная активация и возможности профилактики // Успехи современной биологии. -2001. Т. 121. - №6. - С. 563-575.

66. Agostinis P., Assefa Z., Vantieghem A., Vandenheede J.R., Merlevede W., De Witte P. Apoptotic and anti-apoptotic signaling pathways induced byphotodynamic therapy with hypericin // Advances in Enzyme Regulation. — 2000. -Vol. 40.-Issue l.-P. 157-182.

67. Aithal P.G., Day C.P. The natural history of histologically proved drug induced liver disease // Gut. 1999. - Vol. 44. - №5. - P. 731-735.

68. Akiyama S. Isolation and genetic characterization of human KB cell lines resistant to multiple drugs / S. Akiyama, A. Fojo, J. A. Hanover, I. Pastan, M. M. Gottesman // Somat. Cell Mol. Genet. 1985. - Vol. 11. - № 2. - P. 117-126.

69. Aley K.O., Reichling D.B., Levine J.D. Vincristine hyperalgesia in the rat: a model of painful vincristine neuropathy in humans // Neuroscience. 1996. -Vol. 73.-Issue l.-P. 259-265.

70. Ambudkar A.S.V., Dey S., Hrycyna C.A., Ramachandra M., Pastan I., Gottesman M.M. Biochemical, cellular and pharmacological aspects of the multidrug transporter // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999. - Vol. 39. — P. 361-398.

71. Ambudkar A.S.V., Kimchi-Sarfaty C., Sauna Z.E., Gottesman M.M. P-glycoprotein: from genomics to mechanism // Oncogene. 2003. - Vol. 22. -№47.-P. 7468-7485.

72. Andrade R.J., Camargo R., Lucena M.I., González-Grande R. Causality assessment in drug-induced hepatotoxicity // Expert. Opin. Drug Saf. 2004. -Vol.3.-№4.-P. 329-344.

73. Andrade P.J., Robles M., Fernández-Castañer A., López-Ortega S., López-Vega C., Lucena I. Assessment of drug-induced hepatotoxicity in clinical practice: a challenge for gastroenterologists // World J. Gastroenterol. 2007. -Vol. 13. -№3. - P. 329-340.

74. Armand J.P., Ribrag V., Harrousseau J.L., Abrey L. Reappraisal of the use of procarbazine in treatment of lymphomas and brain tumors // Ther. Clin. Risk Manag. 2007. - Vol. 3. - №2. - P. 213-224.

75. Arora A., Seth K., Shukla Y. Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance by diallyl sulfide in K562 leukemic cells and in mouse liver // Carcinogenesis. 2004. - Vol. 25. - №6. - P. 941-949.

76. Aszalos A. Drug-drug interactions affected by the transporter protein, P-glycoprotein (ABCB1, MDR1) // Drug Discovery Today. 2007. - Vol. 12. -№19/20.-P. 833-837.

77. Bard S.M., Woodin B.R., Stegeman J.J. Expression of P-glycoprotein and cytochrome P450 1A in intertidal fish (Anoplarchus purpurescens) exposed to environmental contaminants // Aquatic Toxicology. 2002. - Vol. 60. - P. 17-32.

78. Bearcroft C.P., Domizio P., Mourad F.H., Andre E.A., Farthing M.J.G. Cisplatin impairs fluid and electrolyte absorption in rat small intestine: a role for 5-hydroxytryptamine // Gut. 1999. - Vol. 44. - P. 174-179.

79. Benimetskaya L., C. Lai J.L., Khvorova A., Wu S., Hua E., Miller P., Zhang L.-M., Stein C.A. Relative bcl-2 independence of drug-induced cytotoxicity and resistance in 518A2 melanoma cells // Clinical Cancer Research. 2004. -Vol. 10.-P. 8371-8379.

80. Bjornsson E., Olsson R. Outcome and prognostic markers in severe drug-induced liver disease // Hepatology. 2005. - Vol. 42. - №2. - P. 481-489.

81. Boddy A.V., Yule S.M. Metabolism and pharmacokinetics of oxazaphosphorines // Clin. Pharmacokinet. 2000. - Vol. 38. - №4. - P. 291-304.

82. Bratstorm D., Bergqvist M., Lamberg K. Complete sequence ofp53 gene in 20 patients with lung cancer: comparison with chemosensitivity and immunohistochemistry. // Med. Oncol. 1998. - Vol. 15. - P. 255-261.

83. Bykov V.J.N., Issaeva N., Zache N., Shilov A., Hultcrantz M., Bergman J., Selivanova G., Wiman K.G. Reactivation of mutant p53 and induction of apoptosis in human tumor cells by maleimide analogs // J. Biol. Chem. 2005. -Vol. 280.-№34.-P. 30384-30391.

84. Chao C. C.-K. Selective drug efflux in multidrug-resistant immunoblastic B lymphoma cells with overexpressed P-glycoprotein // Environmental Toxicology and Pharmacology. 1996. - Vol. 1. - Issue 1. - P. 63-72.

85. Chattopadhyay N., Kher R., Godbole M. Inexpensive SDS/phenol method for RNA extraction from tissues.// Biotechniques. 1993. - Vol. 15. - №1. - P. 2426.

86. Chaudhary P.M., Roninson I.B. Induction of multidrug resistance in human cells by transient exposure to different chemotherapeutic drugs // J. Natl. Cancer Inst. 1993. - Vol. 85. - P. 632-639.

87. Chin J.E., Soffir R., Noonan K.E., Choi K., Roninson I.B. Strucrure and expression of the human MDR (P-glycoprotein) gene family // Molecular and cellular biology. 1989. - Vol. 9. - №9. - P. 3808-3820.

88. Crook T.R., Souhami R.L., Mclean A.E. Cytotoxicity, DNA cross-linking, and single strand breaks induced by activated cyclophosphamide and acrolein in human leukemia cells // Cancer Res. 1986. - Vol. 46. - №10. - P. 5029-5034.

89. D'Agostini F., Balansky R.M., Izzotti A., Lubet R.A., Kelloff G.J., De Flora S. Modulation of apoptosis by cigarette smoke and cancer chemopreventive agents in the respiratory tract of rats // Carcinogenesis. 2001. - Vol. 22. - №3. -P. 375-380.

90. Devault A., Gros P. Two members of the mouse mdr gene family confer multidrug resistance with overlapping but distinct drug specificities // Molecular and cellular biology. 1990.-Vol. 10.-№4.-P. 1652-1663.

91. Diamond J.R., Finlayson C.A., Borges V.F. Hepatic complications of breast cancer // The Lancet Oncology. 2009. - Vol. 10. - Issue 6. - P. 615-621.

92. Driever F., Becker A. , Wiestler O. D., Madea B. Fatal myeloencephalopathy due to accidental intrathecal vincristin administration: a report of two cases // Forensic Science International. 2001. - Vol. 122. - Issue 1. -P. 60-64.

93. Endres C.J., Hsiao P., Chung F.S., Unadkat J.D. The role of transopters in drug interactions // Eur. J. Pharmaceutic. Sci. 2006. - Vol. 26. - P. 501-517.

94. Engel C., Scholz M., Loeffler M. Acomputational model of human granulopoiesis to simulate the hematotoxic effects of multicycle polychemotherapy // Blood. 2004. - Vol. 104. - P. 2323-2331.

95. Filipits M. Mechanisms of cancer: multidrug resistance // Drug Discovery Today: Disease Mechanisms. 2004. - Vol. 1. - №2. - P. 229-234.

96. Fojo A.T., Ueda K., Slamon D.J., Poplack D.G., Gottesman M.M., Pastan I. Expression of a multidrug-resistance gene in human tumors and tissues // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol. 84. - P. 265-269.

97. Foster B.A., Coffey H.A., Morin M.J., Rastinejad F. Pharmacological rescue of mutant p53 conformation and function // Science. 1999. - Vol. 286. -№5449. -P. 2507-2510.

98. Franko J., Pomfy M, Prosbova T. Apoptosis and cell death (mechanisms, pharmacology and promise for the future) // Acta medica. 2000. - Vol. 43. - №2. -P. 63-68.

99. Friedlander P., Haupt Y., Prives C., Oren M. A Mutant p53 that discriminates between p53-responsive genes cannot induce apoptosis // Molecular and cellular Biology. 1996. - Vol. 16. -№9. - P. 4961-4971.

100. Fu D., Shi Z.-x., Wang Y.-z. Bcl-2 plays a key role instead of mdrl in the resistance to hexadecylphosphocholine in human epidermoid tumor cell line KB // Cancer Letters. 1999. - Vol. 142. - Issue 2. - P. 147-153.

101. Fujita N., Tsuruo T. In vivo Veritas: Bcl-2 and Bcl-XLmediate tumor cell resistance to chemotherapy //Drug Resistance Updates. 2000. - Vol. 3. - Issue 3. -P. 149-154.

102. Gewirtz D.A. A critical evaluation of the mechanisms of action proposed for the antitumor effects of the anthracycline antibiotics adriamycin and daunorubicin // Biochemical Pharmacology. 1999. - Vol. 57. - Issue 7. - P. 727741.

103. Hartmann G., Kim H., Piquette-Miller M. Regulation of the hepatic multidrug resistance gene expression by endotoxin and inflammatory cytokines in mice // Int. Immunopharmacol. 2001. - Vol. 1. - №2. - P. 189-199.

104. Hembruff S.L., Laberge M.L., Villeneuve D.J., Guo B., Veitch Z., Cecchetto M., Parissenti A.M. Role of drug transporters and drug accumulation inthe temporal acquisition of drug resistance // BMC Cancer. 2008. - Vol. 8. — №318.-P. 1-16.

105. Hooiveld G.J., van Montfoort J.E., Meijer D.K., and Muller M. Function and regulation of ATP-binding cassette transport proteins involved in hepatobiliary transport // Eur. J. Pharm. Sci. 2001. - Vol. 12 - P. 525-543.

106. Howell S.J., Radford J.A., Ryder W.D., Shalet S.M. Testicular function after cytotoxic chemotherapy: evidence of Leyding cell insufficiency // J. Clin. Oncol.-1999.-Vol. 17. -№5. P. 1493-1498.

107. Huang Y., Sadee W. Drug sensitivity and resistance genes in cancer chemotherapy: a chemogenomic approach // Drug Discovery Today. 2003. — Vol. 8.-№8.-P. 356-363.

108. Huong L., Amoura Z., Duhaut P., Sbai A., Costedoat N., Wechsler B., Piette J.C. Risk of ovarian failure and fertility after intravenous cyclophosphamide. A study in 84 patients // J. Rheumatol. 2002. - Vol. 29. - №12. - P. 2571-2576.

109. Islam M.O., Hara M., Jun Miyake J. Induction of P-glycoprotein, glutathione-S-transferase and cytochrome P450 in rat liver by atrazine // Environmental Toxicology and Pharmacology. 2002. - Vol. 12. - P. 1-6.

110. Jaeschke H., Gores G.J., Cederbaum A.I., Hinson J.A., Pessayre D., Lemasters J.J. Mechanisms of hepatotoxicity // Toxicological sciences. 2002. -Vol. 65.-P. 166-176.

111. Jung F., Weiland U., Johns R.A., Ihling C., Dimmeler S. Chronic hypoxia induces apoptosis in cardiac myocytes: a possible role for bcl-2-like proteins // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2001. - Vol. 286.-Issue 2.-P. 419-425.

112. Kaplowitz N. Drug-induced liver injury // Clin. Infect. Dis. 2004. -Vol. 38. - Suppl. 2. - P. 44-48.

113. Khashab M., Tector A.J., Kwo P.Y. Epidemioilogy of acute liver failure // Curr. Gastroenterol. Rep. 2007. - Vol. 9. - №1. - P. 66-73.

114. Kik K., Studzian K., W^sowska-Lukawska M., Oszczapowicz I., Szmigiero L. Cytotoxicity and inhibitory properties against topoisomerase II ofdoxorubicin and its formamidine derivatives // Acta Biochimica Polonica. 2009. -Vol. 56. -№1. - P. 135-142.

115. King P., Perry M. Hepatotoxicity of chemotherapy // The Oncologist. -2001.-Vol. 6.-P. 162-176.

116. Kmiec Z. Cooperation of liver cells in health and disease // Adv. Anat. Embryol. Cell Biol. 2001. - Vol. 161,- III-XIII. - P. 1 -151.

117. Kok T., Wolters H., Bloks V. W., Havinga R., Jansen P.L., Staels B., Kuipers F. Induction of hepatic ABC transporter expression is part of the PPARalpha-mediated fasting response in the mouse.//Gastroenterology. 2003. -Vol. 124.-№1.-P. 160-171.

118. Kolli V.K., Abraham P., Isaac B. Alteration in antioxidant defense mechanisms in the small intestines of methotrexate treated rat may contribute to its gastrointestinal toxicity // Cancer Therapy. 2007. - Vol. 5. - P. 501-510.

119. Larrey D. Drug-induced liver diseases // J. Hepatol. 2000. - Vol. 32. -Suppl. l.-P. 77-88.

120. Lee W.M. Acute liver failure in the United States // Semin. Liver. Dis. -2003. Vol. 23. - №3. - P. 217-226.

121. Lewis H.J. Drug-induced liver disease // Med. Clin. North. Am. 2000. -Vol. 84.-P. 1275-1311.

122. Li G., Bush J.A., Ho V.C. P-53-dependent apoptosis in melanoma cells after treatment with campthotecin // The Journal of Investigative Dermatology. — Vol. 114. -№3. P. 514-519.

123. Lim L.Y., Vidnovic N., Ellisen L.W., Leong C.-O. Mutant p53 mediates survival of breast cancer cells // British Journal of Cancer. 2009. - Vol. 101. - P. 1606-1612.

124. Lohrmann H.P. The problem of permanent bone marrow damage after cytotoxic drug treatment // Oncology. 1984. - Vol. 41. - №3. - P. 180-184.

125. Ma Q.-j., Gao S., Zhao J., Gu X.-q., Cai S.-y., Zhao G.-q., Effect of (3 radiation on bcl-2 and bax expressions in benign prostate hyperplasia tissues // Chemical Research in Chinese Universities. 2008. - Vol. 24. - Issue 4. - P. 501504.

126. Maehara Y., Tomoda M., Hasuda S., Kabashima A., Tokunaga E., Kakeji Y., Sugimachi K. Prognostic value of p53 protein expression for patients with gastric cancer a multivariate analysis // British Journal of Cancer. - 1999 — Vol. 79.-P. 1255-1261.

127. Mahmood B., Daood M.J., Hart C., Hansen T.W., Watchko J.F. Ontogeny of P-glycoprotein in mouse intestine, liver, and kidney // J. Investig. Med. 2001. - Vol. 49. - №3. - P. 250-257.

128. Manov I., Motanis H., Frumin I., Iancu T.C. Hepatotoxicity of antiinflammatory and analgesic drugs: ultrastructural aspects // Acta Pharmacologica Sinica. 2006. - Vol. 27. - № 3. - P. 259-272.

129. Mashima T., Tsuruo T. Defects of the apoptotic pathway as therapeutic target againsr cancer // Drag Resistance Updates. 2005. - Vol. 8. - P. 339-343.

130. Minotti G., Menna P., Salvatorelli E., Cairo G., Gianni L. Anthracyclines: molecular advances and pharmacologic developments in antitumor activity and cardiotoxicity // Pharmacol. Rev. 2004. - Vol. 56. - №2. - P. 185229.

131. Mironova N., Shklyaeva O., Andreeva E., Popova N., Kaledin V., Nikolin V., Vlassov V., Zenkoya M. Animal model of drug-resistant tumor progression // Ann. N.Y. Acad. Sei. 2006. - Vol. 1091. - P. 490-500.

132. Mizuno N., Niwa T., Yotsumoto Y., Sugiyama Y. Impact of drug transporter studies on drug discovery and development // Pharmacol. Rev. 2003. -Vol. 55.-P. 425-461.

133. Ng W.F., Sarangi F., Zastawny R.L., Veinot-Drebot L., Ling V. Idrntification of the P-glycoprotein multigene family // Molecular and cellular biology. 1989. -Vol. 9.-№3.-P. 1224-1232.

134. Panda D., Jordan M.N., Chin Chu K., Wilson L. Differential effects of vinblastine on polymerization and dynamics at opposite microtubule ends // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. -№47. - P. 29807-29812.

135. Petros A.M., Olejniczak E.T., Fesik S.W. Structural biology of the Bcl-2 family of proteins // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - Vol. 1644. - №2-3. - P. 83-94.

136. Plosker G.L., Figgitt D.P. Rituximab: a review of its use in non-Hodgkin's lymphoma and chronic lymphocytic leukaemia // Drugs. 2003. - Vol. 63.-№8.-P. 803-843.

137. Puschek E., Phili p P.A., Jeyendran R.S. Male fertility preservation and cancer treatment // Cancer Treatment Rev. 2004. - Vol. 222. - №30. - P. 173180.

138. Rabbani A., Abdosamadi S., Sari-saraf N. Affinity of anticancer drug, daunomycin, to core histones in solution: comparison of free and cross-linked proteins // Acta Pharmacologica Sinica 2007. - Vol. 28. - P. 731-737.

139. Rabbani A., Iskandar M., Ausio J. Daunomycin-induced unfolding and aggregation of chromatin // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274 - Issue 26. - P. 18401-18406.

140. Reed J.C. Bcl-2 family proteins: regulators of apoptosis and chemoresistance in hematologic malignancies // Seminars in Hematology. 1997. -Vol. 34.-№4.-P. 9-19.

141. Robert J. Multidrug resistance in oncology: diagnostic and therapeutic approaches // Eur. J. Clin. Invest. 1999. - Vol. 29. - №6. - P. 536-545.

142. Roninson I.B. Molecular mechanism of multidrug resistance in tumor cells//Clin. Phisiol. Biochem. 1987.-Vol. 5.-P. 140-151.

143. Rottenberg S., Jonkers J. Modeling therapy resistance in genetically engineered mouse cancer models // Drug Resistance Updates. 2008. - Vol. 11.-P. 51-60.

144. Ruefli A.A., Johnstone R.W. A role for P-glycoprotein in regulating cell growth and survival // Clinical and Applied Immunology Reviews. 2003. - Vol. 4.-P. 31-47.

145. Sarkadi B., Homolya L., Szakacs G., Varadi A. Human multidrug resistance ABCB and ABCG transporters: participation in a chemoimmunity defense system // Physiol. Rev. 2006. - Vol. 86. - P. 1179-1236.

146. Sarkaria J.N., Kitange G.J., James C.D., Plummer R., Calvert H., Weller M., Wick W. Mechanisms of chemoresistance toalkylating agents in malignant glioma // Clin. Cancer Res. 2008. - Vol. 14. - №10. - P. 2900-2908.

147. Shtil A.A., Azare J. Redundancy of biological regulation as the basis of emergence of multidrug resistance // International Review of Cytology. 2005. -Vol. 246.-P. 1-29.

148. Silverman J.A., Thorgeirsson S.S. regulation and function of the multidrug resistance genes in liver // Prog. Liver Dis. 1995. - Vol. 13. - P. 101123.

149. Skirvin J.A., Valley A.W., Relias W., Morris A.K. 6-Mercaptopurine hepatotoxicity during acute lymphocytic leukemia maintenance therapy // Journal of Oncology Pharmacy Practice. 1998. - Vol. 4. - №2. - P. 117-120.

150. Stavrovskaya A.A., Stromskaya T.P. Transport proteins of the ABC family and multidrug resistance of tumor cells // Biochemistry. 2008. - Vol. 73. - № 5 - P. 592-604.

151. Stein U., Rau B., Wust P., Walther W., Schlag P.M. Hyperthermia for treatment of rectal cancer: evaluation for induction of mdr-1 gene expression // Int. J. Cancer. 1999. - Vol. 80. - №1. - P. 5-12.

152. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide // Science. 1995. -Vol. 267. - Issue 5203. - P. 1445-1449.

153. Stouch T.R., Gudmundsson O. Progress in understanding the structure-activity relationships of P-glycoprotein // Advanced Drug Deliveiy Reviews. — 2002.-Vol. 54. P. 315-328.

154. Styczynski J., Wysocki M., Balcar-Boron A., Halota W. Analysis of hepatitis B virus infection and its influence on treatment results in children with neoplastic disease // Med. Sci. Monit. 1997. - Vol. 3. - №3. - P. 361-368.

155. Swift L.P., Rephaeli A., Nudelman A., Phillips D.R., Cutts S.M. Doxorubicin-DNA adducts induce a non-topoisomerase II-mediated form of cell death // Cancer Research. 2006. - Vol. 66. - P. 4863-4871.

156. Tan B., Piwnica-Worms D., Ratner L. Multidrug resistance transporters and modulation // Curr. Opin. Oncol. 2000. - Vol. 12. - P. 450-458.

157. Tanner K.D., Reichling D.B., Levine J.D. Nociceptor hyper-responsiveness during vincristine-induced painful peripheral neuropathy in the rat // The Journal of Neuroscience. 1998. - Vol. 18. - №16. - P. 6480-6491.

158. Terada T., Inui K. Gene expression and regulation of drug transporters in the intestine and kidney // Biochemical pharmacology. 2007. - Vol. 73. - P. 440449.

159. Thompson C.B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease // Science. 1995.-Vol. 267.-Issue 5203.-P. 1456-1462.

160. Turner P.R., Denny W.A., Ferguson L.R. Role of DNA minor groove alkylation and DNA cross-linking in the cytotoxity of polybenzamide mustards // Anticancer Drug Des. 2000. - Vol. 15. - №4. - P. 245-253.

161. Tygstrup N., Bangert K., Ott P., Bisgaard H.C. Messenger RNA profiles in liver injury and stress: a comparison of lethal and nonlethal rat models // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2002. - Vol. 290. - P. 518-525.

162. Uozurmi K., Nakaichi M., Yamamoto Y., Une S., Taura Y. Development of multidrug resistance in a canine lymphoma cell line // Research in Veterinary Science.-2005.-Vol. 78.-P.217-224.

163. Velayudham L.S., Farrell G.C. Drug-induced cholestasis // Expert. Opin. Drug Saf. 2003. - Vol. 2. - №3. - P. 287-304.

164. Webster J.I., Carlstedt-Duke J. Involvement of multidrug resistance proteins (MDR) in the modulation of glucocorticoid response. // Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology. 2002. - Vol. 82. - P. 277-288.

165. Weibel E.R. Stereological methods. London: Academic Press. - 1979. -415 p.

166. Wilson W.H., Teruya-Feldstein J., Fest T., Harris C., Steinberg S.M., Jaffe E.S., Raffeld M. Relationship of p53, bcl-2, and tumor proliferation to clinical drug resistance in non-Hodgkin's lymphomas // Blood. 1997. — Vol. 89. — №2.-P. 601-609.

167. Zahraei Z., Rabbani-Chadegani A. A comparison of the effect of anticancer drugs, idarubicin and adriamycin, on soluble chromatin // European Journal of Pharmacology. 2007. - Vol. 575. - Issues 1-3. - P. 28-33.

168. Zhou S.F. Structure, function and regulation of P-glycoprotein and its clinical relevance in drug disposition // Xenobiotica. 2008. - Vol. 38. - №7-8. -P. 802-832.